PENYIMPANAN VAKSIN INAKTIF WHOLE CELL Aeromonas salmonicida DENGAN PENAMBAHAN GLISEROL

ABSTRACT

THE PRESERVATION OF INACTIVE WHOLE CELL VACCINE OF
Aeromonas salmonicida WITH ADDITIONAL OF GLYCEROL

By

RINDA ARYANI PUTRI

ABSTRACT

Inactive whole cell vaccine of A. salmonicida has has the high level of
immunogenecity on common carp. To maintain the stability of the vaccine
imunogenecity, the best storage was needed. Glycerol has been known to be able
to maintain the integrity of the cell in cold storage. The purpose of this research
was to know the best dosage of glycerol in the storage of inactive whole cell
vaccine of A. salmonicida. Vaccine was inactived with 1% formaline and
incubated for 24 hours at room temperature. The density of vaccine was counted
and then vaccine was added with 0,25%, 0,50%, 0,75% of glycerol. Two other
treatments were used as positive (vaccine without glycerol) and negative (without
vaccine, contains PBS) controls. The vaccine was tested on 10 fish/treatment by

intraperitoneal injection (107cell/fish). Vaccination and booster were done in 0
day and 30 days of storage using a different fish. Observation of titer antibody
was done before vaccination, a week after vaccination and a week after the
booster. Water quality as supporting parameter was observed every day, including
DO, pH and temperature. As a results, the highest level of titer antibody was
reached on vaccine with the adding dosage of 0,50% of glycerol with the average
256 times dilution on the storage of vaccine 30 days. Water quality during this
research that was still in normal for common carp life. In conclusion, the best
dosage to keep the level of immonugenecity of A. salmonicida vaccine was the
additional 0,50% of glycerol.
Key words: Aeromonas salmonicida, glycerol, formaline killed vaccine, titer
antibody, common carp

ABSTRAK

PENYIMPANAN VAKSIN INAKTIF WHOLE CELL
Aeromonas salmonicida DENGAN PENAMBAHAN GLISEROL

Oleh

RINDA ARYANI PUTRI
ABSTRAK
Vaksin inaktif whole cell A. salmonicida memiliki tingkat imunogenesitas yang
cukup tinggi pada ikan mas (Cyprinus carpio L). Untuk menjaga stabilitas
imunogenesitas vaksin tersebut, perlu dilakukan penyimpanan yang baik. Gliserol
diketahui mampu menjaga keutuhan sel dalam penyimpanan dingin. Tujuan dari
penelitian ini yaitu untuk mengetahui dosis gliserol terbaik dalam penyimpanan
vaksin whole cell A. salmonicida.Vaksin diinaktifasi dengan formalin 1% dan
diinkubasikan selama 24 jam pada suhu ruang. Kepadatan vaksin dihitung lalu
ditambahkan gliserol dengan dosis 0,25%, 0,50%, 0,75% dan 2 perlakuan lain
sebagai kontrol positif (vaksin tanpa gliserol) dan negatif (tanpa vaksin, berisi
PBS). Vaksin diujikan pada 10 ekor ikan mas per perlakuan dengan cara
penyuntikan intraperitoneal (107 sel/ikan). Seminggu berikutnya dilakukan
booster dengan metode dan dosis yang sama. Vaksinasi dan booster dilakukan
pada penyimpanan vaksin 0 hari dan 30 hari dengan menggunakan ikan mas yang
berbeda. Titer antibodi diamati sebelum vaksinasi, seminggu setelah vaksinasi,
dan seminggu setelah booster, baik pada penyimpanan 0 hari dan 30 hari.
Parameter pendukung kualitas air akuarium diamati setiap hari meliputi DO, pH
dan suhu. Hasil penelitian menunjukkan tingkat titer antibodi tertinggi pada
vaksin dengan penambahan dosis gliserol 0,50% dengan rata-rata 256 kali

pengenceran pada uji penyimpanan vaksin 30 hari. Hasil pengukuran kualitas air,
secara umum masih berada dalam kisaran normal untuk kelangsungan hidup ikan
mas. Kesimpulan dari penelitian ini yaitu dosis gliserol terbaik dalam
mempertahankan tingkat imunogenesitas vaksin A. salmonicida adalah vaksin
dengan penambahan gliserol 0,50%.
Kata kunci : Aeromonas salmonicida, gliserol, vaksin, titer antibodi, ikan mas

PENYIMPANAN VAKSIN INAKTIF WHOLE CELL
Aeromonas salmonicida DENGAN PENAMBAHAN GLISEROL

(Skripsi)

Oleh
RINDA ARYANI PUTRI

PROGRAM STUDI BUDIDAYA PERAIRAN
FAKULTAS PERTANIAN
UNIVERSITAS LAMPUNG

2012

PENYIMPANAN VAKSIN INAKTIF WHOLE CELL
Aeromonas salmonicida DENGAN PENAMBAHAN GLISEROL

Oleh

RINDA ARYANI PUTRI

SKRIPSI
Sebagai Salah Satu Syarat Untuk Mencapai Gelar
SARJANA PERIKANAN
Pada
Jurusan Budidaya Perairan
Fakultas Pertanian Universitas Lampung

FAKULTAS PERTANIAN
UNIVERSITAS LAMPUNG
BANDAR LAMPUNG
2012

DAFTAR ISI

Halaman
DAFTAR TABEL .............................................................................................. i
DAFTAR GAMBAR .......................................................................................... ii
DAFTAR LAMPIRAN ....................................................................................... iii
I. PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang .........................................................................................
1.2 Tujuan Penelitian .....................................................................................
1.3 Manfaat Penelitian ..................................................................................
1.4 Kerangka Pikir .........................................................................................

1
5
5
5

II. TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Aeromonas salmonicida ........................................................................... 7
2.1.1 Klasifikasi dan Morfologi Aeromonas salmonicida ...................... 7

2.1.2 Karakteristik Aeromonas salmonicida ........................................... 8
2.1.3 Gejala Klinis Infeksi A. salmonicida ............................................. 9
2.2 Vaksinasi .................................................................................................. 10
2.3 Gliserol ..................................................................................................... 12
III. METODOLOGI
3.1 Waktu dan Tempat Penelitian .................................................................. 14
3.2 Alat dan Bahan ......................................................................................... 14
3.2.1 Penelitian Pendahuluan .................................................................. 14
3.2.1.1 Pembuatan Media .............................................................. 14
3.2.1.2 Pembuatan Vaksin A. salmonicida dengan Gliserol.......... 14
3.2.1.3 Persiapan Penelitian........................................................... 15
3.2.2 Uji Penambahan Gliserol pada Vaksin A. salmonicida ........ 15
3.2.3 Pengamatan .................................................................................... 15
3.2.3.1 Titer Antibodi .................................................................... 15
3.2.3.2 Analisis Kualitas Air ......................................................... 16
3.3 Rancangan Penelitian ............................................................................... 16
3.4 Metode Penelitian .................................................................................... 16

3.4.1 Penelitian Pendahuluan .................................................................. 16
3.4.1.1 Pembuatan Media .............................................................. 16

3.4.1.2 Pembuatan Vaksin A. salmonicida dengan Gliserol.......... 17
3.4.1.3 Persiapan Penelitian........................................................... 18
3.4.2 Uji Penambahan Gliserol pada Vaksin A. salmonicida ................. 18
3.4.3 Pengamatan .................................................................................... 18
3.4.3.1 Titer Antibodi .................................................................... 18
3.4.3.2 Kualitas Air ....................................................................... 20
3.5 Paramater Uji ........................................................................................... 20
3.6 Analisis Data ............................................................................................ 20
IV. HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1 Hasil Penelitian ............................................................................................... 21
4.1.1 Titer Antibodi Vaksin dengan Dosis Gliserol berbeda ......................... 21
4.1.2 Parameter Kualitas Air .......................................................................... 26
4.2 Pembahasan ..................................................................................................... 26
V. KESIMPULAN DAN SARAN
5.1 Kesimpulan ..................................................................................................... 31
5.2 Saran ................................................................................................................ 31
DAFTAR PUSTAKA ......................................................................................... 32
DAFTAR ISTILAH ............................................................................................ 38
LAMPIRAN ........................................................................................................ 42

DAFTAR ISTILAH

Aglutinasi

: penyatuan partikel atau sel yang terdapat dalam cairan (seperti
aglutinasi sel darah merah apabila darah berbagai golongan
dicampur atau aglutinasi bakteri dalam kondisi tertentu)

Antigen

: sebuah zat yang merangsang respon imun, terutama dalam
menghasilkan antibodi. Antigen biasanya berupa
protein atau polisakarida, tetapi dapat juga berupa molekul
lainnya, termasuk molekul kecil (hapten) yang bergabung
dengan protein-pembawa atau carrier.

Antibodi

: Glikoprotein dengan struktur tertentu yang disekresi
dari limfosit-B yang telah teraktivasi menjadi sel plasma

sebagai respon dari antigen tertentu dan reaktif terhadap
antigen tersebut.

Cryopreservation : proses pembekuan jaringan.
Cryoprotectant

: suatu bahan yang bisa digunakan untuk menghambat
pembentukan kristal es pada proses cryopreservasi sperma
ikan.

Dropsy

: gejala dari suatu penyakit tapi bukan merupakan penyakit itu
sendiri. Gejalanya yaitu pembengkakan pada rongga tubuh
ikan.

Fagosit

: Sel darah putih yang melindungi tubuh dengan menelan
partikel asing berbahaya, bakteri, dan sel-sel mati atau sekarat

Fagositosis

: Pencaplokan partikel seperti bakteri atau mikroorganisme lain,
sel darah merah yang menua, benda asing, dll oleh fagosit,
yaitu jenis-jenis leukosit seperti neutrofil dan monosit.

Furunculosis

: Penyakit yang disebabkan oleh A. salmonicida yang awalnya
menyerang ikan salmon dan menyebar ke ikan air tawar seperti
ikan mas.

Imun

: Kekebalan tubuh

Imunogen

: Zat yang dapat menimbulkan respon imun spesifik dalam

tubuh berupa pembentukan antibodi.

Imunogenesitas : Tingkat imunogen untuk merespon imun tubuh
Indol

: suatu senyawa organik yang berupa aromatik heterosiklik.

Injeksi IP

: Suntikan zat ke dalam peritoneum (rongga tubuh) ikan.

Laktosa

: bentuk disakarida dari karbohidrat yang dapat dipecah menjadi
bentuk lebih sederhana yaitu galaktosa dan glukosa.

Levigation

: pengendapan larutan untuk memisahkan partikel dasar yang
ada dalam larutan tersebut.

Limfosit

: Sejenis sel darah putih pada sistem kekebalan vertebrata,
limfosit memiliki peranan penting dalam sistem pertahanan
tubuh

Makrofag

: Sel darah putih dalam jaringan, yang dihasilkan oleh
pembagian monosit

MHC

: (Major Hitocompatibility Sitokini Complex) Sekumpulan gen
yang ditemukan pada semua jenis vertebrata. Protein MHC
yang disandikan berperan dalam mengikat dan
mempresentasikan antigen peptida ke sel T.

Memori imunologis : bagian dari sistem kekebalan tiruan yang memberikan
perlindungan kepada inangnya dengan melakukan respon yang
lebih cepat dan lebih efektif terhadap infeksi yang ditimbulkan
oleh antigen dari jenis yang sebelumnya pernah melakukan
infeksi akut.

Monosit

: Sebuah leukosit berinti sel tunggal (mononuklear) yang relatif
besar yang biasanya berkisar pada 3-7% dari leukosit dalam
sirkulasi darah dan umumnya ditemukan pada kelenjar getah
bening/limfa, sumsum tulang, dan jaringan ikat.

Mutasi

: Perubahan yang terjadi pada bahan genetik (DNA maupun
RNA), baik pada taraf urutan gen (disebut mutasi titik)
maupun pada taraf kromosom.

Neutrofil

: Satu jenis sel darah putih, khususnya yang berbentuk
granulosit, yang berisi pewarnaan butiran netral, kantungkantung kecil enzim yang membantu sel untuk membunuh dan
mencerna mikroorganisme setelah ditelan oleh fagositosis.

Patogen

: Agen biologis yang menyebabkan penyakit pada inangnya

Residu

: Sisa bahan yang tidak terpakai (ampas).

Resistensi

: Resultan dari mekanisme tubuh yang dapat menghalanghalangi atau mencegah invasi, multipliksi dari bibit penyakit
kedalam tubuh atau mencegah terjadinya kerusakan jaringan
yang diakibatkan oleh racun yang dikelurkan oleh bibit
penyakit.

Sel dendrite

: Sel-sel kekebalan yang berfungsi dalam presentasi antigen dan
aktivasi limfosit T

Sel Plasma

: Benda bersifat hidup yang terdapat di dalam sel, berbentuk
cairan yang agak kental.

Sel B

: Limfosit yang memainkan peran penting pada respon imun
humoral yang berbalik pada imunitas selular yang diperintah
oleh sel T.

Sel memori

Sel T

: sekelompok sel yang membantu tubuh mempertahankan diri
terhadap penyakit dengan mengingat paparan sebelumnya dari
organisme tertentu (misalnya virus atau bakteri).
: Sel di dalam salah satu grup sel darah putih yang diketahui
sebagai limfosit dan memainkan peran utama pada kekebalan
selular.

Psikofil

: bakteri yang hidup pada daerah suhu antara 0°– 30 °C, dengan
suhu optimum 15 °C.

Thawing

: merupakan proses kelanjutan dari proses freezing. Thawing
akan mengembalikan bahan baku ataupun produk dari yang
semula berbentuk fase padat menjadi fase cair.

Titer Antibodi

: Metode untuk mengetahui ada atau tidaknya reaksi vaksin ke
dalam tubuh atau ada tidaknya reaksi antigen dan antibodi.

DAFTAR PUSTAKA

DAFTAR PUSTAKA

Afrianto, E., dan Liviawaty, E. 1992. Pengendalian Hama & Penyakit Ikan.
Cetakan Pertama. Penerbit Kanisisus. Yogyakarta. 89 hal.

Almendras, J.M.E., 2001. Immunity and biological methods of diseases
prevention and control. In Health Management in Aquaculture. Aquaculture
Department, Southeast Asian Fisheries Development Center, Iloilo,
Philippines.

Anonim. 1995. National Guidlines for Vaccine Storage And Transportation.
Canada Communicable Disease Report. 21: 93 – 97.
.
Diakses tanggal 9 Desember 2011.

______. 2006a. Glycerol. Encyclopedia Columbia University Press.
. Diakses tanggal 9
Desember 2011.

______. 2006b.Glycerol. Britanica Concise Encyclopedia.
. Diakses tanggal 9 Desember
2011.

______. 2006c. Cryopreservation of Mammalian
Cells.. Diakses tanggal 9
Desember 2011.

______. 2007. Penyakit Ikan Karantina Golongan Bakteri. Pusat Karantina Ikan.
Jakarta. 66 hal.

Astuti, P., Alam, G., Pratiwi, S.U.T., Hertiani, T., dan Wahyuono, S. 2003.
Skrining senyawa anti infeksi dari spons yang dikoleksi dari Bunaken,
Manado. Biota. Vol. VIII 127: 47-52.

Atmomarsono, M., Muliani dan Imah, M. 2004. Pengaruh Jenis Vaksin dan
Konsentrasi Vitamin C Terhadap Sintasan Pasca Larva Udang Windu Yang
Dipapar Dengan White Spot Syndrome Virus (WSSV). Jurnal Penelitian
Perikanan Indonesia. 10: 41 – 46.
Bangun, A. 1992. Petunjuk Laboratorium Antibodi Monoklonal. Pusat Antar
Universitas – Bioteknoligi. UGM. Yogyakarta. 186hal.
Cipriano dan Bullock, G. 2001. Furunculosis And Other Diseases Caused By
Aeromonas Salmonicida. Fish Diseases Leaflet 66. West Virginia. 33 hal.

Cholik, F. 2005. Akuakultur. Masyarakat Perikanan Nusantara. Taman Akuarium
Air Tawar. Jakarta. Global Aquaculture. Advocade. 5(3): 36-37.

David, M.A. 2006. Glycerol : A Jack of All Trades. Toronto.
. Diakses
tanggal 9 Desember 2011.

Ellis, A. E. 1988. Fish Vaccination. Academic Press. New York. 225hal.

Firdaus, A. 2004. Pengaruh Pemberian Vitamin C Dalam Percobaan
Imunoprofilaksis Terhadap Infeksi Bakteri Streptococcus iniae Pada Ikan
Nila (Oreocromis niloticus Linne). Program Studi Teknologi Dan
Managemen Akuakultur. Departemen Budidaya Perikanan. Fakultas
Perikanan Dan Kelautan. Institut Pertanian Bogor.

Gazali, M. dan Surya, N. T. 2002. Kriopreservasi Sel Spermatozoa. Jurnal Hayati
9(1): 27-32.

Ghufran, M dan Kordi K. 2004. Penanggulangan Hama dan Penyakit Ikan.
Penerbit Bina Adiaksa dan Rineka Cipta. Jakarta. 190 hal.

Handayani, H dan Samsudari, S. 2005. Parasit dan Penyakit Ikan. UMM Press:
Malang. Hal 26-27.

Kamiso H.N., Triyanto, Sukiman W.S., Sri H., Bambang, T dan Sri Sulandari.
1990. Uji Coba Vaksin Aeromonas hydrophila terhadap Ikan Lele Dumbo
(Clarias gariepenus). Fakultas Pertanian. UGM. Yogyakarta.

Kristini, T. D. 2008. Faktor-Faktor Risiko Kualitas Pengelolaan Vaksin yang
Buruk di Unit Pelayanan Swasta (Studi Kasus di Kota Semarang).
Universitas Diponegoro. Semarang.

Kordi, K. dan M. Ghufran. 2004. Penanggulangan Hama dan Penyakit Ikan.
Cetakan Pertama.PT Rineka Cipta; Jakarta. 190 hal.

Kurniastuty, T., Tusihadi, dan Hartono, P. 2004. Hama dan Penyakit Ikan dalam
Pembenihan Ikan Kerapu. DKP, Dirjen Perikanan Budidaya, Balai
Budidaya Laut Lampung, Lampung. Hal 56 – 58.
Lee, E. 2001. What is The Function Egg Yolk And Glycerol In Cryopreservation.
.
Diakses tanggal 10 Desember 2011

Lio-Po, G.D.; Leano, E.M.; Usero, R.C.; dan Guanzon Jr., N.G., 2002.Vibrio
harveyi and the green water culture of Penaeus monodon. In: Inui, Y., CruzLacierda, E.R. (Eds.), Disease Control in Fish and Shrimp Aquaclture in
Southest Asia. Diagnosis and Husbandry Techniques. SEAFDEC
AQD, Iloilo,Philippines. Hal 172-180

Lusiastuti, A. M., Purwaningsih U., dan Hadie, W. 2010. Potensi Imunogenik Sel
Utuh (Whole Cell) Streptococcus agalactiae Yang Diinaktivasi dengan
Formalin Untuk Pencegahan Penyakit Streptococosis Pada Ikan Nila
(Oreochromis niloticus). Bogor. Pusat Riset Perikanan Budidaya.

Markedstat, A. dan Grave, K. 1997. Reducation of antibacterial drug use in
Norwegian fish farming due to vaccination. Dev. Biol. Stand. 90: 365-369.
Masada. 2000. Current Research – Aeromonas salmonicida.
www.nwfsc.noaa.gov Diakses tanggal 15 Desember 2011.

Mclaughlin, E.A., Ford, W.C.L. dan Hull, M.G.R.. 1992. The contribution of the
toxicity of a glycerol-egg yolkcitrate cryopreservative to the decline in
human sperm motility during cryopreservation. J. Reprod. Fert., 95: 749754.

Meek. 2004. Effect of Heat And Cold on Vaccines. Proceding of The National
Vaccine Storage Whorkshop. Brisbane. . Diakses tanggal 9 Desember 2011.

Milien, N., Mark, W., Shane, A dan Neeraj A. 2004. Technical Issues With
Refrigerators. Proceding of The National Vaccine Storage Whorkshop.
Brisbane. . Diakses tanggal 9 Desember 2011.

Noga, E.J. 2000. Fish Disease: Diagnosis and Treatment. Iowa: Iowa State Press.

Poedjiadi, A. 1994. Dasar-dasar Biokimia. Jakarta. Universitas Indonesia
(UI-Press). 472 hal.

Radji. 2010. Imunologi dan Virologi. Pt. Isfi Penerbit: Jakarta Barat. 323 hal.

Retmonojati, K. 2007. Penyimpanan Vaksin Polivalien Vibrio dengan
Penambahan Adjuvant dan Gliserol. Skripsi Jurusan Perikanan. Fakultas
Pertanian, Universitas Gajahmada, Yogyakarta.

Rizzal M., Toelihere. M.R., Yusuf, T.L., Purwantara, B. dan Situmorang, P.
2002. Kualitas Semen Beku Domba Garut dalam Berbagai Konsentrasi
Gliserol. J. Ilmu Ternak dan Veteriner 7 (3): 194-199.

Robersson, B.S. 1990. Bacterial Agglutination. In: J. S. Stolen, T. C. Fletcher,
D.P. Anderson, B. S. Roberson, and W. B. Van Muiswinkle (eds).
Techniques In Fish Immunology. SOS Publication, Fair Heaven, New
Jersey. Hal 81-86.

Rusiyantono, Y., Ahmad, B. Y., Sukra, M.R. Toelihere, Supriatna, dan
Purwantara, B. 2000. Pemakaian Etthylen Glicol dan Glicerol untuk
Vitrifikasi Embrio Kambing In Vitro. Direktorat Pembinaan Penelitian dan
Pengabdian Pada Masyarakat Dirjen Dikti Diknas, Bogor.

Setyawan A., Siti H., Zulfikar S., dan Sumino. 2012. Imunogenesitas Vaksin
Inaktif Whole Cell Aeromonas salmonicida Pada Ikan Mas (Cyprinus
carpio). Aquasains. Vol I (1) : 18-21.

Soeripto. 2002. Pendekatan Konsep Kesehatan Hewan Melalui Vaksinasi. Jurnal
Litabang Pertanian, 21(2). Hal: 54.

Supriatna, I. dan Pasaribu, F,H. 1992. In Vitro Fertilisasi, Transfer Embrio dan
Pembekuan Embrio. Pusat Antar Universitas, Institut Pertanian Bogor,
Bogor.

Supriyadi, H. dan Rukyani, A. 1990. lmunopropilaksis dengan cara vaksinasi
pada usaha budidaya ikan. Seminar Nasional ke-Il Penyakit Ikan dan
Udang, Bogor.

Tambing, S.N., Mozes, R.T., Tuty, L.Y., dan Sutama, I.K. 2000. Pengaruh
gliserol dalam pengencer Tris terhadap kualitas semen beku kambing
Peranakan Etawah. Jurnal Ilmu Ternak dan Veteriner 5 (2) : 1-8

Tambunan, I. R., dan Ika, M. 2003. Pemanfaatan Teknik Kriopreservasi dalam
Penyimpanan Plasma Nutfah Tanaman. Buletin Plasma Nutfah 9 (2): 10-18.

Tizard, I. 1988. An Introduction To Veterinary Immunology. Penterjemah : P.
Masduki dan S. Hardjosworo. Pengantar Immunologi Veteriner. Universitas
Airlangga. Surabaya. 197hal.

Tossin, M. R., Sunarto dan Sabariah. 2008. Pengaruh Dosis Pakan Berbeda
terhadap Pertumbuhan Ikan Mas (Cyprinus carpio) dan Ikan Baung
(Macrones sp.) dengan Sistem Cage-Cum-Cage. Jurnal Akuakultur
Indonesia. 7(1): 59-64.

Triyanto, 1990. Patologi dan Patogenisitas Beberapa Isolat Bakteri Aeromonas
hydrophila Terhadap Ikan Lele (Clariassbatrachus L.). Seminar Nasional
ke-II Penyakit Ikan dan Udang, Bogor.

I. PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Penyakit ikan merupakan salah satu masalah yang harus dihadapi dalam usaha
budidaya ikan. Akibat yang ditimbulkan biasanya tidak sedikit antara lain dapat
menyebabkan gangguan pada ikan budidaya bahkan dapat menyebabkan kematian
hingga 100% dan sangat merugikan terutama secara ekonomi (Kurniastuty et al.,
2004).

Bahan kimia dan antibiotika telah banyak digunakan dalam penangulangan
penyakit pada ikan. Namun demikian penggunaan bahan kimia secara terus
menerus tentu saja akan menimbulkan efek negatif baik bagi lingkungan, ikan
maupun konsumen dan dalam jangka panjang dapat menyebabkan timbulnya
resistensi serta bersifat residu pada ikan (Astuti et al., 2003).

Noga (2000) menjelaskan bahwa pemakaian antibiotik sebagai obat utama dalam
penanganan suatu penyakit akan menimbulkan resistensi dari bakteri penyebab
penyakit, jadi semakin banyak antibiotik yang digunakan maka masalah yang
dihadapi akan semakin besar. Oleh karena itu pencegahan penyakit dengan
menggunakan bahan-bahan yang dapat menimbulkan kekebalan baik dengan

menggunakan vaksin maupun imunostimulan mulai banyak dikembangkan
sebagai alternatif lain dalam pencegahan penyakit ikan.

Penggunaan vaksin merupakan salah satu upaya preventif yang memungkinkan
untuk diterapkan dalam pengendalian penyakit bakteri. Soeripto (2002)
menyebutkan bahwa vaksinasi merupakan salah satu upaya pencegahan penyakit
serta terjadinya resistensi bakteri dan residu antibakteri pada hewan (termasuk
ikan) dengan cara pemberian vaksin ke dalam tubuh ikan. Vaksin merupakan
sediaan antigen yang didapat dari mikroorganisme patogen yang dilemahkan atau
dimatikan, dan meningkatkan kekebalan dengan pembentukan antibodi (Bangun
1992).

Beberapa vaksin yang telah dikembangkan dan berhasil menanggulangi penyakit
ikan antara lain vaksin A. salmonicida terhadap penyakit furunculosis di
Norwegia pada tahun 1993. Vaksin tersebut berhasil memberikan dampak yang
luar biasa dimana wabah penyakit tersebut menurun dan penggunaan antibiotik
yang semula mencapai puluhan ton per tahun menjadi hanya beberapa ratus
kilogram saja (Markedstat dan Grave, 1997). Vaksin A. hydrophila dapat
menanggulangi penyakit Motile Aeromonas Septisemia (MAS) atau penyakit
merah yang dapat menyebabkan tingkat kematian lebih dari 60% (Supriyadi dan
Rukyani, 1990) dalam waktu sekitar 7 hari (Triyanto, 1990). Saat ini telah
dikembangkan vaksin inaktif A. salmonicida di Fakultas Pertanian Jurusan
Budidaya Perairan Universitas Lampung. Hasil penelitian menunjukkan vaksin

tersebut memiliki imunogenisitas yang cukup tinggi pada ikan mas yang
ditunjukkan dengan titer AB yang mencapai 27 (Setyawan et al., 2012).

Vaksin memiliki beberapa keuntungan dalam penanggulangan penyakit ikan
antara lain adalah dampak sampingan relatif tidak ada atau sangat kecil baik
terhadap lingkungan hidup maupun ikan, tingkat perlindungan cukup tinggi,
perlindungan cukup lama sehingga dengan satu kali vaksinasi dapat melindungi
ikan terhadap infeksi selama pemeliharaan yang kira-kira 3 – 4 bulan (Kamiso,
1990). Namun vaksin juga memiliki kendala antara lain cara pemberian vaksin,
daya penyerapan ke dalam tubuh ikan serta masalah penyimpanan. Penelitian ini
lebih difokuskan pada masalah penyimpanan. Vaksin mudah rusak sehingga
diperlukan alat dan cara penyimpanan tertentu, misalnya tempat yang bebas sinar
matahari dan dingin, dimana hal ini merupakan kesulitan bagi petani (Kamiso,
1990). Vaksin merupakan substansi biologi yang cukup sensitif dan berpotensi
untuk rusak selama dalam proses penyimpanan terutama untuk waktu yang lama,
sekitar 2 bulan.

Penyimpanan vaksin yang tidak baik menyebabkan vaksin mudah rusak yang
berarti tidak dapat digunakan untuk melawan target penyakit karena
imunogenisitas dan efektifitas vaksin menurun. Kerusakan vaksin dapat
dipercepat apabila kondisi tempat penyimpanan tidak baik (Meek, 2004).
Kerusakan vaksin dapat disebabkan karena suhu yang panas atau karena proses
pembekuan. Suhu penyimpanan vaksin yang dianjurkan berkisar antara 2 – 8o C,

karena pada kondisi tersebut vaksin akan lebih stabil (Anonim 1995 ; Millien et
al. 2004).

Selain dengan memperhatikan waktu penyimpanan vaksin, penyimpanan vaksin
juga dapat dilakukan dengan penambahan bahan kimia, salah satunya yaitu
menggunakan gliserol. Gliserol merupakan media yang digunakan untuk
melindungi kerusakan bahan yang disimpan dengan metode pendinginan. Gliserol
berperan sebagai komponen antifreeze dalam suatu campuran atau larutan
(Anonim, 2006a). Gliserol akan mencegah kerusakan pada proses pembekuan
karena gliserol akan menurunkan suhu pembekuan. Selain itu gliserol juga
merupakan bahan penetrating cryoprotectant, yaitu bahan pelindung dalam proses
cryopreservation yang melindungi bahan secara intraseluler maupun ekstraseluler
(Lee, 2001). Gliserol dapat digunakan sebagai pengawet yang dapat
mempertahankan kualitas bahan karena sifatnya yang stabil (David, 2006).

Sebelumnya sudah pernah dilakukan penelitian tentang penyimpanan vaksin
polivalen Vibrio dengan penambahan gliserol. Hasil yang didapatkan perlakuan
penambahan gliserol 0,50% yang disimpan pada suhu refrigerator menunjukkan
kecenderungan penurunan kualitas vaksin yang lebih stabil (Ratmonojati, 2007).
Dengan mempertimbangkan masalah penyimpanan tersebut, maka perlu
dilakukan penelitian tentang penambahan gliserol dalam penyimpanan vaksin A.
salmonicida agar tetap memiliki imunogenisitas yang tinggi.

1.2 Tujuan Penelitian

Tujuan dilakukannya penelitian ini yaitu untuk mengetahui dosis gliserol terbaik
dalam penyimpanan vaksin A. salmonicida.

1.3 Manfaat Penelitian

Manfaat dilakukannya penelitian ini yaitu dapat memberikan informasi bagi
masyarakat mengenai gliserol yang dapat mempertahankan tingkat imunogenisitas
vaksin dan dapat menyimpan vaksin dalam waktu relatif lama.

1.4 Kerangka Pikir

Penyakit pada ikan merupakan masalah yang umum dihadapi para pembudidaya
ikan. Kerugian yang diakibatkan seperti penurunan kualitas ikan bahkan dapat
mencapai kematian pada ikan. Cara menanggulangi permasalahan tersebut
kebanyakan dilakukan dengan penggunaan bahan kimia dan antibiotika. Namun
penggunaan bahan – bahan tersebut secara terus menerus dapat menyebabkan
timbulnya resistensi dan bersifat residu pada ikan (Astuti et al., 2003). Oleh sebab
itu pencegahan penyakit dengan menggunakan bahan-bahan yang dapat
menimbulkan kekebalan baik dengan menggunakan vaksin maupun
imunostimulan telah banyak dilaksanakan. Saat ini sedang dikembangkan vaksin
A. salmonicida di Laboratorium Budidaya Perikanan, Program Studi Budidaya
Perairan Fakultas Pertanian Universitas Lampung. Vaksin tersebut memiliki
imunogenisitas yang cukup tinggi yang ditunjukkan nilai titer antibodi mencapai
27 pada ikan mas (Setyawan et al.,2012).

Untuk mempertahankan imunogenisitas vaksin A. salmonicida tersebut terutama
dalam penyimpanan untuk waktu yang cukup lama, perlu dilakukan penelitian
tentang penyimpanan vaksin A. salmonicida dengan menambahkan gliserol. Lee
(2001) menyebutkan bahwa gliserol merupakan bahan penetrating cryoprotectant,
yaitu merupakan bahan pelindung dalam proses cryopreservation yang
melindungi bahan secara intraseluler maupun ekstraseluler. Keunggulan dari
gliserol itu sendiri menurut Anonim (2006b) yaitu :
1.

melindungi kerusakan bahan yang disimpan dengan metode pendinginan,
misalnya dalam pembekuan darah ataupun jaringan tubuh yang lain.

2.

mencegah kerusakan pada proses pembekuan karena gliserol akan
menurunkan suhu pembekuan.

3.

melindungi sel dari kontaminasi dan dapat mencegah perubahan genetik pada
sel tersebut.

4.

dapat digunakan sebagai pengawet yang dapat mempertahankan kualitas
bahan karena sifatnya yang stabil.

5.

gliserol juga dapat berperan sebagai levigation agent untuk mereduksi ukuran
partikel menjadi bentuk powder.

II. TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Aeromonas salmonicida

2.1.1

Klasifikasi dan Morfologi A. salmonicida

A. salmonicida merupakan bakteri Gram negatif, berbentuk batang pendek, tidak
motil, tidak membentuk spora, tidak membentuk kapsul, aerob, katalase positif,
oxidase positif, menghasilkan enzim galatinase, tampak seperti rantai
berpasangan, berwarna putih, berbentuk bulat (circulair) dengan permukaan
cembung (convex) (Anonim, 2007).

Gambar 1. Aeromonas salmonicida
(Sumber: Cipriano and Bullock, 2001)
Keterangan gambar : A
OM
R
PM
B

: A-Layer (Dinding sel)
: Outer membrane (Membran luar)
: Rigid layer (Membran kaku)
: Plasma membrane (Membran plasma)
: Pili like appendages (Kaki jalan berupa Pili)

Cipriano dan Bullock (2001) menyebutkan bahwa A. salmonicida diklasifikasi
sebagai berikut :
Superkingdom : Bacteria
Filum

: Proteobacteria

Kelas

: Gammaproteobacteria

Ordo

: Aeromonadales

Famili

: Aeromonadaceae

Genus

: Aeromonas

Spesies

: A. salmonicida

Bakteri A. salmonicida memiliki banyak subspesies yang masing – masing
memberikan sifat dan patogenitas yang berbeda. Selain membagi secara
taksonomi, A. salmonicida juga dibagi menjadi 2 jenis berdasarkan
karakteristiknya yaitu tipikal dan atipikal (Cipriano dan Bullock, 2001). Strain
tipikal mempunyai karakteristik yang homogen sifat morfologi dan biokimianya.
Strain atipikal mempunyai karakteristik memiliki banyak variasi dari sifat
fisiologi, biokimia dan serologi serta ketahanan terhadap antibiotik (Cipriano dan
Bullock, 2001).

2.1.2 Karakteristik A. salmonicida
Anonim (2007) menyebutkan bahwa sifat biokimia A. salmonicida adalah :
anaerob fakultatif, oxidase (+), katalase (+), dan sedikit menghasilkan asam pada
gula tertentu. Morfologi koloni bakteri A. salmonicida pada medium standar (TSA
dan BHIA) :

 Warna

: Putih

 Bentuk

: Bulat (Circulair)

 Permukaan

: Cembung (Convex)

 Uji Biokimia

: menghasilkan in ndol dan laktosa, menghasilkan enzim

gelatinase
 Pada medium Furunculosis Agar (FA) membentuk pigmen, terutama untuk
subspesies salmonicida

Bakteri ini tidak dapat hidup lama tanpa inangnya dan suhu optimal bagi
pertumbuhannya antara 22 – 28oC, sedangkan pada suhu 35oC pertumbuhannya
terhambat. Bakteri ini dapat dijumpai di lingkungan air tawar maupun air laut dan
dikenal sebagai penyebab penyakit furunculosis (Cipriano dan Bullock, 2001).

2.1.3 Gejala Klinis Infeksi A. salmonicida
Ciri-ciri ikan yang terserang bakteri A. salmonicida menunjukkan gejala warna
tubuh ikan yang berubah menjadi agak gelap, kemampuan berenang ikan
menurun, sirip menjadi geripis, ikan kehilangan nafsu makan, kulit ikan melepuh,
insang terlihat pucat keputih-putihan, mata ikan menjadi agak menonjol, dan
terjadi pendarahan pada kulit dan insang. Bila dibedah, maka organ-organ dalam
seperti usus, ginjal, hati dan limpa akan terlihat mengalami pendarahan (Kordi
dan Ghufran, 2004).

Gejala klinis yang tampak ketika Aeromonas sudah menyerang sistemik (internal),
dapat menyebabkan dropsy atau hydrops. Dropsy terjadi ketika aliran cairan tubuh

terhenti dan merembes keluar dari kapiler dan masuk ke dalam jaringan, rongga
tubuh dan rongga mata. Diagnosa berdasarkan sisik yang berdiri atau
menggembang yang biasanya disebabkan kerusakan pada hati dan ginjal (Masada,
2000; Handayani dan Samsudari, 2005).

2.2 Vaksinasi

Vaksin adalah satu antigen yang biasanya berasal dari suatu jasad patogen yang
telah dilemahkan atau dimatikan, ditujukan untuk meningkatkan ketahanan
(kekebalan) ikan atau menimbulkan kekebalan aktif terhadap suatu penyakit
tertentu. Sedangkan vaksinasi merupakan salah satu upaya penanggulangan
penyakit pada hewan (termasuk ikan) dengan cara pemberian vaksin ke dalam
tubuh hewan agar memiliki ketahanan terhadap serangan penyakit (Ghufran dan
Kordi, 2004).

Syarat dari suatu vaksin adalah harus bersifat immunogen, artinya harus dapat
merangsang dalam pembentukan antibodi yang bertujuan untuk mendapatkan
kekebalan secara aktif, dimana antigen tersebut akan merangsang sel limfoid
membentuk antibodi (Atmomarsono et al., 2004).

Radji (2010) menyebutkan bahwa vaksin yang baik harus memenuhi syarat-syarat
sebagai beikut:
a.

vaksin harus efektif dalam merangsang sistem imun sehingga dapat
memepertahankan tubuh dari serangan mikroorganisme patogen.

b.

vaksin harus stabil dan imunogenesitasnya tidak mudah berkurang

c.

vaksin mudah didapat dengan harga yang terjangkau

d.

vaksin memenuhi persyaratan kualitas mutu yang baik dan aman untuk
digunakan.

Ghufran dan Kordi (2004) menjelaskan bahwa faktor yang mempengaruhi
vaksinasi pada ikan antara lain:
1.

Temperatur, karena pada temperatur yang rendah, produksi antibodi lambat

2.

Umur dan berat ikan, vaksinasi jangan dilakukan pada ikan yang umurnya
kurang dari 2 minggu dan berat badannya kurang dari 1 gram.

Lio-po et al., (2002) mengatakan bahwa vaksinasi dilakukan tergantung dari
spesies ikan, ukuran, model budidaya, penyakit dan umur ikan. Ada 4 metode
pemberian vaksin yaitu :
1.

Perendaman. Metode pemberian vaksin dengan cara ini biasanya dilakukan
pada ikan yang berukuran kecil. Namun metode perendaman membutuhkan
biaya yang tinggi. Antigen akan diambil melalui insang, kulit dan linea
lateralis serta masuk melalui mulut dengan cara ditelan.

2.

Spray atau penyemprotan. Vaksinasi melalui penyemprotan merupakan
variasi dari vaksinasi perendaman. Metode ini dapat digunakan pada ikan
yang berukuran lebih besar dari ikan yang divaksin dengan metode
perendaman. Penyemprotan dilakukan di bawah insang dengan
menyemprotkan dua kali atau lebih tetapi tidak lebih dari sepuluh menit.

3.

Peroral. Vaksinasi dengan metode ini dilakukan dengan dicampurkan pada
bahan makanan. Metode ini banyak memberikan keuntungan seperti tidak

meninggalkan bekas luka pada ikan, menghindari resiko stress, dapat memilih
waktu pemberian vaksin yang tepat dan aman bagi pemberi vaksin serta tidak
ada penyebaran infeksi setelah selesai dilakukan pemberian vaksin.
4.

Injeksi atau penyuntikan. Metode penyuntikan sering digunakan pada industri
salmon. Satu suntikan dapat menaikkan imunitas ikan hingga dapat dilakukan
pemeriksaan bersamaan dengan pemberian vaksin, mengetahui jumlah ikan
yang divaksin, monitoring untuk abnormalitas, serta dapat mengetahui tandatanda penyeakit yang timbul.

2.3 Gliserol

Gliserol ialah suatu trihidroksil alkohol yang terdiri atas tiga atom karbon
(Poedjiadi, 1994). Gliserol mempunyai sifat fisik berbentuk cairan kental bening
atau kuning pucat dan tidak berbau serta mempunyai titik lebur atau cair 17,8o C,
titik didih 290o C, suhu kritis yang dapat merusak 492,2o C, tekanan kritis yang
dapat merusak 42,5 atm (David, 2006).
HO

CH2

HO

CH

HO

CH2

Gambar 2. Gliserol
(Sumber: Poedjiadi, 1994)

Fungsi dari gliserol antara lain digunakan sebagai media untuk melindungi
kerusakan bahan yang disimpan dengan metode pendinginan, misalnya dalam
pembekuan darah ataupun jaringan tubuh yang lain. Gliserol berperan sebagai
komponen antifreeze dalam suatu campuran atau larutan (Anonim, 2006a).

Lee (2001) menyatakan bahwa gliserol akan mencegah kerusakan pada proses
pembekuan karena gliserol akan menurunkan suhu pembekuan. Gliserol biasanya
digunakan dalam proses cryopreservation (penyimpanan dalam suhu dingin)
maupunkultursel untuk melindungi sel dari kontaminasi dan dapat mencegah
perubahan genetik pada sel tersebut (Anonim, 2006c). Gliserol juga dapat
mencegah kerusakan sel pada proses pendinginan dan thawing. Gliserol
merupakan bahan penetrating cryoprotectant, yaitu merupakan bahan pelindung
dalam proses cryopreservation yang melindungi bahan secara intraseluler maupun
ekstraseluler (Lee, 2001). David (2006) juga menyebutkan bahwa gliserol dapat
digunakan sebagai pengawet yang dapat mempertahankan kualitas bahan karena
sifatnya yang stabil.

III. METODOLOGI

3.1 Waktu dan Tempat Penelitian

Penelitian dilaksanakan pada bulan Maret sampai bulan Mei 2012 di
Laboratorium Budidaya Perikanan Jurusan Budidaya Perairan Fakultas Pertanian
Universitas Lampung.

3.2 Alat dan Bahan
3.2.1

Penelitian Pendahuluan

3.2.1.1 Pembuatan Media
1. Alat : Petridish (Normax®), tabung reaksi (Iwaki glassTM), Erlenmeyer
(Pyrex®), hot stirrer plate (Stuart CB162TM), corong (Iwaki glassTM), lampu
bunsen, autoclave, sprayer, Alumunium foil, timbangan digital (BOECO
Germany d=0,001 gr), kapas, karet, plastic dan refrigerator.
2. Bahan : Alkohol 70%, aquadest, media TSA (OXOIDTM, USA), TSB
(OXOIDTM, USA), GSP.

3.2.1.2 Pembuatan Vaksin Aeromonas salmonicida dengan Gliserol
1. Alat : Jarum ose, spektrofotometer (Genesys-20, Thermospectronic),
mikropipet (Nesco®), dan sentrifuge(80–2).
2. Bahan : Formaln 1%, isolat bakteri A. salmonicida (koleksi stasiun karantina
ikan kelas I Panjang, Lampung), PBS (phospat buffer saline), Gliserol 40%.

3.2.1.3 Persiapan Penelitian
1. Alat : Akuarium ukuran 60x40x40 cm3 15 buah (5 perlakuan dengan 3 kali
ulangan), aerator, selang aerasi, dan batu aerasi.
2. Bahan : Ikan mas (Cyprinus carpio L) ukuran ± 30 gr sebanyak 200 ekor
(berasal dari petani ikan, Pringsewu, Lampung), dan pakan ikan komersil
(merk 781 dengan kadar protein 30 – 32%) .

3.2.2

Uji Pengaruh Penambahan Gliserol pada Vaksin Aeromonas
salmonicida

1. Alat : Spuit 26 G ½” ukuran 1 ml (TerumoTM), botol falcon (IwakiTM), alat
penangkap ikan, baskom berbahan plastik.
2. Bahan : Ikan uji, vaksin inaktif A. salmonicida, vaksin inaktif A. salmonicida
dengan penambahan gliserol 0,25%, vaksin inaktif A. salmonicida dengan
penambahan gliserol 0,50%, dan vaksin inaktif A. salmonicida dengan
penambahan gliserol 0,75%.

3.2.3

Pengamatan

3.2.3.1 Titer Antibodi
1. Alat : Needle/spuit 26 G ½” ukuran 1 ml (TerumoTM), refrigerator (LG), botol
falcon (IwakiTM), microtiter plate (REF. 650101, Greiner bio – oneTM ; PS –
microplate – 96 well), mikropipet (Nesco®), tabung eppendorf (Pyrex®. Under
lic), plastic, dan sentrifuge(80–2).
2. Minyak cengkeh (Cap House Brand), larutan EDTA 10%, Sampel darah ikan
mas per ulangan (tanpa vaksin dan gliserol, tanpa gliserol, vaksin dengan
gliserol 0,25%, vaksin dengan gliserol 0,5%, vaksin dengan gliserol 0,75%)

3.2.2.2 Analisis kualitas air
1. Alat : Termometer suhu (Japan. 1-1000C), pH meter (Hanna Instruments.
Microcomputer. Ketelitian : 0,00 – 14,00), dan DO meter (Lutron . DO-5509).
2. Bahan : Sampel air akuarium pemeliharaan ikan mas (Cyprinus carpio L).

3.3 Metode Penelitian
3.4.1 Penelitian Pendahuluan
3.4.1.1 Pembuatan Media
a. Media – media yang digunakan dipersiapkan terlebih dahulu seperti media
TSB, TSA, dan GSP.
b. Media-media yang digunakan ditimbang sesuai dengan takaran kemudian
dimasukkan ke dalam labu erlenmeyer.
c. Aquades ditambahkan ke dalam labu erlenmeyer kemudian dihomogenisasi
menggunakan stirrer.
d. Media TSB dituangkan kedalam tabung reaksi, media TSA dan GSP kedalam
cawan petri. Proses penuangan dilakukan didekat bunsen agar bakteri yang
tidak dibutuhkan tidak tumbuh pada media tersebut.
e. Media – media disterilisasi menggunakan autoklaf.
f. Media disimpan dalam refrigerator dan siap digunakan.

3.4.1.2 Pembuatan Vaksin A. salmonicida dengan Penambahan Gliserol
selama 24 Jam pada Suhu Ruang
1.

Isolat bakteri A. salmonicida dikultur pada media cair TSB, lalu diinkubasi
selama 24 jam pada suhu ruang.

2.

Pengkayaan bakteri dilakukan dengan memindahkan inokulum A.
salmonicida dari media TSB ke media TSA lalu diinkubasi selama 24 jam
pada suhu ruang.

3.

Kemudian dilakukan pemanenan bakteri A. salmonicida, kumpulkan dengan
batang spreader dan masukkan kedalam erlenmeyer menggunakan corong,

4.

Vaksin diinaktifasi dengan penambahan formalin 1% kemudian diinkubasi
selama 24 jam pada suhu ruang.

5.

Uji viabilitas bakteri pada medium spesifik GSP dan diinkubasi selama 24
jam pada suhu ruang.

6.

Jika bakteri sudah tidak tumbuh, dilakukan pencucian formalin menggunakan
PBS dengan cara disentrifuse dengan kecepatan 3500 rpm selama 30 menit.
Sentriifuse dilakukan sebanyak 3 kali, setiap kali selesai sentrifuse,
supernatant dibuang.

7.

Dihitung kepadatan vaksin inaktif dengan spektrofotometer (λ=625 nm)
mengacu pada standar McFarland.

8.

Gliserol ditambahkan ke dalam vaksin sesuai perlakuan masing–masing
(gliserol 0,25%, gliserol 0,50% dan gliserol 0,75%).

9.

Vaksin yang telah ditambahkan gliserol disimpan selama 1 bulan (30 hari) di
refrigerator.

3.4.1.3 Persiapan Penelitian
1.

Dipersiapkan ikan mas (Cyprinus carpio L) ukuran 30 ± 0,15 gr sebanyak
200 ekor lalu diadaptasikan selama 1 minggu.

2.

Ikan dipelihara dan diberi aerasi, serta diberi pakan pelet 2–3 kali sehari.

3.

Selama masa pemeliharaan atau adaptasi dilakukan manajemen kualitas air
dan kesehatan ikan diantaranya sifon dan ganti air.

3.4.2

Uji Pengaruh Penambahan Gliserol pada Vaksin A. salmonicida

Gliserol ditambahkan ke dalam vaksin inaktif A. salmonicida dengan 5 perlakuan,
3 ulangan. Perlakuannya adalah sebagai berikut :
A : Kontrol negatif, tanpa vaksin dan tanpa gliserol (berisi PBS)
B : Kontrol positif, vaksin tanpa gliserol
C : Vaksin dengan penambahan gliserol 0,25%
D : Vaksin dengan penambahan gliserol 0,50%
E : Vaksin dengan penambahan gliserol 0,75%
Metode pemberian vaksin yang digunakan dalam penelitian ini yaitu dengan
penyuntikan secara intra peritoneal (i.p) dengan dosis 107 sel/ikan atau
0,1ml/ikan.

3.4.3

Pengamatan

3.3.1.1 Titer Antibodi
Pengamatan titer antibodi diperoleh dari pengamatan reaksi aglutinasi antara
serum darah pada ikan mas yang direaksikan dengan vaksin inaktif whole cell
A. salmonicida. Berikut prosedur pengamatan titer antibodi yang dilakukan :

1. Ikan yang terlebih dahulu dibius dengan minyak cengkeh diambil dan
dimasukkan ke dalam ember.
2. Serum titer antibodi pada darah ikan diambil :
Penyimpanan Vaksin
Penyimpanan Vaksin 0 hari

Penyimpanan Vaksin 30 hari

1.
2.
3.
1.
2.
3.

Pengambilan Darah
Sebelum vaksin
Seminggu setelah vaksin I
Seminggu
setelah
vaksin
(booster)
Sebelum vaksin
Seminggu setelah vaksin I
Seminggu
setelah
vaksin
(booster)

II

II

3. Darah diambil menggunakan spuit ukuran 1 ml pada bagian vena caudal.
4. Serum yang telah diambil disimpan di refrigerator. Pengujian dengan metode
aglutinasi mengacu pada prosedur standar mikroaglutinasi (Robberson, 1990)
dengan sedikit modifikasi secara lengkap tahap uji aglutinasi adalah sebagai
berikut :
1) Serum@ 25 µl dimasukkan kedalam sumuran 1 dan 2.
2) PBS@ 25 µl dimasukkan ke sumuran 2 – 12.
3) Sumuran kedua direpipeting (pipet ulang) untuk mengencerkan serum,
kemudian dilanjutkan ke sumuran 3 sampai 11.
4) Ag@ 25 µl dimasukkan ke sumur 1 – 12.
5) Mikrotiter plate digoyang – goyangkan selama ± 3 menit dengan pola
membentuk angka 8.
6) Hasil titer diinkubasi dalam refrigerator selama 1 malam.
7) Dilakukan pengamatan reaksi aglutinasi pada masing – masing sumur yang
ditandai dengan adanya kabut warna keruh/putih atau dot yang menyebar ke
seluruh sumuran yang berarti antibodi telah terbentuk.

3.4.3.2 Kualitas air
Parameter kualitas air yang diamati adalah oksigen terlarut, pH dan suhu.
Pengukuran parameter kualitas air dilakukan secara harian. Dengan harapan
parameter kualitas air selama penelitian terukur dan masih berada dalam kisaran
strandar kehidupan ikan uji (ikan mas).

3.4 Parameter Uji
Parameter yang diamati dalam penelitian ini adalah pengaruh penambahan
gliserol yang dilihat dari titer antibodi dan kualitas air.

3.5 Analisis Data
Analisis data pada penelitian ini, yaitu parameter utama berupa hasil titer antibodi
setiap perlakuan hingga pengenceran yang tercatat dilakukan dengan análisis
statistik non parametrik, disajikan dalam bentuk grafik dan tabel. Sedangkan
parameter pendukung berupa kualitas air dianálisis secara deskriptif.

Motto Hidup

Selalu berbuat baik kepada orang lain, tidak peduli balasan
apa yang diberikan, yang penting kita tidak berbuat jahat
pada orang lain.
(Rinda Aryani Putri)
Jangan melakukan suatu hal dikarenakan ingin memperoleh
pujian. Kerjakanlah karena itu hal yang benar untuk
dilakukan.
If we did all the things we are capable of, we would literally
astound ourselves.
(Thomas A. Edison)

Judul Skripsi

: PENYIMPANAN VAKSIN INAKTIF WHOLE
CELL Aeromonas salmonicida DENGAN
PENAMBAHAN GLISEROL

Nama Mahasiswa

: Rinda Aryani Putri

Nomor Pokok Mahasiswa

: 0814111012

Jurusan/Program Studi

: Budidaya Perairan

Fakultas

: Pertanian

MENYETUJUI,
1. Komisi Pembimbing

Wardiyanto, S.Pi, M.P
NIP.1969070520001121001

Agus Setyawan, S.Pi., M.P.
NIP. 198408052009121003

2. Ketua Jurusan Budidaya Perairan

Ir. Siti Hudaidah, M.Sc.
NIP. 196402151996032001

MENGESAHKAN

1. Tim Penguji

Ketua

: Wardiyanto, S.Pi, M.P

.......................

Sekretaris

: Agus Setyawan, S.Pi., M.P.

.......................

Penguji
Bukan Pembimbing

: Esti Harpeni, S.T., MApp Sc.

.......................

2. Dekan Fakultas Pertanian

Prof. Dr. Ir. H. Wan Abbas Zakaria, M.S.
NIP. 196108261987021001

Tanggal Lulus Ujian Skripsi : 06 November 2012

Kupersembahkan hasil karya
ini untuk orang tua tersayang, adik
ku dan keluarga ku
Serta teman – teman
dan almamater tercinta ........

RIWAYAT HIDUP

Rinda Aryani Putri lahir di Bandar Lampung 27 Desember
1990. Penulis merupakan anak pertama dari dua bersaudara.
Pendidikan Taman Kanak-kanak (TK) Sari Teladan Bandar
Lampung diselesaikan pada tahun 1996. Pendidikan
Sekolah Dasar di SD Negeri 2 Palapa Bandar Lampung
selesai pada tahun 2002. Pendidikan Sekolah Menengah Pertama (SMP)
diselesaikan pada tahun 2005 di SMP Negeri 25 Bandar Lampung. Dan
menyelesaikan pendidikan Sekolah Menengah Atas (SMA) pada tahun 2008 di
SMA Negeri 3 Bandar Lampung.

Pada tahun 2008 penulis melanjutkan jenjang studi S1 di Jurusan Budidaya
Perairan Fakultas Pertanian Universitas Lampung melalui jalur PKAB. Selama
menjadi mahasiswa penulis pernah menjadi asisten dosen pada praktikum Biota
Laut. Selain menjadi asisten dosen, penulis juga aktif dalam kegiatan organisasi
baik internal maupun ekstrenal di lingkungan Universitas Lampung diantaranya
pernah menjadi Sekretaris Bidang Kewirausahaan Himpunan Mahasiswa
Budidaya Perairan Unila (HIDRILA) periode 2009-2010, Bendahara Umum
Himpunan Mahasiswa Budidaya Perairan Unila (HIDRILA) periode 2010-2011

dan Wakil Sekretaris Legislatif Badan Eksekutif Mahasiswa (BEM) Universitas
Lampung periode 2011-2012.
Pada bulan Juni 2011 penulis melakukan Kuliah Kerja Nyata (KKN) Tematik di
Desa Punjul Agung, Kabupaten Way Kanan selama 40 hari. Pada bulan Januari
2012 penulis melakukan Praktek Umum (PU) selama 30 hari di Balai Besar
Pengembangan Budidaya Air Tawar (BBPBAT) Sukabumi, Jawa Barat.

Hingga akhirnya penulis dapat menyelesaikan pendidikan S1 di Jurusan Budidaya
Perairan pada tahun 2012 dengan judul skripsi “Penyimpanan Vaksin Inaktif
Whole Cell Aeromonas salmonicida dengan Penambahan Gliserol”.

SANWACANA

Puji syukur kehadirat Allah SWT yang telah memberikan berkat, rahmat dan
hidayah-Nya kepada penulis sehingga dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul
“Penyimpanan Vaksin Inaktif Whole Cell Aeromonas Salmonicida dengan
Penambahan Gliserol”. Shalawat serta salam semoga selalu tercurahkan kepada
nabi kita Muhammad SAW yang selalu kita nantikan syafa’atnya di yaumil akhir
kelak, amin.

Dalam kesempatan ini penulis mengucapkan terimakasih kepada :
1.

Bapak Prof. Dr. Ir. H. Wan Abbas Zakaria, M.S., selaku Dekan Fakultas
Pertanian Unila,

2.

Ibu Ir. Siti Hudaidah, M.Sc., selaku Ketua Jurusan Budidaya Perairan Unila,

3.

Bapak Wardiyanto, S.Pi., M.P., selaku pembimbing utama yang telah
membimbing, memberikan masukan dan saran kepada penulis hingga
selesainya skripsi ini.

4.

Bapak Agus Setyawan, S.Pi., M.P., selaku pembimbing kedua dan sebagai
pembimbing akademik yang telah membimbing dan memberikan saran serta
kritik dalam proses penyelesaian skripsi ini.

5.

Ibu Esti Harpeni, S.T., MApp Sc. selaku penguji yang telah memberikan
masukan dan saran-sarannya untuk perbaikan skripsi ini.

6.

Seluruh dosen dan staf jurusan Budidaya Perairan Fakultas Pertanian
Universitas Lampung.

7.

Orang tua tersayang dan tercinta papa mama yang telah mendoakan dan
memberi dukungan penuh dalam segala hal.

8.

Adikku A. Irfandi Indra serta keluarga yang selalu memberi do’a dan
dukungannya kepada penulis.

9.

Teman seperjuangan Ria Hindra Sari yang bersama-sama melakukan
penelitian dari awal sampai akhirnya menjadi sebuah skripsi.

10. Teman seperjuangan penelitian Septi, Selvi dan Romaria yang sama-sama
melakukan penelitian di Laboratorium Budidaya Perairan (Lab. Basah).
11. Sahabat-sahabat pendukung Lisa (Bantet) dan Qorie (Bakpau) yang telah
menemani, mendoakan dan memberikan semangat.
12. Ucup, Dedo, Rudy, Deny,