Uji Validasi Pada Estimasi Kandungan Kafein Dan Asam Sitrat Dalam Minuman Energi Secara Spektrofotometri Derivatif

  

Lampiran 1. Gambar Sampel Minuman Berenergi

®

  1. Merek Kratingdaeng

  ®

  Lampiran 2. Komposisi Sampel Minuman Berenergi

  Spesifikasi sampel minuman berenergi:

  ® ®

  Merek Kratingdaeng Merek Kratingdaeng-S No. Bets 495P120 K 13 No. Bets 437A110 C 11

  Tanggal Kadaluarsa: Mei 2015 Tanggal Kadaluarsa: September 2015 Taurin 1000 mg Taurin 1000 mg

  Kafein 50 mg Kafein 50 mg

  Inositol 50 mg Inositol 50 mg Vitamin B3 20 mg Vitamin B3 20 mg Vitamin B6 5 mg Vitamin B6 2 mg Provitamin B5 5 mg Provitamin B5 5 mg Vitamin B12 5 mcg Vitamin B12 5 mcg Gula 25 mg Gula 25 mg Ponceau 4R Cl 16255 Ponceau 4R Cl 16255 Tartrazine Cl 19140 Tartrazine Cl 19140

  Asam Sitrat Asam Sitrat

  Trisodium Sitrat Trisodium Sitrat Natrium Benzoat Natrium Benzoat Perasa BPOM RI SL 03160091 Perasa BPOM RI SL 03160091

  Lisin 50 mg Choline Bitartrate 50 mg Glukuronolakton 400 mg

  Panjang gelombang maksimum bahan-bahan dalam sampel minuman berenergi: Bahan Panjang gelombang Rujukan maksimum (nm)

  Taurin 570 Draganov, dkk., 2014 Kafein 273 Moffat, dkk., 2005 Inositol 261 Moffat, dkk., 2005 Vitamin B3 261 Moffat, dkk., 2005 Vitamin B6 290 Moffat, dkk., 2005 Vitamin B12 361 Moffat, dkk., 2005 Sukrosa 190 Sumantri, dkk., 2013 Natrium Benzoat 230 Moffat, dkk., 2005 Tartrazin 425 Moffat, dkk., 2005 Asam sitrat 208 Sari, 2014 Ponceau 4R 506 Kartadarma, dkk., 2007 Vitamin B5 200 Engel, 2009

  

Lampiran 3. Gambar Alat Spektrofotometer Ultraviolet

  Lampiran 4. Uji Kualitatif Asam Sitrat dengan Pereaksi Deninges Zat Identifikasi Hasil Pengamatan

  Larutan asam sitrat + pereaksi Deninges Endapan Putih (+)

  (pembanding)

  ®

  Sampel Kratingdaeng + pereaksi Deninges Endapan Putih (+)

  ®

  Sampel Kratingdaeng-S + pereaksi Deninges Endapan Putih (+)

  

Lampiran 5. Perhitungan Pembuatan HCl 0,1N

  HCl pekat = 37% setara dengan 12 N

  V

  1 x N 1 =

  V

  2 x N

  1

  1000 ml V = x

  12 N

  1

  ,

  1 N = 8,3 mL

  Lampiran 6. Bagan Alir Prosedur Penelitian

  diambil 2,5 mL dimasukkan ke dalam labu tentukur 25 mL dilarutkan dan dicukupkan dengan HCL 0,1N

  LIB II Kafein 100 μg/mL

  Baku 1

  4 μg/mL

  Baku 3

  8 μg/mL

  Baku 4

  10 μg/mL

  Baku 2

  6 μg/mL

  Baku 5

  12 μg/mL diambil 0,4 mL diambil 0,8 mL diambil 1 mL diambil 0,6 mL diambil 1,2 mL diukur serapan maksimum pada λ 200- 400 nm

  Serapan Maksimum

  Kafein ditimbang 25 mg dimasukkan ke dalam labu tentukur 25 mL dilarutkan dan dicukupkan dengan HCL 0,1N

  LIB I Kafein 10 00 μg/ml

  Lampiran 6. (Lanjutan)

  Asam Sitrat ditimbang 250 mg dimasukkan ke dalam labu tentukur 25 mL dilarutkan dan dicukupkan dengan HCL 0,1N

  LIB Asam Sitrat 10.000 μg/ml diambil 0,2 mL diambil 0,4 mL diambil 0,5 mL

  Baku 1 Baku 3 Baku 4 200 400

  μg/mL μg/mL 500

  μg/mL diukur serapan diambil 0,3 mL maksimum diambil 0,6 mL pada λ 200- 400 nm

  Baku 2 Baku 5

  300 μg/mL 600 Serapan

  μg/mL Maksimum

  Lampiran 6. (Lanjutan)

  Larutan Baku Kafein (4; 6; 8; 10

  ; 12 μg/mL ) diukur serapan pada λ 200-400 nm ditransformasikan ke serapan derivat pertama ditransformasikan ke serapan derivat kedua ditentukan zero crossing ditentukan panjang gelombang analisis

  kafein = 293.60 nm

  λ dibuat kurva kalibrasi Persamaan Regresi

  Lampiran 6. (Lanjutan)

  Larutan Baku Asam Sitrat (200; 300; 400; 500; 600

  μg/mL) diukur serapan pada λ 200-400 nm ditransformasikan ke serapan derivat pertama ditransformasikan ke serapan derivat kedua ditentukan zero crossing ditentukan panjang gelombang analisis

  asam sitrat = 236.0 nm

  λ dibuat kurva kalibrasi Persamaan Regresi

  Lampiran 6. (Lanjutan)

  Sampel diambil 25 mL dimasukkan ke dalam beaker gelas disaring dibuang ± 10 ml filtrat pertama filtrat selanjutnya ditampung diambil 0,3 mL dimasukkan ke dalam labu tentukur 25 mL dilarutkan dan dicukupkan dengan HCL 0,1N diukur pada λ 293.60 nm dan 236.0 nm

  Nilai Absorbansi dihitung Kadar

  Lampiran 7. Kurva Serapan Kafein Baku dan Asam Sitrat Baku 2.00000 1.50000

  . bs A

  1.00000 0.50000 0.00000 200.00 250.00 300.00 350.00 nm.

  Lampiran 7. (Lanjutan) nm.

  200.00 250.00 300.00 350.00 A bs .

  1.00000 0.50000 0.00000

  Lampiran 7. (Lanjutan) 1.50000 . bs

  1.00000 A

  0.50000 0.00000 200.00 250.00 300.00 350.00 nm.

  Lampiran 7. (Lanjutan) nm.

  200.00 250.00 300.00 350.00 A bs .

  0.40000 0.20000 0.00000

  Lampiran 7. (Lanjutan) nm.

  200.00 250.00 300.00 350.00 A bs .

  0.40000 0.20000 0.00000

  200.00 250.00 300.00 350.00 A bs .

  

Lampiran 8. Kurva Serapan Derivat Pertama Kafein dan Asam Sitrat

nm.

  0.00000

• 0.05000
• 0.10000
• 0.12672

  Lampiran 8. (Lanjutan) 0.00000 . bs A

• 0.05000
• 0.07514 200.00 250.00 300.00 350.00 nm.

  200.00 250.00 300.00 350.00 A bs .

  Lampiran 8. (Lanjutan) nm.

  0.05000 0.00000

• 0.05000
• 0.10000
• 0.12717

  Lampiran 8. (Lanjutan) 0.00000 . bs A

• 0.01000
• 0.01694 200.00 250.00 300.00 350.00 nm.

  200.00 250.00 300.00 350.00 A bs .

  Lampiran 8. (Lanjutan) nm.

  0.00000

• 0.01000
• 0.02000
• 0.02475

  

Lampiran 9. Kurva Serapan Derivat Kedua Kafein dan Asam Sitrat

0.00000 . bs A

• 0.02000
• 0.04038 200.00 250.00 300.00 350.00 nm.

  200.00 250.00 300.00 350.00 A bs .

  Lampiran 9. (Lanjutan) nm.

  0.00500 0.00000

• 0.00500
• 0.01000
• 0.01573

  Lampiran 9. (Lanjutan) 0.00000 . bs A

• 0.02000
• 0.04038 200.00 250.00 300.00 350.00 nm.

  Lampiran 9. (Lanjutan) 0.00100 0.00000

  . bs A

• 0.00100
• 0.00178 200.00 250.00 300.00 350.00 nm.

  200.00 250.00 300.00 350.00 A bs .

  Lampiran 9. (Lanjutan) nm.

  0.00100 0.00000

• 0.00100
• 0.00200
• 0.00238

  Lampiran 10. Kurva Serapan Panjang Gelombang Analisis Kafein dan Asam

  Sitrat Kurva serapan derivatif kedua kafein konsentrasi 10

  μg/mL pada λ = 293.60 nm Kurva serapan derivatif kedua asam sitrat konsentrasi 500

  μg/mL pada λ = 236.0 nm

  Lampiran 10. (Lanjutan)

  Kurva serapan derivat kedua campuran kafein konsentrasi 10 μg/mL dan asam sitrat konsentrasi 500

  μg/mL

  

Lampiran 11. Hasil Pengukuran Serapan Derivat Kedua Kafein, Asam Sitrat

  dan Campuran Kafein dan Asam Sitrat pada λ 200-300 nm

  Lampiran 11. (Lanjutan)

  Lampiran 11. (Lanjutan)

   Lampiran 11. (Lanjutan)

  Lampiran 11. (Lanjutan)

  Lampiran12. Data Kalibrasi Kafein BPFI, Persamaan Regresi dan Koefisien

  Korelasi Kalibrasi Serapan Derivat Kedua Kafein pada Panjang Gelombang 293,60 nm No.

  Absorbansi (Y)

Konsentrasi (μg/mL) (X)

  1. 0,0000 0,00000 2. 4,0000 0,00118 3. 6,0000 0,00179 4. 8,0000 0,00238 5. 10,0000 0,00299 6. 12,0000 0,00358

  Perhitungan Persamaan Garis Regresi

  2`

  2 No.

  X Y

  XY

  X Y 1. 0,0000 0,00000 0,0000 0,0000 0,000000000 2. 4,0000 0,00118 0,00472 16,0000 0,000001392 3. 6,0000 0,00179 0,01074 36,0000 0,000003204 4. 8,0000 0,00238 0,01904 64,0000 0,000005702 5. 10,0000 0,00299 0,02990 100,0000 0,000008940 6. 12,0000 0,00358 0,04296 144,0000 0,000012816

  2

  ΣX = 40 ΣY = 0,01192

  2 =

  ΣXY = Σ Y = 360

  ΣY =6,666667 = 0,00198667 0,10736 0,000032054

  Maka, persamaan garis regresinya adalah

  Lampiran 12. (Lanjutan)

  Perhitungan Koefisien Korelasi ( )

  =

  0,9997 Maka, koefisien korelasi dari data kalibrasi serapan derivat kedua kafein pada panjang gelombang 293,60 nm adalah 0,9997.

  Lampiran 13. Data Kalibrasi Asam Sitrat, Persamaan Regresi dan Koefisien

  Korelasi Kalibrasi Serapan Derivat Kedua Asam Sitrat Pada Panjang Gelombang 236,0 nm No.

  Absorbansi (Y)

Konsentrasi (μg/mL) (X)

  1. 0,0000 0,00000 2. 200,0000 0,00059 3. 300,0000 0,00093 4. 400,0000 0,00119 5. 500,0000 0,00150 6. 600,0000 0,00181

  Perhitungan Persamaan Garis Regresi

  `

  2

  2 No.

  X Y

  XY

  X Y 1. 0,0000 0,00000 0,0000 0,0000 0,0000

• 7

  2. 200,0000 0,00059 0,118 40000 3,48.10

• 7

  3. 300,0000 0,00093 0,278 90000 8,64.10

• 7

  4. 400,0000 0,00119 0,476 160000 14,16.10

• 7

  5. 500,0000 0,00150 0,750 250000 22,5.10

• 7

  6. 600,0000 0,00181 1,086 360000 32,76.10

  2

  2

  ΣX = 2000 ΣY = 0,00602 = =

  ΣXY = ΣX ΣY

• 7

  2,709 900000 81,54.10

  =333,333 = 0,0010033

  Maka persamaan garis regresinya adalah

  Lampiran 13. (Lanjutan)

  Perhitungan Koefisien Korelasi ( )

  =

  Maka, koefisien korelasi dari data kalibrasi serapan derivat kedua asam sitrat pada panjang gelombang 236,0 nm adalah 0,9999.

• 6
• 6
• 12

• 6
• 4 No.

• -6

• 5
• 9
• 5

  16,615 μg/mL

  11,1090 1,6665 .10

  2

  Σ (Y-Yi)

  ) 1 0,0000 0,00000 0,0000 0,0000 0,0000 2 200,0000 0,00059 601,8 -1,18 1,3924 3 300,0000 0,00093 902,7 2,73 7,4529 4 400,0000 0,00119 1203,6 -1,36 1,8496 5 500,0000 0,00150 1504,5 -0,45 0,2025 6 600,0000 0,00181 1805,4 0,46 0,2116

  10

  2 (

  ) (Y-Yi)

  ) Y-Yi (10

  X Y Yi (10

  2. Persamaan garis regresi asam sitrat adalah Y = (6,1027X + 0,4019) . 10

  0,2698 μg/mL

  0,0809 μg/mL

  260,17 8,065.10

  2

  49 Σ(Y-Yi)

  ) 1 0,0000 0,00000 6,1 -6,1 37,21 2 4,0000 0,00118 1189,5 -9,5 90,25 3 6,0000 0,00179 1787,3 2,7 7,29 4 8,0000 0,00238 2385,1 -5,1 26,01 5 10,0000 0,00299 2982,9 7,1 50,41 6 12,0000 0,00358 3580,7 -7

  (10

  2

  ) (Y-Yi)

  ) Y-Yi (10

  X Y Yi (10

  1. Persamaan garis regresi kafein adalah No.

  Kuantitasi (Limit of Quantitation, LOQ) Kafein dan Asam Sitrat

  

Lampiran 14. Perhitungan Batas Deteksi (Limit of Detection, LOD) dan Batas

  55,5838 μg/mL

  

Lampiran 15. Kurva Serapan Derivat Kedua Kafein dan Asam Sitrat dalam

  Sampel

  ®

  Kurva serapan kafein dan asam sitrat dalam sampel Kratingdaeng -1

  ®

  Kurva serapan kafein dan asam sitrat dalam sampel Kratingdaeng -2

  Lampiran 15. (Lanjutan) ®

  Kurva serapan kafein dan asam sitrat dalam sampel Kratingdaeng -3

  ®

  Kurva serapan kafein dan asam sitrat dalam sampel Kratingdaeng -4

  Lampiran 15. (Lanjutan) ®

  Kurva serapan kafein dan asam sitrat dalam sampel Kratingdaeng -5

  ®

  Kurva serapan kafein dan asam sitrat dalam sampel Kratingdaeng -6

  Lampiran 15. (Lanjutan) ®

  Kurva serapan kafein dan asam sitrat dalam sampel Kratingdaeng -1 adisi asam sitrat sebanyak 500 µg/mL

  ®

  Kurva serapan kafein dan asam sitrat dalam sampel Kratingdaeng -2 adisi asam sitrat sebanyak 500 µg/mL

  Lampiran 15. (Lanjutan) ®

  Kurva serapan kafein dan asam sitrat dalam sampel Kratingdaeng -1 adisi asam sitrat sebanyak 600 µg/mL

  ®

  Kurva serapan kafein dan asam sitrat dalam sampel Kratingdaeng -2 adisi asam sitrat sebanyak 600 µg/mL

  Lampiran 15. (Lanjutan) ®

  Kurva serapan kafein dan asam sitrat dalam sampel Kratingdaeng-S -1

  ®

  Kurva serapan kafein dan asam sitrat dalam sampel Kratingdaeng-S -2

  Lampiran 15. (Lanjutan) ®

  Kurva serapan kafein dan asam sitrat dalam sampel Kratingdaeng-S -3

  ®

  Kurva serapan kafein dan asam sitrat dalam sampel Kratingdaeng-S -4

  Lampiran 15. (Lanjutan) ®

  Kurva serapan kafein dan asam sitrat dalam sampel Kratingdaeng-S -5

  ®

  Kurva serapan kafein dan asam sitrat dalam sampel Kratingdaeng-S -6

  Lampiran 15. (Lanjutan) ®

  Kurva serapan kafein dan asam sitrat dalam sampel Kratingdaeng-S -1 adisi asam sitrat sebanyak 500 µg/mL

  ®

  Kurva serapan kafein dan asam sitrat dalam sampel Kratingdaeng-S -2 adisi asam sitrat sebanyak 500 µg/mL

  Lampiran 15. (Lanjutan) ®

  Kurva serapan kafein dan asam sitrat dalam sampel Kratingdaeng-S -1 adisi asam sitrat sebanyak 600 µg/mL

  ®

  Kurva serapan kafein dan asam sitrat dalam sampel Kratingdaeng-S -2 adisi asam sitrat sebanyak 600 µg/mL

  

Lampiran 16. Hasil Analisis Kandungan Jumlah Kafein dan Asam Sitrat dalam

  Kadar asam sitrat persaji

  0,00005 16,6168

  1313,4631

  c. Absorbansi asam sitrat dan absorbansi asam sitrat dalam sampel yang diadisi dengan asam sitrat sebanyak 600 µg/mL No

  236,0 nm Absorbansi setelah diadisi baku asam sitrat 600 µg/mL

  Absorbansi analisis asam sitrat

  Konsentrasi asam sitrat (µg/mL)

  (mg/Kg) 1 -0,00079 0,00106 0,00005

  5 -0,00078 0,00076 0,00004

  16,6168 1313,4631 2 -0,00079 0,00106 0,00004 13,2270 1050,7742

  3 -0,00077 0,00107 0,00004

  13,2270 1050,7742 4 -0,00078 0,00107

  0,00005 16,6168

  1313,4631 5 -0,00078 0,00106 0,00004 13,2270 1050,7742 6 -0,00079 0,00106

  0,00005 16,6168

  1313,4631

  13,2270 1050,7742 6 -0,00079 0,00076

  9,9701 788,0779 4 -0,00078 0,00076 0,00004 13,2270 1050,7742

  Sampel

  b. Absorbansi asam sitrat dan absorbansi asam sitrat dalam sampel yang diadisi dengan asam sitrat sebanyak 500 µg/mL No

  1. Sampel Kratingdaeng

  ®

  a. Absorbansi kafein No

  Absorbansi Kafein pada λ 293,60 nm

  Konsentrasi Kafein (µg/mL)

  Kadar Kafein persaji (mg) 1 0,00119 3,9632 49,5400 2 0,00118 3,9301 49,1263 3 0,00119 3,9632 49,5400 4 0,00120 3,9964 49,9550 5 0,00119 3,9632 49,5400 6 0,00118 3,9301 49,1263

  Absorbansi awal pada λ 236,0 nm

  1050,7742 3 -0,00077 0,00076 0,00003

  Absorbansi setelah diadisi baku asam sitrat 500 µg/mL

  Absorbansi analisis asam sitrat

  Konsentrasi asam sitrat (µg/mL)

  Kadar asam sitrat persaji

  (mg/Kg) 1 -0,00079 0,00075 0,00004

  13,2270 1050,7742 2 -0,00079 0,00075

  0,00004 13,2270

Absorbansi awal pada λ

  Lampiran 16. (Lanjutan)

  Konsentrasi kafein (µg/mL)

  (mg) 1 -0,00061 0,00125 0,00006 19,8405 1572,2932 2 -0,00061 0,00125 0,00006 19,8405 1572,2932 3 -0,00062 0,00125 0,00007 23,2635 1834,3387

  (µg/mL) Kadar asam sitrat persaji

  Absorbansi asam sitrat Konsentrasi kafein

  Absorbansi setelah diadisi baku asam sitrat 600 µg/mL

  Absorbansi awal pada λ 236,0 nm

  c. Absorbansi asam sitrat dan absorbansi asam sitrat dalam sampel yang diadisi dengan asam sitrat sebanyak 600 µg/mL No

  5 -0,00062 0,00096 0,00008 26,5869 2096,3909 6 -0,00061 0,00095 0,00006 19,9402 1572,2932

  2 -0,00061 0,00095 0,00006 19,9402 1572,2932 3 -0,00062 0,00095 0,00007 23,2635 1834,3387 4 -0,00061 0,00095 0,00006 19,9402 1572,2932

  Kadar asam sitrat persaji (mg/Kg) 1 -0,00061 0,00096 0,00007 23,2635 1834,3387

  500 µg/mL Absorbansi asam sitrat

  2. Sampel Kratingdaeng-S

  Absorbansi setelah diadisi baku asam sitrat

  Absorbansi awal pada λ 236,0 nm

  b. Absorbansi asam sitrat dan absorbansi asam sitrat dalam sampel yang diadisi dengan asam sitrat sebanyak 500 µg/mL No

  4,1020 50,7828 5 0,00123 4,1355 51,1975 6 0,00123 4,1355 51,1975

  50,7828 3 0,00122 4,1020 50,7828 4 0,00122

  Kadar Kafein persaji (mg) 1 0,00122 4,1020 50,7828 2 0,00122 4,1020

  Konsentrasi Kafein (µg/mL)

  Absorbansi Kafein pada λ 293,60 nm

  a. Absorbansi kafein No

  ®

  4 -0,00061 0,00126 0,00007 23,2635 1834,3387 5 -0,00062 0,00125 0,00007 23,2635 1834,3387 6 -0,00061 0,00125 0,00006 19,8405 1572,2932

  Lampiran 17. Contoh Perhitungan Kadar Kafein dan Asam Sitrat dalam ®

   Sampel Kratingdaeng

  Volume sampel yang digunakan = 0,3 mL Absorbansi analisis (Y) kafein (293,60 nm) = 0,00119 Persamaan regresi pada panjang gelombang maksimum kafein (

  λ= 293,60 nm) :

• 6

  Y = 298,9X – 6,1 . 10 Untuk mendapatkan kadar (X) sampel, disubtitusikan absorbansi (Y) terhadap persamaan regresi pada masing-masing panjang gelombang.

• 6

  Konsentrasi Kafein : Y = 298,9X – 6,1 . 10

• 6

  0, 00119 = 298,9X – 6,1 . 10

• 6

  0,00119 + 0,0000061 = 298,9 . 10

  X X = 4,0016 μg/mL

  Kadar Kafein dalam sampel:

C : konsentrasi kafein dalam larutan sampel (μg/mL)

  V : volume larutan pengenceran sampel (mL) Fp : faktor pengenceran W : volume sampel (mL)

  Kadar kafein dalam sampel = = 333,4667 µg/mL

  Lampiran 17. (Lanjutan)

  Kadar kafein sebenarnya = kadar kafein dalam sampel x persen baku kafein = 333,4667 µg/mL x 99,04% = 330,2654 µg/mL

  ®

  Volume setiap botol sampel Kratingdaeng = 150 mL Kadar kafein = Kadar kafein sebenarnya x volume sampel

  = 330,5624 µg/mL x 150 mL = 495400 µg = 49,5400 mg

  Volume sampel yang digunakan = 0,3 mL Absorbansi awal asam sitrat (236,0 nm) = -0,00079 Absorbansi baku asam sitrat C = 500 µg/mL (236,0 nm) = 0,00150 Absorbansi asam sitrat setelah diadisi baku asam sitrat C = 500 µg/mL (236,0 nm). Maka Abs. analisis asam sitrat adalah = perubahan Abs. asam sitrat setelah diadisi – Abs. baku asam sitrat = (Abs. asam sitrat setelah diadisi – Abs. awal asam sitrat) – Abs. baku asam sitrat = 0,00075 – (-0,00079) – 0,00150 = 0,00154 – 0,00150 = 0,00004 Absorbansi analisis asam sitrat (236,0 nm) = 0,00004

  Lampiran 17. (Lanjutan)

  Persamaan regresi pada panjang gelombang maksimum asam sitrat ( λ = 236,0 nm)

• 6

  Y = 3,009X . 10

• 6

  Konsentrasi Asam Sitrat : Y = 3,009X . 10

• 6

  0, 00004 = 3,009X . 10 X = 13,2935 µg/ml

  =

  Kadar Asam Sitrat dalam sampel :

C : kosentrasi asam sitrat dalam larutan sampel (μg/mL)

  V : volume larutan pengenceran sampel (mL) Fp : faktor pengenceran W : volume sampel (mL)

  Kadar asam sitrat dalam sampel = = 1107,7917 µg/mL Kadar asam sitrat sebenarnya = Kadar asam sitrat dalam sampel x persen baku asam sitrat

  = 1107,7917 µg/mL x 99,50% = 1102,2527 µg/mL

  Dilakukan penyetaraan dalam berat dengan melakukan penimbangan dalam 100 mL sampel yang wadahnya telah dikalibrasi dengan hasil sebagai berikut: 100 mL sampel setara dengan berat sampel 104,8991 g Kadar asam sitrat = 1102,2527 µg/mL

  = 110225,27 µg/100 mL = 110225,27 µg g/104,8991 g = 1050,7742 µg/g = 1050,7742 mg/Kg

  Lampiran 18. Contoh Perhitungan Kadar Kafein dan Asam Sitrat dalam

®

   Sampel Kratingdaeng-S

  Volume sampel yang digunakan = 0,3 mL Absorbansi analisis (Y) kafein (293,60 nm) = 0,00121 Persamaan regresi pada panjang gelombang maksimum kafein (

  λ= 293,60 nm) :

• 6

  Y = 298,9X – 6,1 . 10 Untuk mendapatkan kadar (X) sampel, disubtitusikan absorbansi (Y) terhadap persamaan regresi pada masing-masing panjang gelombang.

• 6

  Konsentrasi Kafein : Y = 298,9X – 6,1 . 10

• 6

  0, 00122 = 298,9X – 6,1 . 10

• 6

  0,00122 + 0,0000061 = 298,9 . 10

  X X = 4,1020 μg/mL

  Kadar Kafein dalam sampel :

C : konsentrasi kafein dalam larutan sampel (μg/mL)

  V : volume larutan pengenceran sampel (mL) Fp : faktor pengenceran W : volume sampel (mL)

  Kadar kafein dalam sampel = = 341,8333 µg/mL

  Lampiran 18. (Lanjutan)

  Kadar kafein sebenarnya = kadar kafein x persen baku = 341,8333 µg/mL x 99,04% = 338,5517 µg/mL

  ®

  Volume setiap botol sampel Kratingdaeng-S = 150 mL Kadar kafein = kadar kafein sebenarnya x volume sampel

  = 338,5517 µg/mL x 150 mL = 50782,755 µg = 50,7828 mg

  Volume sampel yang digunakan = 0,3 mL Absorbansi awal asam sitrat (236,0 nm) = -0,00061 Absorbansi baku asam sitrat C = 500 µg/mL (236,0 nm) = 0,00150 Absorbansi asam sitrat setelah diadisi baku asam sitrat C = 500 µg/mL (236,0 nm). Maka Abs. analisis asam sitrat adalah = perubahan Abs. asam sitrat setelah diadisi – Abs. baku asam sitrat = (Abs. asam sitrat setelah diadisi – Abs. awal asam sitrat) – Abs. baku asam sitra = 0,00096 – (-0,00061) – 0,00150 = 0,00157 – 0,00150 = 0,00007 Absorbansi analisis asam sitrat (236,0 nm) = 0,00007

  Lampiran 18. (Lanjutan)

  Persamaan regresi pada panjang gelombang maksimum asam sitrat ( λ= 236,0 nm)

• 6
• 6
• 6

  Y = 3,009X . 10

  Konsentrasi Asam Sitrat : Y = 3,009X . 10

  0, 00007 = 3,009X . 10

  X =

  =

  23,2635 µg/ml Kadar Asam Sitrat dalam sampel :

  C : kosentrasi larutan sampel (μg/mL)

  V : volume larutan pengenceran (mL) Fp : faktor pengenceran W : volume sampel (mL)

  Kadar asam sitrat dalam sampel = = 1938,6250 µg/mL Kadar asam sitrat sebenarnya = kadar asam sitrat dalam sampel x persen baku asam sitrat

  = 1938,6250 µg/mL x 99,50% = 1928,9319 µg/mL

  Dilakukan penyetaraan dalam berat dengan melakukan penimbangan dalam 100 mL sampel yang wadahnya telah dikalibrasi dengan hasil sebagai berikut: 100 mL sampel setara dengan berat sampel 105,1568 g Kadar asam sitrat = 1928,9319 µg/mL

  = 192893,19 µg/100 mL = 192893,19 µg g/105,1568 g = 1834,3387 µg/g = 1834,3387 mg/Kg

  

Lampiran 19. Perhitungan Statistik Kadar Kafein dan Asam Sitrat dalam

®

  Sampel Kratingdaeng

  1. Jumlah Kafein

  X No. Jumlah (mg) 1 49,5400 1,653 2,7324

  2 49,1263 1,653 2,7324 3 49,5400 -0,826 0,6829 4 49,9550 1,653 2,7324 5 49,5400 -3,306 10,9309 6 49,1263 -0,826 0,6829

  49 = 20,4939

  Σ SB =

  = =

  0,3103

  =

  Pada interval kepercayaan 99% dengan nilai α = 0,01, dk = n-1= 5, maka t = 4,0321

  (α/2,dk)

  Data diterima jika t hitung < t tabel t hitung 1 = = 0,5428 t hitung 2 = = 2,7230 t hitung 3 = = 0,5428

  Lampiran 19. (Lanjutan)

  t hitung 4 = = 3,8177 t hitung 5 = = 0,5428 t hitung 6 = = 2,7230 Dari hasil perhitungan tersebut diperoleh bahwa semua t hitung < t tabel, maka semua data tersebut diterima.

  ®

  Kadar Kafein dalam sampel Kratingdaeng : x SB/ μ = ± (t √n)

  α/2, dk)

  = 49,4713 mg ± (4,0321 x 0,3103/ √6)

  = 49,4713 mg ± (4,0321 x 0,1267) = (49,4713 ± 0,5109) mg/sajian

  2. Kadar Asam Sitrat

  X No.

Kadar (μg/g) 1 1050,7742 0,0013 0,00000169

  2 1050,7742 0,0013 0,00000169 3 788,0779 -262,6950 69008,6630 4 1050,7742 0,0013 0,00000169 5 1050,7742 0,0013 0,00000169 6 1313,4631 262,6902 69006,1412

  1050,7729 = 138014,8042

  Σ SB =

  Lampiran 19. (Lanjutan) =

  166,1414

  =

  Pada interval kepercayaan 99% dengan nilai α = 0,01, dk = n-1=5, maka t = 4,0321

  (α/2,dk)

  Data diterima jika t hitung < t tabel t hitung 1 = = 0,00002 t hitung 2 = = 0,00002 t hitung 3 = = 3,8730 t hitung 4 = = 0,00002 t hitung 5 = = 0,00002 t hitung 6 = = 3,8729 Dari hasil perhitungan tersebut diperoleh bahwa semua t hitung < t tabel, maka semua data tersebut diterima.

  ®

  Kadar asam sitrat pada sampel Kratingdaeng : x SB/ μ = ± (t √n)

  α/2, dk)

  = 1050,7729 μg/g ± (4,0321 x 166, 1414/ )

  = (1050,7729 ± 273,4848 ) μg/g

  = (1050,7729 ± 79,9639) mg/Kg

  

Lampiran 20. Perhitungan Statistik Kadar Kafein dan Asam Sitrat dalam

®

  Sampel Kratingdaeng-S

  1. Jumlah Kafein

  X No. Jumlah (mg) 1 50,7828 -0,1382 0,0191

  2 50,7828 -0,1382 0,0191 3 50,7828 -0,1382 0,0191 4 50,7828 -0,1382 0,0191 5 51,1975 0,2765 0,0765 6 51,1975 0,2765 0,0765

  50,9210 = 0,2294

  Σ SB =

  =

  0,2142

  =

  Pada interval kepercayaan 99% dengan nilai α = 0,01, dk = n-1=5, maka t = 4,0321

  (α/2,dk)

  Data diterima jika t hitung < t tabel t hitung 1 = = 1,5812 t hitung 2 = = 1,5812 t hitung 3 = = 1,5812 t hitung 4 = = 1,581

  Lampiran 20. (Lanjutan)

  t hitung 5 = = 3,1636 t hitung 6 = = 3,1636 Dari hasil perhitungan tersebut diperoleh bahwa semua t hitung < t tabel, maka semua data tersebut diterima.

  Kadar Kafein dalam sampel Kratindaeng-s : x SB/ μ = ± (t α/2, dk) √n) = 50,9210 mg ± (4,0321 x ) = (50,9210 ± 0,3524) mg

  2. Kadar Asam Sitrat

  X No.

Kadar (μg/g) 1 1834,3387 87,3474 7629,5683

  2 1572,2932 -174,6981 30519,4261 3 1834,3387 87,3474 7629,5683 4 1572,2932 -174,6981 30519,4261 5 2096,3909 349,3996 122080,0805 6 1572,2932 -174,6981 30519,4261

  1746,9913 = 228897,4954

  Σ SB =

  = = 213,9614

  Lampiran 20. (Lanjutan)

  Pada interval kepercayaan 99% dengan nilai α = 0,01, dk = n-1=5, maka t = 4,0321

  (α/2,dk)

  Data diterima jika t hitung < t tabel t hitung 1 = = 1,0000 t hitung 2 = = 2,0001 t hitung 3 = = 1,0000 t hitung 4 = = 2,0001 t hitung 5 = = 4,0002 t hitung 6 = = 1,0000 Dari hasil perhitungan tersebut diperoleh bahwa semua t hitung < t tabel, maka semua data tersebut diterima.

  ®

  Kadar asam sitrat dalam sampel Kratingdaeng-S : x SB/ μ = ± (t √n)

  α/2, dk)

  = )

  μg/g ± (4,0321 x = ( ± 352,1797

  ) μg/g = (1746,9913± 352,1797) mg/Kg

  

Lampiran 21. Kurva Serapan Uji Perolehan Kembali Kafein dan Asam Sitrat

®

  dalam sampel Kratingdaeng-S Kurva Serapan Uji Perolehan Kembali Kafein dan Asam Sitrat dalam sampel

  ®

  Kratingdaeng -1 Kurva Serapan Uji Perolehan Kembali Kafein dan Asam Sitrat dalam sampel

  ®

  Kratingdaeng -2

  Lampiran 21. (Lanjutan)

  Kurva Serapan Uji Perolehan Kembali Kafein dan Asam Sitrat dalam sampel

  ®

  Kratingdaeng -3 Kurva Serapan Uji Perolehan Kembali Kafein dan Asam Sitrat dalam sampel

  ®

  Kratingdaeng -4

  Lampiran 21. (Lanjutan)

  Kurva Serapan Uji Perolehan Kembali Kafein dan Asam Sitrat dalam sampel

  ®

  Kratingdaeng -5 Kurva Serapan Uji Perolehan Kembali Kafein dan Asam Sitrat dalam sampel

  ®

  Kratingdaeng -6

  

Lampiran 22. Hasil Uji Perolehan Kembali Kafein dan Asam Sitrat Setelah

  Penambahan Masing-Masing Larutan Standar Pada Sampel

  1. Hasil Analisis Kafein Setelah Penambahan Larutan Standar Kafein Konsentrasi (µg/mL)

  Persen Serapan

  Perolehan Setelah Sebelum

  Sampel λ 293.60

  Baku yang Kembali penambahan penambahan nm ditambahkan

  (%) Baku Baku 1 0,00240 664,3809 330,2667 333,3333 100,23

  2 0,00238 658,8584 327,5083 333,3333 99,41 3 0,00239 661,6197 330,2667 333,3333 99,41 4 0,00240 664,3809 333,0333 333,3333 99,31 5 0,00237 656,0972 330,2667 333,3333 97,75 6 0,00237 656,0972 327,5083 333,3333 98,58

  = 99,12

  2. Hasil Analisis Asam Sitrat Setelah Penambahan Larutan Standar Asam Sitrat Serapan pada

  λ 236.0 nm Setelah penambahan Baku

  Sebelum penambahan Baku Sampel

  (Sampel + Standar Asam Sitrat (Sampel + Standar Asam Sitrat 500 µg/mL + Standar Asam

  500 µg/mL) Sitrat 200 µg/mL ) 1 0,00136 0,00075

  2 0,00135 0,00075 3 0,00136 0,00076 4 0,00137 0,00076 5 0,00136 0,00076 6 0,00136 0,00076

  Konsentrasi (mg/Kg) Persen

  Perolehan Setelah Sebelum

  Sampel Baku yang

  Kembali penambahan penambahan ditambahkan

  (%) Baku Baku 1 35726,2020 19701,9471 15808,8424 101,36

  2 35463,5048 19701,9471 15808,8424 99,70 3 35726,2020 19964,6397 15808,8424 99,70 4 35988,8899 19964,6397 15808,8424 101,36 5 35726,2020 19964,6397 15808,8424 99,70 6 35726,2020 19964,6397 15808,8424 99,70

  = 100,25

  

Lampiran 23. Contoh Perhitungan Uji Perolehan Kembali Kafein dan Asam

®

  Sitrat dengan Menggunakan Sampel Kratingdaeng Volume sampel yang digunakan = 0,3 mL Absorbansi analisis (Y) :

  Kafein (293.40 nm) = 0,0048 Asam sitrat (213.20 nm)= 0,0058

  Persamaan regresi pada panjang gelombang maksimum kafein ( λ=293.40 nm) :

• 4

  Y = (3,0214X – 0,1782) . 10 Persamaan regresi pada panjang gelombang maksimum natrium benzoat

• 4

  ( λ= 213.20 nm) : Y = (6,1027X + 0, 4019) . 10

• 6

  Konsentrasi Kafein : Y = (298,9 X -6,1 ) . 10

• 6

  0, 00240 = (298,9 X -6,1 ) . 10 X = 8,0498

  μg/mL

• 6

  Konsentrasi Asam Sitrat : Y = (3,009 . 10 ) X

• 6

  0,00136 = (3,009 . 10 ) X X = 451,9774

  μg/mL

  1. Perhitungan Uji Perolehan Kembali Kafein Konsentrasi kafein setelah penambahan larutan baku = 8,0498

  μg/mL Kadar kafein =

  Lampiran 23. (Lanjutan)

  = = 670,8208 µg/mL

  C = kadar kafein x persen baku kafein

  F

  = 670,8208 µg/mL x 99,04% = 664,3809 µg/mL

  Kadar kafein sampel setelah ditambah larutan baku (C F ) 664,3809 µg/mL Kadar kafein sampel sebelum ditambah larutan baku (C A ) = 330,2667 µg/mL

• Kadar larutan baku yang ditambahkan (C )

  A

• C A = ml yang ditambahkan 1 mL

  =

  = 333,3333 µg/mL Maka persen perolehan kembali kafein = 100 %

  100%

  =

  = 100,23 %

  2. Perhitungan Uji Perolehan Kembali Asam Sitrat Konsentrasi asam sitrat setelah penambahan larutan baku = 451,9774 µg/mL Kada rasam sitrat =

   x Faktor pengenceran

  Lampiran 23. (Lanjutan)

  = = 37664,7883 µg/mL = 3766478,83 µg/100 mL = 3766478,83 µg/104,8991 g = 35905,7307 µg/g

  C F = kadar asam sitrat x persen baku asam sitrat = 35905,7307µg/g x 99,5% = 35726,2020 µg/g

  Kadar asam sitrat sampel setelah ditambah larutan baku (C F ) = 35726,2020 µg/g Kadar asam sitrat sampel sebelum ditambah larutan baku (C ) = 19701,9471 µg/g

  A

• *

  Kadar larutan baku yang ditambahkan (C A )
• C A = mL yang ditambahkan

  0,5 mL

  =

  = 16666,6667 µg/mL = 16666,6667 µg/100 mL = 1666666,67 µg/ 104,8991 g = 15888,2838 µg/g

• C A = kadar asam sitrat x persen baku asam sitrat

  = 15888,2838 µg/g x 99,5% = 15808,8424 µg/g

  Maka persen perolehan kembali asam sitrat = 100 %

  100%

  =

  = 101,36%

  

Lampiran 24. Perhitungan Simpangan Baku Relatif (Relative Standard

Deviation, RSD ) Persen Perolehan Kembali Kafein

No.

  Persen Perolehan Kembali (Xi)

  (Xi - ) (Xi - )

  2

  1 100,23 1.11 1,2321 2 99,41 0,29 0,0841 3 99,41 0,29 0,0841 4 99,31 0,19 0,0361 5 97,75 -1,37 1,8769 6 98,58 0,54 0,2916

  = 99,12 = 3,6049 SB =

  =

  = 0,8491 µg/mL RSD = x 100%

  = x 100% = 0,8566 = 0,86%

  

Lampiran 25. Perhitungan Simpangan Baku Relatif (Relative Standard Deviation,

RSD ) Persen Perolehan Kembali Asam Sitrat

  Persen Perolehan Kembali

  2

  (Xi - ) (Xi - ) No. (Xi) 1 101,36 1,11 1,2321

  2 99,70 -0,55 0,3025 3 99,70 -0,55 0,3025 4 101,36 1,11 1,2321 5 99,70 -0,55 0,3025 6 99,70 -0,55 0,3025

  = 100,25 = 3,6742 SB =

  =

  = 0,8572 µg/mL RSD = x 100%

  = x 100% = 0,8550% = 0,86%

  Lampiran 26. Daftar Nilai Distribusi t

Lampiran 27. Sertifikat Pengujian Kafein

  

Lampiran 28. Label Asam Sitrat Pro Analisis

  

Lampiran 29. SNI 01-6684-2002 Tentang Minuman Berenergi

  Lampiran 29. (Lanjutan)

  Lampiran 29. (Lanjutan)

  

Lampiran 30. Peraturan Kepala BPOM R.I. No. 8 Tahun 2013 Tentang Batas

  Maksimum penggunaan Bahan Tambahan Pangan Pengatur Keasaman

  Lampiran 30. (Lanjutan)

  Lampiran 30. (Lanjutan)

  Lampiran 30. (Lanjutan)