kantung plastik, alat sentrifuse, tabung reaksi, marker spidol, botol kecil, termos es, cawan petri, tabung mikro.
2. Metode Penelitian
Pemeliharaan Hewan Coba
Populasi ayam pejantan yang diamati secara keseluruhan yaitu 100 ekor. Ayam ini dibagi dalam 2 kelompok. Kelompok ayam ini dipelihara di kandang
yang terletak di kandang uji coba. Ayam diberi pakan dengan standar komersial dan diberi minum ad libitum.
Rancangan percobaan
Pada penelitian ini dilakukan vaksinasi dengan vaksin AI-ND inaktif. Rute vaksinasi melalui subkutan dan dosis yang diberikan adalah 0.5 mlekor.
Vaksinasi dilakukan sebanyak 2 kali. Pengambilan darah sampel dilakukan dengan metode penarikan contoh acak random sampling sebanyak 10 ekor ayam
pada masing-masing kelompok ayam. Perlakuan masing-masing kelompok disajikan pada Tabel 1.
Tabel 1 Rancangan percobaan penelitian yang dilakukan
Kelom- pok
Perlakuan minggu
ke- 0 2 4 6 8 10
AV Awal
DOC datang
dan pengam-
bilan serum
darah Vaksi-
nasi AI- ND ke-1
dan Pengam-
bilan serum
darah Pengam-
bilan serum
darah 2 minggu
setelah vaksinasi
ke-1 Vaksi-
nasi AI- ND ke-2
dan pengam-
bilan serum
darah 4 minggu
setelah vaksinasi
ke-1 Pengam-
bilan serum
darah 2 minggu
setelah vaksinasi
ke-2 Pengam-
bilan serum
darah 4 minggu
setelah vaksinasi
AK Pengam-
bilan serum
darah Pengam-
bilan serum
darah Pengam-
bilan serum
darah Pengam-
bilan serum
darah Pengam-
bilan serum
darah Pengam-
bilan serum
darah
Pengambilan Darah dan Evaluasi Titer Antibodi
Pengambilan sampel darah ayam dilakukan menggunakan syringe 3 ml di daerah sayap yaitu pada vena brachialis. Darah tersebut selanjutnya dibawa ke
Laboratorium Terpadu bagian Mikrobiologi Medis FKH-IPB. Darah dibiarkan tetap berada di dalam syringe dan disimpan dalam lemari pendingin dengan suhu
4
o
C selama satu malam. Selanjutnya serum yang terpisah dari darah diambil dan disimpan sampai saat dilakukan evaluasi titer antibodi dengan uji HI.
Pembuatan RBC Red Blood Cell
Darah utuh whoole blood yang didapat dari ayam dewasa sehat kemudian dicampur dengan antikoagulan Na Sitrat dengan perbandingan 4:1, darah
dipisahkan dengan Na Sitrat dengan cara disentrifuse 2000 rpm Heareus
selama 10 menit. Hasi sentrifuse dibuang supernatannya dan diambil endapannya. Endapan tersebut merupakan sel darah merah. Selanjutnya endapan dicuci dengan
menambahkan NaCl fisiologis kemudian disentrifuse pada kecepatan dan waktu yang sama seperti di atas. Pencucian dilakukan sebanyak tiga kali, hasil pencucian
sel darah merah di buat menjadi suspensi 1 untuk digunakan pada uji haemaglutinasi mikrotitrasi.
Uji HA mikrotitrasi
Uji HA ini digunakan untuk membuat virus AI standar 4 HAU. Adapun prosedur uji HA mikrotitrasi yaitu OIE 2008 :
PBS sebanyak 25 l dimasukkan kedalam sumur microplate berbentuk V V bottom microplate.
25 l suspensi virus dimasukkan pada lubang pertama dan dilakukan pengenceran menggunakan micropipette dengan cara menghisap dan
mengeluarkan campuran sebanyak 5 kali lalu memindahkan 25 l
campuran ke sumur kedua. Pengenceran dilakukan hingga sumur ke 12. Pada sumur ke 12, campuran sebanyak 25
l dibuang. PBS sebanyak 25 l dimasukkan lagi kedalam sumur yang telah berisi
suspensi virus dan dihomogenkan lalu diinkubasikan pada suhu 4
o
C selama 40 menit.
Tambahkan RBC 1 sebanyak 25 l dimasukkan ke semua sumur.
Microplate digoyang untuk menghomogenkan kemudian diinkubasikan pada suhu 4
o
C selama 40 menit. Hasil diamati seteleh sumur kontrol positif tampak mengendap.
Pembacaan dilakukan dengan cara sebagai berikut : pada lubang yang menampakkan terjadinya endapan seperti pada lubang kontrol negatif dinyatakan
negatif HA, sedangkan yang menunjukkan terjadinya aglutinasi penggumpalan RBC dinyatakan positif HA. Untuk memudahkan pembacaan, microplate
dimiringkan 45
o
.
Uji HI mikrotitrasi
Titer antibodi ayam terhadap virus AI dilakukan dengan uji Hambat Aglutinasi HI Test mikrotitrasi OIE 2008.
Prosedur uji HI mikrotitrasi : PBS sebanyak 25 l dimasukkan ke dalam sumur microplate berbentuk
V V bottom microplate. 25 l serum ayam dimasukkan pada lubang pertama dan dilakukan
pengenceran menggunakan micropipette dengan cara menghisap dan mengeluarkan campuran sebanyak 5 kali lalu memindahkan 25
l campuran ke sumur kedua. Pengenceran dilakukan hingga sumur ke 12.
Pada sumur ke 12, campuran sebanyak 25 l dibuang.
Suspensi virus AI standar 4 HAU sebanyak 25 l dimasukkan kedalam sumur berisi serum yang telah diencerkan lalu di homogenkan dan
inkubasi pada suhu 4
o
C selama 40 menit. Tambahkan RBC 1 sebanyak 25 l dimasukkan ke semua sumur.
Plate digoyang selama 10 detik untuk menghomogenkan larutan dan
inkubasi pada suhu 4
o
C selama 40 menit. Hasil diamati seteleh sumur kontrol positif tampak adanya reaksi
penghambatan aglutinasi. Pembacaan dilakukan dengan cara sebagai berikut : pada lubang yang
menampakkan terjadinya endapan RBC seperti yang terdapat pada lubang kontrol negatif dinyatakan positif HI, sedangkan pada sumur yang menunjukkan
terjadinya aglutinasi penggumpalan RBC dinyatakan negatif HI. Untuk memudahkan pembacaan, microplate dimiringkan 45
o
.
Rataan titer antibodi dihitung dengan rumus :
Log2 GMT = log2 t
1
S
1
+ log2 t
2
S
2
+ ..........+ log2 t
n
S
n
N N = jumlah contoh serum yang diamati
t = tinggi titer antibodi pada pengenceran tertinggi S = jumlah contoh serum yang bertiter t
n = sampel ke-n
HASIL DAN PEMBAHASAN
Pemeriksaan antibodi terhadap AI dari sampel serum menunjukan bahwa ayam yang digunakan dalam penelitian memiliki maternal antibodi yang rendah
dengan titer 2
1.7
. Antibodi yang terukur merupakan antibodi asal induk maternal antibody.
Antibodi tersebut berasal dari dalam darah induk yang ditransfer ke dalam kuning telur untuk melindungi anak ayam pada hari-hari pertama setelah
menetas. Zat kebal yang diperoleh anak ayam ini dikenal dengan antibodi maternal
Tizard 2004. Ayam yang baru menetas memiliki antibodi maternal sampai berumur kurang lebih 12-14 hari. Kualitas maupun kuantitas maternal
antibodi pada anak ayam tergantung pada kekebalan yang dimiliki induknya. Vaksinasi yang pertama kali dianjurkan tidak terlalu dini sebab masih terdapat
antibodi maternal di dalam tubuh anak ayam. Antibodi maternal dalam tubuh anak ayam yang tinggi dapat menetralisasi antigen vaksin Prabowo 2003.
Tabel 2 Rataan titer antibodi anti AI dari ayam yang divaksinasi dengan AI-ND Inaktif
Titer AI pada umur ayam ke - Kelompok ayam
yang divaksinasi Kelompok ayam yang tidak
divaksinasi 0 Minggu
2
1.7
±1.01 2
1.7
±1.01 2 Minggu
2
0.2
±0.66 0 4 Minggu
2
2.5
±0.72 0 6 Minggu
2
1.1
±1.56 0 8 Minggu
2
6.7
±1.74 2
1.2
±1.09 10 Minggu
2
3.2
±1.41 0
waktu pemberian vaksin
Antibodi maternal ini akan menurun dengan cepat seiring meningkatnya umur ayam. Hal ini nampak dari hasil pengujian titer antibodi pada ayam umur
dua minggu, titer antibodi kedua kelompok sudah mulai menurun Tabel 2. Dengan menurunnya antibodi maternal saat umur dua minggu maka vaksinasi
dengan vaksin inaktif pada penelitian ini dilakukan pada ayam umur dua minggu. Dua minggu setelah vaksinasi pertama atau saat ayam berumur empat minggu
kelompok ayam yang divaksin mulai menunjukan adanya peningkatan antibodi
dengan rataan titer 2
2.5
. Hasil ini menunjukkan bahwa vaksin yang diberikan mampu menggertak terbentuknya antibodi terhadap AI. Namun titer yang
terbentuk belum mencapai titer protektif. Menurut Deptan 2006 titer HI protektif terhadap AI H5N1 adalah
≥ 4 log 2 atau 2
4
≥16. Titer antibodi yang masih rendah diakibatkan karena vaksin yang digunakan merupakan vaksin inaktif,
sehingga antigen yang masuk tidak memperbanyak diri tetapi langsung memacu jaringan limfoid tubuh untuk membentuk kekebalan. Menurut standar OIE 2008
vaksin inaktif optimal membentuk kekebalan tiga minggu setelah vaksinasi. Titer antibodi yang terbentuk minimal setinggi 2
4
, sehingga dalam waktu dua minggu titer yang terbentuk sebesar 2
2.5
dinyatakan rendah. Pada saat ayam berumur enam minggu empat minggu setelah vaksinasi
pertama titer mulai menurun dan mencapai titer 2
1.1
. Pada kondisi titer mulai menurun dilakukan vaksinasi ulang. Dua minggu setelah vaksinasi kedua titer
antibodi mencapai titer optimal dengan rataan sebesar 2
6.7
dan
90 populasi ayam memiliki titer protektif Tabel 3
.
Tingginya titer antibodi tersebut karena vaksinasi tersebut merupakan vaksinasi ulangan. Menurut Tizard 2004 vaksin
inaktif menghasilkan kekebalan yang lemah karena virus inaktif tidak mampu bereplikasi di dalam tubuh, sehingga memerlukan vaksinasi yang berulang kali
agar dapat mempertahankan titer antibodi protektif. Pemaparan oleh antigen yang sama untuk kedua kalinya akan menginduksi pembentukan respon imun sekunder
dalam waktu singkat dan peningkatan titer antibodi lebih tinggi dari sebelumnya Wibawan Soejoedono 2003.
Empat minggu setelah vaksinasi ke-2 titer antibodi mulai menurun dan hanya 40 ayam yang masih memiliki titer antibodi protektif. Menurut Malole
1988 titer antibodi protektif akan mengalami penurunan yang disebabkan oleh adanya waktu paruh antibodi. Rendahnya antibodi dapat disebabkan oleh
beberapa hal yang terkait dengan proses vaksinasi dan respon tanggap kebal hewan. Rendahnya antibodi bisa disebabkan oleh dua faktor yaitu faktor internal
dan ekternal Fadilah 2007. Faktor internal berupa kandungan antigen, kualitas vaksin, jumlah dosis, dan rute vaksin prosedur vaksinasi. Faktor eksternal
berupa vaksinator, kondisi dan jenis ayam yang divaksin, serta lingkungan.
Tabel 3 Prosentase populasi ayam dengan titer antibodi protektif terhadap AI H5
Sample Titer AI Pada Umur Ayam Minggu Ke-
0 2 4
6 8
10 AV AK AV AK AV AK AV AK AV AK
1 2
3
2 2
2
3
2 2
2 2
8
2
1
2
5
2 2 2
1
2 2
2
3
2 2
2 2
6
2
2
2
5
2 3 2
3
2
2
2 2
1
2 2
3
2 2
5
2
2
2
4
2 4 2
2
2 2
2
3
2 2
2
2 2
8
2
1
2
4
2 5 2
2 2
2
3
2 2
2 2
8
2
1
2
3
2 6 2
2
2 2
2
2
2 2
2 2
7
2
2
2
3
2 7 2
2
2 2
2
2
2 2
4
2 2
3
2
3
2
3
2 8 2
2
2 2
2
3
2 2
2
2
6
2 2
2
2 9 2
2
2 2
2
3
2 2
2
2
8
2 2
3
2 10 2
2 2
2
2
2 2
2
2 2
8
2 2
2 Persentase
ayam dengan
titer protektif
0 0 0 0 0 10 0 90 0 40 0
Ayam kontrol tidak menunjukan adanya antibodi terhadap AI pada minggu ke-2, ke-4, ke-6 dan ke-10. Hal ini menunjukan tidak adanya kontaminasi virus AI
di lingkungan pemeliharaan. Pada minggu ke-8 beberapa ekor ayam kontrol menunjukan adanya antibodi terhadap AI sebesar 2
1.2
namun antibodi yang terbentuk sangatlah rendah bila dibandingkan dengan ayam kelompok vaksinasi.
Antibodi yang terdeteksi itu diduga merupakan antibodi maternal yang masih berada pada individu tersampling. Hal tersebut terjadi karena adanya variasi
individu dari ayam yang diambil mengingat pengambilan sampel dilakukan secara acak.
Pada penelitian ini ayam divaksinasi dengan vaksin kombinasi AI-ND. Hasil pengamatan menunjukkan vaksin kombinasi ini mampu menginduksi titer
antibodi terhadap AI dan ND yang protektif, biladibandingkan dengan vaksinasi tunggal AI yang dilakukan Azhari 2011 menunjukkan antibodi terhadap AI tidak
berbeda antara vaksinasi AI-ND dan AI tunggal Tabel 4. Pada penelitian Ardhiani 2011 menunjukkan bahwa ayam yang divaksinasi ND-AI ini mampu
menghasilkan titer antibodi terhadap ND yang protektif. Hal ini sejalan dengan penelitian Ebrahimi 2000 yang menyatakan bahwa vaksin kombinasi dapat
diberikan pada unggas dan keduanya berhasil menginduksi antibodi dengan titer yang cukup protektif.
Tabel 4 Hasil serologis serum darah ayam yang divaksinasi AI Inaktif
Titer AI pada umur ayam ke -
Kelompok ayam yang divaksinasi
Kelompok ayam yang tidak divaksinasi
0 Minggu 2
2.4
±1.1 2
2.4
±1.1 2 Minggu
2
0.5
±1.3 0 4 Minggu
2
2.0
±1.2 0 6 Minggu
2
0.8
±1.0 0 8 Minggu
2
4.2
±1.4 0 10 Minggu
2
1.3
±1.1 0
waktu pemberian vaksin sumber: Azhari 2011
KESIMPULAN
Dari hasil penelitian dapat disimpulkan bahwa vaksinasi dengan vaksin AI- ND inaktif sebanyak dua kali mampu menginduksi pembentukan antibodi anti AI
H5 mencapai titer protektif. Antibodi protektif yang terbentuk hanya mampu bertahan selama dua minggu setelah vaksinasi kedua.
SARAN
Perlu dilakukan penelitian untuk mengetahui vaksinasi yang mampu mempertahankan titer protektif yang lebih lama.
DAFTAR PUSTAKA
Akoso BT. 2006. Waspada Flu Burung Penyakit Menular pada Hewan dan Manusia
. Yogyakarta : Kanisius. Ardhiani S. 2011. Gambaran respon kebal newcastle disease ND pada ayam
petelur yang divaksinasi dengan vaksin AI-ND inaktif [skripsi]. Bogor: Fakultas Kedokteran Hewan, Institut Pertanian Bogor.
Azhari AA. 2011. Gambaran antibodi anti avian influenza H5 pada ayam petelur yang divaksinasi dengan vaksin AI H5N1 inaktif isolat tahun 2007 [skripsi].
Bogor: Fakultas Kedokteran Hewan, Institut Pertanian Bogor.
Cahyono, Bambang, Ir.1995. Cara Meningkatkan Budidaya Ayam Ras Pedaging Broiler
. Yogyakarta : Pustaka Nusatama. Cardoso WM, Aguiar FJLC, Romão JM, Oliveira WF, Salles RPR, Teixeira RSC,
Sobral MHR. 2005. Effect of Associated Vaccines on the Interference between Newcastle Disease Virus and Infectious Bronchitis Virus in
Broilers. Brazilian J of Poultry Sci. 73.
[Depkes] Departemen Kesehatan RI. 1979. Farmakope Indonesia, Ed ke-3. [Deptan] Departemen Pertanian. 2005. Manual Standar Kesehatan Hewan Ed
Pedoman Surveilance dan Monitoring Avian Influenza di Indonesia. Jakarta:
Direktorat Jendral Peternakan Departemen Pertanian. Ebrahim MM, Moghaddampour M, Tavassoli A, Shahsavandi. 2000. Vaccination
of Chicks with Experimental Newcastle Disease and Avian Influenza Oil- emulsion Vaccines by In Ovo Inoculation. J Arch Razi Ins. 51
Escorcia M, Vázquez L, Méndez ST, Rodríguez‐Ropón A, Lucio E, Nava GM. 2008. Avian
Influenza : genetic evolution under vaccination pressure. J Virology. 5:15
.
Fadilah R, Iswandari, Polana A. 2007. Beternak Unggas Bebas Flu Burung. Jakarta : Agromedia Pustaka.
Fenner FJ, Gibbs EPJ, Murphy FA, Root R, Studdert MJ, white DO. 1995. Virologi Veteriner Edisi 2
. Putra DKH, penerjemah. Semarang : IKIP Semarang Pr. Terjemahan dari Veterinary Virolog.
Ganong WF. 1998. Buku Ajar fisiologi kedokteran. Ed ke-17. Widjajakusumah, M, Dkk, penerjemah. Jakarta : EGC. Terjemahan dari : Review of Medical
Physiology.
Guyton AC. 1995. Buku Ajar Fisiologi Kedokteran. Ed ke- 7. Bgian 1. Tengadi, K.A, Dkk, penerjemah; Oswari, editor. Jakarta :EGC. Terjemahan dari :
Text Book of medical.
Handharyani E. 2004. Avian Influenza Pada Unggas dan Dampaknya Pada Manusia. Makalah Seminar. Fakultas Kedokteran Hewan IPB.
Jindal N, Chander Y, Chockalingam A, Abin M, Redig P, Goyal S. 2009. Phylogenetic analysis of Newcastle disease viruses isolated from waterfowl
in the Upper Midwest Region of the United States. J Virology. 6:191.
Koch G, Elbers ARW. 2006. Outdoor Ranging of Poultry: a Major Risk Factor for Introduction and Development of High Pathogenicity Avian Influenza. NJAS
54-2:179-194.
Malole MBM. 1988. Virologi. Pusat Antar Universitas. Institut Pertanian Bogor. Nuh M. 2008. Flu Burung Ancaman dan Pencegahan. Jakarta : Departemen
Komunikasi dan Informatika. [OIE] World Organization for Animalth Health. 2008. Avian Influenza.
Murphy FA, Paul JG, Marian CH, Michael JS. 1999. Veterinary Virology. Ed ke- 3. USA : Academic Pr.
Prabowo D. 2003. Maternal Antibodi Anak Ayam Pelung yang Induknya Divaksin Dengan Vaksin ND Kombinasi. Anim Prod, 51:11-18.
Radji M. 2010. Imunologi Virologi. Jakarta : PT. ISFI Penerbitan.
Ratriastuti. 2004. Mengenal Lebih Dekat Avian Influenza. Poultry Indonesia Januari 2004.
Ressang AA. 1986. Penyakit Viral Pada Hewan. Jakarta : UI Pr. Soejoedono RD, Handharyani E. 2005. Flu Burung. Jakarta : Penebar Swadaya.
Tabbu CR. 2000. Penyakit Ayam dan penanggulangannya. Yogyakarta : Kanisius. Tizard IR. 2004. Veterinary Immunology an Introduct. Ed ke-6. Philadelphia:
W.B Saunders Company. Wibawan IWT, Soejoedono RD. 2003. Imunologi. FKH-IPB.
ABSTRACT
EKA MARTTIANA . Immune Response of Avian Influenza AI H5 in Laying
Hens Following Vaccinated AI-ND Inactive Vaccine. Under guided of RETNO
DAMAYANTI SOEJOEDONO and SRI MURTINI
.
The research was conducted to study the immune response against to Avian Influenza AI H5 in laying hens following vaccinated AI-ND inactive vaccine.
One hundred chickens were used and divided into two groups. Group one were vaccinated with AI-ND inactive vaccine and group two were unvaccinated serve
as a control group. The antibody were measured by hemagglutination inhibition Test. AI-ND inactive vaccine were able to induce protective antibody four weeks
after second vaccination but the titers decreased four week later. In conclusion to induce antibody protection again AI-H5 in laying hens as need to vaccinated the
chicken more than two time. Keywords: Avian Influenza, HI Test, AI-ND inactive vaccine
ABSTRAK E
KA MARTTIANA. Gambaran Respon Kebal terhadap Virus Avian Influenza
AI H5 pada Ayam Petelur yang Divaksinasi dengan Vaksin AI-ND Inaktif. Dibawah bimbingan RETNO DAMAYANTI SOEJOEDONO dan SRI
MURTINI
.
Penelitian ini dilakukan untuk mempelajari respon kekebalan terhadap Avian Influenza
AI H5 pada ayam petelur yang divaksinasi AI-ND inaktif. Ayam yang digunakan dalam penelitian ini sebanyak 100 ekor yang dibagi
kedalam dua kelompok. Kelompok pertama yang divaksinasi dengan vaksin AI- ND inaktif dan kelompok kedua yang tidak divaksinasi sebagai kelompok kontrol.
Pengukuran antibodi dilakukan dengan uji hemagglutination inhibition HI. Vaksin AI-ND inaktif mampu menginduksi antibodi empat minggu setelah
vaksinasi kedua tetapi titer antibodi mulai menurun empat minggu kemudian. Kesimpulannya untuk menginduksi antibodi pada AI-H5 pada ayam petelur
dengan setelah dua kali vaksinasi dan titer protektif yang terbentuk hanya mampu bertahan samapi empat minggu setelah vaksinasi.
Kata kunci : Avian Influenza, HI Test, Vaksin AI-ND Inaktif
PENDAHULUAN
Latar Belakang
Penyakit influenza menular pada unggas Avian InfluenzaAI atau flu burung disebabkan oleh virus Avian Influenza. Virus Avian Influenza termasuk
dalam golongan influenza tipe A. Virus ini digolongkan kedalam famili Orthomyxoviridae
dan genus Orthomyxovirus Escorcia et al. 2008. Pada tahun 1955, flu burung lebih dikenal dengan nama Fowl plaque,
penyakit ini menyerang sistem pernafasan, sistem pencernaan dan sistem syaraf unggas. Penyakit AI Avian Influenza dapat menyerang semua jenis burung, baik
domestik maupun eksotik yang ditemukan di darat dan unggas air. Beberapa kasus AI Avian influenza ditemukan pada babi, kuda, hewan liar, bahkan manusia
Soejoedono Handharyani 2005. Masa inkubasi penyakit AI tiga hari untuk unggas di luar kandang,
sedangkan unggas di dalam kandang mencapai 14-21 hari. Unggas air lebih kebal terhadap virus ini daripada unggas peliharaan. Virus tersebut tidak menyebabkan
penyakit yang nyata pada unggas air, namun dapat menyebabkan dampak yang sangat fatal pada unggas peliharaan karena berperan sebagai pembawa reservoir
virus. Unggas tersebut dapat mengeluarkan virus melalui kotorannya yang dapat ditularkan ke unggas lain.
Penyakit AI memiliki gejala yang bervariasi. Pada kasus yang sangat ganas dan akut ditandai dengan kematian tinggi tanpa disertai gejala klinis. Hewan
tampak sehat tetapi tiba-tiba mati Nuh 2008. Virus AI dapat dikelompokan sesuai keganasan serangan penyakitnya yaitu Low Pathogenicity Avian Influenza
LPAI dan High Pathogenicity Avian Influenza HPAI Koch Elbers 2006. Kerugian sebagai akibat kematian unggas ialah penurunan harga produk unggas,
tertutupnya peluang ekspor, serta peningkatan biaya penanggulangan penyakit Nuh 2008.
Virus yang dapat menyerang unggas selain virus AI adalah virus Newcastle Disease atau virus tetelo. Penyakit ND merupakan penyakit viral yang disebabkan
oleh Avian Paramyxovirus dan tergolong ke dalam virus RNA. Penyakit Newcastle Disease dapat menyebabkan gejala klinis yang bervariasi, dari infeksi
subklinis sampai dengan terjadi kematian 100, hal tersebut tergantung pada kerentanan inang dan virulensi virus. Wabah ND telah dilaporkan di banyak
negara dengan kerugian ekonomi yang cukup besar. Berdasarkan gejala klinisnya, penyakit ND dapat dibedakan menjadi 5
patotipe, yakni viscerotropic velogenic VVND, neurotropic velogenic NVND, mesogenic, lentogenic respiratory,
dan asymptomatic enteric. Strain velogenic menyebabkan infeksi fatal akut ayam dari semua kelompok umur dengan temuan
klinis berupa lesi hemoragi dalam saluran pencernaan. Strain mesogenic menyebabkan gangguan pernafasan dan saraf, sedangkan strain lentogenic
menyebabkan gangguan infeksi ringan tanpa gejala Jindal et al. 2009. Salah satu upaya untuk pencegahan penyakit-penyakit tersebut adalah
dengan vaksinasi. Vaksin adalah suatu suspensi mikroorganisme atau substansi mikroorganisme yang digunakan untuk menginduksi sistem imunitas Radji
2010. Penyakit AI dan ND merupakan penyakit yang cukup tinggi tingkat kejadiannya di Indonesia sehingga vaksinasi menggunakan dua jenis virus dalam
satu kemasan vaksin akan memudahkan tindakan vaksinasi pada ayam. Beberapa jenis vaksin merupakan kombinasi dari dua atau lebih mikroorganisme misalnya
vaksin kombinasi ND-IB, ND-IBD dan AI-ND. Kombinasi lebih dari satu organisme dalam satu vaksin dapat mempengaruhi efektifitas respon vaksinasi.
Pengaruh tersebut dapat berupa peningkatan maupun penurunan efektifitas pembentukan antibodi dalam vaksinasi. Menurut penelitian Raggi Lee, 1964;
Bracewell et al., 1972; Thornton Muskett, 1975 yang dilaporkan oleh Cardoso et al.
2005, vaksinasi kombinasi vaksin IB-ND menyebabkan pembentukan anibodi terhadap ND kurang optimal. Menurut penelitian Ebrahim 2000
kombinasi vaksin AI-ND tidak mempengaruhi respon pembentukan antibodi terhadap ND maupun AI. Pada penelitian ini digunakan kombinasi vaksin AI-ND
dan diamati respon pembentukan antibodinya terhadap AI-H5.
Tujuan
Penelitian ini dilakukan untuk menganalisis dan mengetahui gambaran respon kebal terhadap virus Avian Influenza AI H5 pada ayam petelur yang
divaksinasi dengan vaksin AI-ND inaktif.
Manfaat
Penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi tentang gambaran respon kebal terhadap virus Avian Influenza AI H5 pada ayam petelur yang
divaksinasi dengan vaksin AI-ND inaktif.
TINJAUAN PUSTAKA
Ayam Petelur
Ayam petelur adalah ayam-ayam betina dewasa yang dipelihara khusus untuk diambil telurnya. Ayam peliharaan merupakan hasil domestikasi dari ayam
hutan yang ditangkap dan dipelihara serta diseleksi genetiknya terus menerus sehingga diperoleh ras yang mampu menghasilkan telur cukup banyak. Ayam
yang terseleksi untuk tujuan produksi telur dikenal dengan ayam petelur. Selain itu, seleksi juga diarahkan pada warna kulit telur hingga kemudian dikenal ayam
petelur putih dan ayam petelur cokelat. Persilangan dan seleksi itu dilakukan cukup lama hingga menghasilkan ayam petelur seperti yang ada sekarang ini
Cahyono 1995. Jenis ayam petelur dibagi menjadi dua tipe, yaitu tipe ayam petelur ringan
dan tipe ayam petelur medium. Tipe ayam petelur ringan disebut dengan ayam
petelur putih. Ayam petelur ringan ini mempunyai badan yang rampingkurus- mungilkecil dan mata bersinar. Bulunya berwarna putih bersih dan berjengger
merah. Ayam ini berasal dari galur murni white leghorn. Ayam petelur ringan ini sensitif terhadap cuaca panas dan keributan, dan ayam ini mudah kaget dan bila
kaget ayam ini produksinya akan cepat turun, begitu juga bila kepanasan. Tipe
ayam petelur medium, bobot tubuh ayam ini cukup berat, dengan berat diantara
berat ayam petelur ringan dan ayam broiler. Oleh karena itu ayam ini disebut tipe ayam petelur medium. Tubuh ayam ini tidak kurus, tetapi juga tidak terlihat
gemuk. Telurnya cukup banyak dan juga dapat menghasilkan daging yang banyak. Ayam ini disebut juga dengan ayam tipe dwiguna, warna telur yang
dihasilkan cokelat, maka ayam ini disebut dengan ayam petelur cokelat yang umumnya mempunyai warna bulu yang cokelat juga Cahyono 1995.
Sistem Kekebalan pada Ayam
Secara umum sistem kekebalan pada unggas hampir sama dengan sistem kekebalan hewan lainnya. Sistem kekebalan unggas juga ada yang merupakan
sistem kebal alami yang bersifat fisik seperti bulu dan kulit maupun kimiawi seperti pembentukan lendirmukus dan enzimatis lisozim yang terkandung dalam
air mata. Sistem kekebalan lainnya adalah sistem kebal dapatan yang bersifat seluler maupun humoral. Limfosit merupakan unsur kunci sistem kekebalan
tubuh. Selama perkembangan janin, prekursor limfosit berasal dari sumsum tulang. Pada unggas, prekursor yang menempati bursa Fabricius di transformasi
menjadi limfosit yang berperan dalam kekebalan humoral limfosit B. Sel B berdiferensiasi menjadi sel plasma dan sel B memori. Sel T dibagi menjadi 4 yaitu
: sel T pembantu, sel T supresor, sel T sitotoksik sel T efektor atau sel pembunuh, dan sel T memori Ganong 1998.
Mekanisme kekebalan dapat terbentuk akibat induksi antigen dengan tidak sengaja seperti infeksi agen penyakit maupun induksi antigen dengan sengaja
seperti vaksinasi. Antigen yang masuk ke dalam tubuh baik sengaja maupun tidak pertama kali akan ditanggapi oleh sistem kebal alami, seperti adanya respon
pembentukan mukus oleh sel-sel epitel permukaan mukosa tempat masuknya antigen. Antigen yang berhasil melewati kekebalan alami ini akan berhasil
menembus sel dan menginfeksi sel. Antigen tersebut akan dijerat makrofag yang terdapat dalam jaringan limfoid. Makrofag akan memfagositosis antigen tersebut
dan dibawa ke sel T pembantu pada saat yang bersamaan Guyton 1995. Oleh makrofag sebagai antigen presenting cell bentukrupa dari bahan asingantigen
akan dikirimkan informasinya dalam bentuk efektor selsitokin ke sel-sel limfosit yang berperan dalam respon kebal humoral maupun sistem kebal berperantara sel.
Sebelum terpapar dengan antigen yang spesifik, klon limfosit B tetap dalam keadaan dormant di dalam jaringan limfoid,dengan adanya antigen yang masuk
limosit B berproliferasi menjadi sel plasma. Selanjutnya sel plasma akan menghasilkan antibodi khusus yang mampu menyingkirkan antigen sebagai
sistem kekebalan humoral. Selain itu sel B juga berdeferensiasi sebagai sel B memori yang akan menyimpan “ingatan” tentang kejadian ini sehingga pada
paparan berikutnya dengan antigen yang sama, tanggapannya akan jauh lebih efisien Tizard 2004.
Antibodi tidak dapat menembus sel, sehingga antibodi hanya akan bekerja selama antigen berada di luar sel. Antibodi bekerja untuk mempertahankan tubuh
terhadap antigen penyebab penyakit yaitu : 1 dengan cara langsung menginaktifasi antigen penyebab penyakit 2 dengan mengaktifkan sistem
komplemen yang kemudian akan menghancurkan agen penyakit tersebut Guyton 1995.
Anak ayam yang baru menetas memiliki antibodi maternal yang diturunkan dari induknya. Antibodi maternal yang diperoleh secara pasif dapat menghambat
pembentukan imunoglobulin, sehingga mempengaruhi keberhasilan vaksinasi. Penghambatan antibodi maternal berlangsung sampai antibodinya habis yaitu
sekitar 10-20 hari setelah menetas Tizard 2004. Anak ayam yang antibodi maternal
asal induknya telah hilang akan menjadi sangat rentan terhadap infeksi penyakit di alam. Oleh karena itu perlu dilakukan vaksinasi untuk merangsang
sistem kekebalan anak ayam.
Penyakit Avian Influenza AI
Avian Influenza AI atau flu burung merupakan salah satu penyakit penting yang sering menyerang unggas khususnya ayam, baik ayam pedaging maupun
ayam petelur. Penyakit AI petama kali terjadi pada tahun 1800 di Italia. Penyakit ini dilaporkan untuk pertama kali pada tahun 1878 dan dikenal dengan nama Fowl
Plaque Murphy et al. 1999. Penyakit flu burung yang disebabkan oleh virus
avian influenza merupakan penyakit viral yang menyerang saluran pernafasan, pencernaan dan sistem syaraf pada unggas. Pada tahun 1955, para ahli
membuktikan bahwa penyebab Fowl Plaque adalah virus Avian Influenza tipe A. Pada tahun 1981, dalam suatu simposium tentang Avian Influenza istilah Fowl
Plaque diganti dengan Highly Pathogenic Avian Influenza HPAI Ratriastuti
2004. Virion dari virus influenza tipe A adalah bulat dan berdiameter sekitar 100
nm. Terdapat delapan senyawa genom, lima diantaranya merupakan genom berstruktur dan tiga lainnya merupakan protein virus struktural yang berkaitan
dengan enzim RNA polimerase. Protein terbanyak adalah protein matriks M1 yang tersusun dari banyak monomer kecil serupa. Monomer ini terkait dengan
permukaan bagian dalam dari lapisan ganda lemak amplopnya envelope. M2 adalah protein kecil yang menonjol sebagai pori-pori atau kanal ion yang melalui
membran. Virus ini memiliki dua antigen permukaan yang disebut haemaglutinin HA dan neuraminidase NA. Kedua antigen permukaan ini merupakan molekul
glikoprotein. Molekul HA merupakan trimer bentuk batang, sedangkan molekul NA merupakan tetramer bentuk jamur. Kedua antigen tersebut digunakan sebagai
penanda dalam identifikasi subtipe virus karena membawa epitop khusus subtipe Fenner et al. 1995. Pembagian subtipe virus berdasarkan permukaan
haemaglutinin HA dan neuraminidae NA yang dimilikinya. Saat ini, telah dikenal 16 jenis HA H1-16 dan 9 jenis NA N1-9. Diantara 16 subtipe HA,
hanya H5 dan H7 yang bersifat ganas pada unggas Nuh 2008. Berdasarkan tingkat keganasannya, virus AI dibagi menjadi Low Pathogenic Avian Influenza
LPAI dan Highly Pathogenic Avian Influenza HPAI. Virus AI sangat mudah bermutasi, babi merupakan mixing vessel pembawa-pencampur bagi virus dari
unggas ke mamalia, selain itu melalui genetic reassortment babi mempunyai peranan dalam menciptakan virus yang lebih ganas Handharyani 2004. Antigen
HA dapat mengaglutinasi darah merah ayam dan berbagai hewan mamalia. Antigen HA dan NA menyebabkan pembentukan antibodi spesifik Ressang
1986. Virus
Avian Influenza ini dibungkus oleh glikoprotein dan dilapisi oleh
lapisan lemak ganda bilayer lipid. Virus ini akan tetap hidup dalam air dengan suhu 20
o
C selama empat hari, serta bisa hidup pada suhu 0
o
C lebih dari 30 hari dan masih tetap infektif dalam feses selama 30-35 jam pada temperatur 4
o
C dan selama 7 hari dalam suhu 20
o
C Tabbu 2000. Virus juga peka terhadap lingkungan panas 56
o
C, 30 menit, PH yang ekstrim asam, pH=3, kondisi non isotonik udara kering, relatif tidak tahan terhadap inaktivasi pelarut lemak seperti
detergen Soejoedono Handharyani 2005.
Gejala Klinis Penyakit AI
Gejala klinis yang teramati pada unggas yang terinfeksi virus AI adalah anoreksia, emasiasi, depresi, produksi telur menurun, gejala sesak nafas disertai
eksudat keluar dari hidung, edema daerah wajah, konjungtivitis, jengger dan pial berwarna kebiruan. Beberapa daerah dibawah kulit termasuk tungkai mengalami
perdarahan. Sementara itu beberapa kasus tidak menunjukan gejala klinis. Pemeriksaan lebih lanjut maka akan terlihat adanya peradangan pada langit-langit,
mulut, trakhea, dan laring. Pada pemeriksaan histopatologi terlihat adanya
akumulasi sel-sel radang limfosit pada jengger ayam yang terinfeksi Soejoedono Handharyani 2005.
Vaksin dan Vaksinasi
Pencegahan penyakit merupakan suatu tindakan untuk melindungi individu terhadap serangan penyakit tertentu. Pada kasus flu burung tindakan vaksinasi
merupakan salah satu cara untuk memutus siklus penyakit ini. Vaksinasi adalah usaha agar hewan yang divaksin memiliki kekebalan.
Vaksin merupakan sediaan yang mengandung antigen dapat berupa kuman mati, kuman inaktif atau kuman hidup yang dilumpuhkan virulensinya tanpa
merusak potensi antigennya. Digunakan untuk menimbulkan kekebalan aktif dan khas terhadap infeksi kuman atau toksinnya. Vaksin dibuat dari bakteri, riketsia,
virus atau toksin dengan cara berbeda-beda sesuai jenisnya tertera pada masing- masing monografi, sedemikian rupa sehingga masih tetap identitasnya dan bebas
cemaran jasad asing. Zat tambahan yang cocok dapat ditambahkan sewaktu pembuatan, tetapi penisilin atau streptomisin tidak boleh digunakan pada setiap
pembuatan atau dalam hasil akhir. Pembuatan vaksin dapat digunakan sebagai atau seluruh biakan yang dapat dilakukan dengan cara fisika, kimia atau biokimia.
Bakterisida yang cocok dapat ditambahkan ke dalam vaksin steril, vaksin virus hidup atau vaksin ricketsia hidup, asalkan bakterisida itu tidak mempunyai
keaktifan terhadap virus Farmakope Indonesia 1979. Vaksin dibedakan menjadi dua yaitu vaksin aktif dan vaksin inaktif. Vaksin
aktif merupakan vaksin dari mikroorganisme hidup yang masih aktif namun sudah tidak virulen atau avirulen. Vaksin inaktif adalah vaksin yang berisi
mikroorganisme mati melalui proses inaktivasi. Virus yang terkandung dalam vaksin inaktif telah kehilangan sifat inefektifnya namun antigenitasnya masih
dipertahankan. Sifat antigenitas inilah yang berperan dalam menginduksi kekebalan tubuh Fenner et al. 1995.
Program vaksinasi merupakan salah satu cara pengendalian penyakit AI pada unggas. Vaksin yang digunakan saat ini adalah vaksin inaktif yang resmi
atau telah terdaftar pada instansi pemerintah yang berwenang Soejoedono Handharyani 2005. Vaksin yang dapat digunakan dalam pencegahan dan
pemberantasan AI adalah vaksin inaktif homolog. Vaksin homolog adalah vaksin dengan subtipe virus sama dengan virus penyebab penyakit. Vaksin ini terbukti
mampu menurunkan kasus klinis dan jumlah virus yang menyerang unggas Akoso 2006.
MATERI DAN METODA
Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian dilakukan di Laboratorium Terpadu FKH-IPB, Departemen Ilmu Penyakit Hewan dan Kesehatan Masyarakat Veteriner, Fakultas Kedokteran
Hewan, Institut Pertanian Bogor dari bulan Juni 2010 sampai Juli 2011.
Bahan dan Alat Penelitian Hewan Percobaan
Hewan yang digunakan pada penelitian ini adalah ayam jantan petelur jenis white leghorn
berumur dua minggu. Jumlah ayam yang diamati sebanyak 100 ekor. Ayam tersebut dibagi kedalam 2 kelompok yaitu AV diberikan vaksin AI-
ND dan AK tidak diberikan vaksinkontrol. Masing-masing kelompok terdiri dari 50 ekor ayam.
Vaksin AI-ND
Vaksin AI-ND yang digunakan merupakan vaksin AI-ND inaktif killed vaccine
.
Pakan
Pakan yang digunakan pada pemeliharaan ayam penelitian ini adalah pakan konsentrat komersial yang diberikan setiap pagi. Air minum diberikan secara ad
libitum .
Kandang dan Perlengkapannya
Pada penelitian ini digunakan dua kandang litter berukuran 2x3 meter yang terbuat dari tembok yang dibatasi oleh kawat ram. Lantai dan tembok tersebut
diberi kapur dan lantai diberi sekam padi. Tempat minum dan tempat makan terbuat dari plastik yang dibersihkan setiap hari. Kandang juga dilengkapi dengan
lampu listrik.
Bahan dan Peralatan Perlengkapan Uji Laboratorium
Bahan yang digunakan adalah virus AI dan virus ND standar dengan titer 4 HAU, suspensi RBC 1, serum kebal AI, es batu, larutan Phospate Buffer Saline
PBS pH 7,2. Alat yang digunakan yaitu syringe 1 ml, syringe 3 ml, inkubator, lemari
pendingin bersuhu 4
o
C, mikroplate V bottom, mikropipet 100 l, tissue, kapas,
kantung plastik, alat sentrifuse, tabung reaksi, marker spidol, botol kecil, termos es, cawan petri, tabung mikro.
2. Metode Penelitian
