Kromatografi Penukar ion Kromatogafi Gel Filtrasi

4.5 Kromatografi Penukar ion

Penelitian ini menggunakan matriks DEAE Sephadex A 50. Matriks ini termasuk dalam golongan fungsional diethylaminoethyl, terbuat dari dextran, sejenis polysakarida. Dextran termasuk dalam golongan penukar ion yang lemah. Kode A-50 adalah penukar ion jenis anionik dengan kapasitas 50, artinya jumlah 50 muatan dan potensi muatannya per unit berat atau miliequivalen grup ion per miligram berat kering matrik Boyer 1993. Hasil kromatografi pertukaran ion disajikan pada Gambar 16. -0,1 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 10 20 30 40 50 60 70 Nomer fraksi Aktivitas kola g enase Uni tm l; Absor b an 280 n 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 Konsentrasi NaCl M Gambar 16 Hasil kromatografi penukar ion. ◊ absorban pada 280 nm, ■ aktivitas kolagenase Terdapat tiga puncak aktivitas kolagenase. Aktivitas kolagenase tertinggi terdapat pada fraksi yang ke-11 sebesar 0,658 Umenit dengan absorban 0,352 pada panjang gelombang 280 nm. Fraksi yang ke-11 ini selanjutnya dimurnikan lagi menggunakan gel filtrasi.

4.6 Kromatogafi Gel Filtrasi

Purifikasi kolagenase selanjutnya adalah kromatografi gel filtrasi. Penelitian ini kromatografi menggunakan matriks Sephadex G-100. Kode G-100 artinya adalah matriks untuk gel filtrasi dengan perkiraan berat molekul yang akan dipisahkan sebesar 4.000-150.000 Dalton. Selanjutnya fraksi-fraksi yang dihasilkan, diuji aktivitas kolagenase dan proteinnya. Hasil kromatografi gel filtrasi disajikan pada Gambar 17. 0,02 0,04 0,06 0,08 0,1 0,12 0,14 1 10 19 28 37 46 55 Nomer Fraksi A k tiv ita s k o la g en as e U n it m 0,02 0,04 0,06 0,08 0,1 0,12 0,14 Ab so rb a n 280 n m Gambar 17 Hasil kromatografi gel filtrasi. ◊ aktivitas kolagenase, ■ absorban pada 280 nm. Aktivitas kolagenase tertinggi terdapat pada fraksi yang ke-7 sebesar 0,133 Uml dengan absorban 0,126 pada panjang gelombang 280 nm. Gel Sephadex G- 100 dapat digunakan untuk memisahkan kolagenase dengan pengotor lainnya. Tahapan proses pemurnian telah berjalan dengan baik hal ini dapat dilihat dengan peningkatan kelipatan pemurniannya Kelipatan tingkat pemurnian kolagenase disajikan pada Tabel 8. Purifikasi kolagenase dari organ dalam ikan bandeng, menghasilkan tingkat kemurnian akhir sebesar 114,371 kali dan yield sebesar 1,26. Tabel 8 Hasil pemurnian kolagenase. Tahapan Volume ml Aktvitas enzim Unitml Aktivitas U Konsentrasi protein mgml Protein mg Aktivitas spesifik Umg Derajat kemurnian Yield Ekstraksi 450 0,141 63 0,785 353,25 0,178 1,00 100,00 Hasil pengendapan 70 ZA 45 0,496 2,32 1,185 53,325 0,419 2,347 35,42 Dialisis 20 0,451 9,020 1,020 23,260 0,388 2,484 14,32 DEAE Sephadex A-50 5 0,657 1,314 0,095 0,190 6,916 38,778 2,08 Sephadex G- 100 5 0,133 0,798 0,0065 0,039 20,462 114,731 1,26

4.4 Karakterisasi