ISOLASI GEN PENGKODE PROTEIN ANTIOKSIDAN PADA BIJI TANAMAN MELINJO (Gnetum gnemon)

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

gilib
i
d
/
/
:

gilib
i
d
/

/
:

.id/

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

gilib
i
d
/
/

:

/dig

:/
http

http

http

http

ac
nej.

.u

.u


.u

/dig

:/
http

.id/

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http


gilib
i
d
/
/
:

http

.id/

.u

gilib
i
d
/
/
:


ac
nej.

.u

.u

http

.id/

ac
nej.

.id/

ac
nej.


gilib
i
d
/
/
:

http

http

/dig

:/
http

.id/

ac
nej.


.u

.u

gilib
i
d
/
/
:

.u

http

.id/

.id/


ac
nej.

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

http

http

ac

nej.

.u

.u

.u

gilib
i
d
/
/
:

.id/

.id/

.id/


.id/

ac
nej.

ISOLASI GEN PENGKODE PROTEIN ANTIOKSIDAN
PADA BIJI TANAMAN MELINJO (Gnetum gnemon)
isolation of genes encoding antioxidant proteins
in melinjo seeds (Gnetum gnemon)

SKRIPSI

Diajukan guna melengkapi dan memenuhi salah satu syarat untuk menyelesaikan
Program Sarjana (S1) pada Program Studi Agroteknologi
Fakultas Pertanian Universitas Jember

Oleh:

Arya Bagus Boedi Iswanto

NIM. 081510501157

.u

gilib
i
d
/
/
:

PROGRAM
STUDI AGROTEKNOLOGI
.u
lib.u
lib.u
i
i
g
g
i
i
/d
/d
FAKULTAS
ttp:/
ttp:/ PERTANIAN
h
h
UNIVERSITAS JEMBER

http

.id/

.id/

ac
nej.

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

.u

igilib

.u

ac
nej.

ac
nej.

.u

gilib
i
d
/
/
:

/dig

:/
http

http

i

.id/

.id/

.id/

.id/

ac
nej.

.id/

.u

http

/dig

:/
http

.id/

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

http

igilib

OKTOBER, 2012

.u

.u

gilib
i
d
/
/
:

ac
nej.

ac
nej.

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

.id/

.id/

.id/

.id/

ac
nej.

igilib

.u

ac
nej.

igilib

.u

ac
nej.

ig

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

gilib
i
d
/
/
:

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

http

.id/

.une
b
i
l
i
Nama
g
://di

u

.
gilib
i
d
/
/
:

http

http

.u

gilib
i
d
/
/
:

://d
http
: 081510501157

/dig

:/
http
.id/

.id/

ac
nej.

ac
nej.

.u

.u

gilib
i
d
/
/
:

ilib Iswanto
: Arya BagusigBoedi

NIM

.id/

ac
nej.

http

d/

.i
Saya yang bertanda
j.ac tangan di bawah ini :

ac
nej.

/dig

:/
http

.id/

ac
nej.

lib.u
i
g
i
://d
PERNYATAAN
http

.u

.u

gilib
i
d
/
/
:

.u

http

.id/

.id/

ac
nej.

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

http

http

ac
nej.

.u

.u

.u

gilib
i
d
/
/
:

.id/

.id/

.id/

.id/

ac
nej.

/dig

:/
http

http

bahwa karya ilmiah yang
/
/ berjudul : Isolasi
/
.id/ Menyatakan dengan sesungguhnya
c.id
c.id
c.id
a
a
a
.
.
.
j
j
j
ne Antioksidan Padab.Biji
Gen Pengkodeb.u
Protein
uneTanaman Melinjo(Gnetum
.une
b
i
i
i
l
l
l
i
i
i
g
g
ig benar-benar hasil karya
dig
gnemon)
://di
://pengutipan
://di sendiri, kecuali jika dalam
://dadalah
p
p
p
p
t
t
t
t
t
t
t
t
h
h
h
h

ac
nej.

.u

gilib
i
d
/
/
:

http

substansi disebutkan sumbernya, dan belum pernah diajukan pada institusi

/
/
/
/
c.id atas keabsahan dan j.ac.id
c.idjiplakan. Saya bertanggung
c.id manapun, serta bukan jkarya
jawab
a
a
a
.
.
.
j
j
ne
une
.une
.uharus
.sesuai
.une
b
b
b
b
i
i
i
i
l
l
l
l
i
i
i
i
kebenaran
isinya
dengan
sikap
ilmiah
yang
dijunjung
tinggi.
g
g
g
g
g
://di
://di
://di
://di
://di
p
p
p
p
p
t
t
t
t
t
t
t
t
t
t
h
h tanpa adanya
h Demikian peryataan ini hsaya buat dengan sebenarnya,
h

/
/ mendapat sanksi
/pihak manapun serta bersedia
.id/ tekanan dan paksaan .adari
c.id
c.id
c.id
a
a
.
.
j
j
j
akademik jika ternyata
.une
.uneini tidak benar.
.une di kemudian hari pernyataan
b
b
b
i
i
i
l
l
l
i
i
i
g
g
g
g
://di
://di
://di
://di
p
p
p
p
t
t
t
t
t
t
t
t
h
h
h
h

ac
nej.

.u

gilib
i
d
/
/
:

http

.id/

.id/

ac
nej.

.u

.u

gilib
i
d
/
/
:

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

http

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

gilib
i
d
/
/
:

gilib
i
d
/
/
:

gilib
i
d
/
/
:

gilib
i
d
/
/
:

.u

igilib

.u

igilib

gilib
i
d
/
/
:

/dig

:/
http

http

ii

.id/

.id/

.id/

ac
nej.

ac
nej.

.u

.u

http

.id/

ac
nej.

.id/

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

http

/dig

:/
http

.id/

ac
nej.

.u

.u

gilib
i
d
/
/
:

.u

http

.id/

.id/

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

http
ac
nej.

.id/

ac
nej.

.u

.u

/dig

:/
http

.id/

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

gilib
i
d
/
/
:

http

.id/

.u

ac
nej.

.u

.u

http

.id/

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

http

.id/

.id/

ac
nej.

.u

.u

/dig

:/
http

NIM. 081510501157

.id/

.id/

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

lib.u
i
g
i
://d Iswanto
Arya Bagus
Boedi
http

http

http

http

ac
nej.

ac
nej.

.u

.u

.u

.id/

.id/

.id/

.id/

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

.id/ 29 Oktober 2012 .ac.id/
cJember,
a
.
j
nej
ne
u
u
.
.
b
b
li
li
Yang menyatakan,
g
digi
digi
/
/
/
/
://di
:
:
p
p
p
t
t
t
t
t
t
h
h
h

igilib

.u

ac
nej.

igilib

.u

ac
nej.

ig

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

gilib
i
d
/
/
:

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

http

gilib
i
d
/
/
:

d/
ac.i

nej.

.u

gilib
i
d
/
/
:

ac
nej.

http

http

.id/

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

d/
ac.i

nej.

.u

gilib
i
d
/
/
:

d/
ac.i

nej.

.u

lib Anggota
Dosen Pembimbing
digi
/

:/
http

http

gilib
i
d
/
/
:

http

.u

ac
nej.

.u

igilib

.id/

ac
nej.

ac
nej.

.u

gilib
i
d
/
/
:

/dig

:/
http

http

iii

.id/

.id/

.id/

.id/

ac
nej.

/dig

:/
http

http

gilib
i
d
/
/
:

http

http

.u

gilib
i
d
/
/
:

.u

.u

gilib
i
d
/
/
:

ac
nej.

.id/

ac
nej.

/dig

:/
http
.id/

.u

.id/

.u

.u

.id/

ac
nej.

http

.id/

ac
nej.

igilib

.u

.id/

ac
nej.

: Dr.
Didik Pudji Restanto, MS.
gilib
gIr.ilib
i
i
d
d
/
/
/
/
:
:
http
http NIP. 196504261994031001

gilib
i
d
/
/
:

http

http

gilib
i
d
/
/
:

a
nej.

ac
nej.

/dig

:/
http

: Tri Agus Siswoyo, SP., M.Agr., Ph.D
/
NIP. 197008101998031001
c.id

.u

.u

gilib
i
d
/
/
:

.u

http

.id/

.id/

ac
nej.

.id/

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

Dosen Pembimbing Utama

/dig

:/
http

.id/

ac
nej.

.u

gilib
i
d
/
/
:

http

http

.u

http

Pembimbing

.u

.u

gilib
i
d
/
/
:

.id/

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

.id/

ac
nej.

/dig

:/
http

http

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

http

.u

gilib
i
d
/
/
:

.u

.u

gilib
i
d
/
/
:

ac
nej.

.id/

.id/

.u

.id/

.id/

ac
nej.

/dig

:/
http

http

http

.id/

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

.u

://di

://di

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http
.id/

.u

gilib
i
d
/
/
:

.id/

.id/

ac
nej.

j.ac
j.ac BAGUS BOEDI ISWANTO
ARYA
e
e
n
n
u
u
.
.
NIM. 081510501157
gilib
gilib

ac
nej.

/dig

:/
http

http

g
://di

http
.id/

gilib
i
d
/
/
:

Oleh :ilib.u

.u

gilib
i
d
/
/
:

ac
nej.

.u

.u

gilib
i
d
/
/
:

.id/

.u

http

ac
nej.

http

.id/

ac
nej.

.id/

.

.

.u

/dig

:/
http

http

ISOLASI GEN PENGKODE PROTEIN ANTIOKSIDAN PADA BIJI
TANAMAN
id/
id/ MELINJO (Gnetum gnemon)

http

gilib
i
d
/
/
:

gilib
i
d
/
/
:

http

gilib
i
d
/
/
:

http

ac
nej.

.u

.u

ac
nej.

/dig

:/
http
.id/

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

http

.u

gilib
i
d
/
/
:

.id/

ac
nej.

.u

.u

gilib
i
d
/
/
:

.id/

ac
nej.

http

.id/

.id/

ac
nej.

/dig

:/
http

.id/

ac
nej.

lib.u
i
g
i
SKRIPSI
://d
http

.u

.u

gilib
i
d
/
/
:

.u

http

.id/

.id/

ac
nej.

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

http

http

ac
nej.

.u

.u

.u

gilib
i
d
/
/
:

.id/

.id/

.id/

.id/

ac
nej.

igilib

.u

ac
nej.

igilib

.u

ac
nej.

ig

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

gilib
i
d
/
/
:

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

http

/dig

:/
http
.id/

.id/

ac
nej.

ac
nej.

.u

lib.u
i
g
i
://d
PENGESAHAN
http

.u

.u

gilib
i
d
/
/
:

.u

http

.id/

.id/

ac
nej.

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

http

http

ac
nej.

.u

.u

.u

gilib
i
d
/
/
:

.id/

.id/

.id/

.id/

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

/dig

:/
http

http

/
/
/
.id/ Skripsi berjudul Isolasi.aGen
c.id Pada Biji Tanaman j.ac.id
c.idPengkode Protein Antioksidan
a
.
j
j
e
.une
.une oleh Fakultas Pertanian
.ungnemon)
b
b
b
i
i
i
l
l
l
i
i
i
Melinjo (Gnetum
telah
diuji
dan
disahkan
g
g
g
g
://di
://di
://di
://di
p
p
p
p
t
t
t
t
t
t
t
t
h
h
h
h
Universitas
Jember pada :

ac
nej.

.u

gilib
i
d
/
/
:

http

.id/ Hari

ac
nej.

Tanggal

http

.id/

.id/

ac
nej.

ac
nej.

.u

.u

gilib
i
d
/
/
:

gilib
i
d
/
/
:

/d

.id/

ac
nej.

.u

http

.u

/dig

:/
http

http

.id/

ac
nej.

ac
nej.

.u

.u

gilib
i
d
/
/
:

:/
http

/dig

:/
http

http

c
Penguji
II,ej.a
n
u
ilib.
//dig

.u

.id/

/
c.id
a
.
j
nePenguji III,

.id/

.id/

ac
nej.

.u

.u

gilib
i
d
/
/
:

:
http

http

gilib
i
d
/
/
:

/
/
/
c.id
c.id
c.id
a
a
a
.
.
.
j
j
j
.une
.une Ph.D
.uneTri Agus Siswoyo, SP.,ilibM.Agr.,
b
b
i
i
l
l
i
i
g
g
g
g
NIP. 197008101998031001
://di
://di
://di
://di
p
p
p
p
t
t
t
t
t
t
t
t
h
h
h
h

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

ac
nej.

.id/

Tim Penguji
Penguji
igiI,lib

http

http

gilib
i
d
/
/
:

ac
nej.

lib.u
i
g
g
i
i
Tempat
Jember
://d
://d : Fakultas PertaniantUniversitas
h tp
http

.u

gilib
i
d
/
/
:

.id/

.id/

/
c.id
a
.
j
e
: 22un
Oktober
2012
ilib.
: Senin

gilib
i
d
/
/
:

/dig

:/
http

http

http

Prof. Dr. Ir. Wiwiek
/
/ Sri Wahyuni, MS.
/ MS.
.id/ Dr. Ir. Didik Pudji Restanto,
c.id
c.id
c.id
a
a
a
.
.
.
j
j
j
NIP. 196504261994031001
NIP.
195901021988031002
.une
.une
.une
b
b
b
i
i
i
l
l
l
i
i
i
g
g
g
g
://di
://di
://di
://di
p
p
p
p
t
t
t
t
t
t
t
t
h
h
h
h

ac
nej.

.u

gilib
i
d
/
/
:

http

.id/

.id/

ac
nej.

.u

.u

gilib
i
d
/
/
:

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

http

.id/

ac
nej.

.u

gilib
i
d
/
/
:

http

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

.u

igilib

.u

ac
nej.

ac
nej.

.u

gilib
i
d
/
/
:

/dig

:/
http

http

iv

.id/

.id/

.id/

.id/

.id/

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

igilib

/dig

:/
http

http

.u

.u

.u

ac
nej.

.u

gilib
i
d
/
/
:

.id/

.id/

.id/

http

ac
nej.

/
/
/
c.id
c.id
c.id
a
a
a
.
.
.
j
j
j
Dr. Ir. Jani Januar,.uMT.
ne
.une
.une
b
b
b
i
i
i
l
l
l
i
i
i
NIP. 195212171980032001
g
g
g
g
://di
://di
://di
://di
p
p
p
p
t
t
t
t
t
t
t
t
h
h
h
h

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

.id/

.id/

ac
Mengesahkan unej.
.
gilib
Dekan,
i
d
/
/
:
http

igilib

.u

ac
nej.

igilib

.u

ac
nej.

ig

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

gilib
i
d
/
/
:

/dig

:/
http
.id/

.id/

ac
nej.

ac
nej.

ac
nej.

lib.u
lib.u
lib.u
i
i
i
g
g
g
i
i
i
/d Pengkode Protein tAntioksidan
://d Melinjo
://d
:/Gen
Isolasi
Pada Biji Tanman
http
ht p
http

.u

gilib
i
d
/
/
:

.u

http

.id/

.id/

ac
nej.

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

http

http

ac
nej.

.u

.u

.u

gilib
i
d
/
/
:

.id/

.id/

.id/

.id/

ac
nej.

http

/dig

:/
http

(Gnetum gnemon). ARYA BAGUS BOEDI ISWANTO. 081510501157. 2012,

/
/
/
/
c.idPertanian, Universitas j.ac.id
c.id Minat Agronomi, Fakultas
c.id Program Studi Agroteknologi
a
a
a
.
.
.
j
j
j
.une
.une
.une
.une
b
b
b
b
i
i
i
i
l
l
l
l
i
i
i
i
Jember.
g
g
g
g
g
://di
://di
://di
://di
://di
p
p
p
p
p
t
t
t
t
t
t
t
t
t
t
h
h
h
h
h
RINGKASAN

Isolasi dan karakterisasi protein antioksidan pada biji melinjo Gnetum
gnemon menunjukkan adanya dua fraksi protein antioksidan dengan berat molekul
untuk fraksi protein utamanya sebesar 30 kilo Dalton dan fraksi protein keduanya
memiliki berat molekul sebesar 12 kilo Dalton. Protein antioksidan berperan
sebagai penangkal radikal bebas, pencegah terjadinya stres oksidatif, menghambat
spesies oksigen reaktif (ROS) yang dapat mempengaruhi sistem metabolisme
serta dapat meyebabkan kerukasan struktur dan fungsi sel. Penelitian ini bertujuan
untuk mengisolasi dan mengidentifikasi gen pengkode protein antioksidan pada
biji melinjo.
Metode RLM-RACE (RNA Ligase Mediated Rapid Amplification Of
cDNA Ends) digunakan untuk mengisolasi fragmen cDNA Gg-AOP ujung 5’ dan
ujung 3’. Primer di desain berdasarkan urutan asam amino dari fraksi protein
terisolasi. Pada ujung 5’ desain primer yang digunakan adalah primer spesifik
(AP1)R 5’-TGN CCR TAY TGN ACY TTY TGY TTN AC-3’, (AP2)R 5’ ATN
GCN CAN GTN GCY TTN CCR TTN CC-3’, sedangkan pada ujung 3’ adalah
(SP1)R 5’- GGN AAY GGN AAR GCN ACN GTN GCN AT-3’, (SP2)R 5’GTN AAR CAR AAR GTN CAR TAY GGN CA-3’. Hasil PCR di kloning ke
dalam plasmid pGEM-T Easy vector dan ditransformasi ke dalam bakteri E.coli
strain DH5 dan ditumbuhkan pada media LB padat. Koloni bakteri berwarna
putih ditumbuhkan pada media LB cair selama semalam dan dilakukan isolasi
plasmid. Plasmid DNA target yang diperoleh kemudian dipotong menggunakan
enzim retriksi EcoRI dan disekuensi untuk mengetahui urutan nukleotida dari
fragmen cDNA Gg-AOP yang diperoleh.

v

.u

igilib

igilib

.u

ac
nej.

.id/

.id/

.id/

.id/

ac
nej.

igilib

.u

ac
nej.

igilib

.u

ac
nej.

ig

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

gilib
i
d
/
/
:

Hasil isolasi

ac
nej.

.u

gilib
i
d
/
/
:

/dig

:/
http

http

http

http

http

ac
nej.

.u

.u

.u

gilib
i
d
/
/
:

.id/

.id/

.id/

.id/

ac
nej.

RACE ujung 3’ menghasilkan fragmen cDNA Gg-AOP

sebesar 300 bp. Isolasi RACE ujung 5’ menghasilkan fragmen cDNA Gg-AOP
berukuran 178 bp. Homologi cDNA Gg-AOP ujung 5’ dengan sekuen nukleotida
protein antioksidan terisolasi menunjukkan nilai homologi sebesar 34,2%.
Homologi cDNA Gg-AOP ujung 3’ dengan sekuen nukleotida protein antioksidan
terisolasi menunjukkan nilai homologi sebesar 31,4%. Perlu dilakukan penelitian
lebih lanjut untuk mendapatkan full length fragmen cDNA Gg-AOP.

Kata Kunci : cDNA, RLM-RACE, Protein Antioksidan (AOP), Melinjo.

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

gilib
i
d
/
/
:

gilib
i
d
/
/
:

gilib
i
d
/
/
:

gilib
i
d
/
/
:

gilib
i
d
/
/
:

http

http
.u

igilib

igilib

.u

ac
nej.

ac
nej.

.u

gilib
i
d
/
/
:

/dig

:/
http

http

vi

.id/

.id/

.id/

.id/

ac
nej.

.id/

ac
nej.

.u

.u

/dig

:/
http

.id/

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

gilib
i
d
/
/
:

http

.id/

.u

gilib
i
d
/
/
:

ac
nej.

.u

.u

http

.id/

ac
nej.

.id/

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

http

/dig

:/
http

.id/

ac
nej.

.u

.u

gilib
i
d
/
/
:

.u

http

.id/

.id/

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

http
ac
nej.

.id/

ac
nej.

.u

.u

/dig

:/
http

.id/

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

gilib
i
d
/
/
:

http

.id/

.u

gilib
i
d
/
/
:

ac
nej.

.u

.u

http

.id/

ac
nej.

.id/

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

http

/dig

:/
http

.id/

ac
nej.

.u

.u

gilib
i
d
/
/
:

.u

http

.id/

.id/

ac
nej.

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

http

http

ac
nej.

.u

.u

.u

gilib
i
d
/
/
:

.id/

.id/

.id/

.id/

ac
nej.

igilib

.u

ac
nej.

igilib

.u

ac
nej.

ig

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

gilib
i
d
/
/
:

/dig

:/
http
.id/

.id/

ac
nej.

ac
nej.

ac
nej.

lib.u
lib.u
lib.u
i
i
i
g
g
g
i
i
i
://d(Gnetum
://d Proteins in Melinjo tSeeds
://dof Genes Encoding Antioxidant
Isolation
h tp
http
http

.u

gilib
i
d
/
/
:

.u

http

.id/

.id/

ac
nej.

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

http

http

ac
nej.

.u

.u

.u

gilib
i
d
/
/
:

.id/

.id/

.id/

.id/

ac
nej.

http

/dig

:/
http

gnemon). ARYA BAGUS BOEDI ISWANTO. 081510501157. 2012, Program

/
/
/
id/Jember.
c.id
c.of
c.id of Agriculture, University
c.id Study Agrotechnology,j.Faculty
a
a
a
a
.
.
.
j
j
j
.une
.une
.une
.une
b
b
b
b
i
i
i
i
l
l
l
l
i
i
i
i
g
g
g
g
g
://di
://di
://di
://di
://di
p
p
p
p
p
t
t
t
t
t
t
t
t
t
t
h
h
hSUMMARY
h
h
.id/

ac
nej.

.u

gilib
i
d
/
/
:

http

/
/
/
c.id
c.id
c.id
a
a
a
.
.
.
j
j
j
ne characterization antioxidant
Isolation .uand
.une
.une protein in melinjo iliseeds
b
b
b
i
i
l
l
i
i
g
g
ig
/dig two fractions of antioxidant
(Gnetum
showed that there
://di
://di protein.
:/were
://dgnemon)
p
p
p
p
t
t
t
t
t
t
t
t
h
h
h
h
The first fraction was 30 kilo Dalton and the second fraction was 12 kilo Dalton.

/
/
/
d/
c.id
c.id is a free radical blocker,
c.id The role of antioxidantj.protein
oxidative
stress preventer, j.ac.i
a
a
a
.
.
j
j
ne
ne
.une
.ucould
.uOxygen
.une
b
b
b
b
i
i
i
i
l
l
l
l
i
i
i
i
pursuing
Reactive
Species
(ROS).
ROS
influences
the
metabolism
g
g
g
g
g
://di
://di
://di
://di
://di
p
p
p
p
p
t
t
t
t
t
t
t
t
t
t
h
h
h and causes cell functionhand structure damage. This research
h
system
aimed to

/
/ seeds.
/ antioxidant protein in melinjo
.id/ isolate and identify gene.aencoding
c.id
c.id
c.id
a
a
.
.
j
j
j
e
e RLM-RACE (RNA Ligase
The method
Rapid Amplification
.une
.unMediated
.unof
b
b
b
i
i
i
l
l
l
i
i
i
g
g
g
/dig Gg-AOP fragment terminal
://di
://di 5’ and
:/cDNA
://diEnds) was used to isolate
Of cDNA
p
p
p
p
t
t
t
t
t
t
t
t
h
h
h
h

ac
nej.

.u

gilib
i
d
/
/
:

http

cDNA Gg-AOP fragment terminal 3’. Primer was designed based on the amino

/
/
/
/
c.id fraction. (AP1)R 5’- j.ac.id
c.id of 12 kilo Dalton protein
c.id acid sequence from the
isolated
a
a
a
.
.
.
j
j
j
ne
.une
.une and (AP2)R 5’ ATNiliGCN
.uTGN
.une
b
b
b
b
i
i
i
l
l
l
i
i
i
TGN
CCR
TAY
ACY
TTY
TGY
TTN
AC-3’
g
g
g
g
g
://di
://di
://di
://di
://di
p
p
p
p
p
t
t
t
t
t
t
t
t
t
t
h
h GTN GCY TTN CCR TTNhCC-3’, was used to find out theh cDNA Gg-AOP
h
CAN

/
/ ACN GTN GCN
/5’- GGN AAY GGN AAR.iGCN
.id/ fragment terminal 5’. (SP1)R
c.id
c d
c.id
a
a
a
.
.
.
j
j
j
e GTN AAR CAR AAR GTN
AT-3’ and (SP2)R
was
.une
.uneCAR TAY GGN CA-3’
.un5’b
b
b
i
i
i
l
l
l
i
i
i
g
g
g
/digout cDNA Gg-AOP fragment
://di
://di 3’ and
://diterminal 3’. The RACEttterminal
:/find
usedttto
p
p
p
p
t
t
t
t
h
h
h
h

ac
nej.

.u

gilib
i
d
/
/
:

http

terminal 5’ was each cloned to pGEM-T Easy vector and transform to E.coli strain

/
/
/
id/
c.idgrown on LB liquid j.ac.id
c.selected
c.id DH5 on LB plate. jThe
of white colonyj.a
was
a
a
.
.
j
.une
.une
.une
.une
b
b
b
b
i
i
i
i
l
l
l
l
i
i
i
i
overnight
then
the
plasmid
was
isolated.
The
plasmid
of
DNA
target
was
cut
with
g
g
g
g
g
://di
://di
://di
://di
://di
p
p
p
p
p
t
t
t
t
t
t
t
t
t
t
h
h
h retriction enzyme then wash sequenced to find out the nucleotide
h
EcoRI
sequence

/
/
/
.id/ of cDNA Gg-AOP fragment.
c.id
c.id
c.id
a
a
a
.
.
.
j
j
j
e
The sizeb.of
Gg-AOP fragmentb.terminal
une
une 3’ was 300 bp and
uncDNA
.the
b
i
i
i
l
l
l
i
i
i
g
g
dig 178 bp. Homology cDNA
//dig fragment terminalttp5’://was
://di
://diGg-AOP
:Gg-AOP
cDNA
p
p
p
t
t
t
t
t
t
h
h
h
h

ac
nej.

.u

gilib
i
d
/
/
:

http

terminal 5’ with isolated nucleotide antioxidant protein sequence showed

/
d/
.id/ 3’ with isolated .ac.id/
cterminal
c.iHomology
c.id homology value of 34.2%.
cDNA Gg-AOP
a
a
a
.
.
.
j
j
j
nej
ne
ne
ne
u
u
u
u
.
.
.
.
b
b
b
b
li
li
li
li
g
digi
digi
digi
digi
/
/
/
/
/
/
/
/
://di
:
:
:
:
p
p
p
p
p
t
t
t
t
t
t
t
t
t
t
h
h
h
h
h
vii
.u

igilib

igilib

.u

ac
nej.

.id/

.id/

.id/

.id/

ac
nej.

igilib

.u

ac
nej.

igilib

.u

ac
nej.

ig

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

gilib
i
d
/
/
:

http

d/
ac.i

nej.

.u

gilib
i
d
/
/
:

/d

/d

gilib
i
d
/
/
:

gilib
i
d
/
/
:

gilib
i
d
/
/
:

gilib
i
d
/
/
:

gilib
i
d
/
/
:

gilib
i
d
/
/
:

gilib
i
d
/
/
:

gilib
i
d
/
/
:

http

http
.u

igilib

igilib

.u

ac
nej.

ac
nej.

.u

gilib
i
d
/
/
:

/dig

:/
http

http

viii

.id/

.id/

.id/

.id/

ac
nej.

.id/

ac
nej.

.u

.u

/dig

:/
http

.id/

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

gilib
i
d
/
/
:

http

.id/

.u

gilib
i
d
/
/
:

ac
nej.

.u

.u

http

.id/

ac
nej.

.id/

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

http

/dig

:/
http

.id/

ac
nej.

.u

.u

gilib
i
d
/
/
:

.u

http

.id/

.id/

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

http
ac
nej.

.id/

ac
nej.

.u

.u

/dig

:/
http

.id/

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

gilib
i
d
/
/
:

http

.id/

.u

gilib
i
d
/
/
:

ac
nej.

.u

.u

http

.id/

ac
nej.

.id/

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

http

/dig

:/
http

.id/

ac
nej.

.u

.u

.u

http

.id/

.id/

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

http
ac
nej.

.id/

ac
nej.

.u

.u

/dig

:/
http

.id/

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

gilib
i
d
/
/
:

http

.id/

.u

ac
nej.

.u

.u

http

.id/

ac
nej.

.id/

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

http

/dig

:/
http

.id/

ac
nej.

.u

.u

.u

http

.id/

.id/

ac
nej.

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

http

/dig

:/
http
.id/

ac
nej.

.u

.u

http

.u

gilib
i
d
/
/
:

.id/

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

ac
nej.

http

.id/

.u

.id/

ac
nej.

http

.id/

/dig

:/
http

http

.u

.u

ac
nej.

.u

.id/

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

:/
http

http

gilib
i
d
/
/
:

.u

.id/

.u

gilib
i
d
/
/
:

ac
nej.

.u

.id/

http

/dig

:/
http
.id/

.id/

.id/

ac
nej.

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

ac
nej.

needed to conduct a further research to gain full length cDNA Gg-AOP.

:/
http

gilib
i
d
/
/
:

.id/

.id/

ac
nej.

ac
nej.

lib RLM-RACE, Antioxidant
Key wordsig: icDNA,
igilibProtein (AOP), Melinjo.

http

gilib
i
d
/
/
:

/dig

:/
http

lib.u
lib.u
lib.u
i
i
i
g
g
g
i
i
i
/d
nucleotide
It is
:/31.4%.
://dshowed homology valuettof
://d antioxidant protein sequence
h p
http
http

.u

gilib
i
d
/
/
:

.u

http

.id/

.id/

ac
nej.

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

http

http

ac
nej.

.u

.u

.u

gilib
i
d
/
/
:

.id/

.id/

.id/

.id/

ac
nej.

igilib

.u

ac
nej.

igilib

.u

ac
nej.

ig

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

gilib
i
d
/
/
:

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

http

.id/

ac
nej.

u

.
gilib
i
d
/
/
:

d/

.id/

ac
nej.

.u

gilib
i
d
/
/
:

/dig

:/
http

http
d/

.i
.i
Puji syukur kehadirat
j.acatas segala rahmat dan
j.ac Tuhan Yang Maha Esa
.une

/dig

:/
http

.id/

ac
nej.

lib.u
i
g
i
://d
KATA
PENGANTAR
http

.u

.u

gilib
i
d
/
/
:

.u

http

.id/

.id/

ac
nej.

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

http

http

ac
nej.

.u

.u

.u

gilib
i
d
/
/
:

.id/

.id/

.id/

.id/

ac
nej.

.une

.id/

ac
nej.

.u

lib
ilib
karuniaNyaigsehingga
penulis dapat menyelesaikan
skripsi yang berjudul
igiIsolasi
igilib

g
://di
://d
://d
://d
p
p
p
p
t
t
t
t
t
t
t
t
h
h
h Pengkode Protein Antioksidan
Gen
Pada Biji Tanaman hMelinjo(Gnetum
/
/ satu syarat untuk
/ untuk memenuhi salah
/ gnemon). Skripsi ini disusun
c.id
c.id
c.id
c.id
a
a
a
a
.
.
.
.
j
j
j
j
e
menyelesaikan pendidikan
strata satu (S1) pada
Studi Agroteknologi
.une
.unProgram
.une
.une
b
b
b
b
i
i
i
i
l
l
l
l
i
i
i
i
g
g
g
g
dig
Fakultas
Universitas Jember.
://di
://di
://di
://Pertanian
://di
p
p
p
p
p
t
t
t
t
t
t
t
t
t
t
h
h
h
h
h

http

Penyusunan skripsi ini tidak terlepas dari bantuan berbagai pihak, oleh

/
/
/
/
c.id
c.idkepada :
c.id
c.id karena itu penulis inginj.amenyampaikan
ucapan terimaj.kasih
a
a
a
.
.
j
j
ne
une
.Dr.
.uDosen
.une SP., M.Agr., Ph.D, selaku
.une
b
b
b
b
i
i
i
i
l
l
l
l
i
i
i
i
1.
Tri
Agus
Siswoyo,
Pembimbing
Utama,
g
g
g
g
g
://di
://di
://di
://di
://di
p
p
p
p
p
t
t
t
t
t
t
t
t
t
t
h
h
hIr. Didik Pudji Restanto, MS h
h
selaku Dosen Pembimbing Anggota
I, dan Prof.
.id/

ac
nej.

.u

gilib
i
d
/
/
:

http

/
c.id
c.
c.
a
a
a
.
.
.
j
j
j
e
meluangkan waktu,
skripsi ini.
.une
.unpenulisan
.une pikiran dan perhatian idalam
b
b
b
i
i
i
l
l
l
i
i
g
g
ig dan saudara-saudaraku yang
//digsayang
://di
:kasih
://didengan penuh pengertian,
://dtua
2. Orang
p
p
p
p
t
t
t
t
t
t
t
t
h
h
h
h
Dr. Ir. Wiwiek Sri Wahyuni,
II yang telah
id/
id/ MS selaku Dosen Pembimbing

dan semangat selalu mendoakan agar terselesaikannya skripsi ini.

/
/
.id/ telah memberikan .ac.id/
cyang
c.id
c.id 3. Seluruh anggota Laboratorium
Analisis Tanaman
a
a
a
.
.
.
j
j
j
nej
ne
ne
ne
u
u
u
u
.
.
.
.
b
b
b
b
li
li
kesempatan
g
gili
igili memberikan dukungan
diterhadap
dserta
digi penulis menimba ilmu
digi
/
/
/
/
/
/
/
/
://di
:
:
:
:
p
p
p
p
p
t
t
t
t
t
t
t
t
t
t
h
h
hterselesaikannya skripsi ini. h
h

MS
serta dorongan
/
/
/ yang selalu memberi masukan
.id/ 4. Dr. Ir. Sigit Suparjono,
c.id
c.id
c.id
a
a
a
.
.
.
j
j
j
semangat. b.une
.une
.une
b
b
i
i
i
l
l
l
i
i
i
g
g
g
g
://di
://di rekan
://di Amin, Fendi dan Dodik
://di Candra, Anang, Adrian,ttpNisya,
5. Oktavia,
sebagai
p
p
p
t
t
t
t
t
t
h
h
h
h

ac
nej.

.u

gilib
i
d
/
/
:

http

d/
ac.i

nej.

.u

gilib
i
d
/
/
:

kerjaku yang telah membantu selama penelitian dan selalu memberi dorongan
semangat.

.id/

.id/

ac
nej.

ac
nej.

.u

.u

.u

.id/

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

lib
6. Semuadpihak
igilibyang tidak dapat disebutkan
digisatu per satu.

g
://di
://
://
p
p
p
p
t
t
t
t
t
t
t
t
h
h
h
h Penulis juga menerima segala
kritik dan saran dari semua
pihak demi
penulis berharap, semoga
/
/ skripsi ini dapat
/
/ kesempurnaan skripsi ini. .Akhirnya
c.id
c.id
c id
c.id
a
a
a
a
.
.
.
.
j
j
j
j
bermanfaat. b.une
.une
.une
.une
b
b
b
i
i
i
i
l
l
l
l
i
i
i
i
g
g
g
g
g
://di
://di
://di
://di
://di
p
p
p
p
p
t
t
t
t
t
t
t
t
t
t
h
h
h
h
h

http

.id/ Jember,

ac
nej.

u

.
gilib
i
d
/
/
:

une

.
gilib
i
d
/
/
:

.u

igilib

.u

igilib

.u

ac
nej.

.id/

Penulis

ac
nej.

.u

gilib
i
d
/
/
:

/dig

:/
http

http

ix

.id/

.id/

.id/

.id/

ac
nej.

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

http

http

.id/

id/

.
Oktober 2012
j.ac

igilib

.u

ac
nej.

igilib

.u

ac
nej.

ig

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

gilib
i
d
/
/
:

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

http

.u

gilib
i
d
/
/
:

.id/

ac
nej.

/dig

:/
http
.id/

ac
nej.

Halaman

.u

.u

.u

.u

gilib
i
d
/
/
:

ac
nej.

.id/

ac
nej.

http

.id/

.id/

ac
nej.

/dig

:/
http

.id/

ac
nej.

lib.u
i
g
i
://d ISI
DAFTAR
http

.u

.u

gilib
i
d
/
/
:

.u

http

.id/

.id/

ac
nej.

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

http

http

ac
nej.

.u

.u

.u

gilib
i
d
/
/
:

.id/

.id/

.id/

.id/

ac
nej.

lib
lib
lib
HALAMAN
digi ii
digi
digiJUDUL ………………………………………………………

g
://di
://
://
://
p
p
p
p
t
t
t
t
t
t
t
t
h
h
h
h
HALAMAN
PERNYATAAN ……………………………………………
iiii
iv
/
/
/ …………………………………………….
/ HALAMAN PENGESAHAN
iv
c.id
c.id
c.id
c.id
a
a
a
a
.
.
.
.
j
j
j
j
RINGKASANb……………………………………………………………..
vvb.une
.une
.une
.une
b
b
i
i
i
i
l
l
l
l
i
i
i
i
g
g
g
g
/dig
://di
://di ix
://di
:/PENGANTAR
://di
KATA
…………………………………………………….
p
p
p
p
p
ix
t
t
t
t
t
t
t
t
t
t
h
h
h
h
h

http

DAFTAR ISI ………………………………………………………………. xx

/
/
/
/
c.id
c.id
c.id
c.id DAFTAR GAMBARj……………………………………………………...
xi
a
a
a
a
.
.
.
.
xii
j
j
j
.une
.une
.une …………………………………………………...
.une
b
b
b
b
i
i
i
i
l
l
l
l
i
i
i
i
DAFTAR
LAMPIRAN
xii
g
g
g
g
g
://di
://di xiii
://di
://di
://di
p
p
p
p
p
t
t
t
t
t
t
t
t
t
t
h
h
h
h 1. PENDAHULUAN ………………………………………………...
h
BAB
11
.id/

ac
nej.

.u

gilib
i
d
/
/
:

1.1 Latar Belakang.id
…………………………………………………
/
/
/
11
c.id
c.id
c
a
a
a
.
.
.
j
j
j
e
e
e
1.2 Perumusan
3b3.un
b.un
b.un Masalah …………………………………………...

li
li
gili
digi 3
digi
diTujuan
/
/
/
/
/
/
:
:
:
1.3
Penelitian
………………………………………………
p
p
p
3
htt
htt
htt

http

/dig

:/
http

1.4 Manfaat Penelitian …………………………………………….. 33

/
/
/
/
c.id
c.id
c.id ………………………………………….
c.id BAB 2. TINJAUAN PUSTAKA
4
a
a
a
a
.
.
.
.
4
j
j
j
j
.une
.une
.une
.une
b
b
b
b
i
i
i
i
l
l
l
l
i
i
i
i
2.1
Tanaman
Melinjo
(Gnetum
gnemon)
………………………....
4
g
g
g
g
g
://di
://di 4
://di
://di
://di
p
p
p
p
p
t
t
t
t
t
t
t
t
t
t
h
h
h
h 2.2 Antioksidan ………………………………………………….....
h
55
.id/

ac
nej.

.u

gilib
i
d
/
/
:

http

d/
ac.i

nej.

.u

gilib
i
d
/
/
:

/

2.3 RLM-RACE (RNA
.id/
.id/ Ligase Mediated Rapid Amplification

d
ac.i
ac
ac
.
.
.
j
j
j
e
e
e
n
n Ends) ………………………………………………...
Of cDNA
6 n
li6b.u
lib.u
lib.u
i
i
i
g
g
g
i
i
i
/d 5’ …………………………..
://d 88
:/Ujung
://d 2.3.1 RLM-RACE tKit
http
h tp
http
2.3.2 RLM-RACE Kit Ujung 3’ ………………………….. 88
/
/
c.id
c.id Chain Reaction) …………………………....
2.4 PCR (Polymerase
a
a
.
.
99
j
j
e
e

.un

.un

/dig

:/
http

.id/

ac
nej.

.u

b
li11
ilib
2.5
DNA (cDNA)
gilib
digi 11
dig………………………………...
diComplementary

g
://di
://
://
://
p
p
p
p
t
t
t
t
t
t
t
t
h
h
h
h 2.6 Kloning cDNA ………………………………………………....
12
12
/
/
/
/ BAB 3. BAHAN DAN METODE
………………………………………..
15
15
c.id
c.id
c.id
c.id
a
a
a
a
.
.
.
.
j
j
j
j
ne Tempat Penelitian ………………………………..
3.1 Waktu
15
.une
.une
.udan
.une
15
b
b
b
b
i
i
i
i
l
l
l
l
i
i
i
i
g
g
g
g
g
//diBahan
://di
://di 15
://di
:3.2
://di
dan Alat ………………………………………………..
15
p
p
p
p
p
t
t
t
t
t
t
t
t
t
t
h
h
h
h
h

http

3.3 Metode Penelitian ……………………………………………..

15

15
/
d/
d/
d/
i
i
i
.
.
.
c.id
c
c
c
BAB
4.
HASIL
DAN
PEMBAHASAN
…………………………………..
21
a
a
a
a
.
.
.
.
21
j
j
j
j
.une
.une
.une
.une
b
b
b
b
i
i
i
i
l
l
l
l
i
i
i
i
g
g
g
g
g
://di
://di
://di
://di
://di
p
p
p
p
p
t
t
t
t
t
t
t
t
t
t
h
h
h
h
h
x

.u

igilib

igilib

.u

ac
nej.

.id/

.id/

.id/

.id/

ac
nej.

igilib

.u

ac
nej.

igilib

.u

ac
nej.

ig

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

gilib
i
d
/
/
:

http

d/
ac.i

d/

.une

gilib
i
d
/
/
:

gilib
i
d
/
/
:

gilib
i
d
/
/
:

gilib
i
d
/
/
:

gilib
i
d
/
/
:

gilib
i
d
/
/
:

.u

igilib

.u

igilib

gilib
i
d
/
/
:

/dig

:/
http

http

xi

.id/

.id/

.id/

ac
nej.

ac
nej.

.u

.u

http

.id/

ac
nej.

.id/

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

http

/dig

:/
http

.id/

ac
nej.

.u

.u

gilib
i
d
/
/
:

.u

http

.id/

.id/

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

http
ac
nej.

.id/

ac
nej.

.u

.u

/dig

:/
http

.id/

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

gilib
i
d
/
/
:

http

.id/

.u

gilib
i
d
/
/
:

ac
nej.

.u

.u

http

.id/

ac
nej.

.id/

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

http

/dig

:/
http

.id/

ac
nej.

.u

.u

gilib
i
d
/
/
:

.u

http

.id/

.id/

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

http
ac
nej.

.id/

ac
nej.

.u

.u

/dig

:/
http

.id/

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

gilib
i
d
/
/
:

http

.id/

.u

gilib
i
d
/
/
:

ac
nej.

.u

.u

http

.id/

ac
nej.

.id/

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

http

/dig

:/
http

.id/

ac
nej.

.u

.u

.u

http

.id/

.id/

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

http
ac
nej.

.id/

ac
nej.

.u

.u

/dig

:/
http

.id/

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

.u

http

.id/

.u

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

.id/

ac
nej.

.id/

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

/dig

:/
http

http
.u

.u

http

gilib
i
d
/
/
:

.id/

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

ac
nej.

.u

.u

.id/

.u

.id/

.id/

ac
nej.

http

.id/

ac
nej.

:/
http

:/
http

gilib
i
d
/
/
:

http

/dig

/

/

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

.id/

ac
nej.

.u

:/
http

.u

.u

gilib
i
d
/
/
:

.une

.id/

.id/ LAMPIRAN

gilib
i
d
/
/
:

d/

.i
c.i
5.1 Kesimpulan
30
30
j.ac
j.a………………………………………………….....
://
http PUSTAKA
DAFTAR

http

/dig

:/
http

BAB 5. KESIMPULAN DAN SARAN …………………………………. 30
30

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

ac
nej.

lib
lib
5.2
gilib …………………………………………………………...
digi 30
digi
diSaran

http

gilib
i
d
/
/
:

.id/

.id/

ac
nej.

ac
nej.

nej.

u

.
gilib
i
d
/
/
:

/dig

:/
http

lib.u
lib.u
lib.u
i
i
i
g
g
g
i
i
i
//d Hasil dan Pembahasantt………………………………………...
://d 21
://d
:4.1
21
http
h p
http

.u

gilib
i
d
/
/
:

.u

http

.id/

.id/

ac
nej.

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

http

http

ac
nej.

.u

.u

.u

gilib
i
d
/
/
:

.id/

.id/

.id/

.id/

ac
nej.

igilib

.u

ac
nej.

igilib

.u

ac
nej.

ig

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

http

.u

gilib
i
d
/
/
:

.id/

.u

http

d/
ac.i

ej.

://

.id/

ac
nej.

.u

gilib
i
d
/
/
:

http

4.4

Hasil seleksi bakteri transforman pada media LB plate

26

4.7

Hasil sekuensi
.id/
.id/RACE ujung 3’ ………………………….

28

/
/
/
c.id
c.idmenggunakan
c.id
4.5
Hasil elektroforesis
isolasi plasmid dengan
a
a
a
.
.
.
j
j
j
une
.une
.agarose
.uneretriksi EcoRI pada gel
b
b
b
i
i
i
l
l
l
i
i
i
Enzim
1%
…………….
27
g
g
g
g
://di
://di
://di
://di
p
p
p
p
t
t
t
t
t
t
t
t
h
h
h ujung 5’ …………………………..
h4.6
Hasil sekuensi RACE
28

gilib
i
d
/
/
:

gilib
i
d
/
/
:

gilib
i
d
/
/
:

gilib
i
d
/
/
:

.u

igilib

.u

igilib

gilib
i
d
/
/
:

/dig

:/
http

http

xii

.id/

.id/

.id/

ac
nej.

ac
nej.

.u

.u

http

.id/

ac
nej.

.id/

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

http

/dig

:/
http

.id/

ac
nej.

.u

.u

gilib
i
d
/
/
:

.u

http

.id/

.id/

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

http
ac
nej.

.id/

ac
nej.

.u

.u

/dig

:/
http

.id/

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

gilib
i
d
/
/
:

http

.id/

.u

ac
nej.

.u

.u

http

.id/

ac
nej.

.id/

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

/dig

:/
http

.id/

ac
nej.

.u

.u

.u

http

.id/

.id/

ac
nej.

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

http

gilib
i
d
/
/
:

ac
nej.

.u

.u

gilib
i
d
/
/
:

.id/

.id/

ac
nej.

/dig

:/
http

http

.id/

.u

gilib
i
d
/
/
:

http

.id/

ac
nej.

ac
nej.

.u

.u

http

http

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

ac
nej.

.u

igilib

/dig

:/
http

.id/

.id/

.id/

ac
nej.

.u

http

/

d
ac.i
ac
ac
.
.
.
j
j
j
e
e
e
n
n homologi cDNA ujung 5’b.…………………………
4.8
Hasil
29 n
lib.u
li u
lib.u
i
i
i
g
g
g
i
i
i
//d 3’ …………………………
://d 29
:ujung
4.9 ://d
Hasil homologi cDNA
http
http
http
gilib
i
d
/
/
:

http

/dig

:/
http

22
/
c.id
c.
c.
a
a
a
.
.
.
j
j
j
ne…………………….. 24b.une
4.2
Hasil
.u3’
.uneelektroforesis cDNA ujung
b
b
i
i
li
l
l
i
i
g
ig
digi 25
dpGEM-T
dig Peta Lingkaran Plasmid
/
/
/
/
/
/
://di
:
:
:
4.3
Easy
...…………….....
p
p
p
p
t
t
t
t
t
t
t
t
h
h
h
h

.u

gilib
i
d
/
/
:

.id/

ac
nej.

Halaman

Hasil elektroforesis
cDNA ujung 5’ ……………………..
id/
id/

.id/

gilib
i
d
/
/
:

/dig

:/
http

http

4.1

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

.u

b.u
b.u
l8ib.u
liProcdure
liOverview
i
i
i
of
the
RLM-RACE
………………....
g
g
g
i
i
i
/d
://d
p://d
ttp:/
http
htt5’
h2.2
Posisi primer untuk
dan 3’ RACE ……………………
9

ac
nej.

n
lib.u
i
g
i
d

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

ac
nej.

ac
nej.

2.1

http

gilib
i
d
/
/
:

.id/

.id/

.id/

.id/ Gambar

ac
nej.

/dig

:/
http

.id/

ac
nej.

lib.u
i
g
i
://dGAMBAR
DAFTAR
http

.u

.u

gilib
i
d
/
/
:

.u

http

.id/

ac
nej.

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

.id/

http

gilib
i
d
/
/
:

http

http

ac
nej.

.u

.u

.u

gilib
i
d
/
/
:

.id/

.id/

.id/

.id/

ac
nej.

igilib

.u

ac
nej.

ig

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

gilib
i
d
/
/
:

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

http

.u

gilib
i
d
/
/
:

1.

http

gilib
i
d
/
/
:

gilib
i
d
/
/
:

gilib
i
d
/
/
:

gilib
i
d
/
/
:

gilib
i
d
/
/
:

gilib
i
d
/
/
:

gilib
i
d
/
/
:

gilib
i
d
/
/
:

.u

igilib

.u

igilib

gilib
i
d
/
/
:

/dig

:/
http

http

xiii

.id/

.id/

.id/

ac
nej.

ac
nej.

.u

.u

http

.id/

ac
nej.

.id/

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

http

/dig

:/
http

.id/

ac
nej.

.u

.u

gilib
i
d
/
/
:

.u

http

.id/

.id/

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

http
ac
nej.

.id/

ac
nej.

.u

.u

/dig

:/
http

.id/

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

gilib
i
d
/
/
:

http

.id/

.u

gilib
i
d
/
/
:

ac
nej.

.u

.u

http

.id/

ac
nej.

.id/

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

http

/dig

:/
http

.id/

ac
nej.

.u

.u

gilib
i
d
/
/
:

.u

http

.id/

.id/

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

http
ac
nej.

.id/

ac
nej.

.u

.u

/dig

:/
http

.id/

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

gilib
i
d
/
/
:

http

.id/

.u

gilib
i
d
/
/
:

ac
nej.

.u

.u

http

.id/

ac
nej.

.id/

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

http

/dig

:/
http

.id/

ac
nej.

.u

.u

gilib
i
d
/
/
:

.u

http

.id/

.id/

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

http
ac
nej.

.id/

ac
nej.

.u

.u

/dig

:/
http

.id/

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

gilib
i
d
/
/
:

http

.id/

.u

gilib
i
d
/
/
:

ac
nej.

.u

.u

http

.id/

ac
nej.

.id/

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

http

/dig

:/
http

.id/

ac
nej.

.u

.u

gilib
i
d
/
/
:

.u

http

.id/

.id/

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

http
ac
nej.

.id/

ac
nej.

.u

.u

gilib
i
d
/
/
:

:/
http

.id/

.id/

.u

/dig

/

:/
http

:/
http

ac
nej.

.id/

ac
nej.

Halaman

.u

/

/

:/
http

/dig

:/
http

http

lib
lib
ilib
Foto
……………………………………….................
digi34
digi
digPenelitian

.id/

http

.u

.u

.u

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

ac
nej.

ac
nej.

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

.id/

.id/

.id/

.id/

ac
nej.

/dig

:/
http

.id/

ac
nej.

lib.u
i
g
i
d
://LAMPIRAN
DAFTAR
http

.u

.u

gilib
i
d
/
/
:

.u

http

.id/

.id/

ac
nej.

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

http

http

ac
nej.

.u

.u

.u

gilib
i
d
/
/
:

.id/

.id/

.id/

.id/

ac
nej.

igilib

.u

ac
nej.

igilib

.u

ac
nej.

ig

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

gilib
i
d
/
/
:

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

http

.id/

ac
nej.

.u

gilib
i
d
/
/
:

/dig

:/
http

http

/
/
/
c.id
c.id= Amphisilin Resistancej.ac.id
a
a
.
.
j
j
.une
.une Phosphatase
.une
b
b
b
i
i
i
l
l
l
i
i
i
CIP
=
Calf
Intestine
alkaline
g
g
g
g
://di
://di
://di
://di
p
p
p
p
t
t
t
t
t
t
t
t
h
h
h
h
Gg-AOP
= Gnetum
gnemon Antioxidant Protein

.id/ AmpR

ac
nej.

.u

gilib
i
d
/
/
:

/dig

:/
http

.id/

ac
nej.

lib.u
i
g
i
://d
SINGKATAN
http

.u

.u

gilib
i
d
/
/
:

.u

http

.id/

.id/

ac
nej.

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

http

http

ac
nej.

.u

.u

.u

gilib
i
d
/
/
:

.id/

.id/

.id/

.id/

ac
nej.

http

=
/
/
/ Ethylenediaminetetraacetic.idacid
c.id
c
c.id
a
a
a
.
.
.
j
j
j
EtBr
= Ethidium Bromide
.une
.une
.une
b
b
b
i
i
i
l
l
l
i
i
i
g
g
g
ig
LB ttp://d
= Luria
Bertani
://di
://di
://di
p
p
p
t
t
t
t
t
t
h
h
h
h

.id/ EDTA

ac
nej.

.u

gilib
i
d
/
/
:

http

TAP

= Tobacco Acid Pyrophosphatase

d/
ac.i TE

nej.

.u

gilib
i
d
/
/
:

nej.

.u

gilib
i
d
/
/
:

gilib
i
d
/
/
:

gilib
i
d
/
/
:

gilib
i
d
/
/
:

gilib
i
d
/
/
:

gilib
i
d
/
/
:

gilib
i
d
/
/
:

.u

igilib

.u

igilib

gilib
i
d
/
/
:

/dig

:/
http

http

xiv

.id/

.id/

.id/

ac
nej.

ac
nej.

.u

.u

http

.id/

ac
nej.

.id/

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

http

/dig

:/
http

.id/

ac
nej.

.u

.u

gilib
i
d
/
/
:

.u

http

.id/

.id/

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

http
ac
nej.

.id/

ac
nej.

.u

.u

/dig

:/
http

.id/

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

gilib
i
d
/
/
:

http

.id/

.u

gilib
i
d
/
/
:

ac
nej.

.u

.u

http

.id/

ac
nej.

.id/

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

http

/dig

:/
http

.id/

ac
nej.

.u

.u

gilib
i
d
/
/
:

.u

http

.id/

.id/

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

http
ac
nej.

.id/

ac
nej.

.u

.u

/dig

:/
http

.id/

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

gilib
i
d
/
/
:

http

.id/

.u

gilib
i
d
/
/
:

ac
nej.

.u

.u

http

.id/

ac
nej.

.id/

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

http

/dig

:/
http

.id/

ac
nej.

.u

.u

gilib
i
d
/
/
:

.u

http

.id/

.id/

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

http
ac
nej.

.id/

ac
nej.

.u

.u

/dig

:/
http

.id/

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

gilib
i
d
/
/
:

http

.id/

.u

ac
nej.

.u

.u

http

.id/

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

ac
nej.

gilib
i
d
/
/
:

http

http

.id/

.id/

d/
ac.i = Tris EDTA

igilib

.u

ac
nej.

igilib

.u

ac
nej.

ig