UJI FITOKIMIA, TOKSISITAS SERTA ANTIOKSIDAN EKSTRAK PROPOLIS PEMBUNGKUS MADU LEBAH Trigona Incisa DENGAN METODE 2,2-diphenyl-1- picrylhidrazyl (DPPH) THE PHYTOVHEMICAL TEST, BRINE SHRIMP LETHALITY TEST, AND ACTIVITY

  Abdul Rohim Analisa Kandungan

  

UJI FITOKIMIA, TOKSISITAS SERTA ANTIOKSIDAN EKSTRAK PROPOLIS

PEMBUNGKUS MADU LEBAH Trigona Incisa DENGAN METODE 2,2-diphenyl-1-

picrylhidrazyl (DPPH)

THE PHYTOVHEMICAL TEST, BRINE SHRIMP LETHALITY TEST, AND ACTIVITY

  

ANTIOXIDANT FROM EXTRACTS OF PROPOLIS Trigona Incisa WITH 2,2-Diphenyl-1-

Picrylhidrazyl (DPPH) METHOD

  Aswin Thamrin ¹ , Erwin ^1* , Syafrizal ² ₁ Jurusan Kimia, FMIPA, Universitas Mulawarman Samarinda ₂ Jurusan Biologi, FMIPA, Universitas Mulawarman Samarinda

• *Corresponding Author :

  

ABSTRACT

Phytochemical test, test the mortality of larvae shrimp (Brine Shrimp Lethality Test) and test the antioxidant

activity of secondary metabolites extract of propolis Trigona Incisa been done. Based on the test results of

phytochemical screening of secondary metabolites contained in propolis extracts showed that the crude extract contains

phenolic compounds and alkaloids. Ethanol fraction containing alkaloids and phenolic compounds. Ethyl acetate

fraction containing alkaloid compounds. Mortality of shrimp larvae test performed to determine the toxicity values

propolis extract obtained values of 50% Lethal Concentration (LC50) at 249.6079 ppm for ethanol fraction as the most

active fraction. Based on the test of antioxidant activity with DPPH values obtained Inhibition Concentration 50%

(IC50) in the crude extract of 139.47 ppm ethanol, ethanol fraction at 109.44 ppm, 91.42 ppm ethyl acetate fraction and

vitamin C amounted to 59.44 ppm , It can be stated that the most active fraction is the fraction of ethyl acetate with

IC50 value of 91.42 ppm. .

  Keywords : Propolis, Trigona Incisa, Antioxidant Activity.

  PENDAHULUAN

  Antioksidan merupakan substansi nutrisi maupun non-nutrisi yang terkandung dalam bahan pangan, yang mampu mencegah atau memperlambat terjadinya reaksi oksidasi dalam tubuh. Antioksidan sangat bermanfaat bagi kesehatan dan kosmetik serta berperan penting dalam mempertahankan mutu produk pangan. (Heo dkk., 2005 dan Tamat dkk., 2007). Propolis merupakan salah satu bahan yang mengandung antioksidan alami dari senyawa metabolit sekunder berupa fenol dan flavonoid. Menurut Robinson (1995) dikutip Jaya et al., (2006) menjelaskan bahwa kemampuan propolis sebagai antioksidan dapat menangkap radikal hidroksi dan superoksida kemudian menetralkan radikal bebas, sehingga melindungi sel dan mempertahankan keutuhan struktur sel dan jaringan serta dapat melindungi membran lipid terhadap reaksi yang merusak.

  Menurut Krell (1996) dikutip Lasmayanty (2007), lebah Trigona Incisa tidak populer karena produktivitas madunya sangat rendah, namun propolis yang dihasilkannya lebih banyak dibandingkan dengan lebah jenis lainnya.

  Propolis mentah dapat dikonsumsi secara langsung, namun karena sifatnya yang lengket pada suhu ruang menyebabkan kesulitan dalam mengkonsumsinya. Propolis mentah dapat diproses menjadi bubuk propolis atau dengan mengekstrak propolis cair sebelum dikonsumsi.

  Eksraksi propolis dilakukan dengan metode ekstraksi kimia (Winarno, 1981).

  Menurut Sarwono (2001), propolis banyak mengandung senyawa organik, diantaranya yaitu damar malam, minyak yang mudah menguap dan mineral. Berdasarkan penelitian sebelumnya hasil analisis fitokimia pada ekstrak etanol propolis positif mengandung senyawa flavonoid dan fenolik (Sholikhah, 2012). Dalam dunia pengobatan, propolis juga dapat digunakan untuk mengobati saluran pernapasan karena mempunyai sifat antibakteri.

  Berdasarkan uraian di atas, perlu dilakukan penelitian untuk mengetahui jenis senyawa metabolit sekunder yang terkandung di dalam propolis, fraksi apa yang paling aktif terhadap larva udang (Artemia salina L.) melalui uji BSLT (Brine Shrimp Lethality Test), dimana akan ditentukan efektivitas daya racun dari setiap fraksi (Meyer dkk., 1982) serta untuk mengetahui besarnya aktivitas antioksidan dengan metode

  

Jurnal Kimia Mulawarman Volume 14 Nomor 1 November 2016 P-ISSN 1693-5616

Kimia FMIPA Unmul

E-ISSN 2476-9258

METODOLOGI PENELITIAN

  Alat

  Selanjutnya ekstrak kasar etanol tersebut difraksinasi. Caranya adalah sebagai berikut: ekstrak kasar etanol yang telah bebas etanol ditambahkan campuran etanol dan etil asetat dengan perbandingan ( ^v / v ). Fraksinasi dilakukan dengan corong pisah, sehingga diperoleh 2 fraksi, yaitu fraksi etanol dan faksi etil asetat. Fraksi etil asetat dipekatkan dengan rotari evaporator dan disebut sebagai ekstrak fraksi etil asetat, dilakukan berulang sebanyak 3 kali fraksinasi sehingga di dapatkan 3 hasil ekstrak fraksi etil asetat. Selanjutnya fraksi etanol yang tersisa kemudian dipekatkan dengan rotari evaporator dan hasilnya disebut sebagai ekstrak fraksi etanol.

  Pengambilan sampel propolis dilakukan secara manual. Tahap selanjutnya adalah sampel kemudian dimaserasi dengan pelarut etanol 70 % dan dipekatkan dengan menggunakan rotari evaporator dan di diamkan di dalam desikator selanjutnya dirotari evaporator kembali untuk mandapatkan ekstrak kasar/total. Kemudian ekstrak kasar/total difraksinasi menjadi fraksi etanol dan fraksi etil asetat. Setelah didapatkan ekstrak kasar dan kedua fraksi, kemudian akan dilakukan analisis fitokimia dan uji mortalitas larva udang (brine shrimp lethality test) serta akan dilakukan uji aktivitas antioksidan dengan menggunakan metode peredaman radikal bebas 2,2-diphenyl-1-picrylhidrazyl (DPPH) dengan menggunakan alat spektrofotometer.

  Ekstrak kasar etanol propolis dan fraksi- fraksinya diekstraksi dengan dietil eter sebanyak tiga kali, dari fraksi ekstrak tersebut dihasilkan fraksi yang larut dalam dietil eter dan yang tidak larut dalam dietil eter. Fraksi yang tidak larut dalam dietil eter kemudian ditambahkan air

  2. Uji Saponin/Uji Forth

  Ekstrak kasar etanol propolis dan fraksi- fraksinya ditambahkan 10 mL kloroform- amoniak, lalu disaring kedalam tabung reaksi. Filtrat ditambah dengan beberapa tetes asam sulfat 2 M dan dikocok sehingga terbentuk dua lapisan. Lapisan asam (terdapat pada bagian atas) dipipet ke dalam tabung reaksi lain, lalu ditambah pereaksi Meyer’s (5 gram KI dilarutkan dalam 90 mL air dan ditambahkan perlahan-lahan HgCl ^{2 sambil diaduk dan diencerkan sampai} volume 100 mL) dan pereaksi Dragendroff (campuran Bi(NO ^{3 ) 3 .5H 2 O dalam asam nitrat dan} larutan KI). Adanya alkaloid ditunjukkan dengan terbentuknya endapan putih dengan pereaksi Meyer’s dan endapan jingga sampai merah coklat dengan pereaksi Dragendroff (Darwis, 2000).

  Analisis Fitokimia 1. Uji Alkaloid (Uji Meyer’s dan Dragendroff)

  Pada ekstrak kasar dan kedua fraksi (fraksi etil asetat dan fraksi etanol) kemudian akan dilakukan analisis fitokimia dan uji mortalitas larva udang (brine shrimp lethality test). Selanjutnya ekstrak kasar dan kedua fraksi dilakukan uji aktivitas antioksidan dengan menggunakan metode peredaman radikal bebas 2,2-diphenyl-1-picrylhidrazyl (DPPH) dengan menggunakan spektrofotometer.

  Sampel propolis yang telah dihaluskan ditimbang sebanyak 100 gr kemudian dimaserasi dengan etanol 70 % sebanyak 250 mL dengan kurun waktu selama 3-7 hari (Ditjen POM, 1986). Terlebih dahulu dilakukan pengenceran etanol 96 % menjadi 70 % dengan menggunakan labu takar. Kemudian disaring dan pelarut diuapkan dengan rotari evaporator. Selanjutnya menguapkan pelarut aquadest yang ada dalam ekstrak dengan menggunakan desikator selama 7 hari. Kemudian diambil 100 ml dan diuapkan kembali dengan rotari evaporator hingga kental sehingga diperoleh ekstrak kasar etanol.

  Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah rotari evaporator, beaker gelas, erlenmeyer, gelas ukur, corong, corong pisah, neraca analitik, tabung reaksi, pipet volume, saringan, panci, gelas, pipet tetes, mikropipet ukuran 100-1000 µL, labu ukur, batang pengaduk, kertas saring Whatman no.1, aluminium foil, lampu TL, hot plate, freezer dan spektrofotometer UV-Vis.

  55 peredaman radikal 2,2-diphenyl-1-picrylhidrazyl (DPPH) dari ekstrak propolis

  Propolis Trigona Incisa yang diambil dari Kebun Raya Samarinda didiamkan selama semalam. Setelah didiamkan akan mengeras atau memadat dan setelah memadat dihaluskan.

  Prosedur Penelitian Persiapan Sampel

  Bi(NO ^{3 ) 3 .5H 2 O, HgCl 2 , HNO 3 pekat, KI, FeCl 3 ,} HCl, serbuk Mg, aquades, air laut, DMSO, DPPH (2,2-diphenyl-1-picrylhidrazyl) dan Vitamin C .

  Bahan-bahan yang digunakan adalah propolis, etanol, etil asetat, kloroform, heksana, dietil eter, H ^{2 SO 4 , asam asetat glasial,}

  Bahan

  Ekstraksi Senyawa Metabolit Sekunder

  Abdul Rohim Analisa Kandungan

  seperti pada ekstrak kasar (Wijaya, 2006). Data yang diperoleh dimasukkan ke dalam lembar pengamatan.

  3 pengulangan.

  Ekstrak ditimbang 20 mg, kemudian dilarutkan dengan etanol sampai volumenya 40 mL. Dengan demikian diperoleh konsentrasi larutan ekstrak sampel (ekstrak kasar etanol dan masing-masing fraksi) yaitu 500 ppm. Kemudian ekstrak kasar dan masing-masing fraksi dengan konsentrasi 500 ppm diencerkan untuk mendapatkan konsentrasi 10, 25, 50, 75 dan 100 ppm dengan menggunakan mikro pipet dan masing-masing konsentrasi dibuat

  3. Pembuatan Konsentrasi Ekstrak Sampel

  Pipet sebanyak 1 mL larutan DPPH 0,08 mg/mL dan ditambahkan dengan 1 mL etanol. Setelah dibiarkan selama 30 menit ditempat gelap serapan larutan diukur dengan spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang 516 nm untuk mendapatkan panjang gelombang maksimum.

  2. Penentuan Panjang Gelombang Serapan Maksimum DPPH

  Kristal DPPH ditimbang sebanyak 8 mg dan dilarutkan dengan 100 mL etanol di dalam labu ukur gelap sehingga didapatkan larutan DPPH dengan konsentrasi 0,08 mg/mL yang digunakan pada pengujian. Larutan disimpan pada tempat tertutup rapat dan terlindung dari cahaya.

  1. Penyiapan Larutan DPPH

  picrylhidrazyl ) digunakan sebagai radikal bebas serta vitamin C sebagai pembanding.

  C) pada panjang gelombang 516 nm dan larutan DPPH (2,2-diphenyl-1-

  Uji peredaman pereaksi DPPH dilakukan dengan mengacu pada metode (Bouftira, 2007) menggunakan spektrofotometer UV-Vis pada suhu kamar (25 ^o

  Uji Aktivitas Antioksidan

  Lethality Test ) dengan prosedur yang sama

  56 kurang lebih 5 mL dalam tabung reaksi kemudian dikocok. Ekstrak positif mengandung saponin jika timbul busa dengan ketinggian 1-3 cm yang bertahan selama 15 menit (Kadarisman, 2000).

  Ditimbang ekstrak kasar sebanyak 0,2 gr dan dilarutkan dengan air laut hingga volumenya mencapai 100 mL dalam labu ukur, untuk membuat konsentrasi sampel 2000 ppm. Sampel dengan konsentrasi 1000 ppm; 500 ppm; 250 ppm; 125 ppm; 62,5 ppm; 31,2 ppm; 15,6 ppm dan 7,8 ppm dibuat dari pengenceran sampel dari konsentrasi 2000 ppm. Masing-masing sampel kemudian dipipet sebanyak 2500 µL dan dimasukkan kedalam tabung reaksi, kemudian ditambah 2500 µL air laut yang berisi 10 larva udang pada setiap sampel sehingga volume sampel menjadi setengahnya (1000 ppm; 500 ppm; 250 ppm; 125 ppm; 62,5 ppm; 31,2 ppm; 15,6 ppm dan 7,8 ppm). Jumlah larva udang yang mati dihitung setelah 24 jam dan dianalisa untuk menentukan nilai Lethality Consentration LC ₅₀ . Kontrol dikerjakan sama dengan perlakuan sampel, tetapi tanpa penambahan ekstrak kasar. Ekstrak sampel yang sukar larut dapat ditambahkan DMSO 1 % satu sampai tiga tetes (Kadarisman, 2000). Setiap sampel dilakukan uji mortalitas sebanyak tiga kali (triplo). Ekstrak fraksi etil asetat dan fraksi etanol juga dilakukan uji mortalitas larva udang (Brine Shrimp

  telah disaring. Selanjutnya diberi pencahayaan lampu TL agar menetas sempurna. Setelah 48 jam telur udang menetas dan siap untuk di uji cobakan (Kadarisman, 2000).

  salina L.) ditambahkan 100 mL air laut yang

  Sebanyak 10 mg telur udang (Artemia

  Uji Mortalitas Larva Udang (Brine Shrimp Lethality Test)

  Ekstrak kasar etanol propolis dan fraksi- fraksinya ditambahkan beberapa tetes FeCl ^{3 1 %} dalam air atau etanol. Ekstrak positif mengandung fenolik apabila menghasilkan warna hijau, merah, ungu, biru atau hitam pekat (Kadarisman, 2000).

  5. Uji Fenol

  Ekstrak kasar etanol propolis dan fraksi- fraksinya ditambah dengan 100 mL air panas, dididihkan selama 5 menit, kemudian disaring. Filtrat sebanyak 5 mL ditambah sedikit serbuk Mg dan 1 mL HCl pekat, kemudian dikocok kuat-kuat. Uji positif ditunjukkan oleh terbentuknya warna merah, kuning, atau jingga (Chozin, 1996).

  4. Uji Flavonoid

  Ekstrak kasar etanol propolis dan fraksi- fraksinya yang larut dalam dietil eter dari uji saponin dipisahkan, lalu dtambah dengan CH ₃ COOH glasial dan H ₂ SO ₄ pekat. Larutan dikocok perlahan dan dibiarkan selama beberapa menit. Steroid memberikan warna biru atau hijau, sedangkan triterpenoid memberikan warna merah atau ungu ( Kadarisman, 2000).

  3. Uji Steroid dan Triterpenoid/ Uji Lieberman-Burchard

  4. Pembuatan Konsentrasi Vitamin C (Pembanding)

  HASIL DAN PEMBAHASAN Uji Fitokimia

  = Absorbansi control negatif (berisi 1 ml metanol + 1 ml DPPH) (Karamac dkk., 2002).

  

Jurnal Kimia Mulawarman Volume 14 Nomor 1 November 2016 P-ISSN 1693-5616

Kimia FMIPA Unmul

E-ISSN 2476-9258

  Penentuan Persen Peredaman 1. Sampel propolis

  Masing-masing konsentrasi ekstrak (10, 25, 50, 75 dan 100 ppm) dipipet sebanyak 1 mL dan dimasukan ke dalam tabung reaksi.

  Kemudian ditambahkan 1 mL larutan DPPH 0,024 mg/mL, dihomogenkan dan diinkubasi selama 30 menit ditempat gelap. Selanjutnya diukur absorbansinya dengan spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang maksimum.

  Triterpenoid

  Saponin

  Flavonoid

  Uji Fitokimia Jenis Ekstraksi Ekstrak Kasar Fraksi Etanol Fraksi Etil Asetat Alkaloid + + + Fenolik + +

  Tabel 1. Hasil Uji Fitokimia dari Ekstrak Kasar dan Kedua Fraksi Propolis

  Berdasarkan uji skrining fitokimia ekstrak kasar, fraksi etanol dan fraksi etil asetat dari propolis yang diperoleh adalah sebagai berikut:

• - Steroid - - -
• - - -
• - - -
• - - -

2. Vitamin C (Pembanding)

  = Absorbansi sampel (berisi 1 ml ekstrak dalam metanol + 1 ml DPPH) A _KN

  4.2. Pada ekstrak kasar diketahui positif mengandung alkaloid, fenolik, dan saponin. Pada fraksi etanol diketahui positif mengandung alkaloid dan fenolik, sedangkan pada fraksi etil asetat diketahui hanya positif mengandung alkaloid saja.

  57 Vitamin C baku ditimbang sebanyak 10 mg dan dilarutkan dengan etanol sampai volumenya 10 mL menggunakan labu ukur, sehingga didapat larutan induk vitamin C dengan konsentrasi 1000 ppm, kemudian diambil 1 mL larutan induk vitamin C dan dilarutkan dengan etanol sampai volumenya 10 mL menggunakan labu ukur coklat, sehingga didapat konsentrasi vitamin C 100 ppm. Setelah itu, dari konsentrasi vitamin C 100 ppm dibuat seri konsentrasi larutan vitamin C dengan konsentrasi berturut- turut 5, 10, 15, 20 dan 25 ppm dengan menggunakan mikro pipet dan masing-masing konsentrasi dibuat 3 pengulangan.

  Fraksi etil asetat 276,35 Menurut Mc Laughlin (1998) dalam pengamatan potensi bioaktivitas ini dilakukan berdasarkan nilai Lethal Concentration 50 % (LC ₅₀ ) yaitu suatu nilai yang menunjukkan

  Ekstrak kasar 355,46 Fraksi etanol 249,60

  Jenis Ekstrak Nilai LC ^{50 (ppm)}

  Tabel 2. Hasil Uji Mortalitas Larva Udang (BSLT) dari Ekstrak Kasar dan Kedua Fraksi

  Berdasarkan uji mortalitas larva udang (BSLT) ekstrak kasar, fraksi etanol dan fraksi etil asetat dari propolis yang diperoleh adalah sebagai berikut:

  Uji Mortalitas Larva Udang (BSLT)

  Berdasarkan hasil dari uji fitokimia pada ekstrak kasar etanol, fraksi etanol dan fraksi etil asetat propolis Trigona Incisa, dapat diketahui jenis metabolit sekundernya sesuai dengan tabel

  = Absorbansi blanko (berisi 1 ml ekstrak dalam metanol + 1 ml metanol) A _B

  Masing-masing konsentrasi vitamin C (konsentrasi 1, 1,5, 2, 2,5, 3 ppm) dipipet sebanyak 1 mL dan dimasukan ke dalam tabung reaksi. Kemudian ditambahkan 1 mL larutan DPPH 0,024 mg/mL, dihomogenkan dan diinkubasi selama 30 menit ditempat gelap.

  Selanjutnya diukur absorbansinya dengan spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang maksimum.

  Analisis Data

  Nilai dengan kematian 50% dalam 1 hari (LC ₅₀ dalam unit waktu) ditentukan dengan menggunakan Analisis Probit SAS. Efektivitas dari fraksi-fraksi terhadap larva (Artemia salina L.) dinyatakan dalam LC ₅₀ (ppm) 24 jam setelah perlakuan.

  Presentase aktivitas antioksidan dari ekstrak dalam menangkap atau meredam radikal bebas DPPH yang dinyatakan dalam % inhibisi, yang diperoleh dengan menggunakan rumus :

  %AA = 100

• – {[(A
^B – A ^{A )] x 100 / A KN }}

  Keterangan : %AA = Persentase aktivitas antioksidan A _A

  Abdul Rohim Analisa Kandungan

  Ekstrak kasar 139,47 Fraksi etanol 109,44

  91.42

  139.47 109.44

  Etil asetat Vitamin C

  Kasar Fraksi Etanol Fraksi

  50 100 150 Ekstrak

  Gambar 1. Grafik nilai IC ₅₀ pada ekstrak kasar, fraksi etanol, fraksi etil asetat dan vitamin C

  Nilai IC ₅₀ yang semakin kecil menunjukkan aktivitas antioksidan pada bahan yang diuji semakin besar. Untuk melihat besarnya nilai IC ₅₀ dari masing-masing ekstrak serta vitamin C, dapat dilihat pada grafik berikut ini:

  IC ⁵⁰ didefinisikan sebagai besarnya konsentrasi ekstrak yang dapat menghambat aktivitas radikal bebas DPPH sebesar 50 %. Dimana nilai IC ⁵⁰ diperoleh dari suatu persamaan regresi linear yang menyatakan hubungan antara konsentrasi ekstrak uji dengan persen penangkapan radikal.

  Parameter yang digunakan untuk uji penangkapan radikal DPPH adalah nilai IC ⁵⁰ (Inhibition Concentration 50). Nilai

  Fraksi etil asetat 91,42 Berdasarkan hasil analisa data dengan menggunakan regresi linear sederhana sehingga diperoleh grafik linear dan persamaan regresi linear antara konsentrasi ekstrak kasar etanol, fraksi etanol dan fraksi etil asetat dari sampel propolis dengan persen peredaman radikal DPPH (%AA) dapat dilihat pada lampiran 15,16,17 dan vitamin C sebagai pembanding pada lampiran 18.

  Jenis Ekstrak Nilai IC ^{50 (ppm)}

  58 konsentrasi zat toksik yang dapat mengakibatkan kematian organisme sampai 50 %. Apabila LC ⁵⁰

  Tabel 3. Hasil Uji Aktivitas Antioksidan dari Ekstrak Kasar dan Kedua Fraksi Propolis

  Berdasarkan uji aktivitas antioksidan ekstrak kasar, fraksi etanol dan fraksi etil asetat dari propolis yang diperoleh adalah sebagai berikut:

  Uji Aktivitas Antioksidan

  Walaupun tingkat toksisitas dari ekstrak kasar dan fraksi etil asetat lebih kecil dari toksisitas fraksi etanol, namun semua ekstrak ini tetap dikatakan toksik karena berdasarkan studi yang dilakukan Meyer (1982), senyawa kimia dikatakan berpotensi aktif bila mempunyai nilai LC ^{50 kurang dari 1.000 ppm. Dengan demikian} dapat dikatakan bahwa ekstrak kasar etanol, fraksi etanol dan fraksi etil asetat berpotensi aktif karena nilai LC ₅₀ yang dihasilkan kurang dari 1.000 ppm.

  Pada ekstrak kasar nilai LC ₅₀ diperoleh sebesar 355,4602 ppm yang berarti bioaktivitas pada ekstrak kasar lebih rendah dibandingkan dengan fraksi etanol dan fraksi etil asetat. Hal ini dimungkinkan karena rendahnya konsentrasi pelarut yang terkandung didalam ekstrak kasar tersebut.

  Tingginya toksisitas dari fraksi etanol terhadap larva udang jika dibandingkan dengan ekstrak kasar dan fraksi etil asetat diperkirakan karena konsentrasi kandungan senyawa alkaloid yang cukup tinggi, hal tersebut dikarenakan pada fraksi etanol senyawa alkaloid lebih aktif dalam fase yang polar.

  Berdasarkan data tersebut menunjukkan bahwa fraksi etanol memiliki bioaktivitas paling tinggi terhadap larva udang yang ditunjukkan dengan nilai LC ^{50 paling kecil yaitu 249,6079} ppm. Nilai ini menunjukkan bahwa pada konsentrasi 249,6079 ppm fraksi etanol mampu membunuh larva udang sampai 50 % populasi. Semakin kecil nilai LC ^{50 (Lethal Concentration} 50 %) dari suatu sampel maka semakin tinggi toksisitasnya.

  276,3536 ppm. Nilai ini menunjukkan bahwa pada konsentrasi tersebut, ekstrak sampel mampu membunuh larva udang sampai 50 % populasi. Nilai LC ^{50 dari uji mortalitas larva udang} diperoleh dengan menggunakan Analisis Probit SAS.

  Berdasarkan hasil uji mortalitas larva udang dari ekstrak kasar etanol diperoleh nilai LC ^{50 355,4602 ppm; pada ekstrak fraksi etanol} diperoleh nilai LC ^{50 249,6079 ppm dan pada} ekstrak fraksi etil asetat diperoleh nilai LC ₅₀

  = Toksik LC ₅₀ > 1.000 ppm = Tidak toksik

  < 30 ppm maka ekstrak sangat toksik dan berpotensi mengandung senyawa bioaktif antikanker. Meyer (1982) menyebutkan tingkat toksisitas suatu ekstrak : LC _{50 ≤ 30 ppm} = Sangat toksik 31 ppm ≤ LC ⁵⁰ ≤ 1.000 ppm

  59.44 Nilai IC ₅₀

  

Jurnal Kimia Mulawarman Volume 14 Nomor 1 November 2016 P-ISSN 1693-5616

Kimia FMIPA Unmul

E-ISSN 2476-9258

  59 Pada gambar 1, dapat dilihat bahwa nilai

  IC ₅₀ dari ekstrak kasar dan kedua fraksi yaitu fraksi etanol dan fraksi etil asetat semuanya lebih besar dari vitamin C yang digunakan sebagai pembanding, hal ini dikarenakan ekstrak propolis bukan merupakan senyawa murni tetapi masih mengandung senyawa-senyawa lain yang kemungkinan tidak memiliki daya aktivitas antioksidan. Semakin kecil nilai IC ^{50 berarti} semakin tinggi aktivitas antioksidan. Secara spesifik, suatu senyawa dikatakan sebagai antioksidan sangat kuat apabila nilai IC ⁵⁰

  ≤ 50 ppm, kuat apabila nilai IC ₅₀ antara 50-100 ppm, sedang apabila nilai IC ^{50 antara 101-150 ppm dan} lemah apabila nilai IC ^{50 lebih dari 151 ppm.} Berdasarkan klasifikasi di atas, dapat disimpulkan bahwa pada ekstrak kasar dan fraksi etanol memiliki potensi antioksidan yang dikategorikan sedang dikarenakan nilai IC ₅₀ untuk ekstrak kasar yaitu sebesar 139,47 ppm dan untuk fraksi etanol nilai IC ^{50 yaitu sebesar 109,44} ppm, sedangkan untuk fraksi etil asetat dikategorikan sebagai antioksidan kuat dikarenakan memiliki nilai IC ^{50 sebesar 91,42} ppm.

  Berdasarkan penjelasan diatas, dapat dikatakan bahwa fraksi etil asetat memiliki aktivitas antioksidan paling kuat jika dibandingkan dengan ekstrak kasar dan fraksi etanol. Hal ini dikarenakan pada fraksi etil asetat kemungkinan terdapat kandungan senyawa aktif yang berbeda dengan ekstrak lainnya dan jumlah yang berbeda pula (Yulianti, 2013). Dimana dalam penelitian ini untuk fraksi etil asetat, senyawa metabolit sekundernya yaitu alkaloid diduga terkonsentrasi, sehingga daya aktivitas antioksidannya paling kuat. Untuk fraksi etanol memiliki aktivitas antioksidan yang hampir mendekati fraksi etil asetat, yaitu memiliki daya antioksidan sedang. Fraksi etanol mengandung senyawa metabolit sekunder alkaloid dan fenolik, dimana kekuatan antioksidan pada fraksi etanol ini dikategorikan sedang. Hal ini kemungkinan terjadi dikarenakan adanya senyawa alkaloid dan fenolik yang belum terkonsentrasi. Sedangkan untuk ekstrak kasar etanol yang juga mengandung senyawa alkaloid dan fenolik memiliki tingkat aktivitas antioksidan yang sama dengan fraksi etanol yaitu dikategorikan sedang. Hal ini dimungkinkan terjadi karena adanya aktivitas antioksidan yang tidak sinergis terhadap fraksi etanol yang dimana senyawa metabolit sekundernya masih bercampur baik senyawa yang bersifat polar maupun non polar sehingga menyebabkan aktivitas antioksidannya menurun.

  Jika hasil uji aktivitas antioksidan dihubungkan dengan nilai LC ₅₀ yang diperoleh, dapat diketahui bahwa fraksi etil asetat memiliki aktivitas antioksidan paling kuat dengan nilai

  IC ₅₀ 91,42 ppm dan nilai LC ₅₀ yang diperoleh dari fraksi etil asetat adalah 276,3536 ppm. Dari hasil yang diperoleh menunjukkan bahwa pada konsentrasi 91,42 ppm, fraksi etil asetat mampu menangkap radikal DPPH sebesar 50%. Dalam hal ini fraksi etil asetat mempunyai aktivitas antioksidan lebih besar dibandingkan dengan fraksi etanol dan ekstrak kasar. Sedangkan nilai LC ^{50 yang diperoleh, menunjukkan bahwa pada} konsentrasi 276,3536 ppm fraksi etil asetat mampu membunuh larva udang sampai 50% populasi. Artinya dapat dikatakan bahwa fraksi etil asetat dikategorikan bersifat toksik karena nilai LC ^{50 dibawah dari 1000 ppm. Hasil analisis} untuk fraksi etanol memiliki nilai IC ^{50 sebesar}

  109,44 ppm, sehingga aktivitas antioksidan yang dimiliki pada fraksi etanol dikategorikan sedang, dikarenakan nilai IC ^{50 untuk fraksi etanol berada} pada rentang 101-150 ppm. Akan tetapi pada fraksi etanol ini masih belum baik untuk digunakan sebagai antioksidan, karena dilihat dari nilai LC ^{50 yang diperoleh adalah 249,6079} ppm. Hal ini menunjukkan bahwa fraksi etanol dikategorikan masih bersifat toksik, karena nilai LC ₅₀ masih dibawah 1000 ppm. Sedangkan pada ekstrak kasar, nilai IC ^{50 yang diperoleh adalah}

  139,47 ppm. Sehingga dapat dikatakan bahwa daya aktivitas antioksidan yang dimiliki pada ekstrak kasar dikategorikan sedang dan nilai LC ₅₀ yang diperoleh adalah sebesar 355,4602 ppm. Jadi dapat dikatakan bahwa pada ekstrak kasar juga tidak baik digunakan sebagai antioksidan karena dilihat dari nilai LC ₅₀ yang diperoleh sangat tinggi dan dan dikategorikan masih bersifat toksik.

  Salah satu senyawa yang berpotensi sebagai antioksidan adalah senyawa alkaloid, karena pada umunya alkaloid mencakup senyawa bersifat basa yang mengandung satu atau lebih atom nitrogen, biasanya dalam gabungan, sebagai bagian dari sitem siklik. Alkaloid seringkali beracun bagi manusia tetapi banyak yang mempunyai kegiatan fisiologi yang menonjol, jadi dapat digunakanakan secara luas dalam bidang pengobatan (Harborne, 1996). Sebagian alkaloid juga memiliki kemampuan sebagai antioksidan, contohnya indol alkaloid seperti strisin dan brusin bila dilihat dari

  Abdul Rohim Analisa Kandungan

  strukturnya dapat menghambat O serat kafein ₂ IC yang diperoleh adalah 139,47 ppm, untuk ₅₀ dapat bertindak sebagai perdam hidroksil radikal. fraksi etanol yang diperoleh adalah 109,44 Senyawa berbasis nitrogen dari bahan alam ppm dan fraksi etil asetat yang diperoleh berpotensi menghambat berbagai proses adalah 91,42 ppm. oksidatif. Senyawa radikal turunan dari senyawa amina memiliki tahap terminasi yang sangat DAFTAR PUSTAKA lama, dengan demikian mampu menghentikan Achmad, S. A. 1986. Kimia Organik Bahan reaksi rantai radikal secara efisien. Berikut adalah Alam . Jakarta: Karunika. prediksi mekanisme reaksi peredaman radikal Harborne, J.B. 1987. .

  Metode Fitokimia bebas oleh golongan senyawa alkaloid secara Bandung: Penerbit ITB.

  rumus umumnya. Mahani. et al. 2011. Keajaiban Propolis Trigona. _DPPH Pustaka Bunda. Jakarta.

  DPPH-H _R Sholikhah, M. 2012. Analisis Fitokimia dan Uji Daya Antimikroba Ekstrak Produk Sarang Lebah Trigona incisa Terhadap

  R N R H Streptococcus sobinus dan Candida

  R albicans. Skripsi Fakultas Matematika

  dan Ilmu Pengetahuam Alam R-RH R-R R-R :UNMUL.

  

Gambar 2. Prediksi reaksi dari peredaman radikal Suranto, A. 2007. Dahsyatnya Propolis Untuk

bebas oleh golongan senyawa alkaloid Menggempur Penyakit . PT. Agromedia secara rumus umum.

  Pustaka, Jakarta.

  Hidrokuonin Kuonin

  Gambar 3. Prediksi reaksi dari peredaman radikal bebas oleh golongan senyawa fenolik secara rumus umum.

  KESIMPULAN

  Adapun kesimpulan dari penelitian ini adalah sebagai berikut : 1. hasil dari uji fitokimia

  Berdasarkan didapatkan hasil diantaranya, pada ekstrak kasar dan fraksi etanol yaitu alkaloid dan fenolik, sedangkan pada fraksi etil asetat hanya terdapat alkaloid saja.

  2. Berdasarkan hasil uji mortalitas larva udang (BSLT) didapatkan nilai LC ^{50 untuk masing-} masing ekstrak yaitu , untuk ekstrak kasar nilai LC yang diperoleh 355,4602 ppm, ₅₀ fraksi etanol yang diperoleh 249,6079 ppm dan pada fraksi etil asetat yang diperoleh 276,3536 ppm.

  3. Berdasarkan uji aktivitas antioksidan dengan

  metode DPPH didapatkan nilai IC masing- ₅₀ masing ekstrak yaitu, untuk ekstrak kasar nilai

  60