B1J010075 11.
III. METODE PENELITIAN
A. Materi, Lokasi dan Waktu Penelitian
1. Materi
a. Bahan
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah polen bunga beberapa
anggota familia Solanaceae yaitu spesies Solanum melongena L. (ungu),
Solanum melongena L.(hijau), Solanum nigrum L. dan Solanum torvum Sw.,
Capsicum frutescens L., Capsicum annuum L., dan Physalis minima L., asam
asetat glasial, asam sulfat pekat (H2SO4), akuades, safranin 1 % dalam alkohol
70 %, glycerin jelly dan bahan-bahan untuk pembuatan preparat (Lampiran 1).
b. Alat
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah mikroskop cahaya,
sentrifugator, tabung sentrifus, object glass, cover glass, pipet tetes, waterbath,
gelas ukur, batang pengaduk, objektif mikrometer, okuler mikrometer, botol
flakon, pulpen, pensil, kertas tabel, plastik sampel, tisu, kamera digital dan
alat-alat yang digunakan untuk pembuatan preparat (Lampiran 1).
2.Lokasi dan Waktu Penelitian
Pengambilan sampel polen bunga dari beberapa anggota familia
Solanaceae dilakukan di wilayah Banyumas dan sekitarnya yaitu di daerah
Desa Melung Kecamatan Baturaden dan Karangwangkal Kecamatan
Purwokerto Utara (Lampiran 2).
Tahapan preparasi polen dan pengumpulan data polen dilakukan di
Laboratorium Struktur dan Perkembangan Tumbuhan Fakultas Biologi
Universitas Jenderal Soedirman. Penelitian dilaksanakan pada bulan April –
September 2014.
bio.unsoed.ac.id
8
B. Diagram Alir Penelitian
Survai lokasi di wilayah Banyumas dan sekitarnya yang terdapat tumbuhan dari
beberapa anggota familia Solanaceae
Pengambilan sampel secara acak (random sampling)
Preparasi polen dengan metode asetolisis, pewarnaan dengan safranin 1% dalam
alkohol 70%.
Pengumpulan Data
Pengukuran polen panjang aksis
polar (P) dan diameter
Ekuatorial (E)
Pengamatan :
- Unit Polen
- Apertura
- Ornamentasi
Bentuk polen
Analisis secara deskriptif
Hasil Penelitian
C. Metode Penelitian
1. Metode Penelitian
Metode pengambilan sampel menggunakan metode survai dengan cara
acak (random sampling) meliputi berbagai lokasi yang terdapat tumbuhan
genus Solanum, Capsicum, dan Physalis di wilayah Banyumas dan sekitarnya.
Pembuatan preparat polen dengan metode asetolisis (Sumarsono et al., 2012).
bio.unsoed.ac.id
2. Variabel dan Parameter Penelitian
Variabel yang diamati adalah karakter morfologi polen dari beberapa
anggota familia Solanaceae dengan parameter meliputi :
a. Unit polen
Unit polen dibedakan atas tunggal (monad) dan majemuk (diad, tetrad,
poliad, mossula, pollinia).
9
b. Bentuk polen
Bentuk polen ditentukan berdasarkan ratio panjang aksis polar (P) dan
diameter Ekuatorial (E).
c. Ukuran polen
Ukuran polen didasarkan pada aksis yang terpanjang
d. Apetura
Tipe apertur, yaitu pori/porus (lubang), kolpi/kolpus (celah) dan
kolporat sedangkan jumlah apertur, yaitu di, tri, tetra, penta, hexa dan
poly.
e. Ornamentasi (skulptur)
Tipe ornamentasi didasarkan pada ukuran, bentuk, dan susunan unsur
eksinnya (Lampiran 3).
D. Cara Kerja
a. Pengambilan sampel polen
Pengambilan sampel polen dilakukan dengan mengambil polen dari bunga
yang mekar kemudian dimasukan ke dalam botol flakon yang telah diisi asam
asetat glasial dengan volume 10 cc.
b. Pembuatan preparat polen
Pembuatan preparat polen dengan metode asetolisis menurut Sumarsono et
al., (2012) dengan langkah- langkah sebagai berikut:
1) Polen bunga diambil dari antera, dimasukan dalam botol flakon berisi
asam asetat glasial 45 % selama 24 jam untuk difiksasi.
2) Sampel
polen
dipindahkan
kedalam
tabung
sentrifus,
kemudian
disentrifus.
3) Setelah itu cairan/supernatan dibuang dan endapan diberi campuran asam
asetat glasial dan asam sulfat pekat asam dengan perbandingan 9 : 1 secara
perlahan-lahan melalui dinding tabung.
bio.unsoed.ac.id
4) Sampel polen dipanaskan dalam waterbath pada temperatur kamar sampai
mendidih.
5) Setelah mendidih, tabung diambil dan didiamkan selama ± 5 menit.
6) Kemudian disentrifus, setelah itu cairan dibuang dan endapan dicuci
dengan akuades.
10
7) Pencucian dengan akuades dilakukan 3 kali dimana setiap pencucian
disentrifus lagi.
8) Kemudian dilakukan pewarnaan dengan safranin 1 % dalam alkohol 70%,
di diamkan ± 10 menit sebelum diletakan di object glass.
9) Polen diambil dengan batang pengaduk, dan diletakkan di atas object glass
kemudian ditutup cover glass, dan preparat siap diamati.
c. Kalibrasi
Menurut Baptista (2010), kalibrasi dilakukan untuk menentukan nilai 1
skala okuler dengan cara menghimpitkan bayangan skala mikrometer objektif
yang diletakan dibawah lensa objektif dan mikrometer okuler yang dipasang
pada tabung lensa okuler pada perbesaran yang diinginkan (misalnya 400x).
Setelah fokus, kemudian dilihat pada skala berapa bayangan garis dari kedua
mikrometer yang berhimpit tersebut. Dari hasil tersebut dapat diketahui nilai
satu skala mikrometer okuler dengan rumus :
1 skala okuler = Jarak yang diketahui antara 2 garis pada mikrometer objektif
Jarak skala pada mikrometer okuler
= 0,01 x skala objektif (dalam mm)
skala okuler
= 10 x skala objektif (dalam µm)
skala okuler
Peneraan nilai skala okuler dilakukan 5 kali ulangan.
d. Pengukuran diameter polen (P/E)
Pengukuran diameter polen dilakukan dengan cara :
1) Mikrometer objektif diganti dengan preparat polen yang akan diamati,
dicari bayangan preparat.
2) Diukur diameter polen bagian polar (P) dan Ekuatorial (E) pada perbesaran
400x.
3) Hasil yang didapat pada pengukuran polen bagian polar dan ekuatorial,
bio.unsoed.ac.id
masing-masing dikalikan dengan hasil pengukuran kalibrasi.
4) Kemudian dihitung diameter polen dengan rumus P/E.
5) Hasil yang didapat dari rumus tersebut digunakan untuk menentukan
bentuk dan ukuran polen.
e. Pengamatan unit, apertur dan ornamentasi
Polen diamati dibawah mikroskop dengan perbesaran 400x, pada setiap
parameter meliputi: unit polen, apetura dan ornamentasi. Untuk membantu
11
interpretasi dilakukan pemotretan. Identifikasi menggunakan buku acuan dari
Moore & Webb (1978) dan Kapp (1969).
E. Metode Analisis
Morfologi polen dianalisis secara deskriptif, yaitu dengan membuat deskripsi
morfologi polen setiap spesies berdasarkan parameternya, sehingga terlihat karakter
morfologi polen dari beberapa anggota familia Solanaceae.
bio.unsoed.ac.id
12
A. Materi, Lokasi dan Waktu Penelitian
1. Materi
a. Bahan
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah polen bunga beberapa
anggota familia Solanaceae yaitu spesies Solanum melongena L. (ungu),
Solanum melongena L.(hijau), Solanum nigrum L. dan Solanum torvum Sw.,
Capsicum frutescens L., Capsicum annuum L., dan Physalis minima L., asam
asetat glasial, asam sulfat pekat (H2SO4), akuades, safranin 1 % dalam alkohol
70 %, glycerin jelly dan bahan-bahan untuk pembuatan preparat (Lampiran 1).
b. Alat
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah mikroskop cahaya,
sentrifugator, tabung sentrifus, object glass, cover glass, pipet tetes, waterbath,
gelas ukur, batang pengaduk, objektif mikrometer, okuler mikrometer, botol
flakon, pulpen, pensil, kertas tabel, plastik sampel, tisu, kamera digital dan
alat-alat yang digunakan untuk pembuatan preparat (Lampiran 1).
2.Lokasi dan Waktu Penelitian
Pengambilan sampel polen bunga dari beberapa anggota familia
Solanaceae dilakukan di wilayah Banyumas dan sekitarnya yaitu di daerah
Desa Melung Kecamatan Baturaden dan Karangwangkal Kecamatan
Purwokerto Utara (Lampiran 2).
Tahapan preparasi polen dan pengumpulan data polen dilakukan di
Laboratorium Struktur dan Perkembangan Tumbuhan Fakultas Biologi
Universitas Jenderal Soedirman. Penelitian dilaksanakan pada bulan April –
September 2014.
bio.unsoed.ac.id
8
B. Diagram Alir Penelitian
Survai lokasi di wilayah Banyumas dan sekitarnya yang terdapat tumbuhan dari
beberapa anggota familia Solanaceae
Pengambilan sampel secara acak (random sampling)
Preparasi polen dengan metode asetolisis, pewarnaan dengan safranin 1% dalam
alkohol 70%.
Pengumpulan Data
Pengukuran polen panjang aksis
polar (P) dan diameter
Ekuatorial (E)
Pengamatan :
- Unit Polen
- Apertura
- Ornamentasi
Bentuk polen
Analisis secara deskriptif
Hasil Penelitian
C. Metode Penelitian
1. Metode Penelitian
Metode pengambilan sampel menggunakan metode survai dengan cara
acak (random sampling) meliputi berbagai lokasi yang terdapat tumbuhan
genus Solanum, Capsicum, dan Physalis di wilayah Banyumas dan sekitarnya.
Pembuatan preparat polen dengan metode asetolisis (Sumarsono et al., 2012).
bio.unsoed.ac.id
2. Variabel dan Parameter Penelitian
Variabel yang diamati adalah karakter morfologi polen dari beberapa
anggota familia Solanaceae dengan parameter meliputi :
a. Unit polen
Unit polen dibedakan atas tunggal (monad) dan majemuk (diad, tetrad,
poliad, mossula, pollinia).
9
b. Bentuk polen
Bentuk polen ditentukan berdasarkan ratio panjang aksis polar (P) dan
diameter Ekuatorial (E).
c. Ukuran polen
Ukuran polen didasarkan pada aksis yang terpanjang
d. Apetura
Tipe apertur, yaitu pori/porus (lubang), kolpi/kolpus (celah) dan
kolporat sedangkan jumlah apertur, yaitu di, tri, tetra, penta, hexa dan
poly.
e. Ornamentasi (skulptur)
Tipe ornamentasi didasarkan pada ukuran, bentuk, dan susunan unsur
eksinnya (Lampiran 3).
D. Cara Kerja
a. Pengambilan sampel polen
Pengambilan sampel polen dilakukan dengan mengambil polen dari bunga
yang mekar kemudian dimasukan ke dalam botol flakon yang telah diisi asam
asetat glasial dengan volume 10 cc.
b. Pembuatan preparat polen
Pembuatan preparat polen dengan metode asetolisis menurut Sumarsono et
al., (2012) dengan langkah- langkah sebagai berikut:
1) Polen bunga diambil dari antera, dimasukan dalam botol flakon berisi
asam asetat glasial 45 % selama 24 jam untuk difiksasi.
2) Sampel
polen
dipindahkan
kedalam
tabung
sentrifus,
kemudian
disentrifus.
3) Setelah itu cairan/supernatan dibuang dan endapan diberi campuran asam
asetat glasial dan asam sulfat pekat asam dengan perbandingan 9 : 1 secara
perlahan-lahan melalui dinding tabung.
bio.unsoed.ac.id
4) Sampel polen dipanaskan dalam waterbath pada temperatur kamar sampai
mendidih.
5) Setelah mendidih, tabung diambil dan didiamkan selama ± 5 menit.
6) Kemudian disentrifus, setelah itu cairan dibuang dan endapan dicuci
dengan akuades.
10
7) Pencucian dengan akuades dilakukan 3 kali dimana setiap pencucian
disentrifus lagi.
8) Kemudian dilakukan pewarnaan dengan safranin 1 % dalam alkohol 70%,
di diamkan ± 10 menit sebelum diletakan di object glass.
9) Polen diambil dengan batang pengaduk, dan diletakkan di atas object glass
kemudian ditutup cover glass, dan preparat siap diamati.
c. Kalibrasi
Menurut Baptista (2010), kalibrasi dilakukan untuk menentukan nilai 1
skala okuler dengan cara menghimpitkan bayangan skala mikrometer objektif
yang diletakan dibawah lensa objektif dan mikrometer okuler yang dipasang
pada tabung lensa okuler pada perbesaran yang diinginkan (misalnya 400x).
Setelah fokus, kemudian dilihat pada skala berapa bayangan garis dari kedua
mikrometer yang berhimpit tersebut. Dari hasil tersebut dapat diketahui nilai
satu skala mikrometer okuler dengan rumus :
1 skala okuler = Jarak yang diketahui antara 2 garis pada mikrometer objektif
Jarak skala pada mikrometer okuler
= 0,01 x skala objektif (dalam mm)
skala okuler
= 10 x skala objektif (dalam µm)
skala okuler
Peneraan nilai skala okuler dilakukan 5 kali ulangan.
d. Pengukuran diameter polen (P/E)
Pengukuran diameter polen dilakukan dengan cara :
1) Mikrometer objektif diganti dengan preparat polen yang akan diamati,
dicari bayangan preparat.
2) Diukur diameter polen bagian polar (P) dan Ekuatorial (E) pada perbesaran
400x.
3) Hasil yang didapat pada pengukuran polen bagian polar dan ekuatorial,
bio.unsoed.ac.id
masing-masing dikalikan dengan hasil pengukuran kalibrasi.
4) Kemudian dihitung diameter polen dengan rumus P/E.
5) Hasil yang didapat dari rumus tersebut digunakan untuk menentukan
bentuk dan ukuran polen.
e. Pengamatan unit, apertur dan ornamentasi
Polen diamati dibawah mikroskop dengan perbesaran 400x, pada setiap
parameter meliputi: unit polen, apetura dan ornamentasi. Untuk membantu
11
interpretasi dilakukan pemotretan. Identifikasi menggunakan buku acuan dari
Moore & Webb (1978) dan Kapp (1969).
E. Metode Analisis
Morfologi polen dianalisis secara deskriptif, yaitu dengan membuat deskripsi
morfologi polen setiap spesies berdasarkan parameternya, sehingga terlihat karakter
morfologi polen dari beberapa anggota familia Solanaceae.
bio.unsoed.ac.id
12