AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK ETANOL KULIT BATANG KEDONDONG (Spondias pinnata) TERHADAP BAKTERI Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Kulit Batang Kedondong (Spondias pinnata) Terhadap Streptococcus mutans Dan Shigella sonnei.

(1)

AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK ETANOL KULIT BATANG

KEDONDONG (Spondias pinnata) TERHADAP BAKTERI

Streptococcus mutans DAN Shigella sonnei

NASKAH PUBLIKASI

Oleh :

ZULI MUNTARI

K 100 080 136

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA

SURAKARTA


(2)

(3)

AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK ETANOL KULIT

BATANG KEDONDONG (Spondias pinnata) TERHADAP

Streptococcus mutans DAN Shigella sonnei

 

ANTIBACTERIAL ACTIVITY OF ETHANOL EXTRACT OF STEM BARK OF Spondias pinnata AGAINST Streptococcus mutants AND Shigella sonnei

Zuli Muntari, Ratna Yuliani, dan Rima Munawaroh

Fakultas Farmasi, Universitas Muhammadiyah Surakarta

Jl. A Yani Tromol Pos 1, Pabelan Kartasura Surakarta 57102 Zulimuntari@yahoo.com 

ABSTRAK

Tanaman kedondong memiliki banyak kegunaan terutama sebagai obat tradisional. Penelitian sebelumnya menunjukkan bahwa kulit batang kedondong memiliki potensi sebagai antibakteri terhadap Bacillus subtilis dan Proteus mirabilis dan senyawa pada kulit batang kedondong yang diduga mempunyai aktivitas antibakteri adalah alkaloid, flavonoid, dan polifenol. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas antibakteri ekstrak etanol kulit batang kedondong terhadap Streptococcus mutans dan Shigella sonnei.

Ekstraksi kulit batang kedondong menggunakan penyari etanol 96% dengan metode maserasi. Uji aktivitas antibakteri dilakukan dengan metode dilusi padat. Seri konsentrasi yang digunakan yaitu 0,10%, 0,19%, 0,38%, dan 0,75%.

Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa aktivitas antibakteri ekstrak etanol kulit batang kedondong terhadap Streptococcus mutans dan Shigella sonnei

sampai konsentrasi 0,75% atau 7500 µg/ml masih ada pertumbuhan bakteri. Akan tetapi pertumbuhan bakteri pada konsentrasi 0,75% lebih sedikit daripada konsentrasi 0,38%, 0,19%, dan 0,10%. Dari hasil penelitian dapat diambil kesimpulan bahwa ekstrak etanol kulit batang kedondong mempunyai aktivitas antibakteri terhadap Streptococcus mutans dan Shigella sonnei, tetapi nilai Kadar Hambat Minimumnya belum dapat diketahui.

Kata kunci : Spondias pinnata, Streptococcus mutans, Shigella sonnei, antibakteri.

ABSTRACT

Spondia pinnata has many uses, especially it is used as traditional medicine. Previous research indicated that bark of Spondia pinnata has potency as antibacterial against Bacillus subtilis and Proteus mirabilis and compounds in bark of Spondia pinnata that are expected to have antibacterial activity are alkaloid, flavonoid, and polyphenol. The purpose of the research was to determine the antibacterial activity of ethanol extract of stem bark of Spondias pinnata against Streptococcus mutans and Shigella sonnei.


(4)

Extraction of Spondia pinnata’s bark was done by using 96% ethanol and using maceration method. Test of antibacterial activity using solid dilution method. The series concentration that were used are 0.10%, 0.19%, 0.38% and 0.75%.

The results showed that the antibacterial activity of ethanol extract of stem bark of Spondias pinnata against Streptococcus mutans and Shigella sonnei with concentration up to 0.75% remains bacterial growth. However, the growth of the bacteria with concentration up to 0.75% less than the concentration of 0.38%, 0.19%, and 0.10%. In conclution, ethanol extract of stem bark of Spondia pinnata have antibacterial activity against Streptococcus mutants and Shigella sonnei, but Minimum Inhibitory Concentration was unclear.

Key words: Spondias pinnata, Streptococcus mutants, Shigella sonnei, antibacterial

   

PENDAHULUAN

Indonesia merupakan negara tropis dengan infeksi masih merupakan penyakit utama dan penyebab kematian nomor satu (Priyanto, 2008). Penyebab infeksi yang paling sering adalah bakteri (Pelczar dan Chan, 2007). Penularan penyakit ini disebarkan dari satu individu ke individu berikutnya melalui kontak langsung dan tidak langsung. Penyebarannya juga dapat melalui udara, makanan, air yang tercemar, dan melalui serangga (Gould dan Brooker, 2003). Bakteri yang sering menyebabkan penyakit antara lain bakteri dari jenis Streptococcus mutans

dan Shigella sonnei. Kedua bakteri ini banyak menyebabkan penyakit di negara berkembang seperti Indonesia.

Streptococcus mutans adalah penghuni normal di rongga mulut. Namun karena dapat mensintesis banyak polisakarida seperti sukrosa, bakteri ini mempunyai peranan penting dalam pembentukan karies gigi. Karies gigi adalah masalah kesehatan mulut yang utama di negara-negara Asia, Amerika Latin, dan Afrika sehubungan dengan meningkatnya konsumsi gula dan berkurangnya asupan fluorida. Sekitar 60-90% bakteri S. mutans menyerang anak sekolah dan orang dewasa (Erik, 2005). Bakteri ini dapat masuk aliran darah yang menyebabkan endokarditis pada katup jantung yang abnormal. Setelah pencabutan gigi, paling tidak 30% pasien mengalami bakteremia yang diakibatkan bakteri tersebut (Brooks et al., 2005).


(5)

Shigella sonnei adalah salah satu spesies Shigella. Bakteri ini adalah penyebab disentri basiler (Spicer, 2000). Infeksinya terbatas pada sistem gastrointestinal. Penyebaran ke dalam aliran darah sangat jarang tetapi dapat menular dari satu individu ke individu lain (Brooks et al., 2005). Shigella sonnei

biasanya menjadi wabah di negara berkembang (Chapel et al., 2005). Spesies Shigella adalah bakteri patogen yang bertanggung jawab terhadap penyakit diare dan disentri di seluruh dunia. Sekitar 60% dari kematian akibat Shigella terjadi pada kelompok usia balita (Niyogi, 2005). Kejadian di negara berkembang mungkin 20 kali lebih besar dari pada negara maju (Sureshbabu, 2010).

Umumnya, infeksi dapat diobati dengan menggunakan antibiotik. Antibiotik pilihan untuk infeksi yang disebabkan karena S. sonnei di antaranya yaitu siprofloksasin, norfloksasin, dan azitromisin sedangkan untuk infeksi yang disebabkan karena S. mutans yaitu ampisilin, korsamisin, dan omegmisin (IAI, 2008). Akan tetapi, penggunaan antibiotik secara besar-besaran untuk terapi dan profilaksis merupakan faktor utama terjadinya resistensi (Tjay & Rahardja, 2007). Oleh karena itu banyak perhatian ditujukan kepada pengembangan cara-cara untuk pencegahan dan pengobatan penyakit tersebut.

Saat ini masyarakat mulai beralih ke pengobatan dengan bahan-bahan alami. Hal ini dikarenakan obat tradisional murah dan mudah didapat (Muchlisah, 2001). Salah satu tanaman yang dapat digunakan sebagai pengobatan adalah kedondong (Spondias pinnata). Kedondong merupakan keluarga Anacardeaceae

yang terdistribusi luas ke seluruh Pasifik Selatan dan daerah tropis lainnya. Memiliki senyawa kimia tanin, asam amino, mineral, vitamin C, protein, serat, polisakarida dan karotenoid (WHO, 1998). Kedondong telah digunakan oleh masyarakat dalam pengobatan diare, disentri, rematik, gonore dan TBC, infeksi oleh mikroba, katarak, batuk, infeksi mulut, dan tenggorokan (Panda et al., 2011).

Berdasarkan penelitian yang pernah dilakukan oleh Chetia dan Gogoi (2011) fraksi metanol kulit batang kedondong memiliki aktivitas antibakteri terhadap bakteri Bacillus subtilis dan Proteus mirabilis dengan konsentrasi hambat minimum (KHM) sebesar 128 µg/ml, sedangkan konsentrasi hambat minimumnya terhadap bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli


(6)

sebesar 64 µg/ml. Senyawa yang bertanggungjawab pada aktivitas tersebut antara lain alkaloid, flavonoid, dan polifenol. Untuk mengetahui khasiat kedondong terhadap bakteri lain maka dilakukan penelitian lebih lanjut menggunakan bakteri yang berbeda yaitu Streptococcus mutans dan Shigella sonnei dan menggunakan pelarut polar yang berbeda yaitu etanol 96% dengan metode dilusi padat. Hasil penelitian ini diharapkan dapat membuktikan secara ilmiah khasiat dari kulit batang kedondong sebagai antibakteri sehingga dapat menunjang pemanfaatan tanaman sebagai salah satu alternatif pengobatan tradisional terutama untuk penyakit yang disebabkan oleh bakteri.

 

METODE PENELITIAN Alat dan Bahan

Alat : Alat yang dibutuhkan dalam penelitian ini bejana maserasi, cawan porselen, batang pengaduk, rotary evaporator (Heidolph), waterbath (Memmert), blender, autoklaf (My Life), oven (Memmert), mikroskop (Olympus), vortek (Thermolyne Corporation), inkubator (Memmert), mikropipet (Socorex), inkubator (Memmert), LAF (Laminar Air Flow) (Astari Niagara International dan CV. Srikandi Laboratory), alat-alat gelas, yellow tip, blue tip, Bunsen.

Bahan : Bahan yang dibutuhkan adalah kulit batang kedondong yang diperoleh dari daerah Nogosari, Boyolali, bakteri Streptococcus mutans diperoleh dari Balai Laboratorium Kesehatan Yogyakarta dan Shigella sonnei dari Laboratorium Mikrobiologi Farmasi Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta. NaCl 0,9% (normal salin), media Brain Heart Infusion (BHI) (Conda Prodanisa), media Mueller Hinton (MH) (Oxoid), CMC-Na 0,5% teknis, standar Mc Farland konsentrasi 108 CFU/mL (Remel), media KIA (Kliger Iron Agar) (Oxoid), media LIA (Lysine Iron Agar) (Oxoid), media MIO (Motility Indole Ornithine) (Oxoid), formalin 1%, cat Gram A, cat Gram B, cat Gram C, dan cat Gram D.

Jalannya Penelitian

Penyiapan bahan : kulit batang kedondong yang sudah dikumpulkan dicuci bersih dengan air mengalir kemudian dirajang dan dikeringkan di bawah sinar matahari. Bahan yang sudah kering diserbuk sampai halus.


(7)

Pembuatan ekstrak etanol kulit batang kedondong : seribu gram serbuk diekstraksi dengan 7500 mL etanol 96% dalam bejana maserasi yang ditutup rapat dan didiamkan selama 3 hari terlindung dari cahaya. Setelah 3 hari, hasil maserasi disaring dengan kain flanel dan ditampung pada botol gelas. Hasil maserasi dievaporasi dengan rotary evaporator pada suhu 60oC dan untuk mendapatkan ekstrak etanol kulit batang kedondong yang kental maka hasil evaporasi diuapkan di atas waterbath dengan suhu kurang dari 60oC. Sterilisasi alat : alat dan bahan yang digunakan dalam uji mikrobiologi disterilkan terlebih dahulu. Untuk alat-alat gelas yang berupa cawan petri, erlenmeyer, dan tabung reaksi dicuci bersih, dikeringkan dan dibungkus kertas kemudian disterilkan dengan pemanasan kering menggunakan oven pada suhu 180°C selama 1 jam. Alat dan bahan yang tidak tahan pemanasan kering seperti media, yellow tips, dan blue tips disterilkan dengan autoklaf pada suhu 121°C dengan tekanan 2 atm selama 15 menit.

Persiapan media : agar Mueller Hinton (MH) digunakan sebagai media untuk pengujian antibakteri. Media yang digunakan telah tersedia dalam kemasan, sehingga dalam pembuatannya hanya dengan cara melarutkan dalam akuades sesuai dengan instruksi yang terdapat pada masing-masing kemasan. Banyaknya media yang ditimbang untuk tiap liternya adalah sebagai berikut : media MH 64 gram dan media BHI 37 gram. Jumlah media yang ditimbang disesuaikan dengan volume yang dibutuhkan.

Pengecatan bakteri : satu ose bakteri diambil dan diratakan pada gelas obyek yang telah dibebaslemakkan lalu dipanasi di atas nyala bunsen hingga kering kemudian ditetesi formalin 1%, ditunggu 5 menit, dikeringkan lagi dan preparat siap dicat. Preparat yang telah siap dicat digenangi dengan cat Gram A selama 1-3 menit kemudian cat dibuang tanpa dicuci dengan air. Preparat kemudian digenangi dengan cat Gram B selama 0,5-1 menit. Setelah itu cat dibuang dan dicuci dengan air. Preparat ditetesi cat Gram C sampai warna cat dilunturkan.


(8)

Preparat selanjutnya digenangi cat Gram D selama 1-2 menit kemudian dicuci dan dikeringkan dalam udara kamar. Preparat diperiksa di bawah mikroskop. Identifikasi bakteri secara biokimiawi : suspensi bakteri S. sonnei ditanam pada media KIA, LIA, dan MIO kemudian diinkubasi pada suhu 37oC selama 18-24 jam. Identifikasi hasil dilakukan dengan mencocokan evaluasi hasil penanaman pada media biokimiawi dengan tabel identifikasi Enterobacteriaceae.

Pembuatan suspensi bakteri : beberapa koloni bakteri diambil dari biakan murni kemudian digoreskan menggunakan ose steril pada media MH (Mueller Hinton). Bakteri kemudian diinkubasi pada suhu 37ºC selama 24 jam. Bakteri yang tumbuh disimpan pada suhu 4ºC sebagai stok bakteri. Sedikitnya 3-5 koloni bakteri dari media MH dipindahkan ke dalam 5 mL media BHI dan dimasukkan ke dalam incubator shaker selama 2-6 jam pada suhu 370 C sampai kekeruhannya mencapai standar Mc. Farland (108CFU/mL). Setelah disamakan dengan standar Mc. Farland menggunakan salin steril kemudian diencerkan 100 kali, sehingga didapatkan konsentrasi bakteri sebesar 106CFU/mL. Sebanyak 50 µL diambil dan dipindahkan pada media MH kemudian diratakan menggunakan ose.

Pembuatan stok ekstrak : stok dibuat dengan konsentrasi 12%. Ekstrak etanol kulit batang kedondong diambil sebanyak 300 mg dan disuspensikan dengan 25 mL CMC-Na 0,5% sebagai suspending agent.

Pembuatan seri konsentrasi : ekstrak etanol ku lit batang kedondong masing-masing dibuat seri konsentrasi. Seri konsentrasi yang dibuat untuk Streptococcus mutans dan Shigella sonnei adalah 0,75%; 0,38%; 0,19%; dan 0,10%. Konsentrasi tersebut diambil dari stok 12%. Volume pengambilan adalah 7,81 mL; 3,96 mL; 1,98 mL; dan 1,09 mL, kemudian ditambah suspending agent CMC-Na 0,5% sampai 25 mL, kemudian dari masing-masing seri konsentrasi diambil 1 mL dan ditambah 4 mL media MH.

Pembuatan kontrol : aktivitas antibakteri ekstrak etanol kulit batang kedondong menggunakan 3 macam kontrol uji, yaitu kontrol media (K1) berisi 5 mL media MH, kontrol pertumbuhan (K2) berisi 5 mL media MH + 50 µL suspensi bakteri


(9)

S. mutans atau S. sonnei, dan kontrol suspending agent (K3) berisi 4 mL media MH + 1 mL CMC-Na 0,5% + 50 µL suspensi S. mutans atau S. Sonnei.

Uji aktivitas antibakteri dengan metode dilusi agar : media MH yang sudah dicampur dengan ekstrak ditetesi suspensi bakteri sebanyak 50 µL lalu diratakan menggunakan ose steril, kemudian diinkubasi pada suhu 37ºC selama 24 jam. Setelah itu pertumbuhan bakteri diamati.

HASIL DAN PEMBAHASAN

Determinasi tanaman : determinasi tanaman bertujuan untuk memastikan tanaman yang diteliti adalah spesies yang dimaksud. Determinasi dilakukan di Bagian Biologi Farmasi Fakultas Farmasi UGM. Berdasarkan determinasi didapatkan hasil yang menunjukkan bahwa tanaman yang akan diteliti adalah spesies

Spondias pinnata (L.f.) Kurz atau tanaman kedondong.

Penyarian bahan : penyarian kulit batang kedondong menggunakan metode maserasi dengan pelarut etanol 96%. Proses maserasi diulang 2 kali, dengan mengganti pelarut etanol 96% pada saat remaserasi dengan volume yang sama dengan maserasi pertama. Etanol dapat menyari komponen seperti seperti senyawa fenol, flavonoid, alkaloid, sterol, terpenoid, dan tanin (Murphy, 1999). Hasil maserasi diuapkan pelarutnya bertujuan agar larutan penyari tidak mempengaruhi aktivitas antibakteri. Hasil ekstraksi berupa ekstrak etanol 96% kulit batang kedondong sebanyak 199,07 g dengan rendemen sebesar 19,91%. Identifikasi bakteri : identifikasi bakteri dilakukan untuk menggolongkan bakteri ke dalam kelompok atau spesiesnya. Identifikasi bakteri yang dilakukan yaitu pengecatan Gram dan uji biokimia. Pengecatan Gram bertujuan untuk mengelompokkan bakteri ke dalam kelompok Gram positif dan Gram negatif. Hasil pengamatan di bawah mikroskop menunjukkan bahwa bakteri Streptococcus mutans berbentuk bulat berpasangan seperti rantai dan berwarna ungu yang merupakan bakteri Gram positif. Bakteri Gram positif mengalami denaturasi protein pada dinding sel ketika dicuci alkohol 96% (Cat Gram C) sehingga


(10)

pori-pori mengecil. Kompleks ungu kristal-yodium terjebak dalam dinding sel dan bakteri tetap berwarna ungu. Bakteri Gram positif tidak berubah dengan warna merah dari cat Gram D yang berisi air fuksin sehingga bakteri tetap berwarna ungu (Radji, 2010).

Sedangkan bakteri Shigella sonnei menunjukkan bentuk batang berwarna merah yang merupakan bakteri Gram negatif. Bakteri Gram negatif mengandung kadar lipid tinggi yang larut dengan alkohol 96% (cat Gram C), sehingga pori-pori dinding sel melebar. Warna ungu dan kompleks kristal-yodium dari Cat Gram A dan B dilepaskan akibatnya bakteri menjadi tidak berwarna. Sel akan menyerap zat warna kontras air fuksin (cat Gram D) yang menyebabkan bakteri Gram negatif berwarna merah (Radji, 2010).

Pada uji identifikasi bakteri secara biokimiawi, bakteri Shigella sonnei

ditanam pada media KIA (Kliger Iron Agar) dan diinkubasi selama 18-24 jam, diperoleh hasil bagian tegak media terjadi perubahan warna media dari merah menjadi kuning. Hasil ini menunjukkan bahwa S. sonnei dapat memfermentasi glukosa dan membentuk suasana asam. S. sonnei tidak memproduksi H2S yang

ditandai dengan tidak terbentuknya warna hitam pada media KIA. Pada media LIA (Lysine Iron Agar), terlihat bagian miring media membentuk suasana alkali yang ditandai media berwarna ungu. Sedangkan di bagian tegak terjadi perubahan warna dari ungu menjadi kuning, yang berarti membentuk suasana asam dan bakteri mampu memfermentasi glukosa. Pada media MIO (Motility Indole Ornithine) dapat dilihat tidak terjadi pergerakan bakteri S. sonnei yang menandakan bahwa bakteri mempunyai sifat non motil dan media bagian bawah berubah warna dari ungu menjadi kuning yang berarti reaksi dekarboksilasi ornitin negatif. Hasil uji identifikasi biokimia S. sonnei sesuai dengan teori, yaitu bakteri Shigella bersifat nonmotil, memfermentasi glukosa, dan tidak memproduksi H2S (Brooks et al., 2005).

Uji aktivitas antibakteri : metode yang digunakan dalam uji aktivitas antibakteri adalah dilusi padat. Media dengan ekstrak dapat tercampur homogen sehingga kontak bakteri dengan ekstrak terjadi secara langsung dan efektif. Nilai Kadar


(11)

Hambat Minimal (KHM) sebagai parameter konsentrasi terkecil ekstrak yang dapat menghambat pertumbuhan bakteri. Media yang digunakan dalam uji aktivitas antibakteri adalah Mueller Hinton. Ekstrak etanol sukar larut dalam air maka perlu disuspensikan dalam suspending agent yang sesuai. Suspending agent

yang digunakan adalah CMC-Na (Carboxyl Methyl Cellulosum-Natrium) dengan konsentrasi 0,5%. CMC-Na dipilih karena dapat mensuspensikan ekstrak etanol kulit batang kedondong.

Pengujian menggunakan tiga macam kontrol yaitu kontrol media, kontrol pertumbuhan, dan kontrol suspending agent. Kontrol media (K1) hanya berisi media sebagai parameter ada atau tidaknya kontaminan. Kontrol pertumbuhan (K2) berisi media dan bakteri yang bertujuan untuk melihat bakteri dapat tumbuh baik pada media. Kontrol suspending agent (K3) terdiri atas media, suspending agent, dan bakteri yang bertujuan untuk mengetahui apakah suspending agent

mempunyai daya hambat pada bakteri.

Konsentrasi ekstrak etanol kulit batang kedondong yang diujikan pada

Streptococcus mutans dan Shigella sonnei adalah 0,10%, 0,19%, 0,38%, dan 0,75%. Hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol kulit batang kedondong (Spondias pinnata) menunjukkan bahwa sampai konsentrasi 0,75% masih ada pertumbuhan bakteri. Akan tetapi pertumbuhan bakteri pada konsentrasi 0,75% lebih sedikit daripada konsentrasi 0,38%, 0,19%, dan 0,10%. CMC-Na tidak menghambat pertumbuhan bakteri yang ditunjukkan dengan pertumbuhan bakteri pada kontrol suspending agent.

Tabel 1. Hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol kulit batang kedondong terhadap

Streptococcus mutans dan Shigella sonnei

Seri konsentrasi (%) b/v Streptococcus mutans Shigella sonnei 0,10 ++++ ++++

0,19 +++ +++

0,38 ++ ++

0,75 + +

K1 - -

K2 + +

K3 + +

Keterangan: K1 : kontrol media K2 : kontrol pertumbuhan K3 : kontrol suspending agent

(+) : terdapat pertumbuhan bakteri (-) : tidak terdapat pertumbuhan bakteri


(12)

Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa aktivitas antibakteri ekstrak etanol kulit batang kedondong terhadap Streptococcus mutans dan Shigella sonnei yang menggunakan suspending agent CMC Na dengan metode dilusi padat sampai konsentrasi 0,75% atau 7500 µg/ml masih ada pertumbuhan bakteri. Akan tetapi pertumbuhan bakteri pada konsentrasi 0,75% lebih sedikit daripada konsentrasi 0,38%, 0,19%, dan 0,10%. Hal ini berbeda dengan penelitian Chetia dan Gogoi (2011) yang telah membuktikan adanya aktivitas antibakteri fraksi metanol kulit batang kedondong yang berasal dari India dengan pelarut DMSO terhadap bakteri

Bacillus subtilis dan Proteus mirabilis dengan konsentrasi hambat minimum sebesar 128 µg/ml, dan terhadapbakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli dengan konsentrasi hambat minimum sebesar 64 µg/ml dengan metode dilusi padat. Perbedaan hasil penelitian ini mungkin dikarenakan perbedaan penggunaan pelarut atau suspending agent, penyari ekstrak, bakteri, serta asal tanaman kedondong. Penggunaan CMC Na sebagai suspending agent berbeda dengan penggunaan DMSO sebagai pelarut yang dapat melarutkan ekstrak. Akan tetapi Wadhwani et al (2012) dalam penelitiannya membuktikan bahwa DMSO 1% sudah dapat menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus epidermidis dan

Shigella flexneri.

Perbedaan penggunaan bakteri uji juga sangat mempengaruhi aktivitas antibakteri. Etanol yang digunakan sebagai penyari mempunyai tingkat kepolaran yang relatif sama dengan metanol (Seidel, 2005), sehingga tidak ada perbedaan yang signifikan dalam menyari senyawa yang terkandung di dalam serbuk kulit batang kedondong. Perbedaan tempat tumbuh tanaman kedondong juga mempengaruhi kandungan dan aktivitas dari tanaman tersebut, tanaman kedondong dari India terbukti mempunyai aktivitas antibakteri terhadap Bacillus subtilis, Proteus mirabilis, Staphylococcus aureus, dan Escherichia coli. Senyawa yang terkandung dalam kulit batang kedondong yang mempunyai aktivitas terhadap antibakteri tersebut adalah alkaloid, flavonoid, dan polifenol(Chetia dan Gogoi, 2011). Mekanisme alkaloid dalam menghambat pertumbuhan bakteri yaitu dengan cara melisiskan sel dan mengubah morfologi bakteri (Karou et al., 2006), penghambatan bakteri oleh flavonoid dengan cara menghambat fungsi membran sitoplasma dan menghambat sintesis asam nukleat (Chusnie & Lamb, 2005), sedangkan polifenol dapat menyebabkan penghambatan bakteri karena adanya


(13)

ikatan hidrogen dengan enzim mikroba sehingga menghambat metabolisme bakteri (Saravanakumar et al., 2009).

KESIMPULAN

Berdasarkan hasil penelitian yang telah diperoleh maka dapat disimpulkan bahwa ekstrak etanol kulit batang kedondong (Spondias pinnata) menunjukkan adanya aktivitas antibakteri terhadap Streptococcus mutans dan

Shigella sonnei, tetapi nilai Kadar Hambat Minimumnya belum dapat diketahui.

SARAN

Perlu dilakukan penelitian uji antibakteri ekstrak etanol kulit batang kedondong (Spondias pinnata) dengan kadar yang lebih besar terhadap bakteri

Streptococcus mutans dan Shigella sonnei.

DAFTAR ACUAN

Acharyya, S., Dash, K. Gauri., Mondal, S., & Dash, K. Santosh, 2010, Antioxidative and Antimicrobial Study of Spondias Mangifera Willd Root, International Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences , 2 (4), 68-71.

Brooks, G. F., Butel, J. S., dan Morse, S. A., 2005, Mikrobiologi Kedokteran, Edisi 1, 353, 362, Salemba Medika, Jakarta.

Chapel, H., Puel, A., Bernuth, H., Picard, C., dan Casanova, J. L., 2005, Shigella sonnei Meningitis Due to Interleukin-1 Receptor–Associated Kinase–4 Deficiency: First Association with a Primary Immune Deficiency, Clinical Infectious Diseases, 40, 1227-1231.

Chetia, B. & Gogoi, S., 2011, Antibacterial activity of the methanolic extract of stem bark of Spondias pinnata, Moringa oleifera and Alstonia scholaria, Asian Journal of Traditional Medicines, 6 (4), 163-167.

Cushnie, T. P. & Lamb, A. J., 2005,

Antimicrobial activity of flavonoids,

International Journal of Antimicrobial Agents, 26, 343–356.

Erik, P., 2005, Priorities for research for oral health in the 21st Century – the approach of the WHO Global Oral Health Programme, Community Dental Health, 22, 71–74.


(14)

Gould, D. dan Brooker, C., 2003, Mikrobiologi Terapan Untuk Perawat, 17, EGC, Jakarta.

IAI, 2008, ISO Farmakoterapi, 744, 814, Jakarta, PT. IAI-Penerbitan.

Karou, D., Savadogo, A., Canini, A., Yameogo, S., Montesano, C., Simpore, J., Colizzi, V., dan Traore, A. S., 2005, Antibacterial activity of alkaloids from Sida acuta, African Journal of Biotechnology 4 (12), 1452-1457.

Keawsa-ard, S. and Liawruangrath, B., 2009, Antimicrobial Activity of Spondias pinnata Kurz, Pure and Applied Chemistry International Conference,

Thailand.

Muchlisah, F., 2001, Taman Obat Keluarga, 1, Penebar Swadaya, Jakarta.

Murphy, M., 1999, Plant Products as Antimicrobial Agents, Clinical Microbiology Reviews, 12 (4).

Niyogi, S. K., 2005, Shigellosis, The Journal of Microbiology, 43 (2), 133-143. Panda, B.K., Patro, V, J., Mishra, U, S., & Panigrahi, B, K., 2011, Comperative

Study of Anthelmithic Activity Between Acetone and Ethanolic Stem Bark Extracs of Spondias pinnata (Linn.F) Kurz, International Journal of Research in Ayurveda & Pharmacy, 2 (4), 1383-1385.

Pelczar, M. J. dan Chan, E. C. S., 2007, Dasar-Dasar Mikrobiologi, diterjemahkan oleh Hadioetomo, R. S., 19, Penerbit Universitas Indonesia, Jakarta.

Priyanto, 2008, Farmakologi Dasar untuk Mahasiswa Keprawatan dan Farmasi, 83, 86, 87, 90, Leskonfi, Jakarta.

Radji, M., 2010, Buku Ajar Mikrobiologi Panduan Mahasiswa Farmasi dan Kedokteran, 96-97, 201-202, Buku Kedokteran EGC, Jakarta.

Saravanakumar, A., Venkateshwaran, K., Vanitha, J., Ganesh, M., Vasudevan, M., dan Sivakumar, T., 2009, Evaluation Of Antibacterial Actvity, Phenol And Flavonoid Contents Of Thespesia Populnea Flower Extract, Park. J. Pharm. Sci., 22(3), 282-286

Seidel, V., 2005. Initial and Bulk Ekstractuon, New Jersey 9, Humana Press. Spicer, W. J., 2000, Clinical Bacteriology, Mycology and Parasitologi, 199,


(15)

Sureshbabu, J., 2010, Shigella Infection, http://emedicine.medscape.com/ article/968773overview#a0199 (diakses 10 Desember 2011).

Tjay, T. H., & Rahardja, K., 2007, Obat-Obat Penting; Khasiat, Penggunaan dan Efek-Efek Sampingnya, Edisi VI, 61, Jakarta, PT. Gramedia.

Wadhwani, T., Desai, K., Patel, D., Lawani, D., Bahaley, P., Joshi, P., dan Kothari, V., 2009, Effect of various solvents on bacterial growth in context of determining MIC of various antimicrobials, The Internet Journal of Microbiology 1 (7), DOI: 10.5580/b43.


(1)

pori mengecil. Kompleks ungu kristal-yodium terjebak dalam dinding sel dan bakteri tetap berwarna ungu. Bakteri Gram positif tidak berubah dengan warna merah dari cat Gram D yang berisi air fuksin sehingga bakteri tetap berwarna ungu (Radji, 2010).

Sedangkan bakteri Shigella sonnei menunjukkan bentuk batang berwarna merah yang merupakan bakteri Gram negatif. Bakteri Gram negatif mengandung kadar lipid tinggi yang larut dengan alkohol 96% (cat Gram C), sehingga pori-pori dinding sel melebar. Warna ungu dan kompleks kristal-yodium dari Cat Gram A dan B dilepaskan akibatnya bakteri menjadi tidak berwarna. Sel akan menyerap zat warna kontras air fuksin (cat Gram D) yang menyebabkan bakteri Gram negatif berwarna merah (Radji, 2010).

Pada uji identifikasi bakteri secara biokimiawi, bakteri Shigella sonnei

ditanam pada media KIA (Kliger Iron Agar) dan diinkubasi selama 18-24 jam, diperoleh hasil bagian tegak media terjadi perubahan warna media dari merah menjadi kuning. Hasil ini menunjukkan bahwa S. sonnei dapat memfermentasi glukosa dan membentuk suasana asam. S. sonnei tidak memproduksi H2S yang ditandai dengan tidak terbentuknya warna hitam pada media KIA. Pada media LIA (Lysine Iron Agar), terlihat bagian miring media membentuk suasana alkali yang ditandai media berwarna ungu. Sedangkan di bagian tegak terjadi perubahan warna dari ungu menjadi kuning, yang berarti membentuk suasana asam dan bakteri mampu memfermentasi glukosa. Pada media MIO (Motility Indole Ornithine) dapat dilihat tidak terjadi pergerakan bakteri S. sonnei yang menandakan bahwa bakteri mempunyai sifat non motil dan media bagian bawah berubah warna dari ungu menjadi kuning yang berarti reaksi dekarboksilasi ornitin negatif. Hasil uji identifikasi biokimia S. sonnei sesuai dengan teori, yaitu bakteri Shigella bersifat nonmotil, memfermentasi glukosa, dan tidak memproduksi H2S (Brooks et al., 2005).

Uji aktivitas antibakteri : metode yang digunakan dalam uji aktivitas antibakteri adalah dilusi padat. Media dengan ekstrak dapat tercampur homogen sehingga kontak bakteri dengan ekstrak terjadi secara langsung dan efektif. Nilai Kadar


(2)

Hambat Minimal (KHM) sebagai parameter konsentrasi terkecil ekstrak yang dapat menghambat pertumbuhan bakteri. Media yang digunakan dalam uji aktivitas antibakteri adalah Mueller Hinton. Ekstrak etanol sukar larut dalam air maka perlu disuspensikan dalam suspending agent yang sesuai. Suspending agent

yang digunakan adalah CMC-Na (Carboxyl Methyl Cellulosum-Natrium) dengan konsentrasi 0,5%. CMC-Na dipilih karena dapat mensuspensikan ekstrak etanol kulit batang kedondong.

Pengujian menggunakan tiga macam kontrol yaitu kontrol media, kontrol pertumbuhan, dan kontrol suspending agent. Kontrol media (K1) hanya berisi media sebagai parameter ada atau tidaknya kontaminan. Kontrol pertumbuhan (K2) berisi media dan bakteri yang bertujuan untuk melihat bakteri dapat tumbuh baik pada media. Kontrol suspending agent (K3) terdiri atas media, suspending agent, dan bakteri yang bertujuan untuk mengetahui apakah suspending agent

mempunyai daya hambat pada bakteri.

Konsentrasi ekstrak etanol kulit batang kedondong yang diujikan pada

Streptococcus mutans dan Shigella sonnei adalah 0,10%, 0,19%, 0,38%, dan 0,75%. Hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol kulit batang kedondong (Spondias pinnata) menunjukkan bahwa sampai konsentrasi 0,75% masih ada pertumbuhan bakteri. Akan tetapi pertumbuhan bakteri pada konsentrasi 0,75% lebih sedikit daripada konsentrasi 0,38%, 0,19%, dan 0,10%. CMC-Na tidak menghambat pertumbuhan bakteri yang ditunjukkan dengan pertumbuhan bakteri pada kontrol suspending agent.

Tabel 1. Hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol kulit batang kedondong terhadap

Streptococcus mutans dan Shigella sonnei

Seri konsentrasi (%) b/v Streptococcus mutans Shigella sonnei 0,10 ++++ ++++

0,19 +++ +++

0,38 ++ ++

0,75 + +

K1 - -

K2 + +

K3 + +

Keterangan: K1 : kontrol media K2 : kontrol pertumbuhan K3 : kontrol suspending agent

(+) : terdapat pertumbuhan bakteri (-) : tidak terdapat pertumbuhan bakteri


(3)

Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa aktivitas antibakteri ekstrak etanol kulit batang kedondong terhadap Streptococcus mutans dan Shigella sonnei yang menggunakan suspending agent CMC Na dengan metode dilusi padat sampai konsentrasi 0,75% atau 7500 µg/ml masih ada pertumbuhan bakteri. Akan tetapi pertumbuhan bakteri pada konsentrasi 0,75% lebih sedikit daripada konsentrasi 0,38%, 0,19%, dan 0,10%. Hal ini berbeda dengan penelitian Chetia dan Gogoi (2011) yang telah membuktikan adanya aktivitas antibakteri fraksi metanol kulit batang kedondong yang berasal dari India dengan pelarut DMSO terhadap bakteri

Bacillus subtilis dan Proteus mirabilis dengan konsentrasi hambat minimum sebesar 128 µg/ml, dan terhadapbakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli dengan konsentrasi hambat minimum sebesar 64 µg/ml dengan metode dilusi padat. Perbedaan hasil penelitian ini mungkin dikarenakan perbedaan penggunaan pelarut atau suspending agent, penyari ekstrak, bakteri, serta asal tanaman kedondong. Penggunaan CMC Na sebagai suspending agent berbeda dengan penggunaan DMSO sebagai pelarut yang dapat melarutkan ekstrak. Akan tetapi Wadhwani et al (2012) dalam penelitiannya membuktikan bahwa DMSO 1% sudah dapat menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus epidermidis dan

Shigella flexneri.

Perbedaan penggunaan bakteri uji juga sangat mempengaruhi aktivitas antibakteri. Etanol yang digunakan sebagai penyari mempunyai tingkat kepolaran yang relatif sama dengan metanol (Seidel, 2005), sehingga tidak ada perbedaan yang signifikan dalam menyari senyawa yang terkandung di dalam serbuk kulit batang kedondong. Perbedaan tempat tumbuh tanaman kedondong juga mempengaruhi kandungan dan aktivitas dari tanaman tersebut, tanaman kedondong dari India terbukti mempunyai aktivitas antibakteri terhadap Bacillus subtilis, Proteus mirabilis, Staphylococcus aureus, dan Escherichia coli. Senyawa yang terkandung dalam kulit batang kedondong yang mempunyai aktivitas terhadap antibakteri tersebut adalah alkaloid, flavonoid, dan polifenol(Chetia dan Gogoi, 2011). Mekanisme alkaloid dalam menghambat pertumbuhan bakteri yaitu dengan cara melisiskan sel dan mengubah morfologi bakteri (Karou et al., 2006), penghambatan bakteri oleh flavonoid dengan cara menghambat fungsi membran sitoplasma dan menghambat sintesis asam nukleat (Chusnie & Lamb, 2005), sedangkan polifenol dapat menyebabkan penghambatan bakteri karena adanya


(4)

ikatan hidrogen dengan enzim mikroba sehingga menghambat metabolisme bakteri (Saravanakumar et al., 2009).

KESIMPULAN

Berdasarkan hasil penelitian yang telah diperoleh maka dapat disimpulkan bahwa ekstrak etanol kulit batang kedondong (Spondias pinnata) menunjukkan adanya aktivitas antibakteri terhadap Streptococcus mutans dan

Shigella sonnei, tetapi nilai Kadar Hambat Minimumnya belum dapat diketahui.

SARAN

Perlu dilakukan penelitian uji antibakteri ekstrak etanol kulit batang kedondong (Spondias pinnata) dengan kadar yang lebih besar terhadap bakteri

Streptococcus mutans dan Shigella sonnei.

DAFTAR ACUAN

Acharyya, S., Dash, K. Gauri., Mondal, S., & Dash, K. Santosh, 2010, Antioxidative and Antimicrobial Study of Spondias Mangifera Willd Root, International Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences , 2 (4), 68-71.

Brooks, G. F., Butel, J. S., dan Morse, S. A., 2005, Mikrobiologi Kedokteran, Edisi 1, 353, 362, Salemba Medika, Jakarta.

Chapel, H., Puel, A., Bernuth, H., Picard, C., dan Casanova, J. L., 2005, Shigella sonnei Meningitis Due to Interleukin-1 Receptor–Associated Kinase–4 Deficiency: First Association with a Primary Immune Deficiency, Clinical Infectious Diseases, 40, 1227-1231.

Chetia, B. & Gogoi, S., 2011, Antibacterial activity of the methanolic extract of stem bark of Spondias pinnata, Moringa oleifera and Alstonia scholaria, Asian Journal of Traditional Medicines, 6 (4), 163-167.

Cushnie, T. P. & Lamb, A. J., 2005,

Antimicrobial activity of flavonoids,

International Journal of Antimicrobial Agents, 26, 343–356.

Erik, P., 2005, Priorities for research for oral health in the 21st Century – the approach of the WHO Global Oral Health Programme, Community Dental Health, 22, 71–74.


(5)

Gould, D. dan Brooker, C., 2003, Mikrobiologi Terapan Untuk Perawat, 17, EGC, Jakarta.

IAI, 2008, ISO Farmakoterapi, 744, 814, Jakarta, PT. IAI-Penerbitan.

Karou, D., Savadogo, A., Canini, A., Yameogo, S., Montesano, C., Simpore, J., Colizzi, V., dan Traore, A. S., 2005, Antibacterial activity of alkaloids from Sida acuta, African Journal of Biotechnology 4 (12), 1452-1457.

Keawsa-ard, S. and Liawruangrath, B., 2009, Antimicrobial Activity of Spondias pinnata Kurz, Pure and Applied Chemistry International Conference,

Thailand.

Muchlisah, F., 2001, Taman Obat Keluarga, 1, Penebar Swadaya, Jakarta.

Murphy, M., 1999, Plant Products as Antimicrobial Agents, Clinical Microbiology Reviews, 12 (4).

Niyogi, S. K., 2005, Shigellosis, The Journal of Microbiology, 43 (2), 133-143. Panda, B.K., Patro, V, J., Mishra, U, S., & Panigrahi, B, K., 2011, Comperative

Study of Anthelmithic Activity Between Acetone and Ethanolic Stem Bark Extracs of Spondias pinnata (Linn.F) Kurz, International Journal of Research in Ayurveda & Pharmacy, 2 (4), 1383-1385.

Pelczar, M. J. dan Chan, E. C. S., 2007, Dasar-Dasar Mikrobiologi, diterjemahkan oleh Hadioetomo, R. S., 19, Penerbit Universitas Indonesia, Jakarta.

Priyanto, 2008, Farmakologi Dasar untuk Mahasiswa Keprawatan dan Farmasi, 83, 86, 87, 90, Leskonfi, Jakarta.

Radji, M., 2010, Buku Ajar Mikrobiologi Panduan Mahasiswa Farmasi dan Kedokteran, 96-97, 201-202, Buku Kedokteran EGC, Jakarta.

Saravanakumar, A., Venkateshwaran, K., Vanitha, J., Ganesh, M., Vasudevan, M., dan Sivakumar, T., 2009, Evaluation Of Antibacterial Actvity, Phenol And Flavonoid Contents Of Thespesia Populnea Flower Extract, Park. J. Pharm. Sci., 22(3), 282-286

Seidel, V., 2005. Initial and Bulk Ekstractuon, New Jersey 9, Humana Press. Spicer, W. J., 2000, Clinical Bacteriology, Mycology and Parasitologi, 199,


(6)

Sureshbabu, J., 2010, Shigella Infection, http://emedicine.medscape.com/ article/968773overview#a0199 (diakses 10 Desember 2011).

Tjay, T. H., & Rahardja, K., 2007, Obat-Obat Penting; Khasiat, Penggunaan dan Efek-Efek Sampingnya, Edisi VI, 61, Jakarta, PT. Gramedia.

Wadhwani, T., Desai, K., Patel, D., Lawani, D., Bahaley, P., Joshi, P., dan Kothari, V., 2009, Effect of various solvents on bacterial growth in context of determining MIC of various antimicrobials, The Internet Journal of Microbiology 1 (7), DOI: 10.5580/b43.


Dokumen yang terkait

Uji Sitotoksik Ekstrak Etanol Kulit Batang Tanjung (Mimusopsi cortex) Terhadap Sel T47D

1 62 99

Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Dan Beberapa Fraksi Daun Ekor Naga (Rhaphidophora pinnata (L.f.) Schott) Terhadap Bakteri Streptococcus mutans Dan Pseudomonas aeruginosa

17 99 87

AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK ETANOL KULIT BATANG KEDONDONG (Spondias pinnata) TERHADAP BAKTERI Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Kulit Batang Kedondong (Spondias pinnata) Terhadap Bakteri Staphylococcus epidermidis Dan Klebsiella pneumonia.

0 2 13

PENDAHULUAN Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Kulit Batang Kedondong (Spondias pinnata) Terhadap Bakteri Staphylococcus epidermidis Dan Klebsiella pneumonia.

0 1 7

AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK ETANOL KULIT BATANG KEDONDONG (Spondias pinnata) TERHADAP BAKTERI Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Kulit Batang Kedondong (Spondias pinnata) Terhadap Bakteri Staphylococcus epidermidis Dan Klebsiella pneumonia.

0 1 15

AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK ETANOL KULIT BATANG KEDONDONG (Spondias pinnata) TERHADAP Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Kulit Batang Kedondong (Spondias pinnata) Terhadap Streptococcus mutans Dan Shigella sonnei.

0 0 12

PENDAHULUAN Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Kulit Batang Kedondong (Spondias pinnata) Terhadap Streptococcus mutans Dan Shigella sonnei.

0 1 7

AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK ETANOL KULIT BATANG KEDONDONG (Spondias pinnata) TERHADAP BAKTERI Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Kulit Batang Kedondong (Spondias pinnata) Terhadap Bakteri Shigella dysenteriae dan Staphylococcus saprophyticus.

0 0 12

PENDAHULUAN Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Kulit Batang Kedondong (Spondias pinnata) Terhadap Bakteri Shigella dysenteriae dan Staphylococcus saprophyticus.

1 2 8

AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK ETANOL KULIT BATANG KEDONDONG (Spondias pinnata) TERHADAP BAKTERI Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Kulit Batang Kedondong (Spondias pinnata) Terhadap Bakteri Shigella dysenteriae dan Staphylococcus saprophyticus.

0 0 14