15 lebih besar dan sedikit lebih pucat dibandingkan dengan limfosit kecil Junqueira
dan Caneiro, 2005. Limfosit memiliki fungsi utama yaitu memproduksi antibodi sebagai respon terhadap benda asing yang difagosit makrofag Tizard,
2000. Kebanyakan sel limfosit berada pada jaringan limfoid dan akan
bersirkulasi kembali secara konstan ke pembuluh darah Colville dan Bassert, 2008.
Limfosit dapat digolongkan menjadi dua yaitu limfosit B dan limfosit T. Sel limfosit B akan berdiferensiasi menjadi sel plasma yang berperan dalam
respon imunitas humoral untuk memproduksi antibodi, sedangkan limfosit T akan berperan dalam respon imunitas seluler Junqueira dan Caneiro, 2005.
b. Monosit
Monosit adalah leukosit berukuran terbesar, berdiameter 15 - 20 µm dengan populasi berkisar antara 2 - 8 dari jumlah leukosit total. Sitoplasma
monosit berwarna biru abu-abu pucat dan berinti lonjong seperti ginjal atau tapal kuda Junqueira dan Caneiro, 2005. Monosit dibentuk di sumsum tulang, dan
setelah dewasa akan bermigrasi dari darah ke jaringan perifer. Monosit akan berdiferensiasi menjadi berbagai subtipe jaringan tergantung dari proses inflamasi
yang terjadi. Fungsi monosit adalah membersihkan sel debris yang dihasilkan dari proses peradangan atau infeksi, memproses beberapa antigen yang menempel
pada membran sel limfosit menjadi lebih antigenik sehingga dapat mudah dicerna oleh monosit dan makrofag dan menghancurkan zat asing yang masuk ke dalam
tubuh Colville dan Bassert, 2008.
Universitas Sumatera Utara
16
2.5 Ovalbumin Putih Telur
Ovalbumin OVA adalah bahan yang dipakai pada banyak penelitian, dapat merangsang pembentukan respon imun ke arah Th2 dominan. Ovalbumin
merupakan protein utama yang berasal dari putih telur ayam berupa glikoprotein dengan berat molekul 45.000 dalton Sugimoto, 1999.
2.6 Alergi
Alergi adalah suatu keadaan hipersensitivitas yang diinduksi oleh pajanan suatu antigen tertentu yang menimbulkan reaksi imunologi yang berbahaya pada
pajanan berikutnya. World Allergy Organization WAO menunjukkan prevalensi alergi terus meningkatkan dengan angka 30-40 populasi dunia. Di Indonesia
sendiri, walaupun belum ada angka pastinya, namun beberapa peneliti memperkirakan bahwa peningkatan kasus alergi di Indonesia mencapai 30
pertahunnya. Anak usia sekolah lebih 40 mempunyai 1 gejala alergi, 20 mempunyai asma, 6 juta mempunyai dermatitis alergi kulit. Penderita hay fever
lebih dari 9 juta orang Anindya, 2013. Alergi terjadi melalui tahap-tahap aktivasi sel-sel imunokompeten, aktivasi
sel-sel struktural dan aktivasi sel-sel mast, eusinofil dan basofil, reaksi mediator dengan target organ dan tahap timbulnya gejala Kapsenberg dan Kalinski, 2003.
Alergen yang berhasil masuk tubuh akan diproses oleh antigen presenting cells APC. Peptida alergen yang dipresentasikan oleh APC menginduksi aktivasi
limfosit T. aktivasi limfosit T oleh APC yang memproses alergen akan mengaktivasi limfosit Th2 untuk memproduksi sitokin-sitokinnya Kapsenberg
dan Kalinski, 2003.
Universitas Sumatera Utara
17 Reaksi hipersensitivitas meliputi sejumlah peristiwa auto-imun dan alergi
serta merupakan kepekaan berbeda terhadap suatu antigen eksogen atas dasar proses imunologi. Pada hakekatnya reaksi imun tersebut walaupun bersifat
merusak, berfungsi melindungi organisme terhadap zat-zat asing yang menyerang tubuh. Bila suatu protein asing masuk berulangkali kedalam aliran darah seorang
yang hipersensitif, maka limfosit B akan membentuk antibodi IgE. IgE mengikat diri pada membran sel mast tanpa menimbulkan gejala. Apabila kemudian antigen
yang sama atau yang mirip rumus bangunnya memasuki darah lagi, maka IgE akan mengenali dan mengikat padanya. Hasilnya adalah suatu reaksi alergi akibat
pecahnya membran sel mast. Sejumlah zat perantara dilepaskan, yakni histamin bersama serotonin, bradikinin dan asam arakidonat, yang kemudian diubah
menjadi prostaglandin dan leukotrien. Zat-zat ini menarik makrofag dan neutrofil ketempat infeksi untuk memusnahkan sel asing tersebut. Disamping itu juga
mengakibatkan beberapa gejala antara lain bronkokonstriksi, vasodilatasi dan pembengkakan jaringan sebagai reaksi terhadap masuknya antigen. Mediator
tersebut secara langsung atau melalui susunan saraf otonom menimbulkan bermacam-macam penyakit alergi penting, seperti asma, rinitis alergi hay fever
dan eksim. Gejala reaksi alergi tergantung pada lokasi dimana reaksi alergen-antibodi
berlangsung, misalnya di hidung rinitis alergi, dikulit eksim, urtikaria = biduran, kaligata, mukosa mata conjunctivitis atau di bronchi serangan asma.
Gejala tersebut juga dapat timbul bersamaan waktu diberbagai tempat, misalnya pada asma, demam merang dan eksim.
Universitas Sumatera Utara
18
Penggolongan
Reaksi alergi dapat digolongkan berdasarkan prinsip kerjanya dalam 4 tipe hipersensitivitas, yakni tipe I-IV.
Tipe I
Hipersensitivitas tipe I merupakan suatu respon jaringan yang terjadi secara cepat secara khusus hanya dalam bilangan menit setelah terjadi interaksi
antaraalergen dengan antibodi IgE yang sebelumnya berikatan pada permukaan sel mast dan basofil pada pejamu yang tersensitisasi. Bergantung pada jalan
masuknya hipersensitivitas tipe I dapat terjadi sebagai reaksi lokal yang benar- benar mengganggu misalnya rinitis alergi, asma dan anafilaksis.
Banyak reaksi tipe I yang terlokalisasi mempunyai dua tahap yang ditentukan secara jelas yaitu respon awal, ditandai dengan vasodilatasi, kebocoran
vaskular dan spasme otot polos yang biasanya muncul dalam rentang waktu 5 hingga 30 menit setelah terpajan oleh suatu alergen dan menghilang setelah 60
menit dan kedua reaksi fase lambat yang muncul 2 hingga 8 jam kemudian dan berlangsung selama beberapa hari. Reaksi fase lambat ini ditandai dengan
infiltrasi eusinofil serta sel peradangan akut dan kronis lainnya yang lebih hebat pada jaringan dan juga ditandai dengan penghancuran jaringan dalam bentuk
kerusakan sel epitel mukosa.Sel mast dan basofil merupakan inti dari terjadinya hipersensitivitas tipe I Robbins, 2007.
Tipe II
Hipersensitivitas tipe II diperantarai oleh antibodi yang diarahkan untuk melawan antigen target pada permukaan sel atau komponen jaringan lainnya.
Antigen tersebut dapat merupakan molekul intrinsik normal sebagai membran sel atau matriks ekstraseluler atau dapat merupakan antigen eksogen yang diadsorbsi
Universitas Sumatera Utara
19 misalnya metabolit obat. Komplemen dapat memerantarai hipersensitivitas tipe II
melalui dua mekanisme yaitu lisis langsung atau opsonizasi. Pada sitotoksisitas yang diperantarai komplemen, antibodi yang terikat pada antigen permukaan sel
menyebabkan fiksasi komplemen pada permukaan sel yang selanjutnya diikuti lisis melalui kompleks penyerang membran. Sel yang diselubungi oleh antibodi
dan fragmen komplemen C3b teropsonisasi rentan pula terhadap fagositosis. Sel darah dalam sirkulasi adalah yang paling sering dirusak melalui mekanisme ini,
meskipun antibodi yang terikat pada jaringan yang tidak dapat difagosit dapat menyebabkan fagositosis gagal. Hal ini terjadi karena adanya pelepasan enzim
lisosom eksogen dan metabolit toksik misalnya sindrom Goodpasture. Secara klinis, reaksi yang diperantarai oleh antibodi terjadi pada keadaan reaksi transfusi,
anemia hemolitik dan reaksi obat Robbins, 2007.
Tipe III
Hipersensitivitas tipe III diperantarai oleh pengendapan kompleks antigen- antibodi, diikuti dengan aktivasi komplemen dan akumulasi leukosit
polimorfonuklir.Kompleks imun dapat melibatkan antigen eksogen seperti bakteri dan virus atau antigen endogen seperti DNA. Kompleks antigen-antibodi
terbentuk selama berlangsungnya berbagai respon imun dan menunjukkan mekanisme pembersihan antigen yang normal. Kompleks imun patogen terbentuk
dalam sirkulasi dan kemudian mengendap dalam jaringan ataupun terbentuk di daerah ekstravaskular tempat antigen tersebut tertanam. Tempat pengendapan
kompleks imun yang disukai adalah ginjal, sendi, kulit, jantung dan pembuluh darah kecil, contohnya pada serum sickness akut penyakit kompleks imun
sistemik Robbins, 2007.
Universitas Sumatera Utara
20
Tipe IV
Hipersensitivitas tipe IV disebut juga imunitas seluler yang merupakan mekanisme utama respons terhadap berbagai macam mikroba, termasuk patogen
intrasel seperti Mycobacterium tuberculosis dan virus serta agen ekstrasel seperti fungi, protozoa dan parasit. Namun proses ini dapat pula menyebabkan kematian
sel dan jejas jaringan, baik akibat pembersihan infeksi yang normal maupu sebagai respon terhadap antigen sendiri pada penyakit autoimun. Contoh lain
reaksi hipersensitivitas seluler adalah sesuatu yang disebut dengan sensitivitas kulit kontak terhadap bahan kimiawi seperti poison dan penolakan graft. Oleh
karena itu hipersensitivitas tipe VI diperantarai oleh sel T tersensitisasi secara khusus bukan antibodi.
Bentuk alergi tipe I sd III berkaitan dengan imunoglobulin dan imunitas humoral cairan tubuh, artinya ada hubungan dengan plasma. Hanya tipe IV
berdasarkan imunitas seluler limfosit T Robbins, 2007.
Universitas Sumatera Utara
21
BAB III METODE PENELITIAN
Metode penelitian ini dilakukan secara eksperimental yaitu metode yang dipergunakan oleh peneliti terhadap obyeknya dan biasanya dilakukan di
laboratorium dengan mengadakan berbagai eksperimen untuk menemukan kebenaran atas pendapat orang lain tentang sesuatu, meliputi pengumpulan,
pengolahan bahan, pembuatan ekstrak etanol daun nimba, penyiapan hewan percobaan mencit, pengujian efektivitas antialergi pada hewan percobaan. Data
hasil penelitian dianalisis secara ANAVA dua arah two way anava dan dilanjutkan dengan uji beda Tukey HSD menggunakan program SPSS Statistical
and Product Service Solution versi 17.
3.1 Alat dan Bahan 3.1.1 Alat-alat penelitian
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini meliputi alat-alat gelas laboratorium, perkolator, blender, rotary evaporator, kandang mencit, lemari
pengering, neraca listrik, mikroskop Boeco, neraca hewan Presica Geniweigher GW-1500, oral sonde, pipet thoma leukosit dan kamar hitung improved Neubauer
hemocytometer Marienfeld, kaca penutup, kaca preparat, seperangkat alat destilasi penetapan kadar air, tanur dan spuit 1ml Terumo.
3.1.2 Bahan-bahan penelitian
Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian ini meliputi daun nimba, etanol 70, toluena, akuades, asam klorida encer, kloroform, kloralhidrat, putih
telur ayam ras, larutan salin, larutan Turk, larutan Giemsa dan buffer fosfat.
Universitas Sumatera Utara
