Efektivitas Pengendalian Salmonella sp dengan Cacing Tanah (Lumbricus rubellus) pada Ayam Broiler
EFEKTIVITAS PENGENDALIAN Salmonella sp. DENGAN CACING
TANAH (Lumbricus rubellus)
PADA AYAM BROILER
SKRIPSI
OLEH :
SUPRAYOGA
090306011
PROGRAM STUDI PETERNAKAN
FAKULTAS PERTANIAN
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
2014
Universitas Sumatera Utara
EFEKTIVITAS PENGENDALIAN Salmonella sp. DENGAN CACING
TANAH (Lumbricus rubellus)
PADA AYAM BROILER
SKRIPSI
OLEH :
SUPRAYOGA
090306011
Skripsi sebagai salah satu syarat mendapatkan gelar sarjana di
Program Studi Peternakan Fakultas Pertanian
Universitas Sumatera Utara
PROGRAM STUDI PETERNAKAN
FAKULTAS PERTANIAN
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
2014
Universitas Sumatera Utara
Judul penelitian
Nama
NIM
Program Studi
: Efektivitas Pengendalian Salmonella sp dengan Cacing
Tanah (Lumbricus rubellus) pada Ayam Broiler
: Suprayoga
: 090306011
: Peternakan
Disetujui Oleh,
Komisi Pembimbing
Dr. Ir. Ma’ruf Tafsin., M.Si
Ketua
Ir. Tri Hesti Wahyuni., M.Sc
Anggota
Mengetahui,
Dr. Ir Ma’ruf Tafsin., M.Si.
Ketua Program Studi
Tanggal Lulus:
Universitas Sumatera Utara
ABSTRAK
SUPRAYOGA.2014. Efektivitas Pengendalian Salmonella sp. dengan Cacing
Tanah (Lumbricus Rubellus) pada Ayam Broiler. Dibimbing oleh MA’RUF
TAFSIN dan TRI HESTI WAHYUNI.
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui tingkat pengendalian
Salmonella sp dengan olahan cacing tanah dalam bentuk ekstrak, tepung dan
bubur cacing tanah. Tahapan yang digunakan dalam penelitian adalah: Tahap I
mengimbuhkan cacing tanah kedalam media agar, Tahap II uji sensitifitas
salmonella sp. Tahap III uji tantang pada 20 ekor ayam broiler, penelitian ini
mengunakan rancangan acak lengkap (RAL) dengan lima perlakuan yaitu kontrol
(P0), antibiotik komersil (P1), ekstrak (P2), tepung (P3) dan bubur (P4). Hasil
penelitian pada tahap I menunjukan bahwa pertumbuhan koloni salmonella sp
dapat diturunkan dengan olahan cacing tanah. Tahap II memiliki hasil penelitian
salmonella sp mempunyai tingkat sensitifitas yang tinggi terhadap olahan cacing
tanah. Tahap III uji tantang pada ayam broiler bahwa olahan cacing tanah dapat
mengendalikan pertumbuhan salmonella sp secara signifikan, dari hasil penelitian
dapat disimpulan bahwa Salmonella sp dapat dikendalikan dengan olahan cacing
tanah dan ekstrak cacing tanah merupakan olahan terbaik.
Kata kunci: Cacing Tanah, Salmonella Sp, Ayam Broiler, Pengendalian
Universitas Sumatera Utara
ABSTRACT
SUPRAYOGA.2014. Effectivity Controled of Salmonella sp. with Earthworm
(Lumbricus Rubellus) in Broiler Chicken. Under supervised by MA'RUF TAFSIN
and TRI HESTI WAHYUNI.
This study aims to determine the effectivity of eatrhworm product to
control Salmonella sp. The product of earthworms were give in the front of
extracts, flour and porridge earthworms. The reserch composed of there stage,
frist Stages were added earthworms in agar medium, the secound stage were
determined the sensitivity against salmonella sp and third stage were challenge
test use 20 broiler chickens, this study used a completely randomized design
(CRD) composed of control (P0), commercial antibiotics (P1), extract (P2), flour
(P3) and pulp (P4). Challenge test used salmonella (106CFU/gird) at the age 12
days. The results of the first stage showed that the growth of Salmonella sp
colonies can be decreased by earthworms product. At the second stage showed
that Salmonella sp had high sensitivity. The result at third stage show there
earthworm product had ability to control salmonella sp in broiler chicken, it is
concluded that salmonella sp processed can be controlled by earthworm product
and extract is product showed the best product
Keywords: Earthworm, Salmonella Sp, Broiler Chickens, Control
Universitas Sumatera Utara
RIWAYAT HIDUP
Penulis dilahirkan di Lubuk Pakam pada tanggal 14 juli 1991 dari Bapak
Suprayoga dan Ibu Suparni. Penulis merupakan anak pertama dari empat
bersaudara.
Tahun 2009 penulis lulus dari MAS DA dan pada tahun yang sama penulis
masuk ke Fakultas Pertanian Universitas Sumatera Utara melali jalur (Prestasi
Minat dan Pelajar ) PMP. Penulis memilih program studi peternakan.
Selama mengikuti perkuliahan, penulisa aktif sebagai anggota Ikatan
Mahasiswa Peternakan (IMAPET). Selain itu penulis pernah menjadi anggota
Himpunan Mahasiswa Islam Peternakan (HIMMIP). Penulis melakukan Praktek
Kerja Lapangan (PKL) di desa Pardugul Kecamatan Pangururan, Kabupaten
Samosir dimulai bulan Juli sampai dengan bulan September 2012.
Universitas Sumatera Utara
KATA PENGANTAR
Puji dan syukur penulis panjatkan kehadirat Allah SWT atas limpahan
taufik dan hidayah hingga penulis dapat menyelesaikan tulisan ini yang berjudul
“Efektivitas Pengendalian Salmonella sp dengan Cacing Tanah (Lumbricus
rubellus) pada Ayam Broiler”
Penulis mengucapkan banyak terima kasih kepada Bapak Ma’ruf Tafsin
selaku ketua komisi pembimbing dan Ibu Tri Hesti Wahyuni selaku anggota
komisi pembimbing yang telah memberikan arahan dalam menyelesaikan
penulisan skripsi ini dan semua pihak yang ikut membantu. Skripsi ini diharapkan
dapat membantu dan mendukung dalam pelaksanaan penelitian dan sebagai
petunjuk dalam penyusunan skripsi serta ilmu pengetahuan bidang peternakan
khususnya.
Penulis mengetahui masih banyak kekurangan dan kehilafan dalam
penulisan skripsi ini. Penulis mengharapkan kritik dan saran yang bersifat
membangun guna memperbaiki skripsi ini sehingga pelaksanaan penelitian
terwujud sesuai dengan kaidah-kaidah ilmiah yang berlaku.
Universitas Sumatera Utara
DAFTAR ISI
............................................................................................................................. Hal.
ABSTRAK ..........................................................................................................
i
ABSTRACT ........................................................................................................
ii
RIWAYAT HIDUP ............................................................................................. iii
KATA PENGANTAR ........................................................................................ iv
DAFTAR ISI ....................................................................................................... vi
DAFTAR GAMBAR .......................................................................................... viii
PENDAHULUAN
Latar Belakang ....................................................................................................
Tujuan Penelitian ................................................................................................
Kegunaan Penelitian............................................................................................
Hipotesis Penelitian.............................................................................................
1
2
2
2
TINJAUAN PUSTAKA
Salmonellosis .....................................................................................................
Cacing tanah lumbricus rubellus.........................................................................
Pembuatan tepung cacing tanah l. rubellus .........................................................
Penyiapan larutan tepung cacing tanah L.rubellus ..............................................
Pengisian kertas disk ...........................................................................................
3
7
8
8
9
BAHAN DAN METODE PENELITIAN
Tempat Dan Waktu Penelitian ............................................................................
Tahap I penambahan cacing tanah dalam media cair..........................................
Bahan .......................................................................................................
Alat .........................................................................................................
Metode .....................................................................................................
Tahap II uji sensitivitas salmonella Sp. Dengan penambahan cacing tanah .......
Bahan ......................................................................................................
Alat .........................................................................................................
Metode .....................................................................................................
Tahap III uji tantang menggunakan ayam broiler ...............................................
Bahan ......................................................................................................
Alat .........................................................................................................
Metode ....................................................................................................
Metode penelitian ................................................................................................
Pelaksanaan penelitian ........................................................................................
10
10
10
10
10
11
11
11
11
12
12
12
12
13
15
HASIL DAN PEMBAHASAN
Tahap I. Isolasi Salmonella sp ........................................................................... 16
Tahap ii. Uji luas zona bening ............................................................................ 18
Universitas Sumatera Utara
Tahap iii. Uji tantang salmonella sp dengan olahan cacing tanah pada ayam broiler
................................................................................................................. 20
KESIMPULAN DAN SARAN
Kesimpulan ........................................................................................................ 28
Saran ................................................................................................................. 28
DAFTAR PUSTAKA ......................................................................................... ix
LAMPIRAN ...................................................................................................... xi
Universitas Sumatera Utara
DAFTAR GAMBAR
No.
Hal.
1. Gambar 1. Kerangka metode penelitian efektivitas pengendalian salmonella Sp.
dengan olahan cacing tanah pada ayam broiler................................................... 14
2. Gambar 2. Alur pelaksanaan penelitian in vitro.................................................. 15
3. Gambar 3. Alur pelaksanaan penelitian in vivo .................................................. 15
4. Gambar 4. Tahap I isolat salmonela ................................................................... 16
5. Gambar 5. Tahap II luas zona bening ................................................................ 18
6. Gambar 6. Akumulasi rataan pertumbuhan salmonella sp ................................ 27
7. Gambar 7. Alur pembuatan ekstrak cacing tanah L. rubellus ............................. xi
8. Gambar 8. Alur pembuatan tepung cacing tanah L. rubellus.............................. xii
9. Gambar 9. Alur peambuatan bubur cacing tanah L. rubellus ............................. xiii
Universitas Sumatera Utara
ABSTRAK
SUPRAYOGA.2014. Efektivitas Pengendalian Salmonella sp. dengan Cacing
Tanah (Lumbricus Rubellus) pada Ayam Broiler. Dibimbing oleh MA’RUF
TAFSIN dan TRI HESTI WAHYUNI.
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui tingkat pengendalian
Salmonella sp dengan olahan cacing tanah dalam bentuk ekstrak, tepung dan
bubur cacing tanah. Tahapan yang digunakan dalam penelitian adalah: Tahap I
mengimbuhkan cacing tanah kedalam media agar, Tahap II uji sensitifitas
salmonella sp. Tahap III uji tantang pada 20 ekor ayam broiler, penelitian ini
mengunakan rancangan acak lengkap (RAL) dengan lima perlakuan yaitu kontrol
(P0), antibiotik komersil (P1), ekstrak (P2), tepung (P3) dan bubur (P4). Hasil
penelitian pada tahap I menunjukan bahwa pertumbuhan koloni salmonella sp
dapat diturunkan dengan olahan cacing tanah. Tahap II memiliki hasil penelitian
salmonella sp mempunyai tingkat sensitifitas yang tinggi terhadap olahan cacing
tanah. Tahap III uji tantang pada ayam broiler bahwa olahan cacing tanah dapat
mengendalikan pertumbuhan salmonella sp secara signifikan, dari hasil penelitian
dapat disimpulan bahwa Salmonella sp dapat dikendalikan dengan olahan cacing
tanah dan ekstrak cacing tanah merupakan olahan terbaik.
Kata kunci: Cacing Tanah, Salmonella Sp, Ayam Broiler, Pengendalian
Universitas Sumatera Utara
ABSTRACT
SUPRAYOGA.2014. Effectivity Controled of Salmonella sp. with Earthworm
(Lumbricus Rubellus) in Broiler Chicken. Under supervised by MA'RUF TAFSIN
and TRI HESTI WAHYUNI.
This study aims to determine the effectivity of eatrhworm product to
control Salmonella sp. The product of earthworms were give in the front of
extracts, flour and porridge earthworms. The reserch composed of there stage,
frist Stages were added earthworms in agar medium, the secound stage were
determined the sensitivity against salmonella sp and third stage were challenge
test use 20 broiler chickens, this study used a completely randomized design
(CRD) composed of control (P0), commercial antibiotics (P1), extract (P2), flour
(P3) and pulp (P4). Challenge test used salmonella (106CFU/gird) at the age 12
days. The results of the first stage showed that the growth of Salmonella sp
colonies can be decreased by earthworms product. At the second stage showed
that Salmonella sp had high sensitivity. The result at third stage show there
earthworm product had ability to control salmonella sp in broiler chicken, it is
concluded that salmonella sp processed can be controlled by earthworm product
and extract is product showed the best product
Keywords: Earthworm, Salmonella Sp, Broiler Chickens, Control
Universitas Sumatera Utara
PENDAHULUAN
Latar Belakang
Salmonellosis merupakan penyakit menular yang bersifat zoonosis dan
termasuk food borne disease yaitu suatu penyakit yang diderita oleh seseorang
akibat mengkonsumsi makanan yang telah terkontaminasi oleh mikroba patogen.
Kejadian salmonellosis pada manusia paling sering dilaporkan akibat tertular
produk-produk asal ternak unggas seperti telur dan daging yang terkontaminasi.
Penyakit salmonellosis merupakan penyakit unggas yang disebabkan oleh
infeksi bakteri Salmonella sp. Penyakit salmonellosis dapat menyebabkan
kematian jika menyerang unggas muda pada umur 3 minggu atau kurang dengan
tingkat mortalitas antara 20–80% (Porter, 1998; Purnomo, 2004). Salmonella sp
adalah bakteri gram negatif yang dapat menekan sistem kekebalan tubuh unggas
(immuno-suppression) dan menyebabkan kematian ayam pedaging (Shivaprasad,
2003; Mcmullin, 2004).
Belakangan ini, pengendalian penyakit salmonellosis hanya mengunakan
antibiotik. Antibiotik diberikan sebagai bahan imbuhan penyusun ransum yang
bertujuan Antibiotic Growth Promotor (AGP) efek pengunaan antibiotik yang
terus menerus dan pengunaanya yang tidak bijak akan menyebabkan mikroba
resisten. Berbagai upaya dilakukan untuk mencari pengganti antibiotik sebagai
AGP karena semakin meningkatnya kecenderungan akan permintaan produk
peternakan yang sehat, aman, dan bebas dari residu berbahaya. Salah satunya
adalah dengan pemanfaatan bahan alam yang relatif aman untuk mencegah
penyakit. Cacing tanah yang mengandung protein tinggi dan asam amino lengkap
menjadi salah satu alternatif yang potensial untuk dijadikan imbuhan pakan.
Universitas Sumatera Utara
Cacing tanah (Lumbricus rubellus) memiliki kadar protein kasar 65,63%
dan asam amino prolin sekitar 15% dari total 62 asam amino. (L. rubellus)
terbukti mempunyai daya antimikroba dengan spektrum luas. Peptida Lumbricin I
dilaporkan sebagai senyawa yang bertanggung jawab atas aktivitas antimikroba
spektrum luas pada cacing tanah (L. rubellus) (Cho, 1998).
Pengolahan cacing tanah memiliki berapa cara seperti pembuatan tepung
cacing tanah, bubur cacing tanah segar dan ekstraksi cacing tanah, pengolahan
cacing tanah tersebut memiliki kekurangan dan kelebihan sehingga menimbulkan
minat penulis untuk membandingkan dan meneliti dari efektifitas pengendalian
salmonella dengan berbagai pengolahan cacing tanah (L. rubellus).
Tujuan Penelitian
Rangkaian percobaan dalam penelitian bertujuan untuk mengetahui tingkat
pengendalian pertumbuhan salmonella sp yang ditinjau dari total counting
berdasarkan CFU (colony farming unit), uji sensitifitas dan uji tantang dalam
perbandingan tingkat keefektifan dari pengolahan cacing tanah (L. rubellus)
dengan cara pembuatan bubur cacing tanah, tepung cacing tanah dan hasil ekstrak
cacing tanah terhadap Salmonella sp.
Hipotesis Penelitian
Berbagai olahan cacing tanah dapat mengendalikan pertumbuhan
Salmonella sp pada ayam broiler.
Kegunaan Penelitian
Memberikan informasi bagi yang membutuhkan dalam mengetahui
pengolahan cacing tanah yang tepat sebagai pengendali Salmonella sp.
Universitas Sumatera Utara
TINJAUAN PUSTAKA
Salmonellosis
Populasi ayam broiler semakin meningkat, yaitu dari tahun 2007
adalah 891.659.345
ekor menjadi 1.075.884.785 ekor di tahun
2008
(Direktorat Jenderal Peternakan, 2008). Ayam broiler merupakan jenis ayam ras
unggul yang mampu berproduksi dalam waktu singkat dan efisien dalam
mengubah makanan menjadi daging karena memiliki nilai konversi ransum yang
rendah.
Salah satu kendala yang dihadapi dalam pemeliharaan ayam broiler adalah
rentan terhadap penyakit. Salmonellosis merupakan penyebab penyakit yang
sering muncul dalam peternakan dan disebabkan oleh bakteri gram negatif seperti
Salmonella typhimurium dan Salmonella enteritidis yang bersifat infeksius dan
septikemik. Kerugian yang dihadapi secara ekonomi oleh peternak akibat infeksi
Salmonella sp ini diantaranya adalah tingkat kematian yang tinggi (sampai 80%)
dan pertambahan bobot badan ayam broiler yang rendah. Selain itu, infeksi
Salmonella sp ini dapat ditransmisikan pada bahan pangan (telur dan daging
unggas) sehingga membahayakan kesehatan manusia. Penyakit Salmonellosis
rentan terjadi pada ayam berumur 7-21 hari, pada ayam umur lebih dari tiga
minggu jarang menimbulkan gejala klinis karena memiliki kekebalan tubuh yang
lebih baik tetapi dapat menjadi pembawa (carrier) yang dapat menularkan
penyakit pada manusia (Rofiq, 2003).
Salmonella sp adalah salah satu serovar atau serotipe dari subspesies
Salmonella
dan
termasuk
dalam
anggota
famili
Enterobacteriaceae
Universitas Sumatera Utara
(Office International Des Epizooties, 2000). Habitat utamanya berada dalam
saluran pencernaan hewan ternak dan manusia (Portillo, 2000).
Salmonella sp ditemukan pada spesies unggas dan dengan mudah dapat
ditularkan ke manusia melalui telur atau daging ayam yang terkontaminasi
(Agricultural Research Service, 2002). Infeksi bakteri ini pada hewan atau
manusia dapat mengakibatkan penyakit dengan gangguan pada bagian saluran
pencernaan atau gastroenteritis dan penyakit akibat infeksi Salmonella sp disebut
salmonellosis (Serbeniuk, 2002).
Induk ayam petelur atau pedaging yang terinfeksi Salmonella sp secara
transovarial dapat menularkan bakteri tersebut melalui produk telurnya
(Duguid Dan North, 1991; Miyamoto et al.,, 1998). Ayam petelur dapat terinfeksi
S. enteritidis dari flok ayam pembibit yang terinfeksi, pakan yang terkontaminasi
atau melalui vektor rodensia. Selain itu, burung puyuh dan burung liar juga dapat
bertindak
sebagai
sumber
penularan
Salmonella
sp
secara
horizontal
(Davison et al.,1995; Gast, 1997)
Patogenesis
Habitat bakteri salmonella adalah di dalam alat pencernaan manusia,
hewan, dan bangsa burung. Oleh karena itu cara penularannya adalah melalui
mulut karena makan/minum bahan yang tercemar oleh keluaran alat pencernaan
penderita. Salmonella sp akan berkambang biak di dalam alat pencernaan
penderita, sehingga terjadi radang usus (enteritis). Radang usus serta
penghancuran Lamina propria alat pencernaan oleh penyusupan (proliferasi)
Salmonella sp inilah yang menimbulkan diare, karena Salmonella sp
menghasilkan racun yang disebut Cytotoxin dan Enterotoxin (Dharmojono, 2001).
Universitas Sumatera Utara
Salmonella sp mungkin terdapat pada makanan dalam jumlah tinggi, tetapi
tidak selalu menimbulkan perubahan-perubahan dalam hal warna, bau maupun
rasa dari makanan tersebut. Semakin tinggi jumlah salmonella di dalam suatu
makanan, semakin besar timbulnya gejala infeksi yang mengkonsumsi makanan
tersebut dan semakin cepat waktu inkubasi sampai timbulnya gejala infeksi.
Makanan-makanan yang sering terkontaminasi oleh Salmonella sp yaitu telur dan
hasil olahannya, ikan dan hasil olehannya, daging ayam, daging sapi serta susu
dan hasil olahannya seperti es krim dan keju (Supardi dan Sukamto, 1999).
Jay (2000) menjelaskan bahwa khusus untuk S. enteritidis dapat
ditemukan di dalam telur dan ovarium ayam yang bertelur, dengan kemungkinan
jalur penularannya sebagai berikut: (1) transovarium; (2) translokasi dari
peritonium ke kantong kuning telur atau oviduk; (3) mempenetrasi kerabang telur
sewaktu telur bergulir menuju kloaka; (4) pencucian telur; (5) pengolahan
makanan. Salmonella sp akan berpenetrasi ke dalam telur dan terperangkap di
dalam membran, kemudian akan diingesti oleh embrio. Habitat utama
Salmonella sp pada ayam adalah saluran pencernaan, termasuk caecum. Apabila
Salmonella sp ada di dalam tubuh ayam, maka ayam akan bertindak sebagai
carrier sepanjang hidupnya.
Pengendalian Salmonella
Pengobatan salmonellosis acap kali mengunakan kloramfenikol, obat ini
digunakan sejak tahun 1948 dan sampai saat ini masih digunakan sebagai obat
pilihan di Indonesia khususnya di RSUD Dr. Soetomo Surabaya dan
RSU Dr. Saiful Anwar Malang, karena efektvitasnya terhadap Salmonella typhi
masih tinggi disamping harga obat yang relatif murah (Musnelina, 2004). Dari
Universitas Sumatera Utara
kajian tingkat molekuler dikemukakan bahwa bakteri Salmonella typhi menjadi
resisten terhadap Kloramfenikol akibat adanya plasmid yang memproduksi enzim
Chloramphenicol Acetyltransferase (CAT) yang mengaktivasi Kloramfenikol
(Balbi, 2004). Hal ini membuat para ahli mencari alternatif obat lain yang terbaik
untuk demam tifoid antara lain Seftriakson (Musnelina, 2004).
Tabel 1. Frekuensi dan Persentase Respon Sensitivitas Antibiotik
Jenis Anti Biotik
Frekuensi Sensitiv Antibiotik
Jumlah
Presentase Sensitiv Antibiotik
Jumlah
Amikasina
Sensitif
16
Intermediet
5
Resisten
11
32
Sensitif
50
Intermediet
15.6
Resisten
34.4
100
Amoksilina
8
0
24
32
25
0
75
100
Amoksisilinasama
14
9
9
32
43.8
28.1
28.1
100
Klavulanata
9
3
20
32
28.1
9,4
62.5
100
Seftriaksona
9
1
22
32
28.1
3.1
68.8
100
Sefotaksima
Siprofloksasin
28
1
3
32
87.5
3.1
9.4
100
a
31
0
1
32
96.9
0
3.1
100
a
15
1
16
32
46.9
3.1
50
100
18
6
28
52
34
10
28
100
41
7
4
52
79
14
4
100
41
11
0
52
79
21
0
100
Kloromfenikol
Ampisilin
b
b
Sefikasim
Azitromosin
b
Keterangan :
a
b
Suswanti dan Ayu di RSUD Dr. Sutomo (2009)
Hartoyo et al., di RSUD Ulin (2006)
Aktivitas antimikroba dilaporkan terdapat juga dalam cacing tanah
Eisenia foetida mempunyai glikolipoprotein campuran G-90 dan mempunyai daya
hambat terhadap Staphylococcus sp. yang lebih tinggi dibandingkan antibiotik
Gentamicin 10 μg dan Enrofl oxacin 20 μg (Popovic et al.,, 2006). Cacing tanah
E. foetida juga mempunyai Peptida OEP3122 yang dilaporkan bersifat
antimikroba (Liu et al.,, 2004). Cacing Nereis diversicolor mempunyai peptida
histidin yang bersifat antibakteri terhadap S. aureus dan Vibrio alginolyticus
resisten methicillin (Tasiemski et al.,, 2006). Tepung cacing tanah (L. rubellus)
terbukti mempunyai daya antimikroba dengan spektrum luas terhadap bakteri
gram positif S. aureus, bakteri gram negatif E. coli dan S. Pullorum serta fungi C.
Universitas Sumatera Utara
albicans (Damayanti et al., 2009).
Peptida Lumbricin I dilaporkan sebagai
senyawa yang bertanggung jawab atas aktivitas antimikroba spektrum luas pada
cacing tanah (L. rubellus) (cho et al.,, 1998).
Hasil penelitian Gast (1997) menunjukkan bahwa uji serologis terhadap
ayam yang diinfeksi S. Pullorum menghasilkan persentase sampel ayam positif
yang mempunyai antibodi lebih tinggi terjadi pada pengambilan sampel minggu
ke 5–6 pasca infeksi dibandingkan pengambilan sampel pada minggu ke 1–2
pasca infeksi yang di beri pakan imbuhan cacing tanah.
Cacing Tanah (Lumbricus rubellus)
Deskripsi Cacing Tanah Lumbricus rubellus, atau red wriggler atau cacing
tanah merah ini berwarna kemerahan, dengan panjang berkisar antara 7,5 –10 cm.
Segmen berkisar antara 90-145 segmen, klitelium (penebalan dari dinding tubuh
cacing tanah) terletak di segmen 27-32, berbentuk seperti sadel. Pergerakannya
kurang aktif bila dibandingkan dengan spesies dari pheritima, tubuhnya bulat
namun agak gepeng (Catalan, 1981).
Biologi cacing tanah, Spesies : Lumbricus rubellus, Genus : Lumbricus,
Family : Lumbricidae, Ordo : Oligochaeta, Class : Chaetopoda, Phylum :
Annelida, Divisi : Vermes, Kingdom : Animal.
Tepung cacing tanah ((L. rubellus)) mengandung zat aktif antibakteri
(Julendra, 2003), enzim lysozyme, agglutinin, faktor litik (Puwaningroom, 2010)
dan kandungan protein yang cukup tinggi, yaitu sebesar 64-76 % dari bahan
kering (BK) (Palungkun, 2008) serta mengandung asam amino prolin sekitar 15 %
dari 62 asam amino (Cho et al.,, 1998). Aktivitas antibakteri (L. rubellus) berasal
dari Lumbricin I yang merupakan senyawa peptida antimikroba yang berhasil
Universitas Sumatera Utara
diisolasi dan dikarakterisasi dari cacing tanah ((L. rubellus)) (Cho et al.,, 1998).
Cho et al., (1998) menyatakan bahwa hasil uji in vitro menunjukkan Lumbricin I
mempunyai aktivitas antimikroba berspektrum luas, yaitu menghambat bakteri
Gram positif, bakteri Gram negatif dan jamur.
Pembuatan Tepung Cacing Tanah (L. rubellus)
Cacing tanah (L. rubellus) yang digunakan dalam penelitian ini
berumur ± 3 bulan, diperoleh dari peternak cacing. Tepung cacing tanah
dibuat dengan metode Edwards (1985) dan Mihara et al.,. (1991). Cacing
tanah dibersihkan dari media tumbuhnya dan kotoran lain yang menempel,
kemudian dicuci dengan air mengalir. Cacing yang telah bersih disimpan
dalam lemari (inkubator) pada suhu 400C selama + 12 jam. Selanjutnya
cacing tanah dicampur dengan larutan asam format (80%) sebanyak 3 ml per
100 g bobot cacing dan dihaluskan hingga menjadi pasta. Pasta kemudian
dikeringkan dalam oven pada suhu 50-700C selama 4-6 jam. Setelah kering
digiling dengan ukuran partikel ± 40 mesh kemudian diambil sampelnya.
Penyiapan Larutan Tepung Cacing Tanah (L. rubellus)
Tepung cacing tanah ((L. rubellus)) yang akan digunakan dalam penelitian
ini dilarutkan dalam aquades karena bahan aktif yang terkandung dalam tepung
cacing tanah, Lumbricin ,merupakan asam amino yang kaya akan prolin yang
bersifat larut dalam air (Gold Biotechnology, 2009). Konsentrasi tepung cacing
tanah (L. rubellus) yang akan diuji cobakan mengacu pada penelitian sebelumnya
(Damayanti et al.,, 2009; Julendra dan Sofyan, 2007) yaitu sebesar 25% (b/v).
Dimana % b/v menyatakan jumlah gram zat dalam 100 ml larutan, sebagai pelarut
dapat digunakan air/ pelarut lain (Departemen Kesehatan, 1995).
Universitas Sumatera Utara
Pengisian Kertas Disk
Kertas disk disterilkan terlebih dahulu dengan meletakkan kertas disk
dalam cawan petri dan disterilkan dalam autoclave selama 15-20 menit pada
suhu 1210C (Windyaanita, 2006). Selanjutnya kertas disk yang telah
disterilkan, dimasukkan ke dalam 5 tabung reaksi yang berisi supernatan
tepung cacing tanah dengan konsentrasi berbeda yang telah disiapkan
sebelumnya. Setiap tabung berisi tiga buah kertas disk, dan dibiarkan selama
15-20 menit agar zat aktif dalam supernatan tepung cacing tanah dapat
meresap ke dalam kertas disk (Windyaanita, 2006). Untuk perlakuan kontrol
positif digunakan kertas disk yang telah berisi antibiotika kloramfenikol,
karena kloramfenikol memiliki sensitivitas yang sangat tinggi (Uma et al.,,
2005), dimana pada dosis 30 μg/kertas disk mampu menghasilkan diameter
zona hambat sebesar 25-31 mm (Rattanachuay et al.,, 2010).
Universitas Sumatera Utara
METODE PENELITIAN
Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian dilaksanakan di Lab. Reproduksi Fakultas Peternakan
Universitas Sumatera Utara, Jl. A. Sofyan No. 3 Kampus Universitas Sumatera
Utara, Medan. Penelitian akan berlangsung selama 3 bulan yang akan dimulai dari
bulan Februari hingga bulan April 2014.
Tahap I Isolasi Salmonella sp
Bahan
Bahan bahan yang akan digunakan dalam penelitin pada tahap I adalah
Cacing tanah segar yang akan diolah sesuai dengan perlakuan, Brain Heart
Infusion (BHI) Agar dan SSA (Salmonella Sighella Agar) sebagai media biakan
Salmonella sp, alkohol, aquades, alumunium foil, kapas, tisu, sarung tangan, isolat
Salmonella sp akan didapatkan dari hasil isolasi Salmonella sp dari kotoran ayam
dan plastik cling warp.
Alat
Alat-alat yang akan digunakan dalam penelitian ini adalah cawan petri,
pipet mikro, kawat ose, aoutoclaf, pipet tetes, tabung reaksi, bunsen, gelas
erlemeyer, gelas ukur dan masker.
Metode
Metode yang digunakan pada tahap I adalah menghitung CFU (colony
farming unit) yang dikemukakan dalam penelitian Gast (1997). Prosedur yang
digunakan dalam metode ini yaitu: pertama dibuat isolat Salmonella sp dengan
pemurnian salmonella dengan media SSA dan media TSI kemudian uji pewarnaan
dengan methylen red. Diisolatkan kotoran ayam pada media padat SSA kemudian
Universitas Sumatera Utara
diinkubasi pada suhu 300C selama 24 jam, dipindahkan salmonella ke media SSA
yang baru kemudian uji salmonella yang sudah di dapat dengan media TSI dan
dilanjutkan dengan pewarnaan dengan methylan red. Isolat Salmonella sp di
imbuhkan sebesar satu ml ke media SSA yang telah diberi imbuhan perlakuan dan
dihitung kolonial salmonellanya dalam bentuk CFU.
Tahap II Uji Sensitivitas Salmonella Cacing Tanah
Bahan
Bahan bahan yang akan digunakan dalam penelitin pada tahap II adalah
Cacing tanah segar yang akan diolah sesuai dengan perlakuan, Salmonella sighell
agar (SSA) sebagai media biakan salmonella, alkohol, aquades, alumunium foil,
kapas, tisu, sarung tangan, isolat salmonella akan didapatkan dari hasil isolasi
Salmonella sp dari tahap I dan plastik cling warp.
Alat
Alat-alat yang akan digunakan dalam penelitian ini adalah cawan petri,
pipet mikro, kawat ose, aoutoclaf, pipet tetes, tabung reaksi, bunsen, gelas
erlemeyer, gelas ukur, vortex atau mixer bertujuan untuk melarutkan zat-zat yang
terkandung dalam cacing tanah (L. rubellus), centriviewge digunakan untuk
memisahkan cairan dari supratanya dan masker.
Metode
Metode yang digunakan pada tahap II adalah metode kertas cakram yang
mana kertas cakram bertujuan untuk menyimpan larutan perlakuan yang akan
ditambah ke media. Pelaksanaan tahap II dimulai dengan disiapkannya media agar
padat kemudian diisolasikan isolat Salmonella sp dari media cair yang telah
diencerkan hingga CFU-nya 108-109 kemudian dilakukan inkubasi media pada
Universitas Sumatera Utara
suhu +300C di ingkubator selama 24-36 jam selanjutnya ditambahkan kertas
cakram yang telah diisi perlakuandan cacing tanah, diingkubasikan kembali
selanjutnya diukur diameter daerah bening pada media.
Tahap III Uji Tantang Menggunakan Ayam Broiler
Bahan
Bahan-bahan yang digunakan dalam tahap III adalah cacing tanah segar
yang sudah diolah dan siap dijadikan perlakuan, ternak ayam sebagai media uji
tantang, aquades, sarung tangan, isolat Salmonella sp, alkohol dan pakan ayam.
Alat
Alat-alat yang digunakan dalam tahap III adalah kandang idividual dengan
ukuran 25cm X 32cm, tempat pakan, tempat minum, spuit 30 ml sebagai alat
pencekok, tempat penampungan feses, media padat SSA, cawan petri, autoclaf,
centriviewge, vortex atau mixer, pipet tetes, inkubator, tabung reaksi, kawat ose,
dan sarung tangan.
Metode
Tahap III mengunakan metode uji tantang dimana peneliti akan
menginangkan Salmonella sp pada ternak ayam dan diberi perlakuan sehingga
dapat diketahui pertumbuhan dan perkembangan Salmonella sp terhadap
perlakuan apakah perlakuan dapat mengendalikan pertumbuhan Salmonella sp
pada inangya. Prosedur yang digunakan dalam metode ini yakni penampungan
feses ayam selama 4 hari pertama sebelum perlakuan pada kandang metabolis dan
dihitung CFU-nya, kemudian dicekokan isolat Salmonella sp dengan konsentrasi
+106 pada ternak unggas hari ke 5 dan penampungan feses dilakukan hari ke 6
sampai hari ke 9 (masa inkubasi) dan dihitung CFU-nya pada feses. Setelah masa
Universitas Sumatera Utara
inkubasi hari ke 10 sampai ke 13 feses dilakukan penampungan feses ayam yang
telah terinfeksi dan dihitung CFU-nya pada feses.
Metode Penelitian
Rancangan yang digunakan adalah rancangan acak lengkap non faktorial
yang terdiri atas 5 perlakuan dan 4 ulangan,
Adapun perlakuan yang di teliti tersebut antara lain;
P0 =
infeksi salmonella (kontrol)
P1=
infeksi salmonella + pengendalian antibiotik
P2 =
infeksi salmonella + pengendalia ekstrak cacing tanah
P3 =
infeksi salmonella + pengendalian tepung cacing tanah
P4=
infeksi salmonella + pengendalian bubur cacing tanah
Metode linier RAL (rancangan acak Lengkap) yang diasumsikan adalah:
Yij = µ + σi + ɛij
Dimana:
Yij = Respon atau nilai pengamatan dari perlakuan ke-i dan ulangan ke-j
i
= 1, 2, 3 ... = perlakuan
j
= 1, 2, 3 .... = ulangan
µ = nilai tengah umum
σi = pengaruh perlakuan ke-i
ɛij = Pengaruh galat (Experimental Error)
Universitas Sumatera Utara
TAHAP I
penghitungan
CFU
Isolasi salmonella dari feses ke
media berimbuhan cacing tanah
Pengghitungan
total counting
TAHAP II
Uji sensitivitas cacing tanah
terhadap salmonella sp
Mengunakan
metode kertas
cakram
Uji invitro
Uji sensitivitas pada zona
bening
TAHAP III
Uji tantang (in vivo)
pada ayam broiler
Penghitungan total kolonial
berdasarkan CFU
Gambar 1. Kerangka metode penelitian efektivitas pengendalian Salmonella sp dengan berbagai
pengolahan cacing tanah (L. rubellus)
Universitas Sumatera Utara
Pelaksanaan Penelitian
Pembuatan media
Isolasi mikroba dari manur ayam
Isolasi Salmonella sp ke media baru
Uji sensitivitas dan penghitungan CFU-nya
Gambar 2. Alur Pelaksanaan Secara In Vitro
Penyekokan isolat salmonella pada unggas
Masa inkubasi salmonella
Pemberian antibiotik sesuai perlakuan
Colecting manur setiap 24 jam
Colekting manur diuji secara in vitro
Gambar 3. Alur Pelaksanaan Secara In Vivo
Universitas Sumatera Utara
HASIL DAN PEMBAHASAN
Tahap I Isolasi Salmonella
Prinsip dari penghitungan metode hitungan cawan adalah bila sel mikroba
yang masih hidup ditumbuhkan pada medium, maka mikroba tersebut akan
berkembang biak dan membentuk koloni yang dapat dilihat langsung dan
kemudian dapat dihitung tanpa menggunakan mikroskop. Hasil pengamatan dari
tahap I yaitu penghitungan total koloni Salmonella sp pada media SSA yang
diimbuhkan perlakuan kedalamnya dapat di lihat pada gambar 1.
6,50
6,16A +0,02
AB
6,08B + 0,04 6,13 + 0,02
5,81C + 0,05
6,00
Log CFU
5,44D+ 0,07
5,50
5,00
Series1
Gambar 4. Tahap I Isolasi Salmonella Pada Media
Berimbuhan Cacing Tanah
Berdasarkan gambar di atas dapat dilihat rataan tertinggi pada perlakuan
(P0) kontrol yaitu sebesar 6,16 Log CFU dimana pada P0 media tidak
mendapatkan imbuhan antibiotik buatan maupun komersil dan diikuti dengan (P4)
bubur cacing tanah sebesar 6,13 Log CFU, bubur cacing tanah sebesar 0,1 ml
diimbuhkan kemedia SSA, kemudian disusul dengan P3 sebesar 6,08 Log CFU
dimana pada P3 mendapatkan imbuhan tepung cacing tanah sebesar 0,1g dalam
media, dan diikuti dengan P2 sebesar 5, 81 Log CFU perlakuan P2 mendapatkan
Universitas Sumatera Utara
imbuhan ekstrak cacing tanah sebesar 0,1 ml hingga perlakuan terendah pada
perlakuan (P1) Ab atau penggunaan antibiotik komersil sebesar 5,44 Log CFU
dimana setiap perlakuan mengikiti dosis penggunaan antibiotik komersil sebesar
0,1 ml.
Lumbricus rubellus juga sudah lama dipakai sebagai antipiretik (patogen).
Pengujian ekstrak cacing tanah untuk melihat aktivitasnya sebagai antipiretik
dilakukan oleh Sajuthi et al., (2003). Ketika dilakuakan penelitian pengendalian
Salmonella sp didapat data analisa keragaman menjelaskan bahwa antar perlakuan
memiliki tingkat pengendalian yang berbeda.
Setiap perlakuan memiliki total koloni yang sangat berbeda kecuali pada
perlakuan P4 sebesar 6,13 yang mendekati perlakuan P0 sebesar 6,16 dan
perlakuan P3 sebesar 6,07. Perbedaan ini dapat disebabkan oleh Banyaknya asam
amino yang terkandung dalam tubuh cacing tanah, ini memberikan gambaran
bahwa tubuhnya mengandung berbagai jenis enzim yang sangat berguna bagi
kesehatan. penelitian menjelaskan bahwa Lumbricus rubellus mengandung enzim
Lumbrokinase,
peroksidase,
katalase,
dan
selulosa
(Palungkun,
2008).
Lumbrokinase merupakan salah sattu enzim yang bertanggung jawab dalam
mengegdalikan patogen pada saluran pencernaan, enzim enzim pada L. rubellus
besifat alkaloid dan hanya bereaksi pada pelarut basa sehingga bisa diserap tubuh
(Mihara et al., 1991), sedangkan pada perlakuan P4 atau bubur cacing tanah tidak
mendapatkan pelarut basa karena hanya melalui proses pasturisasi saja.
Serangkaian pengujian kimia diketahui bahwa senyawa aktif sebagai
antipiretik dari ekstrak cacing tanah adalah golongan senyawa alkaloid. Pengujian
memang belum dapat menentukan nama senyawanya secara tepat. Golongan
Universitas Sumatera Utara
senyawa alkaloid mempunyai ciri mengandung atom nitrogen dan bersifat basa
(Sajuthi et al., 2003).
Mihara et al., (1991) dan Sajuthi et al., (2003) mencoba menjelaskan
bahwasanya kandungan lumbritin dan enzim-enzim yang berada pada L. rubellus
tidak mudah larut karena bersifat alkaloid sehingga pada perlakuan (P4) bubur
cacing tanah tidak mendapatkan reaksi yang berbeda jauh dengan perlakuan (P3)
dikarenakan antimikroba yang tidak bereaksi secara sempurna, hal ini dapat
dilihat dari P4 tidak berbeda nyata dengan P0 yang tidak memiliki antimikroba.
Tahap II Uji Luas Zona Bening
Resistensi merupakan zona hambat antibiotik yang terjadi terhadap
bakteri, sedangkan sensitifitas merupakan zona hambat yang tidak terjadi pada
antibiotik terhadap bakteri, Maka zona bening adalah sensitifitasa bakteri terhadap
anti bakteri. Hal ini sejalan dengan pendapat Cappuccino (1978) yang mengatakan
bahwa diameter zona hambatan disebabkan antibiotik atau patogenesis.
23,30A + 0,17
25,00
18,40B + 0,17
15,50C + 0,08
12,75D + 0,25
20,00
Log CFU
15,00
10,00
5,00
0,00E + 0
0,00
kontrol
Ab
ext
tepung
bubur
Series1
Gambar 5. Luas Zona Bening (mm) Sensitivitas Salmonella terhadap Perlakuan
Analisa keragaman pada zona bening menunjukkan F hitung lebih besar
dari F tabel 0,05 sehingga dilakukan uji lanjut mengunakan uji duncan. Pada uji
lanjut didapati bahwa setiap perlakuan memiliki perbedaan yang dapat dilihat dari
rataan tertinggi pada (P1) antibiotik komersil sebesar 23,30 mm dan diikuti secara
Universitas Sumatera Utara
berturut-turut (P2) ekstrak cacing tanah sebesar 18,40 mm, (P3) tepung cacing
tanah 15,50 mm, (P4) bubur cacing tanah sebesar 12,75 mm dan terendah pada
(P0) perlakuan kontrol tanpa penambahan antibiotik apapun. Perbedaan ini juga
dapat dilihat dari notasi dari setiap perlakuan yang berbeda antar satu perlakuan
dengan perlakuan yang lain.
Kontrol negatif (P0) merupakan perlakuan yang tidak diberi apapun
kedalamnya dan bertujuan untuk mengetahui jumlah dan tingkat pertumbuhan
Salmonella sp secara normal. Pada P0 tidak memiliki luas zona bening karena
tidak memiliki zat antimikroba. (P1) antibiotik komersil memiliki diameter zona
hambatan sebesar 23,30 mm pada masa inkubasi 24 jam dan diikuti berturut-turut
dengan perlakuan (P2) ekstrak cacing tanah memiliki diameter 18,40 mm, (P3)
tepung cacing tanah sebesar 15,50 mm dan yang terkecil pada perlakuan (P4)
bubur cacing tanah sebesar 12,75 mm. Menurut Baehaki et al., (2011) indeksa
zona bening dinyatakan positif bila zona bening > 1,00 cm.
Berdasarkan hasil uji pengukuran diameter daerah hambatan dari sampel
menunjukkan bahwa setiap jenis sampel uji dengan konsentrasi berbeda memilki
kemampuan dalam menghambat pertumbuhan bakteri Salmonella sp dengan
diameter hambatan yang berbeda. Menurut Mary (2001) hal tersebut dapat
disebabkan karena adanya perbedaan konsentrasi senyawa aktif yang bersifat
sebagai antimikroba pada masing-masing konsentrasi dan jenis sampel uji.
Konsentrasi bahan kimia akan mempengaruhi pertumbuhan mikroorganisme.
Dalam konsentrasi kecil bersifat menghambat pertumbuhan mikroorganisme
(Lay,1994) dan dengan konsentrasi yang tinggi akan menyebabkan lebih banyak
kematian mikroorganisme (Hewitt dan Stephen, 1989).
Universitas Sumatera Utara
Menurut Barnet (1992) perbedaan besarnya daerah hambatan untuk
masing-masing konsentrasi dapat diakibatkan antara lain perbedaan besar kecilnya
konsentrasi atau banyak sedikitnya kandungan zat aktif antimikroba yang
terkandung di dalamnya serta kecepatan difusi bahan antimikroba ke dalam
medium (Lay, 1994). Faktor-faktor lain yang juga dianggap dapat mempengaruhi
antara lain kepekaan pertumbuhan bakteri, reaksi antara bahan aktif dengan
medium dan temperatur inkubasi. Beberapa faktor yang juga mempengaruhi hal
ini antara lain pH lingkungan, komponen media, stabilitas obat, ukuran inokulum,
waktu inkubasi dan aktivitas metabolik mikroorganisme (Brooks, et al., 2005).
Tahap III. Uji Tantang Salmonella sp dengan Cacing Tanah pada Ayam
Broiler
Isolat Salmonella sp didapatkan pada sampel manur ayam menggunakan
metode swab. Isolat murni Salmonella dari media selektif selanjutnya
dikonfirmasi dengan uji biokimia. Hasil uji biokimia dengan media TSI
didapatkan reaksi berwarna kuning kemerahan. Hal ini menunjukkan isolat yang
didapat tersebut hanya memfermentasi glukosa dalam media TSI. Reaksi positif
dalam uji methyl red menunjukkan bahwa isolat tersebut mampu memetabolisme
sumber karbon sitrat, memfermentasi campuran asam, butanediol dan glukosa,
sesuai dengan karakteristik biokimia bakteri Gram negatif Salmonella sp
(Seeley et al., 2001).
Uji sensitivitas pada tahap ini mejadi tiga fase, tahap pertama dimulai dari
hari pertama hingga hari keempat bertujuan mengetahui tingkatan pertumbuhan
Salmonella sp pada fase kosong (tidak mendapatkan perlakuan) hal ini sesuai
dengan GAST (1997) dalam prosedur Uji serologis dan uji biologis antimikroba
Universitas Sumatera Utara
dilakukan dalam 3 tahapan, yaitu 1) 1 minggu sebelum infeksi bakteri, 2) 1
minggu setelah infeksi dan 3) 1 minggu setelah infeksi.
Tabel 5. Uji Tantang Salmonella Dengan Cacing Tanah Pada Ayam Broiler
Kontrol
Antibiotik
Ekstrak
Tepung
Bubur
Hari/Fase
(Log CFU) (Log CFU)
(Log CFU) (Log CFU (Log CFU)
(tn)
Fase Awal
Hari Ke ;
2,83
2,85
2,85
2,85
2,85
1
3,20
3,21
3,21
3,20
3,20
2
3,36
3,37
3,37
3,37
3,36
3
3,53
3,53
3,54
3,53
3,53
4
(tn)
Fase Infeksi
Hari Ke ;
6,07
6,07
6,07
6,07
6,06
1
6,11
6,11
6,12
6,11
6,11
2
7,18
7,19
7,19
7,18
7,18
3
8,24
8,24
8,24
8,24
8,23
4
Fase Pengendalian
Hari Ke ;
8,34a
8,33b
8,32b
8,31b
8,31b
1
8,39a
8,34c
8,36b
8,36b
8,36b
2
8,63a
8,20d
8,36c
8,37b
8,37b
3
4
8,81a
7,96c
8,22b
8,23b
8,23b
Keterangan.
tn
; tidak berbeda nyata
Super scrib ke arah baris menunjukan perbedaan nyata anar perlakuan (P>0,05)
Pada fase pertama terdiri atas empat hari diaman umur ternak sudah
berumur satu minggu. Pada fase pertama tidak memiliki perbedaan yang nyata
antar perlakuan hal ini dapat dilihat dalam Tabel 5.
Fase kedua merupakan fase infeksi mikroba yang ingin dilihat tingkat
infeksinya. Pada fase kedua mikroba yang di infeksikan (Salmonella sp) memiliki
tingkat koloni 106 CFU. Infeksi Salmonella sp dilakuakan secara oral dan diamati
pertumbuhan dan pertambahan koloninya melalui feses setiap harinya hal ini
dapat terlihat pada Tabel 5
Universitas Sumatera Utara
Tabel 5. menunjukkan bahwa setiap perlakuan perharinya tidak berbeda
nyata hal ini disebabkan kondisi yang homogen dari setiap perlakuan. Pada hari ke
1 setiap perlakuan memiliki total koloni 6,06-6,07 Log CFU dan setiap harinya
bertambah secara berturut-turut pada hari ke 2 sebesar 6,11-6,12 Log CFU, hari ke
3 sebesar 7,18-7,19 Log CFU hingga hari ke 4 pertumbuhan Salmonella sp
semakin meningkat hingga 8,23-8,24 Log CFU.
Tabel 5. juga menjelaskan bahwa Salmonella sp yang diinjeksikan dapat
beradaptasi, tumbuh dan berkembang dalam saluran pencernaan ayam broiler, hal
ini dapat dilihat dari tingkat pertambahan koloni dari tiap harinya yang begitu
pesat, dengan begini ayam broiler dianggap sakit dan sudah mengalami
salmonelosis, sehingga dapat dilakukan tahap pengendalian atau fase tiga dari
pemeliharaan.
Fase tiga Uji coba antibiotik ke ayam, penelitian ini menggunakan 20 ekor
ayam Broiler umur 16 hari, dibagi dalam 5 kelompok percobaan yaitu: P0 = pakan
tanpa mengandung imbuhan (kontrol) P1 = pakan berimbuhan antibiotik komersil,
P2 = pakan berimbuhan ekstrak cacing tanah, P3 = pakan berimbuhan tepung
cacing tanah, P4 = pakan berimbuhan bubur cacing tanah. Masing-masing
kelompok percobaan dibagi menjadi 4 ulangan yang masing-masing berisi 1 ekor
ayam. Ayam dipelihara dari umur 1 hari (DOC) sampai umur 20 hari dan diberi
perlakuan mulai umur 16 hari.
Hari ke 1 setelah fase pengendalian perlakuan tertinggi pada P0 yaitu
perlakuan kontrol negatif, ayam broiler ini tidak diberi perlakuan apa-apa dan
memiliki koloni sebesar 8,34 Log CFU yang berturut-turut diikuti oleh P1
perlakuan dengan antibiotik komersil sebesar 8,33 Log CFU, P2 dengan
Universitas Sumatera Utara
perlakuan ekstrak cacing tanah sebesar 8,32 Log CFU, P3 dengan perlakuan
tepung cacing tanah memiliki koloni sebesar 8,31 Log CFU hingga perlakuan P4
bubur cacing tanah yang memiliki total koloni sebesar 8,31 Log CFU. Hal ini
sesuai dengan Masduki (1996) kemampuan biologis setiap bakteri juga berbedabeda dalam merespon bahan antibakteri. Salah satu faktor yang paling
berpengaruh adalah adanya perbedaan struktur dinding sel antara bakteri gram
negatif dan bakteri gram positif. Komponen khusus bakteri gram negatif terdiri
atas lipoprotein, selaput luar, dan lipopolisakarida. Selaput luar dinding sel bakteri
gram negatif merupakan selaput ganda fosfolipid yang sebagian besar diganti
dengan molekul lipopolisakarida.
Lumbrokinase merupakan salah satu enzim yang bertanggung jawab
dalam mengendalikan patogen pada saluran pencernaan, enzim-enzim pada
L.rubellus besifat alkaloid dan hanya bereaksi pada pelarut basa sehingga bisa
diserap tubuh (Mihara et al., 1991)
Analisa keragaman di atas diketahui bahwa total Log CFU pada hari ke 1
pemeliharaan sangat berbeda nyata hal ini dapat dilihat dari F hitung lebih besar
dari F tabel 0,05 dimana F hitung dan harus dilakukan uji lanjut untuk lebih
mengetahui tingkat keragamnya.
Uji lanjut didapatkan bahwa setiap perlakuan memiliki nilai sensitive
terhadap salmonella dan hanya pada P0 (kontrol) pakan tanpa imbuhan antibiotik
memiliki nilai yang tertinggi dengan nilai rataan 8,34 Log CFU sedangkan P1, P2,
P3dan P4 tidak memiliki perbedaan yang nyata memiliki notasi B dari hasil uji
lanjut. Hal ini bisa disebabkan total koloni didalam saluran pencernaan yang
sangat tinggi dan anti biotik didak dapat secara spontanitas membunuh seluruh
Universitas Sumatera Utara
Salmonella sp yang ada pada saluran pencernaan tetapi hanya mampu
melisikannya seperti dikatakan Syamsiah, et al., (2005) bahwa antibakteri dalam
ramuan herbal akan melisiskan racun yang menempel pada usus sehingga
penyerapan zat makanan lebih meningkat.
Menurut Tafsin (2007) bakteri seperti Salmonella sp memiliki lektin pada
permukaan selnya yang dapat mengenal gula spesifik dan membiarkan selnya
untuk menempel pada gula tersebut, sehingga gula tersebut termediasi oleh bakteri
tersebut, dengan penambahan cacing tanah dalam pakan maka lumbritin akan
melindungi dinding saluran pencernaan dan salmonella tidak dapat menempel dan
menurunkan tingkat populasi dalam saluran pencernaan ternak.
Hari ke 2 fase pengendalian total koloni pada feses ayam dapat dilihat
pada tabel 5. Hari kedua fase pengendalian memang tidak memiliki perbedaan
yang cukup siknifikan tetapi bila diuji analisa keragamanya diketahui bahwa
149,28** f hitung lebih besar dari pada f tabel 0,05 sebesar 4,89 hal ini
menunjukkan bahwasanya perlakuan sangat berbeda nyata sehingga dilakukan uji
lanjut duncan.
Uji lanjut duncan menjelaskan bahwa rataan tertinggi pada (P0) kontrol
yang memiliki rataan 8,49 dimana perlakuan tidak mendapatkan imbuhan
antibiotik apapun, hal ini di ikuti dengan (P1) antibiotik, (P2) ekstrak cacing
tanah, (P3) tepung cacing tanah yang memiliki notasi sama yaitu B antara tiga
perlakuan ini hal ini membuktikan bahwa tidak ada perbedaan yang nyata antara
tiga perlakuan ini, ketiga perlakuan ini dapat melisiskan salmonella dalam saluran
pencernaan karena berbedan nyata dengan perlakuan P0 tetapi tidak sampai
mengimbangi perlakuan P1 sebesar 8,34 hal ini sesuai dengan Syamsiah et al.,
Universitas Sumatera Utara
(2005) antibiotik yag baik adalah dapat melisiskan bakteri dalam saluran
pencernaan sehingga penyerapan nutrisi lebih baik, dan didukung juga oleh
Mihara et al., (1991) dan Sajuthi et al., (2003) mencoba menjelaskan bahwasanya
kandungan lumbritin dan enzim-enzim yang berada pada L. rubellus tidak mudah
larut karena bersifat alkaloid, hal ini menyebabkan lumbritin (antimikroba)
terjebak dalam saluran pencernaan dan sempurna melisikan Salmonella sp.
Hari ke 3 fase pengendalian total koloni pada feses ayam memiliki jumlah
(P0)8,63 Log CFU, (P1) 8,20 Log CFU, (P2) 8,36 (P3) 8,37 dan (P4) 8,37 dari
hasil tersebut dapat dilihat bahwa rataan tertinggi terdapat pada perlakuan (P0)
dimana perlakuan ini tidak memiliki imbuhan antibiotik sebesar 8,63 Log CFU
yang diikuti secara berturut-turut oleh (P3) tepung cacing tanah 8,37 dan (P4)
bubur cacing tanah yang memiliki rataan yang sama yakni sebesar 8,37 Log CFU
dan terus diikuti oleh (P2) ekstrak cacing tanah sebesar 8,36 Log CFU dan (P1)
imbuhan antibiotik buatan sebesar 8,20 Log CFU maka dilakukan analisa
keragaman sehingga di ketahui bahwa F hitung 856,67 lebih besar dari pada F
tabel 0,05 sebesar 4,89 hal ini menjelaskan bahwasanya ada perbedaan antar
perlakuan maka dilakuakan uji lanjut duncan untuk mengetahui perlakuan mana
yang berbedanyata.
Uji duncan dapat dilihat bahwa rataan tertinggi terdapat pada perlakuan
TANAH (Lumbricus rubellus)
PADA AYAM BROILER
SKRIPSI
OLEH :
SUPRAYOGA
090306011
PROGRAM STUDI PETERNAKAN
FAKULTAS PERTANIAN
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
2014
Universitas Sumatera Utara
EFEKTIVITAS PENGENDALIAN Salmonella sp. DENGAN CACING
TANAH (Lumbricus rubellus)
PADA AYAM BROILER
SKRIPSI
OLEH :
SUPRAYOGA
090306011
Skripsi sebagai salah satu syarat mendapatkan gelar sarjana di
Program Studi Peternakan Fakultas Pertanian
Universitas Sumatera Utara
PROGRAM STUDI PETERNAKAN
FAKULTAS PERTANIAN
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
2014
Universitas Sumatera Utara
Judul penelitian
Nama
NIM
Program Studi
: Efektivitas Pengendalian Salmonella sp dengan Cacing
Tanah (Lumbricus rubellus) pada Ayam Broiler
: Suprayoga
: 090306011
: Peternakan
Disetujui Oleh,
Komisi Pembimbing
Dr. Ir. Ma’ruf Tafsin., M.Si
Ketua
Ir. Tri Hesti Wahyuni., M.Sc
Anggota
Mengetahui,
Dr. Ir Ma’ruf Tafsin., M.Si.
Ketua Program Studi
Tanggal Lulus:
Universitas Sumatera Utara
ABSTRAK
SUPRAYOGA.2014. Efektivitas Pengendalian Salmonella sp. dengan Cacing
Tanah (Lumbricus Rubellus) pada Ayam Broiler. Dibimbing oleh MA’RUF
TAFSIN dan TRI HESTI WAHYUNI.
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui tingkat pengendalian
Salmonella sp dengan olahan cacing tanah dalam bentuk ekstrak, tepung dan
bubur cacing tanah. Tahapan yang digunakan dalam penelitian adalah: Tahap I
mengimbuhkan cacing tanah kedalam media agar, Tahap II uji sensitifitas
salmonella sp. Tahap III uji tantang pada 20 ekor ayam broiler, penelitian ini
mengunakan rancangan acak lengkap (RAL) dengan lima perlakuan yaitu kontrol
(P0), antibiotik komersil (P1), ekstrak (P2), tepung (P3) dan bubur (P4). Hasil
penelitian pada tahap I menunjukan bahwa pertumbuhan koloni salmonella sp
dapat diturunkan dengan olahan cacing tanah. Tahap II memiliki hasil penelitian
salmonella sp mempunyai tingkat sensitifitas yang tinggi terhadap olahan cacing
tanah. Tahap III uji tantang pada ayam broiler bahwa olahan cacing tanah dapat
mengendalikan pertumbuhan salmonella sp secara signifikan, dari hasil penelitian
dapat disimpulan bahwa Salmonella sp dapat dikendalikan dengan olahan cacing
tanah dan ekstrak cacing tanah merupakan olahan terbaik.
Kata kunci: Cacing Tanah, Salmonella Sp, Ayam Broiler, Pengendalian
Universitas Sumatera Utara
ABSTRACT
SUPRAYOGA.2014. Effectivity Controled of Salmonella sp. with Earthworm
(Lumbricus Rubellus) in Broiler Chicken. Under supervised by MA'RUF TAFSIN
and TRI HESTI WAHYUNI.
This study aims to determine the effectivity of eatrhworm product to
control Salmonella sp. The product of earthworms were give in the front of
extracts, flour and porridge earthworms. The reserch composed of there stage,
frist Stages were added earthworms in agar medium, the secound stage were
determined the sensitivity against salmonella sp and third stage were challenge
test use 20 broiler chickens, this study used a completely randomized design
(CRD) composed of control (P0), commercial antibiotics (P1), extract (P2), flour
(P3) and pulp (P4). Challenge test used salmonella (106CFU/gird) at the age 12
days. The results of the first stage showed that the growth of Salmonella sp
colonies can be decreased by earthworms product. At the second stage showed
that Salmonella sp had high sensitivity. The result at third stage show there
earthworm product had ability to control salmonella sp in broiler chicken, it is
concluded that salmonella sp processed can be controlled by earthworm product
and extract is product showed the best product
Keywords: Earthworm, Salmonella Sp, Broiler Chickens, Control
Universitas Sumatera Utara
RIWAYAT HIDUP
Penulis dilahirkan di Lubuk Pakam pada tanggal 14 juli 1991 dari Bapak
Suprayoga dan Ibu Suparni. Penulis merupakan anak pertama dari empat
bersaudara.
Tahun 2009 penulis lulus dari MAS DA dan pada tahun yang sama penulis
masuk ke Fakultas Pertanian Universitas Sumatera Utara melali jalur (Prestasi
Minat dan Pelajar ) PMP. Penulis memilih program studi peternakan.
Selama mengikuti perkuliahan, penulisa aktif sebagai anggota Ikatan
Mahasiswa Peternakan (IMAPET). Selain itu penulis pernah menjadi anggota
Himpunan Mahasiswa Islam Peternakan (HIMMIP). Penulis melakukan Praktek
Kerja Lapangan (PKL) di desa Pardugul Kecamatan Pangururan, Kabupaten
Samosir dimulai bulan Juli sampai dengan bulan September 2012.
Universitas Sumatera Utara
KATA PENGANTAR
Puji dan syukur penulis panjatkan kehadirat Allah SWT atas limpahan
taufik dan hidayah hingga penulis dapat menyelesaikan tulisan ini yang berjudul
“Efektivitas Pengendalian Salmonella sp dengan Cacing Tanah (Lumbricus
rubellus) pada Ayam Broiler”
Penulis mengucapkan banyak terima kasih kepada Bapak Ma’ruf Tafsin
selaku ketua komisi pembimbing dan Ibu Tri Hesti Wahyuni selaku anggota
komisi pembimbing yang telah memberikan arahan dalam menyelesaikan
penulisan skripsi ini dan semua pihak yang ikut membantu. Skripsi ini diharapkan
dapat membantu dan mendukung dalam pelaksanaan penelitian dan sebagai
petunjuk dalam penyusunan skripsi serta ilmu pengetahuan bidang peternakan
khususnya.
Penulis mengetahui masih banyak kekurangan dan kehilafan dalam
penulisan skripsi ini. Penulis mengharapkan kritik dan saran yang bersifat
membangun guna memperbaiki skripsi ini sehingga pelaksanaan penelitian
terwujud sesuai dengan kaidah-kaidah ilmiah yang berlaku.
Universitas Sumatera Utara
DAFTAR ISI
............................................................................................................................. Hal.
ABSTRAK ..........................................................................................................
i
ABSTRACT ........................................................................................................
ii
RIWAYAT HIDUP ............................................................................................. iii
KATA PENGANTAR ........................................................................................ iv
DAFTAR ISI ....................................................................................................... vi
DAFTAR GAMBAR .......................................................................................... viii
PENDAHULUAN
Latar Belakang ....................................................................................................
Tujuan Penelitian ................................................................................................
Kegunaan Penelitian............................................................................................
Hipotesis Penelitian.............................................................................................
1
2
2
2
TINJAUAN PUSTAKA
Salmonellosis .....................................................................................................
Cacing tanah lumbricus rubellus.........................................................................
Pembuatan tepung cacing tanah l. rubellus .........................................................
Penyiapan larutan tepung cacing tanah L.rubellus ..............................................
Pengisian kertas disk ...........................................................................................
3
7
8
8
9
BAHAN DAN METODE PENELITIAN
Tempat Dan Waktu Penelitian ............................................................................
Tahap I penambahan cacing tanah dalam media cair..........................................
Bahan .......................................................................................................
Alat .........................................................................................................
Metode .....................................................................................................
Tahap II uji sensitivitas salmonella Sp. Dengan penambahan cacing tanah .......
Bahan ......................................................................................................
Alat .........................................................................................................
Metode .....................................................................................................
Tahap III uji tantang menggunakan ayam broiler ...............................................
Bahan ......................................................................................................
Alat .........................................................................................................
Metode ....................................................................................................
Metode penelitian ................................................................................................
Pelaksanaan penelitian ........................................................................................
10
10
10
10
10
11
11
11
11
12
12
12
12
13
15
HASIL DAN PEMBAHASAN
Tahap I. Isolasi Salmonella sp ........................................................................... 16
Tahap ii. Uji luas zona bening ............................................................................ 18
Universitas Sumatera Utara
Tahap iii. Uji tantang salmonella sp dengan olahan cacing tanah pada ayam broiler
................................................................................................................. 20
KESIMPULAN DAN SARAN
Kesimpulan ........................................................................................................ 28
Saran ................................................................................................................. 28
DAFTAR PUSTAKA ......................................................................................... ix
LAMPIRAN ...................................................................................................... xi
Universitas Sumatera Utara
DAFTAR GAMBAR
No.
Hal.
1. Gambar 1. Kerangka metode penelitian efektivitas pengendalian salmonella Sp.
dengan olahan cacing tanah pada ayam broiler................................................... 14
2. Gambar 2. Alur pelaksanaan penelitian in vitro.................................................. 15
3. Gambar 3. Alur pelaksanaan penelitian in vivo .................................................. 15
4. Gambar 4. Tahap I isolat salmonela ................................................................... 16
5. Gambar 5. Tahap II luas zona bening ................................................................ 18
6. Gambar 6. Akumulasi rataan pertumbuhan salmonella sp ................................ 27
7. Gambar 7. Alur pembuatan ekstrak cacing tanah L. rubellus ............................. xi
8. Gambar 8. Alur pembuatan tepung cacing tanah L. rubellus.............................. xii
9. Gambar 9. Alur peambuatan bubur cacing tanah L. rubellus ............................. xiii
Universitas Sumatera Utara
ABSTRAK
SUPRAYOGA.2014. Efektivitas Pengendalian Salmonella sp. dengan Cacing
Tanah (Lumbricus Rubellus) pada Ayam Broiler. Dibimbing oleh MA’RUF
TAFSIN dan TRI HESTI WAHYUNI.
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui tingkat pengendalian
Salmonella sp dengan olahan cacing tanah dalam bentuk ekstrak, tepung dan
bubur cacing tanah. Tahapan yang digunakan dalam penelitian adalah: Tahap I
mengimbuhkan cacing tanah kedalam media agar, Tahap II uji sensitifitas
salmonella sp. Tahap III uji tantang pada 20 ekor ayam broiler, penelitian ini
mengunakan rancangan acak lengkap (RAL) dengan lima perlakuan yaitu kontrol
(P0), antibiotik komersil (P1), ekstrak (P2), tepung (P3) dan bubur (P4). Hasil
penelitian pada tahap I menunjukan bahwa pertumbuhan koloni salmonella sp
dapat diturunkan dengan olahan cacing tanah. Tahap II memiliki hasil penelitian
salmonella sp mempunyai tingkat sensitifitas yang tinggi terhadap olahan cacing
tanah. Tahap III uji tantang pada ayam broiler bahwa olahan cacing tanah dapat
mengendalikan pertumbuhan salmonella sp secara signifikan, dari hasil penelitian
dapat disimpulan bahwa Salmonella sp dapat dikendalikan dengan olahan cacing
tanah dan ekstrak cacing tanah merupakan olahan terbaik.
Kata kunci: Cacing Tanah, Salmonella Sp, Ayam Broiler, Pengendalian
Universitas Sumatera Utara
ABSTRACT
SUPRAYOGA.2014. Effectivity Controled of Salmonella sp. with Earthworm
(Lumbricus Rubellus) in Broiler Chicken. Under supervised by MA'RUF TAFSIN
and TRI HESTI WAHYUNI.
This study aims to determine the effectivity of eatrhworm product to
control Salmonella sp. The product of earthworms were give in the front of
extracts, flour and porridge earthworms. The reserch composed of there stage,
frist Stages were added earthworms in agar medium, the secound stage were
determined the sensitivity against salmonella sp and third stage were challenge
test use 20 broiler chickens, this study used a completely randomized design
(CRD) composed of control (P0), commercial antibiotics (P1), extract (P2), flour
(P3) and pulp (P4). Challenge test used salmonella (106CFU/gird) at the age 12
days. The results of the first stage showed that the growth of Salmonella sp
colonies can be decreased by earthworms product. At the second stage showed
that Salmonella sp had high sensitivity. The result at third stage show there
earthworm product had ability to control salmonella sp in broiler chicken, it is
concluded that salmonella sp processed can be controlled by earthworm product
and extract is product showed the best product
Keywords: Earthworm, Salmonella Sp, Broiler Chickens, Control
Universitas Sumatera Utara
PENDAHULUAN
Latar Belakang
Salmonellosis merupakan penyakit menular yang bersifat zoonosis dan
termasuk food borne disease yaitu suatu penyakit yang diderita oleh seseorang
akibat mengkonsumsi makanan yang telah terkontaminasi oleh mikroba patogen.
Kejadian salmonellosis pada manusia paling sering dilaporkan akibat tertular
produk-produk asal ternak unggas seperti telur dan daging yang terkontaminasi.
Penyakit salmonellosis merupakan penyakit unggas yang disebabkan oleh
infeksi bakteri Salmonella sp. Penyakit salmonellosis dapat menyebabkan
kematian jika menyerang unggas muda pada umur 3 minggu atau kurang dengan
tingkat mortalitas antara 20–80% (Porter, 1998; Purnomo, 2004). Salmonella sp
adalah bakteri gram negatif yang dapat menekan sistem kekebalan tubuh unggas
(immuno-suppression) dan menyebabkan kematian ayam pedaging (Shivaprasad,
2003; Mcmullin, 2004).
Belakangan ini, pengendalian penyakit salmonellosis hanya mengunakan
antibiotik. Antibiotik diberikan sebagai bahan imbuhan penyusun ransum yang
bertujuan Antibiotic Growth Promotor (AGP) efek pengunaan antibiotik yang
terus menerus dan pengunaanya yang tidak bijak akan menyebabkan mikroba
resisten. Berbagai upaya dilakukan untuk mencari pengganti antibiotik sebagai
AGP karena semakin meningkatnya kecenderungan akan permintaan produk
peternakan yang sehat, aman, dan bebas dari residu berbahaya. Salah satunya
adalah dengan pemanfaatan bahan alam yang relatif aman untuk mencegah
penyakit. Cacing tanah yang mengandung protein tinggi dan asam amino lengkap
menjadi salah satu alternatif yang potensial untuk dijadikan imbuhan pakan.
Universitas Sumatera Utara
Cacing tanah (Lumbricus rubellus) memiliki kadar protein kasar 65,63%
dan asam amino prolin sekitar 15% dari total 62 asam amino. (L. rubellus)
terbukti mempunyai daya antimikroba dengan spektrum luas. Peptida Lumbricin I
dilaporkan sebagai senyawa yang bertanggung jawab atas aktivitas antimikroba
spektrum luas pada cacing tanah (L. rubellus) (Cho, 1998).
Pengolahan cacing tanah memiliki berapa cara seperti pembuatan tepung
cacing tanah, bubur cacing tanah segar dan ekstraksi cacing tanah, pengolahan
cacing tanah tersebut memiliki kekurangan dan kelebihan sehingga menimbulkan
minat penulis untuk membandingkan dan meneliti dari efektifitas pengendalian
salmonella dengan berbagai pengolahan cacing tanah (L. rubellus).
Tujuan Penelitian
Rangkaian percobaan dalam penelitian bertujuan untuk mengetahui tingkat
pengendalian pertumbuhan salmonella sp yang ditinjau dari total counting
berdasarkan CFU (colony farming unit), uji sensitifitas dan uji tantang dalam
perbandingan tingkat keefektifan dari pengolahan cacing tanah (L. rubellus)
dengan cara pembuatan bubur cacing tanah, tepung cacing tanah dan hasil ekstrak
cacing tanah terhadap Salmonella sp.
Hipotesis Penelitian
Berbagai olahan cacing tanah dapat mengendalikan pertumbuhan
Salmonella sp pada ayam broiler.
Kegunaan Penelitian
Memberikan informasi bagi yang membutuhkan dalam mengetahui
pengolahan cacing tanah yang tepat sebagai pengendali Salmonella sp.
Universitas Sumatera Utara
TINJAUAN PUSTAKA
Salmonellosis
Populasi ayam broiler semakin meningkat, yaitu dari tahun 2007
adalah 891.659.345
ekor menjadi 1.075.884.785 ekor di tahun
2008
(Direktorat Jenderal Peternakan, 2008). Ayam broiler merupakan jenis ayam ras
unggul yang mampu berproduksi dalam waktu singkat dan efisien dalam
mengubah makanan menjadi daging karena memiliki nilai konversi ransum yang
rendah.
Salah satu kendala yang dihadapi dalam pemeliharaan ayam broiler adalah
rentan terhadap penyakit. Salmonellosis merupakan penyebab penyakit yang
sering muncul dalam peternakan dan disebabkan oleh bakteri gram negatif seperti
Salmonella typhimurium dan Salmonella enteritidis yang bersifat infeksius dan
septikemik. Kerugian yang dihadapi secara ekonomi oleh peternak akibat infeksi
Salmonella sp ini diantaranya adalah tingkat kematian yang tinggi (sampai 80%)
dan pertambahan bobot badan ayam broiler yang rendah. Selain itu, infeksi
Salmonella sp ini dapat ditransmisikan pada bahan pangan (telur dan daging
unggas) sehingga membahayakan kesehatan manusia. Penyakit Salmonellosis
rentan terjadi pada ayam berumur 7-21 hari, pada ayam umur lebih dari tiga
minggu jarang menimbulkan gejala klinis karena memiliki kekebalan tubuh yang
lebih baik tetapi dapat menjadi pembawa (carrier) yang dapat menularkan
penyakit pada manusia (Rofiq, 2003).
Salmonella sp adalah salah satu serovar atau serotipe dari subspesies
Salmonella
dan
termasuk
dalam
anggota
famili
Enterobacteriaceae
Universitas Sumatera Utara
(Office International Des Epizooties, 2000). Habitat utamanya berada dalam
saluran pencernaan hewan ternak dan manusia (Portillo, 2000).
Salmonella sp ditemukan pada spesies unggas dan dengan mudah dapat
ditularkan ke manusia melalui telur atau daging ayam yang terkontaminasi
(Agricultural Research Service, 2002). Infeksi bakteri ini pada hewan atau
manusia dapat mengakibatkan penyakit dengan gangguan pada bagian saluran
pencernaan atau gastroenteritis dan penyakit akibat infeksi Salmonella sp disebut
salmonellosis (Serbeniuk, 2002).
Induk ayam petelur atau pedaging yang terinfeksi Salmonella sp secara
transovarial dapat menularkan bakteri tersebut melalui produk telurnya
(Duguid Dan North, 1991; Miyamoto et al.,, 1998). Ayam petelur dapat terinfeksi
S. enteritidis dari flok ayam pembibit yang terinfeksi, pakan yang terkontaminasi
atau melalui vektor rodensia. Selain itu, burung puyuh dan burung liar juga dapat
bertindak
sebagai
sumber
penularan
Salmonella
sp
secara
horizontal
(Davison et al.,1995; Gast, 1997)
Patogenesis
Habitat bakteri salmonella adalah di dalam alat pencernaan manusia,
hewan, dan bangsa burung. Oleh karena itu cara penularannya adalah melalui
mulut karena makan/minum bahan yang tercemar oleh keluaran alat pencernaan
penderita. Salmonella sp akan berkambang biak di dalam alat pencernaan
penderita, sehingga terjadi radang usus (enteritis). Radang usus serta
penghancuran Lamina propria alat pencernaan oleh penyusupan (proliferasi)
Salmonella sp inilah yang menimbulkan diare, karena Salmonella sp
menghasilkan racun yang disebut Cytotoxin dan Enterotoxin (Dharmojono, 2001).
Universitas Sumatera Utara
Salmonella sp mungkin terdapat pada makanan dalam jumlah tinggi, tetapi
tidak selalu menimbulkan perubahan-perubahan dalam hal warna, bau maupun
rasa dari makanan tersebut. Semakin tinggi jumlah salmonella di dalam suatu
makanan, semakin besar timbulnya gejala infeksi yang mengkonsumsi makanan
tersebut dan semakin cepat waktu inkubasi sampai timbulnya gejala infeksi.
Makanan-makanan yang sering terkontaminasi oleh Salmonella sp yaitu telur dan
hasil olahannya, ikan dan hasil olehannya, daging ayam, daging sapi serta susu
dan hasil olahannya seperti es krim dan keju (Supardi dan Sukamto, 1999).
Jay (2000) menjelaskan bahwa khusus untuk S. enteritidis dapat
ditemukan di dalam telur dan ovarium ayam yang bertelur, dengan kemungkinan
jalur penularannya sebagai berikut: (1) transovarium; (2) translokasi dari
peritonium ke kantong kuning telur atau oviduk; (3) mempenetrasi kerabang telur
sewaktu telur bergulir menuju kloaka; (4) pencucian telur; (5) pengolahan
makanan. Salmonella sp akan berpenetrasi ke dalam telur dan terperangkap di
dalam membran, kemudian akan diingesti oleh embrio. Habitat utama
Salmonella sp pada ayam adalah saluran pencernaan, termasuk caecum. Apabila
Salmonella sp ada di dalam tubuh ayam, maka ayam akan bertindak sebagai
carrier sepanjang hidupnya.
Pengendalian Salmonella
Pengobatan salmonellosis acap kali mengunakan kloramfenikol, obat ini
digunakan sejak tahun 1948 dan sampai saat ini masih digunakan sebagai obat
pilihan di Indonesia khususnya di RSUD Dr. Soetomo Surabaya dan
RSU Dr. Saiful Anwar Malang, karena efektvitasnya terhadap Salmonella typhi
masih tinggi disamping harga obat yang relatif murah (Musnelina, 2004). Dari
Universitas Sumatera Utara
kajian tingkat molekuler dikemukakan bahwa bakteri Salmonella typhi menjadi
resisten terhadap Kloramfenikol akibat adanya plasmid yang memproduksi enzim
Chloramphenicol Acetyltransferase (CAT) yang mengaktivasi Kloramfenikol
(Balbi, 2004). Hal ini membuat para ahli mencari alternatif obat lain yang terbaik
untuk demam tifoid antara lain Seftriakson (Musnelina, 2004).
Tabel 1. Frekuensi dan Persentase Respon Sensitivitas Antibiotik
Jenis Anti Biotik
Frekuensi Sensitiv Antibiotik
Jumlah
Presentase Sensitiv Antibiotik
Jumlah
Amikasina
Sensitif
16
Intermediet
5
Resisten
11
32
Sensitif
50
Intermediet
15.6
Resisten
34.4
100
Amoksilina
8
0
24
32
25
0
75
100
Amoksisilinasama
14
9
9
32
43.8
28.1
28.1
100
Klavulanata
9
3
20
32
28.1
9,4
62.5
100
Seftriaksona
9
1
22
32
28.1
3.1
68.8
100
Sefotaksima
Siprofloksasin
28
1
3
32
87.5
3.1
9.4
100
a
31
0
1
32
96.9
0
3.1
100
a
15
1
16
32
46.9
3.1
50
100
18
6
28
52
34
10
28
100
41
7
4
52
79
14
4
100
41
11
0
52
79
21
0
100
Kloromfenikol
Ampisilin
b
b
Sefikasim
Azitromosin
b
Keterangan :
a
b
Suswanti dan Ayu di RSUD Dr. Sutomo (2009)
Hartoyo et al., di RSUD Ulin (2006)
Aktivitas antimikroba dilaporkan terdapat juga dalam cacing tanah
Eisenia foetida mempunyai glikolipoprotein campuran G-90 dan mempunyai daya
hambat terhadap Staphylococcus sp. yang lebih tinggi dibandingkan antibiotik
Gentamicin 10 μg dan Enrofl oxacin 20 μg (Popovic et al.,, 2006). Cacing tanah
E. foetida juga mempunyai Peptida OEP3122 yang dilaporkan bersifat
antimikroba (Liu et al.,, 2004). Cacing Nereis diversicolor mempunyai peptida
histidin yang bersifat antibakteri terhadap S. aureus dan Vibrio alginolyticus
resisten methicillin (Tasiemski et al.,, 2006). Tepung cacing tanah (L. rubellus)
terbukti mempunyai daya antimikroba dengan spektrum luas terhadap bakteri
gram positif S. aureus, bakteri gram negatif E. coli dan S. Pullorum serta fungi C.
Universitas Sumatera Utara
albicans (Damayanti et al., 2009).
Peptida Lumbricin I dilaporkan sebagai
senyawa yang bertanggung jawab atas aktivitas antimikroba spektrum luas pada
cacing tanah (L. rubellus) (cho et al.,, 1998).
Hasil penelitian Gast (1997) menunjukkan bahwa uji serologis terhadap
ayam yang diinfeksi S. Pullorum menghasilkan persentase sampel ayam positif
yang mempunyai antibodi lebih tinggi terjadi pada pengambilan sampel minggu
ke 5–6 pasca infeksi dibandingkan pengambilan sampel pada minggu ke 1–2
pasca infeksi yang di beri pakan imbuhan cacing tanah.
Cacing Tanah (Lumbricus rubellus)
Deskripsi Cacing Tanah Lumbricus rubellus, atau red wriggler atau cacing
tanah merah ini berwarna kemerahan, dengan panjang berkisar antara 7,5 –10 cm.
Segmen berkisar antara 90-145 segmen, klitelium (penebalan dari dinding tubuh
cacing tanah) terletak di segmen 27-32, berbentuk seperti sadel. Pergerakannya
kurang aktif bila dibandingkan dengan spesies dari pheritima, tubuhnya bulat
namun agak gepeng (Catalan, 1981).
Biologi cacing tanah, Spesies : Lumbricus rubellus, Genus : Lumbricus,
Family : Lumbricidae, Ordo : Oligochaeta, Class : Chaetopoda, Phylum :
Annelida, Divisi : Vermes, Kingdom : Animal.
Tepung cacing tanah ((L. rubellus)) mengandung zat aktif antibakteri
(Julendra, 2003), enzim lysozyme, agglutinin, faktor litik (Puwaningroom, 2010)
dan kandungan protein yang cukup tinggi, yaitu sebesar 64-76 % dari bahan
kering (BK) (Palungkun, 2008) serta mengandung asam amino prolin sekitar 15 %
dari 62 asam amino (Cho et al.,, 1998). Aktivitas antibakteri (L. rubellus) berasal
dari Lumbricin I yang merupakan senyawa peptida antimikroba yang berhasil
Universitas Sumatera Utara
diisolasi dan dikarakterisasi dari cacing tanah ((L. rubellus)) (Cho et al.,, 1998).
Cho et al., (1998) menyatakan bahwa hasil uji in vitro menunjukkan Lumbricin I
mempunyai aktivitas antimikroba berspektrum luas, yaitu menghambat bakteri
Gram positif, bakteri Gram negatif dan jamur.
Pembuatan Tepung Cacing Tanah (L. rubellus)
Cacing tanah (L. rubellus) yang digunakan dalam penelitian ini
berumur ± 3 bulan, diperoleh dari peternak cacing. Tepung cacing tanah
dibuat dengan metode Edwards (1985) dan Mihara et al.,. (1991). Cacing
tanah dibersihkan dari media tumbuhnya dan kotoran lain yang menempel,
kemudian dicuci dengan air mengalir. Cacing yang telah bersih disimpan
dalam lemari (inkubator) pada suhu 400C selama + 12 jam. Selanjutnya
cacing tanah dicampur dengan larutan asam format (80%) sebanyak 3 ml per
100 g bobot cacing dan dihaluskan hingga menjadi pasta. Pasta kemudian
dikeringkan dalam oven pada suhu 50-700C selama 4-6 jam. Setelah kering
digiling dengan ukuran partikel ± 40 mesh kemudian diambil sampelnya.
Penyiapan Larutan Tepung Cacing Tanah (L. rubellus)
Tepung cacing tanah ((L. rubellus)) yang akan digunakan dalam penelitian
ini dilarutkan dalam aquades karena bahan aktif yang terkandung dalam tepung
cacing tanah, Lumbricin ,merupakan asam amino yang kaya akan prolin yang
bersifat larut dalam air (Gold Biotechnology, 2009). Konsentrasi tepung cacing
tanah (L. rubellus) yang akan diuji cobakan mengacu pada penelitian sebelumnya
(Damayanti et al.,, 2009; Julendra dan Sofyan, 2007) yaitu sebesar 25% (b/v).
Dimana % b/v menyatakan jumlah gram zat dalam 100 ml larutan, sebagai pelarut
dapat digunakan air/ pelarut lain (Departemen Kesehatan, 1995).
Universitas Sumatera Utara
Pengisian Kertas Disk
Kertas disk disterilkan terlebih dahulu dengan meletakkan kertas disk
dalam cawan petri dan disterilkan dalam autoclave selama 15-20 menit pada
suhu 1210C (Windyaanita, 2006). Selanjutnya kertas disk yang telah
disterilkan, dimasukkan ke dalam 5 tabung reaksi yang berisi supernatan
tepung cacing tanah dengan konsentrasi berbeda yang telah disiapkan
sebelumnya. Setiap tabung berisi tiga buah kertas disk, dan dibiarkan selama
15-20 menit agar zat aktif dalam supernatan tepung cacing tanah dapat
meresap ke dalam kertas disk (Windyaanita, 2006). Untuk perlakuan kontrol
positif digunakan kertas disk yang telah berisi antibiotika kloramfenikol,
karena kloramfenikol memiliki sensitivitas yang sangat tinggi (Uma et al.,,
2005), dimana pada dosis 30 μg/kertas disk mampu menghasilkan diameter
zona hambat sebesar 25-31 mm (Rattanachuay et al.,, 2010).
Universitas Sumatera Utara
METODE PENELITIAN
Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian dilaksanakan di Lab. Reproduksi Fakultas Peternakan
Universitas Sumatera Utara, Jl. A. Sofyan No. 3 Kampus Universitas Sumatera
Utara, Medan. Penelitian akan berlangsung selama 3 bulan yang akan dimulai dari
bulan Februari hingga bulan April 2014.
Tahap I Isolasi Salmonella sp
Bahan
Bahan bahan yang akan digunakan dalam penelitin pada tahap I adalah
Cacing tanah segar yang akan diolah sesuai dengan perlakuan, Brain Heart
Infusion (BHI) Agar dan SSA (Salmonella Sighella Agar) sebagai media biakan
Salmonella sp, alkohol, aquades, alumunium foil, kapas, tisu, sarung tangan, isolat
Salmonella sp akan didapatkan dari hasil isolasi Salmonella sp dari kotoran ayam
dan plastik cling warp.
Alat
Alat-alat yang akan digunakan dalam penelitian ini adalah cawan petri,
pipet mikro, kawat ose, aoutoclaf, pipet tetes, tabung reaksi, bunsen, gelas
erlemeyer, gelas ukur dan masker.
Metode
Metode yang digunakan pada tahap I adalah menghitung CFU (colony
farming unit) yang dikemukakan dalam penelitian Gast (1997). Prosedur yang
digunakan dalam metode ini yaitu: pertama dibuat isolat Salmonella sp dengan
pemurnian salmonella dengan media SSA dan media TSI kemudian uji pewarnaan
dengan methylen red. Diisolatkan kotoran ayam pada media padat SSA kemudian
Universitas Sumatera Utara
diinkubasi pada suhu 300C selama 24 jam, dipindahkan salmonella ke media SSA
yang baru kemudian uji salmonella yang sudah di dapat dengan media TSI dan
dilanjutkan dengan pewarnaan dengan methylan red. Isolat Salmonella sp di
imbuhkan sebesar satu ml ke media SSA yang telah diberi imbuhan perlakuan dan
dihitung kolonial salmonellanya dalam bentuk CFU.
Tahap II Uji Sensitivitas Salmonella Cacing Tanah
Bahan
Bahan bahan yang akan digunakan dalam penelitin pada tahap II adalah
Cacing tanah segar yang akan diolah sesuai dengan perlakuan, Salmonella sighell
agar (SSA) sebagai media biakan salmonella, alkohol, aquades, alumunium foil,
kapas, tisu, sarung tangan, isolat salmonella akan didapatkan dari hasil isolasi
Salmonella sp dari tahap I dan plastik cling warp.
Alat
Alat-alat yang akan digunakan dalam penelitian ini adalah cawan petri,
pipet mikro, kawat ose, aoutoclaf, pipet tetes, tabung reaksi, bunsen, gelas
erlemeyer, gelas ukur, vortex atau mixer bertujuan untuk melarutkan zat-zat yang
terkandung dalam cacing tanah (L. rubellus), centriviewge digunakan untuk
memisahkan cairan dari supratanya dan masker.
Metode
Metode yang digunakan pada tahap II adalah metode kertas cakram yang
mana kertas cakram bertujuan untuk menyimpan larutan perlakuan yang akan
ditambah ke media. Pelaksanaan tahap II dimulai dengan disiapkannya media agar
padat kemudian diisolasikan isolat Salmonella sp dari media cair yang telah
diencerkan hingga CFU-nya 108-109 kemudian dilakukan inkubasi media pada
Universitas Sumatera Utara
suhu +300C di ingkubator selama 24-36 jam selanjutnya ditambahkan kertas
cakram yang telah diisi perlakuandan cacing tanah, diingkubasikan kembali
selanjutnya diukur diameter daerah bening pada media.
Tahap III Uji Tantang Menggunakan Ayam Broiler
Bahan
Bahan-bahan yang digunakan dalam tahap III adalah cacing tanah segar
yang sudah diolah dan siap dijadikan perlakuan, ternak ayam sebagai media uji
tantang, aquades, sarung tangan, isolat Salmonella sp, alkohol dan pakan ayam.
Alat
Alat-alat yang digunakan dalam tahap III adalah kandang idividual dengan
ukuran 25cm X 32cm, tempat pakan, tempat minum, spuit 30 ml sebagai alat
pencekok, tempat penampungan feses, media padat SSA, cawan petri, autoclaf,
centriviewge, vortex atau mixer, pipet tetes, inkubator, tabung reaksi, kawat ose,
dan sarung tangan.
Metode
Tahap III mengunakan metode uji tantang dimana peneliti akan
menginangkan Salmonella sp pada ternak ayam dan diberi perlakuan sehingga
dapat diketahui pertumbuhan dan perkembangan Salmonella sp terhadap
perlakuan apakah perlakuan dapat mengendalikan pertumbuhan Salmonella sp
pada inangya. Prosedur yang digunakan dalam metode ini yakni penampungan
feses ayam selama 4 hari pertama sebelum perlakuan pada kandang metabolis dan
dihitung CFU-nya, kemudian dicekokan isolat Salmonella sp dengan konsentrasi
+106 pada ternak unggas hari ke 5 dan penampungan feses dilakukan hari ke 6
sampai hari ke 9 (masa inkubasi) dan dihitung CFU-nya pada feses. Setelah masa
Universitas Sumatera Utara
inkubasi hari ke 10 sampai ke 13 feses dilakukan penampungan feses ayam yang
telah terinfeksi dan dihitung CFU-nya pada feses.
Metode Penelitian
Rancangan yang digunakan adalah rancangan acak lengkap non faktorial
yang terdiri atas 5 perlakuan dan 4 ulangan,
Adapun perlakuan yang di teliti tersebut antara lain;
P0 =
infeksi salmonella (kontrol)
P1=
infeksi salmonella + pengendalian antibiotik
P2 =
infeksi salmonella + pengendalia ekstrak cacing tanah
P3 =
infeksi salmonella + pengendalian tepung cacing tanah
P4=
infeksi salmonella + pengendalian bubur cacing tanah
Metode linier RAL (rancangan acak Lengkap) yang diasumsikan adalah:
Yij = µ + σi + ɛij
Dimana:
Yij = Respon atau nilai pengamatan dari perlakuan ke-i dan ulangan ke-j
i
= 1, 2, 3 ... = perlakuan
j
= 1, 2, 3 .... = ulangan
µ = nilai tengah umum
σi = pengaruh perlakuan ke-i
ɛij = Pengaruh galat (Experimental Error)
Universitas Sumatera Utara
TAHAP I
penghitungan
CFU
Isolasi salmonella dari feses ke
media berimbuhan cacing tanah
Pengghitungan
total counting
TAHAP II
Uji sensitivitas cacing tanah
terhadap salmonella sp
Mengunakan
metode kertas
cakram
Uji invitro
Uji sensitivitas pada zona
bening
TAHAP III
Uji tantang (in vivo)
pada ayam broiler
Penghitungan total kolonial
berdasarkan CFU
Gambar 1. Kerangka metode penelitian efektivitas pengendalian Salmonella sp dengan berbagai
pengolahan cacing tanah (L. rubellus)
Universitas Sumatera Utara
Pelaksanaan Penelitian
Pembuatan media
Isolasi mikroba dari manur ayam
Isolasi Salmonella sp ke media baru
Uji sensitivitas dan penghitungan CFU-nya
Gambar 2. Alur Pelaksanaan Secara In Vitro
Penyekokan isolat salmonella pada unggas
Masa inkubasi salmonella
Pemberian antibiotik sesuai perlakuan
Colecting manur setiap 24 jam
Colekting manur diuji secara in vitro
Gambar 3. Alur Pelaksanaan Secara In Vivo
Universitas Sumatera Utara
HASIL DAN PEMBAHASAN
Tahap I Isolasi Salmonella
Prinsip dari penghitungan metode hitungan cawan adalah bila sel mikroba
yang masih hidup ditumbuhkan pada medium, maka mikroba tersebut akan
berkembang biak dan membentuk koloni yang dapat dilihat langsung dan
kemudian dapat dihitung tanpa menggunakan mikroskop. Hasil pengamatan dari
tahap I yaitu penghitungan total koloni Salmonella sp pada media SSA yang
diimbuhkan perlakuan kedalamnya dapat di lihat pada gambar 1.
6,50
6,16A +0,02
AB
6,08B + 0,04 6,13 + 0,02
5,81C + 0,05
6,00
Log CFU
5,44D+ 0,07
5,50
5,00
Series1
Gambar 4. Tahap I Isolasi Salmonella Pada Media
Berimbuhan Cacing Tanah
Berdasarkan gambar di atas dapat dilihat rataan tertinggi pada perlakuan
(P0) kontrol yaitu sebesar 6,16 Log CFU dimana pada P0 media tidak
mendapatkan imbuhan antibiotik buatan maupun komersil dan diikuti dengan (P4)
bubur cacing tanah sebesar 6,13 Log CFU, bubur cacing tanah sebesar 0,1 ml
diimbuhkan kemedia SSA, kemudian disusul dengan P3 sebesar 6,08 Log CFU
dimana pada P3 mendapatkan imbuhan tepung cacing tanah sebesar 0,1g dalam
media, dan diikuti dengan P2 sebesar 5, 81 Log CFU perlakuan P2 mendapatkan
Universitas Sumatera Utara
imbuhan ekstrak cacing tanah sebesar 0,1 ml hingga perlakuan terendah pada
perlakuan (P1) Ab atau penggunaan antibiotik komersil sebesar 5,44 Log CFU
dimana setiap perlakuan mengikiti dosis penggunaan antibiotik komersil sebesar
0,1 ml.
Lumbricus rubellus juga sudah lama dipakai sebagai antipiretik (patogen).
Pengujian ekstrak cacing tanah untuk melihat aktivitasnya sebagai antipiretik
dilakukan oleh Sajuthi et al., (2003). Ketika dilakuakan penelitian pengendalian
Salmonella sp didapat data analisa keragaman menjelaskan bahwa antar perlakuan
memiliki tingkat pengendalian yang berbeda.
Setiap perlakuan memiliki total koloni yang sangat berbeda kecuali pada
perlakuan P4 sebesar 6,13 yang mendekati perlakuan P0 sebesar 6,16 dan
perlakuan P3 sebesar 6,07. Perbedaan ini dapat disebabkan oleh Banyaknya asam
amino yang terkandung dalam tubuh cacing tanah, ini memberikan gambaran
bahwa tubuhnya mengandung berbagai jenis enzim yang sangat berguna bagi
kesehatan. penelitian menjelaskan bahwa Lumbricus rubellus mengandung enzim
Lumbrokinase,
peroksidase,
katalase,
dan
selulosa
(Palungkun,
2008).
Lumbrokinase merupakan salah sattu enzim yang bertanggung jawab dalam
mengegdalikan patogen pada saluran pencernaan, enzim enzim pada L. rubellus
besifat alkaloid dan hanya bereaksi pada pelarut basa sehingga bisa diserap tubuh
(Mihara et al., 1991), sedangkan pada perlakuan P4 atau bubur cacing tanah tidak
mendapatkan pelarut basa karena hanya melalui proses pasturisasi saja.
Serangkaian pengujian kimia diketahui bahwa senyawa aktif sebagai
antipiretik dari ekstrak cacing tanah adalah golongan senyawa alkaloid. Pengujian
memang belum dapat menentukan nama senyawanya secara tepat. Golongan
Universitas Sumatera Utara
senyawa alkaloid mempunyai ciri mengandung atom nitrogen dan bersifat basa
(Sajuthi et al., 2003).
Mihara et al., (1991) dan Sajuthi et al., (2003) mencoba menjelaskan
bahwasanya kandungan lumbritin dan enzim-enzim yang berada pada L. rubellus
tidak mudah larut karena bersifat alkaloid sehingga pada perlakuan (P4) bubur
cacing tanah tidak mendapatkan reaksi yang berbeda jauh dengan perlakuan (P3)
dikarenakan antimikroba yang tidak bereaksi secara sempurna, hal ini dapat
dilihat dari P4 tidak berbeda nyata dengan P0 yang tidak memiliki antimikroba.
Tahap II Uji Luas Zona Bening
Resistensi merupakan zona hambat antibiotik yang terjadi terhadap
bakteri, sedangkan sensitifitas merupakan zona hambat yang tidak terjadi pada
antibiotik terhadap bakteri, Maka zona bening adalah sensitifitasa bakteri terhadap
anti bakteri. Hal ini sejalan dengan pendapat Cappuccino (1978) yang mengatakan
bahwa diameter zona hambatan disebabkan antibiotik atau patogenesis.
23,30A + 0,17
25,00
18,40B + 0,17
15,50C + 0,08
12,75D + 0,25
20,00
Log CFU
15,00
10,00
5,00
0,00E + 0
0,00
kontrol
Ab
ext
tepung
bubur
Series1
Gambar 5. Luas Zona Bening (mm) Sensitivitas Salmonella terhadap Perlakuan
Analisa keragaman pada zona bening menunjukkan F hitung lebih besar
dari F tabel 0,05 sehingga dilakukan uji lanjut mengunakan uji duncan. Pada uji
lanjut didapati bahwa setiap perlakuan memiliki perbedaan yang dapat dilihat dari
rataan tertinggi pada (P1) antibiotik komersil sebesar 23,30 mm dan diikuti secara
Universitas Sumatera Utara
berturut-turut (P2) ekstrak cacing tanah sebesar 18,40 mm, (P3) tepung cacing
tanah 15,50 mm, (P4) bubur cacing tanah sebesar 12,75 mm dan terendah pada
(P0) perlakuan kontrol tanpa penambahan antibiotik apapun. Perbedaan ini juga
dapat dilihat dari notasi dari setiap perlakuan yang berbeda antar satu perlakuan
dengan perlakuan yang lain.
Kontrol negatif (P0) merupakan perlakuan yang tidak diberi apapun
kedalamnya dan bertujuan untuk mengetahui jumlah dan tingkat pertumbuhan
Salmonella sp secara normal. Pada P0 tidak memiliki luas zona bening karena
tidak memiliki zat antimikroba. (P1) antibiotik komersil memiliki diameter zona
hambatan sebesar 23,30 mm pada masa inkubasi 24 jam dan diikuti berturut-turut
dengan perlakuan (P2) ekstrak cacing tanah memiliki diameter 18,40 mm, (P3)
tepung cacing tanah sebesar 15,50 mm dan yang terkecil pada perlakuan (P4)
bubur cacing tanah sebesar 12,75 mm. Menurut Baehaki et al., (2011) indeksa
zona bening dinyatakan positif bila zona bening > 1,00 cm.
Berdasarkan hasil uji pengukuran diameter daerah hambatan dari sampel
menunjukkan bahwa setiap jenis sampel uji dengan konsentrasi berbeda memilki
kemampuan dalam menghambat pertumbuhan bakteri Salmonella sp dengan
diameter hambatan yang berbeda. Menurut Mary (2001) hal tersebut dapat
disebabkan karena adanya perbedaan konsentrasi senyawa aktif yang bersifat
sebagai antimikroba pada masing-masing konsentrasi dan jenis sampel uji.
Konsentrasi bahan kimia akan mempengaruhi pertumbuhan mikroorganisme.
Dalam konsentrasi kecil bersifat menghambat pertumbuhan mikroorganisme
(Lay,1994) dan dengan konsentrasi yang tinggi akan menyebabkan lebih banyak
kematian mikroorganisme (Hewitt dan Stephen, 1989).
Universitas Sumatera Utara
Menurut Barnet (1992) perbedaan besarnya daerah hambatan untuk
masing-masing konsentrasi dapat diakibatkan antara lain perbedaan besar kecilnya
konsentrasi atau banyak sedikitnya kandungan zat aktif antimikroba yang
terkandung di dalamnya serta kecepatan difusi bahan antimikroba ke dalam
medium (Lay, 1994). Faktor-faktor lain yang juga dianggap dapat mempengaruhi
antara lain kepekaan pertumbuhan bakteri, reaksi antara bahan aktif dengan
medium dan temperatur inkubasi. Beberapa faktor yang juga mempengaruhi hal
ini antara lain pH lingkungan, komponen media, stabilitas obat, ukuran inokulum,
waktu inkubasi dan aktivitas metabolik mikroorganisme (Brooks, et al., 2005).
Tahap III. Uji Tantang Salmonella sp dengan Cacing Tanah pada Ayam
Broiler
Isolat Salmonella sp didapatkan pada sampel manur ayam menggunakan
metode swab. Isolat murni Salmonella dari media selektif selanjutnya
dikonfirmasi dengan uji biokimia. Hasil uji biokimia dengan media TSI
didapatkan reaksi berwarna kuning kemerahan. Hal ini menunjukkan isolat yang
didapat tersebut hanya memfermentasi glukosa dalam media TSI. Reaksi positif
dalam uji methyl red menunjukkan bahwa isolat tersebut mampu memetabolisme
sumber karbon sitrat, memfermentasi campuran asam, butanediol dan glukosa,
sesuai dengan karakteristik biokimia bakteri Gram negatif Salmonella sp
(Seeley et al., 2001).
Uji sensitivitas pada tahap ini mejadi tiga fase, tahap pertama dimulai dari
hari pertama hingga hari keempat bertujuan mengetahui tingkatan pertumbuhan
Salmonella sp pada fase kosong (tidak mendapatkan perlakuan) hal ini sesuai
dengan GAST (1997) dalam prosedur Uji serologis dan uji biologis antimikroba
Universitas Sumatera Utara
dilakukan dalam 3 tahapan, yaitu 1) 1 minggu sebelum infeksi bakteri, 2) 1
minggu setelah infeksi dan 3) 1 minggu setelah infeksi.
Tabel 5. Uji Tantang Salmonella Dengan Cacing Tanah Pada Ayam Broiler
Kontrol
Antibiotik
Ekstrak
Tepung
Bubur
Hari/Fase
(Log CFU) (Log CFU)
(Log CFU) (Log CFU (Log CFU)
(tn)
Fase Awal
Hari Ke ;
2,83
2,85
2,85
2,85
2,85
1
3,20
3,21
3,21
3,20
3,20
2
3,36
3,37
3,37
3,37
3,36
3
3,53
3,53
3,54
3,53
3,53
4
(tn)
Fase Infeksi
Hari Ke ;
6,07
6,07
6,07
6,07
6,06
1
6,11
6,11
6,12
6,11
6,11
2
7,18
7,19
7,19
7,18
7,18
3
8,24
8,24
8,24
8,24
8,23
4
Fase Pengendalian
Hari Ke ;
8,34a
8,33b
8,32b
8,31b
8,31b
1
8,39a
8,34c
8,36b
8,36b
8,36b
2
8,63a
8,20d
8,36c
8,37b
8,37b
3
4
8,81a
7,96c
8,22b
8,23b
8,23b
Keterangan.
tn
; tidak berbeda nyata
Super scrib ke arah baris menunjukan perbedaan nyata anar perlakuan (P>0,05)
Pada fase pertama terdiri atas empat hari diaman umur ternak sudah
berumur satu minggu. Pada fase pertama tidak memiliki perbedaan yang nyata
antar perlakuan hal ini dapat dilihat dalam Tabel 5.
Fase kedua merupakan fase infeksi mikroba yang ingin dilihat tingkat
infeksinya. Pada fase kedua mikroba yang di infeksikan (Salmonella sp) memiliki
tingkat koloni 106 CFU. Infeksi Salmonella sp dilakuakan secara oral dan diamati
pertumbuhan dan pertambahan koloninya melalui feses setiap harinya hal ini
dapat terlihat pada Tabel 5
Universitas Sumatera Utara
Tabel 5. menunjukkan bahwa setiap perlakuan perharinya tidak berbeda
nyata hal ini disebabkan kondisi yang homogen dari setiap perlakuan. Pada hari ke
1 setiap perlakuan memiliki total koloni 6,06-6,07 Log CFU dan setiap harinya
bertambah secara berturut-turut pada hari ke 2 sebesar 6,11-6,12 Log CFU, hari ke
3 sebesar 7,18-7,19 Log CFU hingga hari ke 4 pertumbuhan Salmonella sp
semakin meningkat hingga 8,23-8,24 Log CFU.
Tabel 5. juga menjelaskan bahwa Salmonella sp yang diinjeksikan dapat
beradaptasi, tumbuh dan berkembang dalam saluran pencernaan ayam broiler, hal
ini dapat dilihat dari tingkat pertambahan koloni dari tiap harinya yang begitu
pesat, dengan begini ayam broiler dianggap sakit dan sudah mengalami
salmonelosis, sehingga dapat dilakukan tahap pengendalian atau fase tiga dari
pemeliharaan.
Fase tiga Uji coba antibiotik ke ayam, penelitian ini menggunakan 20 ekor
ayam Broiler umur 16 hari, dibagi dalam 5 kelompok percobaan yaitu: P0 = pakan
tanpa mengandung imbuhan (kontrol) P1 = pakan berimbuhan antibiotik komersil,
P2 = pakan berimbuhan ekstrak cacing tanah, P3 = pakan berimbuhan tepung
cacing tanah, P4 = pakan berimbuhan bubur cacing tanah. Masing-masing
kelompok percobaan dibagi menjadi 4 ulangan yang masing-masing berisi 1 ekor
ayam. Ayam dipelihara dari umur 1 hari (DOC) sampai umur 20 hari dan diberi
perlakuan mulai umur 16 hari.
Hari ke 1 setelah fase pengendalian perlakuan tertinggi pada P0 yaitu
perlakuan kontrol negatif, ayam broiler ini tidak diberi perlakuan apa-apa dan
memiliki koloni sebesar 8,34 Log CFU yang berturut-turut diikuti oleh P1
perlakuan dengan antibiotik komersil sebesar 8,33 Log CFU, P2 dengan
Universitas Sumatera Utara
perlakuan ekstrak cacing tanah sebesar 8,32 Log CFU, P3 dengan perlakuan
tepung cacing tanah memiliki koloni sebesar 8,31 Log CFU hingga perlakuan P4
bubur cacing tanah yang memiliki total koloni sebesar 8,31 Log CFU. Hal ini
sesuai dengan Masduki (1996) kemampuan biologis setiap bakteri juga berbedabeda dalam merespon bahan antibakteri. Salah satu faktor yang paling
berpengaruh adalah adanya perbedaan struktur dinding sel antara bakteri gram
negatif dan bakteri gram positif. Komponen khusus bakteri gram negatif terdiri
atas lipoprotein, selaput luar, dan lipopolisakarida. Selaput luar dinding sel bakteri
gram negatif merupakan selaput ganda fosfolipid yang sebagian besar diganti
dengan molekul lipopolisakarida.
Lumbrokinase merupakan salah satu enzim yang bertanggung jawab
dalam mengendalikan patogen pada saluran pencernaan, enzim-enzim pada
L.rubellus besifat alkaloid dan hanya bereaksi pada pelarut basa sehingga bisa
diserap tubuh (Mihara et al., 1991)
Analisa keragaman di atas diketahui bahwa total Log CFU pada hari ke 1
pemeliharaan sangat berbeda nyata hal ini dapat dilihat dari F hitung lebih besar
dari F tabel 0,05 dimana F hitung dan harus dilakukan uji lanjut untuk lebih
mengetahui tingkat keragamnya.
Uji lanjut didapatkan bahwa setiap perlakuan memiliki nilai sensitive
terhadap salmonella dan hanya pada P0 (kontrol) pakan tanpa imbuhan antibiotik
memiliki nilai yang tertinggi dengan nilai rataan 8,34 Log CFU sedangkan P1, P2,
P3dan P4 tidak memiliki perbedaan yang nyata memiliki notasi B dari hasil uji
lanjut. Hal ini bisa disebabkan total koloni didalam saluran pencernaan yang
sangat tinggi dan anti biotik didak dapat secara spontanitas membunuh seluruh
Universitas Sumatera Utara
Salmonella sp yang ada pada saluran pencernaan tetapi hanya mampu
melisikannya seperti dikatakan Syamsiah, et al., (2005) bahwa antibakteri dalam
ramuan herbal akan melisiskan racun yang menempel pada usus sehingga
penyerapan zat makanan lebih meningkat.
Menurut Tafsin (2007) bakteri seperti Salmonella sp memiliki lektin pada
permukaan selnya yang dapat mengenal gula spesifik dan membiarkan selnya
untuk menempel pada gula tersebut, sehingga gula tersebut termediasi oleh bakteri
tersebut, dengan penambahan cacing tanah dalam pakan maka lumbritin akan
melindungi dinding saluran pencernaan dan salmonella tidak dapat menempel dan
menurunkan tingkat populasi dalam saluran pencernaan ternak.
Hari ke 2 fase pengendalian total koloni pada feses ayam dapat dilihat
pada tabel 5. Hari kedua fase pengendalian memang tidak memiliki perbedaan
yang cukup siknifikan tetapi bila diuji analisa keragamanya diketahui bahwa
149,28** f hitung lebih besar dari pada f tabel 0,05 sebesar 4,89 hal ini
menunjukkan bahwasanya perlakuan sangat berbeda nyata sehingga dilakukan uji
lanjut duncan.
Uji lanjut duncan menjelaskan bahwa rataan tertinggi pada (P0) kontrol
yang memiliki rataan 8,49 dimana perlakuan tidak mendapatkan imbuhan
antibiotik apapun, hal ini di ikuti dengan (P1) antibiotik, (P2) ekstrak cacing
tanah, (P3) tepung cacing tanah yang memiliki notasi sama yaitu B antara tiga
perlakuan ini hal ini membuktikan bahwa tidak ada perbedaan yang nyata antara
tiga perlakuan ini, ketiga perlakuan ini dapat melisiskan salmonella dalam saluran
pencernaan karena berbedan nyata dengan perlakuan P0 tetapi tidak sampai
mengimbangi perlakuan P1 sebesar 8,34 hal ini sesuai dengan Syamsiah et al.,
Universitas Sumatera Utara
(2005) antibiotik yag baik adalah dapat melisiskan bakteri dalam saluran
pencernaan sehingga penyerapan nutrisi lebih baik, dan didukung juga oleh
Mihara et al., (1991) dan Sajuthi et al., (2003) mencoba menjelaskan bahwasanya
kandungan lumbritin dan enzim-enzim yang berada pada L. rubellus tidak mudah
larut karena bersifat alkaloid, hal ini menyebabkan lumbritin (antimikroba)
terjebak dalam saluran pencernaan dan sempurna melisikan Salmonella sp.
Hari ke 3 fase pengendalian total koloni pada feses ayam memiliki jumlah
(P0)8,63 Log CFU, (P1) 8,20 Log CFU, (P2) 8,36 (P3) 8,37 dan (P4) 8,37 dari
hasil tersebut dapat dilihat bahwa rataan tertinggi terdapat pada perlakuan (P0)
dimana perlakuan ini tidak memiliki imbuhan antibiotik sebesar 8,63 Log CFU
yang diikuti secara berturut-turut oleh (P3) tepung cacing tanah 8,37 dan (P4)
bubur cacing tanah yang memiliki rataan yang sama yakni sebesar 8,37 Log CFU
dan terus diikuti oleh (P2) ekstrak cacing tanah sebesar 8,36 Log CFU dan (P1)
imbuhan antibiotik buatan sebesar 8,20 Log CFU maka dilakukan analisa
keragaman sehingga di ketahui bahwa F hitung 856,67 lebih besar dari pada F
tabel 0,05 sebesar 4,89 hal ini menjelaskan bahwasanya ada perbedaan antar
perlakuan maka dilakuakan uji lanjut duncan untuk mengetahui perlakuan mana
yang berbedanyata.
Uji duncan dapat dilihat bahwa rataan tertinggi terdapat pada perlakuan