Tahap 3. Analisis Bioavailabilitas in vitro kalsium Crackers metode Dialisis Roig et al. 1999
a. Bahan dan Alat
Semua peralatan gelas dicuci, direndam dalam larutan HNO
3
10 vv selama 24 jam dan dibilas dengan air bebas ion sebelum digunakan. Bahan dan
alat meliputi : 1. HCl
37 2. Suspensi Pepsin :
1,6 g pepsin didispersikan ke dalam 0,1 M HCl dan ditepatkan volumenya menjadi 10 ml. suspensi ini dibuat sewaktu akan digunakan.
3. Campurkan pankreatin
: Sebanyak 1 g pankreatin dan 6,25 g ekstrak
bile didispersikan dalam 0,1 M NaHCO
3
dan ditepatkan volumenya menjadi 250 ml. Campuran ini dibuat sewaktu akan digunakan.
4. Kantung Dialisis : Kantung dialisis dipotong dengan panjang 20 cm dan kemudian direndam
dalam air bebas ion sampai akan digunakan. 5. Botol-botol
gelas :
Botol-botol gelas dengan ukuran yang sesuai dan mencukupi, digunakan untuk tempat sampel dan kantung dialisis.
b. Persiapan sampel Gambar 3
crackers diblender kering sampai menyerupai bubuk Ditimbang setara 2 gram protein
Analisis ketersediaaan kalsium Gambar 3 Tahap-tahap persiapan sampel
c. Prinsip analisis
Kalsium sampel dihirolisis dari ikatannya dengan protein menggunakan enzim-enzim pencernaan yang terdapat di lambung dan usus halus.
Kalsium bebas yang terdapat dalam larutan sampel akan berdifusi melalui membran semipermeabel ke dalam kantung dialisis yang berisi buffer
NaHCO
3
. Kalsium dalam dialisat menunjukkan jumlah kalsium yang diserap tubuh.
d. Pencernaan in vitro kalsium pada crackers Gambar 4
Gambar 4 Prosedur pencernaan kalsium secara
in vitro dalam analisis ketersediaan biologis bioavailabilitas kalsium dengan metode
dialisis Roig et al. 1999
Sampel + H
2
0 bebas ion 100 ml Atur pH menjadi 2,0 dengan HCl 4N
Timbang gelas piala bersama sampel A
Timbang 20 g T1 Timbang 20 g T2
+ suspensi Pepsin 1 ml + suspensi Pepsin 1 ml
1,6 g pepsin dilarutkan dalam 10 ml HCl 0,1 N
Inkubasi 37 C 120 mnt kec 5
Inkubasi 37 C 120 mnt kec 5
Masukkan ke dalam freezer Masukkan ke dalam
freezer
+ 5 ml pancreatin bile
+ 5 ml pancreatin bile
Inkubasi 37 C 2 jam kec 5
Angkat kantung dialisis Titrasi dgn kOH standar
sampai pH 7
Cuci dengan air bebas ion Hitung kebutuhan NaHCO
3
Timbang dialisatnya 1 gr pankreatin sigma p
170 + 6,23 ekstrak bile
sigma B-8631 larutkan dalam 250 ml NaHCO
3
0,1 N Thawing dalam shaker 37
C Kantung dialisis dimasukkan
Inkubasi 37 C 30 menit kec 5
Potong kantung ± 12 cm, rendam dlm air bebas ion
lalu ikat salah satu ujungnya dan isi dengan
20 ml larutan NaHCO
3
hasil perhitungan Thawing dalam shaker 37
C
e. Pengabuan basah untuk analisis kandungan kalsium pada dialisat dan crackers
