Pengaruh pH dan NaCl terhadap produksi inhibitor protease Escherichia coli dari Acinetobacter baumanii (bakteri yang bersimbiosis dengan sponge)

PENGARUH pH DAN NaCl TERHADAP PRODUKSI DIEIBITOR
PROTEASE Eschericlzin coli DARI Acinetobncfer baurnnnii
(bakteri yang bersimbiosis dengan sponge)

.

Oleh :
Rini Suwardinni
C03400047

PROGRAM STUD1 TEICNOLOGI HASIL PERIKANAN
FAKULTAS PERIKANAN DAN ILMU KELAUTAN
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
2006

RIM SUWARDINNI. C03400047. Pengaruh pH dan NaCl terhadap
Produksi Inhibitor Protease Escltericltia coli dari Acinetobacter bnumanii
(bakteri yang bersimbiosis dengan sponge). Dibawah bimbingan TAT1
NUREIAYATI dan DESNIAR.
Protease adalah enzim yang dapat menghidrolisa ikatan peptida dan
protein. Protease banyak diaplikasikan sebagai katalisator hayati khususnya

dalam bidang industri pangan, deterjen dan kulit. Walazpm ?emiki~nprotease
yang dihasilkan bakteri patogen dapat digunakan sebagai target senyawa obat bagi
penyakit-penyakit yang disebabkan oleh bakteri dan virus seperti kanker;.mor,
malalia, SARS, dan juga penyakit degeneratif Alzheimer. Inhibitor alamiah
protease diketahui tersebar luas pada makhluk hidup, dan dapat diproduksi dari
mikroorganis~e. Penelitian lebih lanjut menunjukkan telah banyak inhibitor
protease yang berhasil diisolasi dari mikroba dan digunakan untuk mempelajari
mekanisme enzimatik d& aktivitas farmakologis. Namun belum dilakukan
penelitian untuk meningkatkan a k t ~ t a sinhibitor protease tersebut. Oleh karena
itu perlu dilakukan variasi pH dan NaCl pada medium sehhgga diarapkan
aktivitas inhibitor ini dapat menghambat protease secara optimal. Adapun bakteri
yang digunakan adalah Acinetobacter baumannii.
Penilitian ini dilakukan untuk mengetahui pengamh NaCl dan pH medium
terhadap produksi inhibitor protease Escherichia coli dari A. baumanii.
. Penelitian ini dilakukan dengan memodifikasi media pertumbuhau bakteii laut
Acinetobacter baumannii dengan variasi NaCl (0%, 2% dan 4%) dan juga pH (6,
7 dm 8). Penelitian ini dilakukan dengan tiga tahap yaitu penentuan waktu
propagasi bakteri laut, produksi protease kasar serta produksi inhibitor protease.
Adapun parameter yang diukur adalah OD, p w penentuan a k t i t a s protease,
s

protease dan penentuan konsentrasi protease kasar.
penentuan a l r t ~ t a inhibitor
Aktivitas inhibitor protease tertinggi untuk perlakuan NaCl 0% terjadi
pada jam ke-20 berada pada fase logaritmik dengan nilai penghambatan sebesar
1,81 unit/& OD sebesar 0,355, pH sebesar 7,70, konsentrasiprotein 0,118 mdml
an aktivitas protease sebesar 0,035 IUImnt. Untuk NaCl 2% a k t ~ t a inhibitor
s
ertingg protease terjadi pada jam ke-28 berada pad fase loga~itmikdengan
aktivitas sebesar 1,93 unit14 OD sebesar 0,667, pH sebesar 7,28, konsentrasi
protein 0,101 mglml dan aktivitas protease sebesar 0,032 IUImnt. Sedangkan
untuk NaCl 4% aktivitas inhibitor tertinggi terjadi pada jam ke-24 yang berada
pada fase logaritmik dengan aktivitas sebesar 1,90 unitlml, OD sebesar 0,790, pH
sebesar 7,77, konsentrasi protein 0,104 mgtml dan aktivitas protease sebesar 0,022
IUImnt. NaCl 2% merupakan perlakuau terbaik dengan nilai penghambatan
teitinggi yaitu sebesar 1,93 Unitlml. Kemudian dari perlakuan terbaik (NaCl2%)
dilanjutkan dengan perlakuan pH (6,7 dan 8).
Aktiitas inhibitor protease tertinggi uutuk pH 6 terjadi pada jam ke-24
dan ke-32 berada pada fase logaritmik dengan nilai penghambatan yang sama
sebesar 1,69 unit14 OD masing-masimg sebesar 0,786 dan 1,532, pH masingmasing sebesar 6,71 dan 7,06, konsentrasi protein masing-masing 0,120 mglml
dan 0,083 mdml dan aktivitas protease masing-masing sebesar 0,019 IUImnt dan

0,008 IUImnt. Untuk pH 7 a k t ~ t a sinhibitor tertinggi terjadi pada jam ke-16
berada pada fase logaritmik dengan nilai penghambatan sebesar 1,64 u n i t l d OD
sebesar 0,792, pH sebesar 6,89, konsentrasi protein 0,154 mgtml dan aktivitas
protease sebesar 0,011 IUImnt. Sedangkan untuk pH 8 aktitas tertinggi terjadi
pada jam ke-28 berada pada fase logaritmik dengan nilai penghambatan sebesar
1,82 uuitlml, OD sebesar 0,752, pH sebesar 7,85, konsentrasi protein 0,142 mdml
'*n aktivitas protease sebesar 0,002 IUlmut. pH 8 me~upakanperlakuan terbaik
-1gannitai penghambatan teitiuggi sebesar 1,84 uuitlml.

-

B " .

PENGARUH p H DAN NaCl TERHADAP PRODUKSI l[N16IBITOR
PROTEASE Escherichin coli DARI Acinetobacter bnumnnii
(bakteri yang bersimbiosis dengan sponge)

Sebagai salah satu syarat memperolah gelar Sarjana Perikanan
pada Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan
Institut Pertanian Bogor

Oleh :
Rini Suw~rdinni
~03400047

DEPARTEMEN TEKNOLOGI HASDL PElUKANAN
FAKULTAS PEFUKANAN DAN lLMU KELAUTAN
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
2006

: PENGARUH pH DAN NaCl TEHADAP PRODUKSI

Judul Skripsi
-

INHIBITOR -PROTEASE Esclzericlzia coli DARI
Acinetobacter baumanii @akteri yang bersimbiosis
dengan sponge)
Nama Mahasiswa

: Rini Suwardinni

Nomor Pokok

: C03400047

Menyetujui,
Pembimbing 2

Pembirnbing 1

-+-\

Desniar, S.Pi, M.Si.
NIP. 132 150 705

Tati Nurhayati. %Pi,M.Si.
NIP. 132 149 436

&anan dan Ilmu Kelautm

adarwan Soewardi.
NIP. 130 805 031

Tanggal dilulus : 16 Februari 2006

KATA PENGANTAR

Alltamdulillaaltirobbil'aalamiin.

Segala puji dan syukur hanya bagi

AUah SWT. Atas segala rahmat, hidayah, dan inayah-Nya sehingga penulis dapat
menyelesaikan skripsi ini. Penulis mengucapkan terima kasih dan penghargaan
yang sebesar-besarnya kepada :
1. rou Tati Nurhayati, S.Pi, MSi. selaku dosen pembimbing I yang telah
memberikan tknbingan, pengarahan dan masukan selama penelitian dan
penyusunan skripsi.
2.

Ibu Desniar, S.Pi MSi selaku dosen pembimbing II atas segala masukan
selama penynsunan skripsi.

3.

Ibu Ir. Winarti Zahiruddin, MS dan ibu Ir. Anna C. Erungan, MS sebagai
dosen penguji yang telah meluangkan waktu, tenaga dan pikiran untuk
menguji penulis.

4. Orang tua penulis bapak dan ibu untuk kash sayang, semangat dan doa
yang tak pernah putus serta dukungan baik moral maupun mated,
kakakhv Suzan Suwartini dan adik-adikku Ristri Mulia Utami,

Rizbi Satria Utama untuk semangat dan doanya.
5.

Sahabat-sahabatku S i Lely, Dwi, Rikah, T e 4 Warda, Eko, Diki, Ismail,
Nab4 Slamet, Venol, Nano, Edi dan juga teman-tema THP 37
semuanya.

6 . Bu Ika, Mba Dewi, Lia, Pak Ahmed, Intan yang telah banyak membantu

penulis dalam melakukan penelitian.
7.

Semua pihak yang tidak dapat disebutkan satu-saw yang telah
memberikan bantuan, dukungan, dan doanya kepada penulis.

Akhir kata, tak ada sesuatu yang sempuma di semesta ini kecuali Allah
Ta'alla.

Kiranya skripsi ini dengan segala kelebihan dan kekurangannya dapat

bermanfaat bagi pembaca dan pihak la$ yang membutuhkan serta bagi kemajuan
ilmu pengetahuan.
Bogor, Maret 2006
Rini S u w a r d i i

FUWAYAT HIDUP
Penulis bemama lengkap Rini Suwardinni. Dilahirkan

di Sukabumi, Jawa Barat pada tanggal 14 Agustus 1982.
Penulis melupakan anak kedua dari empat bersaudara dari
pasangan Royani dan Yunengsih.

Pendidikan formal penulis

dimulai pada saat mulai duduk di bangku SDN Cisaat I1 (19881994). Kemudian penulis melanjutkan pendidikan di SLTPN I
Cisaat (1994-1997), dan tiga tahun berikutnya (1997-2000) penulis menempuh
pendidikan formal di SMUN 2 Sukabumi. Pada tahun 2000 penulis diterima di
Program Studi Teknologi Hasil Perikanan Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan
Institut Pertanian Bogor melalui jdur Undangan Seleksi Masuk IPB (USMI).
Sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar sarjana pada
Departemen Teknologi Hasil Perikanan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan,
Institut Pertanian Bogor, penulis melakukan penelitian dengan judul Pengaruh

pH dun NaCl terhadap Produksi Inhibitor Protease Escherichia coli dari
Acinetobacter baumanii (bakteri yang bersimbiosis dengan sponge) dibawah
bimbingan Tati Nurhayati, S.Pi, M.Si. dan Desniar, S.Pi, M.Si.

DAF'TAR IS1

Halaman

DAFTAR TABEL ....................................................................................... vii
...
DAFTAR GAMBAR ................................................................................... vlu
DAFTAR LAMPIRAN................................................................................ ix
1.1. Latar Belakang .................................................................................

1

..

1.2. Tujuan Penehtlan ............................................................................. 2

.

1.3. Waktu dan Tempat Penelitian ...........................................................

2

2 TINJAUAN PUSTAKA....................................................................... 3

2.1. Protease Mikroba ............................................................................ 3
2.2. Protease sebagai Faktor Virulensi...............................................

5

2.3. Protease Bakteri Escherichia coli ................................................

6

2.4. Media Fermentasi.............................................................................

7

2.5. Pertumbuhan Mikroba .....................................................................

9

2.5.1. Tahapan pe~tumbuhanmikroba ............................................. 10
2.5.2. Penentuan waktu propagasi................................................... 11
2.6. Klasifikasi Acinetobacter baunlanii ................................................. 12
2.7. Inhibitor Protease...........................................................................

13

2.7.1. Mekanisme kerja inhibitor protease ....................................... 13
2.7.2. Inhibitor protease mikroba .................................................... 14

.

................................................................................ 16
3.1. Bahan dan Alat ............................. .
.
....................................... 16
.
.
3.2. Metode Peneht~an...:....................................................................
16
3.2.1. Penentuan waktu propagasi bakteri laut ................................. 16
3.2.2. Produksi protease kasai ....................................................... 17
3.2.3. Produksi inhibitor protease ................................................... 17
3.3. Analisa Parameter ............................................................................. 18
3.3.1. Penentuan aktivitas protease (Bergmeyer 1984) dari E. coli ... 18

3 METODOLOGI

3.3.2. Penentuan aktwitas inhibitor protease (Anson (1983) dalanz
Imada et a1. (1985b) yang dimodiiasiNurhayati 2004)
dari Acinetobacter baunla~mii................................................ 19
3.3.3. Analisa konsentrasi protein protease kasar (Bradford 1976) ... 20