Gene Rearrangements Pasien Limfoma Folikular Indonesia.

Gene rearrangements pasien limfoma folikular Indonesia

Amaylia Oehadian ,* Naoki Koide,** Pandji Irani Fianza,* Trinugroho Heri Fadjari,*
Rachmat Sumantri,* Iman Supandiman,* & Takashi Yokochi**

*Sub Divisi Hematologi Onkologi Medik , Bagian Penyakit Dalam Fakultas Kedokteran
Universitas Padjadjaran , Rumah Sakit Hasan Sadikin, Bandung, Indonesia. **Department of
Microbiology and Immunology and Research Center for Infectious Disease, Aichi Medical
University School of Medicine, Nagakute, Aichi 480-1195, Japan

ABSTRAK
Tujuan : Gene rearrangements mempunyai peranan penting dalam pengelolaan
limfoma. Kami meneliti rearrangements B-cell leukaemia/lymphoma 2 (BCL2), BCL6 dan
Paired homeobox 5 (PAX5) gen pada pasien-pasien limfoma folikular Indonesia.
Metode: Gene rearrangements diperiksa dengan berbagai metode polymerase chain
reaction (PCR) menggunakan 24 sampel DNA dari darah perifer.
Hasil : BCL2 rearrangement ditemukan pada 58 % ( 14 dari 24 pasien), 8 pada mbr
(major breakpoint region), 2 pada mcr (minor cluster region) dan 4 pada icr (intermediate
cluster region). Tidak didapatkan rearrangement pada gen BCL6 dan PAX5. Terdapat
perbedaan bermakna dalam keterlibatan limpa antara pasien dengan dan tanpa

BCL-2

rearrangement ( 50 % vs 11%, p=0.04). Terdapat korelasi antara BCL-2 rearrangement dan
keterlibatan limpa (OR=9) dan anemia (OR=2.3).
Kesimpulan : Frekwensi BCL2 rearrangement pada limfoma folikular di Indonesia
lebih tinggi dibandingkan dengan laporan pada daerah Asia lainnya. (58 % vs 48 % ). Metoda
pemeriksaan dengan menggunakan DNA dari darah perifer dapat berguna dalam diagnosis
molekular limfoma folikular.

Kata-kata kunci : Gene rearrangements, BCL2, BCL6, PAX5, limfoma folikular .

PENDAHULUAN
Diagnostik molekuler limfoma diperlukan untuk konfirmasi diagnostik, evaluasi
prognostik secara akurat dan sebagai petanda minimal residual disease (MRD).
Abnormalitas genetik limfoma maligna sering tidak mudah terdeteksi dengan analisis
kariotipe, sehingga diperlukan test diagnostik molekuler. Polymerase chain reaction (PCR)

1

telah banyak menggantikan metode Southern blot test. PCR hanya memerlukan sedikit DNA,

relatif cepat dan dapat mendeteksi adanya abnormalitas dalam jumlah kecil.1
Rearrangement B-cell leukaemia/lymphoma 2 (BCL2) yang disebabkan translokasi
gen BCL2 pada kromosom 18q21 ke lokus gen immunoglobulin heavy chain (IgH) pada
14q32

(t(14;18)(q32;q21)) ditemukan pada in 85 % limfoma folikular (LF). Sebagai

akibatnya, gen BCL2 berada dalam pengaruh kontrol IgH E enchancer yang menyebabkan
ekspresi berlebihan protein BCL2 yang bersifat anti apoptosis. Hal ini menyebabkan supresi
apoptosis yang diduga merupakan tahap awal transformasi maligna yang memfasilitasi
akumulasi lesi genetik lebih lanjut . Proses ini selanjutnya menyebabkan tidak terkontrolnya
proliferasi sel dan terjadinya progresifitas menjadi LF. 2,3 Frekwensi translokasi BCL2 pada
LF bervariasi pada setiap tempat, di Asia ( Jepang dan Hongkong) 48 %, Eropa 55 % dan
Amerika Serikat 79 %.4
Rearrangements atau mutasi

lainnya diperlukan dalam terjadinya LF, seperti

translokasi gen myc, Paired homeobox 5 (PAX5) dan BCL6 atau inaktivasi p53 . Gen BCL6
pada 3q27 menghasilkan protein yang berperan dalam regulasi dan diferensiasi sel limfosit B

pada sentrum germinativum. Sebagai akibat translokasi

BCL6 , tidak terjadi

down-

regulation fisiologik gen BCL6 yang akan menghambat diferensiasi limfosit. Mutasi pada
gen BCL6 merupakan mutasi yang paling sering ditemukan pada diffuse large B-cell
lymphomas. Pada LF, juga terdapat translokasi BCL6 dengan frekwensi yang lebih rendah.4
Gen PAX5 mengkode faktor transkripsi B-cell-specific activator protein (BSAP)
yang merupakan regulator pertumbuhan dan diferensiasi sel limfosit B. Rearrangenennt
PAX5 menyebabkan perpindahan posisi PAX5 ke gen IgH : t(9;14)(p13;q32).5,6 Translokasi
ini dilaporkan pada limfoma limfoplasmasitoid. Tingginya kadar BSAP juga ditemukan pada
limfoma sel besar dan beberapa LF. Hal ini merupakan akibat deregulasi ekspresi gen dan
menunjukkan kemungkinan terlibatnya PAX5 pada keganasan sel B tertentu.7
Monoklonalitas IgH gene rearrangement telah digunakan untuk membedakan sel B
maligna dengan sel B normal . Secara khusus, complementarity determining regions (CDRs )
pada variable region gen IgH mengkode antigen binding site yang unik untuk setiap klon sel
B .CDR III pada CDRs merupakan petanda klonal bagi setiap sel B.8,9,10 Pada penelitian
sebelumnya, kami melaporkan metode baru yang sensitif dengan menggunakan seminested

PCR dan analisis heterodupleks untuk mendeteksi monoklonalitas IgH rearrangement pada
DNA lekosit darah perifer pasien LF. Metode ini dapat mendeteksi 1 sel ganas dalam 10.000
sel mononuklear normal pada darah perifer. Dengan menggunakan metode ini kami
menemukan sel limfoma yang bersirkulasi pada 79% ( 19 dari 24 ) pasien limfoma.11
Sepanjang yang kami ketahui, belum ada laporan mengenai rearrangements
gen pada LF di Indonesia . Kami melaporkan rearrangement gen BCL2, BCL6 dan PAX5

2

dengan menggunakan sampel DNA darah perifer yang sama dengan penelitian yang
terdahulu. 11

BAHAN DAN METODE
Pasien
Dua puluh empat pasien dengan gambaran histologi LF yang berobat di Sub Bagian
Hematologi dan Medikal Onkologi Bagian Penyakit Dalam, Rumah Sakit Hasan Sadikin
Bandung, antara bulan Agustus sampai November 2003 diikutsetakan dalam penelitian.
Penelitian ini dilaksanakan sesuai dengan prinsip Deklarasi Helsinki dan telah mendapat
persetujuan Komite Etik Rumah Sakit Hasan Sadikin. Karakteristik klinik pasien dapat dilihat
pada tabel 1.

Tabel 1. Karakteristik klinik 24 pasien LF
Karakteristik klinik

n

%

Laki-laki

18

75

Perempuan

6

25

I

3

13

II

2

8

III

11

46

IV

8

33

Ya

18

75

Tidak

6

25

Ya

8

33

Tidak

16

67

Ya

7

29

Tidak

17

71

10

42

Lekopeni (lekosit < 4 x 10 /L)

3

13

Thrombositopeni (Thr < 150 x 109/L)

1

4

Jenis kelamin

Stadium klinis Ann Arbor

Simptom B

Keterlibatan limpa

Keterlibatan ekstranodal

Abnormalitas hematologi
Anemi (Hb < 12 gr/L)
9

3

Ekstraksi DNA
Untuk isolasi DNA, dilakukan ekstraksi genom DNA dengan berat molekul tinggi
menggunakan metode salting out dari lekosit darah perifer dengan antikoagulan heparin.12
Ekstraksi DNA dilakukan di Bagian Patologi Klinik , Rumah Sakit Hasan Sadikin , Bandung.

Amplifikasi PCR
PCR dilakukan dengan iCycler Bio-Rad (Bio-Rad, Hercules, CA, USA) di Department of
Microbiology and Immunology, Aichi Medical University School of Medicine, Nagakute,
Aichi, Jepang. Sintesa oligonucleotide primers dilakukan oleh Rikaken Co., Nagoya, Jepang.

Primer sequences dapat dilihat pada tabel 2.

Tabel 2. Oligonucleotide primers sequence untuk PCR
Primer

Nucleotide sequence 5’>3’

Kepustakaan

s-MBR

GAGAGTTGCTTTACGTGGCC

2

s-mcr

CGCTTGACTCCTTTACGTGC

2

s-icr

TCGTTCTCAGTAAGTGAGAGTGC

2

s-JH

ACCTGAGGAGACGGTGACC

2

vExon3up

CAACGATGCCTACTTTGCCACCC

2

vExon3low ATCCCGTACATGACGTCACAGCG

2

BCL6/02

CAATCCCATCGGCTCCAAGGTTAGTGTGTGCATGT

13

BCL6/04

TTCATACGACCCCAGACATGGAATCACTCTTTAGA

13

KIS/01

AAGTTGTCCTGGGCTTGGGGTCTAAGTTTATCCTT

13

C/01

TGCTGCTGATGTCAGAGTTGTTCTTGTATTTCCAG

13

C/01

AAGATGGTGATGGTCGTCCACAGCCCGTCCAG

13

C/02

AGGGCACGGTCACCACGCTGCTGAGGGAGTAGAGT

13

C/01

TCGTGTAGTGCTTCACGTGGCATGTCACGGACTTG

13

C/01

CCAGGCAGCCCAGAGTCACGGAGGTGGCATTGGAG

13

GCGTCAGGGTGCTGCTGAGGCTGTAGGTGCTGTCC

13

TGGCCGCGTACTTGTTGTTGCTTTGTTTGGAGGGT

13

C/01
C/02

4

Rearrangement BCL2 :
PCR untuk rearrangement BCL2 dilakukan dengan menggunakan 0.5 unit Taq polimerase
(Ex TagTM, Takara Bio Inc, Otsu, Jepang) dalam 20 l campuran yang terdiri dari 2 l 10x

Ex TagTM bufer, 1.6 l campuran dNTP (masing-masing 2.5 mM ), 1.0 M primer dan 1 g
DNA template. Primer yang digunakan untuk amplifikasi gen BCL-2 adalah s- Major
Breakpoint Region (s-MBR) , s- Minor Cluster Region (s-mcr ) and s-Intermediate Cluster
Region (s-icr) sebagai forward primers dan s-JH sebagai backward primer. Kondisi PCR
yang digunakan adalah :
untuk MBR: denaturasi inisial 98oC selama 3 menit; 30 siklus terdiri dari

10 detik pada

98oC, 30 detik pada 61oC, 30 detik pada at 72oC; untuk mcr: denaturasi inisial 98oC selama
3 menit; 30 siklus terdiri dari 10 detik pada 98oC, 30 detik pada 58oC, 1 menit pada 72oC;
untuk icr : denaturasi inisial 98oC selama 3 menit; 30 siklus terdiri dari 10 detik pada 98oC, 30
detik pada 58oC, 30 detik pada 72oC. Untuk kontrol reaksi PCR, digunakan vExon3up dan
vExon3low primers (house keeping gene).2

Rearrangement BCL6 dan PAX5:
Long distance PCR (LD-PCR) untuk rearrangement gen BCL6 dan PAX5 dilakukan dengan

menggunakan 2.5 unit LA Tag polimerase (TaKaRa LA TagTM) dalam 50 l campuran yang
mengandung 5 l 10x LA PCRTM Bufer II (Mg2+ free), 5 l 25 mM MgCl2, 8 l campuran

dNTP (masing-masing 2.5 M ), 1.0 M primer dan 1 g DNA template.

Dilakukan evaluasi rearrangement gen BCL6 pada 7 lokasi dengan menggunakan kombinasi
primers : BCL6/04-C/03, BCL6/04-C/01, BCL6/04-C/02, BCL6/04-C/01, BCL6/04C/01, BCL6/02-C/01 dan BCL6/02-C/02.13
Rearrangement gen PAX5 dievaluasi pada 5 lokasi dengan menggunakan kombinasi primers:
KIS/01-C/03, KIS/01-C/01, KIS/01-C/02, KIS/01-C/01, and KIS/01- C/01.13
Kondisi PCR untuk mendeteksi kedua rearrangement adalah : denaturasi inisial pada 94 oC
selama 2 menit ; 5 siklus yang terdiri dari 20 detik pada 98 oC, 20 menit pada 72 oC; 5
siklus yang terdiri dari 20 detik pada 98 oC, 20 menit pada 70 oC; 4 siklus yang terdiri dari
20 detik pada 98 oC, 20 menit pada 68 oC; 16 siklus yang terdiri dari 20 menit pada 98 oC, 20
menit pada 68 oC dengan 00.15 auto-segmen extension; 1 siklus 10 menit pada 72 oC.13

Analisis statistik
Karakteristik klinik dan hasil pemeriksaan molekular ditabulasi dan dibandingkan dengan
menggunakan test Fisher Exact . Korelasi antara keduanya dievaluasi dengan odd rasio.

5

HASIL

Translokasi gen BCL2
Translokasi gen BCL2 ditemukan pada 58 % (14/24) pasien. Lokasi breakpoint
adalah MBR pada 33 % (8 /24), mcr 8% (2 /24) dan icr 17 % (4 /24) pasien. Gambar
hasil PCR dapat dilihat pada gambar 1.

Gambar 1 . Hasil PCR rearrangement gen BCL2. Tanpa rearrangement (A), rearrangement
BCL2 pada Major Breakpoint Region (MBR) (B), rearrangement BCL2 pada minor cluster
region (mcr )(C) dan rearrangement BCL2 pada intermediate cluster region (icr) (D). M,
100 bp petanda ukuran DNA ; baris 1, house keeping gene; baris 2, MBR (180-275 bp); baris
3, mcr (580-630 bp); baris 4, icr (73-134 bp).

6

Perbandingan karakteristik klinik antara pasien dengan dan tanpa rearrangement
BCL2 dapat dilihat pada tabel 3.

Tabel 3. Perbandingan karakteristik pasien berdasarkan rearrangement BCL2

Rearrangement BCL2
Karakteristik

(+)

Rearragement BCL2 (-)

P

n = 10

n =14
48.2 + 15.2 tahun

59 + 13.1 tahun

> 0.05

median

51 tahun

57 tahun

> 0.05

kisaran

16-66 tahun

40-78 tahun

Jenis kelamin : laki-laki

79 % (n=11)

70 % (n=7)

21 % (n=3)

30 % (n=3)

14 % (n=2)

10 % (n=1)

> 0.05

II

7 % (n=1)

10 % (n=1)

> 0.05

III

43 % (n=6)

50 % (n=5)

> 0.05

IV

36 % (n=5)

30 % (n=3)

> 0.05

Keterlibatan ekstranodal

21 % (n=3)

40 % (n=4)

> 0.05

Simptom B

71 % (n=10)

80 % (n=8)

> 0.05

Keterlibatan limpa

50 % (n=7)

10 % (n=1)

0.04

Umur : rerata

perempuan
Stadium : I

> 0.05

Hematologi :
-

anemi

50 % (n=7)

30 % (n=3)

> 0.05

-

leukopeni

21 % (n=3)

0 % (n=0)

> 0.05

-

trombositopeni

36 % (n=5)

10 % (n=1)

> 0.05

Rearrangement gen BCL6 dan PAX5
Rearrangement gen BCL6 dievaluasi pada 5 regio, rearrangement gen PAX5
dievaluasi pada 7 regio. Kami tidak menemukan adanya rearrangement gen BCL6 dan PAX5
pada semua sampel DNA.

DISKUSI
Pada sebagian besar pasien LF, bahkan pada stadium dini mempunyai sel-sel dengan
translokasi BCL2 dalam sirkulasi darah. Hal ini menjadi dasar untuk dapat melakukan
identifikasi dan klasifikasi limfoma berdasarkan translokasi BCL2 pada sirkulasi darah tanpa

7

melakukan pemeriksaan langsung pada jaringan tumor. Kesesuain hasil pemeriksaan antara
sumsum tulang/darah perifer dengan kelejar getah bening adalah sebsesar 94.2 %.

14

Translokasi BCL2 dilaporkan juga terjadi pada individu sehat. Meskipun demikian, bila
hanya menggunakan 1 ug DNA, seperti yang kami gunakan pada penelitian ini, translokasi
BCL2 dalam darah perifer hanya terdeteksi pada 6 % individu sehat.15 Frekwensi translokasi
BCL2 pada individu sehati ini akan lebih rendah bila digunakan bahan pemeriksaan seluruh
sel lekosit perifer dan bukan hanya sel limfosit B.14 Pada penelitian terdahulu, kami
menemukan sel ganas yang bersirkulasi dengan mendeteksi monoklonalitas rearrangement
IgH di CDRIII pada 79% (19 dari 24) DNA darah perifer pasien LF.11 Berdasarkan hal ini,
kami melakukan penelitian lanjutan untuk mendeteksi rearrangements

gen dengan

menggunakan sampel DNA yang sama.
Variasi geografi dalam translokasi BCL2 telah dirangkum berdasarkan 14 penelitian.
Frekwensi translokasi BCL2 di Asia, Eropa dan Amerika Serikat adalah masing-masing 48
%, 55 % dan 79 %.4 Frekwensi translokasi BCL2 pada pasien LF Indonesia (58.3 %)
tampaknya sedikit lebih tinggi dibandingkan daerah Asia lainnya , kira-kira sama dengan
Eropa dan lebih rendah dibandingkan dengan Amerika Serikat. Perbedaan ini kemungkinan
disebabkan karena dilakukannya pemeriksaan icr region breakpoint pada penelitian kami
yang tidak dilakukan pada penelitian-penelitian sebelumnya . Oleh sebab itu, kami
menemukan 4 pasien yang mempunyai BCL2 breakpoint di luar regio yang paling banyak
ditemukan (MBR dan mcr).
Hasil pemeriksaan lokasi breakpoint translokasi BCL2 pada penelitian ini dengan
menggunakan DNA dari darah perifer hampir sama dengan penelitian terdahulu dengan
menggunakan DNA dari jaringan tumor kelenjar getah bening. Perbandingan lokasi
rearrangement BCL2 antara penelitian terdahulu dan penelitian kami adalah : MBR (32.2 %
vs 33 %), mcr (3.4 % vs 8 %), dan icr (17 % vs 17 %).2 Hal ini menunjukkan bahwa sampel
DNA dari darah perifer dapat digunakan untuk deteksi rearrangement BCL2 dengan hasil
yang sebanding dengan sampel DNA dari jaringan tumor.
Perbandingan antara penelitian terdahulu yang dilakukan Lopez Guilermo dkk dengan
penelitian ini dalam memeriksa translokasi BCL2 mengunakan darah perifer adalah MBR
(71 % vs 33 %), mcr (11 % vs 8 %), jumlah total translokasi 81 % vs 58 %.14 Penelitian
terdahulu yang menggunakan darah perifer tidak memeriksa translokasi pada lokasi icr.
Didapatkannya frekwensi translokasi BCL2 yang lebih rendah pada penelitian kami
tampaknya disebabkan perbedaan lokasi geografi ( Amerika Serikat vs Indonesia/Asia).
Dengan menggabungkan data dari penelitian kami sebelumnya dan data penelitian
kami saat ini, kami mendapatkan 11 pasien dengan rearrangement IgH dan BCL2, 3 pasien
dengan rearrangement BCL2 saja, 8 pasien dengan rearrangement IgH saja dan 2 pasien

8

tanpa rearrangement gen.

11

Sehingga dengan memeriksa IgH dan/atau BCL2 kami dapat

mendeteksi rearrangement gen pada 92 % (22 dari 24) pasien.
Makna klinik rearrangement BCL2 pada LF masih kontroversial. Penelitian
terdahulu hanya menemukan bahwa LF pasien dengan rearrangement BCL2 lebih muda
dibandingkan dengan pasien tanpa rearrangement BCL2. Tidak terdapat perbedaan
berdasarkan ada tidaknya rearrangement BCL2 dalam hal besarnya respon komplit, waktu
terjadinya kegagalan terapi, kelangsungan hidup atau karakteristik klinis lainnya.

16

Pada

penelitian kami, pasien dengan rearrangement BCL2 cenderung lebih muda dibandingkan
pasien tanpa rearrangement BCL2 (48 vs 59 tahun), tetapi tidak bermakna secara statistik.
Kami menemukan adanya perbedaan bermakna dalam keterlibatan limpa antara pasien
dengan dan tanpa rearrangement (50% vs 10%, p 0.04) ( tabel 3). Reararangement BCL-2
berkorelasi dengan keterlibatan limpa (OR 9) dan anemia (OR 2.3). Sampai saat ini belum
diketahui bagaimana rearrangement BCL2 berkorelasi dengan abnormalitas-abnormalitas
ini.
Rearrangement gen PAX5 didapatkan pada kira-kira setengah kasus limfoma
limfoplasmasitik , juga pada sebagian kecil limfoma marginal zone dan diffuse large B cell
lymphoma. Rerrangement gen BCL6 ditemikan pada sepertiga kasus diffuse large B cell
lymphomas, juga kadang-kadang ditemukan pada LF dan limfoma marginal zone.1 Pada
penelitian ini, kami tidak menemukan adanya rearrangement gen PAX5 atau BCL6. Hal ini
kemungkinan disebabkan karena perbedaan etnik, geografi atau adanya rearrangement gen
lain yang berperan pada LF pasien Indonesia.

KESIMPULAN
Rearrangement gen BCL2 banyak ditemukan pada LF pasien Indonesia, sedikit lebih banyak
dibandingkan daerah Asia lainnya. Pada penelitian ini tidak ditemukan rearrangement gen
BCL6 dan PAX5. DNA dari darah perifer dapat digunakan sebagai alternatif bahan
pemeriksaan untuk deteksi rearrangements gen.

9

DAFTAR PUSTAKA
1. Arber AA. Molecular diagnostic approach to non-Hodgkin’s lymphoma. J Mol Diag
2000;2:178-90.
2. Hegyi AA, Hochreutener B, Abdou MT, Hegyi I, Zimmermann MTD, Kurrer MO, et
al. High frequency of t(14;18)-translocation breakpoints outside of major breakpoint
and minor cluster regions in follicular lymphomas. Am J Pathol 2002;160:823-32.
3. Bohling SD, King TC, Wittwer CT, Johnson KSJE. Rapid simultaneous amplification
and detection of the MBR/JH chromosomal translocation by fluorescence melting
curve analysis. Am J Pathol 1999;154:97-103.
4. Biagi JJ, Seymour JF. Insights into the molecular pathogenesis of follicular
lymphoma arising from analysis of geographic variation. Blood 2002;99:4265-75.
5. Ohno H, Ueda C, Akasaka T. The t(9;14)(p13;q32) translocation in B-cell nonHodgkin’s lymphoma. Leuk lymphoma 2000;36:435-45.
6. Hamada T, Yonetani N, Ueda C, Maesako Y, Akasaka H, Akasaka T , et al.
Expression of the PAX5/BSAP transcription factor in haematological tumour cells
and further molecular characterization of the t(9;14)(p13;q32) translocation in B-cell
non-Hodgkin’s lymphoma. Br J Haematol 1998;102:691-700.
7. Krenacs L, Himmelmann AW, Mastinez LQ, Fest T, Riva A, Wellmann A , et al.
Transcription factor B-cell specific

activator protein (BSAP) is differentially

expressed in B cells and in subsets of B-cell lymphomas. Blood 1998;92:1308-16.
8. Schwartz

RS.

Shattuck

lecture-Diversity

of

the

immune

repertoire

and

immunoregulation . N Engl J Med 2003;348:1017-26.
9. Voena C, Ladetto , Astolfi M, Provan D, Gribben JG, Boccadoro M, et al. A novel
nested-PCR strategy for detection of rearranged immunoglobulin heavy -chain genes
in B cell tumors. Leukemia 1997;11:1193-8.
10. Yamauchi A, Tomita Y, Miwa H, Sakamoto H, Sugiyama H, Aozasa K. Clonal
evolution of gastric lymphoma of mucosa-associated lymphoid tissue type. Mod
Pathol 2001;14:957-62.
11. Oehadian A, Koide N, Mu MM, Hassan F, Yoshida T, Yokochi T. Seminested
polymerase chain reaction and heteroduplex analysis detects the monoclonality of
IgH rearrangement in

follicular lymphoma patients with high sensitivity.

Haematologica 2005 ;90:272-3.
12. Kendall TL, Byerley DJ, Dean R.. Isolation of DNA from blood. Anal Biochem
1991;15:74-6.
13. Akasaka T, Akasaka H, Ohno H. Polymerase chain reaction amplification of long
DNA targets: Application to analysis of chromosomal translocations in human B-cell
tumors (Review). Int J Oncol 1998;12:113-21.

10

14. Guillermo AL, Cabanillas F, McDonnell TI, McLaughin P, Smith T, PughW, et al.
Correlation of Bcl-2 rearrangement with clinical characteristics and outcome in
indolent follicular lymphoma. Blood 1999;9:3081-7.
15. Dolken G, Illerhaus G, Hirt C, Mertelsmann R. BCL-2/JH rearrangements in
circulating B cells of healthy blood donors and patients with non-malignant diseases.
J Clin Oncol 1996;14:1333-44.
16. Montoto S, Guillermo AL, Colomer D, Esteve J, Bosch F, Ferber A, et al. Incidence
and clinical significance of Bcl-2/IgH rearrangements in follicular lymphoma. Leuk
Lymphoma 2003;44:71-6.

11

12