Lampiran 1 Persetujuan Komite Etik Penelitian Hewan
Lampiran 1 Persetujuan Komite Etik Penelitian Hewan
Lampiran 2 Hasil Identifikasi Tumbuhan
Lampiran 3 Gambar Karakterisasi Tumbuhann Nimba Tumbuhan nimba (Azadirachta indica A. Juss.)
Lampiran 3 (lanjutan)
Daun nimba segar
Simplisia daun nimbi Serbuk simplisia daun nimba
Lampiran4 Perhitungan Pemeriksaan Karakterisasi Serbuk Simplisia Daun Nimba
(Azadirachta indicaA. Juss.)
1. Penetapan kadar air
volume II‐volume I Kadar air
= 100 % berat sampel
a. Berat sampel = 5,002 g Volume I = 5,1 ml Volume II = 5,5 ml
5,5-5,1 Kadar air = 100 % = 7,99 %
5,002
b. Berat sampel = 5,001 g Volume I = 5,5 ml Volume II = 5,8 ml
5,8-5,5 Kadar air = x 100% = 5,99 %
5,001
c. Berat sampel = 5,002 g Volume I = 5,8 ml Volume II = 6,2 ml
6,2-5,8 Kadar air = x 100% = 7,99 %
5,002 7,99+5,99+7,99 % Kadar air rata-rata = 7,33 %
3
Lampiran 4 (Lanjutan)
a. Perhitungan hasil penetapan kadar sari yang larut dalam air
Kadar sari larut dalam air = x x 100%
1. Kadar sari larut dalam air I Berat cawan = 47,747 g Berat cawan + berat sari = 47,979 g Berat sampel = 5,020 g Berat sari = 0,232 g Kadar sari larut dalam air =
, , x x 100%= 23,10 %
2. Kadar sari larut dalam air II Berat cawan = 45,166 g Berat cawan + berat sari = 45,455 g Berat sampel = 5,010 g Berat sari = 0,289 g Kadar sari larut dalam air =
, , x x 100%= 28,84 %
3. Kadar sari larut dalam air III Berat cawan = 45,154 g Berat cawan + berat sari = 45,332 g Berat sampel = 5,002 g Berat sari = 0,178 g Kadar sari larut dalam air =
, , x x 100%= 17,79 % Kadar sari larut dalam air rata – rata =
, % , % , % = 23,24 %
Lampiran 4 (Lanjutan)
c. Perhitungan hasil penetapan kadar sari yang larut dalam etanol
1. Kadar sari larut dalam etanol I Berat Cawan = 44,246 g Berat Cawan + Berat Sari = 44,351 g Berat Sampel = 5,020 g Berat sari = 0,105 g Kadar sari larut dalam etanol
, , x x 100%=10,45%
2. Kadar sari larut dalam etanol II Berat Cawan = 45,123g Berat Cawan + Berat Sari = 45,214g Berat Sampel = 5,002 g Berat sari = 0,091 g Kadar sari larut dalam etanol
. , x x100%= 9,09%
3. Kadar sari larut dalam etanol III Berat Cawan = 45,129 g Berat Cawan + Berat Sari = 45,221 g Berat Sampel = 5,002 g Berat sari = 0,092 g Kadar sari larut dalam etanol
, , x x 100% =9,19% Kadar sari larut dalam etanol rata-rata
, % , % , % = 9,58% Kadar sari larut dalam etanol x x
100%
Lampiran 4 (Lanjutan)
d. Perhitungan hasil penetapan kadar abu total
Kadar abu total 100% x
1. Sampel I Berat simplisia = 2,002 g Berat abu = 0,075g
,
Kadar abu total x100%=3,74%
,
2. Sampel II Berat simplisia = 2,001 g Berat abu = 0,115g
,
Kadar abu total x100%= 5,74%
,
3.Sampel III Berat simplisia = 2,005 g Berat abu = 0,121g
,
Kadar abu total x100%= 6,03%
,
, % , % , % Kadarabu total rata-rata = 5,17%Lampiran 4 (lanjutan)
e. Perhitungan Hasil Penetapan Kadar Abu Tidak Larut Dalam Asam
1. Sampel I Berat simplisia = 2,002 g Berat abu = 0,009g Kadar abu tidak larut asam
, , x 100% = 0,44%
2. Sampel II Berat simplisia = 2,001 g Berat abu = 0,001g Kadar abu tidak larut asam
, , 100% = 0,49%
3.Sampel III Berat simplisia = 2,005 g Berat abu = 0,007g Kadar abu tidak larut asam
, , x 100% = 0,34%
Kadar abu tidak larut asam rata-rata , % . % , %
= 0,43% Kadar abu tidak larut dalam asam x
100%
Lampiran 5 Bagan Kerja Pembuatan Serbuk Simplisia Daun nimba dibersihkan dari pengotor dicuci hingga bersih ditiriskan ditimbang Daun nimba 3,4 kg dikeringkan di lemari pengering
Simplisia kering 1,1kg dihaluskan Serbuk simplisia daun nimba dilakukan pemeriksaan karakterisasi simplisia Kadar Kadar Kadar Kadar Kadar air sari larut sari larut abu abu tidak air etanol total larut dalam asam
Lampiran 6 Bagan Kerja Pembuatan Ekstrak Serbuk Simplisia 300 g dibasahi dengan etanol 70% dimasukkan ke dalam bejana tertutup sekurang kurangnya selama 3 jam
dimasukkan ke dalam perkolator
Simplisia basah dalam perkolator ditambahkan cairan penyari sampai satu lapis diatas serbuk ditutup dengan alumunium foil didiamkan selama 24 jamSimplisia dan pelarut berwarna hijau tua dibuka kran perkolator dengan kecepatan pengaliran 1 ml/menit. Ekstrak etanol encer 10 L dipekatkan dengan alat rotary evaporator pada suhu 60°C
Ekstrak etanol kental dimasukkan ke dalam alat freeze dryer
Ekstrak kental 97,3 g
Lampiran 7 Gambar alat-alat Hemositometer (Improved Neubauer-Marienfield)
Pipet Thoma leukosit Oral sonde dan spuit 1ml
Lampiran 7 (Lanjutan) Mikroskop (Boeco-Germany)
Mencit
Lampiran 8 Gambar Hasil Kamar Hitung dan Hasil Diferensial Leukosit Mencit Sel darah putih (leukosit)
Lampiran 8 (Lanjutan) Neutrofil
Monosit
b. Monosit
a. Neutrofil
Lampiran 8 (Lanjutan)
Eusinofil
Limfosit
Lampiran 8 (Lanjutan) Basofil
Basofil
Lampiran 9 Contoh Perhitungan Contoh perhitungan ekstrak yang akan ditimbang Ekstrak yang akan ditimbang bervariasi konsentrasi yaitu 0,25%, 0,5% dan
1%
a. Cara perhitungan ekstrak : misalnya BB mencit = 25g ,
0,25%= = = 2,5mg/ml
Jumlah ekstrak etanol daun nimbi dosis 50mg/kg BB = x 50 mg= 1,25
mg, Jumlah suspensi yang akan diberikan = = 0,5 ml
, / , 0,5%= = = 5 mg/ml
Jumlah ekstrak etanol daun nimbi dosis 100 mg/kg BB = x 100 mg = 2,5
mg, Jumlah suspensi yang akan diberikan = = 0,5 ml
/ 1%= = = 10 mg/ml
Jumlah ekstrak etanol daun nimbi dosis 200 mg/kg BB = x 200 mg = 5
mg Jumlah suspensi yang akan diberikan = = 0,5 ml/
b. Contoh perhitungan jumlah total leukosit mencit Jumlah leukosit = x 20 x 10 atau (A+B+C+D) x 50 sel/ l c. Contoh perhitungan diferensial leukosit mencit
/ Jumlah diferensial mencit = x 100%
/
Lampiran 10 Hasil Analisis Data Anava Two Way Total leukosit
Descriptive Statistics
25 hari ke-7 Kontrol 9250.00 4663.723
15 Total 9292.20 4621.078
15 dosis 50mg/kg bb 9920.00 4575.575 15 dosis 100 mg/kg bb 7324.00 2667.211 15 dosis 200mg/kg bb 9190.33 2546.600
15 Ovalbumin 12101.67 6679.563
25 Total Kontrol 7925.00 4321.789
5 Total 12745.60 4743.165
5 dosis 50mg/kg bb 15200.00 1303.572 5 dosis 100 mg/kg bb 9582.00 2178.000 5 dosis 200mg/kg bb 11366.00 1057.162
5 Ovalbumin 18330.00 5385.089
5 Total 8021.00 2788.534
Dependent Variable: hasil pengamatan leukosit Waktu pengambilan darah leukosit
5 dosis 50mg/kg bb 7695.00 3240.968 5 dosis 100mg/kg bb 8020.00 1025.061 5 dosis 200 mg/kg bb 9340.00 711.864
5 Ovalbumin 9250.00 4663.723
25 jam ke-24 Kontrol 5800.00 1575.496
5 Total 7110.00 4062.327
5 dosis 50 mg/kg bb 6865.00 2893.074 5 dosis 100 mg/kg bb 4370.00 1103.744 5 dosis 200 mg/kg bb 6865.00 2893.074
5 Ovalbumin 8725.00 5700.959
Jenis perlakuan pengambilan darah leukosit Mean Std. Deviation N jam ke-6 Kontrol 8725.00 5700.959
75
Hasil pengamatan leukosit
Tests of Between-Subjects Effects
74
75 Corrected Total 1.580E9
Error 7.103E8 60 1.184E7 Total 8.056E9
2 2.288E8 19.328 .000 perlakuan 2.106E8 4 5.265E7 4.448 .003 waktu * perlakuan 2.018E8 8 2.522E7 2.130 .046
Type III Sum of Squares df Mean Square F Sig. Corrected Model 8.700E8 14 6.214E7 5.249 .000 Intercept 6.476E9 1 6.476E9 547.060 .000 waktu 4.576E8
Dependent Variable: hasil pengamatan leukosit Source
b. Alpha = ,05.
Jenis perlakuan pengambilan darah leukosit N
a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 15,000.
Sig. .248 .154 Means for groups in homogeneous subsets are displayed. Based on observed means. The error term is Mean Square(Error) = 11837588,333.
dosis 100mg/kg bb 15 7324.00 kontrol 15 7925.00 dosis 200mg/kg bb 15 9190.33 9190.33 dosis 50mg/kg bb 15 9920.00 9920.00 ovalbumin 15 12101.67
a,,b
2 TukeyHSD
1
Subset
a. R Squared = ,551 (Adjusted R Squared = ,446)
Limfosit Descriptive Statistics
25 hari ke-7 kontrol 31.60 2.408
15 Total 34.03 13.171
15 dosis 200mg/kg bb 28.53 14.177
15 dosis 100mg/kg bb 29.93 13.204
15 dosis 50mg/kg bb 32.27 11.323
15 ovalbumin 50.20 6.167
25 Total kontrol 29.20 4.074
5 Total 39.48 8.982
5 dosis 200mg/kg bb 46.20 2.387
5 dosis 100mg/kg bb 29.60 5.595
5 dosis 50mg/kg bb 39.40 2.302
5 ovalbumin 50.60 5.030
5 Total 38.80 11.500
Dependent Variable: hasil pengamatan limfosit Waktu pengambilan darah limfosit
5 dosis 200mg/kg bb 26.00 2.236
5 dosis 100mg/kg bb 45.00 3.162
5 dosis 50mg/kg bb 39.00 4.062
5 ovalbumin 55.40 5.030
25 jam ke-24 kontrol 28.60 3.050
5 Total 23.80 12.583
5 dosis 200mg/kg bb 13.40 2.881
5 dosis 100mg/kg bb 15.20 3.701
5 dosis 50 mg/kg bb 18.40 8.142
5 ovalbumin 44.60 3.050
Deviation N jam ke-6 kontrol 27.40 5.595
Jenis perlakuan pengambilan darah limfosit Mean Std.
75
Test of Between-subjects Effects
Dependent Variable: hasil pengamatan limfosit Type III Sum of Source Squares df Mean Square F Sig.
a
Corrected Model 11764.347 14 840.310 46.962 .000 Intercept 86836.053 1 86836.053 4852.984 .000 waktu 3927.707
2 1963.853 109.753 .000 pengamatan 5023.547 4 1255.887 70.187 .000 waktu * pengamatan 2813.093 8 351.637 19.652 .000
Error 1073.600 60 17.893 Total 99674.000
75 Corrected Total 12837.947
74
a. R Squared = ,916 (Adjusted R Squared = ,897)
Hasil pengamatan limfosit
Subset pengamatan N
1
2
a,,b
TukeyHSD dosis 200 mg/kg bb
15
28.53 kontrol
15
29.20 dosis 100mg/kg bb
15
29.93 dosis 50mg/kg bb
15
32.27 ovalbumin
15
50.20 Sig. .125 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed.
Based on observed means. The error term is Mean Square(Error) = 17,893.
a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 15,000.
b. Alpha = ,05.
Monosit Descriptive Statistics
25 hari ke-7 kontrol 6.00 1.581
15 Total 7.08 2.530
15 dosis 200mg/kg bb 6.27 1.751
15 dosis 100mg/kg bb 6.20 2.541
15 dosis 50mg/kg bb 7.60 1.882
15 ovalbumin 9.33 3.132
25 Total kontrol 6.00 1.558
5 Total 8.24 2.743
5 dosis 200mg/kg bb 6.60 2.074
5 dosis 100mg/kg bb 8.60 2.074
5 dosis 50mg/kg bb 8.00 2.000
5 ovalbumin 12.00 1.581
5 Total 6.96 2.336
Dependent Variable: hasil pengamatan monosit Waktu pengambilan darah monosit
5 dosis 200mg/kg bb 6.20 1.924
5 dosis 100mg/kg bb 6.00 1.581
5 dosis 50mg/kg bb 7.60 2.408
5 ovalbumin 9.40 2.074
25 jam ke-24 kontrol 5.60 2.074
5 Total 6.04 2.051
5 dosis 200mg/kg bb 6.00 1.581
5 dosis 100mg/kg bb 4.00 1.581
5 dosis 50mg/kg bb 7.20 1.483
5 ovalbumin 6.60 3.050
Deviation N jam ke-6 kontrol 6.40 1.140
Jenis perlakuan pengambilan darah monosit Mean Std.
75
Tests of Between-Subjects Effects
Dependent Variable: hasil pengamatan monosit Type III Sum of Source Squares df Mean Square F Sig.
a
Corrected Model 249.520 14 17.823 4.774 .000 Intercept 3759.480 1 3759.480 1007.004 .000 waktu 61.040
2 30.520 8.175 .001 perlakuan 119.253 4 29.813 7.986 .000 waktu * perlakuan 69.227 8 8.653 2.318 .031
Error 224.000 60 3.733 Total 4233.000
75 Corrected Total 473.520
74
a. R Squared = ,527 (Adjusted R Squared = ,417)
Hasil pengamatan monosit
Jenis perlakuan Subset pengambilan darah monosit N
1
2
a,,b
TukeyHSD kontrol
15
6.00 dosis 100 mg/kg bb
15
6.20 dosis 200mg/kg bb
15
6.27 dosis 50mg/kg bb
15
7.60
7.60 ovalbumin
15
9.33 Sig. .170 .115 Means for groups in homogeneous subsets are displayed.
Based on observed means. The error term is Mean Square(Error) = 3,733.
a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 15,000.
b. b. Alpha = ,05.
Neutrofil
Descriptive Statistics
15 dosis 100 mg/kg bb jam ke-6 51.20 5.718
25 Total 66.44 13.149
25 hari ke-7 73.20 9.811
25 jam ke-24 67.60 12.104
15 Total jam ke-6 58.52 13.267
5 Total 60.07 13.090
5 hari ke-7 72.60 5.128
5 jam ke-24 62.00 3.674
15 dosis 200 mg/kg bb jam ke-6 45.60 9.864
5 Total 61.07 8.980
5 hari ke-7 70.00 2.236
5 jam ke-24 62.00 4.690
5 Total 64.73 9.750
Dependent Variable: hasil pengamatan neutrofil Jenis perlakuan pengambilan darah neutrofil
5 hari ke-7 70.80 3.194
5 jam ke-24 64.80 10.826
15 dosis 50 mg/kg bb jam ke-6 58.60 10.597
5 Total 84.67 9.170
5 hari ke-7 89.60 6.465
5 jam ke-24 86.80 10.872
15 ovalbumin jam ke-6 77.60 5.983
5 Total 61.67 4.981
5 hari ke-7 63.00 2.739
5 jam ke-24 62.40 5.030
Waktu pengambilan darah neutrofil Mean Std. Deviation N kontrol jam ke-6 59.60 6.768
75
Tests of Between-Subjects Effects
Dependent Variable: hasil pengamatan neutrofil Type III Sum of Source Squares df Mean Square F Sig.
a
Corrected Model 9950.880 14 710.777 14.997 .000 Intercept 331070.520 1 331070.520 6985.593 .000 perlakuan 6411.013
4 1602.753 33.818 .000 waktu 2744.240 2 1372.120 28.952 .000 perlakuan * waktu 795.627 8 99.453 2.098 .050
Error 2843.600 60 47.393 Total 343865.000
75 Corrected Total 12794.480
74
a. R Squared = ,778 (Adjusted R Squared = ,726)
Hasil pengamatan neutrofil
Jenis perlakuan Subset pengambilan darah neutrofil N
1
2
a,,b
TukeyHSD dosis 200 mg/kg bb
15
60.07 dosis 100 mg/kg bb
15
61.07 Kontrol
15
61.67 dosis 50mg/kg bb
15
64.73 ovalbumin
15
84.67 Sig. .352 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed.
Based on observed means. The error term is Mean Square(Error) = 47,393.
a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 15,000.
b. Alpha = ,05.
Eusinofil
Descriptive Statistics
15 dosis 100mg/kg bb jam ke-6 3.00 .707
25 Total 3.93 2.036
25 hari ke-7 4.04 2.475
25 jam ke-24 4.24 2.067
15 Total jam ke-6 3.52 1.447
5 Total 3.13 .990
5 hari ke-7 3.00 1.000
5 jam ke-24 2.80 .837
15 dosis 200mg/kg bb jam ke-6 3.60 1.140
5 Total 2.87 .743
5 hari ke-7 2.60 .548
5 jam ke-24 3.00 1.000
5 Total 4.00 1.363
Dependent Variable: hasil pengamatan eusinofil Jenis perlakuan pengambilan darah basofil
5 hari ke-7 3.20 .837
5 jam ke-24 5.20 1.304
15 dosis 50mg/kg bb jam ke-6 3.60 1.140
5 Total 7.13 1.727
5 hari ke-7 8.60 1.140
5 jam ke-24 7.40 1.140
15 ovalbumin jam ke-6 5.40 1.140
5 Total 2.53 .743
5 hari ke-7 2.80 .837
5 jam ke-24 2.80 .447
Deviation N kontrol jam ke-6 2.00 .707
Waktu pengambilan darah basofil Mean Std.
75
Tests of Between-Subjects Effects
kontrol
a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 15,000.
Based on observed means. The error term is Mean Square(Error) = ,920.
7.13 Sig. .434 .110 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed.
15
4.00 ovalbumin
15
3.13 dosis 50mg/kg bb
3.13
15
2.87 dosis 200mg/kg bb
15
2.53 dosis 100mg/kg bb
15
a,,b
Dependent Variable: hasil pengamatan eusinofil Source
3 TukeyHSD
2
1
Subset
Jenis perlakuan pengambilan darah basofil N
Hasil pengamatan eusinofil
a. R Squared = ,820 (Adjusted R Squared = ,778)
74
75 Corrected Total 306.667
Error 55.200 60 .920 Total 1467.000
4 52.433 56.993 .000 waktu 6.907 2 3.453 3.754 .029 perlakuan * waktu 34.827 8 4.353 4.732 .000
14 17.962 19.524 .000 Intercept 1160.333 1 1160.333 1261.232 .000 perlakuan 209.733
a
Type III Sum of Squares Df Mean Square F Sig. Corrected Model 251.467
b. Alpha = ,05.
Basofil Descriptive Statistics
Dependent Variable: hasil pengamatan basofil Jenis perlakuan Waktu pengambilan pengambilan darah basofil darah basofil Mean Std. Deviation N kontrol jam ke-6 .80 .837
5 jam ke-24 .60 .894 5 hari ke-7 .40 .548
5 Total .60 .737
15 ovalbumin jam ke-6 2.20 .837
5 jam ke-24 5.40 1.140
5 hari ke-7 4.40 1.140
5 Total 4.00 1.690
15 dosis 50mg/kg bb jam ke-6 1.00 .707
5 jam ke-24 1.40 .548
5 hari ke-7 .60 .548
5 Total 1.00 .655
15 dosis 100mg/kg bb jam ke-6 1.00 .707
5 jam ke-24 .40 .548 5 hari ke-7 .20 .447
5 Total .53 .640
15 dosis 200mg/kg bb jam ke-6 .60 .548 5 jam ke-24
1.00 .707
5 hari ke-7 .60 .548
5 Total .73 .594
15 Total jam ke-6 1.12 .881
25 jam ke-24 1.76 2.026
25 hari ke-7 1.24 1.739
25 Total 1.37 1.626
75
Tests of Between-Subjects Effects
Dependent Variable: hasil pengamatan basofil Type III Sum of Source Squares df Mean Square F Sig.
a
Corrected Model 162.347 14 11.596 20.957 .000 Intercept 141.453 1 141.453 255.639 .000 perlakuan 131.280
4 32.820 59.313 .000 waktu 5.787 2 2.893 5.229 .008 perlakuan * waktu 25.280 8 3.160 5.711 .000
Error 33.200 60 .553 Total 337.000
75 Corrected Total 195.547
74
a. R Squared = ,830 (Adjusted R Squared = ,791)
Hasil pengamatan basofil
Jenis perlakuan Subset pengambilan darah basofil N
1
2
a,,b
TukeyHSD dosis 100mg/kg bb 15 .53 Kontrol 15 .60 dosis 200 mg/kg bb
15 .73 dosis 50 mg/kg bb
15
1.00 ovalbumin
15
4.00 Sig. .431 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed.
Based on observed means. The error term is Mean Square(Error) = ,553.
a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 15,000.
b. Alpha = ,05.