UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK AIR TERIPANG PASIR (Holothuria scabra) DENGAN METODE 1,1-DIFENIL-2- Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Air Teripang Pasir (Holothuria scabra) Dengan Metode 1,1-Difenil-2- Pikrilhidrazil (DPPH) Dan Analisis Kandungan Kimia
!! !"! #$
!
%&'()&*
&'()&* (*+(
(*+() , , *( % -& & -&+( -.&/&+ , *0&1&%
*0
2 /&'&+
'&+ &/'&*& &/,&-% 3 &/, 1&2& &)( +&- &/,&-%
&
*%4 //-%+&- ( &,,&2%.& (/&)&/+&
2% (/&)&/+&
!! !"! #$
!
ii
< /'(2(
!! !"! #$
%1 //+& &*)&* 2% &2&1&* *5('% )/%1-%
&)( +&- &/
&/,&-% *%4 /-%+&- ( &,,&2%.&
.& (/&)&/+&
(/&)&/
&2& +&*
+&*55&
*5 +& (%
&)( +&- &/,&-%
*%4 /-%+&- ( &,,&2%.& (/&)&/+&
)&*
/3
( &,,&2 &6%
,;%,;%*5
%,;%*5 +&,
+&,&
/%8&
/% 9& .(*%
3 %3
1+3
,;%,;%*5
3 03
1+3
:-%+&
+&
&**%-&
*2&,1%*5
3 %3
1+3
*5('%
3 /3
( &,,&2 &6%
3 %3
3 )& /%- &/.&*+%
73 /%8&
/% 9& .(*%
$3 :-%+&
&**%-&
1+3
3 &/,3
3 03
3 %3
=================
1+3
=================
========
1+3 =================
1+3
=================
========
iii
iv
Assalamu alaikum warohmatullohi wabarokatuh.
Segala puji bagi Allah yang telah melimpahkan rahmat dan hidayah
sehingga penulis dapat menyelesaikan penelitian dan penyusunan skripsi yang
berjudul: “Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Air Teripang Pasir (Holothuria
scabra) dengan Metode 1,1#Difenil#2#Pikrilhidrazil (DPPH) dan Analisis
Kandungan Kimianya” sebagai salah satu syarat untuk mencapai derajat Sarjana
Farmasi (S. Farm) di Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta.
Dalam penyusunan ini penulis banyak mendapatkan bantuan dari berbagai
pihak. Untuk itu penulis mengucapkan terimakasih kepada:
1.
Bapak Dr. Muhammad Da’i, M.Si., Apt selaku Dekan Fakultas Farmasi
Universitas Muhammadiyah Surakarta.
2.
Ibu Arifah Sri Wahyuni, M.Sc., Apt selaku penguji dan pembimbing utama
yang telah memberikan banyak bimbingan, pengarahan, dan dukungan
selama penelitian maupun penyusunan skripsi ini.
3.
Ibu Rosita Melannisa, M.Si., Apt selaku penguji dan pembimbing
pendamping yang telah memberikan banyak bimbingan pengarahan,
dukungan selama penelitian maupun penyusunan skripsi ini.
4.
Ibu Ika Trisharyanti DK, M.Farm., Apt selaku penguji
5.
Kedua orang tua tercinta, Bapak Hudiyanto dan Ibu Setiyatun untuk setiap
do’a yang terpanjatkan.
Semoga skripsi ini dapat memberikan manfaat bagi siapa saja yang
membacanya dan muncul kritik dan saran untuk perbaikan penulis selanjutnya.
Wassalamu alaikum warohmatullohi wabarokatuh
Surakarta, Juni 2012
Peneliti
v
Halaman
HALAMAN JUDUL ........................................................................................
i
HALAMAN PENGESAHAN ..........................................................................
iii
DEKLARASI ...................................................................................................
iv
KATA PENGANTAR ......................................................................................
v
DAFTAR ISI ....................................................................................................
vi
DAFTAR TABEL ............................................................................................
viii
DAFTAR GAMBAR .......................................................................................
ix
DAFTAR LAMPIRAN ....................................................................................
x
DAFTAR SINGKATAN................................................................................. .
xi
INTISARI.............................................................................................. ...........
xii
BAB I PENDAHULUAN
A. Latar Belakang ..........................................................................................
1
B. Perumusan Masalah ...................................................................................
3
C. Tujuan Penelitian.......................................................................................
3
D. Tinjuan Pustaka .........................................................................................
3
1. Radikal Bebas ......................................................................................
3
2. Antioksidan ........................................................................................
5
3. Teripang Pasir (Holothuria scabra) ....................................................
6
a. Morfologi ........................................................................................
6
b. Kandungan Teripang ......................................................................
6
c. Khasiat ............................................................................................
6
4. Ujia Aktivitas Antiradikal ...................................................................
7
E. Landasan Teori ..........................................................................................
8
F. Hipotesis ....................................................................................................
8
BAB II METODE PENELITIAN
A. Kategori Penelitian ....................................................................................
9
B. Variabel Penelitian ....................................................................................
9
vi
C. Bahan dan Alat ..........................................................................................
9
D. Jalannya Penelitian ....................................................................................
10
1. Identifikasi Ekstrak Air Teripang Pasir (Holothuria scabra) .............
10
2. Pembuatan Ekstrak Air Teripang Pasir ...............................................
10
3. Uji Aktifitas Antiradikal Metode DPPH .............................................
10
a. Pembuatan Larutan Pereaksi DPPH 0,1mM ..................................
10
b. Pembuatan Larutan Stok Sampel Ekstrak Air Teripang Pasir........
10
c. Penentuan Operating Time (OT) DPPH .........................................
11
d. Penentuan Panjang Gelombang Maksimal (λmax) DPPH ...............
11
e. Pembuatan Larutan Stok Vitamin E ...............................................
11
f. Penentuan IC50 Ekstrak Air Teripang Pasir ....................................
11
4. Analisis Skrining Fitokimia ................................................................
12
a. Uji Polifenol ....................................................................................
12
b. Uji Saponin ....................................................................................
12
c. Uji Flavanoid ..................................................................................
12
d. Uji Alkaloid ...................................................................................
12
5. Analisis Kromatografi Lapis Tipis (KLT) .........................................
13
a. Uji Flavanoid .................................................................................
13
b. Uji Alkaloid ....................................................................................
13
6. Penetapan Kadar Total Senyawa Fenolik ...........................................
13
a. Penentuan Operating Time (OT) ....................................................
13
b. Penentuan Panjang Gelombang Maksimal (λmax)...........................
14
c. Penentuan Kurva Baku Asam Galat ...............................................
14
d. Penetapan Kadar Fenol Total .........................................................
14
E. Analisis Data .............................................................................................
15
BAB III HASIL DAN PEMBAHASAN
BAB IV KESIMPULAN DAN SARAN
A. Kesimpulan ...............................................................................................
24
B. Saran ..........................................................................................................
24
DAFTAR PUSTAKA .......................................................................................
25
LAMPIRAN .....................................................................................................
29
vii
<
Halaman
Tabel 1.
Hasil Penentuan IC50 Ekstrak Air Teripang Pasir (Holothuria
scabra) dibandingkan dengan Vitamin E .....................................
Tabel 2.
Tabel 3.
17
Hasil Skrining Fitokimia Ekstrak Air Teripang Holothuria
scabra) ...........................................................................................
19
Hasil Uji Kromatografi Lapis Tipis (KLT) ..................................
21
viii
<
Halaman
Gambar 1. Reaksi Radikal DPPH dengan Antioksidan .................................
16
Gambar 2. Korelasi konsentrasi antar sampel (ekstrak air teripang pasir dan
vitamin E) dibandingkan dengan aktivitas antiradikalnya.
Semakin besar konsentrasi semakin besar aktivitas penangkap
radikalnya ......................................................................................
18
Gambar 3. Gambar 3. Hasil uji tabung a) pengujian dengan Dragendorff, b)
pengujian dengan Mayer, c) fraksi klorofom, diuji dengan
Dragendroff dan HCl 1%. Hasil positif mengandung alkaloid
terbentuk endapan..........................................................................
20
Gambar 4. Lempeng KLT (a) Lempeng flavonoid (fase diam silika gel
GF254, fase gerak etil asetat : metanol : air (100 : 13,5 : 10) dan
deteksi reagen semprot Sitroborat, (b) Lempeng alkaloid (fase
diam silika gel GF254, fase gerak etil asetat : metanol : air (100 :
13,5 : 10) dan deteksi reagen semprot Dragendorff .....................
ix
21
Halaman
Lampiran 1.
Surat keterangan hasil determinasi teripang pasir (Holothuria
scabra) .....................................................................................
Lampiran 2.
Hasil Penentuan Operating Time dan Panjang Gelombang
Maksimum DPPH .....................................................................
Lampiran 3.
30
31
Hasil Penentuan % Antiradikal, IC50 ekstrak air teripang pasir
(Holothuria scabra) dan Vitamin E ..........................................
32
Lampiran 4.
Foto hasil pengujian polifenol, saponin dan flavonoid ............
36
Lampiran 5.
Foto hasil KLT flavonoid (fase diam silika gel GF254, fase
gerak etil asetat : metanol : air (100 : 13,5 : 10) dan deteksi
dengan reagen semprot Sitroborat) ...........................................
Lampiran 6.
37
Foto hasil KLT alkaloid (fase diam silika gel GF254, fase
gerak etil asetat : metanol : air (100 : 13,5 : 10) dan deteksi
dengan reagen semprot Dragendorff) .......................................
38
Lampiran 7.
Hasil Penentuan Operating Time Asam Galat ..........................
39
Lampiran 8.
Penentuan Kurva Baku Asam Galat .........................................
39
Lampiran 9.
Profil Penetapan Kurva Baku Asam Galat dan Perhitungan
Kadar Fenol Total .....................................................................
x
40
BCB
: β Carotene Bleaching
o
: Derajat Celcius
DHA
: Dokosahexaenoat
DPPH
: 1,1#Difenil#2#Pikrilhidrazil
DNA
: Deoxyribonucleic acid
EPA
: Eikosapentanoat
FeCl3
: Ferri Clorida
FRAP
: Ferric Reducing Ability in Plasma
GAE
: gallic acid equivalent
g
: Gram
HCl
: Asam Klorida
IC50
: Inhibitory Concentration
KLT
: Kromatografi Lapis Tipis
LDL
: Low density lipoprotein (lipoprotein densitas rendah)
mL
: Mililiter
MDA
: Malondialdehyde
mM
: Milimolar
Na2CO3
: Natrium Carbonat
nm
: Nanometer
OT
: Operating Time
SOD
: Superoksida Dismutase
TBA
: Thiobarbituric Acid
TBARS
: Thiobarbituric Acid Reactive Species
UV
: Ultra Violet
µL
: Mikroliter
C
xi
Pola pengembangan penyakit telah bergeser dari penyakit infeksi ke
penyakit degeneratif seperti infark miokard, inflamasi jaringan, mutasi gen
kanker, katarak, penuaan dini dan sebagainya, yang dipicu oleh radikal bebas
dalam tubuh. Peranan antioksidan sangat penting dalam menetralkan dan
menghancurkan radikal bebas. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui daya
antioksidan ekstrak air teripang pasir (Holothuria scabra).
Uji aktivitas antioksidan ini dilakukan dengan menggunakan metode DPPH
sedangkan analisis profil kandungan senyawa kimia dilakukan dengan metode
kromatografi lapis tipis dan uji tabung. Pengukuran aktivitas antioksidan
dilakukan dengan mengamati penurunan serapan DPPH dalam metanol p.a
secara spektrofotometri pada λmaks= 514,5 nm dengan waktu inkubasi 30 menit.
Pengujian kromatografi lapis tipis menggunakan fase gerak etil asetat : metanol :
air (100 : 13,5 : 10).
Berdasarkan hasil penelitian, ekstrak air teripang pasir (Holothuria
scabra) memiliki aktivitas antioksidan yang rendah (IC50 = 2715,36 Hg/ml) dan
mengandung senyawa golongan alkaloid dan flavonoid.
&+& )(*0%: Antioksidan, Ekstrak air, Teripang, Holothuria scabra, metode
DPPH.
xii
!
%&'()&*
&'()&* (*+(
(*+() , , *( % -& & -&+( -.&/&+ , *0&1&%
*0
2 /&'&+
'&+ &/'&*& &/,&-% 3 &/, 1&2& &)( +&- &/,&-%
&
*%4 //-%+&- ( &,,&2%.& (/&)&/+&
2% (/&)&/+&
!! !"! #$
!
ii
< /'(2(
!! !"! #$
%1 //+& &*)&* 2% &2&1&* *5('% )/%1-%
&)( +&- &/
&/,&-% *%4 /-%+&- ( &,,&2%.&
.& (/&)&/+&
(/&)&/
&2& +&*
+&*55&
*5 +& (%
&)( +&- &/,&-%
*%4 /-%+&- ( &,,&2%.& (/&)&/+&
)&*
/3
( &,,&2 &6%
,;%,;%*5
%,;%*5 +&,
+&,&
/%8&
/% 9& .(*%
3 %3
1+3
,;%,;%*5
3 03
1+3
:-%+&
+&
&**%-&
*2&,1%*5
3 %3
1+3
*5('%
3 /3
( &,,&2 &6%
3 %3
3 )& /%- &/.&*+%
73 /%8&
/% 9& .(*%
$3 :-%+&
&**%-&
1+3
3 &/,3
3 03
3 %3
=================
1+3
=================
========
1+3 =================
1+3
=================
========
iii
iv
Assalamu alaikum warohmatullohi wabarokatuh.
Segala puji bagi Allah yang telah melimpahkan rahmat dan hidayah
sehingga penulis dapat menyelesaikan penelitian dan penyusunan skripsi yang
berjudul: “Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Air Teripang Pasir (Holothuria
scabra) dengan Metode 1,1#Difenil#2#Pikrilhidrazil (DPPH) dan Analisis
Kandungan Kimianya” sebagai salah satu syarat untuk mencapai derajat Sarjana
Farmasi (S. Farm) di Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta.
Dalam penyusunan ini penulis banyak mendapatkan bantuan dari berbagai
pihak. Untuk itu penulis mengucapkan terimakasih kepada:
1.
Bapak Dr. Muhammad Da’i, M.Si., Apt selaku Dekan Fakultas Farmasi
Universitas Muhammadiyah Surakarta.
2.
Ibu Arifah Sri Wahyuni, M.Sc., Apt selaku penguji dan pembimbing utama
yang telah memberikan banyak bimbingan, pengarahan, dan dukungan
selama penelitian maupun penyusunan skripsi ini.
3.
Ibu Rosita Melannisa, M.Si., Apt selaku penguji dan pembimbing
pendamping yang telah memberikan banyak bimbingan pengarahan,
dukungan selama penelitian maupun penyusunan skripsi ini.
4.
Ibu Ika Trisharyanti DK, M.Farm., Apt selaku penguji
5.
Kedua orang tua tercinta, Bapak Hudiyanto dan Ibu Setiyatun untuk setiap
do’a yang terpanjatkan.
Semoga skripsi ini dapat memberikan manfaat bagi siapa saja yang
membacanya dan muncul kritik dan saran untuk perbaikan penulis selanjutnya.
Wassalamu alaikum warohmatullohi wabarokatuh
Surakarta, Juni 2012
Peneliti
v
Halaman
HALAMAN JUDUL ........................................................................................
i
HALAMAN PENGESAHAN ..........................................................................
iii
DEKLARASI ...................................................................................................
iv
KATA PENGANTAR ......................................................................................
v
DAFTAR ISI ....................................................................................................
vi
DAFTAR TABEL ............................................................................................
viii
DAFTAR GAMBAR .......................................................................................
ix
DAFTAR LAMPIRAN ....................................................................................
x
DAFTAR SINGKATAN................................................................................. .
xi
INTISARI.............................................................................................. ...........
xii
BAB I PENDAHULUAN
A. Latar Belakang ..........................................................................................
1
B. Perumusan Masalah ...................................................................................
3
C. Tujuan Penelitian.......................................................................................
3
D. Tinjuan Pustaka .........................................................................................
3
1. Radikal Bebas ......................................................................................
3
2. Antioksidan ........................................................................................
5
3. Teripang Pasir (Holothuria scabra) ....................................................
6
a. Morfologi ........................................................................................
6
b. Kandungan Teripang ......................................................................
6
c. Khasiat ............................................................................................
6
4. Ujia Aktivitas Antiradikal ...................................................................
7
E. Landasan Teori ..........................................................................................
8
F. Hipotesis ....................................................................................................
8
BAB II METODE PENELITIAN
A. Kategori Penelitian ....................................................................................
9
B. Variabel Penelitian ....................................................................................
9
vi
C. Bahan dan Alat ..........................................................................................
9
D. Jalannya Penelitian ....................................................................................
10
1. Identifikasi Ekstrak Air Teripang Pasir (Holothuria scabra) .............
10
2. Pembuatan Ekstrak Air Teripang Pasir ...............................................
10
3. Uji Aktifitas Antiradikal Metode DPPH .............................................
10
a. Pembuatan Larutan Pereaksi DPPH 0,1mM ..................................
10
b. Pembuatan Larutan Stok Sampel Ekstrak Air Teripang Pasir........
10
c. Penentuan Operating Time (OT) DPPH .........................................
11
d. Penentuan Panjang Gelombang Maksimal (λmax) DPPH ...............
11
e. Pembuatan Larutan Stok Vitamin E ...............................................
11
f. Penentuan IC50 Ekstrak Air Teripang Pasir ....................................
11
4. Analisis Skrining Fitokimia ................................................................
12
a. Uji Polifenol ....................................................................................
12
b. Uji Saponin ....................................................................................
12
c. Uji Flavanoid ..................................................................................
12
d. Uji Alkaloid ...................................................................................
12
5. Analisis Kromatografi Lapis Tipis (KLT) .........................................
13
a. Uji Flavanoid .................................................................................
13
b. Uji Alkaloid ....................................................................................
13
6. Penetapan Kadar Total Senyawa Fenolik ...........................................
13
a. Penentuan Operating Time (OT) ....................................................
13
b. Penentuan Panjang Gelombang Maksimal (λmax)...........................
14
c. Penentuan Kurva Baku Asam Galat ...............................................
14
d. Penetapan Kadar Fenol Total .........................................................
14
E. Analisis Data .............................................................................................
15
BAB III HASIL DAN PEMBAHASAN
BAB IV KESIMPULAN DAN SARAN
A. Kesimpulan ...............................................................................................
24
B. Saran ..........................................................................................................
24
DAFTAR PUSTAKA .......................................................................................
25
LAMPIRAN .....................................................................................................
29
vii
<
Halaman
Tabel 1.
Hasil Penentuan IC50 Ekstrak Air Teripang Pasir (Holothuria
scabra) dibandingkan dengan Vitamin E .....................................
Tabel 2.
Tabel 3.
17
Hasil Skrining Fitokimia Ekstrak Air Teripang Holothuria
scabra) ...........................................................................................
19
Hasil Uji Kromatografi Lapis Tipis (KLT) ..................................
21
viii
<
Halaman
Gambar 1. Reaksi Radikal DPPH dengan Antioksidan .................................
16
Gambar 2. Korelasi konsentrasi antar sampel (ekstrak air teripang pasir dan
vitamin E) dibandingkan dengan aktivitas antiradikalnya.
Semakin besar konsentrasi semakin besar aktivitas penangkap
radikalnya ......................................................................................
18
Gambar 3. Gambar 3. Hasil uji tabung a) pengujian dengan Dragendorff, b)
pengujian dengan Mayer, c) fraksi klorofom, diuji dengan
Dragendroff dan HCl 1%. Hasil positif mengandung alkaloid
terbentuk endapan..........................................................................
20
Gambar 4. Lempeng KLT (a) Lempeng flavonoid (fase diam silika gel
GF254, fase gerak etil asetat : metanol : air (100 : 13,5 : 10) dan
deteksi reagen semprot Sitroborat, (b) Lempeng alkaloid (fase
diam silika gel GF254, fase gerak etil asetat : metanol : air (100 :
13,5 : 10) dan deteksi reagen semprot Dragendorff .....................
ix
21
Halaman
Lampiran 1.
Surat keterangan hasil determinasi teripang pasir (Holothuria
scabra) .....................................................................................
Lampiran 2.
Hasil Penentuan Operating Time dan Panjang Gelombang
Maksimum DPPH .....................................................................
Lampiran 3.
30
31
Hasil Penentuan % Antiradikal, IC50 ekstrak air teripang pasir
(Holothuria scabra) dan Vitamin E ..........................................
32
Lampiran 4.
Foto hasil pengujian polifenol, saponin dan flavonoid ............
36
Lampiran 5.
Foto hasil KLT flavonoid (fase diam silika gel GF254, fase
gerak etil asetat : metanol : air (100 : 13,5 : 10) dan deteksi
dengan reagen semprot Sitroborat) ...........................................
Lampiran 6.
37
Foto hasil KLT alkaloid (fase diam silika gel GF254, fase
gerak etil asetat : metanol : air (100 : 13,5 : 10) dan deteksi
dengan reagen semprot Dragendorff) .......................................
38
Lampiran 7.
Hasil Penentuan Operating Time Asam Galat ..........................
39
Lampiran 8.
Penentuan Kurva Baku Asam Galat .........................................
39
Lampiran 9.
Profil Penetapan Kurva Baku Asam Galat dan Perhitungan
Kadar Fenol Total .....................................................................
x
40
BCB
: β Carotene Bleaching
o
: Derajat Celcius
DHA
: Dokosahexaenoat
DPPH
: 1,1#Difenil#2#Pikrilhidrazil
DNA
: Deoxyribonucleic acid
EPA
: Eikosapentanoat
FeCl3
: Ferri Clorida
FRAP
: Ferric Reducing Ability in Plasma
GAE
: gallic acid equivalent
g
: Gram
HCl
: Asam Klorida
IC50
: Inhibitory Concentration
KLT
: Kromatografi Lapis Tipis
LDL
: Low density lipoprotein (lipoprotein densitas rendah)
mL
: Mililiter
MDA
: Malondialdehyde
mM
: Milimolar
Na2CO3
: Natrium Carbonat
nm
: Nanometer
OT
: Operating Time
SOD
: Superoksida Dismutase
TBA
: Thiobarbituric Acid
TBARS
: Thiobarbituric Acid Reactive Species
UV
: Ultra Violet
µL
: Mikroliter
C
xi
Pola pengembangan penyakit telah bergeser dari penyakit infeksi ke
penyakit degeneratif seperti infark miokard, inflamasi jaringan, mutasi gen
kanker, katarak, penuaan dini dan sebagainya, yang dipicu oleh radikal bebas
dalam tubuh. Peranan antioksidan sangat penting dalam menetralkan dan
menghancurkan radikal bebas. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui daya
antioksidan ekstrak air teripang pasir (Holothuria scabra).
Uji aktivitas antioksidan ini dilakukan dengan menggunakan metode DPPH
sedangkan analisis profil kandungan senyawa kimia dilakukan dengan metode
kromatografi lapis tipis dan uji tabung. Pengukuran aktivitas antioksidan
dilakukan dengan mengamati penurunan serapan DPPH dalam metanol p.a
secara spektrofotometri pada λmaks= 514,5 nm dengan waktu inkubasi 30 menit.
Pengujian kromatografi lapis tipis menggunakan fase gerak etil asetat : metanol :
air (100 : 13,5 : 10).
Berdasarkan hasil penelitian, ekstrak air teripang pasir (Holothuria
scabra) memiliki aktivitas antioksidan yang rendah (IC50 = 2715,36 Hg/ml) dan
mengandung senyawa golongan alkaloid dan flavonoid.
&+& )(*0%: Antioksidan, Ekstrak air, Teripang, Holothuria scabra, metode
DPPH.
xii