Karkterisasi Simplisia dan Skrining Fitokimia Serta Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Buah Kesemek (Diospyros kaki Thunb.
Lampiran 1. Hasil identifikasi tumbuhan buah kesemek
Lampiran 2. Gambar tumbuhan dan buah kesemek (Diospyros kaki Thunb.)
Pohon kesemek
Buah kesemek
Lampiran 3. Makroskopik buah kesemek (Diospyros kaki Thunb.)
Buah kesemek
Daging buah kesemek segar
Simplisia buah kesemek
Serbuk simplisia buah kesemek
Lampiran 4. Mikroskopik buah kesemek
Penampang melintang buah kesemek segar perbesaran 10x40
Keterangan: 1. Kutikula
2.
3.
4.
5.
6.
Epidermis
Sel batu
Parenkim
Kristal oksalat bentuk prisma
Jaringan pengangkut bentuk spiral
Serbuk simplisia buah kesemek perbesaran 10x40
Keterangan: 1. Parenkim
2. Kristal kalsium oksalat
3. Pati
4. Jaringan pengangkut bentuk spiral
Lampiran 5. Bagan kerja penelitian
Buah kesemek segar
dicuci bersih dan dikupas kulitnya
Daging buah kesemek
dirajang dengan ukuran panjang
1-2cm, lebar 3-4 cm dan tebal 0,2-0,4 cm
ditimbang beratnya,
dihaluskan menggunakan blender
ditimbang sebagai berat basah
ditambah air, diperas melalui kain kasa
dan disaring
dikeringkan di lemari pengering
pada suhu 40ºC
Filtrat
Simplisia
dibekukan dalam freezer
ditimbang sebagai berat kering
diserbuk menggunakan blender
dikeringkan menggunakan
ditimbang beratnya
Serbuk Simplisia
Karakterisasi Simplisia
Pemeriksaan organoleptis
Pemeriksaan mikroskopik
Penetapan kadar air
Penetapan kadar sari
yang larut dalam air
Penetapan kadar sari
yang larut dalam etanol
Penetapan kadar abu
total
Penetapan kadar abu yang
tidak larut dalam asam
Sari buah kental
Skrining Fitokimia
Ektraksi secara maserasi
dimaserasi dengan
etanol 96 %
Pemeriksaan
Alkaloid
Pemeriksaan
Glikosida
Maserat
diuapkan dengan rotary
evaporator
Pemeriksaan
Steroid/Triterpenoid
Pemeriksaan
Flavonoid
Pemeriksaan
Tanin
Pemeriksaan
Saponin
Pemeriksaan
Antrakinon
dikeringkan dengan
freeze dryer
Ekstrak kental
Uji aktivitas
antioksidan
Hasil
freeze
dryer
Lampiran 6. Perhitungan pemeriksaan karakteristik simplisia buah kesemek
1. Perhitungan kadar air
% Kadar air =
volume air (ml)
x 100%
berat sampel (g)
1. Berat sampel
= 5,000 g
Volume air
= 0,3 ml
% Kadar air =
0,3ml
x 100% = 6%
5,000 g
2. Berat sampel
Volume air
% Kadar air =
3. Berat sampel
Volume air
% Kadar air =
= 5,009 g
= 0,2 ml
0,2 ml
x 100% = 3,99%
5,009 g
= 5,012 g
= 0,3 ml
0,3 ml
x100% = 5,98%
5,012 g
% Kadar air rata-rata =
6% + 3,99% + 5,98%
3
= 5,32%
Lampiran 6 (lanjutan)
2. Perhitungan kadar sari larut dalam air
% Kadar sari larut dalam air =
Berat sari (g)
100
x
100%
Berat simplisia (g) 20
1. Berat simplisia = 5,000 g
Berat sari
= 0,305 g
% Kadar sari larut dalam air =
0,305 g 100
x 100% = 30,5%
x
5,000 g 20
2. Berat simplisia = 5,003 g
Berat sari
= 0,386 g
% Kadar sari larut dalam air =
0,386g 100
x
x 100% = 38,57%
5,003 g 20
3. Berat simplisia = 5,001 g
Berat sari
= 0,371 g
% Kadar sari larut dalam air =
0,371 g 100
x 100% = 37,09%
x
5,001 g 20
% Kadar sari larut dalam air rata-rata =
30,5% + 38,57% + 37,09%
3
= 35,58%
Lampiran 6. (lanjutan)
3. Perhitungan kadar sari larut dalam etanol
% Kadar sari larut dalam etanol =
1. Berat simplisia
Berat sari
Berat sari (g)
100
x
x 100%
Berat simplisia (g) 20
= 5,000 g
= 0,449 g
% Kadar sari larut dalam air =
0,449 g 100
x
x 100% = 44,9%
5,000 g 20
2. Berat simplisia = 5,000 g
Berat sari
= 0,42 g
% Kadar sari larut dalam air =
0,42 g 100
x 100% = 42%
x
5,000 g 20
3. Berat simplisia = 5,002 g
Berat sari
= 0,419 g
% Kadar sari larut dalam etanol =
0,419 g 100
x 100% = 41,88%
x
5,002g 20
% Kadar sari larut dalam etanol rata-rata =
44,9% + 42% + 41,88%
3
= 42,92%
Lampiran 6. (lanjutan)
4. Perhitungan kadar abu total
% Kadar abu total =
Berat abu (g)
x 100%
Berat simplisia (g)
1. Berat simplisia
Berat abu
% Kadar abu total =
2. Berat simplisia
Berat abu
% Kadar abu total =
3. Berat simplisia
Berat abu
% Kadar abu total =
= 2,002 g
= 0,099 g
0,099 g
x 100% = 4,94%
2,002 g
= 2,006 g
= 0,096 g
0,096 g
x 100 % = 4,78%
2,006 g
= 2,003 g
= 0,102 g
0,102 g
x 100 % = 4,93%
2,003 g
% Kadar abu total rata-rata =
4,94% + 4,78% + 5,08%
3
= 4,93%
Lampiran 6. (lanjutan)
5. Perhitungan kadar abu yang tidak larut dalam asam
% Kadar abu tidak larut dalam asam =
Berat abu (g)
x 100%
Berat simplia (g)
1. Berat simplisia = 2,002 g
Berat abu
= 0,0056g
% Kadar abu tidak larut dalam asam =
0,0056 g
x 100%
2,002 g
= 0,279%
2. Berat simplisia = 2,006 g
Berat abu
= 0,0049 g
% Kadar abu tidak larut dalam asam =
0,0049 g
x 100%
2,006 g
= 0,244%
3. Berat simplisia = 2,003 g
Berat abu
= 0,0052 g
% Kadar abu tidak larut dalam asam =
0,0052 g
x 100%
2,003 g
= 0,259%
% Kadar abu yang tidak larut dalam asam rata-rata
=
0,279% + 0,244% + 0,259%
3
= 0,26 %
Lampiran 7. Seperangkat alat spektrofotometer UV/Vis (Shimadzu 1800).
Lampiran 8 Data Absorbansi Dan Hasil Uji Aktivitas Antioksidan Sari Buah Kesemek Segar (SBKS), Ekstrak Etanol Buah Kesemek
(EEBK), Butil Hidroksianisol (BHA), Butil Toluena (BHT) dan Kuersetin Metode β-karoten-asam linoleat
Tabel 8.1 Data Absorbansi Dan Hasil Uji Aktivitas Antioksidan Sari Buah Kesemek Segar (SBKS)
Waktu
Blanko
Pengukuran
(menit)
I
Percobaan
II
III
0
15
30
45
60
75
90
105
0.034
0.031
0.030
0.029
0.029
0.029
0.028
0.033
0.028
0.028
0.027
0.026
0.025
0.025
0.028
0.024
0.032
0.024
0.022
0.022
0.022
0.022
0.022
0.022
120
0.027
0.024
0.022
Sari Buah Kesemek Segar (SBKS)
Absorbansi Sampel SBKS
% Aktivitas Antioksidan SBKS 4000
4000 ppm
ppm
Percobaan
Percobaan
I
II
III
I
II
III
Ratarata
0.0
0.0
0.0
0.00
0.395
0.368
0.368
33.3
40.0
25.0
32.70
0.394
0.365
0.362
0.362
50.0
40.0
40.0
43.33
0.393
0.365
0.362
20.0
33.4
40.0
31.13
0.391
0.364
0.362
20.0
14.3
45.6
26.58
0.391
0.362
0.362
20.0
12.5
45.6
25.96
0.391
0.361
0.362
16.6
12.5
45.6
24.85
0.388
0.361
0.362
16.6
11.2
45.6
24.42
0.388
0.360
0.387
0.360
0.362
14.2
11.2
45.6
23.62
Lampiran 8.1 (lanjutan)
Waktu
Waktu
Pengukuran
Blanko
(menit)
Percobaan
II
I
III
0
15
30
45
60
75
90
105
0.034
0.031
0.030
0.029
0.029
0.029
0.028
0.033
0.028
0.028
0.027
0.026
0.025
0.025
0.028
0.024
0.032
0.024
0.022
0.022
0.022
0.022
0.022
0.022
120
0.027
0.024
0.022
Lampiran 8.1 (lanjutan)
Sari Buah Kesemek Segar (SBKS)
Sari Buah Kesemek Segar (SBKS)
Absorbansi Sampel SBKS
% Aktivitas Antioksidan SBKS 5000
5000 ppm
ppm
Percobaan
Percobaan
I
II
III
I
II
III
Ratarata
0.0
0.0
0.0
0.00
0.403
0.370
0.370
33.3
40.0
37.5
36.94
0.401
0.367
0.365
50.0
40.0
50.0
46.66
0.400
0.367
0.365
20.0
50.0
50.0
40.00
0.400
0.367
0.365
20.0
28.6
54.6
34.40
0.400
0.365
0.364
20.0
25.0
54.6
33.20
0.400
0.364
0.364
16.6
25.0
54.6
33.06
0.399
0.364
0.364
16.6
22.3
45.46
28.12
0.398
0.363
0.363
0.398
0.363
0.363
14.2
22.3
45.46
28.12
Blanko
I
0
15
30
45
60
75
90
105
120
Percobaan
II
0.034
0.031
0.030
0.029
0.029
0.029
0.028
0.033
0.028
0.028
0.027
0.026
0.025
0.025
0.028
0.027
III
Absorbansi Sampel SBKS
6000 ppm
Percobaan
I
II
III
0.401
0.400
0.400
0.399
0.399
0.399
0.396
0.396
0.393
0.393
0.393
0.392
0.391
0.391
0.396
0.391
0.391
0.391
0.390
0.390
0.390
0.024
0.032
0.024
0.022
0.022
0.022
0.022
0.022
0.022
0.396
0.390
0.389
0.024
0.022
0.395
0.390
0.389
% Aktivitas Antioksidan SBKS 6000
ppm
Percobaan
I
II
III
Ratarata
0.0
0.0
0.0
0.00
33.4
40.0
37.5
36.96
75.0
40.0
50.0
55.00
40.0
50.0
50.0
46.66
40.0
42.86
45.46
42.77
40.0
37.5
45.46
40.98
33.4
37.5
45.46
38.78
16.7
33.33
36.4
28.81
16.7
33.33
36.4
28.81
Lampiran 8.2 Data Absorbansi Dan Hasil Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Buah Kesemek (EEBK).
Waktu
Blanko
Pengukuran
(menit)
I
Percobaan
II
III
0
15
30
45
60
75
90
105
0.034
0.031
0.026
0.026
0.026
0.026
0.025
0.034
0.031
0.030
0.029
0.027
0.027
0.026
0.034
0.030
0.029
0.028
0.028
0.027
0.027
0.025
0.025
0.026
120
0.025
0.025
0.026
Ekstrak Etanol Buah Kesemek (EEBK)
Absorbansi Sampel EEBK
% Aktivitas Antioksidan EEBK 2000
2000 ppm
ppm
Percobaan
Percobaan
I
II
III
I
II
III
Ratarata
0.0
0.0
0.0
0.00
0.178
0.176
0.179
33.4
33.3
25.0
30.56
0.176
0.175
0.176
62.5
50.0
40.0
50.83
0.175
0.174
0.176
37.5
60.0
50.0
49.16
0.173
0.174
0.176
37.5
42.9
33.4
37.93
0.173
0.172
0.175
25.0
28.6
28.6
27.40
0.172
0.171
0.174
25.0
25.0
28.6
26.20
0.172
0.170
0.174
22.3
22.3
25.0
23.20
0.169
0.169
0.173
0.169
0.169
0.173
22.3
22.3
25.0
23.20
Lampiran 8.2 (lanjutan)
Waktu
Blanko
Pengukuran
(menit)
I
Percobaan
II
III
0
15
30
45
60
75
90
105
0.034
0.031
0.026
0.026
0.026
0.026
0.025
0.034
0.031
0.030
0.029
0.027
0.027
0.026
0.034
0.030
0.029
0.028
0.028
0.027
0.027
0.025
0.025
0.026
120
0.025
0.025
0.026
Ekstrak Etanol Buah Kesemek (EEBK)
Absorbansi Sampel EEBK
% Aktivitas Antioksidan EEBK 2500
2500 ppm
ppm
Percobaan
Percobaan
I
II
III
I
II
III
Ratarata
0.0
0.0
0.0
0.00
0.180
0.179
0.180
33.4
33.3
25.0
30.60
0.178
0.177
0.179
50.0
50.0
60.0
53.33
0.176
0.177
0.178
50.0
60.0
50.0
53.33
0.176
0.177
0.177
50.0
42.9
33.4
42.20
0.176
0.176
0.176
50.0
42.9
28.6
40.50
0.176
0.176
0.175
37.50
25.0
28.6
30.36
0.175
0.173
0.175
33.40
22.3
25.0
26.90
0.174
0.173
0.174
0.174
0.173
0.174
33.40
22.3
25.0
26.90
Lampiran 8.2 (lanjutan)
Waktu
Blanko
Pengukuran
(menit)
I
Percobaan
II
III
Ekstrak Etanol Buah Kesemek (EEBK)
Absorbansi Sampel EEBK
% Aktivitas Antioksidan EEBK 3000
3000 ppm
ppm
Percobaan
Percobaan
I
II
III
I
II
III
Ratarata
0.0
0.0
0.0
0.00
0.182
0.181
0.181
33.4
33.4
50.0
38.90
0.180
0.180
0.180
62.5
50.0
60.0
57.50
0.179
0.179
0.179
37.5
60.0
66.7
54.73
0.178
0.178
0.179
37.5
42.9
50.0
43.46
0.178
0.177
0.178
37.5
42.9
42.9
41.10
0.178
0.177
0.177
37.5
37.5
42.9
39.30
0.177
0.176
0.177
0
15
30
45
60
75
90
105
0.034
0.031
0.026
0.026
0.026
0.026
0.025
0.034
0.031
0.030
0.029
0.027
0.027
0.026
0.034
0.030
0.029
0.028
0.028
0.027
0.027
0.025
0.025
0.026
0.176
0.175
0.176
22.3
33.4
37.5
31.06
120
0.025
0.025
0.026
0.176
0.175
0.176
22.3
33.4
37.5
31.06
Tabel 8.3 Data Absorbansi Dan Hasil Uji Aktivitas Antioksidan Butil Hidroksianisol (BHA)
Waktu
Blanko
Pengukuran
(menit)
I
Percobaan
II
III
0
15
30
45
60
75
90
105
0.034
0.032
0.029
0.029
0.027
0.027
0.026
0.031
0.029
0.026
0.025
0.025
0.025
0.024
0.033
0.030
0.029
0.029
0.028
0.028
0.026
0.026
0.023
0.025
120
0.026
0.023
0.025
Butil Hidroksianisol (BHA)
Absorbansi Sampel BHA 100 % Aktivitas Antioksidan BHA 100 ppm
ppm
Percobaan
Percobaan
I
II
III
I
II
III
Ratarata
0.00
0.00
0.00
0.00
0.418
0.414
0.415
50.00
50.00
66.67
55.56
0.417
0.413
0.414
80.00
80.00
75.00
78.33
0.417
0.413
0.414
80.00
83.33
75.00
79.44
0.417
0.413
0.414
71.43
66.67
60.00
66.03
0.416
0.412
0.413
71.43
66.67
60.00
66.03
0.416
0.412
0.413
62.50
57.14
57.14
58.93
0.415
0.411
0.412
62.50
50.00
50.00
54.17
0.415
0.410
0.411
0.415
0.410
0.411
62.50
50.00
50.00
54.17
Tabel 8.4 Data Absorbansi Dan Hasil Uji Aktivitas Antioksidan Butil Hidroksitoluena (BHT)
Waktu
Blanko
Pengukuran
(menit)
I
Percobaan
II
III
Butil Toluena (BHT)
Absorbansi Sampel BHT 100
ppm
Percobaan
I
II
III
% Aktivitas Antioksidan BHT 100 ppm
Percobaan
II
III
0.403
0.00
50.00
60.00
60.00
57.14
57.14
50.00
50.00
0.00
50.00
60.00
66.67
66.67
66.67
57.14
50.00
0.00
33.33
50.00
75.00
60.00
60.00
42.86
37.50
Ratarata
0.00
44.44
56.67
67.22
61.27
61.27
50.00
45.83
0.403
50.00
50.00
37.50
45.83
0
15
30
45
60
75
90
105
0.034
0.032
0.029
0.029
0.027
0.027
0.026
0.031
0.029
0.026
0.025
0.025
0.025
0.024
0.033
0.030
0.029
0.029
0.028
0.028
0.026
0.416
0.415
0.414
0.414
0.413
0.413
0.412
0.411
0.410
0.409
0.409
0.409
0.409
0.408
0.414
0.412
0.408
0.407
0.406
0.406
0.404
0.026
0.023
0.025
0.412
0.407
120
0.026
0.023
0.025
0.412
0.407
I
Tabel 8.5 Data Absorbansi Dan Hasil Uji Aktivitas Antioksidan Kuersetin
Waktu
Blanko
Pengukuran
(menit)
I
Percobaan
II
III
Kuersetin
Absorbansi Sampel Kuersetin
100 ppm
Percobaan
I
II
III
0
15
30
45
60
75
90
105
0.034
0.032
0.029
0.029
0.027
0.027
0.026
0.031
0.029
0.026
0.025
0.025
0.025
0.024
0.033
0.030
0.029
0.029
0.028
0.028
0.026
0.409
0.408
0.407
0.407
0.405
0.405
0.404
0.408
0.407
0.407
0.405
0.405
0.405
0.404
0.410
0.408
0.408
0.408
0.408
0.408
0.406
0.026
0.023
0.025
0.404
0.403
0.405
120
0.026
0.023
0.025
0.404
0.403
0.405
% Aktivitas Antioksidan Kuersetin 100
ppm
Percobaan
I
II
III
Ratarata
0.00
0.00
0.00
0.00
50.00
50.00
33.33
44.44
60.00
80.00
50.00
63.33
60.00
50.00
50.00
53.33
42.86
50.00
60.00
50.95
42.86
50.00
60.00
50.95
37.50
42.86
42.86
41.07
37.50
37.50
37.50
37.50
37.50
37.50
37.50
37.50
Lampiran 9
Contoh Perhitungan Nilai Aktivitas Antioksidan Metode β-Karoten-Asam Linoleat
Perhitungan aktifitas antioksidan Sari Buah Kesemek Segar (SBKS)
Konsentrasi 4000 ppm
Rumus : AA = 100 �1 −
(𝐴0−𝐴𝑡)
�𝐴00 −𝐴0𝑡 �
�
Pengukuran menit ke-15
(0,395−0,394)
Pengukuran pertama = 100 �1 − (0,034−0,031)� = 33,3%
(0,368−0,365)
Pengukuran kedua = 100 �1 − (0,033−0,028)� = 40,00%
(0,368−0,362)
Pengukuran ketiga = 100 �1 − (0,032−0,024)� =25,00%
Lampiran 10. Hasil uji aktivitas antioksidan metode DPPH
a. Sari buah kesemek segar (SBKS)
Konsentrasi
Sampel
(ppm)
0
4000
5000
6000
Absorbansi DPPH
Absorbansi sampel
I
II
III
I
II
III
1,106
0,586
0,551
0,512
1,128
0,579
0,579
0,513
1,124
0,581
0,581
0,512
0,00
47,01
47,01
53,71
0,00
48,67
48,67
54,52
0,00
48,31
48,31
54,45
b. Ekstrak etanol buah kesemek (EEBK)
Konsentrasi
Sampel
Absorbansi DPPH
Absorbansi sampel
Ratarata
0,00
47,99
47,99
54,23
(ppm)
I
II
III
I
II
III
0
2000
2500
3000
1,111
0,630
0,537
0,455
1,123
0,619
0,535
0,458
1,121
0,620
0,534
0,463
0,00
43,29
51,66
59,04
0,00
44,88
52,36
59,22
0,00
44,69
52,36
58,70
Ratarata
0,00
44,29
52,13
58,65
c. Vitamin C
Konsentrasi
Sampel
(ppm)
0
4
5
6
Absorbansi DPPH
Absorbansi sampel
I
II
III
I
II
III
1,114
0,550
0,385
0,303
1,115
0,547
0,384
0,305
1,116
0,548
0,391
0,306
0,00
50,63
65,44
72,80
0,00
50,94
65,56
72,64
0,00
50,90
64,96
67,74
Contoh perhitungan:
Sari buah kesemek segar
% pemerangkapan: =
A kontrol - A sampel
x 100%
A kontrol
Konsentrasi 4000 ppm
Pengukuran pertama:
% pemerangkapan =
1,106 − 0,586
x 100% = 47,01
1,106
Lampiran 10. Perhitungan nilai IC50
Persamaan regresi linier dan nilai IC50 ekstrak etanol buah kesemek
Nilai
IC50
Sari buah kesemek
segar
Y = 0,009X + 4,65
5038,88 ppm
Persamaan Regresi
Ekstrak etanol buah
kesemek
Y = 0,020X + 127
2436,50 ppm
Vitamin C
Y = 12,12X + 0,55
4,08 ppm
Ratarata
0,00
50,82
65,32
71,06
Contoh perhitungan:
Nilai IC50 sari buah kesemek segar
X
0
4000
5000
6000
Y
0
47,99
51,33
54,23
XY
0
192240
260300
326580
X2
0
16000000
25000000
36000000
ΣX= 15000
ΣY= 153,61
ΣXY= 774290
Σ=77000000
X = Konsentrasi (ppm)
Y = % Pemerangkapan
a =
=
(∑ XY) - (∑ X)(∑ Y) / n
(∑ X 2 ) − (X 2 ) / n
(779120) − (15000)(154,55) / 4
779120
=
= 0,009
2
(77000000) − (3750) / 4
20750000
b = y - ax
= 38,63-0,009(3750)
= 4,65
Jadi, persamaan garis regresi Y = 0,009X + 4,65
Nilai IC50 =
50 = 0,009X + 4,65
X = 5038,88 ppm
maka IC50 = 5038,88ppm.
Lampiran 2. Gambar tumbuhan dan buah kesemek (Diospyros kaki Thunb.)
Pohon kesemek
Buah kesemek
Lampiran 3. Makroskopik buah kesemek (Diospyros kaki Thunb.)
Buah kesemek
Daging buah kesemek segar
Simplisia buah kesemek
Serbuk simplisia buah kesemek
Lampiran 4. Mikroskopik buah kesemek
Penampang melintang buah kesemek segar perbesaran 10x40
Keterangan: 1. Kutikula
2.
3.
4.
5.
6.
Epidermis
Sel batu
Parenkim
Kristal oksalat bentuk prisma
Jaringan pengangkut bentuk spiral
Serbuk simplisia buah kesemek perbesaran 10x40
Keterangan: 1. Parenkim
2. Kristal kalsium oksalat
3. Pati
4. Jaringan pengangkut bentuk spiral
Lampiran 5. Bagan kerja penelitian
Buah kesemek segar
dicuci bersih dan dikupas kulitnya
Daging buah kesemek
dirajang dengan ukuran panjang
1-2cm, lebar 3-4 cm dan tebal 0,2-0,4 cm
ditimbang beratnya,
dihaluskan menggunakan blender
ditimbang sebagai berat basah
ditambah air, diperas melalui kain kasa
dan disaring
dikeringkan di lemari pengering
pada suhu 40ºC
Filtrat
Simplisia
dibekukan dalam freezer
ditimbang sebagai berat kering
diserbuk menggunakan blender
dikeringkan menggunakan
ditimbang beratnya
Serbuk Simplisia
Karakterisasi Simplisia
Pemeriksaan organoleptis
Pemeriksaan mikroskopik
Penetapan kadar air
Penetapan kadar sari
yang larut dalam air
Penetapan kadar sari
yang larut dalam etanol
Penetapan kadar abu
total
Penetapan kadar abu yang
tidak larut dalam asam
Sari buah kental
Skrining Fitokimia
Ektraksi secara maserasi
dimaserasi dengan
etanol 96 %
Pemeriksaan
Alkaloid
Pemeriksaan
Glikosida
Maserat
diuapkan dengan rotary
evaporator
Pemeriksaan
Steroid/Triterpenoid
Pemeriksaan
Flavonoid
Pemeriksaan
Tanin
Pemeriksaan
Saponin
Pemeriksaan
Antrakinon
dikeringkan dengan
freeze dryer
Ekstrak kental
Uji aktivitas
antioksidan
Hasil
freeze
dryer
Lampiran 6. Perhitungan pemeriksaan karakteristik simplisia buah kesemek
1. Perhitungan kadar air
% Kadar air =
volume air (ml)
x 100%
berat sampel (g)
1. Berat sampel
= 5,000 g
Volume air
= 0,3 ml
% Kadar air =
0,3ml
x 100% = 6%
5,000 g
2. Berat sampel
Volume air
% Kadar air =
3. Berat sampel
Volume air
% Kadar air =
= 5,009 g
= 0,2 ml
0,2 ml
x 100% = 3,99%
5,009 g
= 5,012 g
= 0,3 ml
0,3 ml
x100% = 5,98%
5,012 g
% Kadar air rata-rata =
6% + 3,99% + 5,98%
3
= 5,32%
Lampiran 6 (lanjutan)
2. Perhitungan kadar sari larut dalam air
% Kadar sari larut dalam air =
Berat sari (g)
100
x
100%
Berat simplisia (g) 20
1. Berat simplisia = 5,000 g
Berat sari
= 0,305 g
% Kadar sari larut dalam air =
0,305 g 100
x 100% = 30,5%
x
5,000 g 20
2. Berat simplisia = 5,003 g
Berat sari
= 0,386 g
% Kadar sari larut dalam air =
0,386g 100
x
x 100% = 38,57%
5,003 g 20
3. Berat simplisia = 5,001 g
Berat sari
= 0,371 g
% Kadar sari larut dalam air =
0,371 g 100
x 100% = 37,09%
x
5,001 g 20
% Kadar sari larut dalam air rata-rata =
30,5% + 38,57% + 37,09%
3
= 35,58%
Lampiran 6. (lanjutan)
3. Perhitungan kadar sari larut dalam etanol
% Kadar sari larut dalam etanol =
1. Berat simplisia
Berat sari
Berat sari (g)
100
x
x 100%
Berat simplisia (g) 20
= 5,000 g
= 0,449 g
% Kadar sari larut dalam air =
0,449 g 100
x
x 100% = 44,9%
5,000 g 20
2. Berat simplisia = 5,000 g
Berat sari
= 0,42 g
% Kadar sari larut dalam air =
0,42 g 100
x 100% = 42%
x
5,000 g 20
3. Berat simplisia = 5,002 g
Berat sari
= 0,419 g
% Kadar sari larut dalam etanol =
0,419 g 100
x 100% = 41,88%
x
5,002g 20
% Kadar sari larut dalam etanol rata-rata =
44,9% + 42% + 41,88%
3
= 42,92%
Lampiran 6. (lanjutan)
4. Perhitungan kadar abu total
% Kadar abu total =
Berat abu (g)
x 100%
Berat simplisia (g)
1. Berat simplisia
Berat abu
% Kadar abu total =
2. Berat simplisia
Berat abu
% Kadar abu total =
3. Berat simplisia
Berat abu
% Kadar abu total =
= 2,002 g
= 0,099 g
0,099 g
x 100% = 4,94%
2,002 g
= 2,006 g
= 0,096 g
0,096 g
x 100 % = 4,78%
2,006 g
= 2,003 g
= 0,102 g
0,102 g
x 100 % = 4,93%
2,003 g
% Kadar abu total rata-rata =
4,94% + 4,78% + 5,08%
3
= 4,93%
Lampiran 6. (lanjutan)
5. Perhitungan kadar abu yang tidak larut dalam asam
% Kadar abu tidak larut dalam asam =
Berat abu (g)
x 100%
Berat simplia (g)
1. Berat simplisia = 2,002 g
Berat abu
= 0,0056g
% Kadar abu tidak larut dalam asam =
0,0056 g
x 100%
2,002 g
= 0,279%
2. Berat simplisia = 2,006 g
Berat abu
= 0,0049 g
% Kadar abu tidak larut dalam asam =
0,0049 g
x 100%
2,006 g
= 0,244%
3. Berat simplisia = 2,003 g
Berat abu
= 0,0052 g
% Kadar abu tidak larut dalam asam =
0,0052 g
x 100%
2,003 g
= 0,259%
% Kadar abu yang tidak larut dalam asam rata-rata
=
0,279% + 0,244% + 0,259%
3
= 0,26 %
Lampiran 7. Seperangkat alat spektrofotometer UV/Vis (Shimadzu 1800).
Lampiran 8 Data Absorbansi Dan Hasil Uji Aktivitas Antioksidan Sari Buah Kesemek Segar (SBKS), Ekstrak Etanol Buah Kesemek
(EEBK), Butil Hidroksianisol (BHA), Butil Toluena (BHT) dan Kuersetin Metode β-karoten-asam linoleat
Tabel 8.1 Data Absorbansi Dan Hasil Uji Aktivitas Antioksidan Sari Buah Kesemek Segar (SBKS)
Waktu
Blanko
Pengukuran
(menit)
I
Percobaan
II
III
0
15
30
45
60
75
90
105
0.034
0.031
0.030
0.029
0.029
0.029
0.028
0.033
0.028
0.028
0.027
0.026
0.025
0.025
0.028
0.024
0.032
0.024
0.022
0.022
0.022
0.022
0.022
0.022
120
0.027
0.024
0.022
Sari Buah Kesemek Segar (SBKS)
Absorbansi Sampel SBKS
% Aktivitas Antioksidan SBKS 4000
4000 ppm
ppm
Percobaan
Percobaan
I
II
III
I
II
III
Ratarata
0.0
0.0
0.0
0.00
0.395
0.368
0.368
33.3
40.0
25.0
32.70
0.394
0.365
0.362
0.362
50.0
40.0
40.0
43.33
0.393
0.365
0.362
20.0
33.4
40.0
31.13
0.391
0.364
0.362
20.0
14.3
45.6
26.58
0.391
0.362
0.362
20.0
12.5
45.6
25.96
0.391
0.361
0.362
16.6
12.5
45.6
24.85
0.388
0.361
0.362
16.6
11.2
45.6
24.42
0.388
0.360
0.387
0.360
0.362
14.2
11.2
45.6
23.62
Lampiran 8.1 (lanjutan)
Waktu
Waktu
Pengukuran
Blanko
(menit)
Percobaan
II
I
III
0
15
30
45
60
75
90
105
0.034
0.031
0.030
0.029
0.029
0.029
0.028
0.033
0.028
0.028
0.027
0.026
0.025
0.025
0.028
0.024
0.032
0.024
0.022
0.022
0.022
0.022
0.022
0.022
120
0.027
0.024
0.022
Lampiran 8.1 (lanjutan)
Sari Buah Kesemek Segar (SBKS)
Sari Buah Kesemek Segar (SBKS)
Absorbansi Sampel SBKS
% Aktivitas Antioksidan SBKS 5000
5000 ppm
ppm
Percobaan
Percobaan
I
II
III
I
II
III
Ratarata
0.0
0.0
0.0
0.00
0.403
0.370
0.370
33.3
40.0
37.5
36.94
0.401
0.367
0.365
50.0
40.0
50.0
46.66
0.400
0.367
0.365
20.0
50.0
50.0
40.00
0.400
0.367
0.365
20.0
28.6
54.6
34.40
0.400
0.365
0.364
20.0
25.0
54.6
33.20
0.400
0.364
0.364
16.6
25.0
54.6
33.06
0.399
0.364
0.364
16.6
22.3
45.46
28.12
0.398
0.363
0.363
0.398
0.363
0.363
14.2
22.3
45.46
28.12
Blanko
I
0
15
30
45
60
75
90
105
120
Percobaan
II
0.034
0.031
0.030
0.029
0.029
0.029
0.028
0.033
0.028
0.028
0.027
0.026
0.025
0.025
0.028
0.027
III
Absorbansi Sampel SBKS
6000 ppm
Percobaan
I
II
III
0.401
0.400
0.400
0.399
0.399
0.399
0.396
0.396
0.393
0.393
0.393
0.392
0.391
0.391
0.396
0.391
0.391
0.391
0.390
0.390
0.390
0.024
0.032
0.024
0.022
0.022
0.022
0.022
0.022
0.022
0.396
0.390
0.389
0.024
0.022
0.395
0.390
0.389
% Aktivitas Antioksidan SBKS 6000
ppm
Percobaan
I
II
III
Ratarata
0.0
0.0
0.0
0.00
33.4
40.0
37.5
36.96
75.0
40.0
50.0
55.00
40.0
50.0
50.0
46.66
40.0
42.86
45.46
42.77
40.0
37.5
45.46
40.98
33.4
37.5
45.46
38.78
16.7
33.33
36.4
28.81
16.7
33.33
36.4
28.81
Lampiran 8.2 Data Absorbansi Dan Hasil Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Buah Kesemek (EEBK).
Waktu
Blanko
Pengukuran
(menit)
I
Percobaan
II
III
0
15
30
45
60
75
90
105
0.034
0.031
0.026
0.026
0.026
0.026
0.025
0.034
0.031
0.030
0.029
0.027
0.027
0.026
0.034
0.030
0.029
0.028
0.028
0.027
0.027
0.025
0.025
0.026
120
0.025
0.025
0.026
Ekstrak Etanol Buah Kesemek (EEBK)
Absorbansi Sampel EEBK
% Aktivitas Antioksidan EEBK 2000
2000 ppm
ppm
Percobaan
Percobaan
I
II
III
I
II
III
Ratarata
0.0
0.0
0.0
0.00
0.178
0.176
0.179
33.4
33.3
25.0
30.56
0.176
0.175
0.176
62.5
50.0
40.0
50.83
0.175
0.174
0.176
37.5
60.0
50.0
49.16
0.173
0.174
0.176
37.5
42.9
33.4
37.93
0.173
0.172
0.175
25.0
28.6
28.6
27.40
0.172
0.171
0.174
25.0
25.0
28.6
26.20
0.172
0.170
0.174
22.3
22.3
25.0
23.20
0.169
0.169
0.173
0.169
0.169
0.173
22.3
22.3
25.0
23.20
Lampiran 8.2 (lanjutan)
Waktu
Blanko
Pengukuran
(menit)
I
Percobaan
II
III
0
15
30
45
60
75
90
105
0.034
0.031
0.026
0.026
0.026
0.026
0.025
0.034
0.031
0.030
0.029
0.027
0.027
0.026
0.034
0.030
0.029
0.028
0.028
0.027
0.027
0.025
0.025
0.026
120
0.025
0.025
0.026
Ekstrak Etanol Buah Kesemek (EEBK)
Absorbansi Sampel EEBK
% Aktivitas Antioksidan EEBK 2500
2500 ppm
ppm
Percobaan
Percobaan
I
II
III
I
II
III
Ratarata
0.0
0.0
0.0
0.00
0.180
0.179
0.180
33.4
33.3
25.0
30.60
0.178
0.177
0.179
50.0
50.0
60.0
53.33
0.176
0.177
0.178
50.0
60.0
50.0
53.33
0.176
0.177
0.177
50.0
42.9
33.4
42.20
0.176
0.176
0.176
50.0
42.9
28.6
40.50
0.176
0.176
0.175
37.50
25.0
28.6
30.36
0.175
0.173
0.175
33.40
22.3
25.0
26.90
0.174
0.173
0.174
0.174
0.173
0.174
33.40
22.3
25.0
26.90
Lampiran 8.2 (lanjutan)
Waktu
Blanko
Pengukuran
(menit)
I
Percobaan
II
III
Ekstrak Etanol Buah Kesemek (EEBK)
Absorbansi Sampel EEBK
% Aktivitas Antioksidan EEBK 3000
3000 ppm
ppm
Percobaan
Percobaan
I
II
III
I
II
III
Ratarata
0.0
0.0
0.0
0.00
0.182
0.181
0.181
33.4
33.4
50.0
38.90
0.180
0.180
0.180
62.5
50.0
60.0
57.50
0.179
0.179
0.179
37.5
60.0
66.7
54.73
0.178
0.178
0.179
37.5
42.9
50.0
43.46
0.178
0.177
0.178
37.5
42.9
42.9
41.10
0.178
0.177
0.177
37.5
37.5
42.9
39.30
0.177
0.176
0.177
0
15
30
45
60
75
90
105
0.034
0.031
0.026
0.026
0.026
0.026
0.025
0.034
0.031
0.030
0.029
0.027
0.027
0.026
0.034
0.030
0.029
0.028
0.028
0.027
0.027
0.025
0.025
0.026
0.176
0.175
0.176
22.3
33.4
37.5
31.06
120
0.025
0.025
0.026
0.176
0.175
0.176
22.3
33.4
37.5
31.06
Tabel 8.3 Data Absorbansi Dan Hasil Uji Aktivitas Antioksidan Butil Hidroksianisol (BHA)
Waktu
Blanko
Pengukuran
(menit)
I
Percobaan
II
III
0
15
30
45
60
75
90
105
0.034
0.032
0.029
0.029
0.027
0.027
0.026
0.031
0.029
0.026
0.025
0.025
0.025
0.024
0.033
0.030
0.029
0.029
0.028
0.028
0.026
0.026
0.023
0.025
120
0.026
0.023
0.025
Butil Hidroksianisol (BHA)
Absorbansi Sampel BHA 100 % Aktivitas Antioksidan BHA 100 ppm
ppm
Percobaan
Percobaan
I
II
III
I
II
III
Ratarata
0.00
0.00
0.00
0.00
0.418
0.414
0.415
50.00
50.00
66.67
55.56
0.417
0.413
0.414
80.00
80.00
75.00
78.33
0.417
0.413
0.414
80.00
83.33
75.00
79.44
0.417
0.413
0.414
71.43
66.67
60.00
66.03
0.416
0.412
0.413
71.43
66.67
60.00
66.03
0.416
0.412
0.413
62.50
57.14
57.14
58.93
0.415
0.411
0.412
62.50
50.00
50.00
54.17
0.415
0.410
0.411
0.415
0.410
0.411
62.50
50.00
50.00
54.17
Tabel 8.4 Data Absorbansi Dan Hasil Uji Aktivitas Antioksidan Butil Hidroksitoluena (BHT)
Waktu
Blanko
Pengukuran
(menit)
I
Percobaan
II
III
Butil Toluena (BHT)
Absorbansi Sampel BHT 100
ppm
Percobaan
I
II
III
% Aktivitas Antioksidan BHT 100 ppm
Percobaan
II
III
0.403
0.00
50.00
60.00
60.00
57.14
57.14
50.00
50.00
0.00
50.00
60.00
66.67
66.67
66.67
57.14
50.00
0.00
33.33
50.00
75.00
60.00
60.00
42.86
37.50
Ratarata
0.00
44.44
56.67
67.22
61.27
61.27
50.00
45.83
0.403
50.00
50.00
37.50
45.83
0
15
30
45
60
75
90
105
0.034
0.032
0.029
0.029
0.027
0.027
0.026
0.031
0.029
0.026
0.025
0.025
0.025
0.024
0.033
0.030
0.029
0.029
0.028
0.028
0.026
0.416
0.415
0.414
0.414
0.413
0.413
0.412
0.411
0.410
0.409
0.409
0.409
0.409
0.408
0.414
0.412
0.408
0.407
0.406
0.406
0.404
0.026
0.023
0.025
0.412
0.407
120
0.026
0.023
0.025
0.412
0.407
I
Tabel 8.5 Data Absorbansi Dan Hasil Uji Aktivitas Antioksidan Kuersetin
Waktu
Blanko
Pengukuran
(menit)
I
Percobaan
II
III
Kuersetin
Absorbansi Sampel Kuersetin
100 ppm
Percobaan
I
II
III
0
15
30
45
60
75
90
105
0.034
0.032
0.029
0.029
0.027
0.027
0.026
0.031
0.029
0.026
0.025
0.025
0.025
0.024
0.033
0.030
0.029
0.029
0.028
0.028
0.026
0.409
0.408
0.407
0.407
0.405
0.405
0.404
0.408
0.407
0.407
0.405
0.405
0.405
0.404
0.410
0.408
0.408
0.408
0.408
0.408
0.406
0.026
0.023
0.025
0.404
0.403
0.405
120
0.026
0.023
0.025
0.404
0.403
0.405
% Aktivitas Antioksidan Kuersetin 100
ppm
Percobaan
I
II
III
Ratarata
0.00
0.00
0.00
0.00
50.00
50.00
33.33
44.44
60.00
80.00
50.00
63.33
60.00
50.00
50.00
53.33
42.86
50.00
60.00
50.95
42.86
50.00
60.00
50.95
37.50
42.86
42.86
41.07
37.50
37.50
37.50
37.50
37.50
37.50
37.50
37.50
Lampiran 9
Contoh Perhitungan Nilai Aktivitas Antioksidan Metode β-Karoten-Asam Linoleat
Perhitungan aktifitas antioksidan Sari Buah Kesemek Segar (SBKS)
Konsentrasi 4000 ppm
Rumus : AA = 100 �1 −
(𝐴0−𝐴𝑡)
�𝐴00 −𝐴0𝑡 �
�
Pengukuran menit ke-15
(0,395−0,394)
Pengukuran pertama = 100 �1 − (0,034−0,031)� = 33,3%
(0,368−0,365)
Pengukuran kedua = 100 �1 − (0,033−0,028)� = 40,00%
(0,368−0,362)
Pengukuran ketiga = 100 �1 − (0,032−0,024)� =25,00%
Lampiran 10. Hasil uji aktivitas antioksidan metode DPPH
a. Sari buah kesemek segar (SBKS)
Konsentrasi
Sampel
(ppm)
0
4000
5000
6000
Absorbansi DPPH
Absorbansi sampel
I
II
III
I
II
III
1,106
0,586
0,551
0,512
1,128
0,579
0,579
0,513
1,124
0,581
0,581
0,512
0,00
47,01
47,01
53,71
0,00
48,67
48,67
54,52
0,00
48,31
48,31
54,45
b. Ekstrak etanol buah kesemek (EEBK)
Konsentrasi
Sampel
Absorbansi DPPH
Absorbansi sampel
Ratarata
0,00
47,99
47,99
54,23
(ppm)
I
II
III
I
II
III
0
2000
2500
3000
1,111
0,630
0,537
0,455
1,123
0,619
0,535
0,458
1,121
0,620
0,534
0,463
0,00
43,29
51,66
59,04
0,00
44,88
52,36
59,22
0,00
44,69
52,36
58,70
Ratarata
0,00
44,29
52,13
58,65
c. Vitamin C
Konsentrasi
Sampel
(ppm)
0
4
5
6
Absorbansi DPPH
Absorbansi sampel
I
II
III
I
II
III
1,114
0,550
0,385
0,303
1,115
0,547
0,384
0,305
1,116
0,548
0,391
0,306
0,00
50,63
65,44
72,80
0,00
50,94
65,56
72,64
0,00
50,90
64,96
67,74
Contoh perhitungan:
Sari buah kesemek segar
% pemerangkapan: =
A kontrol - A sampel
x 100%
A kontrol
Konsentrasi 4000 ppm
Pengukuran pertama:
% pemerangkapan =
1,106 − 0,586
x 100% = 47,01
1,106
Lampiran 10. Perhitungan nilai IC50
Persamaan regresi linier dan nilai IC50 ekstrak etanol buah kesemek
Nilai
IC50
Sari buah kesemek
segar
Y = 0,009X + 4,65
5038,88 ppm
Persamaan Regresi
Ekstrak etanol buah
kesemek
Y = 0,020X + 127
2436,50 ppm
Vitamin C
Y = 12,12X + 0,55
4,08 ppm
Ratarata
0,00
50,82
65,32
71,06
Contoh perhitungan:
Nilai IC50 sari buah kesemek segar
X
0
4000
5000
6000
Y
0
47,99
51,33
54,23
XY
0
192240
260300
326580
X2
0
16000000
25000000
36000000
ΣX= 15000
ΣY= 153,61
ΣXY= 774290
Σ=77000000
X = Konsentrasi (ppm)
Y = % Pemerangkapan
a =
=
(∑ XY) - (∑ X)(∑ Y) / n
(∑ X 2 ) − (X 2 ) / n
(779120) − (15000)(154,55) / 4
779120
=
= 0,009
2
(77000000) − (3750) / 4
20750000
b = y - ax
= 38,63-0,009(3750)
= 4,65
Jadi, persamaan garis regresi Y = 0,009X + 4,65
Nilai IC50 =
50 = 0,009X + 4,65
X = 5038,88 ppm
maka IC50 = 5038,88ppm.