UJI SITOTOKSIK EKSTRAK ETANOL DAUN BELUNTAS (Pluchea indica L.), CIPLUKAN (Physalis angulata L.), DAN Uji Sitotoksik Ekstrak Etanol Daun Beluntas (Pluchea indica L.), Ciplukan (Physalis angulata L.) dan Kenikir (Cosmos caudatus Kunth.) Terhadap Sel T47D.
UJI SITOTOKSIK EKSTRAK ETANOL DAUN BELUNTAS
(Pluchea indica L.), CIPLUKAN (Physalis angulata L.), DAN
KENIKIR (Cosmos caudatus Kunth.) TERHADAP SEL T47D
SKRIPSI
Oleh:
ANISA WIDYARATNA
K100130071
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA
SURAKARTA
2016
UJI SITOTOKSIK EKSTRAK ETANOL DAUN BELUNTAS
(Pluchea indica L.), CIPLUKAN (Physalis angulata L.), DAN
KENIKIR (Cosmos caudatus Kunth.) TERHADAP SEL T47D
SKRIPSI
Diajukan untuk memenuhi salah satu syarat mencapai derajat
Sarjana Farmasi (S. Farm) pada Fakultas Farmasi
Universitas Muhammadiyah Surakarta
di Surakarta
Oleh:
ANISA WIDYARATNA
K100130071
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA
SURAKARTA
2016
i
ii
KATA PENGANTAR
Assalamu’alaikum Warohmatullahi Wabarokatuh
Puji syukur kehadirat Allah SWT atas rahmat serta hidayah-Nya penulis
mampu menyelesaikan skripsi yang berjudul UJI SITOTOKSIK EKSTRAK
ETANOL DAUN BELUNTAS (Pluchea indica L.), CIPLUKAN (Physalis
angulata L.), DAN KENIKIR (Cosmos caudatus Kunth.) TERHADAP SEL
T47D
Penyusunan penelitian ini dimaksudkan untuk memenuhi salah satu syarat
dalam memperoleh gelar Sarjana Farmasi di Fakultas Farmasi Universitas
Muhammdiyah Surakarta. Dalam kesempatan ini, perkenankan penulis untuk
menyampaikan rasa terimakasih dan penghargaan kepada:
1. Bapak Azis Saifudin, Ph.D., Apt yang terhormat, selaku Dekan Fakultas
Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta, pembimbing akademik dan
dosen penguji I.
2. Ibu Maryati, Ph.D., Apt selaku pembimbing utama dan penguji III.
3. Bapak Dr. Haryoto, M.Sc., selaku dosen penguji II
4. Bapak/ibu dosen serta seluruh staf Fakultas Farmasi yang telah membantu
jalannya penelitian ini.
5. Ibu dan adikku tercinta serta seluruh keluarga besar yang senantiasa
membimbing, mendoakan dan memberikan semangat, dukungan yang tak
terhingga selama proses penulisan skripsi ini
6. Sahabat-sahabat tercinta, terima kasih untuk semuanya, atas semangat,
dukungan, doa dan kekompakannya.
7. Semua pihak yang telah membantu penulis dalam penyelesaian skripsi ini
yang tidak dapat penulis sebutkan satu persatu.
Wasalamu’alaikum Warohmatullahi Wabarokatuh
Surakarta, 29 November 2016
Penulis
iv
DAFTAR ISI
Halaman
PENGESAHAN SKRIPSI ...................................................................................... ii
DEKLARASI ......................................................................................................... iii
KATA PENGANTAR ........................................................................................... iv
DAFTAR ISI ........................................................................................................... v
DAFTAR GAMBAR ............................................................................................ vii
DAFTAR TABEL ................................................................................................ viii
DAFTAR LAMPIRAN .......................................................................................... ix
DAFTAR SINGKATAN ........................................................................................ x
ABSTRAK ............................................................................................................. xi
ABSTRACT ............................................................................................................ xii
BAB I PENDAHULUAN ....................................................................................... 1
A. Latar Belakang ............................................................................................... 1
B. Rumusan Masalah.......................................................................................... 2
C. Tujuan Penelitian ........................................................................................... 2
D. Tinjauan Pustaka............................................................................................ 3
1. Tanaman beluntas (Pluchea indica l.) ...................................................... 3
a. Klasifikasi .......................................................................................... 3
b. Kandungan Kimia .............................................................................. 3
c. Aktivitas Farmakologi ....................................................................... 3
2. Tanaman Ciplukan (Physalis angulata L.) ............................................... 4
a. Klasifikasi .......................................................................................... 4
b. Kandungan Kimia .............................................................................. 4
c. Aktivitas Farmakologi ....................................................................... 5
3. Tanaman Kenikir (Cosmos caudatus Kunth.) ........................................... 5
a. Klasifikasi .......................................................................................... 5
b. Kandungan Kimia .............................................................................. 5
c. Aktivitas Farmakologi ....................................................................... 5
4. Kanker ....................................................................................................... 6
E. Landasan Teori .............................................................................................. 7
F. Hipotesis ......................................................................................................... 8
BAB II METODE PENELITIAN ........................................................................... 9
A. Kategori Penelitian ........................................................................................ 9
B. Variabel Penelitian dan Definisi Operasionalnya .......................................... 9
C. Alat dan Bahan ............................................................................................ 10
1. Alat penelitian ......................................................................................... 10
2. Bahan penelitian...................................................................................... 10
v
D. Tempat Penelitian ........................................................................................ 11
E. Rencana Penelitian....................................................................................... 11
1.
2.
3.
4.
Penyiapan Bahan ..................................................................................... 11
Ekstraksi.................................................................................................. 11
Uji Kandungan Senyawa dengan KLT ................................................... 12
Uji Sitotoksik .......................................................................................... 12
a. Pemanenan Sel ................................................................................. 12
b. Pembuatan larutan uji ...................................................................... 13
c. Uji Sitotoksik ................................................................................... 13
F. Analisis Data ................................................................................................ 15
BAB III HASIL DAN PEMBAHASAN............................................................... 16
BAB IV KESIMPULAN DAN SARAN .............................................................. 24
A. Kesimpulan .................................................................................................. 24
B. Saran ............................................................................................................ 24
DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................... 26
vi
DAFTAR GAMBAR
Gambar 1. Struktur senyawa dari ekstrak beluntas. ................................................ 3
Gambar 2. Struktur senyawa dari ekstrak ciplukan ................................................ 4
Gambar 3. Struktur senyawa dari ekstrak kenikir ................................................... 5
Gambar 4. Uji Sitotoksik....................................................................................... 14
Gambar 5. Reaksi reduksi garam MTT membentuk formazan ............................. 17
Gambar 6. Morfologi sel T47D ............................................................................. 18
Gambar 7. Grafik hubungan konsentrasi versus %sel hidup ................................ 19
Gambar 8. Profil KLT ekstrak etanol daun beluntas............................................. 22
Gambar 9. Profil KLT ekstrak etanol daun ciplukan ............................................ 22
Gambar 10. Profil KLT ekstrak etanol daun kenikir............................................. 23
vii
DAFTAR TABEL
Tabel 1. Regimen kemoterapi kanker payudara dengan HER2 (-) ......................... 7
Tabel 2. Definisi Operasional ................................................................................. 9
Tabel 3. Hasil ekstraksi tanaman .......................................................................... 16
Tabel 4. Seri konsentrasi sampel uji dan % sel hidup setelah perlakuan .............. 18
Tabel 5. Persamaan regresi linier masing-masing sampel dan IC50 ...................... 20
Tabel 6. Deteksi golongan senyawa dengan berbagai pereaksi semprot .............. 23
viii
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1. Gambar Tanaman Beluntas, Ciplukan dan Kenikir .......................... 29
Lampiran 2. Perhitungan sel dan larutan seri konsentrasi ekstrak ........................ 30
Lampiran 3. Perhitungan hasil IC50 ....................................................................... 32
ix
DAFTAR SINGKATAN
DMSO : Dimethyl Sulfoxide
ELISA : Enzyme Linked Immuno Sorbant Assay
ER
: Estrogen Receptor
FBS
: Foetal Bovine Serum
IC50
: Inhibitory Concentration 50
KLT
: Kromatografi Lapis Tipis
LAF
: Laminar Air Flow
MK
: Media Kultur
MTT
:3-(4,5-Dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolium bromide
PBS
: Phospate Buffered Saline
PR
: Progesteron Receptor
Rf
: retardation factor
RPMI
: Roswell Park Memorial Institute
SDS
: Sodium Dodecyl Sulfate
UV
: Ultraviolet
x
ABSTRAK
Kanker payudara merupakan salah satu kanker penyebab kematian
terbesar pada wanita. Saat ini penemuan agen-agen sitotoksik dari bahan alam
terus dikembangkan. Beluntas (Pluchea indica L.), Ciplukan (Physalis angulata
L.) dan Kenikir (Cosmos caudatus Kunth.) merupakan tanaman-tanaman yang
berpotensi untuk dikembangkan sebagai agen sitotoksik. Penelitian ini bertujuan
untuk mengetahui efek sitotoksik ekstrak etanolik daun beluntas, ciplukan dan
kenikir terhadap sel kanker payudara T47D serta mengetahui golongan senyawa
yang terkandung didalamnya.
Ekstrak etanolik daun beluntas, ciplukan dan kenikir diuji efek
sitotoksik nya pada sel T47D dengan menggunakan metode MTT. Metode MTT
didasarkan pada pembentukan kristal formazan karena reduksi dari garam MTT
oleh enzim dehidrogenase suksinat. Proses nya terjadi di jalur respirasi
mitokondria sel hidup.
Dari hasil penelitian diperoleh IC50 pada ekstrak etanolik daun ciplukan
yaitu 176,6 µg/mL dan pada ekstrak etanolik daun beluntas dan kenikir masingmasing memiliki IC50 >200 µg/mL. Dari hasil penelitian ini dapat disimpulkan
ekstrak etanolik daun beluntas, ciplukan dan kenikir memiliki efek sitotoksik yang
lemah terhadap sel T47D. Hasil uji KLT menunjukkan bahwa ekstrak etanol daun
beluntas, ciplukan dan kenikir mengandung tanin dan flavonoid.
Kata kunci: Pluchea indica L., Physalis angulata L., Cosmos caudatus Kunth.,
sitotoksik, IC50, T47D
xi
ABSTRACT
Breast cancer is one of leading cause of cancer death in women around
the world. One of the strategy to prevent breast cancer based on cytotoxic agent by
natural products are now being developed. Beluntas (Pluchea indica L.), Ciplukan
(Physalis angulata L.) and Kenikir (Cosmos caudatus Kunth.) are the potential
plants for being developed as cytotoxic agent. This study aimed to know cytotoxic
effect of beluntas, ciplukan and kenikir leaves ethanolic extract on T47D breast
cancer cell and to know classes of the compound that contain in extracts.
The extracts are tested its cytotoxic effect on T47D cancer cells using
MTT assay.MTT assay is based on the formation of formazan crystal because the
reduction of salt MTT by enzyme succinate dehydrogenase. Its occurs in
respiration pathway of mitochondrial living cell.
This research shows that ciplukan leaves ethanolic extract had cytotoxic
effect on T47D cancer cell with IC 50 176,6 µg/mL and beluntas and kenikir leaves
ethanolic extract had cytotoxic effect on T47D cancer cell with IC 50 > 200 µg/mL.
From this research can be concluded that beluntas, ciplukan and kenikir leaves
ethanolic extract had less potential effect on T47D cells. The result shows that
beluntas leaves ethanolic extract, ciplukan leaves ethanolic extract and kenikir
leaves ethanolic extract contain of tanin and flavonoid.
Keywords: Pluchea indica L., Physalis angulata L., Cosmos caudatus Kunth.,
cytotoxic , IC50, T47D
xii
(Pluchea indica L.), CIPLUKAN (Physalis angulata L.), DAN
KENIKIR (Cosmos caudatus Kunth.) TERHADAP SEL T47D
SKRIPSI
Oleh:
ANISA WIDYARATNA
K100130071
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA
SURAKARTA
2016
UJI SITOTOKSIK EKSTRAK ETANOL DAUN BELUNTAS
(Pluchea indica L.), CIPLUKAN (Physalis angulata L.), DAN
KENIKIR (Cosmos caudatus Kunth.) TERHADAP SEL T47D
SKRIPSI
Diajukan untuk memenuhi salah satu syarat mencapai derajat
Sarjana Farmasi (S. Farm) pada Fakultas Farmasi
Universitas Muhammadiyah Surakarta
di Surakarta
Oleh:
ANISA WIDYARATNA
K100130071
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA
SURAKARTA
2016
i
ii
KATA PENGANTAR
Assalamu’alaikum Warohmatullahi Wabarokatuh
Puji syukur kehadirat Allah SWT atas rahmat serta hidayah-Nya penulis
mampu menyelesaikan skripsi yang berjudul UJI SITOTOKSIK EKSTRAK
ETANOL DAUN BELUNTAS (Pluchea indica L.), CIPLUKAN (Physalis
angulata L.), DAN KENIKIR (Cosmos caudatus Kunth.) TERHADAP SEL
T47D
Penyusunan penelitian ini dimaksudkan untuk memenuhi salah satu syarat
dalam memperoleh gelar Sarjana Farmasi di Fakultas Farmasi Universitas
Muhammdiyah Surakarta. Dalam kesempatan ini, perkenankan penulis untuk
menyampaikan rasa terimakasih dan penghargaan kepada:
1. Bapak Azis Saifudin, Ph.D., Apt yang terhormat, selaku Dekan Fakultas
Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta, pembimbing akademik dan
dosen penguji I.
2. Ibu Maryati, Ph.D., Apt selaku pembimbing utama dan penguji III.
3. Bapak Dr. Haryoto, M.Sc., selaku dosen penguji II
4. Bapak/ibu dosen serta seluruh staf Fakultas Farmasi yang telah membantu
jalannya penelitian ini.
5. Ibu dan adikku tercinta serta seluruh keluarga besar yang senantiasa
membimbing, mendoakan dan memberikan semangat, dukungan yang tak
terhingga selama proses penulisan skripsi ini
6. Sahabat-sahabat tercinta, terima kasih untuk semuanya, atas semangat,
dukungan, doa dan kekompakannya.
7. Semua pihak yang telah membantu penulis dalam penyelesaian skripsi ini
yang tidak dapat penulis sebutkan satu persatu.
Wasalamu’alaikum Warohmatullahi Wabarokatuh
Surakarta, 29 November 2016
Penulis
iv
DAFTAR ISI
Halaman
PENGESAHAN SKRIPSI ...................................................................................... ii
DEKLARASI ......................................................................................................... iii
KATA PENGANTAR ........................................................................................... iv
DAFTAR ISI ........................................................................................................... v
DAFTAR GAMBAR ............................................................................................ vii
DAFTAR TABEL ................................................................................................ viii
DAFTAR LAMPIRAN .......................................................................................... ix
DAFTAR SINGKATAN ........................................................................................ x
ABSTRAK ............................................................................................................. xi
ABSTRACT ............................................................................................................ xii
BAB I PENDAHULUAN ....................................................................................... 1
A. Latar Belakang ............................................................................................... 1
B. Rumusan Masalah.......................................................................................... 2
C. Tujuan Penelitian ........................................................................................... 2
D. Tinjauan Pustaka............................................................................................ 3
1. Tanaman beluntas (Pluchea indica l.) ...................................................... 3
a. Klasifikasi .......................................................................................... 3
b. Kandungan Kimia .............................................................................. 3
c. Aktivitas Farmakologi ....................................................................... 3
2. Tanaman Ciplukan (Physalis angulata L.) ............................................... 4
a. Klasifikasi .......................................................................................... 4
b. Kandungan Kimia .............................................................................. 4
c. Aktivitas Farmakologi ....................................................................... 5
3. Tanaman Kenikir (Cosmos caudatus Kunth.) ........................................... 5
a. Klasifikasi .......................................................................................... 5
b. Kandungan Kimia .............................................................................. 5
c. Aktivitas Farmakologi ....................................................................... 5
4. Kanker ....................................................................................................... 6
E. Landasan Teori .............................................................................................. 7
F. Hipotesis ......................................................................................................... 8
BAB II METODE PENELITIAN ........................................................................... 9
A. Kategori Penelitian ........................................................................................ 9
B. Variabel Penelitian dan Definisi Operasionalnya .......................................... 9
C. Alat dan Bahan ............................................................................................ 10
1. Alat penelitian ......................................................................................... 10
2. Bahan penelitian...................................................................................... 10
v
D. Tempat Penelitian ........................................................................................ 11
E. Rencana Penelitian....................................................................................... 11
1.
2.
3.
4.
Penyiapan Bahan ..................................................................................... 11
Ekstraksi.................................................................................................. 11
Uji Kandungan Senyawa dengan KLT ................................................... 12
Uji Sitotoksik .......................................................................................... 12
a. Pemanenan Sel ................................................................................. 12
b. Pembuatan larutan uji ...................................................................... 13
c. Uji Sitotoksik ................................................................................... 13
F. Analisis Data ................................................................................................ 15
BAB III HASIL DAN PEMBAHASAN............................................................... 16
BAB IV KESIMPULAN DAN SARAN .............................................................. 24
A. Kesimpulan .................................................................................................. 24
B. Saran ............................................................................................................ 24
DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................... 26
vi
DAFTAR GAMBAR
Gambar 1. Struktur senyawa dari ekstrak beluntas. ................................................ 3
Gambar 2. Struktur senyawa dari ekstrak ciplukan ................................................ 4
Gambar 3. Struktur senyawa dari ekstrak kenikir ................................................... 5
Gambar 4. Uji Sitotoksik....................................................................................... 14
Gambar 5. Reaksi reduksi garam MTT membentuk formazan ............................. 17
Gambar 6. Morfologi sel T47D ............................................................................. 18
Gambar 7. Grafik hubungan konsentrasi versus %sel hidup ................................ 19
Gambar 8. Profil KLT ekstrak etanol daun beluntas............................................. 22
Gambar 9. Profil KLT ekstrak etanol daun ciplukan ............................................ 22
Gambar 10. Profil KLT ekstrak etanol daun kenikir............................................. 23
vii
DAFTAR TABEL
Tabel 1. Regimen kemoterapi kanker payudara dengan HER2 (-) ......................... 7
Tabel 2. Definisi Operasional ................................................................................. 9
Tabel 3. Hasil ekstraksi tanaman .......................................................................... 16
Tabel 4. Seri konsentrasi sampel uji dan % sel hidup setelah perlakuan .............. 18
Tabel 5. Persamaan regresi linier masing-masing sampel dan IC50 ...................... 20
Tabel 6. Deteksi golongan senyawa dengan berbagai pereaksi semprot .............. 23
viii
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1. Gambar Tanaman Beluntas, Ciplukan dan Kenikir .......................... 29
Lampiran 2. Perhitungan sel dan larutan seri konsentrasi ekstrak ........................ 30
Lampiran 3. Perhitungan hasil IC50 ....................................................................... 32
ix
DAFTAR SINGKATAN
DMSO : Dimethyl Sulfoxide
ELISA : Enzyme Linked Immuno Sorbant Assay
ER
: Estrogen Receptor
FBS
: Foetal Bovine Serum
IC50
: Inhibitory Concentration 50
KLT
: Kromatografi Lapis Tipis
LAF
: Laminar Air Flow
MK
: Media Kultur
MTT
:3-(4,5-Dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolium bromide
PBS
: Phospate Buffered Saline
PR
: Progesteron Receptor
Rf
: retardation factor
RPMI
: Roswell Park Memorial Institute
SDS
: Sodium Dodecyl Sulfate
UV
: Ultraviolet
x
ABSTRAK
Kanker payudara merupakan salah satu kanker penyebab kematian
terbesar pada wanita. Saat ini penemuan agen-agen sitotoksik dari bahan alam
terus dikembangkan. Beluntas (Pluchea indica L.), Ciplukan (Physalis angulata
L.) dan Kenikir (Cosmos caudatus Kunth.) merupakan tanaman-tanaman yang
berpotensi untuk dikembangkan sebagai agen sitotoksik. Penelitian ini bertujuan
untuk mengetahui efek sitotoksik ekstrak etanolik daun beluntas, ciplukan dan
kenikir terhadap sel kanker payudara T47D serta mengetahui golongan senyawa
yang terkandung didalamnya.
Ekstrak etanolik daun beluntas, ciplukan dan kenikir diuji efek
sitotoksik nya pada sel T47D dengan menggunakan metode MTT. Metode MTT
didasarkan pada pembentukan kristal formazan karena reduksi dari garam MTT
oleh enzim dehidrogenase suksinat. Proses nya terjadi di jalur respirasi
mitokondria sel hidup.
Dari hasil penelitian diperoleh IC50 pada ekstrak etanolik daun ciplukan
yaitu 176,6 µg/mL dan pada ekstrak etanolik daun beluntas dan kenikir masingmasing memiliki IC50 >200 µg/mL. Dari hasil penelitian ini dapat disimpulkan
ekstrak etanolik daun beluntas, ciplukan dan kenikir memiliki efek sitotoksik yang
lemah terhadap sel T47D. Hasil uji KLT menunjukkan bahwa ekstrak etanol daun
beluntas, ciplukan dan kenikir mengandung tanin dan flavonoid.
Kata kunci: Pluchea indica L., Physalis angulata L., Cosmos caudatus Kunth.,
sitotoksik, IC50, T47D
xi
ABSTRACT
Breast cancer is one of leading cause of cancer death in women around
the world. One of the strategy to prevent breast cancer based on cytotoxic agent by
natural products are now being developed. Beluntas (Pluchea indica L.), Ciplukan
(Physalis angulata L.) and Kenikir (Cosmos caudatus Kunth.) are the potential
plants for being developed as cytotoxic agent. This study aimed to know cytotoxic
effect of beluntas, ciplukan and kenikir leaves ethanolic extract on T47D breast
cancer cell and to know classes of the compound that contain in extracts.
The extracts are tested its cytotoxic effect on T47D cancer cells using
MTT assay.MTT assay is based on the formation of formazan crystal because the
reduction of salt MTT by enzyme succinate dehydrogenase. Its occurs in
respiration pathway of mitochondrial living cell.
This research shows that ciplukan leaves ethanolic extract had cytotoxic
effect on T47D cancer cell with IC 50 176,6 µg/mL and beluntas and kenikir leaves
ethanolic extract had cytotoxic effect on T47D cancer cell with IC 50 > 200 µg/mL.
From this research can be concluded that beluntas, ciplukan and kenikir leaves
ethanolic extract had less potential effect on T47D cells. The result shows that
beluntas leaves ethanolic extract, ciplukan leaves ethanolic extract and kenikir
leaves ethanolic extract contain of tanin and flavonoid.
Keywords: Pluchea indica L., Physalis angulata L., Cosmos caudatus Kunth.,
cytotoxic , IC50, T47D
xii