Ekstraksi Metanol dan Pengkisatan
Jurnal Riset Akuakult ur, 11 (3), 2016, 281-289
Tersedia online di: ht t p://ej ournal-balit bang.kkp.go.id/index.php/j ra
AKTIVITAS ANTIBAKTERI PENYEBAB VIBRIOSIS TERHADAP UDANG W INDU DARI
EKSTRAK HERBAL M ANGROVE Sonneratia alba DAN Bruguiera gymnorrhiza
#M uliani , Bunga Rante Tampangallo, dan M uharijadi Atmomarsono
Balai Penelitian dan Pen gemb angan Bud idaya Air Payau
ABSTRAKPenelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas antibakteri dari ekstrak herbal mangrove Sonnerat ia
alba dan Bruguiera gymnorrhiza terhadap penyebab penyakit vibriosis pada udang windu . Daun mangrove
dan masing-masing diambil dari Kabupaten Maros dan Pangkep. Sampel daun dikering-S. alba
B. gymnorrhiza
anginkan selama dua minggu, ditepungkan, diekstraksi dengan metanol 80%, dan dievaporasi. Rendemen
yang diperoleh dipartisi menggunakan dua jenis pelarut yaitu butanol dan dietileter. Uji bioassay dilakukan
baik se cara kualitatif maupun kuan titatif melalu i penentuan minimum inhibit ion concent r at ion (MIC) dan
minimum bact ericidal concent rat ion (MBC). Hasil penelitian menunjukkan bahwa aktivitas antibakteri ekstrak
mangrove dan lebih tinggi terhadap dibanding . Fraksi
S. alba
B. gymnorrhiza V. parahemolyt icus V. har veyi dietileter dan ekstrak metanol S. alba , serta fraksi butanol
B. gymnorrhiza memiliki antibakteri yang tergolong
kuat. Ekstrak metanol S. alba bersifat toksik terhadap benur udang windu pada konsentrasi di atas 2.000
m g/L.KATA KUNCI: antibakteri; herbal mangrove; S. alba ;
B. gymnorrhiza ; udang windu ABSTRACT: Activity of anti-bacteria cause of vibriosis on tiger shrimp from mangrove herbs Sonnerat ia alba and Bruguiera gymnorrhiza extract. By: M uliani, Bunga Rante Tampangallo, and M uharijadi At momarsono
The experiment was aimed t o examine t he activity of anti-bact erial of mangrove herbs Sonneratia alba and Bruguiera
gymnorrhiza ext ract on t iger shrimp. M angroves leaf of S. alba and B. gymnorrhiza were t aken from M aros andPangkep Regency. M angrove leaves dried aired approximat ely t wo weeks, made int o flour, ext ract ed using 80%
met anol, and evaporat ed. Yield were t hen part it ioned using t wo t ypes of solvent s are but anol and diet ilet er. Bioassay
t est bot h qualyt at ively and quantit at ively by det erminat ion of minimum inhibit ion concentrat ion (MIC) and minimum
bact ericidal concentrat ion (M BC). The result s showed t hat t he ant i-bact erial act ivit y mangrove ext ract of S. alba and
B. gymnorrhiza higher in V. parahemolyticus compared against V. harveyi. Dietileter fraction and t he met anol ext ract
of S. alba and but hanol fract ion of B. gymnorrhiza have st rongly as ant i-bact erial. The met hanol ext ract of S. alba
will be t oxic t o black t iger shrimp fry at concent rat ions above of 2,000 mg/L.KEYW ORDS: anti-bacterial; mngrove herbs; S. alba; B. gymnorrhiza; Penaeus monodon
PENDAHULUAN s a at in i p e n yak it in i m a sih m e ru p a k an k e n d a la
budidaya udang t erut ama di pant i perbenihan.Penyakit vibrio sis at au penyakit udang berpendar merupakan salah satu jenis penyakit udang yang banyak Be r b a g a i u p a ya t e la h d ila k u k a n u n t u k menimbulkan kematian baik di t ambak maupun di panti m e n an ggu langi se rangan p e nyakit pad a b u d id aya perbenihan. Vibrio sis disebabkan o leh beberapa jenis u dan g, n am u n h ingga saat in i ke m at ian u dan g d i b a k t e r i vib r io s e p e r t i Vi br i o h a r veyi , Vi br i o t am b ak dan d i p an t i p e rb e n ih an akib at se ran gan
parahaemolyt iucus Vibrio alginolyt icus Vibrio fischeri
, , . Di penyakit masih saja t erus t erjadi. Penggunaan bahan ant ara b eberapa jenis vibrio yang paling berbahaya alam t ermasu k mangro ve dan t anaman aso siasinya
V. har veyi et al
adalah (Kannapiran ., 2009) dan sampai unt uk penanggulangan penyakit di bidang perikanan mu lai dirint is me skip un m asih t e rbat as pada skala # la b o r a t o r iu m d i a n t a r a n ya s e b a g a i a n t ib a k t e r i
Ko r e sp o n d e nsi: Balai Pe n elit ian d an Pe n ge m b an g an Bu d id aya et al
(Velmurugan & Cit arasu, 2010; Rajasekar ., 2011;
Air Payau . Jl. Makmu r Dg . Sit akka No . 1 2 9 , Mar o s 9 0 51 2 , Rajeswari et al ., 2012). Su lawesi Se lat an , In d o n e sia. Te l. + (0 4 1 1 ) 3 7 1 5 4 4 mul i ani m@ yahoo.com
E-m ail: Co p yrigh t @ 20 16, Jurnal Riset Akuakultur, p -ISSN 1 907-675 4, e -ISSN 250 2-65 34
281 Co p yrig ht @ 20 16, Jurnal Riset Aku akultur, p -ISSN 1 907-675 4, e-ISSN 250 2-65 34 Aktivit as antibakt eri penyebab vibriosis terhadap udang windu ..... (M uliani)
Beberapa jenis mangro ve telah dilaporkan berperan sebagai ant ibakt eri pada udang sepert i
,
masing-masing adalah adalah 1 mg/L dan 0,1 mg/L. Berdasarkan hal t ersebut m aka d ilaku kan p e n e lit ian yan g b e rt u ju an u n t u k m e lih a t a k t ivit a s a n t ib a k t e r i
V. parahaemolyt icus
dan
V. har veyi
t erhadap
S. alba
., 2011; Millo n et al ., 2012). Muliani et al . (2015) melapo rkan bahwa n ilai MIC ekst rak me t an o l
et al
(Haq
V. mimicus
, dan
V. parahaemolyt icus
salmonella t yphi
d a n
,
Pseudomonas aeruginosa
,
dysent eriae
, dan bakt eri Gram negat if penyebab penyakit p ad a m an u sia t e rm as u k Escher ichia coli , Shi g ell a
Sarcina lut era
, dan
B. subt ilis
,
Bacillus cereus
,
St aphylo- coccus aureus
merupakan jenis mangro ve yan g juga t elah b anyak dikaji se b agai an t ibakt e ri. Ke du a jenis man gro ve in i d ilapo rkan men ghamb at p ert u mb u h an b akt e ri Gram po sit if yait u
V. h ar veyi
V. parahaemolyt icus
dan
Ekstraksi M etanol dan Pengkisat an
, sedangkan fraksi diet ilet e r dan but ano l dikisat kan menggunakan
freezedr yer
dilaru t kan d e n g a n p e la r u t d ie t ile t e r d a la m g e la s p ia la diho mo genkan dan dimasukkan ke co ro ng pemisah, die ndapkan h ingga t erb ent u k dua lapisan. Masing- m asin g lap isan d ike lu arkan d ari co ro n g p e m isah . Pelarut an ini diulang 3-4 kali hingga lapisan diet ilet er t e rlih at je rn ih . Se m e n t a ra, e n d ap an ya n g t e rsisa dilarutkan dengan but anol. Proses yang dilakukan sama dengan pemisahan dengan diet ilet er. Apabila lapisan b ut an o l t erlih at jernih, pe misahan dih en t ikan dan e nd ap an yan g t idak laru t dalam bu t ano l diko le ksi s e b a g a i fr ak s i air d a n d ik is at k a n m e n gg u n ak a n
B. gymnnor rhiza
dan
S. alba
Ekst rak
Fraksinasi Hasil Ekstraksi
Rot at or y evaporat or .
sebanyak 5 g, dit ambahkan larut an met anol 80% hingga terendam. Cairan hasil penyaringan d it am p u n g s e d a n g ka n a m p a s d ir e n d am k e m b ali dengan met ano l selama 24 jam dan disaring kembali. Untuk memaksimalkan ekstrak bahan-bahan aktif maka perendaman selama 24 jam dilakukan t iga kali at au t e rgan t u n g t in gkat ke ke ru h an re n d am an . Ap ab ila re nd am an sud ah t erlihat je rn ih m aka pe re nd am an dihent ikan. Larut an simplisia hasil ekst raksi disaring ulang menggunakan kertas filter dan dikisatkan dengan menggunakan
B. gymnnorrhiza
Te p u ng (sim p lisia) d au n m an gro ve S. alba d an
(ukuran 1 mm) dan diekst rak menggunakan pelarut met ano l 80%.
, dari herbal mangro ve
B. gymnnorrhiza kering, dit epung (simplisia), disaring
d a n
S. al ba
Dau n (d a u n m u d a d an d au n t u a )
Pem buat an Tepung (Sim plisia)
yang digunakan p ad a p e n e lit ian in i m asin g-m asin g d iko le ksi d ari Kabu pat en Maro s dan Kabupat en Pangkep Pro vinsi Sulawesi Selat an (Gambar 1). Pengambilan sampel daun dilakukan secara keseluruhan baik daun t ua maupun masih muda, selanju t nya dibersihkan dan dikering- anginkan dalam suhu ruang selama kurang lebih dua minggu.
B. gymnnorrhiza
dan
S. alba
Daun
BAHAN DAN M ETODE Pengambilan dan Pengeringan Daun M angrove
dan B. gymnorrhiza pada budidaya udang.
S. alba
B. gymnorrhiza
S. alba
R. mucronat a
., 2010; Babuselvam
Acant hus ilicifolius
. (20 12) melap o rkan b ah wa fraksi b u t an o l d ari d au n
et al
ikan. Selanjut nya Sap t iani
Flavobact erium spp penyebab penyakit bakt erial pada
efektif t erhadap bakteri
E. agallocha
. (2011); Lait h & Najiah (2014) melapo rkan bahwa
et al
Se la in it u , je n is m a n g r o ve in i d a p a t d ijad ikan se b agai alt e rn at if p e n go b at an p e n yakit vibriosis pada larva lo bst er (Baskaran & Mo han, 2012). Sement ara, Lait h
., 2 0 1 2 ) .
et al
et al
V. har veyi
(Manilal
V. parahaemolyticus
, d a n
V. h ar veyi
,
Ser r at ia s p . Aer om on a s h yd r op h i l a
,
Baci llus subt ilis
, V. vulnificus , V. alginolyt icus , V. anginllarum , dan V. lohi . Kedua jenis mangro ve t ersebut juga efekt if t erhadap p at o ge n ika n se p e rt i
Vibrio harveyi
efekt if t erhadap
Salichornia brachiata
dan
m e n gh a m b at p e r t u m b u h a n
le b ih b aik dibanding ekst rak et ilaset at , sedangkan Ramesh
Se la in je n is m an gro ve yan g t e lah d ise b u t kan ,
V. har veyi
V. har veyi .
, dan
V. parahaemolyt icus
mampu menghambat pert umbuhan bakt eri pat o gen p a d a ik a n d i a n t a r a n ya Aer om ona s h yd r op hyl a ,
Exocaria agllocha
. (2010) melapo rkan bahwa met o de ekst rak dengan klo ro fo rm dari daun
et al
Ravikumar
et al ., 2015).
berbeda secara signifikan dengan ekst rak et ano l dan met ano l (Sreenivasa
Escherichia coli
, dan
,
et al .
Aeromonas hydrophyla
t erhadap
A. ilicifolius
. Lapo ran lain m en yeb u t kan bah wa daya h amb at e t il ase t at d ari
Rhizophora mucronat a
, dan
A. ofcinalis
,
Avicenia marina
VSH5 dengan diamet er hambat an 16,4 mm dibanding dengan ekst rak daun
lebih po t ensial sebagai ant i V. har veyi
A. ilicifolius
(2 014) me lap o rkan b ahwa me t o d e ekst rak dengan acet o n dari daun
rot at or y evaporat or . Co p yrigh t @ 20 16, Jurnal Riset Akuakultur, p -ISSN 1 907-675 4, e -ISSN 250 2-65 34
283
. Uji MIC dilakukan dengan merujuk pada p ro sedur yang diperkenalkan o leh Kasanah & Isn an se t yo (2 0 1 3 ) d e n g an m e n gg u n akan m e t o d e
dilakukan dengan mengisi 40 µL media nut rien brot h
(NB) ke dalam set iap sumur plat mikro , kecuali pada sumur plat mikro unt uk ko nt ro l (100 mL). Selanjut nya set iap sumura n ditambahkan 40 µL ekstrak mangrove. Pada sumur plat mikro unt uk ko nt ro l media, ko nt ro l pelarut (DMSO), dan kont ro l ant ibio tik t idak dilakukan penambahan ekst rak mangro ve. Pada kont ro l masing- masing digunakan 40 mL DMSO 10% (ko nt ro l pelarut ) dan ant ibio t ik rifampisin 40 mL (ko nt ro l ant ibio t ik).
Selanjutnya, suspensi bakteri ditambahkan 20 µL ke
dalam semua sumur plat mikro kecuali pada ko nt ro l media dan diinkubasi pada suhu ruang selama 24 jam. Pe n g u jia n d iu la n g s e b an yak t ig a ka li. In d ik a t o r
pertumbuhan sel bakteri dengan menambahkan 10 µL
la ru t an 3 -(4 ,5 -d im e t h ylt h iaz o l-2 -yl)-2 ,5 -d ip h e n yl- t et razo lium bro mid (MTT) 5 g/L (Wang et al ., 2010).
Penentuan Nilai M inimum Inhibition Concentration (M IC) M inimum inhibit ion concent rat ion
(MIC) dari ekst rak m e t a n o l d a n h a s il fr a k s in a s i S. a l ba d a n
B. gymnnor r hi za
d iu jika n t e rh ad a p
V. har veyi
d an
V. parahaemolyt icus
mikrowell plat e dilut ion assay .
mikrow ell plat e assay
Ekst rak m an gro ve h asil faraksin asi yan g t e lah dilarut kan dalam pelarut DMSO 10% (5 g/mL) sebanyak
100 µL dimasukkan pada sumur plat mikro pertama
dan ket ujuh, sedangkan pada sumur plat mikro yang
lainnya diisi dengan 50 µL akuades. Selanjutnya sebanyak 50 µL ekstrak mangrove dari sumur plat
m ik r o p e r t a m a d a n s u m u r p la t m ik r o k e t u ju h dipindahkan ke sumur plat mikro berikut nya (sumur p la t m ik r o k e d u a d a n k e d e la p a n ), k e m u d ia n d ih o m o g e n k a n d e n g a n p e m ip e t a n b e r u la n g . Pengenceran dilakukan hingga ke sumur plat mikro
keenam dan dua belas. Media NB sebanyak 30 µL ke
dalam masing-masin g sumu r plat mikro , b aik p ada Gambar1. Daun mangro ve S. alba (A) dan
B. gymnnorrhiza (B) yang digunakan unt uk uji akt ivit as
ant ibakt eri dan ant iWSSV pada udang windu
Figure 1. M angrove leaf of S. alba (A) and B. gymnnorrhiza (B) used for ant i-bact erial and ant i-WSSV
act ivit y on black t iger shrimp(A)
S. alba
(B)
d en gan 96 su m uran (Kasan ah & Isn an se t yo , 2 0 1 3). Me t o d e p e n gujian
melalui m et o d e
Jurnal Riset Akuakult ur, 11 (3), 2016, 281-289 Uji Aktivitas Anti-Bakt erial Secara Kualitatif
V. har veyi
Uji bio assay unt uk melihat akt ivit as ant i-
V. har veyi
d a n a n t i- V. p a r a ha em ol yt i cu s d a r i S. a l ba d a n
B. g ym nnor r hi za
d ilak u ka n d e n g an t e k n ik “
Hi g h Throughput Screening
” (Langfield
et al
., 2004; Ganju
et al
., 2008; Karuppusamy & Rajasekaran, 2009). Hasil fr ak sin as i d a n e ks t r ak m e t a n o l d ar i ke d u a je n is m a n g r o ve t e r s e b u t d it im b a n g m a s in g -m a s in g sebanyak 5 mg dan 10 mg, kemudian dilarut kan dengan 1 mL DMSO (
dimet hylsulfoxide
) 10% dalam tabung mikro volume 1,5 mL (Kasanah & Isnansetyo , 2013). Suspensi iso lat
(ko de 275) dan
B. gymnorrhiza
V. parahaemolyt icus
(ko de iso lat -3) masing-masing dikult ur dalam media
nut rient brot h
(NB) 10 mL selama 24 jam pada suhu ruang sambil digo yang. Sebanyak 1 mL hasil kult ur t ersebut selanjut nya di subkult ur selama empat jam dalam 10 mL media NB (10 8 CFU/mL) dan diencerkan hingga dipero leh kepadat an suspensi bakt eri V. har veyi dan
V. parahaemolyt icus
sebesar 10 5 CFU/mL (Kadriah, 2012).
Su s p e n s i
V. h ar veyi
d a n
V. pa r ah aem ol yt i cu s
d igu n akan se b agai b io in d ikat o r p ad a u ji bioassay ekst rak mangro ve
S. alba
dan
B. gymnnorrhiza Co p yrig ht @ 20 16, Jurnal Riset Aku akultur, p -ISSN 1 907-675 4, e-ISSN 250 2-65 34 Aktivit as antibakt eri penyebab vibriosis terhadap udang windu ..... (M uliani)
ko nt ro l maupun pada sumur plat mikro yang berisi
B. gymnorrhiza
Posit ive Positif
S. alba Positif
V. ha rveyi V. paraha emolyticus V. harveyi V. pa rahaemolyticus V. harveyi V. parahaemolyticus V. harveyi V. para haemolyticus
V. parahaemolyt icus
Table 1. Result of qualit at ive bioassay t est of S. alba and B. gymnorrhiza on V. harveyi and V. parahaemolyticus
dan
V. har veyi
t erhadap
dan
Posit ive Positif
S. alba
secara kualit at if
bioassay
Tabel 1. Hasil uji
V. parahemolyt icus (Tabel 1).
menunjukkan bahwa kedua jenis mangro ve t ersebut po sit if mengandung ant i- V. har veyi dan ant i-
V. parahaemolyt icus
Posit ive Pos itif
Posit ive Posit if
V. har veyi
Posit ive Positif
Buthanol fract ion Fraksi d ietileter
M eta nol ext raction Fraksi butan ol
Anti-bacterial activities ) Ekstrak etanol
Kinds of mangrove Aktivitas an tibakteri (
W ater fract ion Jen is mangrove
Posit ive Fraksi air
Posit ive Positif
Posit ive Pos itif
Posit ive Pos itif
Posit ive Posit if
Posit ive Positif
Posit ive Pos itif
Posit ive Positif
B. gym norrhi za Positif
Posit ive
Posit ive Positif
Posit ive Positif
dan
t erhadap
ekstrak mangrove. Suspensi bakteri sebanyak 20 µL
Ekst rak met ano l
in vit ro
pada ko nsent rasi 1 mg/L, 10 mg/L, 100 mg/L, 1.000 mg/L, dan 10.000 mg/L dengan ulangan masing-masing t iga kali. Uji t ant ang ekst rak mangro ve secara
V. har veyi
diuji t ant ang dengan
B. gymnorrhiza
dan
S. alba
Uji Tantang Secara In Vitro M etanol S. alba dan B. gymnorrhiza Terhadap V. harveyi
V. har veyi
Penentuan nilai MBC dilakukan set elah pengamat an MIC, yait u d e n gan cara b iakan d a lam p lat m ikro dikult ur pada m edia TCBSA unt uk menge t ahui ada t id akn ya p e rt um b u h an b akt e ri. Biakan d iin ku b asi selama 24 jam pada suhu 28°C. Ko nsent rasi ekst rak mangrove t erendah diindikasikan dengan tidak adanya pert umbuhan ko lo ni bakt eri (nilai MBC). Dat a hasil uji nilai MBC dianalisis secara dekript if.
Penentuan Nilai M inimum Bactericidal Concentration (M BC)
B. gymnorrhiza .
dan
S. alba
ekst rak mangro ve dianalisis secara dekript if unt uk menget ahui nilai MIC dari
bioassay
dit ambahkan ke dalam campuran sumur plat mikro kecuali pada ko nt ro l media dan diinkubasi pada suhu ru ang selama 24 jam. Pen ambahan MTT dilakukan set et lah 24 jam masa inkubasi. Perubahan warna me- dia dari kuning menjadi ungu, menunjukkan adanya p ert u m bu han se l bakt e ri (e kst rak m an gro ve t idak memiliki akt ivit as ant ibakt eri), sedangkan jika warna media t et ap ber warna kuning (t idak berubah set elah penambahan MTT) t idak ada pert umbuhan sel bakt eri. Hal ini mengindikasikan adanya akt ivit as ant ibakt eri dari ekst rak mangro ve. Ko nsent rasi ekst rak mangro ve t erendah di mana t idak t erjadi perubahan warna (t idak ada pert umbuhan sel bakt eri) merupakan nilai MIC dari ekst rak t ersebut (Kasanah & Isnanset yo , 2013). Dat a hasil uji
dengan
pada 2.000 mg/L, 4.000 mg/L, 6.000 mg/L, dan 8.000 mg/L dilakukan t erhadap
B. gymnrrhiza
in vitro
dan
S. alba
Hasil u ji akt ivit as an t ib akt e ri se cara ku alit at if ekst rak met ano l (ekst rak kasar) dan hasil fraksinasi dari
HASIL DAN BAHASAN Hasil Uji Bioassay Secara Kualitatif
. Lar va udang yang digunakan adalalh PL-12 yang diambil dari unit perbenihan ko mersil di Kabupat en Barru, Sulawesi Selat an. Wadah kaca digunakan sebagai wadah uji, diisi air laut 2 L dengan salinit as 28 ppt d a n la r va u d a n g w in d u PL-1 2 se b a n ya k 3 0 e ko r. Mo rt alit as udang windu diamat i set elah 96 jam.
alba
, 1 mg/L, 10 mg/L, 100 mg/L, 1.000 mg/L, dan 10.000 m g/L de ngan ulan gan m asin g-masin g t iga kali. Uji t o ksisit as dengan ko nsent rasi 2.000 mg/L, 4.000 mg/ L, 6.000 mg/L, dan 8.000 mg/L dilakukan t erhadap S.
t erhadap lar va udang windu digunakan ko nsent rasi yang sama pada uji t antang secara
S. alba
B. gymnorrhiza
Uji t o k s is it a s e k s t r a k m e t a n o l S. a l ba d a n
B. gymnorrhiza Terhadap Larva Udang W indu
Uji Toksisitas Ekstrak M etanol S. alba dan
V. har veyi maka d ilakukan p en gam at an p o p ulasi V. har veyi menggunakan media TCBS agar.
d alam t ab u n g ad alah 1 0 6 CFU/m L. Ta b u n g ku lt u r diinkubasi selama 24 jam pada suhu ruang dengan digo yang. Unt uk m en ge t ah ui p en garuh p em be rian e kst rak h e rb al m an gro ve , t e rh ad ap p e rt u m b u h an
mL) sebanyak 100 µL sehingga konsentrasi V. har veyi
dengan t iga kali ulangan. Ke dalam set iap t abu ng yang berisi ekst rak mangro ve se suai konsent rasi yang telah dit entukan, dimasukkan biakan bakt eri yang berumur empat jam (10 8 CFU/
Dietileter fraction Co p yrigh t @ 20 16, Jurnal Riset Akuakultur, p -ISSN 1 907-675 4, e -ISSN 250 2-65 34
285
masing 24 ± 3,78 unt uk daun dan 24 ± 3,78 unt uk bat ang (Melki
. (2013) menyat akan bahwa bahan antibakteri memiliki daya hamb at yang kuat jika nilai MIC-nya
et al
m e m ilik i a k t ivit a s a n t ib a k t e r i ya n g le b ih k u a t dibanding ekst rak daun dengan daya hambat masing 10,33 ± 1,53 unt uk rant ing dan 6,00 ± 1,73 ekst rak air pada konsentrasi yang sama yaitu 1.000 µg/mL. Abed
S. alba
lebih t inggi dibanding ekst rak air. Lebih lanjut d ikat akan b ah wa e kst rak m et an o l ran t ing
har veyi
memiliki daya hambat t erhadap V.
S. caseolaris
., 2011). Avenido & Serrano (2012) melapo rkan bahwa ekst rak met ano l dari rant ing dan daun
et al
harveyi yang t ergo lo ng kuat dengan diamet er masing-
nya berkisar 600-1. 500 µg/mL, dan daya hambat rendah jika nilai MIC lebih besar dari 1.600
me m iliki akt ivit as an t i- V.
S. alba
dari kedua jenis mangro ve ini t ergo lo ng kuat pada semua fraksi yang diuji dengan nilai MIC ant ara 0,05-50 mg/L. Ekst rak met ano l dari d au n d an bat an g
V. parahaemolyt icus
t e r g o lo n g k u a t (MIC 5 0 m g /L d a n 5 0 0 m g /L), sedangkan fraksi air lemah (MIC 5.000 mg/L). Akt ivit as ant i
B. gymnorrhiza fraksi but ano l dan diet ilet er
mangro ve
V. har veyi
mg/L), sedangkan fraksi die t ile t er t ergo lo n g le mah dengan nilai MIC sebesar 5.000 mg/L). Ant i-
V. har veyi yang t ergo lo ng kuat (MIC 50 mg/L dan 500
memiliki ant i-
adalah 500 µg/mL, daya hambat sedang jika nilai MIC-
µg/mL.
masing-masing pada ko nsent rasi 150 µg/mL dan 175 µg/mL. Fraksi air dan fraksi but ano l
W at er fract ion Fraksi butanol But hanol fract ion
Jenis mangrove Kinds of mangrove
50 M IC dan M BC (mg/L) terhadap V. parahaemolyt icus M IC and M BC (mg/L) on V. parahaemolyt i cus
0.05
0.05 B. gymnorrhi za 5,000
50 500 500
0.05
0.05
S. alba 50 500 5,000
Fraksi dietileter Dietileter fraction
Fraksi butanol But hanol fraction
Fraksi air W ater fraction
Fraksi dietileter Dietilet er fract ion
parahaemolyt icus
Tabel 2. Result of M IC and M BC t est of S. alba and B. gymnorrhiza fract inat ions on V. harveyi and V. parahaemolyt icus
Fraksi airHasil Uji Tantang Secara In Vitro dengan V. harveyi
d an V.
V. har veyi
t e rh ad ap
B. gymnor r hiza
d an
S. alba
disajikan pada Tabel 3. Pada Tabel Tabel 2. Hasil u ji MIC d an MBC h asil fraksin asi
V. har veyi
u n t u k m e lih at ko nsen t rasi amban g bawah dan amb ang at as yang mematikan
in vit r o
Hasil u ji t ant an g se cara
S. alba
parahemolyt icus
Jurnal Riset Akuakult ur, 11 (3), 2016, 281-289 Hasil Uji M IC dan M BC
lebih t inggi dibanding nilai MIC d a n MBC t e r h a d a p
V. parahaemolyt icus sama pada set iap fraksi yait u 0,05
t ert inggi pada fraksi air dengan nilai 50 mg/L, kemudian fraksi but ano l dan selanjut nya fraksi diet ilet er dengan nilai MIC masing-masing 500 mg/L dan 5.000 mg/L. Nilai MIC mangro ve ini t erhadapi
S. alba
dari
V. har veyi
. Semakin rendah nilai MIC dan MBC suat u bahan akt if maka efekt ivit as bahan t ersebut semakin t inggi, demikian pula sebaliknya. Hasil uji MIC dan MBC pada Tabel 2 menunjukkan bahwa akt ivit as ant i-
V. har veyi
dibanding t erhadap
V. parahemolyt icus
. Ha l in i mengindikasikan bahwa kedua jenis mangro ve lebih efekt if terhadap
V. p a r a h em ol yt i cus
V. har veyi
S. alba
Pada Tabel 2 t erlihat pula bahwa nilai MIC dan MBC hasil fraksinasi dari kedu a jenis mangro ve t ersebut t erhadap
V. parahemolyt icus .
dan ant i-
V. har veyi
d ari ke d u a je n is m angro ve t ersebut t idak berbeda. Hal ini menunjukkan bahwa ke d ua je n is m an gro ve t erse b u t p o t e n sial se bagai penghasil ant i-
V. par ahemolyt icus
d an
V. harveyi
Nilai MIC dan MBC dari semua fraksi t erhadap
B. gymnorrhiza disajikan pada Tabel 2.
Hasil uji MIC dan MBC t erhadap hasil fraksinasi dari S. alba dan
mg/L. Hasil penelit ian sebelumnya menunjukkan bahwa nilai MIC ekst rak met ano l
t erhadap
dan V.
dan
V. angillar um
Sedangkan Dhayanit hi et al . (2013) melapo rkan bahwa ekst rak met ano l menunjukkan adanya akt ivit as an t ib akt eri t erh ad ap
Vi br i o sp . penyebab penyakit pada udang adalah 0,1 µg/L.
t e rh ad a p e n am je n is b akt e ri
caseol ar i s
. (2 0 1 3 ) melapo rkan bahwa nilai MIC ekst rak air mangro ve S.
et al
po t ensial sebagai penghasil ant i-vibrio sis pada b u d id aya u d an g win d u. Sh am su d d in
S. alba
adalah 0,1 mg/L. Hasil uji MIC dan MBC pada Tabel 2 menunjukkan bahwa fraksi air
V. parahaemolyt icus
B. gymnorrhiza t erhadap V. har veyi
V. har veyi
. (2015) melaporkan bahwa nilai MIC ekst rak met an o l
et al
t e rt in ggi pada fraksi bu t ano l de ngan n ilai MIC 5 0 mg/L disusul dengan fraksi diet ile t er d an fraksi air dengan nilai MIC masing-masing 500 mg/L dan 5.000 mg/L. Seme nt ara akt ivit as an t i V. par t ahaemolyt icus t ert inggi pada fraksi but ano l dengan nilai MIC 0,05 mg/L; kemudian fraksi diet ilet er dan selanjut nya fraksi air dengan nilai MIC masing-masing 50 mg/L dan 500 mg/L. Muliani
B. g ym n or r h i za
d a r i
V. har veyi
Ak t ivit a s a n t i
et al ., 2015).
adalah 0,1 mg/L (Muliani
V. par ahaemolyt icus
adalah 1 mg/L sedang t e rhadap
M IC dan M BC (mg/L) terhadap V. harveyi M IC and M BC (mg/L) on V. harveyi
Aktivit as antibakt eri penyebab vibriosis terhadap udang windu ..... (M uliani)
Tabel 3. Po pulasi V. har veyi (lo g CFU/mL) set elah 24 uji t ant ang secara in vit ro
S. alba
B. gymnorrhiza
dengan ekst rak met ano l dan
Table 3. V. harveyi populat ion (log CFU/mL) aft er 24 hours in vit ro challenge wit h
met hanol ext ract of S. alba and B. gymnorrhiza VibrioKonsent rasi sp. ( Vibrio sp. Concentr ation ) Konsent rasi (log CFU/m L) Concetr ations S. alba
B. gym nor rihza 1 mg /L 7 .6 9 7 .9 8 1 0 m g/L 7 .8 2 7 .6 7 1 0 0 mg /L 7 .8 6 7 .8 1 1 ,00 0 m g/L 6 .7 1 6 .6 7 1 0 ,0 0 0 mg /L
7 .9 8 Ko n tr o l (tan p a ekstr ak mang r o ve) 8 .9 6 8 .2 6
Control (without mangrove ext ract) Sum ber ( ): Muliani . (201 5)
Source et al S. alba
3 t erlih at b ah wa e kst rak m e t ano l d e n gan penelit ian sebelumnya menunjukkan bahwa po pulasi
Vibrio V. har veyi
ko nsentrasi 10.000 mg/L memat ikan bakt eri sp. bakt eri pada ko nsent rasi 1, 10, 10 0, dan
B. gymnorrhiza
hingga 100%, sedangkan memat ikan 1.000 mg/L, masing-masing adalah 6,69; 7,82; 7,86;
Vibrio
sp. sekit ar 3,4% dibanding dengan ko nt ro l. Oleh dan 6,71 lo g CFU/mL; sed angkan pada ko nsent rasi karena it u, uji in vit ro ke t ah ap b eriku t nya den gan 10.0 00 mg/L t idak ad a lagi p ert umbuh an V. har veyi
et al ko nsent rasi 2.000 mg/L, 4.000 mg/L, 6.000 mg/L, dan (Muliani ., 2015). S. alba 8.000 mg/L hanya menggunakan (Gambar 2).
Hasil Uji Toksisit as V. har veyi
Pada Gambar 2 t erlihat bahwa po pulasi Hasil u ji t o ksist as u nt u k m e lih at ko nse n t rasi t ert inggi set elah 24 jam kult ur t erdapat pada ko nt ro l ambang bawah dan ambang atas yang mematikan udang
(t an p a e kst rak m an gro ve ), ke m u d ian ko n se n t rasi windu disajikan pada Tabel 4. Pada Tabel 4 t erlihat 2.000 mg/L dan 4.000 mg/L. Pada Gambar 2 t erlihat
S. alba
bahwa baik ekst rak met ano l maupun ekst rak
V. har veyi
pula bahwa t idak ada pert umbuhan pada met ano l
B. gymnorrhiza dengan ko nsent rasi 10.000
k o n s e n t r a s i 6 .0 0 0 m g /L d a n 8 .0 0 0 m g /L. Ha s il
9
)
8 L
7.57
8
/m U
6.79 F
7
i C ey g
6
o rv
(l a h n
5 .
o
V
3.87
ti4
si la u la p u o
3
p p o i
P y
2
e rv
1
a h .
V 4,000 mg/L 6,000 mg/L 8,000 mg/L Ko ntro l ( Control ) Awal ( Init ial ) 2,000 mg/L
Konsent rasi ( Concent rat ion )
V. har veyi
Gambar 2. Po pulasi (lo g CFU/mL) set elah 24 jam uji t ant ang dengan ekst rak met ano l
S. alba
Figure2. V. harveyi populat ion (log CFU/mL) aft er 24 hours challenged wit h met hanol ext ract of
S. albaCo p yrig ht @ 20 16, Jurnal Riset Aku akultur, p -ISSN 1 907-675 4, e-ISSN 250 2-65 34
Jurnal Riset Akuakult ur, 11 (3), 2016, 281-289
Tabel 4. Hasil uji t o ksisit as ekst rak met ano l S. alba dan B. gymnorrhiza t erhadap lar va udang windu pada ko nsent rasi yang berbeda
Table 4. Toxicit y t est result of met hanol ext ract ed of S. alba and B. gymnorrhiza on t iger shrimp post
larvae at different concent rat ions Mort ali t as (%) larva udang windu set elah 96 j am Konsent rasiTiger shr imp post lar vae m or tality (%) after 9 6 hour s Concetrations S. alba
B. gymnor r ihza 1 mg /L 1 2 .2 2 13 .3 3 1 0 m g /L 1 2 .2 2 5 .5 5 1 0 0 m g/L 1 7 .7 8 18 .8 9 1 ,00 0 mg /L 3 1 .1 1 95 .5 6 1 0 ,0 0 0 m g/L 10 0 1 0 0 Ko n tr o l (tan p a ekstr ak man gr o ve)
1 7 .7 8 17 .7 8 Control (without mangrove extract)
Sum ber ( Source ): Muliani et al . (2 015) S. alba
Tabel 5. Hasil uji To ksisit as e kst rak m et ano l d aun t erhadap benur u dang windu
P. monodon
( ) set elah 96 jam
Table 5. Toxisit y t est of met hanol ext ract of S. alba leaf on t iger shrimp post lar vae (P. monodon)
aft er 96 hours Perl akuan Ti ngkat kem at ian l arva udang wi nduTreatments M or tality of tiger shr imp post lar vae (%) 0 mg /L (ko n tr o l/ cont rol ) 3 6 .6 7 2 ,00 0 m g/L 7 6 .6 7 4 ,00 0 m g/L 1 00 6 ,00 0 m g/L 1 00 8 ,00 0 m g/L 1 00
mg/L memat ikan udang 100%. Pada ko nsent rasi 1.000 2 01 6). Lapo ran lain m en ye bu t kan b ah wa p o p ulasi
S. alba Vibrio
mg/L ekst rak metano l memat ikan udang windu bakteri sp. dalam air pemeliharaan udang windu
B. gymnorrhiza
hingga 31,11% sedangkan 95,56%. Oleh set elah 96 jam perendaman dengan ekst rak met ano l 3 karena it u, uji t o ksisit as ke t ahap berikut nya dengan S. alba 1.000 mg/L adalah 1,78 x 10 CFU/mL (Nurbaya
et al ko nsent rasi 2.000 mg/L, 4.000 mg/L, 6.000 mg/L, dan ., 2016). S. alba 8.000 mg/L hanya menggunakan (Tabel 5).
KESIM PULAN
Pada Tabel 5 t erlihat bahwa pada ko nsent rasi 4.000 Akt ivit as an t ib akt e ri e kst rak h e rb al m an gro ve
S. alba
mg/L, 6.00 0 mg/L, dan 8.00 0 mg/L e kst rak
S. a l ba t e r t in g g i p a d a fr a k s i a ir s e d a n g k a n sudah bersifat t o ksik t erhadap benur udang windu.
B. gymnorrhiza
pada fraksi but ano l. Ant ibakt eri dari Ha s il p e n e lit ia n s e b e lu m n ya d ila p o r k a n b a h w a kedua jenis mangro ve t ersebut t ergo lo ng kuat dan mo rt alit as u dang windu p ada p enggu naan ekst rak memiliki akt ivit as ant i- V. parahemolyt icus lebih t inggi
S. alba
me t ano l pada ko n se n t rasi 1.0 00 m g/L dan
V. har veyi S. alba
d ib an din g an t i- . Ekst rak m et an o l 10.000 mg/L masing-masing sebesar 26,67% dan 100% b ersifat t o ksik t e rh ad ap be nu r ud an g win du p ad a
et al
(Muliani ., 20 15). Hal in i m enu nju kkan bah wa ko nsent rasi di at as 2.000 mg/L. ekst rak metano l dari daun mangro ve ini sudah bersifat t o ksik di at as ko nsent rasi 1.000 mg/mL. Uji t ant ang
UCAPAN TERIM A KASIH in vivo
secara dalam wadah pemeliharaan udang windu
Vibrio
menunjukkan bahwa po pulasi bakt eri sp. pada Te rim a kas ih ke p ad a re kan -re kan p e n e lit i d an
S. alba
pemberian ekst rak met ano l pada ko nsent rasi t eknisi Labo rat o rium Kesehat an Ikan dan Lingkungan 5
et al
1.000 mg/L adalah 5,68 x 10 CFU/mL (Muliani ., yang penuh dedikasi dan t anggung jawab membant u
Co p yrigh t @ 20 16, Jurnal Riset Akuakultur, p -ISSN 1 907-675 4, e -ISSN 250 2-65 34
287 Co p yrig ht @ 20 16, Jurnal Riset Aku akultur, p -ISSN 1 907-675 4, e-ISSN 250 2-65 34 Aktivit as antibakt eri penyebab vibriosis terhadap udang windu ..... (M uliani)
t erlaksananya penelit ian ini. Penelitian ini didanai o leh APBN DIPA BPPBAP Maro s Tahun 2014.
Jounal of M icrobiol- ogy and Ant imocrobial , 6(2), 29-36.
.
Rhi zophor a mucronat a
Ma n ila l, A. , Me r d e k io s , B., t d h a ya d h u lla , A. , Mut hukumar, C., & Melkie, M. (2010). An in vit ro an t a go n ist ic e ffica cy valid at io n o f
Jour n a l of Et hnophrmacology , 94, 279-281.
Peper om i a g al i oi des .
Langfield, R.D., Scarano , F.J., Heit zman, M.E., Ko no do , M., Hammo nd, G.B., & Net o , C.C. (2004). Use o f mo dified micro plat e bio assay met ho d t o invest i- gat e ant ibcat erial ac t ivit y in t he Peruvian medici- n a l p la n t
against select ed bact erial pat ho gens.
Melki, So edharma, D., Effendi, H., & Must o pa, A.Z.
Excoecaria agallocha
, p. 43- 47. Lait h, A.A., & Najiah, M. (2014). Ant imo cro bial act ivi- t ies o f blinding t ree,
UMTAS
Flavobacterium spp.
against
agallocha
S.H.M.A.W., Sifzizul, T.M., Nadirah, M., & Habsah, M. (2011). In vit ro antimicrobial activity o f Exoecaria
Asian Pac. J. Trop. Dis ., 5(1):28-32.
(20 11 ). Bio po t en si t u mb u han m an gro ve un t u k pencegahan penyakit vibrio sis pada udang windu.
M at eri workshop dan Pelat ihan Bi op r osp ek t i n g Ba h an Al a m Kel a ut a n I I .
Vibrio
against
Cardiospermum halicacubum
Ra ja s e k a r, T. , Us h a r a n i, J. , Sa k t h ive l, M., & Deivasigamani, B. (2011). Immuno st imulat o r y ef- fect s o f
Forum Inovasi Teknologi Akuakult ur (FITA) Surbaya, 25-26 April 2016, 9 hlm.
Nurbaya, Susianingsih, E., & Muliani. (2016). Pengaruh t eknik ekst raksi daun mangro ve t erhadap param- eter immun, to tal vibrio, dan sint asan udang windu pada skala labo rat o rium.
M a ka l a h t el a h diseminarkan pada Seminar Nasional Tahunan XIII UGM pada t anggal 13 Agust us 2016 . Jo gjakart a, 15 hlm.
, re sp o n s im u n , d an sint asan p ascalar va u d an g windu pada penggunaan ekst rak mangro ve dengan t e k n ik p e m b e r ia n b e r b e d a .
Muliani, Nurhidayah, & Nurbaya. (2016). To t al
M aspari Journal , 02, 39-47.
Penaeus mondon . J. Ris. Akuakult ur , 10(3), 405-414.
p en yeb ab p en yakit pad a u dan g win d u
Vibrio harveyi
Muliani, Nurhidayah, & Kurniayawan, K. (2015). Herbal mangrove sebagai sumber anti bakteri
IJPSR , 3(7), 2233-2237.
Sonnerat ia alba bark.
Millo n , M.A., Mu h it , M.A., Go sh wami, D., Masu d , M.M., & Begum, B. (2012). Ant io xidant , cyt o t o xic and ant imicro bial act ivit y o f
Lab o rat o rium Hidro bio lo gi. Jurusan Pe rikan an , Fak u lt as Pe r t an ia n , Un ive rs it as Gad jah Ma d a. Jo gjakart a, 22 hlm. La it h , A. A. , Na jia h , M. , Za in , S. M. , Effe n d y,
dalam penemuan senyawa bio akt if dari alam.
DAFTAR ACUAN
In- t ernat ional Journal of Applied M iocrobiology Science ,
Indian Journal of Geo-M arine Science , 41(3), 218-222.
L. against mult i drug resist en Vibrio spp. iso lat ed fro m marine wat e r lo bst e r ’s lar vae hat che ries.
Rhizophora mucronat a
ant ibact e- rial activit y o f leaf extract s o f
In vit ro