EFEK SITOTOKSIK DAN KINETIKA PROLIFERASI FRAKSI ETIL ASETAT EKSTRAK ETANOLIK TANAMAN EFEK SITOTOKSIK DAN KINETIKA PROLIFERASI FRAKSI ETIL ASETAT EKSTRAK ETANOLIK TANAMAN CEPLUKAN (Physalis angulata L.) TERHADAP SEL MYELOMA.
EFEK SITOTOKSIK DAN KINETIKA PROLIFERASI FRAKSI
ETIL ASETAT EKSTRAK ETANOLIK TANAMAN
CEPLUKAN (Physalis angulata L.) TERHADAP SEL
MYELOMA
SKRIPSI
Oleh:
DEWI NUR ROHIM
K 100 030 139
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA
SURAKARTA
2007
EFEK SITOTOKSIK DAN KINETIKA PROLIFERASI FRAKSI ETIL
ASETAT EKSTRAK ETANOLIK TANAMAN CEPLUKAN
(Physalis angulata L.)
TERHADAP SEL MYELOMA
SKRIPSI
Diajukan untuk memenuhi salah satu syarat mencapai Derajat Sarjana
Farmasi (S. Farm)
pada Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah
di Surakarta
Oleh :
DEWI NUR ROHIM
K 100 030 139
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA
SURAKARTA
2006
ii
PENGESAHAN SKRIPSI
Berjudul :
EFEK SITOTOKSIK DAN KINETIKA PROLIFERASI FRAKSI ETIL
ASETAT EKSTRAK ETANOLIK TANAMAN CEPLUKAN (Physalis
angulata L.)
TERHADAP SEL MYELOMA
Oleh :
DEWI NUR ROHIM
K 100 030 139
Dipertahankan di hadapan Panitia Penguji Skripsi Fakultas Farmasi
Universitas Muhammadiyah Surakarta
Pada tanggal : 17 Januari 2007
Mengetahui,
Fakultas Farmasi
Universitas Muhammadiyah Surakarta
Dekan,
Dra. Nurul Muthmainah, M.Si, Apt.
Pembimbing I
Pembimbing II
Maryati, M. Si, Apt
dr. EM. Sutrisna, M. Kes
Penguji :
1. DR. Pudjono, SU, Apt
( ....................................... )
2. Dedi Hanwar, M.Si, Apt
( ....................................... )
3. Maryati, M. Si, Apt
( ....................................... )
4. dr. EM Sutrisna, M. Kes
( ....................................... )
iii
MOTTO
“Sesungguhnya sesudah kesulitan itu ada kemudahan. Maka, apabila kamu sudah
selesai (dari suatu urusan), kerjakanlah dengan sungguh-sungguh (urusan) yang
lain”
(Al Insyirah : 6-7)
“Kebimbangan kita adalah pengkhianatan kita yang sering kali membuat kita
kehilangan peluang menang karena takut mencobanya”
(One)
“Nothing smart without slip, nothing wise without experience”
(Penulis)
Sebuah persembahan terindah buat
Ibu dan Bapak, sebagai tanda cinta bhaktiku
Khusna Akbari, saudaraku tercinta
Dan Mas Syaiful yang tercinta
iv
DEKLARASI
Saya menyatakan bahwa penelitian/karya ilmiah/skripsi ini adalah hasil
pekerjaan saya sendiri dan sepanjang pengetahuan saya tidak berisi materi yang
dipublikasikan atau ditulis orang lain atau
telah dipergunakan dan diterima
sebagai persyaratan penyelesaian studi pada bagian-bagian tertentu yang telah
dinyatakan dalam teks.
Apabila penelitian/ karya ilmiah/ skripsi ini merupakan jiplakan dari
penelitian/ karya ilmiah/ skripsi orang lain, maka saya siap menerima sanksi baik
secara akademik maupun hukum.
Surakarta, 3 Januari 2007
Peneliti
Dewi Nur Rohim
v
KATA PENGANTAR
Assalamu’alaikum Wr. Wb
Puji syukur ke hadirat ALLAH SWT yang telah melimpahkan rahmat
serta hidayahNya sehingga penulis dapat menyelesaikan penelitian dan menyusun
skripsi yang berjudul “EFEK SITOTOKSIK DAN KINETIKA PROLIFERASI
FRAKSI ETIL ASETAT EKSTRAK ETANOLIK TANAMAN CEPLUKAN
(Physalis angulata L.) TERHADAP SEL MYELOMA” yang disusun sebagai
salah satu syarat untuk mencapai derajat Sarjana Farmasi (S.Farm) pada Fakultas
Farmasi UMS.
Dalam penulisan skripsi ini tidak terlepas dari bantuan berbagai pihak
dan pada kesempatan ini penulis ingin menyampaikan ucapan terima kasih yang
tak terhingga kepada:
1. Ibu Dra. Nurul Muthmainah, M. Si, Apt selaku Dekan Fakultas Farmasi
UMS.
2. DIKTI Program Hibah Kompetensi A2 yang telah membiayai penelitian
3. Ibu Maryati, M. Si, Apt selaku dosen pembimbing utama yang telah
banyak memberikan bimbingan, pengarahan, waktu dan pengertiannya
dari awal hingga terwujudnya skripsi ini.
4. Bapak dr. EM Sutrisna, M. Kes selaku dosen pembimbing pendamping
yang telah banyak memberikan bimbingan, pengarahan, waktu dan
pengertiannya dari awal hingga terwujudnya skripsi ini.
5. Bapak DR. Pudjono, SU, Apt selaku penguji yang telah banyak
memberikan waktu dan arahan.
vi
6. Bapak Dedi Hanwar, M.Si, Apt selaku penguji yang telah banyak
memberikan waktu dan arahan.
7. Mbak Rumbiwati atas kerjasamanya selama penelitian.
8. Bapak Ibu dosen serta staf karyawan Fakultas Farmasi UMS, termasuk
laboran atas bantuan selama penelitian.
9. Bapak Suripto dan Ibu Marsiyati, kedua orang tuaku, terima kasih atas
segala do’a, kasih sayang, pengertian, dan dukungannya selama ini.
10. Syaifullah, Khusna Akbari, dan seluruh saudara kerabatku yang selalu
memberikan semangat dan inspirasi.
11. Rina, Itsna, dan Marsini, teman seperjuangan dalam penelitian skripsi,
terima kasih atas segala keceriaan, persaudaraan, tawa, dan tangis.
12. Ferry, Ratih, Anik, Zaenab, Laila, Eva, Dewi, Dian, Dyas, Nia, dan
sahabatku yang telah memberikan dukungan, bantuan, dan motivasi.
13. Seluruh teman-temanku Farmasi 2003 dan adik-adik angkatan.
Akhir kata penulis menyadari bahwa penyusunan skripsi ini masih
banyak kekurangan dan jauh dari sempurna. Penulis selalu terbuka untuk
menerima kritik dan saran. Semoga skripsi ini dapat memberikan manfaat bagi
penulis khususnya dan pembaca pada umumnya.
Wassalamu’alaikum. Wr.
3 Januari 2007
Penulis
vii
DAFTAR ISI
Halaman
HALAMAN SAMPUL .....................................................................................
ii
HALAMAN PENGESAHAN ...........................................................................
ii
HALAMAN PERSEMBAHAN DAN MOTTO ...............................................
iii
HALAMAN DEKLARASI ...............................................................................
iv
KATA PENGANTAR ......................................................................................
v
DAFTAR ISI ..................................................................................................... viii
DAFTAR TABEL .............................................................................................
xi
DAFTAR GAMBAR ........................................................................................
xii
DAFTAR SINGKATAN .................................................................................. xiii
INTISARI .......................................................................................................... xiv
BAB I. PENDAHULUAN ................................................................... .............
1
A. LATAR BELAKANG MASALAH .....................................................
1
B. PERUMUSAN MASALAH .................................................................
4
C. TUJUAN PENELITIAN.......................................................................
4
D. TINJAUAN PUSTAKA .......................................................................
5
1. Kanker ............................................................................................
5
2. Karsinogenesis, Mutagenesis, dan Teratogenesis ........................... 12
3. Siklus Sel Kanker ........................................................................... 14
4. Regulator Daur Sel ......................................................................... 16
viii
5. Sel Myeloma .................................................................................. 18
6. Pengobatan Kanker ................................................................... ...... 19
7. Tanaman Ceplukan (Physalis angulata L.) ...................................... 21
a. Klasifikasi Tanaman ...................................................................... 21
b. Nama Daerah ................................................................................ 22
c. Kandungan Kimia ......................................................................... 22
d. Manfaat Tanaman ................................................................. ....... 23
e. Tanaman Ceplukan Kaitannya dengan Kanker ........................... 23
8. Ekstraksi dan Fraksinasi ................................................................... 24
a. Metode Maserasi ......................................................................... 25
b. Metode Perkolasi ........................................................................ 26
c. Soxhletasi .................................................................................... 27
9. Uji Sitotoksik .................................................................................. 29
E. HIPOTESIS ........................................................................................... 31
BAB II. METODE PENELITIAN ................................................................... 33
A. Kategori Penelitian .......................................................................... 33
B. Variabel Penelitian ..........................................................................
33
C. Bahan dan Alat ................................................................................
33
D. Cara Penelitian ................................................................................
35
1. Determinasi Tanaman ................................................................
35
2. Pengumpulan Bahan, Pengeringan, dan Pembuatan Serbuk ...... 35
3. Ekstraksi dan Fraksinasi ............................................................. 36
4. Uji Sitotoksik .............................................................................. 36
ix
a. Preparasi Sel .......................................................................... 36
b. Panen Sel ................................................................................ 37
c. Pembuatan Larutan Uji ........................................................... 37
d. Uji Sitotoksisitas .................................................................... 37
e. Uji Pengamatan Kinetika Proliferasi ...................................... 38
5. Cara Analisis ............................................................................... 38
1. Uji Sitotoksik ......................................................................... 38
2. Uji Pengamatan Kinetika Proliferasi ...................................... 39
BAB III. HASIL DAN PEMBAHASAN ........................................................... 40
A. Determinasi Tanaman ...................................................................... 40
B. Ekstraksi dan Fraksinasi ................................................................. 40
C. Uji Sitotoksik dengan Metode MTT Assay ..................................... 41
D. Uji Pengamatan Kinetika Prolifarasi .............................................. 45
BAB IV. KESIMPULAN DAN SARAN .......................................................... 51
A. Kesimpulan ...................................................................................... 51
B. Saran ................................................................................................ 51
DAFTAR PUSTAKA
LAMPIRAN
x
DAFTAR TABEL
Halaman
Tabel 1.
Data Hasil Fraksinasi Bertingkat dari Ekstrak Etanol 96% ………
41
Tabel 2. Hasil Uji Sitotoksik Sel Myeloma Akibat Perlakuan Fraksi Etil
Asetat Ekstrak Etanol Tanaman Ceplukan (Physalis angulata L.)
terhadap Sel Myeloma ....................................................................
Tabel 3.
42
Hasil Uji Dobling Time Sel Myeloma Akibat Perlakuan Fraksi
etil Asetat Ekstrak Etanolik Tanaman Ceplukan (Physalis
angulata L.) dengan Metode MTT ................................................
47
Tabel 4. Persamaan Kurva Baku Absorbansi Versus Waktu Inkubasi
terhadap Sel Myeloma .....................................................................
xi
49
DAFTAR GAMBAR
Halaman
Gambar 1. Siklus Sel ......................................................................................... 15
Gambar 2. Cell Cycle Progression and Regulator-Regulatornya ..................... 18
Gambar 3. Reaksi Reduksi MTT Menjadi Formazan .......................................
31
Gambar 4. Skema Kerja Penelitian ..................................................................
35
Gambar 5. Grafik Hubungan Konsentrasi Versus Persen Sel Hidup Akibat
Perlakuan fraksi Etil Asetat Ekstrak Etanolik Tanaman Ceplukan
(Physalis angulata L.) terhadap Sel Myeloma .............................
42
Gambar 6. Grafik Hubungan Log Konsentrasi Versus Probit pada Uji
Sitotoksik Fraksi Etil Asetat Ekstrak Etanol Tanaman Ceplukan
(Physalis angulata L.) terhadap Sel Myeloma dengan Metode
MTT. ..............................................................................................
Gambar 7. Morfologi Sel Myeloma ..................................................................
43
45
Gambar 8. Kurva Doubling Time Hubungan Waktu Inkubasi dengan Absorbansi
Akibat Perlakuan Fraksi Etil Asetat Ekstrak Etanolik P. angulata L.
terhadap Sel Myeloma...................................................... .................
xii
47
DAFTAR SINGKATAN
IC
= Inhibitory Concentration
DNA
= Deoxyribonucleic Acid
RNA
= Ribonucleic Acid
RSV
= Rous Sarcoma Virus
pRB
= Protein Retinoblastoma
Cyn
= Cyclin
Cdk
= Cyclin Dependent Kinase
MTT
= 3-(4,5-dimethylthiazol 1,2 il)-2,5-diphenyl tetrazoleum bromide
SDS
= Sodium Dodecyl Sulphat
DMSO = Dimethyl Sulfoxyde
CCS
= Cell Cycle Spesific
CCNS = Cell Cycle Nonspesific
FBS
= Fetal Bovine Serum
PBS
= Phosphat Buffer Saline
HCL
= Asam Klorida
MAPK = Mitogen Activated Protein Kinase
PKC
= Protein Kinase C
RPMI = Rosewell Park Memorial Institute
xiii
INTISARI
Kanker termasuk penyakit yang sangat ditakuti karena sulit disembuhkan,
bahkan tidak jarang menyebabkan kematian. Dari 30.000 spesies tumbuhan yang
ada, sekitar 1250 spesies dapat dimanfaatkan sebagai obat, salah satunya adalah
tanaman ceplukan (Physalis angulata L.). Tanaman ini diduga mempunyai
aktivitas kuat melawan beberapa tipe sel kanker pada manusia dan hewan. Dan
setelah diuji praklinis, ternyata tanaman ini mempunyai efek antitumor. Adapun
tujuan dari penelitian ini yaitu untuk mengetahui efek sitotoksik dan kinetika
proliferasi fraksi etil asetat ekstrak etanolik tanaman ceplukan terhadap sel
myeloma.
Serbuk tanaman ceplukan disari dengan alat Soxhlet dan difraksinasi
dengan pelarut petroleum eter, kloroform, dan etil asetat. Pada uji sitotoksik,
sampel diujikan pada sel myeloma dengan kepadatan sel 2x104. Setelah
diinkubasi selama 24 jam dan diberi pereaksi MTT, dibaca absorbansinya dengan
ELISA reader pada panjang gelombang 550 nm. Dan digunakan analisis probit
untuk mengetahui nilai IC50. Sedangkan pada uji kinetika proliferasi, digunakan
sel myeloma dengan kepadatan sel 104 dengan dua konsentrasi di bawah nilai
IC50, kemudian diinkubasi selama 24, 48, dan 72 jam. Setelah diberi pereaksi
MTT, kemudian dibaca pada jam-jam tersebut dengan ELISA reader untuk
mengetahui waktu kinetika proliferasi dari sel myeloma. Kemudian dibuat grafik
hubungan waktu inkubasi versus absorbansi untuk mengetahui nilai slopenya.
Hasil penelitian menunjukkan bahwa fraksi etil asetat ekstrak etanolik
tanaman ceplukan mempunyai efek sitotoksik dengan nilai IC50 sebesar 273,22
µg/ml. Uji kinetika proliferasi, membuktikan bahwa fraksi etil asetat ekstrak
etanolik tanaman ceplukan dapat memperpanjang waktu kinetika proliferasi sel
myeloma.
Kata kunci: Physalis angulata L., Sitotoksik, Kinetika proliferasi.
xiv
ETIL ASETAT EKSTRAK ETANOLIK TANAMAN
CEPLUKAN (Physalis angulata L.) TERHADAP SEL
MYELOMA
SKRIPSI
Oleh:
DEWI NUR ROHIM
K 100 030 139
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA
SURAKARTA
2007
EFEK SITOTOKSIK DAN KINETIKA PROLIFERASI FRAKSI ETIL
ASETAT EKSTRAK ETANOLIK TANAMAN CEPLUKAN
(Physalis angulata L.)
TERHADAP SEL MYELOMA
SKRIPSI
Diajukan untuk memenuhi salah satu syarat mencapai Derajat Sarjana
Farmasi (S. Farm)
pada Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah
di Surakarta
Oleh :
DEWI NUR ROHIM
K 100 030 139
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA
SURAKARTA
2006
ii
PENGESAHAN SKRIPSI
Berjudul :
EFEK SITOTOKSIK DAN KINETIKA PROLIFERASI FRAKSI ETIL
ASETAT EKSTRAK ETANOLIK TANAMAN CEPLUKAN (Physalis
angulata L.)
TERHADAP SEL MYELOMA
Oleh :
DEWI NUR ROHIM
K 100 030 139
Dipertahankan di hadapan Panitia Penguji Skripsi Fakultas Farmasi
Universitas Muhammadiyah Surakarta
Pada tanggal : 17 Januari 2007
Mengetahui,
Fakultas Farmasi
Universitas Muhammadiyah Surakarta
Dekan,
Dra. Nurul Muthmainah, M.Si, Apt.
Pembimbing I
Pembimbing II
Maryati, M. Si, Apt
dr. EM. Sutrisna, M. Kes
Penguji :
1. DR. Pudjono, SU, Apt
( ....................................... )
2. Dedi Hanwar, M.Si, Apt
( ....................................... )
3. Maryati, M. Si, Apt
( ....................................... )
4. dr. EM Sutrisna, M. Kes
( ....................................... )
iii
MOTTO
“Sesungguhnya sesudah kesulitan itu ada kemudahan. Maka, apabila kamu sudah
selesai (dari suatu urusan), kerjakanlah dengan sungguh-sungguh (urusan) yang
lain”
(Al Insyirah : 6-7)
“Kebimbangan kita adalah pengkhianatan kita yang sering kali membuat kita
kehilangan peluang menang karena takut mencobanya”
(One)
“Nothing smart without slip, nothing wise without experience”
(Penulis)
Sebuah persembahan terindah buat
Ibu dan Bapak, sebagai tanda cinta bhaktiku
Khusna Akbari, saudaraku tercinta
Dan Mas Syaiful yang tercinta
iv
DEKLARASI
Saya menyatakan bahwa penelitian/karya ilmiah/skripsi ini adalah hasil
pekerjaan saya sendiri dan sepanjang pengetahuan saya tidak berisi materi yang
dipublikasikan atau ditulis orang lain atau
telah dipergunakan dan diterima
sebagai persyaratan penyelesaian studi pada bagian-bagian tertentu yang telah
dinyatakan dalam teks.
Apabila penelitian/ karya ilmiah/ skripsi ini merupakan jiplakan dari
penelitian/ karya ilmiah/ skripsi orang lain, maka saya siap menerima sanksi baik
secara akademik maupun hukum.
Surakarta, 3 Januari 2007
Peneliti
Dewi Nur Rohim
v
KATA PENGANTAR
Assalamu’alaikum Wr. Wb
Puji syukur ke hadirat ALLAH SWT yang telah melimpahkan rahmat
serta hidayahNya sehingga penulis dapat menyelesaikan penelitian dan menyusun
skripsi yang berjudul “EFEK SITOTOKSIK DAN KINETIKA PROLIFERASI
FRAKSI ETIL ASETAT EKSTRAK ETANOLIK TANAMAN CEPLUKAN
(Physalis angulata L.) TERHADAP SEL MYELOMA” yang disusun sebagai
salah satu syarat untuk mencapai derajat Sarjana Farmasi (S.Farm) pada Fakultas
Farmasi UMS.
Dalam penulisan skripsi ini tidak terlepas dari bantuan berbagai pihak
dan pada kesempatan ini penulis ingin menyampaikan ucapan terima kasih yang
tak terhingga kepada:
1. Ibu Dra. Nurul Muthmainah, M. Si, Apt selaku Dekan Fakultas Farmasi
UMS.
2. DIKTI Program Hibah Kompetensi A2 yang telah membiayai penelitian
3. Ibu Maryati, M. Si, Apt selaku dosen pembimbing utama yang telah
banyak memberikan bimbingan, pengarahan, waktu dan pengertiannya
dari awal hingga terwujudnya skripsi ini.
4. Bapak dr. EM Sutrisna, M. Kes selaku dosen pembimbing pendamping
yang telah banyak memberikan bimbingan, pengarahan, waktu dan
pengertiannya dari awal hingga terwujudnya skripsi ini.
5. Bapak DR. Pudjono, SU, Apt selaku penguji yang telah banyak
memberikan waktu dan arahan.
vi
6. Bapak Dedi Hanwar, M.Si, Apt selaku penguji yang telah banyak
memberikan waktu dan arahan.
7. Mbak Rumbiwati atas kerjasamanya selama penelitian.
8. Bapak Ibu dosen serta staf karyawan Fakultas Farmasi UMS, termasuk
laboran atas bantuan selama penelitian.
9. Bapak Suripto dan Ibu Marsiyati, kedua orang tuaku, terima kasih atas
segala do’a, kasih sayang, pengertian, dan dukungannya selama ini.
10. Syaifullah, Khusna Akbari, dan seluruh saudara kerabatku yang selalu
memberikan semangat dan inspirasi.
11. Rina, Itsna, dan Marsini, teman seperjuangan dalam penelitian skripsi,
terima kasih atas segala keceriaan, persaudaraan, tawa, dan tangis.
12. Ferry, Ratih, Anik, Zaenab, Laila, Eva, Dewi, Dian, Dyas, Nia, dan
sahabatku yang telah memberikan dukungan, bantuan, dan motivasi.
13. Seluruh teman-temanku Farmasi 2003 dan adik-adik angkatan.
Akhir kata penulis menyadari bahwa penyusunan skripsi ini masih
banyak kekurangan dan jauh dari sempurna. Penulis selalu terbuka untuk
menerima kritik dan saran. Semoga skripsi ini dapat memberikan manfaat bagi
penulis khususnya dan pembaca pada umumnya.
Wassalamu’alaikum. Wr.
3 Januari 2007
Penulis
vii
DAFTAR ISI
Halaman
HALAMAN SAMPUL .....................................................................................
ii
HALAMAN PENGESAHAN ...........................................................................
ii
HALAMAN PERSEMBAHAN DAN MOTTO ...............................................
iii
HALAMAN DEKLARASI ...............................................................................
iv
KATA PENGANTAR ......................................................................................
v
DAFTAR ISI ..................................................................................................... viii
DAFTAR TABEL .............................................................................................
xi
DAFTAR GAMBAR ........................................................................................
xii
DAFTAR SINGKATAN .................................................................................. xiii
INTISARI .......................................................................................................... xiv
BAB I. PENDAHULUAN ................................................................... .............
1
A. LATAR BELAKANG MASALAH .....................................................
1
B. PERUMUSAN MASALAH .................................................................
4
C. TUJUAN PENELITIAN.......................................................................
4
D. TINJAUAN PUSTAKA .......................................................................
5
1. Kanker ............................................................................................
5
2. Karsinogenesis, Mutagenesis, dan Teratogenesis ........................... 12
3. Siklus Sel Kanker ........................................................................... 14
4. Regulator Daur Sel ......................................................................... 16
viii
5. Sel Myeloma .................................................................................. 18
6. Pengobatan Kanker ................................................................... ...... 19
7. Tanaman Ceplukan (Physalis angulata L.) ...................................... 21
a. Klasifikasi Tanaman ...................................................................... 21
b. Nama Daerah ................................................................................ 22
c. Kandungan Kimia ......................................................................... 22
d. Manfaat Tanaman ................................................................. ....... 23
e. Tanaman Ceplukan Kaitannya dengan Kanker ........................... 23
8. Ekstraksi dan Fraksinasi ................................................................... 24
a. Metode Maserasi ......................................................................... 25
b. Metode Perkolasi ........................................................................ 26
c. Soxhletasi .................................................................................... 27
9. Uji Sitotoksik .................................................................................. 29
E. HIPOTESIS ........................................................................................... 31
BAB II. METODE PENELITIAN ................................................................... 33
A. Kategori Penelitian .......................................................................... 33
B. Variabel Penelitian ..........................................................................
33
C. Bahan dan Alat ................................................................................
33
D. Cara Penelitian ................................................................................
35
1. Determinasi Tanaman ................................................................
35
2. Pengumpulan Bahan, Pengeringan, dan Pembuatan Serbuk ...... 35
3. Ekstraksi dan Fraksinasi ............................................................. 36
4. Uji Sitotoksik .............................................................................. 36
ix
a. Preparasi Sel .......................................................................... 36
b. Panen Sel ................................................................................ 37
c. Pembuatan Larutan Uji ........................................................... 37
d. Uji Sitotoksisitas .................................................................... 37
e. Uji Pengamatan Kinetika Proliferasi ...................................... 38
5. Cara Analisis ............................................................................... 38
1. Uji Sitotoksik ......................................................................... 38
2. Uji Pengamatan Kinetika Proliferasi ...................................... 39
BAB III. HASIL DAN PEMBAHASAN ........................................................... 40
A. Determinasi Tanaman ...................................................................... 40
B. Ekstraksi dan Fraksinasi ................................................................. 40
C. Uji Sitotoksik dengan Metode MTT Assay ..................................... 41
D. Uji Pengamatan Kinetika Prolifarasi .............................................. 45
BAB IV. KESIMPULAN DAN SARAN .......................................................... 51
A. Kesimpulan ...................................................................................... 51
B. Saran ................................................................................................ 51
DAFTAR PUSTAKA
LAMPIRAN
x
DAFTAR TABEL
Halaman
Tabel 1.
Data Hasil Fraksinasi Bertingkat dari Ekstrak Etanol 96% ………
41
Tabel 2. Hasil Uji Sitotoksik Sel Myeloma Akibat Perlakuan Fraksi Etil
Asetat Ekstrak Etanol Tanaman Ceplukan (Physalis angulata L.)
terhadap Sel Myeloma ....................................................................
Tabel 3.
42
Hasil Uji Dobling Time Sel Myeloma Akibat Perlakuan Fraksi
etil Asetat Ekstrak Etanolik Tanaman Ceplukan (Physalis
angulata L.) dengan Metode MTT ................................................
47
Tabel 4. Persamaan Kurva Baku Absorbansi Versus Waktu Inkubasi
terhadap Sel Myeloma .....................................................................
xi
49
DAFTAR GAMBAR
Halaman
Gambar 1. Siklus Sel ......................................................................................... 15
Gambar 2. Cell Cycle Progression and Regulator-Regulatornya ..................... 18
Gambar 3. Reaksi Reduksi MTT Menjadi Formazan .......................................
31
Gambar 4. Skema Kerja Penelitian ..................................................................
35
Gambar 5. Grafik Hubungan Konsentrasi Versus Persen Sel Hidup Akibat
Perlakuan fraksi Etil Asetat Ekstrak Etanolik Tanaman Ceplukan
(Physalis angulata L.) terhadap Sel Myeloma .............................
42
Gambar 6. Grafik Hubungan Log Konsentrasi Versus Probit pada Uji
Sitotoksik Fraksi Etil Asetat Ekstrak Etanol Tanaman Ceplukan
(Physalis angulata L.) terhadap Sel Myeloma dengan Metode
MTT. ..............................................................................................
Gambar 7. Morfologi Sel Myeloma ..................................................................
43
45
Gambar 8. Kurva Doubling Time Hubungan Waktu Inkubasi dengan Absorbansi
Akibat Perlakuan Fraksi Etil Asetat Ekstrak Etanolik P. angulata L.
terhadap Sel Myeloma...................................................... .................
xii
47
DAFTAR SINGKATAN
IC
= Inhibitory Concentration
DNA
= Deoxyribonucleic Acid
RNA
= Ribonucleic Acid
RSV
= Rous Sarcoma Virus
pRB
= Protein Retinoblastoma
Cyn
= Cyclin
Cdk
= Cyclin Dependent Kinase
MTT
= 3-(4,5-dimethylthiazol 1,2 il)-2,5-diphenyl tetrazoleum bromide
SDS
= Sodium Dodecyl Sulphat
DMSO = Dimethyl Sulfoxyde
CCS
= Cell Cycle Spesific
CCNS = Cell Cycle Nonspesific
FBS
= Fetal Bovine Serum
PBS
= Phosphat Buffer Saline
HCL
= Asam Klorida
MAPK = Mitogen Activated Protein Kinase
PKC
= Protein Kinase C
RPMI = Rosewell Park Memorial Institute
xiii
INTISARI
Kanker termasuk penyakit yang sangat ditakuti karena sulit disembuhkan,
bahkan tidak jarang menyebabkan kematian. Dari 30.000 spesies tumbuhan yang
ada, sekitar 1250 spesies dapat dimanfaatkan sebagai obat, salah satunya adalah
tanaman ceplukan (Physalis angulata L.). Tanaman ini diduga mempunyai
aktivitas kuat melawan beberapa tipe sel kanker pada manusia dan hewan. Dan
setelah diuji praklinis, ternyata tanaman ini mempunyai efek antitumor. Adapun
tujuan dari penelitian ini yaitu untuk mengetahui efek sitotoksik dan kinetika
proliferasi fraksi etil asetat ekstrak etanolik tanaman ceplukan terhadap sel
myeloma.
Serbuk tanaman ceplukan disari dengan alat Soxhlet dan difraksinasi
dengan pelarut petroleum eter, kloroform, dan etil asetat. Pada uji sitotoksik,
sampel diujikan pada sel myeloma dengan kepadatan sel 2x104. Setelah
diinkubasi selama 24 jam dan diberi pereaksi MTT, dibaca absorbansinya dengan
ELISA reader pada panjang gelombang 550 nm. Dan digunakan analisis probit
untuk mengetahui nilai IC50. Sedangkan pada uji kinetika proliferasi, digunakan
sel myeloma dengan kepadatan sel 104 dengan dua konsentrasi di bawah nilai
IC50, kemudian diinkubasi selama 24, 48, dan 72 jam. Setelah diberi pereaksi
MTT, kemudian dibaca pada jam-jam tersebut dengan ELISA reader untuk
mengetahui waktu kinetika proliferasi dari sel myeloma. Kemudian dibuat grafik
hubungan waktu inkubasi versus absorbansi untuk mengetahui nilai slopenya.
Hasil penelitian menunjukkan bahwa fraksi etil asetat ekstrak etanolik
tanaman ceplukan mempunyai efek sitotoksik dengan nilai IC50 sebesar 273,22
µg/ml. Uji kinetika proliferasi, membuktikan bahwa fraksi etil asetat ekstrak
etanolik tanaman ceplukan dapat memperpanjang waktu kinetika proliferasi sel
myeloma.
Kata kunci: Physalis angulata L., Sitotoksik, Kinetika proliferasi.
xiv