ISOLASI DAN KARAKTERISASI SENYAWA DARI FRAKSISEMIPOLAR EKSTRAK METANOL KULIT BATANG Isolasi Dan Karakterisasi Senyawa Dari Fraksi Semipolar Ekstrak Metanol Kulit Batang Kluwih (Artocarpus altilis Park) Serta Efek Sitotoksiknya terhadap Sel HeLa.
ISOLASI DAN KARAKTERISASI SENYAWA DARI FRAKSI
SEMIPOLAR EKSTRAK METANOL KULIT BATANG
KLUWIH (Artocarpus altilis Park) SERTA EFEK
SITOTOKSIKNYA TERHADAP SEL HeLa
SKRIPSI
Oleh :
KURNIA ANTIK APSARI
K 100 030 065
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA
SURAKARTA
2007
i
ISOLASI DAN KARAKTERISASI SENYAWA DARI FRAKSI
SEMIPOLAR EKSTRAK METANOL KULIT BATANG
KLUWIH (Artocarpus altilis Park) SERTA EFEK
SITOTOKSIKNYA TERHADAP SEL HeLa
SKRIPSI
Diajukan untuk memenuhi salah satu syarat mencapai
derajat Sarjana Farmasi (S.Farm) pada Fakultas Farmasi
Universitas Muhammadiyah Surakarta
di Surakarta
Oleh:
KURNIA ANTIK APSARI
K 100 030 065
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA
SURAKARTA
2007
ii
PENGESAHAAN SKRIPSI
Berjudul :
ISOLASI DAN KARAKTERISASI SENYAWA DARI FRAKSI
SEMIPOLAR EKSTRAK METANOL KULIT BATANG
KLUWIH (Artocarpus altilis Park) SERTA EFEK
SITOTOKSIKNYA TERHADAP SEL HeLa
Oleh :
KURNIA ANTIK APSARI
K 100 030 065
Dipertahankan dihadapan Panitia Penguji Skripsi
Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta
Pada tanggal : 2 Juli 2007
Mengetahui,
Fakultas Farmasi
Universitas Muhammadiyah Surakarta
Dekan,
Dra. Nurul Mutmainah, M.Si., Apt
Pembimbing Utama
Pembimbing Pendamping
( Dr. Muhtadi, M.Si)
(Peni Indrayudha, S.F., Apt)
Penguji :
1. Muhammad Da’i, M.Si., Apt.
2. Indah Purwantini, M.Si., Apt
3. Dr. Muhtadi, M.Si
4. Peni Indrayudha, S.F., Apt
iii
M O TTO DA N PERSEM BA H A N
ϖ “Jadikanlah engkau sum ber tam bang kebaikan dan m aafkan
segala kesalahan yang m enyakitkan, sesungguhnya engkau dapat
m elihat apa yang engkau lakukan dan dapat m endengar apa yang
engkau ucapkan” (abu Ishaq as Sabi’i)
ϖ “Yaitu orang-orang yang berim an dan hati m ereka m enjadi
tentram dengan m engingat A llah. Ingatlah, hanya dengan
m engingat A llah-lah hatim enjaditentram ”(Q S.A r Ra’d :28)
ϖ “H idup adalah perjuangan tanpa henti-henti tak ada yang jatuh
dari langit dengan cum a-Cum a, sem ua usaha dan doa serta
kem enangan hari ini bukanlah kem enangan esok hari, kegagalan
hariinibukanlah kegagalan esok hari”(KhalilGibran )
Ya Alloh,
Karya kecilku ini kupersembahkan kepada-Mu
Semoga Engkau terima sebagai amal sholih
Hingga setiap kemudahan menambah kesyukuran
Dan setiap kesukaran menjadi penghapus dosa
Kepada Ibuku yang sudah jauh dariku
Terima kasih atas do’a, cinta serta
curahan kasih sayangnya
Untuk Bapak dan mama
T erima kasih telah memberikan semua
yang terbaik untukku
memberikan do’a disetiap hembusan nafasku
dan telah membanting tulang untuk menghidupi dan
mendidik putra-putrinya
Buatadikku Astidan kakakku tersayang,
Terim akasih atas dukungan,do’a,m otivasinya.
Buat teman-teman dan sahabat-sahabatku
Dimanapun engkau berada yang telah memberikan
Aku keceriaan dimanapun aku berada.
Alm am aterku yang m em beriku
M asa depan cerah
iv
DEKLARASI
Dengan ini saya menyatakan bahwa skripsi ini adalah hasil pekerjaan saya
sendiri dan sepanjang pengetahuan saya tidak berisi materi yang dipublikasikan
atau ditulis orang atau telah dipergunakan dan diterima sebagai persyaratan
penyelesaian studi pada Universitas lain, kecuali pada bagian-bagian tertentu yang
secara tertulis diacu dalam naskah ini dan disebutkan dalam daftar pustaka.
Apabila skripsi ini merupakan jiplakan dari skripsi orang lain, maka saya
siap menerima sanksi baik secara akademik maupun hukum.
Surakarta, Juli 2007
Penulis
(Kurnia Antik Apsari)
v
KATA PENGANTAR
Alhamdulillah, segala puji bagi Allah SWT yang telah memberikan
rahmat dan hidayah-Nya bagi kita semua dan senantiasa memberikan petunjuk
dan kekuatan sehingga penulisan skripsi dengan judul ISOLASI DAN
KARAKTERISASI SENYAWA DARI FRAKSI SEMIPOLAR EKSTRAK
METANOL KULIT BATANG KLUWIH (Artocarpus altilis Park) SERTA
EFEK SITOTOKSIKNYA TERHADAP SEL HeLa dapat terselesaikan dengan
baik.
Selesainya skripsi ini tentunya tidak lepas dari bantuan banyak pihak, pada
kesempatan ini dengan kerendahan hati dan penghargaan yang tulus, penulis
mengucapkan banyak terima kasih sebesar-besarnya kepada:
1. Dra. Nurul Mutmainah, M.Si., Apt, selaku Dekan Fakultas Farmasi
Universitas Muhammadiyah Surakarta yang telah bersedia meluangkan waktu,
tenaga dan pikiran.
2. Drs. Muhtadi, M.Si selaku dosen Pembimbing I yang telah meluangkan waktu
untuk memberikan petunjuk, bimbingan dan pengarahan berharga yang sangat
penulis butuhkan.
3. Peni Indrayudha, S.F., Apt selaku Dosen Pembimbing II yang telah bersedia
memberikan bimbingan dan pengarahan berharga yang sangat penulis
butuhkan sehingga skripsi ini dapat diselesaikan dengan baik.
4. Muhammad Da’i, M.Si., Apt selaku Dosen Penguji I yang telah bersedia
meluangkan waktu, tenaga dan pikiran untuk menguji skripsi ini.
vi
5. Indah Purwantini, M.Si., Apt selaku Dosen Penguji II yang telah bersedia
meluangkan waktu, tenaga dan pikiran untuk menguji skripsi ini.
6. Team
skripsi
Uswatun,
Rika,
Salasiah,
Karin
terimakasih
atas
kebersamaannya.
7. Buat semua keluargaku yang aku sayangi terima kasih atas curahan cinta dan
kasih sayangnya, nasehat yang diberikan, serta doa dan bantuannya.
8. Buat Fajar terimakasih atas motivasi, bantuan, doa dan dukungannya yang
telah diberikan.
9. Anak-anak Nawiyuma : Mbak Eva, Mbak Rini, Ariva, Ika, Dewi, Dede, Vita,
Ulil, aMy, Widhy, Ina terimakasih atas dukungan dan kebersamaannya.
10. Buat Haphe yang setia menemaniku, terima kasih atas bantuan, do’a, serta
waktu yang telah diberikan.
11. Mbak Santi, Fitria, Dewi, Ita, Nurma, Hafid, Erna, Iphe, Fani, Yuni, Inayah,
Novi, Dian, Ery terimakasih atas motivasi dan bantuannya.
12. Pak Bayu, pak Toni, pak Rahmat,pak Man dan mbak Atin terimakasih atas
bantuannya hingga terselesainya skripsi ini.
13. Kepada pihak-pihak yang tidak dapat disebutkan satu persatu yang telah
banyak membantu hingga terselesainya skripsi ini.
Penulis menyadari skripsi ini tidak lepas dari kekurangan dan jauh dari
kesempurnaan. Walaupun demikian, penulis berharap semoga skripsi ini dapat
bermanfaat bagi perkembangan dan kemajuan ilmu Farmasi.
Surakarta , Juli 2007
Penulis
vii
DAFTAR ISI
HALAMAN SAMPUL DEPAN ...............................................................................i
HALAMAN SAMPUL DALAM ............................................................................ii
HALAMAN PENGESAHAN ................................................................................iii
HALAMAN MOTTO DAN PERSEMBAHAN ...................................................... iv
HALAMAN DEKLARASI ...................................................................................... v
KATA PENGANTAR ............................................................................................vi
DAFTAR ISI ........................................................................................................viii
DAFTAR GAMBAR ..............................................................................................xi
DAFTAR TABEL.................................................................................................xiii
DAFTAR LAMPIRAN ......................................................................................... xiv
DAFTAR SINGKATAN........................................................................................ xv
INTISARI ............................................................................................................. xvi
BAB I. PENDAHULUAN ....................................... Error! Bookmark not defined.
A. Latar Belakang Masalah........................ Error! Bookmark not defined.
B. Perumusan Masalah .............................. Error! Bookmark not defined.
C. Tujuan Penelitian .................................. Error! Bookmark not defined.
D. Tinjauan Pustaka................................... Error! Bookmark not defined.
1. Artocarpus altilis Park .................... Error! Bookmark not defined.
2. Uraian Flavonoid ............................ Error! Bookmark not defined.
3. Metode Ekstraksi ............................ Error! Bookmark not defined.
4. Kromatografi Lapis Tipis ............... Error! Bookmark not defined.
5. Kromatografi Cair Vakum............... Error! Bookmark not defined.
viii
6. Kanker ............................................ Error! Bookmark not defined.
7. Kanker Cervix................................. Error! Bookmark not defined.
8. Sel HeLa ......................................... Error! Bookmark not defined.
9. Uji Sitotoksik .................................. Error! Bookmark not defined.
10. Spektrofotometri Ultraviolet........... Error! Bookmark not defined.
11. Spektrofotometri Infra merah ......... Error! Bookmark not defined.
E. Keterangan Empiris ............................................................................. 24
BAB II. METODE PENELITIAN...Error! Bookmark not defined._Toc170696933
A. Jenis Penelitian .................................... Error! Bookmark not defined.
B. Variabel penelitian ............................... Error! Bookmark not defined.
C. Bahan dan alat...................................... Error! Bookmark not defined.
D. Jalannya Penelitian............................... Error! Bookmark not defined.
E. Cara Analisis ........................................ Error! Bookmark not defined.
BAB III. HASIL DAN PEMBAHASAN.................. Error! Bookmark not defined.
A. Determinasi Tanaman Artocarpus altilis ParkError! Bookmark not defined.
B. Pengumpulan, pengeringan, dan pembuatan serbukError! Bookmark not defined.
C. Ekstraksi .............................................. Error! Bookmark not defined.
D. Fraksinasi dan Isolasi ........................... Error! Bookmark not defined.
D. Uji Sitotoksik dengan Metode MTT AssayError! Bookmark not defined.
E. Kromatografi Lapis Tipis...................... Error! Bookmark not defined.
F. Spektrofotometri IR.............................. Error! Bookmark not defined.
G. Spektrofotometri UV.......................................................................... 59
BAB IV. KESIMPULAN DAN SARAN.................. Error! Bookmark not defined.
ix
A. Kesimpulan.......................................... Error! Bookmark not defined.
B. Saran.................................................... Error! Bookmark not defined.
DAFTAR PUSTAKA .............................................. Error! Bookmark not defined.
LAMPIRAN .......................................................................................................... 65
x
DAFTAR GAMBAR
Gambar 1. Kerangka dasar flavonoid beserta penomorannya (Markham, 1988).Error! Bookmark not d
Gambar 2. Diagram spektrometer (Sastrohamidjojo, 1991).Error! Bookmark not defined.
Gambar 3. Skema fraksinasi dan isolasi ekstrak metanol kulit batang kluwihError! Bookmark not defin
Gambar 4. Skema uji sitotoksik hasil isolasi fraksi semipolar ekstrak metanol kulit
batang kluwih ..............................................Error! Bookmark not defined.
Gambar 5. Profil kromatogram hasil KCV 1 dengan fase gerak nheksana:etilasetat (7:3) ................................Error! Bookmark not defined.
Gambar
6.
Profil
kromatogram
hasil
KCV
2
dengan
Fase
Gerak
kloroform:metanol (9,5:0,5).........................Error! Bookmark not defined.
Gambar
7.
Profil
Kromatogram
fraksi
no.1–20
dengan
fase
gerak
kloroform:etilasetat (9:1) .............................Error! Bookmark not defined.
Gambar
8.
Profil
Kromatogram
fraksi
no.20–45
dengan
fase
gerak
kloroform:etilasetat (9:1) .............................Error! Bookmark not defined.
Gambar
9.
Profil
Kromatogram
fraksi
no.45–71
dengan
fase
gerak
kloroform:etilasetat (9:1) .............................Error! Bookmark not defined.
Gambar 10. Profil kromatogram untuk mengecek kemurnian: (A) dengan fase
gerak
kloroform:etilasetat
(9:1),
(B)
dengan
fase
gerak
heksana:etilasetat (2:8), dan (C) dengan fase gerak kloroform:metanol
(9:1).............................................................Error! Bookmark not defined.
Gambar 11. Kristal Formazan .......................................Error! Bookmark not defined.
Gambar 12. Mekanisme reduksi MTT menjadi FormazanError! Bookmark not defined.
xi
Gambar 13. Sel HeLa sebelum diberi perlakuan dan sel HeLa setelah diberi perlakuanError! Bookmark
Gambar 14. Grafik regresi antara konsentrasi vs persen sel hidupError! Bookmark not defined.
Gambar 15. Grafik regresi antara log konsentrasi vs nilai probitError! Bookmark not defined.
Gambar 16. Kromatogram hasil isolasi fraksi B dari ekstrak metanol kulit batang
kluwih .........................................................Error! Bookmark not defined.
Gambar 17. Kromatogram hasil isolasi fraksi B dari ekstrak metanol kulit batang
kluwih .........................................................Error! Bookmark not defined.
Gambar 18. Kromatogram hasil isolasi fraksi B dari ekstrak metanol kulit batang
kluwih .........................................................Error! Bookmark not defined.
Gambar 19. Kromatogram hasil isolasi fraksi B dari ekstrak metanol kulit batang
kluwih .........................................................Error! Bookmark not defined.
Gambar 20. Hasil Spektrofotometri IR ..........................Error! Bookmark not defined.
Gambar 21. Grafik spektra UV dan tabel yang menyatakan panjang gelombang
dan absorbansi. ............................................Error! Bookmark not defined.
Gambar 22. Senyawa kelompok flavonoid golongan flavanonError! Bookmark not defined.
xii
DAFTAR TABEL
Tabel 1. Daftar bilangan gelombang dari berbagai jenis ikatan . Error! Bookmark
not defined.
Tabel 2. Pengelompokkan fraksi hasil KCV 1 isolat fraksi semipolar ekstrak
metanol kulit batang kluwih berdasarkan profil kromatogram dengan
fase gerak n-heksana-etilasetat (7:3) ......Error! Bookmark not defined.
Tabel 3. Pengelompokkan fraksi hasil KCV 2 isolat fraksi semipolar ekstrak
metanol kulit batng kluwih berdasarkan profil kromatogram dengan fase
gerak kloroform-etilasetat (9,5:0,5)........Error! Bookmark not defined.
Tabel 4. Pengaruh Berbagai Konsentrasi DMSO terhadap % sel Hidup sel HeLa
..............................................................Error! Bookmark not defined.
Tabel 5. Hasil Uji Sitotoksik Isolat Fraksi semipolar Ekstrak Metanol kulit batang
kluwih (Artocarpus altilis Park) terhadap sel HeLa dengan metode MTT.
..............................................................Error! Bookmark not defined.
Tabel 6. Data Konsentrasi dan Probit Akibat Pemberian Isolat Fraksi semipolar
Ekstrak Metanol Kulit Batang Kluwih pada Sel HeLa dengan Metode
MTT ......................................................Error! Bookmark not defined.
Tabel 7. Hasil analisis KLT dibawah sinar UV254 dan UV366.... Error! Bookmark
not defined.
Tabel 8. Hasil Analisis KLT dengan deteksi uap amonia .... Error! Bookmark not
defined.
xiii
Tabel 9. Hasil Analisis KLT dengan Pereaksi semprot Dragendorff ............Error!
Bookmark not defined.
Tabel 10. Hasil analisis KLT dengan Pereaksi semprot Lieberman Burchard
..............................................................Error! Bookmark not defined.
Tabel 11. Tabel data spektra IR ............................Error! Bookmark not defined.
xiv
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1. Surat Keterangan Determinasi. .........Error! Bookmark not defined.
Lampiran 2. Gambar Tanaman Kluwih.................Error! Bookmark not defined.
Lampiran 3. Alat ELISA reader............................Error! Bookmark not defined.
Lampiran 4. Alat Kromatografi Cair Vakum (KCV)........... Error! Bookmark not
defined.
Lampiran 5. Alat Kromatografi Kolom Tekan (KKT)......... Error! Bookmark not
defined.
Lampiran 6. Perhitungan Kepadatan Stock sel HeLa. ......... Error! Bookmark not
defined.
Lampiran 7. Data Absorbansi sel HeLa dengan Metode MTT assay. ...........Error!
Bookmark not defined.
Lampiran 8. Data Uji Sitotoksisitas terhadap sel HeLa ....... Error! Bookmark not
defined.
Lampiran 9. Perhitungan IC50...............................Error! Bookmark not defined.
Lampiran 10. Tabel Probit....................................Error! Bookmark not defined.
xv
DAFTAR SINGKATAN
DMSO
: Dimethil Sulfokside
DNA
: Deoxyribo Nucleic Acid
ELISA
: Enzim Linked Immunosorbent Assay
FBS
: Fetal Bovine Serum
HPV
: Human Papilloma Virus
IC
: Inhibitory Concentration
MTT
: (3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide)
PBS
: Phospat Buffer Saline
RPMI
: Rosewell Park Memorial Institute
SDS
: Sodium Dodecyl Sulphat
VS
: Versus
xvi
INTISARI
Kanker merupakan salah satu penyakit penyebab kematian utama di dunia,
sedangkan kanker cervix masih menempati urutan pertama penyakit yang paling
banyak menyerang wanita di Indonesia. Oleh karena itu dilakukan penelitian
dengan tujuan untuk mengetahui senyawa hasil isolasi fraksi semipolar dari
ekstrak metanol kulit batang kluwih (Artocarpus altilis Park) yang berefek
sitotoksik terhadap sel HeLa.
Preparasi ekstrak dilakukan dengan maserasi menggunakan pelarut
metanol dan dilanjutkan dengan fraksinasi menggunakan kromatografi cair
vakum. Hasil isolasi fraksi semipolar ekstrak metanol kulit batang kluwih
(Artocarpus altilis Park) diuji efek sitotoksiknya terhadap sel HeLa dengan
metode MTT dengan konsentrasi 0,78 ì g/ml; 1,56 ì g/ml; 3,12 ì g/ml; 6,25 ì g/ml;
12,50 ì g/ml. Kemudian diinkubasi selama 24 jam dan dibaca absorbansinya
dengan ELISA reader pada panjang gelombang 550 nm. Kemudian deteksi
senyawa dalam isolat dilakukan dengan analisis KLT, pembacaan
spektrofotometri UV, dan spektrofotometri IR.
Hasil penelitian menunjukkan bahwa hasil isolasi fraksi semipolar ekstrak
metanol kulit batang kluwih mempunyai efek sitotoksik terhadap sel HeLa dengan
IC50 sebesar 19,24 ì g/ml. Berdasar hasil analisis KLT, spektrum UV dan
spektrum IR menunjukkan bahwa hasil isolasi fraksi semipolar ekstrak metanol
kulit batang kluwih mengandung senyawa flavonoid yang khas untuk golongan
flavanon yang berefek sitotoksik terhadap sel HeLa.
Kata kunci : Kulit batang kluwih (Artocarpus altilis Park), sel HeLa, aktivitas
sitotoksik, flavonoid, kromatografi lapis tipis, spektrofotometri.
xvii
SEMIPOLAR EKSTRAK METANOL KULIT BATANG
KLUWIH (Artocarpus altilis Park) SERTA EFEK
SITOTOKSIKNYA TERHADAP SEL HeLa
SKRIPSI
Oleh :
KURNIA ANTIK APSARI
K 100 030 065
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA
SURAKARTA
2007
i
ISOLASI DAN KARAKTERISASI SENYAWA DARI FRAKSI
SEMIPOLAR EKSTRAK METANOL KULIT BATANG
KLUWIH (Artocarpus altilis Park) SERTA EFEK
SITOTOKSIKNYA TERHADAP SEL HeLa
SKRIPSI
Diajukan untuk memenuhi salah satu syarat mencapai
derajat Sarjana Farmasi (S.Farm) pada Fakultas Farmasi
Universitas Muhammadiyah Surakarta
di Surakarta
Oleh:
KURNIA ANTIK APSARI
K 100 030 065
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA
SURAKARTA
2007
ii
PENGESAHAAN SKRIPSI
Berjudul :
ISOLASI DAN KARAKTERISASI SENYAWA DARI FRAKSI
SEMIPOLAR EKSTRAK METANOL KULIT BATANG
KLUWIH (Artocarpus altilis Park) SERTA EFEK
SITOTOKSIKNYA TERHADAP SEL HeLa
Oleh :
KURNIA ANTIK APSARI
K 100 030 065
Dipertahankan dihadapan Panitia Penguji Skripsi
Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta
Pada tanggal : 2 Juli 2007
Mengetahui,
Fakultas Farmasi
Universitas Muhammadiyah Surakarta
Dekan,
Dra. Nurul Mutmainah, M.Si., Apt
Pembimbing Utama
Pembimbing Pendamping
( Dr. Muhtadi, M.Si)
(Peni Indrayudha, S.F., Apt)
Penguji :
1. Muhammad Da’i, M.Si., Apt.
2. Indah Purwantini, M.Si., Apt
3. Dr. Muhtadi, M.Si
4. Peni Indrayudha, S.F., Apt
iii
M O TTO DA N PERSEM BA H A N
ϖ “Jadikanlah engkau sum ber tam bang kebaikan dan m aafkan
segala kesalahan yang m enyakitkan, sesungguhnya engkau dapat
m elihat apa yang engkau lakukan dan dapat m endengar apa yang
engkau ucapkan” (abu Ishaq as Sabi’i)
ϖ “Yaitu orang-orang yang berim an dan hati m ereka m enjadi
tentram dengan m engingat A llah. Ingatlah, hanya dengan
m engingat A llah-lah hatim enjaditentram ”(Q S.A r Ra’d :28)
ϖ “H idup adalah perjuangan tanpa henti-henti tak ada yang jatuh
dari langit dengan cum a-Cum a, sem ua usaha dan doa serta
kem enangan hari ini bukanlah kem enangan esok hari, kegagalan
hariinibukanlah kegagalan esok hari”(KhalilGibran )
Ya Alloh,
Karya kecilku ini kupersembahkan kepada-Mu
Semoga Engkau terima sebagai amal sholih
Hingga setiap kemudahan menambah kesyukuran
Dan setiap kesukaran menjadi penghapus dosa
Kepada Ibuku yang sudah jauh dariku
Terima kasih atas do’a, cinta serta
curahan kasih sayangnya
Untuk Bapak dan mama
T erima kasih telah memberikan semua
yang terbaik untukku
memberikan do’a disetiap hembusan nafasku
dan telah membanting tulang untuk menghidupi dan
mendidik putra-putrinya
Buatadikku Astidan kakakku tersayang,
Terim akasih atas dukungan,do’a,m otivasinya.
Buat teman-teman dan sahabat-sahabatku
Dimanapun engkau berada yang telah memberikan
Aku keceriaan dimanapun aku berada.
Alm am aterku yang m em beriku
M asa depan cerah
iv
DEKLARASI
Dengan ini saya menyatakan bahwa skripsi ini adalah hasil pekerjaan saya
sendiri dan sepanjang pengetahuan saya tidak berisi materi yang dipublikasikan
atau ditulis orang atau telah dipergunakan dan diterima sebagai persyaratan
penyelesaian studi pada Universitas lain, kecuali pada bagian-bagian tertentu yang
secara tertulis diacu dalam naskah ini dan disebutkan dalam daftar pustaka.
Apabila skripsi ini merupakan jiplakan dari skripsi orang lain, maka saya
siap menerima sanksi baik secara akademik maupun hukum.
Surakarta, Juli 2007
Penulis
(Kurnia Antik Apsari)
v
KATA PENGANTAR
Alhamdulillah, segala puji bagi Allah SWT yang telah memberikan
rahmat dan hidayah-Nya bagi kita semua dan senantiasa memberikan petunjuk
dan kekuatan sehingga penulisan skripsi dengan judul ISOLASI DAN
KARAKTERISASI SENYAWA DARI FRAKSI SEMIPOLAR EKSTRAK
METANOL KULIT BATANG KLUWIH (Artocarpus altilis Park) SERTA
EFEK SITOTOKSIKNYA TERHADAP SEL HeLa dapat terselesaikan dengan
baik.
Selesainya skripsi ini tentunya tidak lepas dari bantuan banyak pihak, pada
kesempatan ini dengan kerendahan hati dan penghargaan yang tulus, penulis
mengucapkan banyak terima kasih sebesar-besarnya kepada:
1. Dra. Nurul Mutmainah, M.Si., Apt, selaku Dekan Fakultas Farmasi
Universitas Muhammadiyah Surakarta yang telah bersedia meluangkan waktu,
tenaga dan pikiran.
2. Drs. Muhtadi, M.Si selaku dosen Pembimbing I yang telah meluangkan waktu
untuk memberikan petunjuk, bimbingan dan pengarahan berharga yang sangat
penulis butuhkan.
3. Peni Indrayudha, S.F., Apt selaku Dosen Pembimbing II yang telah bersedia
memberikan bimbingan dan pengarahan berharga yang sangat penulis
butuhkan sehingga skripsi ini dapat diselesaikan dengan baik.
4. Muhammad Da’i, M.Si., Apt selaku Dosen Penguji I yang telah bersedia
meluangkan waktu, tenaga dan pikiran untuk menguji skripsi ini.
vi
5. Indah Purwantini, M.Si., Apt selaku Dosen Penguji II yang telah bersedia
meluangkan waktu, tenaga dan pikiran untuk menguji skripsi ini.
6. Team
skripsi
Uswatun,
Rika,
Salasiah,
Karin
terimakasih
atas
kebersamaannya.
7. Buat semua keluargaku yang aku sayangi terima kasih atas curahan cinta dan
kasih sayangnya, nasehat yang diberikan, serta doa dan bantuannya.
8. Buat Fajar terimakasih atas motivasi, bantuan, doa dan dukungannya yang
telah diberikan.
9. Anak-anak Nawiyuma : Mbak Eva, Mbak Rini, Ariva, Ika, Dewi, Dede, Vita,
Ulil, aMy, Widhy, Ina terimakasih atas dukungan dan kebersamaannya.
10. Buat Haphe yang setia menemaniku, terima kasih atas bantuan, do’a, serta
waktu yang telah diberikan.
11. Mbak Santi, Fitria, Dewi, Ita, Nurma, Hafid, Erna, Iphe, Fani, Yuni, Inayah,
Novi, Dian, Ery terimakasih atas motivasi dan bantuannya.
12. Pak Bayu, pak Toni, pak Rahmat,pak Man dan mbak Atin terimakasih atas
bantuannya hingga terselesainya skripsi ini.
13. Kepada pihak-pihak yang tidak dapat disebutkan satu persatu yang telah
banyak membantu hingga terselesainya skripsi ini.
Penulis menyadari skripsi ini tidak lepas dari kekurangan dan jauh dari
kesempurnaan. Walaupun demikian, penulis berharap semoga skripsi ini dapat
bermanfaat bagi perkembangan dan kemajuan ilmu Farmasi.
Surakarta , Juli 2007
Penulis
vii
DAFTAR ISI
HALAMAN SAMPUL DEPAN ...............................................................................i
HALAMAN SAMPUL DALAM ............................................................................ii
HALAMAN PENGESAHAN ................................................................................iii
HALAMAN MOTTO DAN PERSEMBAHAN ...................................................... iv
HALAMAN DEKLARASI ...................................................................................... v
KATA PENGANTAR ............................................................................................vi
DAFTAR ISI ........................................................................................................viii
DAFTAR GAMBAR ..............................................................................................xi
DAFTAR TABEL.................................................................................................xiii
DAFTAR LAMPIRAN ......................................................................................... xiv
DAFTAR SINGKATAN........................................................................................ xv
INTISARI ............................................................................................................. xvi
BAB I. PENDAHULUAN ....................................... Error! Bookmark not defined.
A. Latar Belakang Masalah........................ Error! Bookmark not defined.
B. Perumusan Masalah .............................. Error! Bookmark not defined.
C. Tujuan Penelitian .................................. Error! Bookmark not defined.
D. Tinjauan Pustaka................................... Error! Bookmark not defined.
1. Artocarpus altilis Park .................... Error! Bookmark not defined.
2. Uraian Flavonoid ............................ Error! Bookmark not defined.
3. Metode Ekstraksi ............................ Error! Bookmark not defined.
4. Kromatografi Lapis Tipis ............... Error! Bookmark not defined.
5. Kromatografi Cair Vakum............... Error! Bookmark not defined.
viii
6. Kanker ............................................ Error! Bookmark not defined.
7. Kanker Cervix................................. Error! Bookmark not defined.
8. Sel HeLa ......................................... Error! Bookmark not defined.
9. Uji Sitotoksik .................................. Error! Bookmark not defined.
10. Spektrofotometri Ultraviolet........... Error! Bookmark not defined.
11. Spektrofotometri Infra merah ......... Error! Bookmark not defined.
E. Keterangan Empiris ............................................................................. 24
BAB II. METODE PENELITIAN...Error! Bookmark not defined._Toc170696933
A. Jenis Penelitian .................................... Error! Bookmark not defined.
B. Variabel penelitian ............................... Error! Bookmark not defined.
C. Bahan dan alat...................................... Error! Bookmark not defined.
D. Jalannya Penelitian............................... Error! Bookmark not defined.
E. Cara Analisis ........................................ Error! Bookmark not defined.
BAB III. HASIL DAN PEMBAHASAN.................. Error! Bookmark not defined.
A. Determinasi Tanaman Artocarpus altilis ParkError! Bookmark not defined.
B. Pengumpulan, pengeringan, dan pembuatan serbukError! Bookmark not defined.
C. Ekstraksi .............................................. Error! Bookmark not defined.
D. Fraksinasi dan Isolasi ........................... Error! Bookmark not defined.
D. Uji Sitotoksik dengan Metode MTT AssayError! Bookmark not defined.
E. Kromatografi Lapis Tipis...................... Error! Bookmark not defined.
F. Spektrofotometri IR.............................. Error! Bookmark not defined.
G. Spektrofotometri UV.......................................................................... 59
BAB IV. KESIMPULAN DAN SARAN.................. Error! Bookmark not defined.
ix
A. Kesimpulan.......................................... Error! Bookmark not defined.
B. Saran.................................................... Error! Bookmark not defined.
DAFTAR PUSTAKA .............................................. Error! Bookmark not defined.
LAMPIRAN .......................................................................................................... 65
x
DAFTAR GAMBAR
Gambar 1. Kerangka dasar flavonoid beserta penomorannya (Markham, 1988).Error! Bookmark not d
Gambar 2. Diagram spektrometer (Sastrohamidjojo, 1991).Error! Bookmark not defined.
Gambar 3. Skema fraksinasi dan isolasi ekstrak metanol kulit batang kluwihError! Bookmark not defin
Gambar 4. Skema uji sitotoksik hasil isolasi fraksi semipolar ekstrak metanol kulit
batang kluwih ..............................................Error! Bookmark not defined.
Gambar 5. Profil kromatogram hasil KCV 1 dengan fase gerak nheksana:etilasetat (7:3) ................................Error! Bookmark not defined.
Gambar
6.
Profil
kromatogram
hasil
KCV
2
dengan
Fase
Gerak
kloroform:metanol (9,5:0,5).........................Error! Bookmark not defined.
Gambar
7.
Profil
Kromatogram
fraksi
no.1–20
dengan
fase
gerak
kloroform:etilasetat (9:1) .............................Error! Bookmark not defined.
Gambar
8.
Profil
Kromatogram
fraksi
no.20–45
dengan
fase
gerak
kloroform:etilasetat (9:1) .............................Error! Bookmark not defined.
Gambar
9.
Profil
Kromatogram
fraksi
no.45–71
dengan
fase
gerak
kloroform:etilasetat (9:1) .............................Error! Bookmark not defined.
Gambar 10. Profil kromatogram untuk mengecek kemurnian: (A) dengan fase
gerak
kloroform:etilasetat
(9:1),
(B)
dengan
fase
gerak
heksana:etilasetat (2:8), dan (C) dengan fase gerak kloroform:metanol
(9:1).............................................................Error! Bookmark not defined.
Gambar 11. Kristal Formazan .......................................Error! Bookmark not defined.
Gambar 12. Mekanisme reduksi MTT menjadi FormazanError! Bookmark not defined.
xi
Gambar 13. Sel HeLa sebelum diberi perlakuan dan sel HeLa setelah diberi perlakuanError! Bookmark
Gambar 14. Grafik regresi antara konsentrasi vs persen sel hidupError! Bookmark not defined.
Gambar 15. Grafik regresi antara log konsentrasi vs nilai probitError! Bookmark not defined.
Gambar 16. Kromatogram hasil isolasi fraksi B dari ekstrak metanol kulit batang
kluwih .........................................................Error! Bookmark not defined.
Gambar 17. Kromatogram hasil isolasi fraksi B dari ekstrak metanol kulit batang
kluwih .........................................................Error! Bookmark not defined.
Gambar 18. Kromatogram hasil isolasi fraksi B dari ekstrak metanol kulit batang
kluwih .........................................................Error! Bookmark not defined.
Gambar 19. Kromatogram hasil isolasi fraksi B dari ekstrak metanol kulit batang
kluwih .........................................................Error! Bookmark not defined.
Gambar 20. Hasil Spektrofotometri IR ..........................Error! Bookmark not defined.
Gambar 21. Grafik spektra UV dan tabel yang menyatakan panjang gelombang
dan absorbansi. ............................................Error! Bookmark not defined.
Gambar 22. Senyawa kelompok flavonoid golongan flavanonError! Bookmark not defined.
xii
DAFTAR TABEL
Tabel 1. Daftar bilangan gelombang dari berbagai jenis ikatan . Error! Bookmark
not defined.
Tabel 2. Pengelompokkan fraksi hasil KCV 1 isolat fraksi semipolar ekstrak
metanol kulit batang kluwih berdasarkan profil kromatogram dengan
fase gerak n-heksana-etilasetat (7:3) ......Error! Bookmark not defined.
Tabel 3. Pengelompokkan fraksi hasil KCV 2 isolat fraksi semipolar ekstrak
metanol kulit batng kluwih berdasarkan profil kromatogram dengan fase
gerak kloroform-etilasetat (9,5:0,5)........Error! Bookmark not defined.
Tabel 4. Pengaruh Berbagai Konsentrasi DMSO terhadap % sel Hidup sel HeLa
..............................................................Error! Bookmark not defined.
Tabel 5. Hasil Uji Sitotoksik Isolat Fraksi semipolar Ekstrak Metanol kulit batang
kluwih (Artocarpus altilis Park) terhadap sel HeLa dengan metode MTT.
..............................................................Error! Bookmark not defined.
Tabel 6. Data Konsentrasi dan Probit Akibat Pemberian Isolat Fraksi semipolar
Ekstrak Metanol Kulit Batang Kluwih pada Sel HeLa dengan Metode
MTT ......................................................Error! Bookmark not defined.
Tabel 7. Hasil analisis KLT dibawah sinar UV254 dan UV366.... Error! Bookmark
not defined.
Tabel 8. Hasil Analisis KLT dengan deteksi uap amonia .... Error! Bookmark not
defined.
xiii
Tabel 9. Hasil Analisis KLT dengan Pereaksi semprot Dragendorff ............Error!
Bookmark not defined.
Tabel 10. Hasil analisis KLT dengan Pereaksi semprot Lieberman Burchard
..............................................................Error! Bookmark not defined.
Tabel 11. Tabel data spektra IR ............................Error! Bookmark not defined.
xiv
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1. Surat Keterangan Determinasi. .........Error! Bookmark not defined.
Lampiran 2. Gambar Tanaman Kluwih.................Error! Bookmark not defined.
Lampiran 3. Alat ELISA reader............................Error! Bookmark not defined.
Lampiran 4. Alat Kromatografi Cair Vakum (KCV)........... Error! Bookmark not
defined.
Lampiran 5. Alat Kromatografi Kolom Tekan (KKT)......... Error! Bookmark not
defined.
Lampiran 6. Perhitungan Kepadatan Stock sel HeLa. ......... Error! Bookmark not
defined.
Lampiran 7. Data Absorbansi sel HeLa dengan Metode MTT assay. ...........Error!
Bookmark not defined.
Lampiran 8. Data Uji Sitotoksisitas terhadap sel HeLa ....... Error! Bookmark not
defined.
Lampiran 9. Perhitungan IC50...............................Error! Bookmark not defined.
Lampiran 10. Tabel Probit....................................Error! Bookmark not defined.
xv
DAFTAR SINGKATAN
DMSO
: Dimethil Sulfokside
DNA
: Deoxyribo Nucleic Acid
ELISA
: Enzim Linked Immunosorbent Assay
FBS
: Fetal Bovine Serum
HPV
: Human Papilloma Virus
IC
: Inhibitory Concentration
MTT
: (3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide)
PBS
: Phospat Buffer Saline
RPMI
: Rosewell Park Memorial Institute
SDS
: Sodium Dodecyl Sulphat
VS
: Versus
xvi
INTISARI
Kanker merupakan salah satu penyakit penyebab kematian utama di dunia,
sedangkan kanker cervix masih menempati urutan pertama penyakit yang paling
banyak menyerang wanita di Indonesia. Oleh karena itu dilakukan penelitian
dengan tujuan untuk mengetahui senyawa hasil isolasi fraksi semipolar dari
ekstrak metanol kulit batang kluwih (Artocarpus altilis Park) yang berefek
sitotoksik terhadap sel HeLa.
Preparasi ekstrak dilakukan dengan maserasi menggunakan pelarut
metanol dan dilanjutkan dengan fraksinasi menggunakan kromatografi cair
vakum. Hasil isolasi fraksi semipolar ekstrak metanol kulit batang kluwih
(Artocarpus altilis Park) diuji efek sitotoksiknya terhadap sel HeLa dengan
metode MTT dengan konsentrasi 0,78 ì g/ml; 1,56 ì g/ml; 3,12 ì g/ml; 6,25 ì g/ml;
12,50 ì g/ml. Kemudian diinkubasi selama 24 jam dan dibaca absorbansinya
dengan ELISA reader pada panjang gelombang 550 nm. Kemudian deteksi
senyawa dalam isolat dilakukan dengan analisis KLT, pembacaan
spektrofotometri UV, dan spektrofotometri IR.
Hasil penelitian menunjukkan bahwa hasil isolasi fraksi semipolar ekstrak
metanol kulit batang kluwih mempunyai efek sitotoksik terhadap sel HeLa dengan
IC50 sebesar 19,24 ì g/ml. Berdasar hasil analisis KLT, spektrum UV dan
spektrum IR menunjukkan bahwa hasil isolasi fraksi semipolar ekstrak metanol
kulit batang kluwih mengandung senyawa flavonoid yang khas untuk golongan
flavanon yang berefek sitotoksik terhadap sel HeLa.
Kata kunci : Kulit batang kluwih (Artocarpus altilis Park), sel HeLa, aktivitas
sitotoksik, flavonoid, kromatografi lapis tipis, spektrofotometri.
xvii