AKTIVITAS SITOTOKSIK EKSTRAK ETANOL BIJI SRIKAYA (Annona squamosa L.) TERHADAP SEL T47D Aktivitas Sitotoksik Ekstrak Etanol Biji Srikaya (Annona Squamosa L.) Terhadap Sel T47D.
AKTIVITAS SITOTOKSIK EKSTRAK ETANOL BIJI SRIKAYA
(Annona squamosa L.) TERHADAP SEL T47D
SKRIPSI
OLEH:
MUSTIKA ERLINANINGRUM
K 100 080 187
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA
SURAKARTA
2012
AKTIVITAS SITOTOKSIK EKSTRAK ETANOL
BIJI SRIKAYA (Annona squamosa L.) TERHADAP SEL T47D
SKRIPSI
Diajukan untuk memenuhi salah satu syarat mencapai
derajat Sarjana Farmasi (S. Farm) pada Fakultas Farmasi
Universitas Muhammadiyah Surakarta
di Surakarta
Oleh :
MUSTIKA ERLINANINGRUM
K 100 080 187
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA
SURAKARTA
2012
i
DEKLARASI
Dengan ini saya menyatakan bahwa dalam skripsi ini tidak terdapat
karya yang pernah diajukan untuk memperoleh gelar kesarjanaan di suatu
Perguruan Tinggi, dan sepanjang pengetahuan saya juga tidak terdapat
karya atau pendapat yang pernah ditulis atau diterbitkan oleh orang lain,
kecuali yang secara tertulis diacu dalam naskah ini dan disebutkan dalam
daftar pustaka.
Surakarta, 10 Maret 2012
Penulis
Mustika Erlinaningrum
iii
KATA PENGANTAR
Assalamu alaikum warahmatullahi wabarakatuh
Alhamdulillah, dengan menyebut nama Allah yang Maha Pengasih lagi
Maha Penyayang, segala puji bagi Allah SWT yang telah melimpahkan rahmat
dan karunia-Nya kepada penulis sehingga penulis mampu menyusun dan
k Etanol Biji
Srikaya (Annona squamosa
memenuhi salah satu syarat dalam mencapai derajat Sarjana Farmasi (S. Farm)
pada Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta. Pada kesempatan
kali ini, penulis ingin menyampaikan rasa terima kasih kepada berbagai pihak
yang telah memberikan bantuan berupa arahan, dorongan, dan motivasi selama
penulis menyelesaikan skripsi ini. Oleh karena itu, penulis ingin menyampaikan
ucapan terima kasih kepada :
1. Bapak
Dekan Fakultas Farmasi UMS
2. Bapak Dr. Haryoto, M.Sc., selaku pembimbing utama skripsi
3. Bapak Dr. Supardi Wongso, Apt., selaku pembimbing akademik
4. Bapak Prof. Dr. M. Kuswandi, SU, M. Phil., Apt., selaku penguji I
5. Bapak Peni Indrayudha, M. Biotech., Apt., selaku penguji II
6. Kedua orang tuaku dan adik-adikku serta abangku Edi Iskandar, Oben
Priandra, Rohman, dan Noorhadi Seto yang selalu memberi motivasi untukku
7. Tim peneliti aktivitas sitotoksik terhadap sel T47D yang terdiri dari Wildan,
Yennie, Desilia, Adi, Eva, Indah, Iwan, Umma, Woro, Cita, dan Hefi
Semoga segala kebaikan yang telah diberikan mendapatkan balasan yang
berlimpah dari Allah SWT. Penulis menyadari bahwa penulisan ini masih banyak
kekurangan karena keterbatasan kemampuan, pengetahuan, dan pengalaman. Oleh
karena itu, penulis mengharapkan saran dan kritik dari pembaca. Penulis berharap
penelitian ini dapat bermanfaat bagi perkembangan ilmu pengetahuan.
Wassalamu alaikum warahmatullahi wabarakatuh
Surakarta, 28 Februari 2012
Penulis
iv
DAFTAR ISI
Halaman
HALAMAN JUDUL..............................................................................
i
HALAMAN PENGESAHAN................................................................
ii
HALAMAN DEKLARASI....................................................................
iii
KATA PENGANTAR............................................................................
iv
DAFTAR ISI...........................................................................................
v
DAFTAR TABEL...................................................................................
vii
DAFTAR GAMBAR..............................................................................
viii
DAFTAR LAMPIRAN..........................................................................
ix
DAFTAR SINGKATAN........................................................................
x
INTISARI...............................................................................................
xi
BAB I. PENDAHULUAN.....................................................................
1
A. Latar Belakang Masalah......................................................
1
B. Perumusan Masalah.............................................................
2
C. Tujuan Penelitian.................................................................
3
D. Tinjauan Pustaka..................................................................
3
1. Tumbuhan Srikaya........................................................
3
a. Sistematika Tanaman.............................................
3
b. Nama Daerah.........................................................
3
c. Nama Asing............................................................
4
d. Nama Simplisia.......................................................
4
e. Morfologi Tumbuhan.............................................
4
f. Kandungan Kimia...................................................
4
g. Bagian Tanaman yang Digunakan..........................
5
h. Khasiat................................................................... .
5
i. Ekstraksi dan Isolasi...............................................
5
2. Metode Penyarian...........................................................
6
3. Kanker............................................................................
6
v
4. Sel T47D..........................................................................
8
5. Sitotoksik.........................................................................
9
6. Metode MTT...................................................................
9
E. Landasan Teori.......................................................................
10
F. Hipotesis.................................................................................
11
BAB II. METODE PENELITIAN............................................................
12
A. Kategori Penelitian.................................................................
12
B. Variabel Penelitian.................................................................
12
C. Alat dan Bahan.......................................................................
13
D. Tempat Penelitian..................................................................
13
E. Jalannya Penelitian................................................................
13
1. Determinasi Tanaman.....................................................
13
2. Pengumpulan Bahan.......................................................
13
3. Preparasi Bahan..............................................................
13
4. Analisis Kualitatif...........................................................
14
5. Uji Sitotoksik..................................................................
15
F. Analisis Data..........................................................................
17
BAB III. HASIL DAN PEMBAHASAN.................................................
19
A. Determinasi Tanaman............................................................
19
B. Pengumpulan Bahan..............................................................
19
C. Ekstraksi Bahan......................................................................
19
D. Hasil Uji Aktivitas Sitotoksik.................................................
20
E. Analisis Kualitatif Kandungan Kimia.....................................
23
BAB IV. KESIMPULAN DAN SARAN..................................................
28
A. Kesimpulan.............................................................................
28
B. Saran.......................................................................................
28
DAFTAR PUSTAKA................................................................................
29
LAMPIRAN..............................................................................................
33
vi
DAFTAR TABEL
Tabel 1. Kadar Ekstrak Etanol Biji Srikaya dan Prosentase Sel Hidup
Setelah Perlakuan ........................................................................... 22
Tabel 2. Hasil Skrining Fitokimia Ekstrak Etanol Biji Srikaya
(Annona squamosa L.) .................................................................. 23
Tabel 3. Hasil Uji KLT Ekstrak Etanol Biji Srikaya (Annosa squamosa L.). 25
vii
DAFTAR GAMBAR
Gambar 1. Skema Uji Aktivitas Sitotksik Ekstrak Etanol Biji Srikaya
(Annona squamosa L.) Terhadap Sel T47D.................................. 18
Gambar 2. Reaksi Reduksi MTT menjadi Farmazan oleh Enzim Reduktase .. 21
Gambar 3.
21
Gambar 4. Kurva Hubungan %Sel Hidup dengan Log Konsentrasi................. 22
Gambar 5. Kromatografi Lapis Tipis Ekstrak Etanol Biji Srikaya Sebelum
Disemprot....................................................................................... 25
Gambar 6. Kromatografi Lapis Tipis Ekstrak Etanol Biji Srikaya Sesudah
Disemprot....................................................................................... 26
viii
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1. Surat Keterangan Determinasi ............................................... 33
Lampiran 2. Gambar Tumbuhan Srikaya ................................................... 35
Lampiran 3. Perhitungan Seri Konsentrasi ................................................
36
Lampiran 4. Perhitungan Kadar Tertinggi DMSO Ekstrak .......................
37
Lampiran 5. Perhitungan Jumlah Sel Tiap Sumuran .................................
38
Lampiran 6. Data Absorbansi Sel Hasil Uji Aktivitas Sitotoksik............... 39
Lampiran 7. Perhitungan % Sel Hidup Setelah Penambahan Ekstrak
Etanol Biji Srikaya (Annona squamosa L)............................ 40
Lampiran 8. Perhitungan IC50 Ekstrak etanol Biji Srikaya
(Annona squamosa L.) Terhadap Sel T47D........................
ix
42
DAFTAR SINGKATAN
A-549
Human Lung Carcinoma
BCl-2
B-Cell Limphoma 2
BCLXL
B-Cell Limphoma Extra Large
Bel-7402
Human Hepatocellular Carcinoma
CNE2
Human Nasopharyngeal Carcinoma
DMSO
Dimetil sulfoksida
ELISA
Enzyme Linked Immuno Sorbant Assay
FBS
Fetal Bovine Serum
HT-29
Human COLON adenocarcinoma
IC50
Inhibitory Concentration 50%
KLT
Kromatografi Lapis Tipis
K-562
Human Erythtomyeloblastoid Leukemia
LAF
Laminar Air Flow
MCF-7
Human Breast Carcinoma
MTT
3-(4,5-Dimetilltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolium bromide
PBS
Phosphate Buffered Saline
PC-3
Human Prostate Adenocarcinoma
Penstrep
Penicillin Streptomycin
Rf
Retardation fact
ROS
Reactive Oxygen Species
T47D
Human Ductal Breast Epitheal Tumor
UV
Ultraviolet
x
INTISARI
Beberapa penelitian menunjukkan bahwa senyawa asetogenin dalam biji
srikaya mempunyai aktivitas sitotoksik, antiparasit, pestisida, dan imunosupresif.
Telah dilakukan penelitian uji aktivitas sitotoksik ekstrak etanol biji srikaya
(Annona squamosa L.) terhadap sel T47D. Tujuan penelitian ini adalah untuk
mengetahui harga IC50, efek sitotoksik ekstrak etanol biji srikaya terhadap sel
T47D, dan senyawa yang terkandung dalam ekstrak etanol biji srikaya.
Ekstrak etanol biji srikaya dibuat dengan cara maserasi menggunakan
pelarut etanol 96%. Ekstrak diuji aktivitas sitotoksiknya terhadap sel T47D
dengan seri konsentrasi 150; 100; 50; 25; dan 10 µg/mL menggunakan metode
MTT assay dan dibaca pada ELISA reader.
Hasil uji aktivitas sitotoksik menunjukkan bahwa ekstrak etanol biji
srikaya mempunyai efek penghambatan sel kanker payudara dengan nilai IC50
sebesar 62,80 µg/mL. Hasil analisisis kualitatif dengan menggunakan uji
kromatografi lapis tipis menunjukkan adanya kandungan senyawa flavonoid,
alkaloid, dan polifenol.
Kata kunci : Sitotoksik, sel T47D, Annona squamosa L., MTT assay, IC 50
xi
(Annona squamosa L.) TERHADAP SEL T47D
SKRIPSI
OLEH:
MUSTIKA ERLINANINGRUM
K 100 080 187
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA
SURAKARTA
2012
AKTIVITAS SITOTOKSIK EKSTRAK ETANOL
BIJI SRIKAYA (Annona squamosa L.) TERHADAP SEL T47D
SKRIPSI
Diajukan untuk memenuhi salah satu syarat mencapai
derajat Sarjana Farmasi (S. Farm) pada Fakultas Farmasi
Universitas Muhammadiyah Surakarta
di Surakarta
Oleh :
MUSTIKA ERLINANINGRUM
K 100 080 187
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA
SURAKARTA
2012
i
DEKLARASI
Dengan ini saya menyatakan bahwa dalam skripsi ini tidak terdapat
karya yang pernah diajukan untuk memperoleh gelar kesarjanaan di suatu
Perguruan Tinggi, dan sepanjang pengetahuan saya juga tidak terdapat
karya atau pendapat yang pernah ditulis atau diterbitkan oleh orang lain,
kecuali yang secara tertulis diacu dalam naskah ini dan disebutkan dalam
daftar pustaka.
Surakarta, 10 Maret 2012
Penulis
Mustika Erlinaningrum
iii
KATA PENGANTAR
Assalamu alaikum warahmatullahi wabarakatuh
Alhamdulillah, dengan menyebut nama Allah yang Maha Pengasih lagi
Maha Penyayang, segala puji bagi Allah SWT yang telah melimpahkan rahmat
dan karunia-Nya kepada penulis sehingga penulis mampu menyusun dan
k Etanol Biji
Srikaya (Annona squamosa
memenuhi salah satu syarat dalam mencapai derajat Sarjana Farmasi (S. Farm)
pada Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta. Pada kesempatan
kali ini, penulis ingin menyampaikan rasa terima kasih kepada berbagai pihak
yang telah memberikan bantuan berupa arahan, dorongan, dan motivasi selama
penulis menyelesaikan skripsi ini. Oleh karena itu, penulis ingin menyampaikan
ucapan terima kasih kepada :
1. Bapak
Dekan Fakultas Farmasi UMS
2. Bapak Dr. Haryoto, M.Sc., selaku pembimbing utama skripsi
3. Bapak Dr. Supardi Wongso, Apt., selaku pembimbing akademik
4. Bapak Prof. Dr. M. Kuswandi, SU, M. Phil., Apt., selaku penguji I
5. Bapak Peni Indrayudha, M. Biotech., Apt., selaku penguji II
6. Kedua orang tuaku dan adik-adikku serta abangku Edi Iskandar, Oben
Priandra, Rohman, dan Noorhadi Seto yang selalu memberi motivasi untukku
7. Tim peneliti aktivitas sitotoksik terhadap sel T47D yang terdiri dari Wildan,
Yennie, Desilia, Adi, Eva, Indah, Iwan, Umma, Woro, Cita, dan Hefi
Semoga segala kebaikan yang telah diberikan mendapatkan balasan yang
berlimpah dari Allah SWT. Penulis menyadari bahwa penulisan ini masih banyak
kekurangan karena keterbatasan kemampuan, pengetahuan, dan pengalaman. Oleh
karena itu, penulis mengharapkan saran dan kritik dari pembaca. Penulis berharap
penelitian ini dapat bermanfaat bagi perkembangan ilmu pengetahuan.
Wassalamu alaikum warahmatullahi wabarakatuh
Surakarta, 28 Februari 2012
Penulis
iv
DAFTAR ISI
Halaman
HALAMAN JUDUL..............................................................................
i
HALAMAN PENGESAHAN................................................................
ii
HALAMAN DEKLARASI....................................................................
iii
KATA PENGANTAR............................................................................
iv
DAFTAR ISI...........................................................................................
v
DAFTAR TABEL...................................................................................
vii
DAFTAR GAMBAR..............................................................................
viii
DAFTAR LAMPIRAN..........................................................................
ix
DAFTAR SINGKATAN........................................................................
x
INTISARI...............................................................................................
xi
BAB I. PENDAHULUAN.....................................................................
1
A. Latar Belakang Masalah......................................................
1
B. Perumusan Masalah.............................................................
2
C. Tujuan Penelitian.................................................................
3
D. Tinjauan Pustaka..................................................................
3
1. Tumbuhan Srikaya........................................................
3
a. Sistematika Tanaman.............................................
3
b. Nama Daerah.........................................................
3
c. Nama Asing............................................................
4
d. Nama Simplisia.......................................................
4
e. Morfologi Tumbuhan.............................................
4
f. Kandungan Kimia...................................................
4
g. Bagian Tanaman yang Digunakan..........................
5
h. Khasiat................................................................... .
5
i. Ekstraksi dan Isolasi...............................................
5
2. Metode Penyarian...........................................................
6
3. Kanker............................................................................
6
v
4. Sel T47D..........................................................................
8
5. Sitotoksik.........................................................................
9
6. Metode MTT...................................................................
9
E. Landasan Teori.......................................................................
10
F. Hipotesis.................................................................................
11
BAB II. METODE PENELITIAN............................................................
12
A. Kategori Penelitian.................................................................
12
B. Variabel Penelitian.................................................................
12
C. Alat dan Bahan.......................................................................
13
D. Tempat Penelitian..................................................................
13
E. Jalannya Penelitian................................................................
13
1. Determinasi Tanaman.....................................................
13
2. Pengumpulan Bahan.......................................................
13
3. Preparasi Bahan..............................................................
13
4. Analisis Kualitatif...........................................................
14
5. Uji Sitotoksik..................................................................
15
F. Analisis Data..........................................................................
17
BAB III. HASIL DAN PEMBAHASAN.................................................
19
A. Determinasi Tanaman............................................................
19
B. Pengumpulan Bahan..............................................................
19
C. Ekstraksi Bahan......................................................................
19
D. Hasil Uji Aktivitas Sitotoksik.................................................
20
E. Analisis Kualitatif Kandungan Kimia.....................................
23
BAB IV. KESIMPULAN DAN SARAN..................................................
28
A. Kesimpulan.............................................................................
28
B. Saran.......................................................................................
28
DAFTAR PUSTAKA................................................................................
29
LAMPIRAN..............................................................................................
33
vi
DAFTAR TABEL
Tabel 1. Kadar Ekstrak Etanol Biji Srikaya dan Prosentase Sel Hidup
Setelah Perlakuan ........................................................................... 22
Tabel 2. Hasil Skrining Fitokimia Ekstrak Etanol Biji Srikaya
(Annona squamosa L.) .................................................................. 23
Tabel 3. Hasil Uji KLT Ekstrak Etanol Biji Srikaya (Annosa squamosa L.). 25
vii
DAFTAR GAMBAR
Gambar 1. Skema Uji Aktivitas Sitotksik Ekstrak Etanol Biji Srikaya
(Annona squamosa L.) Terhadap Sel T47D.................................. 18
Gambar 2. Reaksi Reduksi MTT menjadi Farmazan oleh Enzim Reduktase .. 21
Gambar 3.
21
Gambar 4. Kurva Hubungan %Sel Hidup dengan Log Konsentrasi................. 22
Gambar 5. Kromatografi Lapis Tipis Ekstrak Etanol Biji Srikaya Sebelum
Disemprot....................................................................................... 25
Gambar 6. Kromatografi Lapis Tipis Ekstrak Etanol Biji Srikaya Sesudah
Disemprot....................................................................................... 26
viii
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1. Surat Keterangan Determinasi ............................................... 33
Lampiran 2. Gambar Tumbuhan Srikaya ................................................... 35
Lampiran 3. Perhitungan Seri Konsentrasi ................................................
36
Lampiran 4. Perhitungan Kadar Tertinggi DMSO Ekstrak .......................
37
Lampiran 5. Perhitungan Jumlah Sel Tiap Sumuran .................................
38
Lampiran 6. Data Absorbansi Sel Hasil Uji Aktivitas Sitotoksik............... 39
Lampiran 7. Perhitungan % Sel Hidup Setelah Penambahan Ekstrak
Etanol Biji Srikaya (Annona squamosa L)............................ 40
Lampiran 8. Perhitungan IC50 Ekstrak etanol Biji Srikaya
(Annona squamosa L.) Terhadap Sel T47D........................
ix
42
DAFTAR SINGKATAN
A-549
Human Lung Carcinoma
BCl-2
B-Cell Limphoma 2
BCLXL
B-Cell Limphoma Extra Large
Bel-7402
Human Hepatocellular Carcinoma
CNE2
Human Nasopharyngeal Carcinoma
DMSO
Dimetil sulfoksida
ELISA
Enzyme Linked Immuno Sorbant Assay
FBS
Fetal Bovine Serum
HT-29
Human COLON adenocarcinoma
IC50
Inhibitory Concentration 50%
KLT
Kromatografi Lapis Tipis
K-562
Human Erythtomyeloblastoid Leukemia
LAF
Laminar Air Flow
MCF-7
Human Breast Carcinoma
MTT
3-(4,5-Dimetilltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolium bromide
PBS
Phosphate Buffered Saline
PC-3
Human Prostate Adenocarcinoma
Penstrep
Penicillin Streptomycin
Rf
Retardation fact
ROS
Reactive Oxygen Species
T47D
Human Ductal Breast Epitheal Tumor
UV
Ultraviolet
x
INTISARI
Beberapa penelitian menunjukkan bahwa senyawa asetogenin dalam biji
srikaya mempunyai aktivitas sitotoksik, antiparasit, pestisida, dan imunosupresif.
Telah dilakukan penelitian uji aktivitas sitotoksik ekstrak etanol biji srikaya
(Annona squamosa L.) terhadap sel T47D. Tujuan penelitian ini adalah untuk
mengetahui harga IC50, efek sitotoksik ekstrak etanol biji srikaya terhadap sel
T47D, dan senyawa yang terkandung dalam ekstrak etanol biji srikaya.
Ekstrak etanol biji srikaya dibuat dengan cara maserasi menggunakan
pelarut etanol 96%. Ekstrak diuji aktivitas sitotoksiknya terhadap sel T47D
dengan seri konsentrasi 150; 100; 50; 25; dan 10 µg/mL menggunakan metode
MTT assay dan dibaca pada ELISA reader.
Hasil uji aktivitas sitotoksik menunjukkan bahwa ekstrak etanol biji
srikaya mempunyai efek penghambatan sel kanker payudara dengan nilai IC50
sebesar 62,80 µg/mL. Hasil analisisis kualitatif dengan menggunakan uji
kromatografi lapis tipis menunjukkan adanya kandungan senyawa flavonoid,
alkaloid, dan polifenol.
Kata kunci : Sitotoksik, sel T47D, Annona squamosa L., MTT assay, IC 50
xi