AKTIVITAS SITOTOKSIK EKSTRAK ETANOL KULIT BATANG SRIKAYA (Annona squamosa L.) Aktivitas Sitotoksik Ekstrak Etanol Kulit Batang Srikaya (Annona Squamosa L.) Terhadap Sel T47D.
AKTIVITAS SITOTOKSIK EKSTRAK ETANOL
KULIT BATANG SRIKAYA (Annona squamosa L.)
TERHADAP SEL T47D
SKRIPSI
Oleh:
WORO YULIANA RAHAYU
K100 080 104
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA
2012
i
AKTIVITAS SITOTOKSIK EKSTRAK ETANOL
KULIT BATANG SRIKAYA (Annona squamosa L.)
TERHADAP SEL T47D
SKRIPSI
Diajukan untuk memenuhi salah satu syarat mencapai
Derajat Sarjana Farmasi (S.Farm) pada Fakultas Farmasi
Universitas Muhammadiyah Surakarta
di Surakarta
Oleh:
WORO YULIANA RAHAYU
K 100 080 104
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA
SURAKARTA
2012
ii
PENGESAHAN SKRIPSI
Berjudul:
AKTIVITAS SITOTOKSIK EKSTRAK ETANOL
KULIT BATANG SRIKAYA (Annona squamosa L.)
TERHADAP SEL T47D
Oleh:
WORO YULIANA RAHAYU
K 100 080 104
Dipertahankan di Hadapan Panitia Penguji Skripsi
Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta
Pada tanggal: 8 Maret 2012
Mengetahui,
Fakultas Farmasi
Universitas Muhammadiyah Surakarta
Dekan,
Dr. Muhammad Da’i, M.Si., Apt.
Pembimbing Utama
Pembimbing Pendamping
Dr. Haryoto, M.Sc
Peni Indrayudha, M.Biotech, Apt.
Penguji :
1.
Dr. Muhammad Da’i, M.Si., Apt.
2.
Rosita Melannisa, M.Si., Apt.
3.
Dr. Haryoto, M.Sc
4.
Peni Indrayudha, M.Biotech., Apt.
iii
DEKLARASI
Dengan ini saya menyatakan bahwa dalam skripsi ini tidak terdapat karya
yang pern ah diajukan untuk memperoleh kesarjanaan di suatu perguruan tinggi, dan
sepanjang pengetahuan saya juga tidak terdapat karya atau pendapat yang pernah
ditulis atau diterbitkan oleh orang lain, kecuali yang secara tertulis diacu dalam
naskah ini dan disebutkan dalam daftar pustaka.
Surakarta, 8 Maret 2012
Peneliti
(Woro Yuliana Rahayu)
iv
KATA PENGANTAR
Assalamu’alaikum wr. wb
Alhamdulillah, puji syukur ke hadirat Allah SWT yang telah melimpahkan
rahmat dan hidayah-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi ini.
Skripsi yang berjudul “AKTIVITAS SITOTOKSIK EKSTRAK ETANOL
KULIT BATANG SRIKAYA (Annona squamosa L.) TERHADAP SEL T47D” ini,
disusun untuk memenuhi salah satu syarat guna memperoleh gelar sarjana strata 1
(S1) Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta (UMS).
Penulis menyadari, tanpa adanya partisipasi dari berbagai pihak yang
membimbing dan memberikan bantuan maka skripsi ini tidak akan selesai pada
waktunya. Untuk itu penulis mengucapkan terimakasih kepada pihak-pihak yang
telah membantu menyelesaikannya. Pada kesempatan ini penulis menyampaikan rasa
terimakasih sebesar-besarnya kepada :
1. Dr. Muhammad Da’i, M.Si., Apt., selaku Dekan Fakultas Farmasi Universitas
Muhammadiyah Surakarta, pembimbing akademik, serta penguji.
2. Dr. Haryoto, M.Sc., selaku pembimbing utama
3. Peni Indrayudha, M.Biotech., Apt., selaku pembimbing pendamping.
4. Rosita Melannisa, M.Sc., Apt., selaku penguji.
5. Bapak, Ibu, dan adik serta keluarga besar
6. Cita, Umma, Hefi, Wildan, Desilia, Mustika, Yeni, Adi, Indah, Eva, dan Iwan, tim
peneliti aktivitas sitotoksik.
7. Berbagai pihak yang secara tidak langsung telah membantu baik moral maupun
material dalam penyusunan skripsi ini.
Penulis menyadari bahwa penyusunan skripsi ini masih jauh dari
kesempurnaan, maka kritik dan saran yang bersifat membangun akan sangat berarti
bagi penulis.
v
Akhir kata penulis berharap sekiranya skripsi ini dapat memberikan manfaat
bagi pembaca dan semua pihak, serta agar dipergunakan sebagaimana mestinya.
Wassalamualaikum. wr. wb
Surakarta, 8 Maret 2012
(Penulis)
vi
DAFTAR ISI
Halaman
HALAMAN JUDUL............................................................................................. ii
HALAMAN PENGESAHAN ............................................................................... iii
HALAMAN DEKLARASI................................................................................... iv
KATA PENGANTAR .......................................................................................... v
DAFTAR ISI ......................................................................................................... vii
DAFTAR TABEL ................................................................................................. ix
DAFTAR GAMBAR ............................................................................................ x
DAFTAR LAMPIRAN ......................................................................................... xi
DAFTAR SINGKATAN ...................................................................................... xii
INTISARI.............................................................................................................. xiii
BAB I. PENDAHULUAN .................................................................................... 1
A. Latar Belakang ......................................................................................... 1
B. Rumusan Masalah.................................................................................... 2
C. Tujuan Penelitian ..................................................................................... 2
D. Tinjauan Pustaka...................................................................................... 3
1. Tanaman Srikaya ................................................................................. 3
a. Klasifikasi ....................................................................................... 3
b. Nama Daerah .................................................................................. 3
c. Morfologi Tumbuhan ..................................................................... 3
d. Kegunaan ........................................................................................ 4
e. Kandungan Kimia ........................................................................... 4
2. Kanker ................................................................................................ 5
3. Sel T47D ............................................................................................. 5
4. Uji Sitotoksik ....................................................................................... 6
E. Landasan Teori ................................................................................................ 6
F. Hipotesis.......................................................................................................... 7
vii
BAB II. METODE PENELITIAN ........................................................................ 8
A. Kategori Penelitian ................................................................................. 8
B. Alat dan Bahan ....................................................................................... 8
1) Alat .................................................................................................... 8
2) Bahan ................................................................................................. 8
C. Jalannya Penelitian ................................................................................. 8
1) Determinasi Tanaman ........................................................................ 8
2) Penyiapan Tanaman ........................................................................... 9
3) Ekstraksi ............................................................................................ 9
4) Profil Kromatografi Lapis Tipis ........................................................ 9
5) Uji Aktivitas Sitotoksik ..................................................................... 10
a. Sterilisasi Alat ............................................................................... 10
b. Pembuatan Media Pertumbuhan ................................................... 10
c. Preparasi Sampel ........................................................................... 10
d. Pemanenan Sel .............................................................................. 10
e. Pembuatan Larutan Uji ................................................................. 10
f. Uji Sitotoksik dengan metode MTT .............................................. 11
D. Analisis Data .......................................................................................... 11
BAB III. HASIL DAN PEMBAHASAN.............................................................. 13
A. Determinasi Tanaman ............................................................................ 13
B. Penyarian ................................................................................................ 13
C. Uji Sitotoksik Terhadap Sel T47D dengan Metode MTT ...................... 14
D. Analisis Kromatografi Lapis Tipis ......................................................... 17
BAB IV. KESIMPULAN DAN SARAN ............................................................. 21
A. Kesimpulan ............................................................................................ 21
B. Saran ....................................................................................................... 21
DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................... 22
LAMPIRAN .......................................................................................................... 25
viii
DAFTAR TABEL
Tabel 1.
Hasil Uji Sitotoksik pada ELISA reader ............................................. 16
Tabel 2.
Identifikasi Senyawa dengan Beberapa Pereaksi Semprot .................. 18
ix
DAFTAR GAMBAR
Gambar 1. Morfologi Sel T47D dan Kristal Formazan ...................................... 15
Gambar 2. Grafik Hubungan Log Konsentrasi vs % Sel Hidup ......................... 16
Gambar 3. Kromatogram Hasil KLT .................................................................. 18
Gambar 4. Senyawa N-Nitrosoxylopine .............................................................. 19
x
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1. Surat Keterangan Determinasi ......................................................... 28
Lampiran 2. Perhitungan Seri Konsentrasi .......................................................... 29
Lampiran 3. Perhitungan Kepadatan Sel .............................................................. 30
Lampiran 4. Data Uji Sitotoksik dengan Metode MTT ....................................... 31
Lampiran 5. Data Akibat Perlakuan Ekstrak Etanol ............................................ 32
Lampiran 6. Perhitungan % Sel Hidup ................................................................ 33
Lampiran 7. Perhitungan Harga IC50 ................................................................... 35
Lampiran 8. Foto Tanaman Srikaya ...................................................................... 36
Lampiran 9. Foto ELISA Reader .......................................................................... 37
xi
DAFTAR SINGKATAN
ELISA
: eLinked Immunosorben Assay
FBS
: Fetal Bovine Serum
IC50
: Inhibitory Concentration 50
MTT
: ((3-4,5-dimethyltiazol-2-yl)-2,5-diphenyltrezolium bromide))
PBS
: Phosphate Buffered Saline
Penstrep
: Penisilin Streptomisin
RPMI
: Rosewell Park Memorial Institut
SDS
: Sodium Dodecyl Sulphate
DMSO
: Dimethyl Sulfoxide
UV
: Ultra Violet
Vs
: Versus
KLT
: Kromatografi Lapis Tipis
Rf
: Retardation Factor
xii
INTISARI
Srikaya (Annona squamosa L.) merupakan salah satu tanaman yang
berkhasiat sebagai antikanker. Beberapa penelitian sebelumnya menunjukkan bahwa
senyawa dalam daun dan biji srikaya mempunyai aktivitas sebagai antikanker.
Penelitian ini dilakukan untuk mengeksplorasi potensi sitotoksik ekstrak etanol kulit
batang srikaya terhadap sel kanker payudara T47D.
Ekstrak etanol kulit batang srikaya (Annona squamosa L.) diperoleh dengan
menggunakan metode maserasi dengan pelarut etanol 96%. Uji sitotoksik dilakukan
dengan metode MTT dengan menggunakan 4 seri konsentrasi (500, 250, 150, dan
100 µg/mL). Potensi ketoksikan ekstrak etanol kulit batang srikaya (Annona
squamosa L.) terhadap sel
kanker T47D dihitung berdasarkan persentase
penghambatan sel hidup yang selanjutnya dicari IC50nya. Analisa kandungan
senyawa yag terdapat dalam ekstrak etanol kulit batang srikaya (Annona squamosa
L.) dilakukan dengan Kromatografi Lapis Tipis (KLT) menggunakan fase gerak
heksan:etil asetat (7:3) v/v dan fase diam silika gel GF254. Deteksi bercak
menggunakan reagen semprot FeCl3, sitroborat, dan Dragendorff.
Hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak etanol kulit batang srikaya
(Annona squamosa L.) mempunyai aktivitas sitotoksik yang kurang poten terhadap
sel kanker T47D dengan nilai IC50 sebesar 237,317 µg/mL. Hasil KLT menunjukkan
bahwa ekstrak etanol kulit batang srikaya (Annona squamosa L.) mengandung
senyawa golongan flavonoid, alkaloid, dan polifenol.
Kata kunci : Sitotoksik, srikaya (Annona squamosa L.), sel T47D, ekstrak etanol
xiii
KULIT BATANG SRIKAYA (Annona squamosa L.)
TERHADAP SEL T47D
SKRIPSI
Oleh:
WORO YULIANA RAHAYU
K100 080 104
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA
2012
i
AKTIVITAS SITOTOKSIK EKSTRAK ETANOL
KULIT BATANG SRIKAYA (Annona squamosa L.)
TERHADAP SEL T47D
SKRIPSI
Diajukan untuk memenuhi salah satu syarat mencapai
Derajat Sarjana Farmasi (S.Farm) pada Fakultas Farmasi
Universitas Muhammadiyah Surakarta
di Surakarta
Oleh:
WORO YULIANA RAHAYU
K 100 080 104
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA
SURAKARTA
2012
ii
PENGESAHAN SKRIPSI
Berjudul:
AKTIVITAS SITOTOKSIK EKSTRAK ETANOL
KULIT BATANG SRIKAYA (Annona squamosa L.)
TERHADAP SEL T47D
Oleh:
WORO YULIANA RAHAYU
K 100 080 104
Dipertahankan di Hadapan Panitia Penguji Skripsi
Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta
Pada tanggal: 8 Maret 2012
Mengetahui,
Fakultas Farmasi
Universitas Muhammadiyah Surakarta
Dekan,
Dr. Muhammad Da’i, M.Si., Apt.
Pembimbing Utama
Pembimbing Pendamping
Dr. Haryoto, M.Sc
Peni Indrayudha, M.Biotech, Apt.
Penguji :
1.
Dr. Muhammad Da’i, M.Si., Apt.
2.
Rosita Melannisa, M.Si., Apt.
3.
Dr. Haryoto, M.Sc
4.
Peni Indrayudha, M.Biotech., Apt.
iii
DEKLARASI
Dengan ini saya menyatakan bahwa dalam skripsi ini tidak terdapat karya
yang pern ah diajukan untuk memperoleh kesarjanaan di suatu perguruan tinggi, dan
sepanjang pengetahuan saya juga tidak terdapat karya atau pendapat yang pernah
ditulis atau diterbitkan oleh orang lain, kecuali yang secara tertulis diacu dalam
naskah ini dan disebutkan dalam daftar pustaka.
Surakarta, 8 Maret 2012
Peneliti
(Woro Yuliana Rahayu)
iv
KATA PENGANTAR
Assalamu’alaikum wr. wb
Alhamdulillah, puji syukur ke hadirat Allah SWT yang telah melimpahkan
rahmat dan hidayah-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi ini.
Skripsi yang berjudul “AKTIVITAS SITOTOKSIK EKSTRAK ETANOL
KULIT BATANG SRIKAYA (Annona squamosa L.) TERHADAP SEL T47D” ini,
disusun untuk memenuhi salah satu syarat guna memperoleh gelar sarjana strata 1
(S1) Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta (UMS).
Penulis menyadari, tanpa adanya partisipasi dari berbagai pihak yang
membimbing dan memberikan bantuan maka skripsi ini tidak akan selesai pada
waktunya. Untuk itu penulis mengucapkan terimakasih kepada pihak-pihak yang
telah membantu menyelesaikannya. Pada kesempatan ini penulis menyampaikan rasa
terimakasih sebesar-besarnya kepada :
1. Dr. Muhammad Da’i, M.Si., Apt., selaku Dekan Fakultas Farmasi Universitas
Muhammadiyah Surakarta, pembimbing akademik, serta penguji.
2. Dr. Haryoto, M.Sc., selaku pembimbing utama
3. Peni Indrayudha, M.Biotech., Apt., selaku pembimbing pendamping.
4. Rosita Melannisa, M.Sc., Apt., selaku penguji.
5. Bapak, Ibu, dan adik serta keluarga besar
6. Cita, Umma, Hefi, Wildan, Desilia, Mustika, Yeni, Adi, Indah, Eva, dan Iwan, tim
peneliti aktivitas sitotoksik.
7. Berbagai pihak yang secara tidak langsung telah membantu baik moral maupun
material dalam penyusunan skripsi ini.
Penulis menyadari bahwa penyusunan skripsi ini masih jauh dari
kesempurnaan, maka kritik dan saran yang bersifat membangun akan sangat berarti
bagi penulis.
v
Akhir kata penulis berharap sekiranya skripsi ini dapat memberikan manfaat
bagi pembaca dan semua pihak, serta agar dipergunakan sebagaimana mestinya.
Wassalamualaikum. wr. wb
Surakarta, 8 Maret 2012
(Penulis)
vi
DAFTAR ISI
Halaman
HALAMAN JUDUL............................................................................................. ii
HALAMAN PENGESAHAN ............................................................................... iii
HALAMAN DEKLARASI................................................................................... iv
KATA PENGANTAR .......................................................................................... v
DAFTAR ISI ......................................................................................................... vii
DAFTAR TABEL ................................................................................................. ix
DAFTAR GAMBAR ............................................................................................ x
DAFTAR LAMPIRAN ......................................................................................... xi
DAFTAR SINGKATAN ...................................................................................... xii
INTISARI.............................................................................................................. xiii
BAB I. PENDAHULUAN .................................................................................... 1
A. Latar Belakang ......................................................................................... 1
B. Rumusan Masalah.................................................................................... 2
C. Tujuan Penelitian ..................................................................................... 2
D. Tinjauan Pustaka...................................................................................... 3
1. Tanaman Srikaya ................................................................................. 3
a. Klasifikasi ....................................................................................... 3
b. Nama Daerah .................................................................................. 3
c. Morfologi Tumbuhan ..................................................................... 3
d. Kegunaan ........................................................................................ 4
e. Kandungan Kimia ........................................................................... 4
2. Kanker ................................................................................................ 5
3. Sel T47D ............................................................................................. 5
4. Uji Sitotoksik ....................................................................................... 6
E. Landasan Teori ................................................................................................ 6
F. Hipotesis.......................................................................................................... 7
vii
BAB II. METODE PENELITIAN ........................................................................ 8
A. Kategori Penelitian ................................................................................. 8
B. Alat dan Bahan ....................................................................................... 8
1) Alat .................................................................................................... 8
2) Bahan ................................................................................................. 8
C. Jalannya Penelitian ................................................................................. 8
1) Determinasi Tanaman ........................................................................ 8
2) Penyiapan Tanaman ........................................................................... 9
3) Ekstraksi ............................................................................................ 9
4) Profil Kromatografi Lapis Tipis ........................................................ 9
5) Uji Aktivitas Sitotoksik ..................................................................... 10
a. Sterilisasi Alat ............................................................................... 10
b. Pembuatan Media Pertumbuhan ................................................... 10
c. Preparasi Sampel ........................................................................... 10
d. Pemanenan Sel .............................................................................. 10
e. Pembuatan Larutan Uji ................................................................. 10
f. Uji Sitotoksik dengan metode MTT .............................................. 11
D. Analisis Data .......................................................................................... 11
BAB III. HASIL DAN PEMBAHASAN.............................................................. 13
A. Determinasi Tanaman ............................................................................ 13
B. Penyarian ................................................................................................ 13
C. Uji Sitotoksik Terhadap Sel T47D dengan Metode MTT ...................... 14
D. Analisis Kromatografi Lapis Tipis ......................................................... 17
BAB IV. KESIMPULAN DAN SARAN ............................................................. 21
A. Kesimpulan ............................................................................................ 21
B. Saran ....................................................................................................... 21
DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................... 22
LAMPIRAN .......................................................................................................... 25
viii
DAFTAR TABEL
Tabel 1.
Hasil Uji Sitotoksik pada ELISA reader ............................................. 16
Tabel 2.
Identifikasi Senyawa dengan Beberapa Pereaksi Semprot .................. 18
ix
DAFTAR GAMBAR
Gambar 1. Morfologi Sel T47D dan Kristal Formazan ...................................... 15
Gambar 2. Grafik Hubungan Log Konsentrasi vs % Sel Hidup ......................... 16
Gambar 3. Kromatogram Hasil KLT .................................................................. 18
Gambar 4. Senyawa N-Nitrosoxylopine .............................................................. 19
x
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1. Surat Keterangan Determinasi ......................................................... 28
Lampiran 2. Perhitungan Seri Konsentrasi .......................................................... 29
Lampiran 3. Perhitungan Kepadatan Sel .............................................................. 30
Lampiran 4. Data Uji Sitotoksik dengan Metode MTT ....................................... 31
Lampiran 5. Data Akibat Perlakuan Ekstrak Etanol ............................................ 32
Lampiran 6. Perhitungan % Sel Hidup ................................................................ 33
Lampiran 7. Perhitungan Harga IC50 ................................................................... 35
Lampiran 8. Foto Tanaman Srikaya ...................................................................... 36
Lampiran 9. Foto ELISA Reader .......................................................................... 37
xi
DAFTAR SINGKATAN
ELISA
: eLinked Immunosorben Assay
FBS
: Fetal Bovine Serum
IC50
: Inhibitory Concentration 50
MTT
: ((3-4,5-dimethyltiazol-2-yl)-2,5-diphenyltrezolium bromide))
PBS
: Phosphate Buffered Saline
Penstrep
: Penisilin Streptomisin
RPMI
: Rosewell Park Memorial Institut
SDS
: Sodium Dodecyl Sulphate
DMSO
: Dimethyl Sulfoxide
UV
: Ultra Violet
Vs
: Versus
KLT
: Kromatografi Lapis Tipis
Rf
: Retardation Factor
xii
INTISARI
Srikaya (Annona squamosa L.) merupakan salah satu tanaman yang
berkhasiat sebagai antikanker. Beberapa penelitian sebelumnya menunjukkan bahwa
senyawa dalam daun dan biji srikaya mempunyai aktivitas sebagai antikanker.
Penelitian ini dilakukan untuk mengeksplorasi potensi sitotoksik ekstrak etanol kulit
batang srikaya terhadap sel kanker payudara T47D.
Ekstrak etanol kulit batang srikaya (Annona squamosa L.) diperoleh dengan
menggunakan metode maserasi dengan pelarut etanol 96%. Uji sitotoksik dilakukan
dengan metode MTT dengan menggunakan 4 seri konsentrasi (500, 250, 150, dan
100 µg/mL). Potensi ketoksikan ekstrak etanol kulit batang srikaya (Annona
squamosa L.) terhadap sel
kanker T47D dihitung berdasarkan persentase
penghambatan sel hidup yang selanjutnya dicari IC50nya. Analisa kandungan
senyawa yag terdapat dalam ekstrak etanol kulit batang srikaya (Annona squamosa
L.) dilakukan dengan Kromatografi Lapis Tipis (KLT) menggunakan fase gerak
heksan:etil asetat (7:3) v/v dan fase diam silika gel GF254. Deteksi bercak
menggunakan reagen semprot FeCl3, sitroborat, dan Dragendorff.
Hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak etanol kulit batang srikaya
(Annona squamosa L.) mempunyai aktivitas sitotoksik yang kurang poten terhadap
sel kanker T47D dengan nilai IC50 sebesar 237,317 µg/mL. Hasil KLT menunjukkan
bahwa ekstrak etanol kulit batang srikaya (Annona squamosa L.) mengandung
senyawa golongan flavonoid, alkaloid, dan polifenol.
Kata kunci : Sitotoksik, srikaya (Annona squamosa L.), sel T47D, ekstrak etanol
xiii