Hubungan Imunoekspresi Epidermal Growth Factor Receptor (EGFR) dengan Stadium Dukes pada Karsinoma Kolorektal

  Patologi

  Hubungan Imunoekspresi Epidermal Growth Factor Receptor (EGFR) Majalah

  Fenny Ariyanni, Sri Suryanti, Abdul Hadi Hassan, Bethy S. Hernowo

Hubungan Imunoekspresi Epidermal Growth Factor Receptor

(EGFR) dengan Stadium Dukes pada Karsinoma Kolorektal

  Fenny Ariyanni, Sri Suryanti, Abdul Hadi Hassan, Bethy S. Hernowo Departemen Patologi Anatomik, Fakultas Kedokteran, Universitas Padjadjaran Bandung

  ABSTRAK Latar belakang Epidermal growth factor receptor (EGFR) berperan dalam patogenesis dan progresivitas karsinoma kolorektal.

  Stadium Dukes menunjukkan luas penyebaran tumor dan digunakan sebagai pedoman terapi. Pada stadium Dukes A tumor masih terbatas pada tunika submukosa, stadium Dukes B tumor sudah menembus tunika muskularis dan stadium Dukes C sudah bermetastasis ke kelenjar getah bening. Penggunaan kemoterapi adjuvan pada stadium Dukes B masih kontroversi sehingga hanya diberikan pada stadium Dukes B yang high risk. Diperlukan penanda molekuler yang dapat menunjukkan tumor yang agresif. Pada penelitian ini akan diteliti hubungan imunoekspresi EGFR dengan stadium Dukes pada karsinoma kolorektal. EGFR diharapkan dapat digunakan menjadi penanda karsinoma kolorektal yang agresif.

  Metode Pewarnaan imunohistokimia EGFR dilakukan terhadap 45 blok parafin karsinoma kolorektal yang dilakukan kolektomi (masing-masing stadium Dukes A, B, C 15 kasus). Hasilnya dihubungkan dengan stadium Dukes.

  Hasil Pada stadium Dukes A sebanyak 2 kasus (13%) menunjukkan imunoekspresi positif dan stadium Dukes B sebanyak 8 kasus (53%) menunjukkan imunoekspresi positif dan pada stadium Dukes C sebanyak 11 kasus (73%) menunjukkan imunoekspresi positif. Imunoekspresi EGFR secara statistik (p=0.004, uji Chi-Square) lebih sering ditemukan pada stadium Dukes C. EGFR berperan penting dalam diferensiasi dan proliferasi sel. Pada sel normal pengaktifan sinyal EGFR menyebabkan proliferasi sel, migrasi, metastasis, penghindaran apoptosis dan angiogenesis.

  Kesimpulan Imunoekspresi EGFR lebih sering ditemukan pada stadium Dukes C dibanding Dukes A dan B. Kata kunci: EGFR, imunoekspresi, karsinoma kolorektal, stadium Dukes. ABSTRACT Background Epidermal growth factor receptor immunoexpression may clarify the effects of the pathogenesis and determine the prognosis of colorectal carcinoma (CRC).

  Dukes’ stage explained the extension of the tumor. Dukes’ stage A was defined as malignant tumour in which growth extends into the submucosa, but not into the muscle coat; Dukes’ stage B was defined as the tumour growth extends into the muscle coat; and Dukes’ stage C was defined as the presence of lymph node metastases. Adjuvant chemotherapy in Dukes

  ’ stage B is controversial, which only given to high- risk Dukes’ stage B. Hence, we need to identify high-risk Dukes’ stage B. This research will study association EGFR clone H11 and CRC Dukes

  ’ stage.

  Methods Immunohistochemistry was performed in paraffin-embedded specimens of 45 cases colorectal carcinoma (each Dukes

  ’ stage A, B, C was 15 cases) for the assesment of clone H11 EGFR expression. The results were correlated with colorectal carcinoma Dukes’ stage.

  Results At Dukes ’ stage A there were 2 cases (13%) showed positive immunoexpression and Dukes’ stage B there were 8 cases (53%) showed positive immunoexpression and Dukes ’ stage C there were 11 cases (73%) showed positive immunoexpression. clone H11. EGFR clone H11 immunoexpression (p=0.004, Chi-Square test) was significantly more frequent in Dukes ’ stage C. EGFR play an important role in cell differentiation and proliferation. The activation of EGFR signaling would lead to cell proliferation, migration, metastasis, evasion of apoptosis or angiogenesis.

  Conclusion EGFR immunoexpression was more frequent in colorectal carcinoma Duke s’ stage C explain clearly that EGFR play important role in pathogenesis colorectal carcinoma.

  Key words: colorectal carcinoma, Dukes’ stage, EGFR, immunoexpression. Hubungan Imunoekspresi Epidermal Growth Factor Receptor (EGFR) Majalah

  Patologi Fenny Ariyanni, Sri Suryanti, Abdul Hadi Hassan, Bethy S. Hernowo PENDAHULUAN

  Karsinoma kolorektal adalah tumor ganas epitel kolon atau rektum ^{Karsinoma kolorektal merupakan keganasan tersering urutan ketiga pada pria dan urutan kedua pada wanita Konsensus Asia Pasifik melaporkan adanya peningkatan insidensi karsinoma kolorektal di}

  Asia selama 2 dekade ini Stadium karsinoma kolorektal memberi- kan informasi tentang luasnya penyebaran tumor, menentukan prognosis dan dapat dipergunakan sebagai panduan penatalaksana- an serta menilai respon terapPada stadium Dukes A tumor masih terbatas pada tunika submukosa, stadium Dukes B tumor sudah menembus tunika muskularis dan stadium Dukes C sudah bermetastasis ke kelenjar getah bening ^{Karsinoma kolorektal stadium Dukes B meliputi berbagai macam tumor. Sebagian hanya mengenai tunika muskularis dan semen- tara yang lain sudah menunjukkan penyebaran yang luas tetapi belum bermetastasis ke kelenjar getah bening. Hal ini akan memiliki efek yang besar terhadap prognosis dan sebagian dari karsinoma kolorektal stadium Dukes B tersebut perlu diberikan kemoterapi adjuvan Selain itu tingkat kesintasan pada sebagian karsinoma kolorektal stadium Dukes B mencapai 70-80% setelah 5 tahun pembedahan, pada karsinoma kolorektal stadium Dukes B yang berisiko tinggi memiliki clinical outcome yang sama dengan penderita karsinoma kolorektal stadium III (Dukes C) Penanda molekuler diharapkan dapat menjadi parameter yang lebih baik sebagai panduan penatalaksanaan penderita karsinoma kolorektal dibandingkan dengan kriteria klinis dan histopatologiEpidermal}

  growth factor receptor (EGFR) diharapkan dapat

  digunakan sebagai penanda molekular karsi- noma kolorektal yang agresif khususnya pada stadium Dukes B dapat EGFR diharapkan dapat dipakai menjadi panduan untuk pemberian kemoterapi adjuvan.

  EGFR merupakan reseptor tirosin kinase transmembran seberat 170-kDa masuk dalam famili reseptor membran sel ErbB. Pada sel normal, sinyal EGFR dimulai dengan adanya pengaktifan ligan dan akan mengaktifkan jalur sinyal transduksi multiple; yaitu: jalur MAPK dan jalur phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K) protein kinase B (AKT). Jalur-jalur tersebut menyebab- kan pengaktifan berbagai faktor transkripsi yang akan berdampak pada respon selular seperti proliferasi, migrasi, apoptosisEkspresi protein EGFR dapat dideteksi melalui pemerik- saan imunohistokimia, berhubungan dengan progresivitas tumor dan tingkat survival yang buruk pada berbagai keganasan ^{EGFR dilaporkan dapat memberikan ekspresi berlebih pada 25-82% karsinoma kolorektal, beberapa laporan penelitian melaporkan ekspresi protein berlebih (didefinisikan sebagai 2+ dan/atau 3+ atau pada >50% sel tumor) terjadi pada 35-49% kasus, tetapi signifikasi klinis ekspresi berlebih EGFR pada karsinoma kolon belum jelas} Berbagai macam ekspresi EGFR pada karsi- noma kolorektal telah dilaporkan pada literatur baik dalam interpretasi pulasan dan standar metode pulasan pelaporan EGFR dan antibodi yang dipakai masih kontroversiPenelitian ini bertujuan meneliti hubungan antara imuno- ekspresi EGFR clone H11 dengan stadium Dukes pada karsinoma kolorektal.

  METODE PENELITIAN Sampel penelitian

  Empat puluh lima buah blok parafin dari penderita karsinoma kolon atau rektum stadium Dukes A, B, dan C masing-masing 15 kasus, berasal dari operasi kolektomi di Laboratorium Patologi Anatomik Fakultas Kedokteran Uni- versitas Padjadjaran tahun 2011-2012 dipilih sebagai sampel penelitian ini. Informed consent didapatkan dari penderita diwakili (oleh Kepala Departemen Patologi Anatomik Fakultas Kedok- teran Universitas Padjadjaran Bandung).

  Pewarnaan Imunohistokimia EGFR

  Seluruh sediaan Hematoxylin Eosin diperiksa kembali dan dilakukan penilaian stadium Dukes dan dipilih blok parafin massa tumor yang representatif, dilakukan pemotongan serial blok parafin 4 µm dan ditempel pada kaca objek yang sudah dilakukan coating dan dipulas dengan antibodi EGFR clone H11 (Dako) dengan teknik pulasan imunohistokimia labeled streptavidin/

  streptavidin-biotin (LSAB).

  Antibodi monoklonal EGFR clone H11 dapat mendeteksi EGFR dengan berat molekul 170-kAntibodi tersebut dipakai dalam laboratorium untuk mengidentifikasi EGFR baik pada sel normal maupun sel neoplasm Setelah dilakukan deparafinisasi dan dehidrasi, dilakukan proses antigen retrieval menggunakan enzim carezyme III pronase kit (PRT 957 Kh)

  Patologi

  Hubungan Imunoekspresi Epidermal Growth Factor Receptor (EGFR) Majalah

  Fenny Ariyanni, Sri Suryanti, Abdul Hadi Hassan, Bethy S. Hernowo

  Tabel 1. Karakteristik kasus karsinoma kolorektal dengan pengenceran 1:4 diinkubasi selama 15 selama 1 Januari 2011 sampai 31 Desember 2012 di menit, kemudian dibilas PBS secara sekuensial, Laboratorium Patologi Anatomik Fakultas Kedokteran ditetesi blocking serum dibilas PBS dan Univniversitas Padjadjaran-RSUP. Dr. Hasan Sadikin, diteteskan mouse monoclonal antihuman EGFR Bandung. (clone H11) dari DAKO dengan pengenceran

  Karakteristik n %

  1:200 dilakukan inkubasi selama 1 jam, dibilas

  Usia

  PBS diberi antibodi sekunder Trekkie universal Rerata ± SD : 52,7 ± 12,8 tahun

  Jenis Kelamin link (Biocare Medical), dibilas PBS, dilabel

  Laki-laki

  25

  56 TrekAvidin HRP, ditetes larutan kromogen Perempuan

  20

  44 Betazoid DAB, dicuci air mengalir, dilakukan Varian histopatologi counterstain dengan hematoxylin Mayer.

  Adenokarsinoma

  34

  76 Adenokarsinoma berdegenerasi musin

  1

  2 Musinus adenokarsinoma

  9

  20 Penilaian Imunoekspresi EGFR Signet-ring cell carcinoma

  1

  2 Sediaan imunohistokimia diperiksa mengguna- Derajat diferensiasi histopatologi

  kan mikroskop cahaya oleh 4 peneliti. Variasi

  Baik

  24

  53

  penilaian diatasi dengan menilai ulang secara

  Sedang

  9

  20

  bersama. Imunoekspresi EGFR dilihat berdasar-

  Buruk

  1

  2 Tidak dinilai

  11

  25

  kan terpulasnya membran sel dan sedikit

  45 100 Total subjek penelitian ( Ʃ)

  sitoplasma di daerah dekat membran sel menjadi berwarna coklat. Tumor dikatakan Dari tabel tersebut ditunjukkan bahwa positif bila membran sel tumor dan sedikit usia rerata adalah 52,7 tahun (Standar Deviasi sitoplasma di daerah membran sel berwarna (SD)=12,8 tahun). Jenis kelamin laki-laki seba- coklat. Kontrol positif adalah karsinoma sel nyak 25 kasus (56%) dan perempuan 20 kasus skuamousa paru. Kontrol negatif yang diguna-

  (44%). Varian histopatologi adenocarcinoma kan adalah sentrum germinal tonsil menempati frekuensi terbanyak sebanyak 34

  Imunoekspresi dinilai menggunakan kasus (76%). Derajat diferensiasi histopatologi analisis semikuantitatif berdasarkan kriteria baik merupakan kasus yang paling banyak yaitu Splinder dkk. Penilaian intensitas pewarnaan sebanyak 24 kasus (53%). diberi skor 0=negatif, 1=lemah, 2=sedang dan 3=kuat; (Gambar 1). Distribusi sel yang positif dinilai dengan pembagian skor 0=0% dari massa tumor, 1=1-10%, 2=11-25%, 3=26-50% dan 4=>50%. Untuk penilaian akhir berupa skor yang dinilai skor distribusi dikalikan dengan skor _{Skor tersebut dikelompokkan menjadi: kelompok negatif untuk skor 0, dan kelompok positif untuk skor 1-12.}

  Analisis Statistik

  Data penelitian berupa data kategorik tidak berpasangan, analisis bivariabel yang digunakan uji Chi-square dengan p=0,05 menggunakan program SPSS versi 20.

  HASIL Gambar 1. Pulasan imunoekspresi EGFR clone H11.

  Selama periode 1 Januari 2011-31 Desember

  A. Intensitas kuat; B. Intensitas sedang; C. Intensitas 2012 didapatkan sebanyak 63 kasus karsinoma lemah. Tanda panah menunjukkan membran sel tumor yang berwarna coklat sesuai intensitas pewar- kolorektal dan dipilih 45 kasus yang memeuhi naan (pembesaran 400x). kriteria inklusi sehingga masing-masing terdiri dari 15 kasus stadium Dukes A, B, dan C.

  Imunoekspresi EGFR clone H11 pada Karakteristik pasien yang kasus karsinoma penelitian ini dinilai dari terpulasnya membran kolorektal disajikan pada Tabel 1. sel menjadi berwarna coklat setelah diberikan Hubungan Imunoekspresi Epidermal Growth Factor Receptor (EGFR) Majalah

  Patologi Fenny Ariyanni, Sri Suryanti, Abdul Hadi Hassan, Bethy S. Hernowo

  Hasil analisis statistik mengunakan uji

  EGFR ditentukan melalui pemeriksaan imuno- histokimia dan sangat bergantung pada tipe antibodi, protokol dan sistem skor dan cutoffs yang digunakan

  EGFR clone H11 pada penelitian ini menunjuk- kan frekuensi imunoekspresi EGFR clone H11 sebanyak 21 kasus (47%). Frekuensi ekspresi berlebih EGFR ini mirip dengan hasil penelitian yang dilakukan oleh Hans dkk yang menggu- nakan pemeriksaan imunohistokimia EGFR dengan antibodi monoklonal clone H11 dan antibodi PharmDx (clone 2-18C9) pada 52 kasus penderita yang telah diterapi dengan usia median 53,5 tahun. Hasil penelitian Hans dkk. adalah sebagai berikut: dari 27 penderita dengan hasil pemeriksaan imunohistokimia EGFR yang dapat dievaluasi; 12 penderita (44,4%) yang menggunakan antibodi clone H11 memberikan hasil positif dan 26 penderita 96,3% memberikan hasil positif menggunakan the PharmDx kit EGFR merupakan biomarker kanker yang paling banyak diteliti dan sudah tersedia terapi targetnya pada terapi kank ^Ekspresi

  Karsinoma kolorektal merupakan keganasan pada pria dan wanita urutan ketiga terbanyak di dunia dan penyebab kematian kedua terbanyak di Amerika SerikDi Indonesia dari berbagai laporan terdapat kenaikan jumlah kasus tetapi belum ada angka yang pasti berapa insiden karsinoma kolorektal ^{Kasus karsinoma kolo- rektal berjenis kelamin laki-laki (25 kasus/56%) lebih banyak dibandingkan kasus karsinoma kolorektal berjenis kelamin perempuan (20 kasus/44%). Hal ini sesuai dengan angka insi- den karsinoma kolorektal per 100.000 penduduk di Indonesia yang lebih banyak mengenai laki- laki, dengan insiden sebagai berikut: 19,1 untuk laki-laki dan 15,6 untuk perempuan seperti penelitian epidemiologi karsinoma kolorektal di Indonesia yang dilakukan oleh Abdullah dkk. pada tahun 201 Hasil pemeriksaan imunohistokimia}

  DISKUSI

  antara hasil imunoekspresi EGFR clone H11 dengan stadium Dukes pada karsinoma kolo- rektal p=0,004 yang artinya hasil imunoekspresi EGFR clone H11 positif lemah sampai positif kuat lebih banyak ditemukan pada stadium Dukes C.

  Chi-Square menunjukkan terdapat hubungan

  Stadium Dukes A dan stadium Dukes B paling banyak memberikan hasil tidak reaktif terhadap antibodi EGFR clone H11 yaitu sebanyak 13 kasus (87%) dan 7 kasus (47%). Pada stadium Dukes C sebanyak 11 kasus (73%) memberikan hasil positif lemah sampai positif kuat terhadap antibodi EGFR clone H11.

  antibodi primernya. Hasil pulasan imunohisto- kimia EGFR clone H11 pada penelitian ini 21 kasus (47%) memberikan imunoekspresi EGFR

  Keterangan: *signifikan (p<0,05) dengan uji Chi-Square OR Dukes C = 17,88 (2,15-196,97)bermakna.

  Positif 2 (13) 8 (53) 11 (73) 21 (47) Negatif 13 (87) 7 (47) 4 (27) 24 (53) Total 15 (100) 15 (100) 15 (100) 45 (100) p=0,004*

  (%) Dukes A Dukes B Dukes C n (%) n (%) n (%) EGFR clone H11

  Imunoeks- presi Stadium Total

  Tabel 2. Hasil imunoekspresi EGFR clone H11 berdasarkan Stadium Dukes karsinoma kolorektal.

  clone H11 positif (imunoreaktif) dan 24 kasus (53%) tidak reaktif seperti pada Tabel 2.

  Hasil pemeriksaan imunohistokimia EGFR penelitian ini menunjukkan adanya hubungan antara imunoekspresi EGFR dengan stadium Dukes pada karsinoma kolorektal dengan p=0,004. Hasil penelitian ini sesuai dengan penelitian yang dilakukan oleh Mokhtari dkk. yang meneliti hubungan imunoekspresi EGFR dengan status metastasis ke kelenjar getah bening dan gradasi histopatologi pada karsinoma kolorektal Pada beberapa laporan yang dikutip oleh Spano dkk. disebutkan bahwa imuno- ekspresi EGFR berhubungan dengan penyakit bersifat lebih agresif, meningkatkan risiko metastasis, stadium tumor yang tinggi dan tingkat metastasis ke kelenjar getah bening mesenterium yang lebih tinggi ^{Spano dkk dalam penelitiannya tentang dampak imuno- ekspresi EGFR terhadap prognosis dan kesintasan penderita karsinoma kolorektal mendapatkan adanya hubungan antara imuno- ekpresi EGFR dengan stadium tumor ber- dasarkan sistem Tumor Node and Metastasis (TNM) tetapi tidak mendapatkan hubungan antara imunoekspresi EGFR dengan prognosis yang lebih buruk atau overall survival yang lebih pendek, sehingga walaupun EGFR masih merupakan faktor prognosis yang kontroversial Hubungan Imunoekspresi Epidermal Growth Factor Receptor (EGFR) Majalah}

  Patologi Fenny Ariyanni, Sri Suryanti, Abdul Hadi Hassan, Bethy S. Hernowo

  The Dukes staging system: a cornerstone in the clinical management of colorectal cancer. Lancet Oncol. 2009;10:1128.

  11. Krasinskas AM. EGFR Signaling in Colorectal Carcinoma. Pathol Res Int.

  10. Citri A, Yarden Y. EGF-ERBB signalling: towards the systems level. Nat Rev Mol Cell Biol. 2006; 7: 505-16.

  9. De Hertogh G, Geboes KP. Practical and molecular evaluation of colorectal cancer: new roles for the pathologist in the era of targeted therapy. Arch Pathol Lab Med. 2010; 134: 853-63.

  Clinicopathologic significance of EGFR and HER-2/neu in colorectal adenocarcinomas. Cancer J. 2006; 12: 229-36.

  8. Kountourakis P, Pavlakis K, Psyrri A, Rontogianni D, Xiros N, Patsouris E, et al.

  7. Johnston PG. Stage II colorectal cancer: to treat or not to treat. Oncologist. 2005; 10: 332-4.

  6. Wu JS. Rectal cancer staging. Clin Colon Rectal Surg. 2007; 20: 148-57.

  5. Morris EJ, Maughan NJ, Forman D, Quirke P. Who to treat with adjuvant therapy in Dukes B/stage II colorectal cancer? The need for high quality pathology. Gut. 2007; 56: 1419-25.

  4. Haq AI, Schneeweiss J, Kalsi V, Arya M.

  tetapi imunoekspresi EGFR tetap berperan penting dalam memutuskan pemberian terapi adjuvan ^{Terdapat beberapa perbedaan pene- litan Spano dkk. dengan penelitian ini yaitu: antibodi yang digunakan adalah antibodi mono- klonal EGFR/113 dari Novocastra dan skor interpretasi yang berbeda pula.}

  3. Sung JJ, Lau JY, Young GP, Sano Y, Chiu HM, Byeon JS, et al. Asia Pacific consensus recommendations for colorectal cancer screening. Gut. 2008; 57: 1166-76.

  2. Ferlay J, Shin HR, Bray F, Forman D, Mathers C, Parkin DM. Estimates of worldwide burden of cancer in 2008: GLOBOCAN 2008. Int J Cancer. 2010; 127: 2893-917.

  Carcinoma of the colon and rectum. In: Bosman F, Carneiro F, Hruban R, Theise N, editors. World Health Organization classification of tumours pathology and genetics of tumours of the digestive system. 4 ed. Lyon: IARC Press; 2010.

  DAFTAR PUSTAKA 1. Hamilton SR, Bosman F, Boffeta P.

  Imunoekspresi EGFR lebih sering ditemukan pada stadium Dukes C dibanding Dukes A dan B.

  Mutasi KRAS, BRAF dan PIK3CA merupakan faktor prediksi terhadap pemberian terapi target EGFR dengan respon yang rendah/tidak berespo KESIMPULAN

  Pada awalnya pemberian terapi anti- EGFR didasarkan pada pemeriksaan imuno- histokimia EGFR, tetapi hanya beberapa kelom- pok kecil karsinoma kolorektal bermetastasis yang berespon terhadap terapi anti-EGFR.

  Hasil penelitian ini sesuai dengan teori patogenesis, sebagai berikut: pada sel normal, rangkaian sinyal EGFR akan dimulai dengan adanya pengaktifan ligan EGFR, ligan tersebut akan membentuk homodimer dan heterodimer yang menyebabkan pengaktifan tirosin kinase. Residu tirosin kinase intraseluler tersebut akan mengalami otofoforilasi dan menginduksi jalur- jalur sinyal transduksi. Jalur sinyal transduksi utama yang diaktifkan oleh EGFR adalah jalur MAPK dan jalur PI3K (AKT). Jalur tersebut akan berdampak pada respon selular yaitu proliferasi, migrasi, dan apoptosis ^{Imunoekspresi EGFR positif menunjukkan adanya reseptor EGFR yang berlebih yang akan mengaktifkan jalur di bawahnya dan berdampak pada respon seluler. Imunoekspresi EGFR positif ditemukan lebih banyak pada stadium Dukes B dan Dukes C adanya menunjukkan respon seluler berupa migrasi sel yang tinggi.}

  Prognosis karsinoma kolorektal sangat bergantung pada stadium. Pengelompokan stadium dapat memprediksi prognosis dan membantu dalam pemilihan terapi. Dari pene- litian ini didapatkan hasil bahwa imunoekspresi EGFR clone H11 banyak ditemukan pada karsinoma kolorektal stadium Dukes C dan dari analisis statistik didapatkan hubungan yang bermakna antara imunoekspresi EGFR clone H11 dengan stadium Dukes C karsinoma kolorektal (p=0,04); sehingga berdasarkan hasil penelitian ini pada karsinoma kolorektal khusus- nya dengan stadium Dukes B dan memiliki hasil pemeriksaan imunoekspresi EGFR clone H11 yang positif dianjurkan diberikan kemoterapi.

  2011; 2011: 1-6. Hubungan Imunoekspresi Epidermal Growth Factor Receptor (EGFR) Majalah

  Patologi Fenny Ariyanni, Sri Suryanti, Abdul Hadi Hassan, Bethy S. Hernowo

  20. Spindler KL, Pallisgaard N, Lindebjerg J, Frifeldt SK, Jakobsen A. EGFR related mutational status and association to clinical outcome of third-line cetuximab-irinotecan in metastatic colorectal cancer. BMC Cancer. 2011; 11: 107.

  2005; 16: 102-8.

  25. Spano JP, Lagorce C, Atlan D, Milano G, Domont J, Benamouzig R, et al. Impact of EGFR expression on colorectal cancer patient prognosis and survival. Ann Oncol.

  24. Mokhtari M, Ardestani MM, Movahedipour M. An immunohistochemical study of EGFR expression in colorectal cancer and its correlation with lymph nodes status and tumor grade. JRMS. 2012: 741-4.

  23. Han HS, Chang HJ, Hong YS, Kim SY, Lee KS, Jung KH. Epidermal growth factor receptor expression discrepancies in metastatic colorectal cancer patients treated with cetuximab plus irinotecan- based chemotherapy refractory to irinotecan and oxaliplatin. Dis Colon Rectum. 2009;52:1144-51; discussion 52-3.

  A, Rani AA. Molecular profile of colorectal cancer in Indonesia: is there another pathway? Gastroenterol Hepatol Bed Bench. 2012; 5 : 71-8.

  22. Abdullah M, Sudoyo AW, Utomo AR, Fauzi

  21. Siegel R, Naishadham D, Jemal A. Cancer statistics, 2013. CA Cancer J Clin. 2013; 63: 11-30.

  19. Azevedo MA, Souza BD, Mader AMAA, Martins LC, Waisberg J. Immunohisto- chemical expression of the epidermal growth factor receptor (EGFR) in colorectal carcinoma: relation with clinicopathological parameters. Rev Bras Coloproct. 2011; 31: 5-232.

  12. Bibeau F, Boissiere-Michot F, Sabourin JC, Gourgou-Bourgade S, Radal M, Penault- Llorca F, et al. Assessment of epidermal growth factor receptor (EGFR) expression in primary colorectal carcinomas and their related metastases on tissue sections and tissue microarray. Virch Arch Int J Path. 2006; 449: 281-7.

  18. Monoclonal Mouse Anti-Human Epidermal Growth Factor Receptor (EGFR) Clone H11. In: Dako, editor.

  17. Penault-Llorca F, Cayre A, Arnould L, Bibeau F, Bralet MP, Rochaix P, et al. Is there an immunohistochemical technique definitively valid in epidermal growth factor receptor assessment? Oncol reports. 2006; 16: 1173-9.

  Analytic variability in immunohistochemistry biomarker studies. Cancer epidemiology, biomarkers & prevention : a publication of the American Association for Cancer Research. Am Soc Prev Oncol. 2010; 19: 982-91.

  16. Anagnostou VK, Welsh AW, Giltnane JM, Siddiqui S, Liceaga C, Gustavson M, et al.

  F, Balfour J, Bardelli A. Biomarkers predicting clinical outcome of epidermal growth factor receptor-targeted therapy in metastatic colorectal cancer. JNCI. 2009; 101: 1308-24.

  15. Siena S, Sartore-Bianchi A, Di Nicolantonio

  14. Spano JP, Fagard R, Soria JC, Rixe O, Khayat D, Milano G. Epidermal growth factor receptor signaling in colorectal cancer: preclinical data and therapeutic perspectives. Ann Oncol. 2005; 16: 189-94.

  13. Chang SS, Califano J. Current status of biomarkers in head and neck cancer. J Surg Oncol. 2008; 97: 640-3.

  26. Berg M, Soreide K. EGFR and downstream genetic alterations in KRAS/BRAF and PI3K/AKT pathways in colorectal cancer: implications for targeted therapy. Disc Med. 2012; 14: 207-14.