Studi Regenerasi Protoplas Tanaman Terung (Solanum melongena L) dam Ketahanan Regeneran Terhadap Penyakit Bakteri Layu (Ralstonia solanacearum)

STUD1 REGENERASI PROTOPLAS TANAMAN TERUNG
(SofanrunmefomgenaL) DAN KETAHANAN REGENERAN
TEREUDAP PENYAIUT BAKTERI L A W (Ralstoniasolanacearum)

OLEH
ALI RUSNI

PROGRAM PASCASARJANA
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
2002

ALI HUSIYI. Studi Regeaemsi Pmtupb Taortman Terrreg (Sdkllnt xloelongm L)
dsn Ketahaese
Regenem TerXladap Penyakit Btlkteri Layu (RaMo~tia
solmacearm). Dibawah bimbingan G A WATTiMEPJA sbagai ketua, IKA
MARISKA dan AGUS PURWITO xt#xgaianggota.
Penelitian hi W j u a n untuk mempaokh m&& regemmi protapla menjadi
taaaman dm mnkgkahn varhbilitras genet& tauman tmmg mMui lnrkur pmbpb.
Pada pnetititian ini d i p h j d tentang r e g m i protapk tiga hltivar tamman tenmg
(buah uxlgu, bwh hijau, dan buah put&) dm pngujian regemran y m g d h s i k m
twhadap penyakit b&mi !ayu. Penelitian d i h k d m dengm kkmpa tahap yaitu isolasi

pratoplas, p m u r n b protopk, k u h pn,top@ pngemem s q m s i seI, regemmi
tu~las, akhmtisssi, dm pengujian t m M q penyakit l a p P q a m t m &W
tertaeldap j m M p m t o p ~yang d h h dari x.tiEtp kuftivar, p m ~ n t u driuding
h
jumM himas,
p t a p i . s , p e m h b set, jmdah kobni el, jmhh mikT0pmentasi kekhasilan airlimatisasi d m k
h regemran t a k h p p y a k i t M w i
lap. Miss data dhkukm dengm a m mlqghitung mta-mb, pmelmi, d m stlmtjar
deviasi Hasil pewlitian mnunjukkan, bahwa kombinasi emim 0,5941/ a b Onomla
RS, 0,5% mwmzim R-10,0,05% MES, dan 9,1% d t a l daIeun ierrutptn CPW d i q ~ t
mengisolasi ptaplas dengan j u d & yang banyak (10$ ) dari Wisp kultivar* Inh#lsi
awal h h p t o p k tanpa &ya @.a ked~lajenisd L dasour yang digudan (KM8P
dm VKM) d q m penambah 0,2 ri@ 2,4-D,U,5 mgll x d n , dm f @
NAA
l
@t
medorang p~~~kntukin
dhdiirrg p t o p h d m p t K b set P e m k h &ya pada
kuhw mehh t h t u k : dinding sel dapat mexmdamng terbntuknya koloni wl.
Pengencaaxr swpasi sei

media dassY ymg saim %&pi ZPT yang digumdm
diganti &ngan Q,l mgil 2,443 &in 2,Q mg/i 13A dapat mrpdorung p r t m h b sel
membentuk miiuokdus. Media regemmi MS,vitamin MW,0,l
MA kombhmi 1,O
dm 2,O @I mtin dapat mngfietsillran tunas. P e i u m W 2,O I@ zeatia. m n g h i b
tunas terbmyak y&u 13 tnas d e w ehiensi keberhfian mtwa 5049,1096- Hmyar 15
regemran yang dapt Mup dari 21 regenem yang dhkhatisasi d e w keberhasib
16,67-1Wh. Diperoleh h y a kemgarmn ketahanan klon t w h d q penyakit bakteri
iayu, yaitu 3 regenem y m g ti&& menunjuXclcan gejaIa, 2 r e g m yang mengalami
pmu1ihan kemhii, dan i 0 regexran y m g mati @a mhggrlperiama dm kdu&

ABSTRACT
In this research pm~plastsregenemtion was studied an 3 c & h og eggplant
(purpel, g r e q ang white hits)and Ebe regemant were tested fur their resistance to
bacteria1 wih, The w
x
t was conducted in dfiamt steps, including protaplast
isalation, protopkt purification, pmtaplast culture, cell wspntbn dilutbn, b u t
regmemthn, plantlet a c c W i i o n , and testing for the resistant to b a c t d wilt.
Observation were d e far protaplast n u m b of each cultiw, ptoplast d

l wal
hrrnation, ceU. division, mmbr of cell cabny, m i c d i , and shoot, p m m t of plantlet
survival, in acclhathtion, arad the resistanc;e of clones ta bactmd wilt. Data was
d k d by d c ~ h t h the
g 8-&
-age,
and &Vhi stPtradwrt.
S ~ W tfrt:
comb'mion of 0,5% ~ W a s O
e mzuEra, B,O,S% n m c e r o m R-10, Q,OS% MES, d
9,1% maanitol in CPW solution was able to isoIaiwfs abtof protapIast (10~) in each
cutti=. The first cultmr: incubation with out lighty in both (KM8P and VKM) me&
i
d m h wich Q,2@
2,4-D,&5
I
@ zertthin,1 n@ IAA, prom~bdthe fom~tianof
cell wail and cell didion developed to m i d i Regeneration media MS,applied with
v h m h MW,0,1& NAA, axmd 2 mg/l mathim produced 13 shoots with the efickncy
Of SO-59,100/$. From 21 chms accXimatiPed only 15 cbnes survive with the -&

of I6,67-1Wh. Time were differences among the clones in their resistance to
bacWwilt,3 cbms resistant, 1 clone recovery (tolaant) and 10 cloms were
susceptibei.

SURAT PERNYATAAN

STUD1 REGEMERAS1 PROTUPLAS TANAMAN TERUNG (&&mum &-a
L)dam KKTAHANAN REGENERAN TERHADAP PENYAKIT BAKTERI LAYU
(Ralsloniawhmmmm)

STUD1 RIEGENERASX P1RC)TOPLAS TANAMAN TERUNG
(Sdaltulll-ene

L) DAN KETAIIAEIAN REGENERAN TERHADAP

PENYAKIT BAKTERl LAYU ( R ~ i a ~ t w l w t l )

Tesis
Sekagai.salatr satu symt untuk: mf:mpmhh gelar
Magister Sabs pada

Program Studi BiatebXagi

PROGRAM PASCASARJANA
INS?lTUT PERTBQGQR
2002

hdul Tesis

: Studi Regenemd Protopias Tanaman Temng ( S o h u m
mlongena L) dam Ketahaaan Regesemn Terhadap Penyakit

Wama

: Ali Husni
: 99631
: Bioteknalogi

Bsr kteri Lay u (Raisroniasolanacearm)
NKP
Program Studi

Prof. Dr. Xr. G.A Wattimena, MSc
Kctua

Dr. Ir. Iksl Mariaka, MSc. APU
Anggota

Tanggal lulus: 20 Mei 2002

P
h

Dr. Ir. Aarus Purwito, MSc

RIWAYAT HXDUP

Penuiis dilahkkm di Pdmgsidempuan, Sumafem Utarst pada tanggal 09
D w e m h I964 sebotgai amk kc enam dsri pangan H. Mara Tanjug Hamhap dan Hj.
Tiagar Aritoxlang (ah). Pendidlkan szujana ditempuh di F & W Bblugi W A S Jakarta,
Iulus @ taxlun 1989. Kesernptm untulc mehjutican ke

pro-

pasmrjana

dipemleh pada t a b 1999. Beasiswet pndidikan pascamjam diperohh dwri proyeit
PAATAP &dm Litbang Pertaaian De:@ewn P w t a r h RepubEik: Indonesia,

Penulis muhi bkerja di Pwlithgtri pa& tahun 1991 w h a l staf p l i t i

kebmpak peneliti biatehbgi Karem ada pnrbafaan cur a q p n b i di

e pubs diphddhn ke B a h m p d a kelompok perxeliti f~hbgi

Baddithg P

e

pada

P& tatrun 1996 -Pa;

~ X U 1994.
I

an

sekmng, p u l i s dipinddm ke Mttbia

kelompok peneliiti Reprodhi d m P m t m b u h mhagai Ajun Pewxiti Mady~k
Penulis men&& dengan Mia Kosmiatin pa& tzhm 1995 di Baxadwng. Sekarmg

tclah dikanutiai 2 p u dm
~ I putra.
S e b bkerja, p l i s menjadi mggota Perhimpiman Biokknoiogi Pertanian

Idonesia, P~~
Indonesia

P e m l b P e r t h Iradormb, dan Pedhpunm Biobgi

PRAKATA
Puji d m @cur pnubs panjatkan kepadrt AL,Lah SWT atas segaia Rahmat dan

kmmia-Ny8 sehingga kwya dmhh irri k k i l diseiesakan. T a m yang dipilih ddam

p l i t i a a y m g d i l d m d m sejak b b Septemkr 2000 hi iahh regenemi protopb

dan k m g m m somakbd, dengan judur Studi hgenerelsi Frotoplas Tamram Terung
(Solanurn miongem L.) dm Ketdmmn Regenem T e r M q Penyakit Bakteri Layu
(Ralstania SUI-).

Tmkm kasih penulis uapkan k
@

Bapak fro£ Dr. k.G A Wattinmena, EvlISc,

Ibu Dr.Ir. Ika Mmkh, APU, dm Dr. Ir. Agus Punrvito,MSc selalcu pr:mb'unbin& serta
*lunxh staf kelompok pmiiti Repmdwlai dm Pwhmbuhan B&bm Bagor. Disamphg

ia pengXmargEtan pexlulis sampaib &k
yang tehh memkikan ~ i s v v dan
a k+

proyek PAhTAP Badaurlitbang fertaarlan

Dr. D~~

S h h a l r r =bag& koardixlatar

kerjmam penelitim MEE. 3-a

tiW lupa pnulis wapkaa

orang tua, istri terciata dm ~-~

(Via, L
ia danR&m).

Semga karya iImiah ini dapat lmmmfaat

~~~ kept&

kdua

DAFTAR iSI
Halaman

DAFTAR TABEL

..................................................................

DAFTAR GAMBAR

................................................................

vi
vii

BAHAN DAN METODE
. Tempatdan WakxuPenefitian ................................................... 18
. Bahandan A h .................................................................... 18
. ImtanEnzimyangDipdmn ................................................ 23
. Xsabsi PmtopIas ..................................................................
21
. Kulm Pmtophs ..................................................................
24

.
.

Regenerasi Tunas ................................................................
ABtlimatkasi ........................................................................

25

26
. UjiKetahananRe~nmte&a&pPeny&tb&terihp
................... 26
. PenpmatandanAn&sData ................................................... 27

HASIX; DAN PEMBAMSAN
...................................................................
. 1 ~ 0 l aPrataphs
~i

30
P c n a b m Pratophs ............................................................... 33
. Pengcnceran Kultw: ................................................................
37
. Regenerasi Tunas ...................................................................
39
. AWimatisnsi ................................. .....................................
42
. Uji Ketahanan Regenam tmhadap Penyakit Bakteri I . A ~.....................
47

.

..

KESIMPULAN DAN SARAN
. Kesimpulan ...........................................................................
49
. Saran .........................~......................................................... 50

Hahman

2, H e b dam yang telab digom-gum hgian hwahnya yang d&traSi
dabIartrtanenzimwIanaa16jmdalamgehp.....................................

21

4. Pen;ampaktin tunas yan@,mmpunyori dam tlerwarna Irijtru k e p u t h d d m

botal @lS+vit,MW.1-O,t @I

MA+ 2 @I)

dan seklah akbatisaasi

..........

42

5. P e m q z h n tamman darl klun y m g hidup d a b media aklimatisasii
6 minggu stelah aklimatisasi ...................
............................. 45

.
.

-

6, Pagujian semua regeman yang hidup t d d q pen*
b&& layu
(8. solawcemnt) a bkrlasi, b = gejda hyau dm c = ti&
ada gejala

........ 48

.

4 Kumposisi vitamin. dm komponen iain pads media MS. KM8P dan V K M

.....

60

Latar B e h h n g

Temg (SoIantun melongma L.) m p h n salsXl satu jenis saywan yang

d~~~

b h y a . Tamman

M u a k;awasm hi te-t

dwi Indonesia dan India. Di

ini diduga

wkajenis tmmg, b& y m g dibudidayakan atau tumiruh

tenxng yang kgdm terbesar ad&&

br.Pusat kane-

Cina Trtaaman

hi tehh terse& dm dibudidaykm di s e l d pijwu drmnia, Asia,
Australia dm Empa (%eta&

Amdm,

dan Mwrymti, 2000)-

Di Indonesia tanamm ini tersebar di m i d pnjuru tanah air whingga

wrung9 w h o m (Smda), emung

mempunyai m.ma ymg b d a - b d a *ya
CJaw@, t~~

(N*,

mung1,

cun6;,

(fl&),

-n&

pok.WG

(Mando), fufalri (Ternafe), dan lraumenu (Timer). Buerh terufig mcmpakm sayman
yang sangat papuler di Iwdonesk

dan & h i banyak o

m sebagai lalap dan saw.

Saywan ini h y a k digemari kmm slain msmya emk dan harganya reXatif mm&,

juga kmdmgm gizinya cuirup lenghq y&u

protein, l e d karboh&& v b n h A,

vitamin B, vitamin C, Mium, fusfbr, dan mt k i (Suetad dan M w y d , 2W).

Pada tahm 1998 total p r o d h i tmmg di Indonesia adaM 139.320 tan dmgm luas
pertmmm 43.533 ha dengm hasilJ.2 tadha-(BPS, 20QQ).

Pennht~tanm s y m k & airan

~~ tmhma terung J q m g

dan tmmg

M d m , t m mningkat dari wairtu ke w z h ~Hal ternbut ditunjukkan dengan

wmalrin meluasnya daerah pemmraa % h a n g t a w g

tjdak

Hanya dijumpai di

pasar-patar tdkiorastl atau @a penjual sayur weran saja, $&pi &pat d
i
j
w pula

di mpemmket-flipmarket t e r k d . R

d makan dan hotel-hotel besar b y &

pula yang tehh mnjdikan t m m g s
e
w salah s a t u menu r d w m n y a . k n g t t n

d e m kebuthn a h jenix, b t b s , dan kuztlhsnya pun tunrt menhght.
Karena mempunyai nihi ekawmis y q cuhp tinggi dotn tern mmpu m~~(:ruhs
pasam ekspor, maka tanrtman hi sangat potemid untuk d & e r n h g h de-

ctya

m e n h g k d m produictivhny~

S M satu

mar

y m g menghmbiit &dam pengembqp dan produki

tmng di Indonesia addah Iwianya penyakit ymg dkbabiran

dan nematada.

Penyakit hyu yang disbabkan oieh bald& PsetdlJomonas sollufacearum (Ralstonio
soIunucemim), penyebaramp hmpir mliputi selwuh dunizl dan mmpunyai
k y a k tamman hang baiic yang W l a i ekommk maupun hhn T a m a m k

penyakit ini antara lain

slrtala)r

g

dari fixmlli AmrantImceae, Canmceae,

Euphorbiaceae, Mmaceae, I~gsuninoceue,Vtrbenaceue, dan yang p s t l i banyak;
t m a m g &I&f d l i Solmceae (Kelman, 1953)-

Sakteri hi pertama iEEfli d i t e m b okh B d pda tahu 1890

kentang yang &it
by&

dl dam& North C a n > h M

umbi

a Serikrat. Sejalr tahun tembut

d i i a p a h xsdanya penyakit ymg sam di negm-negm Pfiilipiner, Jepmg,

irdia, dm Indonesia brutam Sumatera dan Jawa (KeImn, 1953). Di pulau Jawa,
Sunaatm, Mi, Lumbk, dan Sutawesi pen*

iai d q d men-

p r o d h i dari

k h a n f 5 mnpi 95% (Mdmud, 1985). Sermgaxl. penyakit ini t a d a p t di ~ ~ W Z U I

&~w~~i,SerangsMlpalingbMterj&iMdi~&
y q hadam m y a b
k
:
dengan suhu tanah sxh kelemhbm w h m y a t-

D a b pengembangan tanaman terung, penyakit ini sering menjadi WOC
peahatas
y m g paling pent*,

karma mpat &i

menular pa& tamman sehat.

t w W p penyakit Inidapat dkkukm seam biobgi, kimiawi,

Pem-

kultur t e h k dm p g g w m n kdtivar resisten. Penggmm cara bbbgi k h a w i dm

h h r t e r n hkun efekif cfan memerluh biya yang d m l , pengembagan

Mivar resisten sangat potensid dm sangat ekktif untuk mngontm1 penyerkit 5.
S u m k k e t h w m tdmdap penyakit h i tadapt pads kuftivar terung cv "Kopek",
cv 'Zerong hij&"'

"Gelatik" (Wlnsteerd dm Kelman, 1952). Bag-

lcali sifat b t a b m hkivar tersebut h b a h p d a be-

sing

negm b y a Sifat

k e t d m a tersebut jugs terdapk @a spesies liar dari t

~wpd

giandvurtun, SS,
smitwngsei, dan S. forvum ( S u p M i , 1986; S h & ,

S.

et al.,

1994)
S W satu upya yang &pat d

terhaQry, penyakit d a h h mlalui me-

i untuk mningkatkan sifat keterhaaBan

p e m u l h seam bioklsnalogi Perkkm

trmEtman bitehlogi padst saat ini telah h y a k
q

E suht d

* imeMui met&

~~~ varietas baru yang

pemliaaxl kowmsbd. S a M satu -or

yang

penting untuk memapi kekhasilan &lam p e m u b haman seam biotekmlogi
b a l melahi ~

h mupun ~iruEtur in i vitro addah d&&ya

sistem

regenemi.

P a h h n b a n a n yang &pat

~~wcam kulhrr in v i m adam nzetoda

k e q p m somslkbml. Met& kemgman s a d d u d terdiri dari k u h protoplas,

kumtur sl,M u r Mus dan re,gmemsi Imgsung.

-

Kmgamm s o d l o d adalah kemgaman genet& dari tamman yang
dlhasihn melalui kuitur jarhgm (Skiwin et al., 1993). V&i
kemgmm genetik dari e b b d

m k m g m m genet&

yang t-i

ini &ma1 dzvi
di daiam kuitur

in vitro.

S u m k eksplan mmpdm salah Wu W u r pyr:bab wadinya v m h i
s o d n a l . -P

~~ pehmg

pmbpl#s ~ e b g a i hkhm kmgmm slo-laal
unSuk m d a p b n kmagmm Pcot0pI;as

ymg tin@

m p a h sel wlanjang tmp dinding, hanya d i l i u n g i aleh m m b p

h

trudihya protoplas xnmpkm meto& y m g W dipdan mtuk
mndapatkankeragamaa, ge&

(MaPgara, 1982)

Peninglsatan lumgmm genet& mWui varhsi SO-nntl
protoph sebagoll balm kmgamm k h khil d

menggunalcaa

i pa& kberapa maman.

V e i y m g mmcul dapat m e n g b i k m kcmgmim y m g W dari sifat morfobgi

dm b a h m m t d & p

penyakit. Padw tamman htmg kmgmm s u ~ o n a i

Maris Pqm, FeWel, Foxton (Shepard et d,

b r a d dari Wiw RusW BUT-

1983).

Pa& tanmm pdi W m h &ya

el ai., 1992) dm ketahaueur t & d q

mukipbidi pa& wuktm a i c a (Dam

AL yang kkxh (Utom, 1997). P h tamman

nilm terrfapat prbxbm W q a n min*

patcholi anbra 3U-35Y0 @ageyam ef

al., 1995). Pada tsnrtnaan ubi jaXar m e n g b i b w k i &dm tral p m t i w r n w dan.
pnhtukm umbi (Sibachakr et al.,

1W)
dm bmyak la@

tamam lain W
i dmi

budidaya pmtapb ini yang tab t e r h d q pyalrit dan t u b t e r w p herbisida
@vans dan Sharp, 19861,

K e k h a s i h kuitur: pmtaphs sang&

~~oLh kemmpan regemmi

protaplas, Kemmpim regenemi ptaplas diperxgamhi okh jenk eksph (Barjaj
1977; Binding dan N e b 1977; Tan 19871, jenis dan kamposisi d i a kultur yang

d i g m a h , kondisi fisik media (Gusctx ef a[., 1975) dan ZPT (zat pengatur tumbuh)
yang digunakan (Nagata dm Takeb 1971).

Bipotafrr
1. Respan prutopk dari wtbp jenk t e n q k h d a teriaadsy,komposisi asedi dm

j e n i s m t ~ ~ y m g d i i m h i r u ~ ~ m e m ~ n t u k ~
kalus dan ldus.
2. Respon dari d a p Mus yang

dmi prompIas € & d a terhdq kampasisi

diadanzatpngwtur~yang~sehlnrfturwtukregenerasi
tunas,

3. Keragaman genet* baru da@
t e r w p weri Iayu.

dihasikan dari budidaya protopk dan t h n

Botani Tanamata Terrrtng

Taaaman tmmg (Solanurn meiongem L.) add& tamma tahnuPan ymg tergobng

dalam kelwga Solanaceue yang bras& dari dam& tropik (Bailey, 1950). Tanaman ini
temrasuk salah satu dmi kebmprtk tanaman y m g mnghilB;nurbiji (Spmtophyta),

Biji y q d

h

h berkeping dua a m biji kM (Dicotyledonem).

dab buah (Angib~pennoe).Biji yang d h s h mpdm

biji bra& di

perkembang birtkntn

yang pnting. T i tamman krkisar antma Q,4 - 0,9 m Tamman hi tumbuh M k di

bkasiterbulcamaupundidahmrumatrkaca
Batztng t m w m terufig: dilxddm menjadi duoz macam, yaitu bmg utama

-1

pea-

W w i t =-a).

warn @ - ~ % - Y B

w

sekumk kli ak;an mempunyai prcabgm banr. Ehmg utamsa l m m p h penymgga
kdirinya tamman, d m g l m pawbangan addah Wian tanaman yang d m

mewelwkan hlqgL

Dsrun terdiri. dari tanghi b u n (petioius) dm helaian dam (lamina). Tangksti dam
berbentuk silindris h g m sisi q p k pip& dm mmbd di boxgiotn pa@&,

pjqpya

berkhr mtara 5-8 cm. Elehian daun terdiri atas ibu t u h g d a q t u h g eat#m& dm uratmt dam b h r hehi dam mm 7-9 cm dan panjangnya antma 12-20 cm k q p t u n g

vdetasnya kngw dewr bmpa blah ketupat h@ga oval, b a g h ujung daw tumpul,
pmgM &tun m e m i n g dm ski bertoreh,

Bmga

tenlng mmupkm bmga

h

i (kkefamin dm), dimam d d m satu

b n g a t d p t &at k e W jmbn ( b m g mi

d m alat Irelamin b e t h (putik), Jenis

disebut sebagai bung# lengkap. Perhiasan buqa yang dimi1ik.i

bunga %perti hi -8

addah kefopak: bunga, dots -a,

dhmter @a

dan hngkai bung& Patfa

buxlga m e k

sat

2,s-3,O cm, ktaknya mmggmtung. bhhkata h g a kaumlah

&ra&

5-8 buair membntuk bangun bintang dan

&-sari

di-h

sew&&

5-6 bi& Putik kjwmlab 2 bush

lingbaran h g t t ymg l&ya

prig

buah bxkmbatng.
t e r m dab satu

wermorxjol di bar bungs

merupakPtn bwh sejd tqgd dm krdagihg t e W lunak; beralr,

Buab

dantidak~pecahjifrabuaht&hmasak.hging~ini~bagirtnymg
en& dimalrern, Biji-biji terdapat bebas d d a selubung l u d ymg terhdung oieh dagii

buab. P m g M buah menempel pada ketopk m a y q

tern

w

~

~

~

~

=

w

w

-

&

~

-

~

~

menjeh menjdi
m

i

w

b

u

n

g

a

] . ~ y ~ ~ d i , ~ ~ d a u a B u a l r ~ b ~ y a r ~ b r a
d a g m varietasnya Bent& yan& d i k e d meljquti : panjang silindris, panjag lunjong,
lonjong (oval),

lebar dm b u k .

Ada bebrapa jenis tmmg yang swing dijumpai, antam lab: 1) tenmg gelatrir,

bwhya bulat k a l b E : m uryru atrau putih kca m

-W

2) terung kopek m

Banyak d-

%bag&

ab
m panjang dengm ujung hunpu5

lunrs, dm kmarm ungu, hijau kemgum b u hijau muds. IWanya ag& manis dan
Bag& buahnya 1-

3) t e n q Wi,buahnya buM p j m g dengm ujuxrg menmcing,

t l e m q u , ada ymg -1

ah ymg hgkok 4) temg bogor, h a b y a Wt W

bewarm put& atau hijm kcputhn, mmya myah agak ketir,

5 ) terung msdaa, b d n y a hht p j m g dm kecil, wEtrnanya hijau bergark put& mmya

rnanis dan agak asam, 6) &rung J-

bt:ntuhya b r a n e b ragam, y m g banyak djkenal

~

bulat p j m g silindris, panjang lunjung, bnjung, hht kbw*$an, buk. Wounrtnya ungu

b g g a mgu gelap dan m*p.

P A m w m y a perbatryakm tarsaman tmmg d h k u h dengan biji Benlh
d h b i l dari buah ymg swhh tua dagm ciri-ciri M h y m yang dab &put dm ap:&
mmgdng, dan mmiliki biji yang k m . %lain

kering, -ya

biji j q a dihhkm dengm @krtn

uxltuk m d a p t h

~~~dengan

bibit uaggd murni +i

poimonMuknyaNmw,cetraini t i d a k u m u m ~ h m i a k u r a a g e f e k t i f u n t u k

merghdlan tmamn yang banyak ( S o d d m M

e 2800)

Keguaasmnyst

T

q mm@m &nis s a p yang sangat ppuler d m didmi b y & orang.

Di hdomsh terung b h y a dkomumi mbi@ syur hhpm & q r x a dhmbd d a
dipmggmg. Di J e p q b w y a d i b t
Orang h l e r h b

mahian Eempwa dsn tenmg ptutggang.

i Ikwmakm kmmg c f q m carat dipg&m& terlebih M

kcmudin dimaican k s m m siraman keju, susu, dan t q ~ S .e w dik:ommsi ~

u

~

o

balm m k m m , t m q temyaka mempunyai k h i a t sekgai t a m a n OW.
Sehh m y a

en&

Wungm gizinyapw c a p mmdai yaitu: protein (1,2 g), hmk (0,2 g),

b h i d r a t ( 5 3 g), Wium (0,15 g), fasfar (O,37 g), besi @,OM g), vitamin A (0,W g),
vitamin. C (O,Q5 g), dan vitamin B (U7000*2 g) d a b 100 pun tnrah tenurg sew
(Hardittsyah dan Briawan, 199Q). S e b diEcammsi

st:&&

bairnan mbm, tenrng

ternyata mempwyai khasiat s
e
w tmamm obat W i o d (Suara Karya, 1987).

Behapa s u m k mengatakan b d tmmg sangat bpt untuk: obat
h y a dapt d & m h

A-

d nrenyembuhkm bomk paufor hidung ( S u m Karyrr, 1991),

t

i

Kebradaan penyakit tkhk dapt dipisahkan dari k g w Mdaya tanamrtn
t e r n , Meskipun maman telah dipel-

seceua mmtat dm ba&, kemungkinan

bebem mgm Ma d i h a m d i m Sif& ketahmm y m g paling baik pda U t e r i
tersebut t d a p t p&da t m m m I i dari s p i e s yang lain W
i
:
S. forvum, S.

sarritwongsei, Ban S. giand#owm (Supiadi, 1986; Sihachakr et al., 1994).
Untuk me-

sifat kebhaxm temZwt dari s p i e s liar Ire spsies budidaya

d i i d d m meisi.ui. hhidisasi samatlk: dewan teluxlk: firsi protapk. MeMui fusi protopias
dapt dipindah h semua total genom dwi kedua tdxmya ke daIm hibridanya

(Wattimena, 1999).

Kemgsman Somakbral
K e m g m m s o d b d addah k m g a m m genet& dari tanman yang dihersihn

meMui WUT
jmhgm (Skiwin et d.,1993). V a i ini b r a d dari kaagmm genet&
dati ekspb dm bagaman genet& ymg te@i di Wmn k u h in v i m . F h r - W o r
ymg mempigamhi k r j a k y a v h i somddonal add& I) gemtipa, 2) h g k w p
k u b , 3) !amber eksplan, dan 4) lanut &MUS
CKarp, 1995; K u M ~1995).
~~
samaklod p d a dmamya wadi &bat W i w mtasi, yxtitU perubhm

V&i

surttu kmakte~yang diwrkhn y q disebabhn okh b e m b h y a pemberwa sifat

menurun (inherited trait)baik: pou&t t b g h t DNA atau gm ymg b b u t jug& m
atau mihsi tit&,

mupun poPda

bma50m y m g &but juga m

i kecil

i barSBr
Qkh

karma itu, xnr:ka&smkejadiamyrt b p i r smut &ngm efek m u u ~ e ~kunvensiand
is

(dasi), y

h h i f a t acak: dan keragamm yang dihasikamya dapat brmdaat atau

klmgbrmanfaat,~mungk;in~lkaa

~~ gemtik y m g

t-i

di dalam kufnxr in v i m dkbat>km ohh

hntuk wama (Oaun, bang, &wan umbi ketajanm dan wigmi

dm lain-lain

(Kumsr, 1995)Sumbr elrsph mrupdm saiatr satu W u r penyebab t6acfinya v-i
s a d b d . #hemprotapk m a p k m sel tebjang, h y a d

plasm whingga Midaya prutopias mmpkm met&
me-

m

i ahb membmn

y q baik dlgunak.ftn utuk

kemgmm (Mugam, 1982)- Namun d d k i m keberhsrsilan untub:

m c m g e d a n pratapk mmghilk;rtn tanaman lengkap pa&

sat ini mash angat

rendair sehhgga mih jarang digunakan orang rmtuic phgkabn k;eragsunmun gerretik
melalui k e q p m n somairlond ini

P a m g h m k q a m a n gem& mMui variasi wmakhnal tehh berhil
d h k d m pala kt.lerapa tammu V-i

ymg muncul

k m g m m yang baik dari sifat morfalagi dm k
tamm kentang keragmm wmkhnozl. bras&

P e p , Fetwel, Fodon (Shepard

et

@at

mmghdkm

h t a b d q pyakit, P d a

dari kdtivar RtrsseP Bur-

d,1983). P&

maman p d i d

b

Mark
h admy8

iceragaman tingirat k & h m m tahdap A1 ftTtomo, 1997). Pada tamman Chrysunfhensum,

kmgaman ytxng diperoleh kbih mmyu &bung& P& tamman ubijda trmenghasiikm
variasi d a h hal ~ m b u h z t nd m pmtKnhhn umbi ( S i h a c k et nl., 1997). Pstda
tanaunan n i h texdapat va-iasi kadmgan &yak

ptcfroli antara 30-35% (KoySeyama ef

al,, 1995). Wmgkm pada tamman kacmg tan& mnghasiillran keragaman yang

berbeda untuk M m g m lmmbya (Utamel al., 1996).

Isolasi pmtophs
Protoplas addah sel tehjang Itanpa dindinl4, hanya dillodungi abh membran
plasma. IsuIstsi protopk pertama Mi dilakukan okh Klerchw (Tomy dan M g r o n ,
1973) p h d u n 1892. Klerctaer rnemalrrti &tun Sfmiices olio& yang twlebih dahulu

dipkmlisa, iremudian dkis tipis dan dimasukb ke d d m media cair sehifigga h y a k
protoplas yang hpas ke d a b medium
b t o p h s &pat diisoiasi dari hampir semua bagian tamman, seperti dari akar

(Cocking, 1960; Baw d m Tarrey, 19711, darj, daun ( W e n d , 19801, dari nod4 d m
(Dawy el a[., 19731, coieptl (HAI dm Cocking, 19741, jahgan bmh (Cocking, 19701,

hjuk bunga (Potrykm, 19731, s e r u sari (Bajaj, 19771, kuhx k a h ( S c W dan
H I X d e W t , 1969; Gosh et al,, 19751, dam in v i ~ (Binding
o
et al., 1982; S a d el al,,
1991; Wusni etal., 1993,

Untuk mt:ngkbi protopk dsri a
jr
m bhmya d i h k u h secarrr. emhatik;.
Jerk dan kamitrasi enzim y q d i g u d m daleun isobi protoph sangat ~

~

PaJingtidak:adit 1 5 j e n i s e & y m g d a p t d & q p d m , y a n g b ~ d i i t t d a ~
p e b , peblyase, macerozim dm wiulase, Peldmse, pholyaw, dm macmzim

kdmgsi

m e h t k m dinding primitif antar sel y q tmamn oleh zat pel&

~Binggamnjadi MI-sel tunggal, S&@m

selulasc: krbgsi

~~sisa dinding

%I yang temswm atas A siuiosa ~ S u r y a ~ t1990).
a,
U&uk memxgah

blnrtin) yang b-ya
b

i

a di@m

pmtoplas d

g lraXi d~~

mt anti pcah (a&

jugs disebut usmolyticum atau omofic stabilizer, Zat yang
addah guh &oh01 (wrbitoi, &ol)

dm sukrosa

i

Kultur dan regenemsi protoplas

Tahap pertama keberhilan di dalam kultur prutopXas addah k e k h s i h
p t o p k mmbentuk dinding se1 ymg baru dan mehkdm pembe-

Kekhasifan, regme&

seL

tananaan cSari protuplas mpallnm taby y m g sangat d t

dengm metode y m g k b e d a - b t a dm swing tidsk: dqxd diulang bngan k e k r b i h

y m g sma pda waktu yang berbda ( E m dan Bravo, 1983).

Untuk k q m l m sintesis dinding sel pmtaplas, px1u adanyet penyedim sum&
k a h n yang mdah d e b s k a n seperti s u h s a dm p e n a m b osma1ytiln;um
(Nagah

dan Takeb, 1971). Pmtoplas dap& dkuqxtlsikan daiam medium

padrt

erkmeyer tanpa d & m k dm dapat dikukurIrsn d a b jumiah &kit d a b bent&

#am e w a dan T o m , 1971). Ummmya mtuk mamgsang pembehhn, protoplati
ham ditanam dab k t m p a h tidak bbib dmi f o4 protapWmI medium (Albersheim,
1974).

Protopb dalam I r u h mulai. mem-

dinaing sel d d m bbaapa jam smpi

b p a h
i (flaw dm Torrey, 1971)- Regmemi dinding protopla meldui pmses
akumulasi baban dinding txl sexma prldum-iahan p&

permukm phfnajemma ddzm

M e r a p jam seteielh Wur. Selubse dikumpdkm b i k antmi ptasdemrra dm antara

hhm dinding m u k i h l a r a&u h p g pads p1asmaXew ( A l k h e i m , 1974).

Bioshtesis dari dmding ~1 sangat k w k i r , tergmtmg dari mteriai tananaaa Bjkt
jmhh protophs ymg dhlturkan tmhb banyak; mak;a sel d i n g bsentuhan sehhggrt

terbentuk agregat (Cocking, 1970)- J

d dm komposisi d L h h r ymg digudmn

menrpalran dab satu faktor pentkg dab pmbIrrhan sel d

(To-

1989). Pembhhm mitosis umumnya mul6ti tajadi

h k u h ptok

m@gu p r t m a setelah

kuftw (Nagah dm Take&, 1970; Sihacbakr et al., 1995; Husni et al., 1997; Pryanto,

1 996; furwito, 1999).
Nag& dan Take& (1970), mIaparlran W w a pmbentukan dinding sel pada
prataphs tembakau m t w g &nya

&sin ddrun medium, d a g h s i t o h h

m m p n g m h i pr:xrhemdm permdam dinding s c L I h g m mmdpuIasi nrrtrisi
medium dm kondisi fisbbgis U u r protapltts akan dapttt kegenera& mdmtuk

m h Musdm kalus tersebut d m d a p bgenerasi mrnkntuk tuners, Menurut E m

dan Bravo (1983) *:lab dqmt dkegenemikan kbih hmqg 28 p i e s tanmm dik:otiX
dan mnokutil dari kuftur protopk.
Pxotoplas yang M dttri ksttus, suspemi sel, dam dan petal tehh d i l a p o h
dapat d b g m m s h n (hjaj, 1977; Binding d m New 1977; de Vrks, 1987; Tan,
1987)- Peqgpmm matin dm IAA

dalam medium h b r &pat meregemms&m

protuplas pads bbqm spesies tatlaman wprti ubhyu, &fa&

millet, qwagm,

kub& dan jade (Biding ef d,1981; Evan dan Bravo, 1983; Chad et d.,1990;
Purwita, 19991, Karadisi M w b k y a gehp pada kbaap hrtri wblum diphdabn

pad& kudhi ymg k c a h y a 40-1 500 lux (Gosch et d., 1975).

Media kuitur

-P

jenis media dasa, kondisi medih, dan mt pE.mgnttrzr t u m M y m g

digunrtkern m m p d m Wor y m g sangat h y a k diklhi dab h h r W p I t i s (Nagah
dmT&eb, 1971; Km dmMyckyluk, 1975; Thomas, 1981; S h W ef ak,, 1989).

M d f h s i media Murashige dan Skoag (2962) d q p cam menggmti CoCh
d q p

(media PIT)ciapa$ meregenwash protopb -pit

te-

majadi

tsrnaman (Notgata

dm Tak:eb, 1971). Kemudian Bind@ ( 1975) m e d i h i medium

PIT tersebut dagan

~~ 0.5 mg/l

asam

fo@

0.1rngllBAdan2mglXNAA

(mdh NT-A) dapat mnixlgkatkm efisiensi p d w a n yang cuinrg m
i (Binding,
1975). P& tathun yang sama, Kaa dm Mihayiuck (1975) me:ndqdkm madm W

P

d q m nredirr,dasw B-5 un&k mxegenerash protopias dam Vicia Isgjmtam. W
M
e
u
d
m
i

V47 dm V-60 digunakan untuk regmemi ptopIas Petunia I y M L. (Binding,
1974). Kambinasi medium V-47 dmgm KM8p menjadi medium V-KM y m g dstpat

mefegmwasikan SoIarrum dulcmma ( B ' i dan N e w 197';1). Icemudim medium
KM8p dm V-KM hi sampai saat ini banyak digunakrmrx dertam p m x h a m - m b
k u h protopfas tarlaman Sohceae (Binding d m Ne&,

1977; S m d et al., 1988;

et al., 1989; Sercaf et nl., 1991; Mullem et nl., 1992)-

S~~

Kolnposisi d m yang kumpMs p d a mmmyrr b r a d dari medium KM8p
yaq~darikbagai~organik;gu~dmvitaminserta~rpe~
(Kao dm MchyIuk, 1975). MmWhsi dari d n u r r KM8p tehh k r b d metegenmsi

protopias hasil fusi antm S. meIorrgena dm S. sysimbri~oliumdmgm cara ~~i

kadm gufa, asam organ&, k ~ b r a vhm&
p
k i n hidroiisat, dm air BEetapa ( G M L et
al-?1936).

Kumtlinasi mt pengatur tumbuh dztn tarraf komntrashya dab medium sangat
penting daXam k e k h i b regmemi protopk padet Miap tahp. Rapon prutaplw

terhadap zat p g a t u t tumbuh ymg d i g m k m muhi M taherp protupb, ~1 tmggd,

kobni d, m h o kdm, dm h i u s WUSsangat kM-W Wingga p d a wisp

~t&~l~pnism~aturtumiruhdankom~~kwbsder. ~ ~ a k peneliti
a n

anauksin MAA W & u

dikornlhadcan &ngm

2,443 prmda d i w n p n a b (Binding dan N e b , 1977; Shepad d m Toten, 1977;

Shchakr et 01-, 1989; MoBers et ol., 1992) dan BA s x b zeatin pada kumntrttsi redah

dari gubngan sitokb (Binding dm Melds9 1977; Shepard dm Tot% 1977; MoUers ef
al., 1992).
l n j s i l tunas p h

dengan -in

k o m b b i LAA

&ng;an me-

W~WIIIIY~

(Shcpm$ 198Q; Bokeham dan Rocst, 1983). Pexxgguxrolan zaatin d a h

medium sangat bik dab Muksi morfogenesis t u i ~Wolim
~
e? al., 1992; Thor~ras,
1981). Adany8 2,443&dm d i m pada 3. ~tolnnranurrdapat mnhghth regmxsi

2,4-D, Zeatin dan NAA h h w i l

tunas (Pryanta, f 996). S d m g b p e m d a h k0mb-i

~eregmmsikan8,tslberom~1pada txdmgai kombinasi fusi (PuMto, 1999).
P

~

~

o

r

cllfpat m m h g b h n w

g

m

i

k

h

y

a

~

i

~

i

n

l

i

s

n mrfogenesis tammm kentarmg (Shefraxd dm Totten, f 977).

gub y q dapat dhetdmlismc sqxrii h s a

Ku-i

~

d o 1 @ga

~~regenemi tunas. Kommtmi sukrosa 1-5 g/l addah optimum @a
khagai komposisi medium dprsar untuk: qpemsi tunas dari ldiw kentang.
Ftcdm&m k o m b W 2.5 g/i suEcrosa $an 0.2 A4 4 0 1 jugs brmanht untuk

regenemi tunas dari kukivw p t o p k to&
(1992) mempeqpmh kombinasi 10 @I

(Tan, 1987). Sdmgkm

M o U a et al.,

dan 15 &ll d o 1 untuk r e g m i

gahir d i l o i d kentang,

P-

zimmnium Wm bmk ammonium

n W mupun snrmanim

kfrlorida b q m g a d ddam regmemi protoplas. §enyaw t e ~ b r r tid&
t
dipetlukan

untuk prkm~orn
dan p e & h

dmi pmbplas dm h i f a t toM peldrt probplas

tanman 2X tubemsum wahupun Xronsentminya rendah (100 mgll) (T_lpdya, 1975).

s

t

d

a

Pmtoplas hasit fusi mtara S-phweja deqan S. e h o e m f : gibbmdosu~tnaenjd viabX
trlnpa &ya

ion mni.um d a m d i m V-KM fr;emim dm &h,
1989) dan S.

tuberasarm ( S b p d dm Tatten, 1977). h Mapi efisbnsi p d u r a n protopias

meningkat IW-4 prada ppotupSas S. dulcamma jika kansentmi amanium nitrat pada

d i m KM8p ditingbtkm rmjadi 2 bli lipat dm WUM
m y a dMmgkm
(Binding dan NeS, 1977). b y & pmliti mrtngumgi m g e n patda prom r e g d
wahpun perlu kejelotsour pmm dari
2 989).

sumk W g e n (Fmira dm Zeicer,

Tempat dan Wwktlr Penelltian

Penellith d i I a k h di Labaratmiurn K u h J a m , Kebmpok Penelti
kproduksi dm b r t w n Bahi
~ Penelitian Biotekmiogi dm ~umbadaya&net&,
Bagor, WaErtu pmlitm dimuXai pada buXwn S e p t d r 2OQQ-Mar&
20Q2.

Bahan dam A h t
Bahin, Balm tamman a d yang d i p m k m untulr. b

h in v i m addah knib

k u k i w terung trutfh putih ymg diperokh dari IAmratarium Moxpbgermese V e g d
Expmhntde, t'nivaite Paris Sud Permcis, tmwg buah mgu 8an tmq W bijau

. ..

(Median) y m g l m d dari Indonesia Be& dari ~-~

.

kmbut c b t m k sI

dqjm 'lbahan s t d m &oh01 70% s e h 3 menit, HgCh 0.05% s e b a 3 menit dan
clomx 3We m

W 3 mnit. Setelah itu dibilas d e w quad=

untuic maghiwan w a n s m h yang mih tersisa pwh
sud& distedhasi kerrmdian dikean-

sebmpk 3 kdi
Beni-bed ymg

dakm media dmw MS (Murasfrige d

Skoog 1962) dengan mnambah vitaunin MW (Morel and Wetmore 1951),20 g h

s

8

dao 7 g agar. K a h m pH media diatw: xraenjadi 5.8 dan distdkasi

autakhfpda

1 2 1 ' ~seselama 20 men&. Kultur dishpan Mam ruang inkubasi

suhu 2527%

dengm pnyinaran Xampu f l w m n f 1000 Lux w

h 12 jam per hari. k n & y m g

k k e c a m h h dlsubkukw ke d r t h mdh bmu yang kumposkhya sama Wkah k u m w
t bd a g m stek in vitro buku tmggd, Kuhw d i s ' i kembli dahn ruang h h h i

~ ~ u d a n p n y i n a r o u n p g s a m a . ~ h h k n r h t l e n r m u r k I ~ ~ ~

tutlas

m e n g H a s i b daum (4-5 bk),kcmudian dam diambil w
a
n gunting sehgai

sumber pratoplas,
Aiat yang digunakan daiam pnexitiorn hi add& Iamiaar, pinset, p*

pipet mikro, pipet,

w

mer

open,

0.22 p,sarlngm (nretailic c i m ) 100 pm, cawan petri,

m hbmg sexttrifus dan. hh-hh

itu d i g u d m mikroskop inverted untuk

P m - protwias.

Lrmmtrtrl,enzim yang digmalmn

Kumposisi iarutrtn emim yang diO,S%

addah 0,5% SeIIuhe OllDmh RS,

MifcerozrEm R-10( Y h k Honsbkt Co) dmgm penam-

0,05%

MES dan 9,1%

manital dab h t s n CPW (Shadcar, 19981, pH hutan t m h d i h t mnjadi 5,s-S,6.
Larutan em&

d

i

i h g m fiklmhm U,22 pn dan d h d c k m kgdalann

=wan petri berdkmter 50 rmn x I5 mm masing-masing 5-6 ml enzim per cawan petri.

T a h a p a n ~ h d a p t d i l ~ p d a ~ d k ~ b
1.). m n ( ~

DOC;16 jam

Kandisi inkubasi
Ink:ubidaunddamIanrtanenzim ~ ~ ~ y a ~ i n X r u t X a t u t y a n g
suhunya diatur @a Aitar 27% selama 16 jam ( a d g h t ) . Untuk m m h t u hpmya

protoplmts fijahgan dam padit akhir inkubi, cawan petri digoymg wcaa borizontral

s c h 30-60 d&

S q m s i siap untuk disaring dm &ukan

p m d m proioplas

dengan Iarutansukrosa 21%.

Peraumiau Pmtapka
Protuphs d h h g agar mphh dari jarhgm h deqm cam memipt hutan
& yang M i prutophs &agm saringm metallic sieve &wan 100 p k e d a h

~~ &wan

15 ml,

k e d i a n disemifugasi dengan kacepatm 1800 rpm setrtrna 5 me&

unrulc

hbmg g e h . Suspetlsi dibagi dengan pipet k&dm

mngmdapkatn pmtopias. Larutan amim (supmtan) dibmg dengan

carst

searis Wi-hati agar endapsan.pmtopb tidaEr. terhwa Kcamdim d q m ~
dengan 10 mJ h u t a n s h s a 21% '/0& p

prubpk dilakuicatn

sentrifugasi

memipet
~

n

d pmtopias.Unbuk mngqmghm

dengm kecepstan ymg sama s e h 10 menit.

Pmtopk yang mngapung parder Elagian atas hutandiisohsi dengm cslca mngamt,iloya

d q m pipet stad dm drphdahkm k e d d m tatarng sentrifM bmu umk proses
pencuciaa

s

i

Pencuciae Protoplas
Protapbs d yang tcbh diperoleh mstsih m~lgandungenzim dm h s a

sehingga protopiss p l u dicuci untuk m n g h i h g h pnganrh enzirn $an subs

t-i,

tinggi Pemucian dW&m dmgan cara memipet pratopkas murni, h i i . pnppungan

k&hn

bbmg

y

q Llaisi ianrtm p c u c i (Q,5

CaCh). Pengendqm pratoplnts d

i dengan w&ifugasi

M naanito1 + 0,s mAn

@a

kmqatm 1800 rpm

terbentuk d q m protaplas. Supemah d i m dengin c a ~ a

s e h 5 menit se-

mmiw mxm bi-M

yang takinggal h y a exgdapan pratapk. Pamcian

dw2kali&mlarutandancaram-

Perrrgbittxegan PmtupIas

Pmtaphs mxrrni y q tehh dicuci d k s p e n s i &ngm 2-5 mi ianrtan pencrmci (0,s

Md

o t + 0,5 mM CaCh ) mhk m e n g h h g densitas pratapXas yang d

fmtoph yang

d k s p e n s i d M i l U,1 d dm d-

W

h

kemW d e w

lmtm pencuci sebmyak I0 Mi (0.9 ml). Kemxarfian d i m d l m clalam gelas

haemositometer M u dilakukan p g h i t u n g 3 ~ ~protaplas
n
secara mikro&opis.

HaemsitMer y q dp@m
tiapbidmgvob

=

1 . 2 5 m 3 1 p a n j a m g x l e k x k ~ =10mmx0,5mmx0,25

mm). i3anyak;nya probph d
3 kali Ma--

mempunyai b w - b i d a n g volume, d i m

i m i a p bidang p&ng

volume tersebut

~~

dari 3 Mi penghhqgan addah j d a h ptotoplas per VOW
bidmg

pandang (1.25 m3)
atau 800 x jumiah mta-rata pmtoplas per ml sampel.

Kuitui pmtaplas
Kondbi Pertumbuhan

K u h pn,toplas Uakukan dengm ~ o d Sai I m c b (1998). Welah dihkukan
kmositomtm, mka dildcuka pengemem

penetapan jumiah proropk

to4 p ~ t ~ p w
rmtuk
d dikuiturkoth

protopiers

~ XL I &

dita-

dab

~ w a n ~ M ~ 5 0 m m x l S yangmshg-masing
m m
Wi6dmeificak.

Kukur dihhbasi d d m k d a a n tanprt h y a dan rfengaa a b y a dab inkubtor yang

suhmya diatur

temperaFur 2 5 ' ~smpi

terjadi pmbentdm dinding wl (1

minggu). K u h ymg tanpa d y a kernradian diberi d y a dengm intensitas lQQO lux

=lama 16 jam

terjadi p m b h sel (1 mhggu).

Media Awal Pertumbufian

Medium a d
c b r y a i t u KM8p d

~~protoplas y a q digmkan addah dm jenis media
a

n

V

sama yaitu k a m b i 0,2 @l2,4-D,
pH media d i k m pa&

M

.

~

4 5 mg/l W i n , dm

kisttrau 5.7-5.8, M&

z

smpJ t-i

pemtkntuh

Setelah terjadi pembntdm d

a

t

~

k

r

m

1,0 mg/i NAA. K

dbtdkm h a n f i k

K u h dishpan daXam inkubator &npa &ya

ukuran 0.22
suhu 25%

K

dm *an

ukuran

dmya

dinding sei dan p e h l a h a n sel(1 minggu),

i dm p e m b e w sel, mka k u h y m g tanpa &ya

kemudh &
hid y a dengm internitas 1000 lux selama 12 jam sampai, terjadi

p&WseL

~

~

d

i

Pengenceran Kultur

P e n g e m d i a d i l d d m d q a n W j m uxxtuk mendamng p a t u m b h n d m
perkembangan s l m&ntuk:

kolani se'l dm ~~.

P e n g e m d i l W a n dengan

3 suspensi protophs (sel) stiap cawan petri kc cawan petri banr y a g

cara

teM Msi media dasar ywq s m a (KM8f dsn WM), i-i

kuroposisi, zat pengatur

hunbuh yang d i g u m h k b e d a yaitu 0,1 mg/l2,4-D dzln 2,U mgll BA. Kukw d b b a s i

kemW p d a ~ a n gimkubasi yang dibdm&yadengan

~~ 1080 lux w

h 12

jam s m p i t h t u k : mikrokdus 8an hius,

Regenemsi tunas

Media Regenemi

Setehh
&wan

se us

y a g terbuk: t m h t jehs dengan W

dagan

3-5 mm (4 minggu d d m d k pengemam) diambil deogan pinst dan

diphdahlcm i r e ~ t t w a n p i r i b a r u ~ ~ t ~ B Q m m x I 5 r m n y a n g ~ ~ i u m

regmrasi (padat).

Mwfia regenemi yang digunakan addah MS + vitamin MW+ 20

g/l~~2~ge~,U.l~LAAdanpenzrm~1,2,dan3mglfmatinse~
prlak:w
Kultur dkkubasi drtlam m a q p inkubotsi sampai, t d x d tunas. hang

&hi

diberi cabaya dmgm intensitas loo0 lux s e h 12 jam dermgan suhu naang

sekititr 25 - 27%.

Isohsi Tunas Haail Regaerrtsi

Untuk mempercept pertumhhm d m perkemhangan regenam @Ion), set*
tuxlas diisaki

d3fn dipbdabh

btol kultur yang berisi media MS+ vitamin MW,

30 fl h s a , 2 gll geHe tanpa mt pengatur t d u h untuk perbnyakm

Aklimathsi

Plantlet yaxlg berasal dari btol k u h seblum d h a m di lapanlr, terlebih U u l u

diddimtisasi di rum& h Mdk yang digunakan aidah ampwan tanah
pup& h&mg (2:l) yang distdisasi d e w oven pacia suhu 150°C selarna 3 jam

Plantlet detri setiap regemran dm kontrol yang b m d dari btol k u b dicuci dmgm air

PAM s a p i h i k Kemudh dhmm pads media a k h n a t k i 1 plantkt per satu
polibek dan difllngkup dengm plolstik tmmpmn s&eM d i s h . f m y m g h p

d W W sampi tamman k;uat (k 1 miaggu). Plantlet yang diakhatisasi s e b @

91

phMyangt&dari18reg~teruxy:WwngudanS~~tenmg~

hijaa Penykaman d

i setietp hwi dengsur air PAM. Pemupukctn d h k d m pada

minau ke-2 dan mioggu ke-5 setelah tanam dengm cam disemprot d q a n pupuk

hayfohn kansentrasi 2mVI.

Uji Iretabanan mgenemn terhadap penyakit bakteri hyu.

Pemiapan inoku lu m bakteri byu
Pmgujim k e t h n m t e r W p penyakit Iayu h b r i membutdkm imhlum
patugen penyebb penyakit tersebut ymg mempunyai daya pat:og&as y m g t@.

S

k Rdstonia solanacemuno ymg di-

addah T926 Ras 1 Biavar 3

y q b d $ari koleksi Kebmpok Peneliti Narmt dm Penyakit BALIITZO, Bogur.

W e r i d b i a s i dari tanamaa tekukalr (SoIanum tonurn) yang diawetkm d a h air
raqdestilad s t d . Videmi koioni diuji h h m medium tetmmiium idarkkt (3°K)
mWuf

m& b i m a n (19541, Ulltu&r p p a m i inoku1m dibkuhn dengan cara

menggodcmmya padol media ~ s ~ . p p t u n eM- ~i .a n dihhbasi slam 3
pads suhu 28'~. Sel Weri kemudian diambil d e w ose dan disuspensikm didam

tabg erkmyer yang Mi & d e s steril. k a p t a n aaFi suspensi ~1~~

Optical

&miry dihat0.1 ( ~ ~ ~ = ~ . ~ ) y m g s e t a ; r al d
dw
m g~mm i .

Uji ketabenan tedadrp penyakit baIr;teri trtyu di mmsb ha

I m W i dihhkm e l a h tamman kmmw 6 dnggu setelah a k W i i di
rumah h PersiaQPuz kraakuki dMdm dmgm cam mmbuat swpensi RnXstonia
s a l m e m m deagaxl

OD = 0.1

&any&

volume ymg dibutubEcan. Metode i x a o b i

yang d h k d m addah W o d a Mdya et al., (2W) dmgan cam memotong dear tamman

d d m tanah d e w b e d L prPda h
baldmi OD = O,l -kg-metsing

p pabag. Sdelah &udis'rram &ogan suqensi

dengm volume 2 rdhmmmpada bagian ytrng drlukai,

Waiau inakdasi d i b k d m pa.@ hari ~ K i t a rpwkul09.00 W B .

Pengamatan dan a m a h data
I%ohi pmtaplas

P q m t a n diXzlkuican sxara mihoskapis dewan mikrosirop inverted

(UrYmphus) ter-

jmhh a m densitas prataplas ysylg d i k i h n dari.minggm85ityr

hkivar t e w Jumlah protopla dWung &wan haemcytom&era AdsL data
d h k h dmgan
shpmgan M

casa mng-

m-mjumlah

ptopIas yang dihasilk;an serta

u M setkp kubivar.

feagencem.an kultur
Pengmakn dihkukan secara d m & o p i s t e r h h p hyaknya j&
mkokalw yaag d h s h d q p cam menggopng kurtur terlebiir W u seam
perhhm m b g g 8 mikrokdus memh kseirmrix cawan
cam mengbhmg ~ - r a t d
am

-mi

diiskukan

hdka

mkokaius yang d * h d a n dari Seth
w

media dan Irultiva

Regnemsi tunas

Pengamtm dikbkm t d a d q b s y l ~ y jumlah
a
fmm, efisiensi k e h b i i a r a
r e g e m i , dm pnmpak;an visual tunas ymg d h i h Analistr data ehiiensi

kekigasilan regerxaasi d i l h k m dengm cam
d i h i denganjumhh MUSyang ~e~~

~~j&
d i i 100,

tunrts yang d h s h

Aklimathsi

P q m a t m d i l a h b terhzsdap pasentaw kebethasifan aklimathi dari set&
r e g e m y m g d h i h dan data p
t
w
z
l
m tamman sernua ldon ( rata-mh jumlah
tunas, tinggi tsaaman,j d a h dam dan jumlatr h g a ) .

Uji kehhlrna~$e&sdap pemyskit bskteri b y u

Pmgmutm d i k h h texhadap tamm ymg mati dan yang hidup M set@

klon yang diuji

NASIL DAN PEMBAHASAN

Imhsi Protaplrmjt
P e m i l h jenis, kunse:nimsi emino dan l a m @ode

mmntuh d d m k e k k i i umtuk tm:nda@km pmtapIws

irhbasi sangat
judh ymg

h y a k dm mmpunyai viabilitas yang Wi. Jhs, kombinasi dm kuflsentrasi
dab isolasi teuaaman solnnaceae m g a t kmiasi MoIltm

enzim yang -d

ef al. (1992) menggudan I S %
41.

s e l b dengotn 0.5% mmemzim, Cooper-hhd et

(1996) xmmggmh kombhasi mzim 1.5% seldase, 0.1% drisehse dan 0.194

pectofiase: Y-23. Thieme ef al. (1997) memwmzim dan hwito, (1999)

m q g u d m 0.5% wlulase @an

pectoliyw, &pat ~ n g h l a sprotnpk
i
tamman So*

*us?#t.

0,05%

S

d et al.

dmgm 0.5% m z i m dapat n#:n&lisoki

1.5%

(1988)

0.8% sekliolse h g m &I%

protoplas tamman S.khaianum

P m g p m m k o m b ' i i enzim s e l W Or#,zuka RS pada korwmtmsi 0-2-2%

d q a n maseroh - RIO pads koxxsenhsi 0.1-174 sexing d @ d m daXam isalasi
protapirts t a n a m Salanum (Femira drtn Zelwr? 1989). Kumbiaasi en&

d q a n rmxruzim &pat

me:ngkhi protophs tamman S.melangena, S.

aethiopicum, dan S. acmrleahun dengmun densitas y m g mi ( S h &

Dalam hal hi
mxyghash m1

elthe

m 2 ; i m

h h g s i untuk mlepaslran sel dPvi W
g
a
n

bnggal, scdmgkm

dinding sel ezliagga protoplas ta+

et al. 1998).

s e b k d m g s i mtuk mendegmhi

kcdahn larutan m z h dari dMhg =I. Wal

hi 6 dengan prnyataw F m i r a dm ZeXcer (1989) ymg m n y a t a h Wwa
e r n y m g s a h g digutrakan dahm isolasi pro top^ tEtnsY13rmn sohum addah
bmWis
e
X
W owmka-RS pada koxlse-i

0.2-2% d e w maserozim pda

komntxasi 0. l - 1%.

Hasit penetitian mnunjukkeur, bahwa p g g m a m metah S h b , (1998)
dengan

~~Irambasi cnzim seIukw Onazuka d e w mammzim R-I0

dab d i m CPW sangat

Mi dijpmhm @a penelit'xcm hi D

dam b q g b bawah digamgores t d b ' i chhulu dengan j d 1 1-

Wjean

dengan p h u

sebh diinkubasi d d m h & m a z i m Penggunamur irombhasi cmzh 0.5% whlwm
om-RS

dan US% r t d R-I0 ymg d b t s a s i 16 jam dapt

~~~

ptapEasyang~bI~~~~tinggi~iaiteriitaatdPrripro~plas~
d b d k m bentuknya blat sempurna setelah d W i

mkoskopik (Gambar

3 a ) . ~ m t ~
a p~ h s ~ g t i n g g i ~ d a r i ~ W u a g u y e r i t u

14.27 x f 0
' protopWg dam, k e d h diikuti tmmg bush put& 14.07 x 10' palia%

sedikit radakh tenmg h h hijau 12.91 x 1d (Tabel 1 ). Dari hkl ternbut dmrpat
dilihplt

bahwa rata-mh densitas ptotaphs arrtxrra tcmng ungu dm tmmg put%tidak

talalu k W S a h g k m rata-rab jumlab ptoplas dari tmmg fnijau jauh kb&
&&it

d i W i dengan tmmg bwh wngu clan h h put& P e h d a m ternbut

diduga dishbkan 0th Aaya tumbuh tamg

hijau d d m media p e r b y d m

iebih h b a t dari tenrng bwh ungu dan put& S e b irtu h e b dmmp j u g w kbih
kw3danleb&teMdihdingmMqhbuahputih,rninik
d e w hsrsil ptmlitian

-0,

(1999) pada tamman kentang, dimma tamman

S i b a c k et d.,(1998) &pat mngisolasi protoplas Solantun melongem cv
h w g a (buat.1 put&) dan S. aethio@mm cv
me-

~~ClCIeatwm
hgm

d e m h thggi

met& yang s a m d e v kurnposisi enzim ymg sama pula

P ~ B U I I ~ a~sW
moiitii

jmanitol0,5 M) dab ianrtan & s e h

inkubsi d q t t mencegah ktmwkm prataplas @.ah)

dan buffer MES (2-N-

morphoiina etkanedfonic acid) urrhxk: mmprhbdm pH @a kiserrrtn 5.5-6.0,
Buffer tersebut k g m a untuk: m m p r W d m vbbilitas protophs s e b
dagm cara meminixwaaXIrstfi paubdm pH h t a n enzim k
menetmkm etlzim-enzim hidrolitik y

d asam dm

q d i i r e l w b oleh sel y m g nu&

lsobi protoplas, Penggunaan asmathm dan buffer t m t mnyebdhn t e h
osimtik shphsmt sel dan Ihgbgan I u r sel seianbang sehhgga grotaptss tkW

rusak (Fearson et d*,
t 973).

Kultur Pmtophs

K o m p o s i s i m t ~ ~ y m g ~ ~ m a d i u m

mempengadi pertumbuhm dan prbmbmgm pmtoplas* S e h itu W u r cada
tidaknya

cahaya

s e h

lruXhrr juga

mmpengadi

priumbub

dan

p x k e m b g a q a Pertmbdm dm psbmbmgm protoplas ~ J a m akultur meMui
k h p tahap dmtn mnggmkm ka@i

medium yang k b e d a panda wtkp

t h p . Tdmp p t m a pala d i m a d a h Wi p e m b t u b dinding s l baru

dan d W i &ngm p e & W

=I. T d q M w add& pngemmm kunwntrasi %I

m e n g f g d m media betru untuk mmcu p e m d m b s i mmbemk ~~+

Tahq k r h b y a pemin$trixan m i h k pada d i a predat unhrb; m
pemb-

miroIralus m t r e n h k kaIus dm kgeneretsi.

u

t e r w ~ gb h put&

Wmgkm pa& d L VKM -41%

dm 1899 untukteruryy,

D i n d i =I m u k t e r b u k setelah 24 jam pada media pnabmm ymg

y

q ticlak d b e l . Sel yang viabe1 ditandai dengan semaIrifi k q a h y o r jtmW sel

mrmda path sethp kohni ymg bewarm bning d m g m inti ml yang b a r . S c d q k m

s l ahu kofoni sel yang tidak: viabe1 selnya b w a m a Wkhhn sampai k e h h m n

p e & b

ml yang ~~~ S h W (1988) nmenydzm b a k a densitas

sel y m g terw banyak dalam medium &an mnyekblran ~

urdulr

~~ pmberSttaan,

se-

~ =I

perxu d h k u b p g e m a m &um

dengm media b r a Pengemam dilakukan 4 mmptdmb k e m q u m sel

me~pertumlatHanrfiYlperIre~~yan~l;samajwgad~~~
(1999) pada studi regemmi pmtoplas b i l fusi tanaman ken-.

Rata-m jumM koloni ~1 y m g d i l m s h pda set*

bidang p n b g

add& 17 kukmiuntuktenmg Wmgu, 7,67 kaloni untukterung bUpLhhijm d m 2

k o f o n i , u n t u k ~ ~ p u t i h ~ m e d i a K M 8 P ~ 1 4 ~ t e r u n g W6u n g u ,

~hijau~1.67~putih,DriTabel3~butjuga~&~~wamedia
KM8P kbh trailr &bandIngh VKM, Hal h i dd e w W pmlitan Purwito,
k0rnpO~kja -8hK

-k

(1999)

WbarR

wmk plnbmhl h k a l u s dengal

sama

xne-

e&nsi

59.30% pada kultivar BFI 5 dan 47.20% pads ldtivar SPVIO.

basil yang t&&k

Pengertxcerrte K u h r

Kuftur de
i-

mmcw

&n&an t u j m

vhtrilitas sel,

untulc m-

~~d m perkp;mtxangern broni sel merabmk m i h W s d m

kdw (Gounbm 3d dan 3e). P q m a m smpnsi se1 W M krjadi pemblahan MI
dorpat dikkukm dengin b e b p cam. Biding et d,(1978) mehhkm pengetlcerttn
kultur dimma q n s i k a h i ml d

i p i pada MBdh yang

sam m
a
n

pmmbhmagar k t o konsentmi redab (0.3%) atau p e n g m &ngm medium

dan komposisi reaE pengatur tumt>uh ymg sama atxu trerkxh dengan komposisi m d k
p o a b begitu juga yang dhkuhn okh Thomas, (198 1) dm JBakelman d m Rust
(1983).

T

i keditan dolfotm met& regenemi ptoplas s m p i mnghilkan

tuxgas sangat tinggi kasena set*

tothap perkemhgm ~

e komposisir &ia

y m g ~ ~ ~ h b g g a ~ t e r kj oa~di p
i adadahsertutahapb~

~

Pada pmlit'm ini taupemi kobni pmtophs diensdm d q p m d h dam
y a n g ~ ~ I a h Z n r f h u b e n u n u r 2 m i n h t g uNmunmtpmgat~~trraafruhyaag

d i g m a b diganti d
e
w 0,1 mg/l 2,4-D Ban 2

BAF (

~ 1998).
~
,

S

P ~ e ~ ~ d i l o t k u i r r t n ~ e t n ~ ~ i t i g a ~ s a

berisikolonise1(~2ml)kedalrtmcerw~npeiribaru~~90nmnx15

~~ media wngaeerm masing-masing

m Kern-

7-8 ml

~ f : m w ~ ~ ~ ~ p e r k ~ = f d e n I F a n t r m j u l n
untukmem~pembebdanmempertebttldinding~1,Wrml~~j~
d

e

n

g

a

d

a

n

~

n

t

u

n

y

a

~

~

y

~

~

t

e

r

~

~

~

d a g m warm pufih kehnhgm (Gunbar 3 4 . h a p t a n

setelah page~

a

p

e

r

k

m

~

~

1

~

~

~

s

a

n

I

g

a

t

~

j

e

media daFau: yang digumkm Efaf ini semai dengan penelitom Puwito, (1999) pack
t m m m kentang dimam p e h h sel

pmgenwrm &makin lama w&u

sernaXrin wpt &Xab

d h b h

hhbasi m d h bertolmboth b
y
& jlunlah

mikub;aius yang t e r h t u k

Mikrawus yzlng terbentuk ~ l dpmgawxm
l
pada umarr 1 dm 3 minggu

cfapat dilitrat: pada T h l 4 . Dari Tab1 tms&ut

@at

d m & b&wa jumiah

rl..rMm y q tedmmk d banyak setehh 3 m@gu pula medi

pengen~pdaked~l~l~~~~tenmgWungu~~tlttuPlhhijlru

~ t e n r r z g b u o L h p u t i h W ~ ~ b n a ~ m e n g ~

ko&i

~IeXxjmmrdanElalrteri.~ r a t a j u m I a h m i b r r o ~ y z l n g d ~

&id& sebmyak 5-71 pada d h KM8f dan 2-4 p d a media VKM untuk knmg

Tabel 4, Bengaruh jenis media dasm W 8 B dan WW) tt?rXarsdlnp-k
protnprsts mmbntuk m i b k d q 1 dm 3 minggu setelah pnge-

Regenemi tunas

P & ~ i n i ~ p m i n d a X 3 a n ~ ~ u s y ~ d i h a S h p