Efektivitas Antivirus Ekstrak Batang Brotowali (Tinospora tuberculata Beumee) terhadap Virus Dengue secara In Vitro.
EFEKTIVITAS ANTIVIRUS EKSTRAK BATANG BROTOWALI
(Tinospora tuberculata Beumee)
TERHADAP VIRUS DENGUE SECARA IN VITRO
SKRIPSI
Untuk Memenuhi Persyaratan
Memperoleh Gelar Sarjana Kedokteran
ANINDYA TAMA TEJA DIPUTRI
G0013031
FAKULTAS KEDOKTERAN
UNIVERSITAS SEBELAS MARET
Surakarta
2016
ii
rrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrr
iii
ABSTRAKS
Anindya Tama Teja Diputri, G0013031, 2016. Efektivitas Antivirus Ekstrak
Batang Brotowali (Tinospora tuberculata Beumee) terhadap Virus Dengue secara
In Vitro. Skripsi Fakultas Kedokteran Universitas Sebelas Maret, Surakarta.
Latar Belakang: Infeksi virus dengue merupakan salah satu jenis infeksi virus
yang endemik di daerah tropis dan subtropis. Hingga saat ini penanganan kasus
infeksi virus dengue masih bersifat simptomatis dan suportif. Oleh karena itu,
diperlukan strategi lain untuk mengatasinya, salah satunya dengan pengembangan
antivirus dari ekstrak bahan alam. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui
efektivitas antivirus ekstrak batang brotowali (Tinospora tuberculata Beumee)
terhadap virus dengue secara in vitro.
Metode Penelitian: Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental laboratorik
dengan post test control group design only. Penelitian dilakukan di Laboratorium
Penelitian Departemen Biologi Farmasi Fakultas Farmasi Universitas Gadjah
Mada serta Laboratorium Virologi dan Biologi Molekuler Departemen
Mikrobiologi Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia. Subjek penelitian
adalah virus dengue serotipe 2 strain New Guinea C yang diinfeksikan ke dalam
cell line Huh-7. Penelitian dibagi dalam 2 uji yaitu uji daya hambat ekstrak
terhadap DENV-2 yang ditentukan melalui nilai Inhibitory Concentration 50
(IC50) dengan metode Focus Forming Unit Assay dan uji toksisitas ekstrak
terhadap sel Huh-7 yang ditentukan melalui nilai Cytotoxicity Concentration 50
(CC50) dengan metode MTT assay. Selanjutnya, nilai CC50 dibandingkan
dengan nilai IC50 untuk memperoleh nilai indeks selektivitas.
Hasil Penelitian: Ekstrak batang brotowali (Tinospora tuberculata Beumee)
memiliki nilai IC50 sebesar 47,00 µg/ml, nilai CC50 sebesar 90,43 µg/ml, dan
nilai selectivity index (SI) sebesar 1,92.
Kesimpulan: Ekstrak batang brotowali (Tinospora tuberculata Beumee) tidak
efektif dalam menghambat replikasi virus dengue secara in vitro dan memiliki
efek toksik terhadap sel Huh-7. Selain itu, ekstrak batang brotowali (Tinospora
tuberculata Beumee) juga kurang selektif dalam menghambat replikasi virus
dengue secara in vitro.
Kata Kunci: Tinospora tuberculata Beumee, Virus Dengue, Huh-7, DENV-2
iv
ABSTRACT
Anindya Tama Teja Diputri, G0013031, 2016. Antiviral Effectivity of
Brotowali Stem Extract (Tinospora tuberculata Beumee) against Dengue Virus In
Vitro. Mini Thesis. Faculty of Medicine, Sebelas Maret University, Surakarta.
Background: Dengue virus infection is one of the most endemic viral infection in
tropic and subtropic area. The main treatment of dengue virus infection is
symptomatic and supportive therapy. Therefore, it is necessary to determine
strategies against dengue virus infection by developing natural product which has
antiviral effect. The aim of this research is to determine the effectivity of
brotowali stem extract (Tinospora tuberculata Beumee) as dengue antiviral in
vitro.
Methods: This study was a laboratory experimental research with post test control
group design only, held in Research Laboratory Biology and Pharmacy
Deparment of Pharmacy Faculty Universitas Gadjah Mada and Virology and
Molecular Biology Laboratory Microbiology Department of Medical Faculty
Universitas Indonesia. The subject of this experiment was dengue virus serotype
2 strain New Guinea C which was infected into Huh-7 cell line. This research
conducted in 2 parts. First, inhibition test against DENV-2 assessed by inhibitory
concentration 50 (IC50) by focus forming unit assay method. Second toxicity test
in Huh-7 cell line assessed by cytotoxicity concentration 50 (CC50) by MTT
assay method. Next, we compared the value of CC50 and IC50 to find the
selectivity index value.
Results: Brotowali stem extract (Tinospora tuberculata Beumee) had IC50 value
of 47,00 µg/ml, CC50 value of 90,43 µg/ml, and selectivity index (SI) value of
1,92.
Conclusions: Brotowali stem extract (Tinospora tuberculata Beumee) is not
effective against dengue virus replication in vitro. This extract had toxic effect to
Huh-7 cell line.Brotowali stem extract (Tinospora tuberculta Beumee) is not
selective against dengue virus replication in vitro.
Keywords: Tinospora tuberculata Beumee, Dengue Virus, Huh-7, DENV-2
v
PRAKATA
Puji syukur penulis kepada Allah SWT atas berkah dan rahmat-Nya
sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi dengan judul ”Efektivitas Antivirus
Ekstrak Batang Brotowali (Tinospora tuberculata Beumee) terhadap Virus
Dengue secara In Vitro”. Penyusunan skripsi ini tidap dapat terselesaikan tanpa
pengarahan, bimbingan dan dukungan dari berbagai pihak. Untuk itu, penulis
mengucapkan terima kasih kepada:
1.
Prof. Dr. Hartono, dr., M.Si, selaku Dekan Fakultas Kedokteran Universitas
Sebelas Maret Surakarta yang telah memberikan ijin pelaksanaan penelitian
dalam penyusunan skripsi.
2. Kusmadewi Eka Damayanti, dr., M.Gizi, selaku Ketua Tim Skripsi beserta
Tim Skripsi Fakultas Kedokteran Universitas Sebelas Maret Surakarta yang
telah memberikan ijin pelaksanaan penelitian dalam penyusunan skripsi.
3. Marwoto, dr., M.Sc., Sp.MK, selaku Pembimbing Utama yang telah
memberikan waktu, bimbingan, dan motivasi kepada penulis.
4. Ratih Dewi Yudhani, dr., M.Sc., selaku Pembimbing Pendamping yang telah
memberikan waktu, bimbingan, dan motivasi kepada penulis.
5. Leli Saptawati, dr., Sp.MK, selaku Penguji Utama yang telah berkenan untuk
menguji dan memberikan kritik dan saran bagi penyusunan skripsi ini.
6. Beti Ernawati Dewi, S.si., Ph,D. dan Hidayati Desti yang telah memberikan
kesempatan untuk melakukan penelitian kolaborasi uji antivirus dengue in
vitro di Departemen Mikrobiologi FK UI.
7. Keluarga. Papa, Drs. Anis Febriantomo dan Mama, Almh. Dra. Yulia Sariati
serta adik, Aditya Tamateja Diputra atas doa, dukungan, dan semangat yang
telah diberikan setiap waktu.
8. Natasha Ninda Pramalista, teman seperjuangan satu tim skripsi yang selalu
memberikan motivasi dan dukungan dalam menghadapi hambatan sehingga
dapat menyusun skripsi ini dengan baik.
9. Yuanita Citra Syafitri atas segala dukungan, motivasi, dan bantuannya selama
proses penyusunan skripsi.
10. Dwitia Ayu Iswari dan Yani Dwi Pratiwi, asisten laboratorium mikrobiologi
FK UNS yang luar biasa.
11. Deonika Ariescika Putri atas segala bantuan selama proses penyusunan
skripsi.
12. Semua pihak yang telah membantu dalam penulisan skripsi ini.
Penulis menyadari masih banyak kekurangan dalam skripsi ini, oleh karena
itu kritik dan saran sangat penulis harapkan dalam penyempurnaan skripsi ini.
Akhir kata penulis berharap semoga skripsi ini dapat memberikan manfaat
bagi pembaca serta menjadi sumbangan bagi ilmu kedokteran selanjutnya.
Surakarta, November 2016
Anindya Tama Teja Diputri
vi
DAFTAR ISI
PRAKATA .......................................................................................................
vi
DAFTAR ISI ....................................................................................................
vii
DAFTAR TABEL ............................................................................................
xi
DAFTAR GAMBAR .......................................................................................
xii
DAFTAR LAMPIRAN ....................................................................................
xii
BAB I PENDAHULUAN ................................................................................
1
A. Latar Belakang Masalah ...................................................................
1
B. Rumusan Masalah.............................................................................
3
C. Tujuan Penelitian ..............................................................................
3
1. Tujuan Umum .............................................................................
3
2. Tujuan Khusus ............................................................................
3
D. Manfaat Penelitian ............................................................................
4
1. Manfaat Teoritis .........................................................................
4
2. Manfaat Aplikatif .......................................................................
4
BAB II LANDASAN TEORI ..........................................................................
5
A. Tinjauan Pustaka ................................................................................
5
1. Virus Dengue .............................................................................
5
a.
Deskripsi ............................................................................
5
b.
Patogenesis ........................................................................
6
c.
Manifestasi Klinis..............................................................
8
2. Tanaman Brotowali (Tinospora tuberculata Beumee) ..............
vii
11
a.
Taksonomi .........................................................................
11
b.
Nama Umum .....................................................................
11
c.
Deskripsi ............................................................................
12
d.
Etnofarmakologi ................................................................
13
e.
Kandungan Kimia dan Efek Farmakologis .......................
14
3. Ekstraksi Bahan Alam ...............................................................
16
4. Kultur Virus Dengue .................................................................
17
5. Huh-7 Cell Line .........................................................................
19
B. Kerangka Berpikir ...........................................................................
20
C. Hipotesis ..........................................................................................
21
BAB III METODE PENELITIAN...................................................................
22
A. Jenis Penelitian ................................................................................
22
B. Lokasi Penelitian dan Waktu Penelitian ..........................................
22
C. Subjek Penelitian .............................................................................
22
D. Identifikasi Variabel Penelitian .......................................................
22
1. Variabel Bebas ............................................................................
22
2. Variabel Terikat ..........................................................................
23
3. Variabel Luar Terkendali ............................................................
23
4. Variabel Luar Tidak Terkendali .................................................
23
E. Definisi Operasional Variabel ..........................................................
23
1. Variabel Bebas ............................................................................
23
2. Variabel Terikat ..........................................................................
24
a. Daya Hambat Ekstrak Herbal ...............................................
24
viii
b. Daya Toksik Ekstrak Herbal .................................................
25
c. Variabel Luar Terkendali ......................................................
27
d. Variabel Luar Tidak Terkendali ...........................................
27
F. Rancangan Penelitian ......................................................................
28
1. Percent Infectivity .......................................................................
28
2. Mapping 96 Well Flat Bottom Plate – Uji Fokus .......................
30
3. Percent Viabiliy ..........................................................................
31
4. Mapping 48 Well Flat Bottom Plate – Uji MTT ........................
33
G. Alat dan Bahan ................................................................................
34
H. Prosedur Penelitian ..........................................................................
36
1. Tahap Persiapan DENV ..............................................................
36
2. Tahap Pengujian Toksisitas dan Penghambatan DENV .............
38
3. Uji Efektivitas .............................................................................
39
Teknik Analisis Data .......................................................................
45
BAB IV HASIL PENELITIAN .......................................................................
47
A. Inhibitory Concentration 50 (IC50) ................................................
47
B. Cytotoxic Concentration 50 (CC50) ................................................
49
C. Indeks Selektivitas ...........................................................................
52
BAB V PEMBAHASAN .................................................................................
53
A. Inhibitory Concentration 50 (IC50) ................................................
53
B. Cytotoxic Concentration 50 (CC50) ................................................
55
C. Selectivity Index (SI) ........................................................................
57
D. Keterbatasan Penelitian ...................................................................
58
I.
ix
BAB VI PENUTUP .........................................................................................
60
A.
Simpulan........................................................................................
60
B.
Saran ..............................................................................................
60
DAFTAR PUSTAKA ......................................................................................
61
LAMPIRAN
x
DAFTAR TABEL
Tabel 4.1. Persentase Infektivitas Ekstrak Batang Brotowali (Tinospora
tuberculata Beumee) terhadap Replikasi DENV-2 ........................... 48
Tabel 4.2. Persentase Viabilitas Ekstrak Batang Brotowali (Tinospora
tuberculata Beumee) terhadap Sel Huh-7 ........................................ 50
xi
DAFTAR GAMBAR
Gambar 2.1. Skema Kriteria Diagnosis Infeksi Dengue ............................. 9
Gambar 2.2. Tinospora tuberculata Beumee............................................... 12
Gambar 2.3. Skema Kerangka Berpikir ...................................................... 20
Gambar 3.1. Uji Focus Forming Unit (FFU) .............................................. 28
Gambar 3.2. Mind Map 96 Well Flat Bottom Plate – Uji FFU ................... 30
Gambar 3.3. Uji MTT (3-(4,5-dimetilthiazol-2-il) 2,5-difenil tetrazoliumbromide) ................................................................................. 31
Gambar 3.4. Mind Map 48 Well Flat Bottom Plate – Uji MTT .................. 33
Gambar 4.1. Rata – rata Persentase Infektivitas Ekstrak Batang
Brotowali (Tinospora tuberculata Beumee) terhadap
Replikasi DENV-2.................................................................. 49
Gambar 4.2. Rata – rata Persentase Viabilitas Ekstrak Batang Brotowali
(Tinospora tuberculata Beumee) terhadap Sel Huh-7 ............ 51
xii
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1 Hasil Perhitungan Focus Forming Unit (FFU)
Lampiran 2. Hasil Pembacaan Absorbansi Sel pada ELISA Reader
Lampiran 3. Foto Kegiatan Penelitian
xiii
(Tinospora tuberculata Beumee)
TERHADAP VIRUS DENGUE SECARA IN VITRO
SKRIPSI
Untuk Memenuhi Persyaratan
Memperoleh Gelar Sarjana Kedokteran
ANINDYA TAMA TEJA DIPUTRI
G0013031
FAKULTAS KEDOKTERAN
UNIVERSITAS SEBELAS MARET
Surakarta
2016
ii
rrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrr
iii
ABSTRAKS
Anindya Tama Teja Diputri, G0013031, 2016. Efektivitas Antivirus Ekstrak
Batang Brotowali (Tinospora tuberculata Beumee) terhadap Virus Dengue secara
In Vitro. Skripsi Fakultas Kedokteran Universitas Sebelas Maret, Surakarta.
Latar Belakang: Infeksi virus dengue merupakan salah satu jenis infeksi virus
yang endemik di daerah tropis dan subtropis. Hingga saat ini penanganan kasus
infeksi virus dengue masih bersifat simptomatis dan suportif. Oleh karena itu,
diperlukan strategi lain untuk mengatasinya, salah satunya dengan pengembangan
antivirus dari ekstrak bahan alam. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui
efektivitas antivirus ekstrak batang brotowali (Tinospora tuberculata Beumee)
terhadap virus dengue secara in vitro.
Metode Penelitian: Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental laboratorik
dengan post test control group design only. Penelitian dilakukan di Laboratorium
Penelitian Departemen Biologi Farmasi Fakultas Farmasi Universitas Gadjah
Mada serta Laboratorium Virologi dan Biologi Molekuler Departemen
Mikrobiologi Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia. Subjek penelitian
adalah virus dengue serotipe 2 strain New Guinea C yang diinfeksikan ke dalam
cell line Huh-7. Penelitian dibagi dalam 2 uji yaitu uji daya hambat ekstrak
terhadap DENV-2 yang ditentukan melalui nilai Inhibitory Concentration 50
(IC50) dengan metode Focus Forming Unit Assay dan uji toksisitas ekstrak
terhadap sel Huh-7 yang ditentukan melalui nilai Cytotoxicity Concentration 50
(CC50) dengan metode MTT assay. Selanjutnya, nilai CC50 dibandingkan
dengan nilai IC50 untuk memperoleh nilai indeks selektivitas.
Hasil Penelitian: Ekstrak batang brotowali (Tinospora tuberculata Beumee)
memiliki nilai IC50 sebesar 47,00 µg/ml, nilai CC50 sebesar 90,43 µg/ml, dan
nilai selectivity index (SI) sebesar 1,92.
Kesimpulan: Ekstrak batang brotowali (Tinospora tuberculata Beumee) tidak
efektif dalam menghambat replikasi virus dengue secara in vitro dan memiliki
efek toksik terhadap sel Huh-7. Selain itu, ekstrak batang brotowali (Tinospora
tuberculata Beumee) juga kurang selektif dalam menghambat replikasi virus
dengue secara in vitro.
Kata Kunci: Tinospora tuberculata Beumee, Virus Dengue, Huh-7, DENV-2
iv
ABSTRACT
Anindya Tama Teja Diputri, G0013031, 2016. Antiviral Effectivity of
Brotowali Stem Extract (Tinospora tuberculata Beumee) against Dengue Virus In
Vitro. Mini Thesis. Faculty of Medicine, Sebelas Maret University, Surakarta.
Background: Dengue virus infection is one of the most endemic viral infection in
tropic and subtropic area. The main treatment of dengue virus infection is
symptomatic and supportive therapy. Therefore, it is necessary to determine
strategies against dengue virus infection by developing natural product which has
antiviral effect. The aim of this research is to determine the effectivity of
brotowali stem extract (Tinospora tuberculata Beumee) as dengue antiviral in
vitro.
Methods: This study was a laboratory experimental research with post test control
group design only, held in Research Laboratory Biology and Pharmacy
Deparment of Pharmacy Faculty Universitas Gadjah Mada and Virology and
Molecular Biology Laboratory Microbiology Department of Medical Faculty
Universitas Indonesia. The subject of this experiment was dengue virus serotype
2 strain New Guinea C which was infected into Huh-7 cell line. This research
conducted in 2 parts. First, inhibition test against DENV-2 assessed by inhibitory
concentration 50 (IC50) by focus forming unit assay method. Second toxicity test
in Huh-7 cell line assessed by cytotoxicity concentration 50 (CC50) by MTT
assay method. Next, we compared the value of CC50 and IC50 to find the
selectivity index value.
Results: Brotowali stem extract (Tinospora tuberculata Beumee) had IC50 value
of 47,00 µg/ml, CC50 value of 90,43 µg/ml, and selectivity index (SI) value of
1,92.
Conclusions: Brotowali stem extract (Tinospora tuberculata Beumee) is not
effective against dengue virus replication in vitro. This extract had toxic effect to
Huh-7 cell line.Brotowali stem extract (Tinospora tuberculta Beumee) is not
selective against dengue virus replication in vitro.
Keywords: Tinospora tuberculata Beumee, Dengue Virus, Huh-7, DENV-2
v
PRAKATA
Puji syukur penulis kepada Allah SWT atas berkah dan rahmat-Nya
sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi dengan judul ”Efektivitas Antivirus
Ekstrak Batang Brotowali (Tinospora tuberculata Beumee) terhadap Virus
Dengue secara In Vitro”. Penyusunan skripsi ini tidap dapat terselesaikan tanpa
pengarahan, bimbingan dan dukungan dari berbagai pihak. Untuk itu, penulis
mengucapkan terima kasih kepada:
1.
Prof. Dr. Hartono, dr., M.Si, selaku Dekan Fakultas Kedokteran Universitas
Sebelas Maret Surakarta yang telah memberikan ijin pelaksanaan penelitian
dalam penyusunan skripsi.
2. Kusmadewi Eka Damayanti, dr., M.Gizi, selaku Ketua Tim Skripsi beserta
Tim Skripsi Fakultas Kedokteran Universitas Sebelas Maret Surakarta yang
telah memberikan ijin pelaksanaan penelitian dalam penyusunan skripsi.
3. Marwoto, dr., M.Sc., Sp.MK, selaku Pembimbing Utama yang telah
memberikan waktu, bimbingan, dan motivasi kepada penulis.
4. Ratih Dewi Yudhani, dr., M.Sc., selaku Pembimbing Pendamping yang telah
memberikan waktu, bimbingan, dan motivasi kepada penulis.
5. Leli Saptawati, dr., Sp.MK, selaku Penguji Utama yang telah berkenan untuk
menguji dan memberikan kritik dan saran bagi penyusunan skripsi ini.
6. Beti Ernawati Dewi, S.si., Ph,D. dan Hidayati Desti yang telah memberikan
kesempatan untuk melakukan penelitian kolaborasi uji antivirus dengue in
vitro di Departemen Mikrobiologi FK UI.
7. Keluarga. Papa, Drs. Anis Febriantomo dan Mama, Almh. Dra. Yulia Sariati
serta adik, Aditya Tamateja Diputra atas doa, dukungan, dan semangat yang
telah diberikan setiap waktu.
8. Natasha Ninda Pramalista, teman seperjuangan satu tim skripsi yang selalu
memberikan motivasi dan dukungan dalam menghadapi hambatan sehingga
dapat menyusun skripsi ini dengan baik.
9. Yuanita Citra Syafitri atas segala dukungan, motivasi, dan bantuannya selama
proses penyusunan skripsi.
10. Dwitia Ayu Iswari dan Yani Dwi Pratiwi, asisten laboratorium mikrobiologi
FK UNS yang luar biasa.
11. Deonika Ariescika Putri atas segala bantuan selama proses penyusunan
skripsi.
12. Semua pihak yang telah membantu dalam penulisan skripsi ini.
Penulis menyadari masih banyak kekurangan dalam skripsi ini, oleh karena
itu kritik dan saran sangat penulis harapkan dalam penyempurnaan skripsi ini.
Akhir kata penulis berharap semoga skripsi ini dapat memberikan manfaat
bagi pembaca serta menjadi sumbangan bagi ilmu kedokteran selanjutnya.
Surakarta, November 2016
Anindya Tama Teja Diputri
vi
DAFTAR ISI
PRAKATA .......................................................................................................
vi
DAFTAR ISI ....................................................................................................
vii
DAFTAR TABEL ............................................................................................
xi
DAFTAR GAMBAR .......................................................................................
xii
DAFTAR LAMPIRAN ....................................................................................
xii
BAB I PENDAHULUAN ................................................................................
1
A. Latar Belakang Masalah ...................................................................
1
B. Rumusan Masalah.............................................................................
3
C. Tujuan Penelitian ..............................................................................
3
1. Tujuan Umum .............................................................................
3
2. Tujuan Khusus ............................................................................
3
D. Manfaat Penelitian ............................................................................
4
1. Manfaat Teoritis .........................................................................
4
2. Manfaat Aplikatif .......................................................................
4
BAB II LANDASAN TEORI ..........................................................................
5
A. Tinjauan Pustaka ................................................................................
5
1. Virus Dengue .............................................................................
5
a.
Deskripsi ............................................................................
5
b.
Patogenesis ........................................................................
6
c.
Manifestasi Klinis..............................................................
8
2. Tanaman Brotowali (Tinospora tuberculata Beumee) ..............
vii
11
a.
Taksonomi .........................................................................
11
b.
Nama Umum .....................................................................
11
c.
Deskripsi ............................................................................
12
d.
Etnofarmakologi ................................................................
13
e.
Kandungan Kimia dan Efek Farmakologis .......................
14
3. Ekstraksi Bahan Alam ...............................................................
16
4. Kultur Virus Dengue .................................................................
17
5. Huh-7 Cell Line .........................................................................
19
B. Kerangka Berpikir ...........................................................................
20
C. Hipotesis ..........................................................................................
21
BAB III METODE PENELITIAN...................................................................
22
A. Jenis Penelitian ................................................................................
22
B. Lokasi Penelitian dan Waktu Penelitian ..........................................
22
C. Subjek Penelitian .............................................................................
22
D. Identifikasi Variabel Penelitian .......................................................
22
1. Variabel Bebas ............................................................................
22
2. Variabel Terikat ..........................................................................
23
3. Variabel Luar Terkendali ............................................................
23
4. Variabel Luar Tidak Terkendali .................................................
23
E. Definisi Operasional Variabel ..........................................................
23
1. Variabel Bebas ............................................................................
23
2. Variabel Terikat ..........................................................................
24
a. Daya Hambat Ekstrak Herbal ...............................................
24
viii
b. Daya Toksik Ekstrak Herbal .................................................
25
c. Variabel Luar Terkendali ......................................................
27
d. Variabel Luar Tidak Terkendali ...........................................
27
F. Rancangan Penelitian ......................................................................
28
1. Percent Infectivity .......................................................................
28
2. Mapping 96 Well Flat Bottom Plate – Uji Fokus .......................
30
3. Percent Viabiliy ..........................................................................
31
4. Mapping 48 Well Flat Bottom Plate – Uji MTT ........................
33
G. Alat dan Bahan ................................................................................
34
H. Prosedur Penelitian ..........................................................................
36
1. Tahap Persiapan DENV ..............................................................
36
2. Tahap Pengujian Toksisitas dan Penghambatan DENV .............
38
3. Uji Efektivitas .............................................................................
39
Teknik Analisis Data .......................................................................
45
BAB IV HASIL PENELITIAN .......................................................................
47
A. Inhibitory Concentration 50 (IC50) ................................................
47
B. Cytotoxic Concentration 50 (CC50) ................................................
49
C. Indeks Selektivitas ...........................................................................
52
BAB V PEMBAHASAN .................................................................................
53
A. Inhibitory Concentration 50 (IC50) ................................................
53
B. Cytotoxic Concentration 50 (CC50) ................................................
55
C. Selectivity Index (SI) ........................................................................
57
D. Keterbatasan Penelitian ...................................................................
58
I.
ix
BAB VI PENUTUP .........................................................................................
60
A.
Simpulan........................................................................................
60
B.
Saran ..............................................................................................
60
DAFTAR PUSTAKA ......................................................................................
61
LAMPIRAN
x
DAFTAR TABEL
Tabel 4.1. Persentase Infektivitas Ekstrak Batang Brotowali (Tinospora
tuberculata Beumee) terhadap Replikasi DENV-2 ........................... 48
Tabel 4.2. Persentase Viabilitas Ekstrak Batang Brotowali (Tinospora
tuberculata Beumee) terhadap Sel Huh-7 ........................................ 50
xi
DAFTAR GAMBAR
Gambar 2.1. Skema Kriteria Diagnosis Infeksi Dengue ............................. 9
Gambar 2.2. Tinospora tuberculata Beumee............................................... 12
Gambar 2.3. Skema Kerangka Berpikir ...................................................... 20
Gambar 3.1. Uji Focus Forming Unit (FFU) .............................................. 28
Gambar 3.2. Mind Map 96 Well Flat Bottom Plate – Uji FFU ................... 30
Gambar 3.3. Uji MTT (3-(4,5-dimetilthiazol-2-il) 2,5-difenil tetrazoliumbromide) ................................................................................. 31
Gambar 3.4. Mind Map 48 Well Flat Bottom Plate – Uji MTT .................. 33
Gambar 4.1. Rata – rata Persentase Infektivitas Ekstrak Batang
Brotowali (Tinospora tuberculata Beumee) terhadap
Replikasi DENV-2.................................................................. 49
Gambar 4.2. Rata – rata Persentase Viabilitas Ekstrak Batang Brotowali
(Tinospora tuberculata Beumee) terhadap Sel Huh-7 ............ 51
xii
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1 Hasil Perhitungan Focus Forming Unit (FFU)
Lampiran 2. Hasil Pembacaan Absorbansi Sel pada ELISA Reader
Lampiran 3. Foto Kegiatan Penelitian
xiii