Lampiran 1. Perhitungan larutan sampel dan perhitungan sel 1. Perhitungan larutan sampel AKTIVITAS SITOTOKSIK EKSTRAK ETANOL RIMPANG LEMPUYANG GAJAH (Zingiber zerumbet L.) DAN RIMPANG LEMPUYANG EMPRIT (Zingiber littorale Val.) TERHADAP SEL KANKER PAYUDA

48

Lampiran 1. Perhitungan larutan sampel dan perhitungan sel
1. Perhitungan larutan sampel
Stok (100.000 µg/ml)

= 50 mg ekstrak dalam 500 µl DMSO.

Sub stok (1000 µg/ml)

= 10 µl (konsentrasi 100.000 µg/ml) ad media 1 ml.

Rumus : C1 x V1 = C2 x V2
Keterangan :

C1 = konsentrasi stok
C2 = Konsentrasi yang diinginkan
V1 = Volume larutan stok
V2 = Volume total yang dibuat

a. Konsentrasi 10 µg/ml (larutan uji 5 µg/ml)

C1 x V1 = C2 x V2  100 µg/ml x V1 = 10µg/ml x 400 µl
 V1 = 40 µl
b. Konsentrasi 20 µg/ml (larutan uji 10 µg/ml)
C1 x V1 = C2 x V2  100 µg/ml x V1 = 10 µg/ml x 400 µl
 V1 = 80 µl
c. Konsentrasi 50 µg/ml (larutan uji 25 µg/ml)
C1 x V1 = C2 x V2  1.000 µg/ml x V1 = 50 µg/ml x 400 µl
 V1 = 20 µl
d. Konsentrasi 100 µg/ml (larutan uji 50 µg/ml)
C1 x V1 = C2 x V2  1.000 µg/ml x V1 = 100 µg/ml x 600 µl
 V1 = 60 µl
e. Konsentrasi 200 µg/ml (larutan uji 100 µg/ml)
C1 x V1 = C2 x V2  1.000 µg/ml x V1 = 200 µg/ml x 400 µl

48

 V1 = 80 µl
f. Konsentrasi 300 µg/ml (larutan uji 150 µg/ml)
C1 x V1 = C2 x V2  1.000 µg/ml x V1 = 300 µg/ml x 400 µl
 V1 = 120 µl

2. Perhitungan Sel
Sel 

231
4

x 104 =577.500 sel/ml
=2.887.500 sel/5ml

Pengambilan sel =

5000 � 100
2.887.500

x 5 ml

= 0,866 ml ad 15 ml media

48

Lampiran 2. Pembuatan larutan MTT
Dibuat stok 50 mg serbuk MTT dilarutkan dalam 10 ml PBS sehingga
diperoleh konsentrasi 5 mg/ml. Diinginkan konsentrasi larutan MTT untuk
perlakuan adalah 0,5 mg/ml.
Perhitungan:
C1 x V1 = C2 x V2  5 mg/ml x V1 = 0,5 mg/ml x 10 ml
 V1 = 1 ml
Jadi 1 ml dari larutan stok MTT diencerkan dengan 10 ml media kultur (untuk
1 buah 96 well plate). Setiap sumuran berisi 100 µl larutan MTT.

48

Lampiran 3. Perhitungan seri konsentrasi doxorubicin.
Sedian injeksi 2 mg/ml  2 g/L


2
543,5

.

�/�

 3,68 x 10-3 M
 3,68 x 106 nM
1. Pembuatan stok (100.000 nM)
C1 x V1 = C2 x V2  3,68 x 106 nM x V1 = 100.000 nM x 500 µl
 V1 = 13,6 µl
Jadi pengambilan dari sediaan injeksi 13,6 µl di ad kan 500 µl media
2. Pembuatan sub stok (1000 nM)
C1 x V1 = C2 x V2  100.000 nM x V1 = 1.000 nM x 500 µl
 V1 = 5 µl
Jadi pengambilan dari stok 100.000 nM 5 µl di ad kan 500 µl media
3. Seri konsentrasi doxorubicin
No.

Konsentrasi
(nM)

Volume

stok (µl)

Penambahan
media (µl)

1
2
3
4
5
6
7
8

2,5
5
10
15
25
50

100
150

40
80
160
240
25
20
40
60

360
320
240
160
975
380
360
340

4. Perhitungan IC50
Persamaan regresi linier Y = -55,36X + 153,5

Pengambilan stok
dari konsentrasi
(nM)
25
25
25
25
1000
1000
1000
1000

48

Y = -55,36X + 153,5
50 = -55,36X + 153,5

X = 1,8695981  antilog

 IC50

5. Konversi satuan
IC50 Doxorubicin = 74,06 nM
= 74,06
= 74,06
= 74,06

�/�

x 10-9

µ�/�
1000 �

µ�/�
�

=0,04 µg/ml

x 10-3
x 10-6 x 543,5

= 74,06

= 74,06

48

Lampiran 4. Data hasil uji sitotoksik ekstrak etanol rimpang lempuyang
emprit.
1. Absorbansi kontrol sel dan Kontrol media
Kontrol sel
0,731
0,854
0,722
0,665
0,832

0,809
0,768
0,704

Rata2 k.sel

0,761

Kontrol media
0,127
0,125
0,121
0,120
0,115
0,125
0,149
0,124

Rata2 media

k.sel-k.media

0,126

0,635

2. Absorbansi ekstrak etanol lempuyang emprit
Konsentrasi
uji (µg/ml)
10
25
50
100
150

log
1,000
1,398
1,699
2,000
2,176

Absorbansi
Rep.1 Rep.2 Rep.3
0,740 0,818 0,905
0,621 0,660 0,738
0,412 0,511 0,517
0,219 0,243 0,439
0,149 0,153 0,167

Rep.1
96,693
77,953
45,039
14,646
3,622

% sel hidup
rata2 % sel
Rep.2
Rep.3
hidup
108,976 122,677
109,449
84,094 96,378
86,142
60,630 61,575
55,748
18,425 49,291
27,454
4,252
6,457
4,777

3. Grafik log konsentrasi terhadap persentase sel hidup (%)

persentase sel hidup (%)

lempuyang emprit
120,000
100,000
80,000
60,000
40,000
20,000
0,000
0,000

1,000

2,000

log konsentrasi (ug/ml)

3,000

48

Lampiran 5. Data hasil uji sitotoksik ekstrak etanol rimpang lempuyang
gajah.
1. Absorbansi kontrol sel dan kontrol media
Kontrol sel
0,721
0,682
0,832
0,836
0,846
0,886
0,973
0,994

Rata-rata
k.sel

0,846

Kontrol
media
0,107
0,102
0,104
0,107
0,101
0,105
0,109
0,106

Rata-rata
media

k.sel-k.media

0,105

0,741

2. Absorbansi ekstrak etanol lempuyang gajah
Konsentrasi
uji (µg/ml)
5
10
25
50
100

log
0,699
1,000
1,398
1,699
2,000

Absorbansi
Rep.1 Rep.2 Rep.3
0,655 0,572 0,661
0,627 0,665 0,623
0,44 0,172 0,423
0,253 0,262 0,342
0,118 0,109 0,118

Rep.1
74,195
70,445
45,209
19,973
1,754

% sel hidup
Rep.2
62,995
75,574
9,042
21,188
0,540

Rep.3
75,004
69,906
42,915
31,984
1,754

3. Grafik log konsentrasi terhadap persentase kehidupan sel (%)

Persentase sel hidup (%)

lempuyang gajah
80,000
70,000
60,000
50,000
40,000
30,000
20,000
10,000
0,000
0,000

1,000

2,000

log konsentrasi (ug/ml)

3,000

rata2 %
sel hidup
70,731
71,975
32,389
24,381
1,350

48

Lampiran 6. Data hasil uji doxorubicin terhadap sel kanker payudara T47D
1. Kontrol sel dan kontrol media
Rata-rata
kontrol sel

kontrol sel
0.731
0.854
0.722
0.665
0.832
0.809
0.768
0.704

0.761

media
0.127
0.125
0.121
0.120
0.115
0.125
0.149
0.124

Rata-rata
media

kontrol sel kontrol media

0.126

0.635

2. Doxorubicin
Konsentrasi
uji (nM)
5
10
15
25
50
100
150

log
0.699
1.000
1.176
1.398
1.699
2.000
2.176

Absorbansi
Rep.1 Rep.2 Rep.3
0.712 0.914
0.8
0.739 0.732 0.775
0.684
0.64 0.781
0.639 0.581 0.697
0.537 0.612 0.587
0.38 0.417 0.348
0.163 0.362 0.319

% sel hidup
Rep.1
Rep.2
Rep.3
92.283 124.094 106.142
96.535 95.433 102.205
87.874 80.945 103.150
80.787 71.654 89.921
64.724 76.535 72.598
40.000 45.827 34.961
5.827 37.165 30.394

3. Grafik log konsentrasi terhadap % sel hidup

persentase sel hidup (%)

doxorubicin
140,000
120,000
100,000
80,000
60,000
40,000
20,000
0,000
0,000

y = -55.36x + 153.5
R² = 0.946

1,000

log konsentrasi

2,000

3,000

rata2 %
sel hidup
107.507
98.058
90.656
80.787
71.286
40.262
24.462