123dok Analisis+Komponen+Senyawa+Kimia+Minyak+Atsiri+Kulit+Buah+Asam+Bunga+(Citrus+cf +nobilis+Lour)+Serta

Lampiran 1.Tanaman dan BuahAsam Bunga (Citrus cf. nobilis Lour)

Lampiran 2. Hasil Uji Aktivitas Antioksidan Minyak Atsiri Kulit Buah Asam Bunga

% Peredaman = blanko−sampel

blanko x100% 1. Konsentrasi 10 ppm

% Peredaman = 1,094−1,002

1,094 x100%= 8,40 %

2. Konsentrasi 20 ppm % Peredaman = 1,094−0,935

1,094 x100%= 14,53 %

3. Konsentrasi 30 ppm % Peredaman = 1,094−0,883

1,094 x100%= 19,28 %

4. Konsentrasi 40 ppm % Peredaman = 1,094−0,832

1,094 x100%= 23,94 %

Peredaman radikal bebas oleh minyak atsiri kulit buah asam bunga

Sampel Absorbansi % Peredaman

Blanko 1,094 -

10 ppm 1,002 8,40

20 ppm 0,935 14,53

30 ppm 0,883 19,28

Lampiran 3. Perhitungan Nilai IC50 Minyak Atsiri Kulit Buah Asam Bunga

X = Konsentrasi Y = % Perendaman

a =�(∑��)−(∑�)(∑�)

�(_∑�2_)–(∑�)2

= 5 (1910,6)− (100)(66,15)

5 (3000)−(100)2

= 9553−6615

15000−10000

= 2938

5000

= 0,5876

b =�∑�2�(∑�)−(∑�)(∑��)

�(_∑�2_)–(∑�)2

= (3000)(66,15)−(100)(1910,6)

5 (3000)−(100)2 =198450−191060

15000−10000

= 7390

5000

= 1,478

Jadi persamaan garis regresi Y = 0,5049X + 0,838 Nilai IC

50 = 0,5876 X + 1,478

50 :

0,5876 X = 50 – 1,478 0,5876 X = 48,522

X = 82,57 IC

X

= 82,57=bp- ppm

Y XY X2

0 0,00 0 0

10 8,40 84,0 100

20 14,53 290,6 400

30 19,28 578,4 900

40 23,94 957,6 1600

∑X = 100 ∑Y = 66,15 ∑XY = 1910,6 ∑X2

Lampiran 4. Hasil Data Kromatogram Hasil Analisa GC-MS Minyak Atsiri Kulit Buah Asam Bunga

1 2 4 5

3 6 8 7 9 10

11 12 14 13 15 167 18 19 20 ₂₁ 22 23 24 25 26 27 28

2930 31 32

33

34 35 36 18,000,000

Chromatogram minyak as bunga 1 C:\GCMSsolution\Data\Project1\analisa as bunga\minyak as bunga1.qgd

TIC*1.00

10.0 20.0 30.0 40.0

min Peak Report TIC

Peak# R.Time Area Area% Height Name

1 6.706 1127495 0.64 407639 .ALPHA.-PINENE, (-)- $$ Bicyclo[3.1.1]hept-2-ene, 2,6,6-trim 2 8.166 1697541 0.96 596839 Sabinene $$ Bicyclo[3.1.0]hexane, 4-methylene-1-(1-methylethy 3 8.285 14096001 7.95 4632104 l-.beta.-Pinene $$ Bicyclo[3.1.1]heptane, 6,6-dimethyl-2-methyl 4 8.838 1711258 0.97 578553 .beta.-Myrcene $$ 1,6-Octadiene, 7-methyl-3-methylene- (CAS) 5 9.303 2147807 1.21 684545 Octanal (CAS) n-Octanal $$ n-Octylal $$ Antifoam-LF $$ Octa 6 10.161 6693231 3.77 1953476 Benzene, methyl(1-methylethyl)- (CAS) Cymol $$ Cymene $$ 7 10.371 79876032 45.05 17901825 l-Limonene $$ Cyclohexene, 1-methyl-4-(1-methylethenyl)-, (S) 8 10.440 6980228 3.94 1894115 1,8-Cineole $$ 2-Oxabicyclo[2.2.2]octane, 1,3,3-trimethyl- (CA 9 11.127 267467 0.15 91637 Trans-Ocimene $$ 1,3,7-Octatriene, 3,7-dimethyl- (CAS) 2,6-Di 10 11.551 13454664 7.59 4315105 .gamma.-Terpinene $$ 1,4-Cyclohexadiene, 1-methyl-4-(1-meth 11 12.048 1104647 0.62 343388 1-Nonanol

12 12.738 819417 0.46 262385 .ALPHA.-TERPINOLENE $$ Cyclohexene, 1-methyl-4-(1-met 13 13.197 2602799 1.47 829401 LINALOOL L $$

14 13.386 551567 0.31 168566 Nonanal (CAS) n-Nonanal $$ n-Nonylaldehyde $$ Nonaldehyde 15 15.323 2654401 1.50 843111 CITRONELLA $$ 6-Octenal, 3,7-dimethyl- (CAS) Citronellal $ 16 15.727 319763 0.18 80673 MENTHOFURAN $$

17 15.829 427165 0.24 93260 Isoborneol

18 16.267 4379087 2.47 1331261 l-4-Terpineol $$ 3-Cyclohexen-1-ol, 4-methyl-1-(1-methylethyl) 19 16.793 9822624 5.54 2978368 .ALPHA. TERPINEOL $$

20 17.350 851112 0.48 241241 Decanal (CAS) n-Decanal $$ Decyl aldehyde $$ Decaldehyde $ 21 17.874 252622 0.14 74120 trans-Carveol $$ 2-Cyclohexen-1-ol, 2-methyl-5-(1-methylethen 22 18.216 4016044 2.26 1227934 .beta.-Citronellol $$ 6-Octen-1-ol, 3,7-dimethyl- (CAS) Citronel 23 18.697 2551487 1.44 801529 Z-Citral $$ 2,6-Octadienal, 3,7-dimethyl-, (Z)- (CAS) Neral $$ . 24 19.198 963006 0.54 295810 GERANIOL $$

25 19.796 3225504 1.82 882547 E-Citral $$ 2,6-Octadienal, 3,7-dimethyl-, (E)- (CAS) Geranial $ 26 21.458 305214 0.17 102271 Farnesol $$ 2,6,10-Dodecatrien-1-ol, 3,7,11-trimethyl- (CAS) F 27 22.262 624796 0.35 195853 .gamma.-Dodecalactone $$ 4-Hydroxydodecanoic acid lactone $ 28 22.412 3861812 2.18 1005849 Evodone $$

Lampiran 4. Kondisi Alat GC-MS Method [Comment]

===== Analytical Line 1 ===== [AOC-20i]

# of Rinses with Presolvent 2 # of Rinses with Solvent(post) 3 # of Rinses with Sample 2 Plunger Speed(Suction) :High Viscosity Comp. Time :0.2 sec Plunger Speed(Injection) :Middle Syringe Insertion Speed :High Injection Mode :Normal

Pumping Times 5

Inj. Port Dwell Time :0.3 sec Terminal Air Gap :No Plunger Washing Speed :High Washing Volume :8uL Syringe Suction Position :0.0 mm Syringe Injection Position :0.0 mm Use 3 Solvent Vial :1 vial [GC-2010]

Column Oven Temp. :60.0 °C Injection Temp. :270.00 °C Injection Mode :Split Flow Control Mode :Pressure Pressure :70.0 kPa Total Flow :62.4 mL/min Column Flow :1.16 mL/min Linear Velocity :39.4 cm/sec Purge Flow :3.0 mL/min Split Ratio :50.0 High Pressure Injection :OFF Carrier Gas Saver :OFF Splitter Hold :OFF Oven Temp. Program

Rate Temperature(°C) Hold Time(min)

- 60.0 5.00

4.00 260.0 10.00

2.00 280.0 5.00

< Ready Check Heat Unit > Column Oven : Yes

SPL1 : Yes

MS : Yes

< Ready Check Detector(FTD) > < Ready Check Baseline Drift > < Ready Check Injection Flow >

SPL1 Carrier : Yes SPL1 Purge : Yes < Ready Check APC Flow > < Ready Check Detector APC Flow > External Wait :No Equilibrium Time :3.0 min [GC Program]

[GCMS-QP2010 Plus]

IonSourceTemp :280.00 °C Interface Temp. :270.00 °C Solvent Cut Time :0.00 min Detector Gain Mode :Relative Detector Gain :0.00 kV Threshold 1000 [MS Table]

--Group 1 - Event 1-- Start Time :1.00min End Time :80.00min ACQ Mode :Scan Event Time :0.50sec

Scan Speed 769 Start m/z :40.00 End m/z :400.00 Sample Inlet Unit :GC [MS Program]

DAFTAR PUSTAKA

Agusta, A. 2000. Minyak Atsiri Tumbuhan Tropika Indonesia.Bandung. ITB. Achmad, S. A. 1986. Kimia Organik Bahan Alam. Universitas Terbuka. Jakarta. Apak, R. 2007. Comparative Evaluation Of Various Total Antioxidant Capacity Assay Applied To Phenolic Compounds With The CUPPRAC Assay. Molecules 12:1496-1547

Ball, J. S. 1997. Fruit Growing. Kalyani Publishers. New Delhi.

Benzie, F.F and Strain, J.J. 1996. The Ferric Reducing Ability of Plasma (FRAP) as a Measure of Antioxidant Power: The FRAP Assay. Anal Biochem 239: 70-76.

Buckle, K.A. 2007. Ilmu Pangan. Penterjemah Hari Purnomo dan Adiono. Universitas Indonesia. Jakarta.

Claus, E.P. 1970. Pharmacognosy. Lea-Febiger. USA.

Dachriyanus, 2004. Analisis Struktur Senyawa Organik Secara Spektroskopi. Andalas University Press. Padang.

Devy, 2010. Kandungan Flavonoid dan Limonoid pada Berbagai Fase Pertumbuhan Tanaman Jeruk Kalomondin (Citrus Mitis Blanko) dan Purut

(Citrus Hystrix Dc). JHort.20:360-367

Fardiaz, S. 1992. Mikrobiologi Pangan I. PT Gramedia Pustaka Utama. Jakarta. Gaman, P.M. 1992. Ilmu Pangan. Edisi Kedua. Gajah Mada University Press.

Yogyakarta.

Gritter, J. R. 1985. Pengantar Kromatografi. Erlangga. Jakarta.

Gunawan, D. dan Mulyani, S. 2004. Ilmu Obat Alam (Farmakognosi). Jilid I. Penerbit Penebar Swadaya. Jakarta.

Ionita, P. 2005. Is DPPH Stable Free Raddical a Good Scavenger for Oxygen Active Species. Chem. Pap. Romania.

Irianto, K. 2006. Mikrobiologi Menguak Dunia Mikroorganisme. Yrama Widya. Bandung.

Khopkar, S.M. 2003. Konsep Dasar Kimia Analitik. UI-Press. Jakarta. Koensoemardiyah. 2010. A to Z Minyak Atsiri. Penerbit Andi. Yogyakarta. Kosasih, E.N. 2004. Peran Antioksidan Pada Lanjut Usia. Pusat Kajian Nasional

Masalah Lanjut Usia. Jakarta

Kumalaningsih. 2006. Antioksidan Alami Penangkal Radikal Bebas Sumber, Manfaat, Cara Penyediaan dan Pengolahan. Trubus Agrisarana. Surabaya. Lutony, T.L, dan Rahmayanti. 1994. Produksi Dan Perdagangan Minyak Atsiri.

Penerbit Penebar Swadaya. Jakarta.

McNair, H dan Bonelli E.J. 1988. Basic Gas Chromatography. Penerjemah: K. Padmawinata. Dasar Kromatografi Gas. Edisi V. Penerbit ITB. Bandung. Mulja, M. 1995. Analisis Instrumental. Airlangga University Press. Bandung. Mpila, D.A.2009. Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Daun Mayana (Coleus

atropurpureus (L) Benth) Terhadap Staphylococcus aureus, Escherichia coli Dan Pseudomonas aeruginosa Secara In-Vitro. Fakultas Farmasi UNSRAT Manado. Manado.

Mulyani, S. 2009. Analisis GC-MS dan daya anti bakteri minyak atsiri Citrus amblycarpa (Hassk) Ochse . Majalah Farmasi Indonesia20(3): 127 – 132 Pelczar, M. J dan Chan. 1986. Dasar-Dasar Mikrobiologi 2. Universitas Indonesia.

Jakarta.

Pinder, A.R. 1960. The Chemistry of Terpenes. Chamman and Hall Ltd. London. Pokorny, J. 2001. Antioxidant in Food. Woodhead Publishing Limited. England. Rochim, A. 2009.Memproduksi 15 Minyak Asiri Berkualitas. Penebar Swadaya.

Jakarta.

Sari, N. 2010. Karakterisasi Simplisia dan Isolasi serta Analisis Komponen Minyak Atsiri secara GC-MS dari Kulit Buah Jeruk Bali (Citrus maximae pericarpium). [Skripsi]. Fakultas Farmasi USU Medan. Medan.

Sastrohamidjojo, H. 2004. Kimia Minyak Atsiri. Cetakan Pertama. Yogyakarta : UGM-Press.

Sharififar, F. 2007. Comparison Of Antioxidant and Free Radical Scavenging Activities Of The Essential Oils From Flower and Fruits Of Otostegia Persica. Boiss. Pak .j. Sci,10: 3895-3899

Silalahi, J. 2006. Makanan Fungsional. Kanisius. Yogyakarta.

Silverstein, R.M. 1986. Laboratory Investigations in Organic Chemistry. Penerjemah: Hartono dan Anny Viktor Purba. Penyidikan Spektrometrik Senyawa Organik. Erlangga. Jakarta

Soelarso, B. 1996. Budidaya Jeruk Bebas Penyakit. Cetakan I.Penerbit Kanisius. Yogyakarta.

Steenis, J. V. 2003. Flora untuk Sekolah di Indonesia. Cetakan IX. PT. Pradnya Paramita.Jakarta.

Sudjadi, M.S. 1985. Penentuan Struktur Senyawa Organik. Ghalia Indonesia. Jakarta.

Tortora, G.J. 2001. Microbiology an Introduction. Edisi ketujuh.Addison Wesley Longman, Inc. New York.

Valentine, F. S. 2014. Analisa Komponen Kimia Minyak Atsiri Kulit Buah Jeruk Cakar Harimau (Citrus Medica L.var. Sarcodactylus) Dengan GC-MS Dan Uji Antioksidan Menggunakan Metode DPPH. [Skripsi]. Fakultas FMIPA USU Medan. Medan.

Vogel. 1994. Kimia Analisis Kuantitatif Anorganik. Edisi keempat. Penerbit Kedokteran ECG. Jakarta.

Volk dan Wheeler. 1984. Mikrobiologi Dasar. Edisi ke 5. Erlangga. Jakarta.

Winarsi, H. 2007. Antioksidan Alami dan Radikal Bebas . Cetakan Pertama. Kaniskus. Yogyakarta.

Wulandari, S. 2006. Bioaktif Ekstrak Jahe Dalam Menghambat Pertumbuhan Koloni Bakteri Escerichia coli dan Bacillis subtilis. Jurnal Biogenesis.

BAB 3

METODE PENELITIAN

3.1 Alat-alat

Peralatan yang digunakan dalam penelitian ini meliputi:

- Alat Stahl

- Seperangkat alat GC-MS Shimadzu

- Seperangkat alat UV-Vis Spectronic 300

- inkubator Fiber --Scientific

- Lemari pendingin Toshiba

- Penangas air

- Hot Plate Cimarec 2

- Autoklaf Yamato SN 20

- Kuvet

- Oven Fisher Scientific

- Neraca analitis

- Pipet mikro Eppendorf

- Jangka sorong - Batang pengaduk - Cawan petri

- Gelas Erlenmeyer 250 ml

- Labu destilasi 1000 ml Pyrex

- Kertas cakram - Jarum ose

- Beaker Glass 250 ml Pyrex

- Jarum suntik 1 ml

- Labu ukur 25 ml Grandplex

- Rak tabung reaksi - Pinset

- Pipet tetes - Bola karet - Botol vial - Aluminium voil - Kapas

- Bunsen - Spatula - Benang bola

3.2 Bahan-Bahan

- Kulit Buah Asam Bunga

- Dietil Eter p.a Merck

- Natrium Klorida p.a Merck

- Na2

- DPPH (2,2-diphenyl-1-picryl-hydrazil) p.a Aldrich

SO4 anhidrous p.a Merck

- Etanol absolut p.a Merck

- Aquadest

- Nutrient Agar (NA) p.a. Oxoid

- Nutrient Broth (NB) p.a. Oxoid

- DMSO (dimetilsulfoksida) p.a. Fisons

- Mueller Hinton Agar (MHA) p.a. Oxoid

- Bakteri Bacillus cereus - Bakteri Streptococcus mutan - BakteriEschercia coli

3.3 Prosedur Penelitian 3.3.1 Penyediaan Sampel

Bahan yang digunakan dalam penelitian adalah kulit buah Asam Bunga segar yang diperoleh dari Desa Lumban Balian Kecamatan Laguboti Kabupaten Toba Samosir.

3.3.2 Isolasi Minyak Atsiri Kulit Buah Asam Bunga dengan Alat Destilasi Stahl

Sebanyak 150 gram kulit buah asam bunga dibersihkan dan diiris kecil-kecil, kemudian dimasukkan kedalam labu alas 1000 ml ditambahkan air secukupnya, dipasang pada alat penyuling Stahl dan dididihkan selama ± 4-5 jam pada suhu 1100C hingga menghasilkan minyak atsiri, dan destilasi diakhiri pada saat destilat yang keluar jernih. Minyak atsiri yang diperoleh ditampung pada gelas Erlenmeyer kemudian ditambahkan NaCl hingga jenuh lalu dimasukkan ke dalam corong pisah, ditambahkan eter didiamkan hingga diperoleh dua lapisan. Lapisan atas ditambahkan Na2SO4 anhidrous, kemudian diuapkan eternya, dimasukkan ke

dalam botol vial, di tutup rapat dan disimpan di tempat sejuk. Minyak atsiri yang diperoleh sebagian sebagai cuplikan disuntikkan ke alat GC-MS untuk dianalisis komponen kimianya (kondisi alat lampiran 5), hingga diperoleh kromatogram dan spektrum dari masing-masing senyawa penyusun minyak atsiri serta dilakukan uji aktivitas antibakteri dan antioksidan.

3.3.3 Pengujian Sifat Antibakteri Minyak Atsiri Kulit Buah Asam Bunga 3.3.3.1 Pembuatan Media Nutrient Agar (NA) Miring Dan Sub Kultur

Bakteri

Dimasukkan 7 g media NA ke dalam gelas Erlenmeyer, dilarutkan dengan 250 ml aquadest yang diikuti dengan pemanasan dan pengadukan, lalu disterilkan di dalam autoclave pada suhu 1210C selama 15 menit. Kemudian sebanyak 3 ml dituangkan kedalam empat tabung reaksi dibiarkan memadat pada posisi miring membentuk sudut 300-450. Diambil biakan bakteri Streptococcus mutans,

dengan jarum ose lalu digoreskan pada media NA yang telah memadat. Diinkubasi selama 18-24 jam pada suhu 350C.

3.3.3.2 Pembuatan Media Mueller Hinton Agar (MHA)

Dimasukkan 7,6 g media MHA ke dalam gelas Erlenmeyer, dilarutkan dengan 200 ml aquadest yang diikuti dengan pemanasan dan pengadukan, lalu disterilkan di dalam autoclave pada suhu 1210C selama 15 menit.

3.3.3.3 Pembuatan Media Nutrient Broth (NB)

Dimasukkan 6,5 g media nutrien broth (NB) kedalam gelas Erlenmeyer dilarutkan dengan 500 ml aquades yang diikuti dengan pemanasan dan pengadukan, lalu disterilkan di autoclave 1210C selama 15 menit.

3.3.3.4 Pembuatan Inokulum Bakteri

Dimasukkan 5 ml media nutrient broth steril dalam tabung reaksi dan diinkubasikan selama 2-3 jam, kemudian ditambahkan Bacillus cereus yang sudah di subkultur kedalam media NB dengan menggunakan jarum ose yang sudah steril,diukur kekeruhan larutan pada panjang gelombang 580 nm sampai diperoleh transmitan 25 %. Dilakukan dengan cara yang sama terhadap bakteri Streptococcus mutans, Pseudomonas aeruginosa, dan Eschericia coli.

3.3.3.5 Pembuatan Variasi Konsentrasi Minyak Atsiri Kulit Buah Asam Bunga

Minyak atsiri kulit buah asam bunga. Diencerkan dengan pelarut DMSO dengan masing-masing konsentrasi 25%, 30%, 35%, 40%� �⁄ .

3.3.3.6 Uji Sifat Antibakteri Minyak Atsiri Kulit Buah Asam Bunga

Dimasukkan 0,1 ml inokulum bakteri Basillus cereus kedalam cawan petri, kemudian ditambahkan 15 ml media MHA dengan suhu 450-500C dihomogenkan dibiarkan sampai media memadat. Diletakkan kertas cakram yang telah direndam

dengan minyak atsiri kulit buah asam bunga yang telah berisi bakteri dan diinkubasi pada suhu 350C selama 24 jam dalam inkubator. Diukur zona bening yang ada disekitar kertas cakram dengan menggunakan jangka sorong.

3.3.4 Uji Sifat Antioksidan Minyak Atsiri Kulit Buah Asam Bunga Dengan Metode DPPH

3.3.3.1Pembuatan Larutan DPPH

Larutan DPPH 0,3 mM dibuat dengan melarutkan 11,85 mg serbuk DPPH dalam etanol absolut dalam labu takar 100ml, kemudian dihomogenkan

3.3.4.2Pembuatan Variasi konsentrasi Minyak Atsiri Kulit Buah Asam Bunga

Minyak atsiri kulit buah asam bunga dibuat larutan induk 1000 ppm, dengan melarutkan 0,025 g minyak atsiri dengan pelarut etanol absolut dalam labu takar 25 ml. Kemudian dari larutan induk 1000 ppm dibuat larutan 100 ppm. Kemudian dari larutan 100 ppm dibuat lagi variasi konsentrasi 10, 20, 30 dan 40 ppm untuk diuji aktivitas antioksidan.

3.3.4.3 Uji Aktivitas Antioksidan 1. Larutan Blanko

Sebanyak 1 ml larutan DPPH 0,3 mM ditambahkan 2,5 ml Etanol absolut. Dihomogenkan dalam tabung reaksi dan dibiakan selamat 30 menit pada ruang gelap. Setelah itu diukur absorbansi dengan panjang gelombang maksimum 515 nm.

2. Uji Aktivitas Antioksidan Sampel

Sebanyak 1 ml larutan DPPH 0,3 mM ditambahkan 2,5 ml minyak atsiri kulit buah asam bunga dengan konsentrassi 10 ppm, dihomogenkan dalam tabung reaksi dan dibiarkan selama 30 menit pada ruang gelap. Setelah itu diukur absorbansi pada panjang gelombang maksimum 515 nm. Dilakukan dengan

3.4 Bagan Penelitian

3.4.1 Isolasi Minyak Atsiri Kulit Buah Asam Bunga Dengan Destilasi Stahl

Dimasukkan kedalam labu Stahl volume 1 L Ditambahkan air secukupnya

Dirangkai alat Stahl

Didestilasi selama ± 4-5 jam hingga menghasilkan minyak atsiri 150 g kulit buah asam bunga

Destilat

Lapisan Bawah Lapisan Atas

Dimasukkan kedalam corong pisah Dijenuhkan dengan NaCl

Diekstraksi dengan eter dalam corong pisah

Ditambahkan Na₂SO₄ Anhidrous Disaring

Dimasukkan kedalam botol vial Minyak Atsiri

Analisa GC-MS

Diuapkan untuk menghilangkan pelarut eter

Uji aktivitas antibakteri Uji aktivitas antioksidan Ditimbang

3.4.2 Analisa Minyak Atsiri Kulit Buah Asam Bunga dengan GC-MS

Dimasukkan kedalam GC-MS Diamati kromatogram yang dihasilkan Cuplikan

3.4.3 Uji Sifat Antibakteri Minyak Atsiri dari Kulit Buah Asam Bunga 3.4.3.1 Pembuatan MediaMueller Hinton Agar (MHA)

Media MHA (Mueller Hinton Agar) steril

Dilarutkan dengan 200 ml aquadest dalam gelas Erlenmeyer

Disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121oC selama 15 menit

Dipanaskan sambil diaduk hingga larut dan mendidih

7,6 g media MHA (Mueller Hinton Agar)

3.4.3.2 Pembuatan Media Nutrient Agar Miring Dan stok Kultur Bakteri

7 g media NA (Nutrient Agar)

Dilarutkan dengan 250 ml aquadest ke dalam gelas Erlenmeyer

Dipanaskan sambil diaduk hingga larut dan mendidih Disterilkan dalam autoklaf pada suhu 1210C selama 15 menit

Media NA (Nutrient Agar) steril

Dibiarkan pada temperatur kamar sampai memadat pada posisi miring membentuk sudut 30-450

Dituangkan Kedalam tabung reaksi sebanyak 3 ml

Diambil biakan bakteri Bacillus cereus dari strain utama dengan jarum ose lalu digoreskan pada media NA yang telah memadat

Diinkubasi pada suhu 350C selama 18-24 jam Stok kultur bakteri Bacillus cereus

3.4.3.3 Penyiapan Inokulum Bakteri

Dipanaskan sambil diaduk hingga larut dan mendidih Disterilkan dalam autoklaf pada suhu 1210C selama 15 menit

6,5 g media NB (Nutrient Broth)

Dilarutkan dengan 500 ml aquadest ke dalam gelas Erlenmeyer

Media NB (Nutrient Broth) steril

Disuspensikan kedalam Nutrient Broth (NB) Diinkubasi pada suhu 3500C selama 2-3 jam

Diukur kekeruhan larutan pada panjang gelombang 580-600 nm sampai diperoleh transmitan 25 % Inokulum bakteri Bacillus cereus

Diambil koloni bakteri Bacillus cereus dari stok kultur bakteri dengam jarum ose

Dituangkan Kedalam tabung reaksi sebanyak 5 ml

Dilakukan perlakuan yang sama untuk bakteri Streptococcus mutan, Eschercia coli, dan Pseudomonas aeruginosa.

3.4.3.4 Uji Aktivitas Antibakteri Minyak Atsiri Kulit Buah Asam Bunga

Ditambahkan 15 ml MHA dengan suhu 45-500C Dihomogenkan sampai media dan bakteri tercampur rata

0,1 ml inokulum bakteri

Dimasukkan kedalam cawan petri

Dibiarkan sampai media memadat

Dimasukkan kertas cakram yang telah direndam dengan minyak atsiri kulit buah asam bunga dengan berbagai konsentrasi kedalam cawan petri yang telah berisi bakteri

Diinkubasi pada suhu 350C selama 1-24 jam dalam inkubator

Diukur diameter zona bening disekitar cakram dengan jangka sorong

3.4.4Uji Sifat Antioksidan Minyak Atsiri Kulit Buah Asam Bunga Dengan Metode DPPH

3.4.4.1Pembuatan Variasi Konsentrasi Minyak Atsiri Kulit Buah Asam Bunga

0,025 g Minyak Atsiri

25 mL Larutan Induk 1000 ppm

25 mL Larutan Induk 100 ppm

Dipipet 2,5 ml dengan pipet volume Dimasukkan kedalam labu takar 25 ml Diencerkan dengan etanol absolut hingga garis batas Dihomogenkan

Dipipet 7,5 ml dengan pipet volume

Dipipet 10 ml dengan pipet volume Dipipet 5 ml

dengan pipet volume

Dimasukkan kedalam labu takar 25 ml

Dimasukkan kedalam labu takar 25 ml Dimasukkan

kedalam labu takar 25 ml Diencerkan dengan etanol absolut hingga garis batas Diencerkan dengan etanol absolut hingga garis batas Diencerkan dengan etanol absolut hingga garis batas

Dihomogenkan Dihomogenkan Dihomogenkan

Hasil _{Hasil Hasil Hasil}

Dihomogenkan

Ditambahkan etanol absolut hingga garis batas

Dimasukkan ke dalam labu takar 25 ml Dipipet sebanyak 2,5 ml

Dimasukkan ke dalam labu takar 25 ml

Dihomogenkan

Ditambahkan etanol absolut hingga garis batas

Dibuat variasi konsentrasi 10, 20, 30 dan 40 ppm

3.4.4.2 Pembuatan Larutan DPPH 0,3 mM

11,85 mg Serbuk DPPH

Dimasukkan ke dalam labu takar 100 ml Ditambahkan etanol absolut hingga garis batas Dihomogenkan

Hasil

3.4.3.3 Uji Aktivitas Antioksidan

a. Uji Aktivitas Antioksidan Larutan Blanko

1 ml larutan DPPH 0,3 mM

Dimasukkan ke dalam tabung reaksi Ditambahkan 2,5 ml etanol absolut

Diukur absorbansi pada panjang gelombang maksimum 515 nm

Hasil

Dihomogenkan

b. Uji Aktivitas Antioksidan Minyak Atsiri Kulit Buah Asam Bunga

1 ml larutan DPPH 0,3 mM

Dimasukkan ke dalam tabung reaksi Ditambahkan 2,5 ml minyak atsiri dengan konsentrasi 10 ppm

Diukur absorbansi pada panjang gelombang maksimum 515 nm

Hasil

Dihomogenkan

Dibiarkan selam 30 menit pada ruangan gelap

BAB 4

HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Hasil Penelitian

4.1.1 Isolasi Minyak Atsiri Kulit Buah Asam Bunga

Minyak atsiri kulit buah Asam Bunga diperoleh dengan metode hidrodestilasi menggunakan alat Stahl. Dari hasil destilasi kulit buah Asam Bunga sebanyak 450 g diperoleh 2,1 g minyak atsiri kadar minyak atsiri kulit buah Asam Bunga sebesar 1,38%. Proses destilasi ini dilakukan secara triplo seperti ditunjukkan dalam tabel 4.1

Tabel 4.1 Minyak Atsiri Kulit Buah Asam Bunga Yang Diperoleh Dengan Metode Hidrodestilasi

4.1.2 Hasil Analisa dengan GC-MS

Minyak atsiri yang diperoleh secara hidrodestilasi dianalisis dengan alat GC-MS. Kromatogram hasil analisis menunjukkan terdapatnya tiga puluh enam puncak senyawa (Gambar 4.1) yang menunjukkan adanya 36 senyawa yang terkandung dalam minyak atsiri tersebut namun ada 8 senyawa yang diinterprestasi (Tabel

No Sampel(g) Minyak Atsiri (g) Persentase (%)

1 150 2,1 1,40

2 150 1,9 1,26

3 150 2,3 1,50

Gambar 4.1 Kromatogram Hasil Analisa GC-MS Minyak Atsiri Kulit Buah Asam Bunga

Tabel 4.2. Hasil Analisis GC-MS Minyak Atsiri Kulit Buah Asam Bunga Waktu Retensi

(Menit)

Massa Molekul

Rumus Molekul

Nama Senyawa Kadar (%)

1 6,706 136 C10H16 α-Pinen 0,46

2 8,166 136 C10H16 Sabinen 0,96

3 8,285 136 C10H16 1- -Pinen 7,95

4 8,838 136 C10H16 -Myrcen 0,97

5 9,303 128 C8H16O n-Octanal 1,21

6 10,161 134 C10H14 Cymen 3,77

7 10,371 82 C10H16 1-Limonen 45,05

8 10,440 154 C10H18O 1,8 Cineol 3.94

9 11,127 136 C10H16 Trans-Ocimen 0,15

10 11,551 136 C10H16 - Terpinen 7,59

11 12,048 142 C9H18O 1-Nonanol 0,62

12 12,738 136 C10H16 α-Terpinolen 0,46

13 13,197 154 C10H18O Linalool 1,47

14 13,386 142 C9H18O n-Nonanal 0,31

15 15,323 154 C10H18O Citronella 1,50

16 15,727 150 C10H14O Menthofuran 0,18

17 15,829 154 C10H18O Isoborneol 0,24

18 16,267 154 C10H18O 4-Terpineol 2,47

20 17,350 156 C10H20O n-Decanal 0,48

21 17,874 152 C10H16O Trans-Carveol 0,14

22 18,216 156 C10H20O -Citronellol 2,26

23 18,697 136 C10H16O Z-Citral 1,44

24 19,198 154 C10H18O Geraniol 0,54

25 19,796 136 C10H16O E-Citral 1,82

26 21,458 222 C15H26O Farnesol 0,17

27 22,262 198 C12H22O2 -Dodecalacton 0,35

28 22,412 164 C10H12O2 Evodon 2,18

29 24,733 194 C12H18O2 Limonen-10-yl acetat 0,65

30 25,061 204 C15H24 Trans-Caryophyllen 0,47

31 25,553 204 C15H24 α-Bergamoten 0,86

32 27,088 204 C15H24 Germacren-D 0,49

33 27,909 204 C15H24 Β-Bisabolen 2,31

34 28,426 204 C15H24 Delta-Cadinen 0,15

35 29,423 194 C12H18O 1-

Homoadamantan-carboxylic acid

2 0,14

36 31,407 204 C15H24 Naphthalenol 0,53

4.1.3 Hasil Uji Aktivitas Antibakteri Minyak Atsiri Kulit Buah Asam Bunga

Aktivitas antibakteri ditentukan berdasarkan metode difusi agar. Kemampuan minyak atsiri kulit buah asam bunga menghambat pertumbuhan bakteri ditentukan berdasarkan zona bening yang ditimbulkan. Sifat antibakteri minyak atsiri kulit

buah asam bunga menunjukkan zona hambat pada pertumbuhan beberapa bakteri yaitu Streptococcus mutans, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, dan Bacilus cereus seperti yang ditunjukkan pada gambar dan tabel dibawah ini :

Gambar 4.2 Zona Hambat Bakteri Bacillus cereus

Gambar. 4.3 Zona Hambat Bakteri Streptococcus mutans

Gambar. 4.5 Zona Hambat Bakteri Pseudomonas aeruginosa

Tabel. 4.3 Hasil Pengukuran Diameter Zona Hambat Beberapa Kultur Bakteri Oleh Minyak Atsiri Kulit Buah Asam Bunga

Sampel Konsentrasi

Diameter Daerah Hambatan (mm)

Bakteri Gram Positif Bakteri Gram Negatif Bacilus

cereus

Streptococcus mutans

Escherichia coli

Pseudomonas aeruginosa Minyak

atsiri kulit buah Asam bunga

25 % 10,5 9,3 10,2 9,1

30 % 10,9 9,6 10,6 9,3

35 % 12,6 10,7 11,7 10,4

40 % 12,9 11,2 12,6 10,8

Semakin tinggi konsentrasi maka zona bening akan semakin lebar.

4.1.4 Hasil Uji Aktivitas Antioksidan Minyak Atsiri Kulit Buah Asam Bunga

Aktivitas antioksidan minyak atsiri kulit buah asam bunga diuji dengan metode DPPH radikal bebas menggunakan spektrofotometer UV-Visible pada panjang gelombang maksimum 515 nm. Tabel 4.3 menunjukkan absorbansi dan persen peredaman minyak atsiri kulit buah asam bunga.

Tabel 4.4 Hasil Pengukuran Absorbansi Minyak Atsiri Kulit Buah Asam Bunga

Konsentrasi Absorbansi % Peredaman

Blanko 1,094 -

10 ppm 1,002 8,40

20 ppm 0,935 14,53

30 ppm 0,883 19,28

40 ppm 0,832 23,94

Dimana semakin tinggi konsentrasi maka % peredaman semakin besar. Hubungan konsentrasi dan % peredaman dapat dilihat pada gambar 4.6

Gambar 4.6 Grafik % Peredaman Vs Konsentrasi Minyak Atsiri Kulit Buah Asam Bunga

0 5 10 15 20 25 30

0 10 20 30 40 50

%

P

e

re

d

am

an

Konsentrasi (ppm)

y= 0,587x + 1,478 R2_{= 0,982}

4.2 Pembahasan

4.2.1Isolasi Minyak Atsiri Kulit Buah Asam Bunga

Dari sebanyak 450 g kulit buah asam bunga segar diperoleh minyak atsiri kulit buah asam bunga sebanyak 2,1 gr b/b dengan persentase sebesar 1,38 % yang diperoleh dari perhitungan berikut:

% kadar minyak atsiri = ���� ������ � ��� ���� ���� ��� ℎ� �� ����� = 2,1

450� 100% = 1,38%

Dalam hal ini minyak atsiri yang diperoleh di ekstraksi dengan menggunakan pelarut Dietil eter. Minyak atsiri kulit buah asam bunga yang diperoleh berwarna bening/ jernih, berbau khas.

4.2.2 Analisis Minyak Atsiri Kulit Buah Asam Bunga

Hasil analisa GC-MS terhadap minyak atsiri kulit buah asam bunga menunjukkan bahwa didalam minyak atsiri tersebut terdapat 8 senyawa yang diinterprestasi sesuai dengan standard Library yaitu:

1. 1-Limonen

Puncak dengan RT 10,371 menit merupakan senyawa dengan rumus molekul C10H16. Data spektrum menunjukkan puncak ion molekul pada m/e 136 diikuti

puncak-puncak fragmentasi pada m/e 121, 107, 93, 79, 68, dan 53. Dengan membandingkan data spektrum yang diperoleh dengan data spektrum library, yang lebih mendekati adalah senyawa 1-Limonen sebanyak 45,05 % dengan spektrum seperti gambar 4.7 dan pola fragmentasi 1-limonen secara teoritis ditunjukkan pada gambar 4.8

Line#:1 R.Time:10.042(Scan#:1206) MassPeaks:69 RawMode:Single 10.042(1206) BasePeak:68.05(1124010) BG Mode:None Group 1 - Event 1

100 ₆₈

93 79

41 53 40

107 121 ₁₃₆

20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 Hit#:1 Entry:26325 Library:WILEY7.LIB

SI:96 Formula:C10 H16 CAS:5989-54-8 MolWeight:136 RetIndex:0

CompName:l-Limonene $$ Cyclohexene, 1-methyl-4-(1-methylethenyl)-, (S)- (CAS) $ (-)-Limonene $$ p-Mentha-1,8-diene, (S)-(-)- $$ (-)-Limonene $$ Li 100

41 53 40

68

93 CMe CH 2

79

Me

107 121 ₁₃₆

20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130

Gambar 4.7 Spektrum Massa 1-Limonen

m/e = 93 (C7H9)

CH2

CH3

H3C

+e -2e

CH₃

H3C

CH2

m/e = 136 (C10H16)

- CH3

CH₂

H3C

m/e = 121 (C9H13)

-CH2

H3C m/e = 68

(C5H8)

- C5H8

CH2

H2C

CH3

(15)

(14)

(68)

- CH2

(14)

m/e = 79 (C6H7)

m/e = 53 (C4H5)+

- C2H2

(26) H3C

(14) -CH2 CH2 Ret rodi elsa lder

m/e = 107 (C8H11)

Gambar 4.8 Pola fragmentasi yang mungkin dari senyawa 1-Limonen 2. -Pinen

Puncak dengan RT 8,285 menit merupakan senyawa dengan rumus molekul a

puncak-puncak fragmentasi pada m/e 121, 107, 93, 79, dan 53. Dengan membandingkan data spektrum yang diperoleh dengan data spektrum library, yang lebih mendekati adalah senyawa -Pinen sebanyak 7,95 % dengan spektrum seperti gambar 4.9 dan pola fragmentasi -Pinen secara teoritis ditunjukkan pada gambar 4.10

Line#:1 R.Time:8.292(Scan#:876) MassPeaks:60 RawMode:Single 8.292(876) BasePeak:93.05(1046878) BG Mode:None Group 1 - Event 1

100 93

41

69 79

40 53 107 121 136

10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 Hit#:1 Entry:26459 Library:WILEY7.LIB

SI:96 Formula:C10 H16 CAS:18172-67-3 MolWeight:136 RetIndex:0

CompName:l-.beta.-Pinene $$ Bicyclo[3.1.1]heptane, 6,6-dimethyl-2-methylene-, (1S)- (CAS) .BETA.-PINENE $$ (-)-2(10)-Pinene $$ (-)-.beta.-Pinene $$ 100

41

27

93

Me

Me CH2

69 79 53

107 121 136 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130

Gambar 4.9 Spektrum Massa -pinen

CH₂ H3C

H3C

CH2 H₃C

m/e = 136 m/e = 136

+e

-2e - CH3

CH2

m/e = 121 H3C

(C10H16)

(C9H13)

(15)

(14)

- C2H2

(26)

m/e = 79

-CH₂

m/e = 53 (C4H5)+

H3C

(C6H7)+

(14) -CH₂

m/e = 107 (C8H11)

m/e = 93 (C7H9)

(14) -CH₂

CH₂

Gambar 4.10 Pola fragmentasi yang mungkin dari senyawa - Pinen a

3. - Terpinen

Puncak dengan RT 11,551 menit merupakan senyawa dengan rumus molekul C10H16

Line#:1 R.Time:11.542(Scan#:1266) MassPeaks:65 RawMode:Single 11.542(1266) BasePeak:93.05(820246) BG Mode:None Group 1 - Event 1

100 93

77 41

40 65

105

121 136

10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 210

Hit#:2 Entry:6298 Library:NIST27.LIB

SI:97 Formula:C10H16 CAS:99-85-4 MolWeight:136 RetIndex:0 CompName:1,4-Cyclohexadiene, 1-methyl-4-(1-methylethyl)-

100 93

77

27 39 43 65 105

121 136

10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 210

. Data spektrum menunjukkan puncak ion molekul pada m/e 136 diikuti puncak-puncak fragmentasi pada m/e 121, 105, 93 dan 77. Dengan membandingkan data spektrum yang diperoleh dengan data spektrum library, yang lebih mendekati adalah senyawa -Terpinen sebanyak 7,59% dengan spektrum seperti gambar 4.11 dan pola fragmentasi -Terpinen secara teoritis ditunjukkan pada gambar 4.12.

Gambar 4.11 Spektrum Massa - Terpinen CH3

H3C

CH3

+ e -2e

CH3

H3C

m/e = 136 (C10H16)

- CH3

H3C

CH3

m/e = 121

CH3

(C9H13)

C₂H₄

m/e = 93 (C7H9)+ (15)

(28)

- CH4

(16) m/e = 77

(C6H5) CH3

Gambar 4.1β Pola fragmentasi yang mungkin dari senyawa - Terpinen 4. α - Terpineol

Puncak dengan RT 16,793 menit merupakan senyawa dengan rumus molekul a

puncak-puncak fragmentasi pada m/e 136, 121, 93, dan 81. Dengan membandingkan data spektrum yang diperoleh dengan data spektrum library, yang lebih mendekati adalah senyawa. α- Terpineol sebanyak 5,54 % dengan spektrum seperti gambar 4.13 dan pola fragmentasi α - Terpineol secara teoritis ditunjukkan pada gambar 4.14.

Line#:1 R.Time:16.783(Scan#:1895) MassPeaks:69 RawMode:Single 16.783(1895) BasePeak:93.05(405588) BG Mode:None Group 1 - Event 1

100

43 59 93

81 41

40 107

121

136

140

20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140

Hit#:1 Entry:42933 Library:WILEY7.LIB

SI:96 Formula:C10 H18 O CAS:98-55-5 MolWeight:154 RetIndex:0 CompName:.ALPHA. TERPINEOL $$

100 59 43 41 38 93 81 107 121 Me 136

CMe 2 OH

140

20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140

Gambar 4.1γ Spektrum Massa α - Terpineol

+ e -2e

-H2O

m /e =136

CH3

CH3

CH3

(15)

m /e =121

(C9H13)+

(18)

m /e = 93 (C7H9)+ CH3

m /e =154 CH3

(C10H18O)+

OH

(C10H16)

H3C

C

CH3

m /e =154 CH3

OH

H3C

C

H3C

CH3

H3C

H3C

(C10H18O)

H3C

CH2

m /e =107

(C8H11)+

-CH2 (14) -CH2 (14) C (12)

m /e = 81 (C6H9)+

Gambar 4.14 Pola fragmentasi yang mungkin dari senyawa α - Terpineol b

5. 1,8 Cineol

Puncak dengan RT 10.440 menit merupakan senyawa dengan rumus molekul C10H18

Line#:1 R.Time:10.442(Scan#:1134) MassPeaks:65 RawMode:Single 10.442(1134) BasePeak:43.00(241802) BG Mode:None Group 1 - Event 1

100 43

81

69 93 108

41 84

40 121

139 140

154

20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 Hit#:1 Entry:43987 Library:WILEY7.LIB

SI:95 Formula:C10 H18 O CAS:470-82-6 MolWeight:154 RetIndex:0

CompName:1,8-Cineole $$ 2-Oxabicyclo[2.2.2]octane, 1,3,3-trimethyl- (CAS) Terpan $$ Zineol $$ Eucapur $$ p-Cineole $$ Cajeputol $$ Eucalyptol $$ C

100 ₄₃

Me

81

69 84 93 108 41

39

121

139 140

O Me

154

Me

20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150

O. Data spektrum menunjukkan puncak ion molekul pada m/e 154 diikuti puncak-puncak fragmentasi pada m/e 139, 121, 108, 93, 81 dan 43. Dengan membandingkan data spektrum yang diperoleh dengan data spektrum library, yang lebih mendekati adalah senyawa 1,8 Cineol sebanyak 3,94% dengan spektrum seperti gambar 4.15 pola fragmentasi 1,8 Cineol secara teoritis ditunjukkan pada gambar 4.16.

a

b

O CH3 CH3 CH3 e -2e O CH3 CH3 CH3

m/e = 154 (C10H18O)

- CH₃ (15)

O CH3

CH3

m/e = 139 (C9H15)

- H2O

(18)

CH CH3

m/e = 121 (C9H13) - CH3CH2OH

(46)

m/e = 108

(C8H12)

m/e =93 (C7H9)

- CH3

- C4H2 (15)

(50)

CH3

H3C

m/e = 43 (C3H7)

CH2

CH3

CH2

- C2H3

(27) m/e = 81 (C6H9)+

Gambar. 4.16 Pola fragmentasi yang mungkin dari senyawa 1,8 Cineol 6. Cymen

Puncak dengan RT 10.161 menit merupakan senyawa dengan rumus molekul C10H14. Data spektrum menunjukkan puncak ion molekul pada m/e 134 diikuti

puncak-puncak fragmentasi pada m/e 119, 91, 77 dan 51. Dengan membandingkan data spektrum yang diperoleh dengan data spektrum library, yang lebih mendekati adalah senyawa Cymen sebanyak 3,77 % dengan spektrum seperti gambar 4.17 dan pola fragmentasi Cymen secara teoritis ditunjukkan pada gambar 4.18.

Line#:1 R.Time:10.167(Scan#:1101) MassPeaks:57 RawMode:Single 10.167(1101) BasePeak:119.10(679634) BG Mode:None Group 1 - Event 1

100

119

40 51 65 77

91

103

134

10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130

Hit#:2 Entry:24424 Library:WILEY7.LIB

SI:96 Formula:C10 H14 CAS:527-84-4 MolWeight:134 RetIndex:0

CompName:Benzene, 1-methyl-2-(1-methylethyl)- (CAS) 1-Methyl-2-isopropylbenzene $$ o-Cymene $$ o-Cymol $$ o-Isopropyltoluene $$ 2-Isopropyltol

100 119

Pr-i

15 27 41 51 65 77

91

103

134

Me

10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130

Gambar 4.17 Spektrum Massa Cymen

Pr-i Me e -2e CH

m/e = 134

- CH3

m/e = 119 (C9H11)+

CH3

(15)

CH3

CH3

CH CH3

CH3

m/e = 91 (C7H7)+

CH3 - C2H4

(C10H14)

- CH2

(14) m/e = 77

(C6H5)+

- C2H2

(26)

(28)

m/e = 51 (C2H2)+

Gambar. 4.18 Pola Fragmentasi Senyawa Cymen

7. - Bisabolene

Puncak dengan RT 27.909 menit merupakan senyawa dengan rumus molekul C15H24. Data spektrum menunjukkan puncak ion molekul pada m/e 204 diikuti

puncak-puncak fragmentasi pada m/e 189, 161, 135, 107, 93, 69, dan 41. Dengan membandingkan data spektrum yang diperoleh dengan data spektrum library, yang lebih mendekati adalah senyawa - Bisabolene sebanyak 2,31 % dengan

b a

spektrum seperti gambar 4.19 dan pola fragmentasi - Bisabolene secara teoritis ditunjukkan pada gambar 4.20.

Line#:1 R.Time:27.900(Scan#:3229) MassPeaks:63 RawMode:Single 27.900(3229) BasePeak:69.05(88929) BG Mode:None Group 1 - Event 1

100

41 69 ₉₃

79

44 107 119

40 135 147

161

175 189 204

10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 210 220 230 240 250 Hit#:1 Entry:16828 Library:NIST27.LIB

SI:94 Formula:C15H24 CAS:495-61-4 MolWeight:204 RetIndex:0 CompName:Cyclohexene, 1-methyl-4-(5-methyl-1-methylene-4-hexenyl)-, (S)-

100 41 69

93

79 27 55

107 119

135 ₁₄₇ 161

189 204

10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 210 220 230 240 250

+ e

-2e

m/e =204

(C15H24)

m/e = 189 (C14H21)

- C2H4

m/e = 161 (C12H17)

- C2H2 CH3

- C2H4

m/e = 135

(C10H15)

m/e = 107 (C8H11) CH3

- CH2

m/e = 93 (C7H9)

m/e = 69 (C5H9)

-2C (15) (28) (26) (28) (14) (24)

CH3 _CH

3

CH3

CH3

CH3

CH3

m/e = 41 (C3H5)+

- CH2

(14)

- CH2

(14)

m/e = 55 (C4H7)+

Gambar 4.18 Pola fragmentasi yang mungkin dari senyawa - Bisabolene

8. - Citronellol

Puncak dengan RT 18,216 menit merupakan senyawa dengan rumus molekul C10H20O. Data spektrum menunjukkan puncak ion molekul pada m/e 156 diikuti

puncak-puncak fragmentasi pada m/e 138, 123, 109, 95, 69, dan 41. Dengan a

b

membandingkan data spektrum yang diperoleh dengan data spektrum library, yang lebih mendekati adalah senyawa - Citronellol sebanyak 2,26 % dengan spektrum seperti gambar 4.19 dan pola fragmentasi – Citronellol secara teoritis ditunjukkan pada gambar 4.20.

Line#:1 R.Time:18.200(Scan#:2065) MassPeaks:62 RawMode:Single 18.200(2065) BasePeak:41.00(140662) BG Mode:None Group 1 - Event 1

100 _{41 69}

55 81

40

95

109 123 ₁₃₈

156

20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150

Hit#:2 Entry:9825 Library:NIST27.LIB

SI:92 Formula:C10H20O CAS:106-22-9 MolWeight:156 RetIndex:0 CompName:6-Octen-1-ol, 3,7-dimethyl-

100 41

69 55

81

95

109 123

HO

138 156

20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150

+ e - 2e

HO-H2C HO-H2C

+

+ +

+

m/e =156 (C10H20O)

- H2O

m/e =138 (C10H18)

- CH3

m/e =123 (C9H15)+

-CH2

m/e =109 (C8H13)+

-CH2

m/e = 95 (C7H11)+ -C2H2

m/e = 69 (C5H9)+ -CH₂

m/e = 41

(C3H5)+ (14) (26)

(14)

(14) (15)

(18)

+

m/e = 55 (C4H7)+ -CH₂

(14)

Gambar 4.20 Pola fragmentasi yang mungkin dari senyawa – Citronellol

a

b

4.3.3 Uji Aktivitas Antibakteri Minyak Atsiri Kulit Buah Asam Bunga

Terbentuknya daerah bening disekitar kertas cakram menunjukkan terjadinya penghambat pertumbuhan koloni bakteri akibat pengaruh senyawa bioaktif yang terdapat pada minyak atsiri kulit buah asam bunga yang diencerkan dalam DMSO. Minyak atsiri kulit buah asam bunga dapat dikatakan aktif terhadap biakan bakteri Bacillus cereus, Streptococcus mutan, Eschercia coli, dan Pseudomonas aeruginosa dengan membentuk zona bening disekitar cakram yang telah dibasahi dengan minyak atsiri. Dari hasil pengamatan yang dilakukan, zona bening yang terbentuk semakin besar dengan bertambahnya konsentrasi minyak atsiri kulit buah asam bunga.

Davis dan Stout mengemukakan bahwa ketentuan kekuatan daya antibakteri adalah zona hambatan 20 mm atau lebih termasuk sangat kuat, zona hambatan 10-20 mm kategori kuat, zona hambatan 5-10 mm kategori sedang, dan zona hambatan 5 mm atau kurang termasuk kategori lemah (Mpila, 2009).

Senyawa- senyawa metabolik sekunder golongan fenol dan minyak atsiri diduga merupakan golongan senyawa yang dapat menghambat pertumbuhan bakteri. Terjadinya penghambatan terhadap pertumbuhan koloni bakteri diduga disebabkan karena kerusakan yang terjadi pada komponen struktural membran sel bakteri. Kerusakan membran sel menyebabkan terganggunya transport nutrisi melalui membran sel sehingga sel bakteri mengalami kekurangan nutrisi yang diperlukan bagi pertumbuhannya (Wulandari, 2006). Senyawa fenol bekerja dengan cara mendenaturasi protein sel dan merusak dinding sel bakteri sehingga bakteri mati, juga dapat merusak lipid pada membran sel melalui mekanisme penurunan tegangan permukaan membran sel (Pelczar dan chan, 1986).

Dari hasil penelitian menunjukkkan bahwa minyak atsiri kulit buah asambunga lebih mudah menghambat bakteri gram positif dibandingkan bakteri gram negatif, artinya bakteri gram positif Bacillus cereus dan Streptococcus mutan lebih rentan terhadap senyawa kimia dibandingkan gram negatif Eschercia coli, dan Pseudomonas aeruginosa. Hal ini kemungkinan disebabkan karena adanya perbedaan susunan dinding sel bakteri. Dinding sel bakteri Gram (+)

relatif lebih sederhana, hanya terdiri dari komponen peptidoglikan dan asam terikoat, sementara dinding sel bakteri Gram (-) mempunyai struktur berlapis 3, terdiri dari peptidoglikan, lipoprotein, membran luar dan lipopolisakharida.

Menurut (Mulyani, 2009) Minyak atsiri pada dasarnya memiliki kelarutan yang rendah didalam air, sehingga mereka tidak mampu mencapai tingkatan yang cukup untuk bersifat toksik pada membran sel, meskipun afinitas mereka pada membran cukup tinggi. Adanya lapisan lipopolisakharida pada membran sel bakteri Gram (-) akan melindungi senyawa-senyawa polar penyebab lisis sel agar tidak terjadi penetrasi pada membran. Sedangkan pada bakteri Gram (+) yang tidak mempunyai lapisan lipo-polisakharida yang melidungi membran, mengakibatkan minyak atsiri akan lebih mudah merusak protein porin, sehingga menyebabkan sel lisis. Aktivitas antibakteri dari senyawa terpenoid berturut-turut adalah fenol,alkohol diikuti aldehida, keton, dan hidrokarbon.Dari hasil penelitian ini, diperoleh beberapa senyawa fenol maupun alkohol yang terkandung dalam minyak atsiri dari kulit buah asam bunga diantaranya,α – Terpineol (5,54%), 4-Terpineol (β,47%), - Citronellol (2,26%), Linalol (1,47%), Nonanol (0,62%), Geraniol (0,54%), Naphthalenol (),53%), Isoborneol (0,24%), Farnesol (0,17%), Trans-Carveol (0,14%). Karena adanya beberapa komponen senyawa tersebut memungkinkan terjadinya sel lisis pada bakteri.

Kerusakan pada membran sel menyebabkan terganggunya transport nutrisi melalui membran sel sehingga sel bakteri mengalami kekurangan nutrisi yang diperlukan bagi pertumbuhannya (Volk dan wheeler 1984).

4.3.4 Uji Aktivitas Antioksidan Minyak Atsiri Kulit Buah Asam Bunga

Minyak atsiri kulit buah asam bunga dilakukan uji aktivitas antioksidan dengan metode DPPH dengan menggunakan alat spektrofotometri UV Visible. Adapun mekanisme utama peredaman radikal DPPH adalah sebagai berikut:

Gambar 4.21 Mekanisme Peredaman Radikal DPPH

Pada uji DPPH, peredaman radikal DPPH diikuti dengan penurunan absorbansi pada panjang gelombang maksimum yang terjadi karena pengurangan radikal oleh antioksidan AH yang ditandai dengan berubahnya warna ungu pada larutan menjadi warna kuning pucat, data yang sering dilaporkan sebagai IC50

merupakan konsentrasi antioksidan yang dibutuhkan untuk 50% peredaman radikal DPPH pada periode 15-30 menit (Pokornya, 2001). DPPH merupakan suatu molekul radikal bebas yang di stabilkan oleh bentuk resonansi seperti yang ditunjukkan pada gambar 4.22.

Gambar 4.22 Kestabilan DPPH

Seperti terlihat pada halaman 38 Tabel 4.3 menunjukkan telah terjadi peredaman radikal bebas DPPH setelah penambahan minyak atsiri kulit buah asam bunga, dimana semakin tinggi konsentrasi maka % peredaman semakin besar yang ditandai dengan menurunnya absorbansi. Dari persamaan Y = ax + b dapat diketahui nilai IC50

NO2

NO2

O2N

NO2

NO2

O2N N N H N N + AH + A DPPH DPPH-H

dengan memasukkan nilai 50 sebagai sumbu Y,

NO2

NO2

O2N

NO2

NO2

O2N

N N

N

NO2

NO2

O2N

NO2

NO2

O2N

N N

N

N

sehingga diperoleh besar nilai x yang akan mempresentasikan besaran IC50

Nilai IC

untuk minyak atsiri kulit buah asam bunga sebesar 82,57 ppm.

50

Potensi aktivitas antioksidan dari minyak atsiri telah menunjukkan dengan adanya persen perendaman radikal DPPH. Aktivitas antioksidan ini adalah dipengaruhi oleh kandungan monoterpen dan seskuiterpen teroksigenasi dari minyak atsiri tersebut (Sharififar, 2007). Beberapa komponen senyawa monoterpen dan seskuiterpen teroksigenasi yang terkandung di dalam minyak atsiri kulit buah asam bunga yang mempengaruhi aktivitas antioksidan diantaranya, α –Terpineol (5,54%), 1,8 Cineol (3,94%), 4- Terpineol (2,47%), – Citronellol (2,26%), E-Citral (1,82%), Citronella (1,50%), Linalol (1,47%), Z- Citral (1,44%), Octanal (1,21%), Nonanol (0,62%), Geraniol (0,54%), n-Decanal (0,48%) dan Farnesol (0,17%).

yang dihasilkan kurang dari 50, maka senyawa tersebut dapat dikatakan memiliki aktivitas antioksidan yang sangat kuat. Oleh karena itu berdasarkan perhitungan yang diperoleh (lampiran 3) dapat dikatakan bahwa senyawa antioksidan yang terdapat dalam sampel minyak atsiri kulit buah asam bunga memiliki aktivitas antioksidan yang kuat.

Berdasarkan perhitungan yang diperoleh dapat dikatakan bahwa senyawa antioksidan yang terdapat dalam sampel kulit buah asam bunga memiliki aktivitas antioksidan yang kuat. Tingkat kekuatan senyawa antioksidan menggunakan metode DPPH dapat dilihat pada tablel 4.5.

Tabel 4.5 Tingkat Kekuatan Antioksidan Dengan Metode DPPH (Ionita, 2005)

Intensitas Nilai IC50

Sangat kuat < 50 mg/L

Kuat 50-100 mg/L

Sedang 101-150 mg/L

BAB 5

KESIMPULAN DAN SARAN

5.1 Kesimpulan

1 Kadar minyak atsiri kulit buah asam bunga yang diperoleh dengan metode hidrodestilasi 1,38% dan komponen minyak atsiri yang terkandung didalamnya nadalah α-Pinen (0,46%), Sabinen (0,96%), -Pinen (7,95%), -Myrcen (0,97%), n-Octanal (1,21%), Cymen (3,77%), 1-Limonen (45,05%), 1,8 Cineol (3,94%), Trans-Ocimen (0,15%), – Terpinen (7,59%), 1-Nonanol (0,6β%), α -Terpinolen (0,46%), Linalol (1,47%), n-Nonanal (0,31%), Citronella (1,50%), Menthofuran (0,18%), Isoborneol (0,24%), 4-Terpineol (β,47%), α-Terpineol (5,54%), n-Decanal (0,48%), Trans-Carveol (0,14%), -Citronellol (2,26%), Z-Citral (1,44%), Geraniol (0,54%), E-Citral (1,8β%), Farnesol (0,17%), -Dodecalaton (0,35%), Evodon (2,18%), Limonen-10-yl acetat (0,65%), Trans-Caryophyllen (0,47%), αBergamoten (0,86%), GermacrenD (0,49%), -Bisabolene (2,31%), Delta-cadinen (0,15%), 1-Homoadamanten-Carboxylic acid (0,14%),Naphthalenol (0,53%).

2. Minyak atsiri kulit buah asam bunga dapat menghambat aktivitas antibakteri terhadap bakteri Bacillus cereus,Streptococcus mutans, Pseudomonas aeruginosa, dan Eschericia coli. Dari hasil yang diperoleh, aktivitas antibakteri kulit buah asam bunga tergolong zona hambatan 10-20 mm kategori kuat. 3. Aktivitas antioksidan dari minyak atsiri kulit buah asam bunga memiliki IC50

5.2 Saran

= 82,57 (ppm=mg/L), dari hasil yang diperoleh, aktivitas antioksidan kulit buah asam bunga tergolong kategori kuat.

Diharapkan pada peneliti selanjutnya supaya dapat melakukan uji aktivitas antibakteri menggunakan jenis bakteri gram positif dan bakteri gram negatif lain.

BAB 2

TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Asam Bunga (Citrus cf. nobilis Lour)

Klasifikasi Asam Bunga hasil identifikasi tumbuhan di laboratorium Herbarium Bogoriense bidang botani pusat penelitian biologi LIPI bogor, adalah sebagai berikut :

Kingdom : Plantae

Divisi : Spermatophyta Class : Dicotyledonae Ordo : Rutales

Famili : Rutaceae Genus : Citrus

Spesies : Citrus cf. nobilis Lour Nama Lokal : Asam Bunga

Asam bunga memiliki beberapa nama lokal yang berbeda-beda di Indonesia seperti Asam Lambao (Tobasa) Jeruk Bunga (Brastagi). Tanaman asam bunga mempunyai tinggi mencapai 6 meter, pohonnya yang kokoh dan berukuran besar. Buah asam ini memiliki ciri bentuk buahnya yang bulat seperti bola, panjang 3-6 cm, diameter 4-7 cm, dan daging buah yang berwarna oranye. Pada bagian kulit buahnya, berwarna hijau ketika muda dan oranye ketika tua, Kulit jeruk ini berdaging tebal dengan permukaan kulit yang sedikit kasar dan tidak rata. Kulit buahnya sulit dikupas bila matang dan rasanya asam. Ada beberapa perbedaan dengan kerabat dekatnya yaitu jeruk keprok (Citrus nobilis Lour) dimana, jeruk ini kulit buahnya mudah di kupas, rasanya yang manis dan septanya mudah dilepaskan (Ball, 1997).

2.1.1 Manfaat Asam Bunga

Pemakaian asam bunga hampir sama dengan jeruk nipis, yakni sebagai minuman dan bumbu masak, sebagai contoh digunakan sebagai bumbu penghilang bau amis dari ikan. Berbeda dengan jeruk keprok, manfaat jeruk keprok untuk terapi antara lain untuk pertahanan tubuh, antikanker, memerangi infeksi virus, dan menurunkan kadar kolesterol. Konsumsi jeruk dan jus jeruk dapat melindungi tubuh terhadap serangan kanker, membantu sistem pertahanan, membantu memerangi infeksi virus (Ball ,1997).

2.2 Minyak Atsiri

Minyak atsiri adalah salah satu kandungan tanaman yang sering disebut “minyak terbang”. Minyak atsiri dinamakan demikian karena minyak tersebut mudah menguap. Selain itu, minyak atsiri juga disebut essential oil (dari kata essence) karena minyak atsiri tersebut memberikan bau pada tanaman. Minyak atsiri itu berupa cairan jernih dan tidak berwarna. Namun, pada minyak-minyak tertentu selama penyimpanan dapat terjadi perubahan seperti perubahan warna. Minyak atsiri tersebut sebaiknya disimpan dalam wadah berbahan dasar kaca yang berwarna gelap (misalnya, botol berwarna cokelat atau biru gelap) untuk mengurangi sinar yang masuk (Koensoemardiyah, 2010).

Minyak atsiri merupakan salah satu hasil proses metabolisme dalam tanaman, yang terbentuk karena reaksi berbagai senyawa kimia dan air. Sifat dari minyak atsiri yang lain adalah mempunyai rasa getir (pungent taste), berbau wangi sesuai dengan bau tanaman penghasilnya, yang diambil dari bagian-bagian tanaman seperti daun, buah akar, biji, bunga, akar, rimpang, kulit kayu, bahkan seluruh bagian tanaman (Ketaren, 1985).

Minyak atsiri, minyak mudah menguap, atau minyak terbang merupakan campuran dari senyawa yang berwujud cairan atau padatan yang memiliki komposisi maupun titik didih yang beragam. Minyak atsiri dibagi menjadi dua kelompok, yaitu:

1. Minyak atsiri yang dengan mudah dapat dipisahkan menjadi komponen-komponen atau penyusun murninya. Komponen-komponen-komponen ini dapat menjadi bahan dasar untuk diproses menjadi produk-produk lain, contoh: minyak sereh, minyak daun cengkeh, minyak permai, dan minyak terpentin.

2. Minyak atsiri yang sukar dipisahkan menjadi komponen murninya, contoh: minyak akar wangi, minyak nilam, dan minyak kenanga. Biasanya minyak atsiri tersebut langsung dapat digunakan tanpa diisolasi komponen-komponennya sebagai pewangi berbagai produk (Sastrohamidjojo, 2004).

Minyak atsiri banyak dibutuhkan diberbagai industri, seperti pada industri kosmetik (sabun, pasta gigi, sampo, lotion dan parfum), pada industri makanan digunakan sebagai bahan penyedap atau penambah cita rasa, dalam industri farmasi atau obat-obatan (anti nyeri, anti infeksi, pembunuh bakteri), bahkan dapat digunakan pula sebagai insektisida. Oleh karena itu, minyak atsiri banyak dicari oleh berbagai negara (Lutony dan Rahmayanti, 2002).

2.2.1 Komposisi Kimia Minyak Atsiri

Minyak atsiri biasanya terdiri dari berbagai campuran persenyawaan kimia yang terbentuk dari unsur karbon (C), hidrogen (H), dan oksigen (O). Pada umumnya komponen kimia minyak atsiri dibagai menjadi dua golongan, yaitu:

1. Golongan Hidrokarbon

Persenyawaan yang termasuk golongan ini terbentuk dari unsur karbon (C), dan hidrogen (H) jenis hidrokarbon yang terdapat dalam minyak atsiri sebagian besar terdiri dari monoterpen (2 unit isopren), sesquiterpen (3 unit isopren), diterpen (4 unit isopren), dan politerpen.

2. Golongan Hidrokarbon Teroksigenasi

Komponen kimia dari golongan ini terbentuk dari unsur karbon (C), hidrogen (H), dan oksigen (O). Persenyawaan yang termasuk dalam golongan ini adalah persenyawaan alkohol, aldehid, ester, fenol. Ikatan karbon yang terdapat dalam molekulnya dapat terdiri dari ikatan tunggal, ikatan rangkap dua dan ikatan rangkap tiga. Terpen mengandung ikatan tunggal dan ikatan rangkap dua. Senyawa terpen memiliki aroma kurang wangi, sukar larut dalam alkohol encer dan jika disimpan dalam waktu lama akan membentuk resin. Golongan hidrokarbon teroksigenasi merupakan senyawa yang penting dalam minyak atsiri karena umumnya aroma yang lebih wangi (Ketaren, 1985).

2.2.2 Biosintesis Minyak Atsiri

Secara kimia minyak atsiri bukan merupakan senyawa tunggal, tetapi tersusun dari berbagai macam komponen yang secara garis besar terdiri dari kelompok terpenoid dan fenil propana. Berdasarkan proses biosintesisnya atau pembentukan komponen minyak atsiri di dalam tumbuhan, minyak atsiri dapat dibedakan menjadi dua golongan. Golongan pertama adalah turunan terpenoid yang terbentuk melalui jalur biosintesis asam asetat mevalonat. Golongan kedua adalah turunan fenil propanoid yang merupakan senyawa aromatik, terbentuk melalui jalur biosintesis asam sikimat (Agusta, 2000).

Mekanisme dari tahap-tahap reaksi biosintesis terpenoid yaitu asam asetat yang telah diaktifkan oleh koenzim A melakukan kondensasi jenis Claisen menghasilkan asam asetoasetat. Senyawa yang dihasilkan ini dengan asetil koenzim A melakukan kondensasi jenis aldol menghasilkan rantai karbon bercabang sebagaimana ditemukan pada asam mevalonat (gambar 2.3). Reaksi-reaksi berikutnya ialah fosforilasi, eliminasi asam fosfat dan dekarboksilasi menghasilkan isopentil pirofosfat (IPP) yang selanjutnya berisomerisasi menjadi dimetilalil pirifosfat (DMAPP) oleh enzim isomerase. IPP sebagai unit isopren aktif bergabung secara kepala ke ekor dengan DMAPP dan penggabungan ini merupakan langkah pertama dari polimerisasi isopren untuk menghasilkan terpenoid. Penggabungan ini terjadi karena serangan elektron dari ikatan rangkap IPP terhadap atom karbon dari DMAPP yang kekurangan elektron diikuti oleh penyingkiran ion pirofosfat. Serangan ini menghasilkan geranil pirofosat (GPP) yakni senyawa antara bagi semua senyawa monoterpen.

Penggabungan selanjutnya antara satu unit IPP dan GPP, dengan mekanisme yang sama seperti antara IPP dan DMAPP, menghasilkan farnesil pirofosfat (FPP) yang merupakan senyawa antara bagi semua senyawa seskuiterpen. Senyawa-senyawa diterpen diturunkan dari geranil-geranil pirofosfat (GGPP) yang berasal dari kondensasi antara satu unit IPP dan FPP dengan mekanisme yang sama pula.

Sintesa terpenoid sangat sederhana sifatnya. Ditinjau dari segi teori reaksi organik sintesa ini hanya menggunakan beberapa jenis reaksi dasar. Reaksi-reaksi selanjutnya dari senyawa antara GPP, FPP, dan GGPP untuk menghasilkan senyawa-senyawa terpenoid satu per satu hanya melibatkan beberapa jenis reaksi sekunder pula (gambar 2.4). Reaksi-reaksi sekunder ini lazimnya adalah hidrolisa, siklisasi, oksidasi, reduksi, dan reaksi-reaksi spontan yang dapat berlangsung dengan mudah dalam suasana netral dan pada suhu kamar, seperti isomerisasi, dehidrasi, dekarbosilasi, dan sebagainya (Achmad, 1986).

CH₃ C O

SHCoA

Asetil koenzim A CoA -SH

CH₃COOH

CH₃ C SCoA

O

CH₃ C SCoA

O

+ CH₃ C

O

CH2 C

O

SCoA

Asetil koenzim A _{Asetoasetil koenzim A}

CH₃ C OH

CH2 C

O

SCoA

CH2 C SCoA

O

CH₃ C O

CH2 C

O

SCoA CH₃ C

O

SHCoA

+

+ CoA -SH

Asetoasetil koenzim A Asetil koenzim A

CH3 C

OH

CH2 C

O

SCoA

CH2 C SCoA

O

H

CH3 C

OH

CH2 CH2 OH

CH2 C

O OH

Asam mevalonat

Gambar 2.3 Pembentukan Asam Mevalonat Sebagai Zat Antara Dalam Biosintesis Terpenoid (Agusta, 2000)

Berikut adalah gambar reaksi biosintesa terpenoid:

CH3 C SCoA

O

CH3 C SCoA

O

+ CH3 C

O

CH2 C

O

SCoA CH3 C SCoA

O

Asetil koenzim A _{Asetoasetil koenzim A}

CH3 C

OH

CH2 C

O SCoA

CH2 C SCoA

O

H

CH3 C

OH

CH2 CH2 OH

CH2 C

O

OH CH3 C

OPP

CH2 C

O

O

-Asam mevalonat

CH2 CH2 OPP

- OPP - CO2

CH3 C CH

CH2 H

CH2 OPP

Isopentenil pirofosfat (IPP) CH3 C

CH3

CH CH2 OPP

Dimetilalil pirofosfat (DMAPP)

OPP OPP H IPP DMAPP OPP Monoterpen Geranil pirofosfat OPP H OPP Farnesil pirofosfat Seskuiterpen 2 X Triterpen OPP H OPP Diterpen 2 X Tetraterpen Geranil-geranil pirofosfat

Gambar 2.4. Biosintesis Terpenoid (Achmad, 1986)

2.2.3 Sumber Minyak Atsiri

Minyak atsiri merupakan salah satu akhir proses metabolisme sekunder dalam tumbuhan. Tumbuhan penghasil minyak atsiri antara lain termasuk famili Pinaceae, Labiatae, Compositae, Lauraceae, Myrtaceae, Rutaceae, Piperaceae, Zingiberaceae, Umbelliferae, dan Gramineae. Minyak atsiri terdapat pada setiap bagian tumbuhan yaitu di daun, bunga, buah, biji, batang, kulit, akar, dan rimpang (Ketaren, 1985)

2.2.4 Kegunaan Minyak atsiri

Menurut Rochim (2009), kegunaan minyak atsiri sangat luas dan spesifik, khususnya dalam berbagai bidang industri, seperti :

1. Farmasi dan Kesehatan

Bidang kesehatan, minyak atsiri digunakan sebagai aroma terapi.Aroma yang muncul dari minyak atsiri dapat menimbulkan efek menenangkan yang pada akhirnya dapat digunakan sebagai terapi psikis. Minyak atsiri ini selain memberikan aroma wangi yang menyenangkan juga dapat membantu pencernaan dengan merangsang sistem saraf, sehingga akan meningkatkan sekresi getah lambung yang mengandung enzim hanya oleh stimulus aroma dan rasa bahan pangan.

2. Kosmetik

Dalam hal perawatan kecantikan, minyak atsiri juga digunakan sebagai campuran bahan kosmetik. Dalam pembuatan parfum dan wangi-wangian, minyak atsiri tersebut berfungsi sebagai zat pengikat bau (fixative) dalam parfum, misalnya minyal nilam, minyak akar wangi dan minyak cendana. Minyak atsiri yang berasal dari rempah-rempah, misalnya minyak lada, minyak kayu manis, minyak jahe, minyak cengkeh, minyak ketumbar, umumnya digunakan sebagai bahan penyedap (flavoring agent) dalam bahan pangan dan minuman.

3. Makanan

Pada makanan, minyak atsiri ditambahkan sebagai penambah aroma dan penambah rasa. Oleh sebab itu, kehadiran minyak atsiri dapat memperkuat aroma

dan rasa sehingga produk makanan serasa memiliki cita rasa yang tak kalah dengan produk aslinya.

2.2.5 Metode Isolasi Minyak Atsiri

Minyak atsiri umumnya diisolasi dengan empat metode yang lazim digunakan sebagai berikut.

2.2.5.1 Metode penyulingan

Dasar dari metode ini adalah memanfaatkan perbedaan titik didih. Beberapa metode penyulingan yang popular dilakukan di berbagai perusahaan indrustri penyulingan minyak atsiri antara lain:

a. Penyulingan dengan air

Pada metode ini, bahan tanaman yang akan disuling mengalami kontak langsung dengan air mendidih. Bahan dapat mengapung di atas air atau terendam secara sempurna, tergantung pada berat jenis dan jumlah bahan yang disuling. Ciri khas model ini yaitu adanya kontak langsung antara bahan dan air mendidih. Oleh karena itu, sering disebut penyulingan langsung.

b. Penyulingan dengan uap

Model ini disebut juga penyulingan uap atau penyulingan tak langsung. Pada prinsipnya, model ini sama dengan penyulingan langsung. Hanya saja, air penghasil uap dan bahan yang akan disuling berada pada ketel yang berbeda. Uap yang digunakan berupa uap jenuh.

c. Penyulingan dengan air dan uap

Pada model penyulingan ini, bahan tanaman yang akan disuling diletakkan di atas rak-rak atau saringan. Kemudian ketel penyulingan diisi dengan air sampai permukaannya tidak jauh dari bagian bawah saringan. Ciri khas model ini yaitu uap selalu dalam keadaan basah, jenuh, dan tidak terlalu panas. Bahan tanamanyang akan disuling hanya berhubungan dengan uap dan tidak dengan air panas (Lutony & Rahmayati, 1994).

2.2.5.2 Metode pengepresan atau Pemerasan

Metode ini hanya bisa dilakukan terhadap simplisia yang mengandung minyak atsiri dalam kadar yang cukup besar. Bila tidak, nantinya hanya akan habis dalam proses. Metode ini dilakukan untuk minyak-minyak atsiri yang tidak stabil dan tidak tahan pemanasan seperti minyak jeruk. Juga terhadap minyak-minyak atsiri yang bau dan warnanya berubah akibat pengaruh pelarut penyari. Metode ini juga hanya cocok untuk minyak atsiri yang rendemenya relatif besar (Ketaren, 1985).

2.2.5.3 Metode Penyarian

Dasar metode ini adalah adanya perbedaan kelarutan. Minyak atsiri sangat mudah larut dalam pelarut organik dan tidak larut dalam air. Metode ini digunakan untuk minyak-minyak atsiri yang tidak tahan pemanasan, seperti cendana. Kebanyakan dipilih metode ini karena kadar minyak didalam tanaman sangat rendah/kecil. Bila dipisahkan dengan metode lain, minyak akan hilang selama proses pemisahan. Pengambilan minyak atsiri menggunakan cara ini diyakini sangat efektif karena sifat minyak atsiri yang larut sempurna didalam bahan pelarut organik nonpolar (Ketaren, 1985).

2.2.5.4 Metode Enfleurage

Metode ini sering disebut metode pelekatan bau dengan menggunakan media lilin. Metode ini digunakan karena diketahui ada beberapa jenis bunga yang setelah dipetik, enzimnya masih menunjukkan kegiatan dalam menghasilkan minyak atsiri sampai beberapa hari, misalnya bunga melati sehingga perlu perlakuan yang tidak merusak aktivitas enzim tersebut secara langsung. Caranya adalah dengan menaburkan bunga dihamparan lapisan lilin dalam sebuah baki besar (1m x 2m) dan ditumpuk-tumpuk menjadi beberapa tumpukan baki yang saling menutup rapat. Baki-baki berlapis lilin tersebut dieramkan, dibiarkan menyerap bau bunga sampai beberapa hari. Setiap kali bunga yang sudah habis masa kerja enzimnya diganti dengan bunga segar. Demikian seterusnya hingga dihasilkan lilin yang berbau harum (dalam perdagangan dikenal sebagai pomade). Selanjutnya, pomade

dikerok dan diekstraksi menggunakan etanol seperti lazimnya proses ekstraksi biasa (Gunawan dan Mulyani, 2004).

2.3 Analisis Komponen Minyak Atsiri Dengan GC-MS 2.3.1 Kromatografi Gas

Kromatografi gas adalah suatu proses dengan mana suatu campuran menjadi komponen-komponennya oleh fase gas yang bergerak melewati suatu lapisan serapan yang stasioner (Vogel,1994). Dalam kromatografi gas, fase bergeraknya adalah gas dan zat terlarut terpisah sebagai uap. Pemisahan tercapai dengan partisi sampel antara fase bergerak dan fase diam berupa cairan dengan titik didih tinggi (tidak mudah menguap) yang terikat pada zat padat penunjangnya (Khopkar, 2003).

a. Gas Pembawa

Tangki gas bertekanan tinggi berlaku sebagai sumber gas pembawa. Pada kromatografi gas suhu tetap selama analisis. Suatu pengatur tekanan digunakan untuk menjamin tekanan yang seragam pada pemasuk kolom sehingga diperoleh laju aliran gas yang tetap. Gas yang biasa dipakai ialah hidrogen, helium, dan nitrogen (McNair and Bonelli, 1988).

b. Sistem Injeksi

Cuplikan dimasukkan ke dalam ruang suntik melalui gerbang suntik, biasanya berupa lubang yang ditutupi dengan septum atau pemisah karet. Ruang suntik harus dipanaskan sendiri, terpisah dari kolom, dan biasanya pada suhu 10−150_C lebih tinggi dari suhu maksimum. Jadi seluruh cuplikan diuapkan segera setelah disuntikkan dan dibawa ke kolom (Gritter, 1985).

c. Kolom

Kolom bagi sebuah kromatografi gas sangat penting, dapat diibaratkan sebagai jantung kromatografi gas karena pemisahan komponen-komponen sampel terjadi di dalam kolom (Mulja,1995).

Kolom dapat dibuat dari tembaga, baja tahan karat, aluminium atau gelas. Kolom dapat berbentuk lurus, melengkung ataupun gulungan spiral sehingga lebih menghemat ruang. Ada dua macam kolom yaitu kolom kemas dan kolom kapiler. Kolom kapiler banyak digunakan untuk menganalisis komponen minyak atsiri. Hal ini disebabkan oleh kelebihan kolom tersebut yang memberikan hasil analisis dengan daya pisah tinggi dan sekaligus memiliki sensitivitas yang tinggi ( Agusta, 2000).

d. Fase Diam

Fase diam dibedakan berdasarkan kepolarannya, yaitu nonpolar, sedikit polar, semi polar, polar dan sangat polar.Berdasarkan kepolaran minyak atsiri yang non polar sampai sedikit polar, maka untuk keperluan analisis sebaiknya digunakan kolom fase diam yang bersifat sedikit polar, misalnya SE-52 dan SE-54 (Agusta, 2000).

e. Suhu

Suhu salah satu faktor utama yang menentukan hasil analisis kromatografi gas dan spektrofotometri massa. Umumnya yang sangat menentukan adalah pengaturan suhu injektor dan kolom. Kondisi analisis minyak atsiri yang cocok sangat bergantung pada komponen minyak atsiri yang akan dianalisis (Agusta, 2000). f. Detektor

Menurut (McNair dan Bonelli ,1988) ada dua detektor yang populer yaitu detektor hantar-termal (thermal conductivity detector) dan detektor pengion nyala (flame ionization detector).

2.3.2 Spektrometer Massa

Spektrometer massa adalah suatu alat berfungsi untuk mendeteksi masing-masing molekul komponen yang telah dipisahkan pada sistem kromatografi gas (Agusta, 2000).

Massa pada umumnya digunakan untuk: 1. Menentukan massa molekul.

Tinggi (High Resolution Mass Spectra).

3. Mengetahui informasi dari struktur dengan melihat pola fragmentasinya (Dachriyanus, 2004).

Spektrometer massa menembaki bahan yang sedang diteliti dengan berkas elektron dan secara kuantitatif mencatat hasilnya sebagai suatu spektrum fragmen ion positif. Terpisahnya fragmen ion positif didasarkan pada massanya. Spektrometer massa biasa diambil pada energi berkas elektron sebesar 70 elektron volt. Kejadian sederhana adalah tercampaknya satu elektron dari molekul dalam fasa gas oleh sebuah elektrton dalam berkas elektron dan membentuk suatu kation radikal (M+.

M + e M

).

+ .

Suatu proses yang disebabkan oleh tabrakan elektron pada kamar pengion spektrometer massa adalah ionisasi dari molekul yang berupa uap dengan kehilangan satu elektron dan terbentuk ion molekul bermuatan positif, karena molekul senyawa organik mempunyai elektron berjumlah genap maka proses pelepasan satu elektron menghasilkan ion radikal yang mengandung satu elektron tidak berpasangan.

+ 2e

M M

Proses lain, molekul yang berupa uap tersebut menangkap sebuah elektron membentuk ion radikal bermuatan negatif dengan kemudian terjadi jauh lebih kecil (10

+.

-2

Spektrometri massa terdiri dari sistem pemasukan cuplikan, ruang pengion dan percepatan, tabung analisis, pengumpul ion dan penguat, dan pencatat.Keuntungan utama spektrometri massa sebagai metode analisis yaitu metode ini lebih sensitif dan spesifik untuk identifikasi senyawa yang tidak diketahui atau untuk menetapkan keberadaan senyawa tertentu. Hal ini disebabkan adanya pola fragmentasi yang khas sehingga dapat memberikan informasi mengenai bobot molekul dan rumus molekul. Puncak ion molekul penting dikenali karena memberikan bobot molekul senyawa yang diperiksa. Puncak

) daripada ion radikal bermuatan positif (Sudjadi, 1985). -e

paling kuat pada spektrum, disebut puncak dasar (base peak), dinyatakan dengan nilai 100% dan kekuatan puncak lain, termasuk puncak ion molekulnya dinyatakan sebagai persentase puncak dasar tersebut (Silverstein, 1985).

2.4 Bakteri

Bakteri merupakan penghasil bermacam-macam zat organik dan obat-obatan antibiotik. Mikroorganisme memang peranan penting dalam menganalisis sistem enzim dan dalam mengalisis komposisi suatu makanan. Bakteri merupakan organisme yang sangat kecil (berukuran mikroskopis). Bakteri rata-rata berukuran lebar 0,5 – 1 mikron dan panjang hingga 10 mikron (1 mikron - 103_{mm). Untuk} melihat bakteri dengan jelas, tubuhnya perlu diisi dengan zat warna, pewarna ini disebut pengecatan bakteri (Irianto, 2006).

Kelompok mikroorganisme yang paling penting dan beraneka ragam, yang berhubungan dengan makanan dan manusia adalah bakteri. Adanya bakteri dalam bahan pangan dapat mengakibatkan pembusukan yang tidak diinginkan atau menimbulkan penyakit yang ditularkan melalui makanan. Bakteri adalah mikroorganisme bersel tunggal yang tidak terlihat oleh mata (Buckle, 2007).

Berdasarkan perbedaan respons terhadap prosedur pewarnaan gram dan strktur dinding bakteri, bakteri diklasifikasikan menjadi bakteri gram negatif dan bakteri gram positif.

2.4.1 Bakteri gram positif

Bakteri gram positif lebih sensitif terhadap penisilin, tetapi lebih tahan terhadap perlakuan fisik dibandingkan bakteri gram negatif. Bakteri gram positif sering berubah sifat pewarnaannya sehingga menunjukkan reaksi gram variabel. Sebagai contoh, kultur bakteri gram positif yang sudah tua dapat kehilangan kemampuannya untuk menyerap pewarna violet sehingga dapat berwarna merah seperti bakteri gram negatif. Perubahan tersebut juga dapat disebabkan oleh perubahan kondisi lingkungan atau modifikasi teknik pewarnaan (Fardiaz, 1992).

Dinding sel bakteri gram positif tersusun atas beberapa lapisan peptidoglikan, dan strukturnya tebal dan keras. Dinding selnya juga tersusun atas teichonic acid yang mengandung alcohol (seperti gliserol) dan posfat (Torota, 2001).

Contoh dari bakteri gram positif : a. Bacillus cereus

Bakteri Bacillus cereus adalah bakteri gram positif berbentuk batang, bergerak, dapat membentuk spora. Gejala-gejala dari keracunan bahan pangan yang tercemar oleh bakteri ini termasuk diare, sakit perut dan kadang-kadang muntah (Buckle, 2007).

b.Streptococcus mutan

Spesies Streptococcus berbentuk bulat yang dapat dijumpai secara tunggal, berpasangan atau berbentuk rantai bakteri ini berperan nyata dalam produksi susu dan sayur-sayuran (Buckle, 2007). Pengamatan bahwa kerusakan gigi salah satunya disebabkan oleh Streptococcus mutan. Glukan melekat erat pada permukaan gigi dan pada bakteri, yang membawa Streptococcus berhubungan erat dengan email gigi (Volk dan Wheeler, 1984).

2.4.2. Bakteri Gram Negatif

Bakteri gram negatif lebih sensitif terhadap antibiotik lainnya seperti streptomisin dan bersifat lebih konstan terhadap reaksi pewarnaan (Fardiaz, 1992). Dinding sel bakteri gram negatif tersusun atas satu lapisan peptidoglikan dan membran luar. Dinding selnya tidak mengandung teichoic acid. Membran luar tersusun atas lipopolisakarida, lipoprotein, dan fospolipid (Torota, 2001).

Contoh bakteri gram negatif : a. Pseudomonas aeruginosa

Pseudomonas merupakan salah satu jenis dalam kelompok ini yang sering menimbulkan kebusukan makanan. Pertumbuhan pada kondisi aerobik berjalan cepat, dan biasanya membentuk lendir. Kebanyakan Pseudomonas, kecuali P.

Syringe, bersifat oksidase positif, dan akan membentuk warna biru jika ditambah senyawa dimetil-p-fenilenediamin dihidroklorida. Tidak tahan terhadap panas dan keadaan kering. Oleh karena itu, mudah dibunuh dengan proses pemanasan dan pengeringan (Fardiaz, 1992).

b. Escherichia coli

Escherichia berbatang pendek. Habitat utamanya adalah usus manusia dan hewan. Escherichia coli dipakai sebagai organisme indikator, karena jika terdapat dalam jumlah yang banyak menunjukkan bahwa pangan atau air telah mengalami pencemaran (Gaman, 1992).

2.5 Antioksidan

Antioksidan adalah senyawa yang mempunyai struktur molekul yang dapat memberikan elektronnya kepada molekul radikal bebas dan dapat memutus reaksi berantai dari radikal bebas (Kumalaningsih, 2006). Antioksidan atau reduktor berfungsi untuk mencegah terjadinya oksidasi atau menetralkan senyawa yang telah teroksidasi dengan cara menyumbangkan hidrogen dan atau elektron (Silalahi, 2006).

Menurut (Kosasih, 2004), antioksidan tubuh dikelompokkan menjadi 3 yakni: (1). Primary antioxidants (antioksidan primer) berfungsi untuk mencegah terbentuknya senyawa radikal bebas baru. Ia mengubah radikal bebas yang ada menjadi molekul yang berkurang dampak negatifnya, sebelum radikal bebas ini sempat bereaksi.

(2).Secondary antioxidants (antioksidan sekunder) berfungsi menangkap senyawa serta mencegah terjadinya reaksi berantai.

(3). Tertiary antioxidants (antioksidan tersier) berfungsi memperbaiki kerusakan sel-sel dan jaringan yang disebabkan radikal bebas.

2.5.1 Uji Aktivitas Antioksidan

Pengukuran aktivitas antioksidan dapat dilakukan dengan beberapa metode yaitu CUPRAC, DPPH, dan FRAP :

1. Metode CUPRAC (cupric ion reducing antioxidant capacity)

Metode CUPRAC menggunakan bis (neokuproin) tembaga (II) (Cu(Nc)22+ sebagai pereaksi kromogenik. Pereaksi Cu(Nc) 22+ yang berwarna biru

akan mengalami reduksi menjadi Cu(Nc)2+

nCu(Nc)

yang berwarna kuning dengan reaksi:

22+ +AR(OH)n →nCu(Nc)2+ +AR(=O)n + nH+

2.Metode DPPH (2,2-difenil-1- pikrilhidrazil)

Menggunakan 2,2 difenil-1- pikrilhidrazil sebagai sumber radikal bebas. Prinsipnya adalah reaksi penangkapan hidrogen oleh DPPH dari zat antioksidan (Apak et al., 2007).

3.Metode FRAP (ferric reducing antioxidant power)

Metode FRAP menggunakan Fe(TPTZ)23+ kompleks besi-ligan

2,4,6-tripiridil-triazin sebagai pereaksi. Kompleks biru Fe(TPTZ)23+ akan berfungsi sebagai zat

pengoksidasi dan akan mengalami reduksi menjadi Fe(TPTZ) 22+

Fe(TPTZ)

yang berwarna kuning dengan reaksi berikut:

23+ + AROH → Fe(TPTZ)22++ H+ + AR

(Benzie and Strain 1996).

BAB 1

PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Minyak atsiri disebut juga minyak menguap, minyak eteris, atau minyak esensial karena pada suhu kamar mudah menguap di udara terbuka,mempunyai rasa getir, berbau wangi sesuai dengan aroma tanaman yang menghasilkannya, dan umumnya larut dalam pelarut organik. Dalam keadaan segar dan murni tanpa pencemar, minyak atsiri umumnya tidak berwarna. Minyak ini dihasilkan dari bagian tanaman tertentu seperti akar, batang, kulit, daun, bunga, atau biji (Gunawan dan Mulyani, 2004; Lutony dan Rahmayati, 1994).

Asam bunga (Citrus cf. nobilis Lour) merupakan kerabat dekat dari tumbuhan jeruk keprok (citrus nobilis Lour), hanya saja ada beberapa perbedaan pada bagian kulit dan rasa asam dari asam bunga. Pada bagian kulit buah jeruk keprok kulitnya mudah di kupas, rasanya yang manis dan septanya mudah dilepaskan (Ball, 1997). Asam bunga merupakan salah satu spesies dari sekian banyak spesies citrus yang jarang dikenal dan dibudidayakan oleh banyak orang.

Dewasa ini, tanaman penghasil minyak atsiri banyak dimanfaatkan sebagai aroma terapi untuk terapi komplementer. Minyak ini mempunyai komponen kimia tertentu, yang pada prinsipnya akan memberikan aktivitas yang spesifik bagi tanaman tersebut (Claus, 1970). Minyak atsiri banyak dibutuhkan di berbagai industri, seperti pada industri kosmetik (sabun, pasta gigi, shampo, lotion dan parfum), pada industri makanan digunakan sebagai bahan penyedap atau penambah cita rasa, dalam industri farmasi atau obat–obatan (anti nyeri, anti infeksi, pembunuh bakteri), bahkan dapat digunakan pula sebagai insektisida (Lutony dan Rahmayanti, 1994). Beberapa tanaman dari genus Citrus suku

DAFTAR ISI

Halaman

Persetujuan ii

Pernyataan iii

Penghargaan iv

Abstrak v

Abstrack vi

Daftar Isi vii

Daftar Tabel x

Daftar Gambar xi

Daftar Lampiran xii

BAB 1 PENDAHULUAN 1.1 Latar Belakang 1 1.2 Permasalahan 3 1.3 Pembatasan Masalah 4 1.4 Tujuan penelitian 4

1.5 Manfaat Penelitian 4 1.6 Lokasi Penelitian 5 1.7 Metodologi Penelitian 5 BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA 2.1 Tanaman Asam Bunga (Citrus cf. nobilis Lour) 6

2.1.1 Manfaat Asam Bunga 7

2.2 Minyak Atsiri 8

2.2.1 Komposisi Kimia Minyak Atsiri 9

2.2.2 Biosintesis Minyak Atsiri 9

2.2.3 Sumber Minyak Atsiri 13

2.2.4 Kegunaan Minyak Atsiri 13

2.2.5 Metode Isolasi Minyak Atsiri 14

2.2.5.1 Metode Destilasi 14

2.2.5.2 Metode Pengepresan atau Pemerasan 15

2.2.5.3 Metode Penyarian 15

2.2.5.4 Metode Enfleurage 15

2.2

Analisis Komponen Minyak Atsiri Dengan GC-MS

16

2.3.1 Kromatografi Gas 16

2.3.2

Spektrometer Massa

17

2.4 Bakteri 19

2.4.1

Bakteri gram positif

19

2.4.2

Bakteri gram negatif

20

2.5

Antioksidan

21

BAB 3 METODE PENELITIAN

3.1 Alat-alat

23

3.2 Bahan-bahan

24

3.3 Prosedur Penelitian

25

3.3.1 Penyediaan Sampel 25

3.3.2 Isolasi Minyak Atsiri Kulit Buah Asam Bunga dengan Alat Destilasi Stahl 25

3.3.3 Pengujian Sifat Antibakteri Minyak Atsiri Kulit Buah Asam Bunga 25

3.3.3.1 Pembuatan Media Nutrient Agar (NA) Miring Dan Sub Kultur Bakteri 25

3.3.3.2 Pembuatan Media Mueller Hinton Agar 26

3.3.3.3 Pembuatan Media Nutrient Broth (NB) 26

3.3.3.4 Penyiapan Inokulum Bakteri 26

3.3.3.5 Pembuatan Variasi Konsentrasi Minyak Atsiri Kulit Buah Asam Bunga 26 3.3.3.6 Uji Sifat Antibakteri Minyak Atsiri Kulit Buah Asam Bunga 26

3.3.4 Uji Sifat Antioksidan Minyak Atsiri Kulit Buah Asam Bunga Dengan Metode DPPH 27

3.3.4.1 Pembuatan Larutan DPPH 27

3.3.4.2 Pembuatan Variasi konsentrasi Minyak Atsiri Kulit Buah Asam Bunga 27

3.3.3.3 Uji Aktivitas Antioksidan 27

3.4 Bagan Penelitian

3.4.1

Isolasi Minyak Atsiri Kulit Buah Asam Bunga

Dengan Destilasi Stahl

28

3.4.2

Analisa Minyak Atsiri Kulit Buah Asam Bunga

dengan GC-MS

28

3.4.3

Pengujian Sifat Antibakteri Minyak Atsiri Kulit

Buah Asam Bunga

29

3.4.3.1 Pembuatan Media Mueller Hinton Agar 29

3.4.3.2 Pembuatan Media Nutrient Agar (NA) Miring Dan Sub Kultur Bakteri 29 3.4.3.3 Penyiapan Inokulum Bakteri 30 3.4.3.4 Uji aktivitas Antibakteri Minyak Atsiri

Kulit Buah Asam Bunga

30

3.4.4

Uji Sifat Antioksidan Minyak Atsiri Kulit Buah

Asam Bunga Dengan Metode DPPH

31

3.4.4.1 Pembuatan Variasi konsentrasi Minyak

Atsiri Kulit Buah Asam Bunga

31

3.4.4.2 Pembuatan Larutan DPPH

32

BAB 4 HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Hasil Penelitian 33

4.1.1 Minyak Atsiri dari Proses Destilasi dengan Alat

Stahl 33

4.1.2 Hasil Analisa dengan GC-MS 33

4.1.3 Hasil Uji Aktivitas Antibakteri Minyak Atsiri Kulit

Buah Asam Bunga 36

4.1.4 Hasil Uji Aktivitas Antioksidan Minyak Atsiri Kulit

Buah Asam Bunga 38

4.2 Pembahasan

4.2.1 Isolasi Minyak Atsiri Kulit Buah Asam Bunga 40 4.2.2 Analisis Minyak Atsiri Kulit Buah Asam Bunga 40 4.2.3 Uji Aktivitas Antibakteri Minyak Atsiri Kulit Buah

Asam Bunga 50

4.2.4 Uji Aktivitas Antioksidan Minyak Atsiri Kulit Buah

Asam Bunga 51

BAB 5 KESIMPULAN DAN SARAN

5.1 Kesimpulan 54

5.2 Saran 54

DAFTAR PUSTAKA 55

DAFTAR TABEL

Judul Halaman

4.1 Minyak Atsiri Kulit Buah Asam Bunga yang Diperoleh Dengan

Metode Hidrodestilasi 32

4.2 Hasil Analisis GC-MS Minyak Atsiri Kulit Buah Asam Bunga 35 4.3 Hasil Pengukuran Diameter Zona Hambat Beberapa Kultur

Bakteri Oleh Minyak Atsiri Kulit Buah Asam Bunga 38 4.4 Hasil Pengukuran Absorbansi Minyak Atsiri Kulit Buah Asam

Bunga 39

4.5 Tingkat Kekuatan Antioksidan Dengan Metode DPPH 53

Nomor

DAFTAR GAMBAR

Nomor Gambar

Judul Halaman

2.1 Asam Bunga 6

2.2 Pembentukan Asam Mevalonat Sebagai Zat Antara Dalam Biosintesis Terpen

11

2.3 Biosintesis Terpen 12

4.1 Kromatogram Hasil Analisa GC-MS Minyak Atsiri Kulit Buah Asam Bunga

34

4.2 Zona Hambat Bakteri Bacillus cereus 37

4.3 Zona Hambat Bakteri Streptococcus mutans 37

4.4 4.5

Zona Hambat Bakteri Escherichia coli

Zona Hambat Bakteri Pseudomonas aeruginosa

37 38 4.6 Grafik % perendaman Vs konsentrasi minyak atsiri kulit buah

asam Bunga

39

4.7 Spektrum Massa Limonen 41

4.8 Pola Fragmentasi yang mungkin dari Senyawa Limonen 41

4.9 Spektrum Massa -Pinen 42

4.10 Pola Fragmentasi yang mungkin dari Senyawa - Pinen 42

4.11 Spektrum Massa - Terpinen 43

4.12 Pola Fragmentasi yang mungkin dari Senyawa - Terpinen 43

4.13 Spektrum Massa α – Terpineol 44

4.14 Pola Fragmentasi yang mungkin dari Senyawa α-Terpineol 44

4.15 Spektrum Massa 1,8 Cineol 45

4.16 Pola Fragmentasi yang mungkin dari Senyawa 1,8 Cineol 46

4.17 Spektrum Massa Cymen 47

4.18 Pola Fragmentasi yang mungkin dari Senyawa Cymen 47

4.19 Spektrum Massa - Bisabolene 48

4.20 Pola Fragmentasi yang mungkin dari - Bisabolene 48

4.21 Spektrum Massa Senyawa -Citronellol 49

4.22 Pola Fragmentasi yang mungkin dari Senyawa - Citronellol 49

4.23 Mekanisme Peredaman Radikal DPPH 52

4.24 Kestabilan DPPH 52

DAFTAR LAMPIRAN

Nomor Lampiran

Judul Halaman

1 Tanaman dan Buah Asam Bunga (Citrus cf. nobilis Lour) 59 2 Hasil Uji Aktivitas Antioksidan Minyak Atsiri Kulit Buah

Asam Bunga

60 3 Perhitungan Nilai IC50 Minyak Atsiri Kulit Buah Asam Bunga 61

4 Kromatogram GC-MS Minyak Atsiri Kulit Buah Asam Bunga 62

5 KondisiAlat GC-MS 63

6 Spektrum Massa Komponen Minyak Atsiri 64

7 Determinasi Tumbuhan Asam Bunga 101