DAFTAR ISI UJI SITOTOKSIK FRAKSI SEMIPOLAR EKSTRAK METANOL KULIT BATANG KAMBONG (Dipterocarpus validus Blume.) TERHADAP SEL HeLa DAN PROFIL KROMATOGRAFI LAPIS TIPISNYA.
DAFTAR ISI
HALAMAN JUDUL...................................................................................
ii
HALAMAN PENGESAHAN.....................................................................
iii
HALAMAN MOTTO .................................................................................
iv
HALAMAN PERSEMBAHAN .................................................................
v
HALAMAN DEKLARASI.........................................................................
vi
KATA PENGANTAR ................................................................................
vii
DAFTAR ISI...............................................................................................
ix
DAFTAR TABEL.......................................................................................
xi
DAFTAR GAMBAR ..................................................................................
xii
DAFTAR LAMPIRAN............................................................................... xiii
INTISARI.................................................................................................... xiv
BAB I PENDAHULUAN
A. Latar Belakang Masalah............................................................
1
B. Perumusan Masalah ..................................................................
4
C. Tujuan Penelitian ......................................................................
4
D. Tinjauan Pustaka .......................................................................
5
1. Tumbuhan Kambong (Dipterocarpus validus Blume) ........
5
2. Ekstrasi................................................................................
7
3. Kanker .................................................................................
8
4. Sel HeLa..............................................................................
12
5. Sitotoksik ............................................................................
13
6. Kromotogradi LAPIS Tipis.................................................
14
E. Keterangan Empiris...................................................................
17
BAB II METODE PENELITIAN
A. Rancangan Penelitian ................................................................
18
B. Bahan dan Alat..........................................................................
18
1. Bahan Penelitian..................................................................
18
2. Alat Penelitian.....................................................................
19
ix
C. Jalan Penelitian..........................................................................
20
1. Determinasi Tanaman .........................................................
20
2. Pengambilan Bahan.............................................................
20
3. Pembuatan Serbuk...............................................................
20
4. Pembuatan Ekstrak..............................................................
20
5. Pembuatan Fraksi ................................................................
21
6. Uji Sitotoksik ......................................................................
23
a
Sterilisasi Alat ...............................................................
23
b Pembuatan Media Pertumbuhan ...................................
23
c
Propagasi Sel HeLa .......................................................
24
d Pemanenan Sel HeLa ....................................................
24
e
Pembuatan Larutan Uji .................................................
25
f
Uji Sitotoksik dengan metode MTT..............................
25
7. Uji KLT...............................................................................
26
D. Cara Analisis .............................................................................
26
BAB III. HASIL DAN PEMBAHASAN
A. Determinasi Tanaman ...............................................................
30
B. Ekstraksi....................................................................................
30
C. Fraksinasi ..................................................................................
31
D. Uji Sitotoksik ............................................................................
32
E. Kromotografi Lapis Tipis..........................................................
39
BAB IV. KESIMPULAN DAN SARAN
A. Kesimpulan .....................................................................................
43
B. Saran................................................................................................
43
DAFTAR PUSTAKA .................................................................................
44
LAMPIRAN................................................................................................
46
x
DAFTAR TABEL
Halaman
Tabel 1. Sifat – sifat dasar adsorben untuk KLT ........................................
15
Tabel 2. Pengaruh berbagai konsentrasi DMSO terhadap Sel HeLa ..........
32
Tabel 3. Pengaruh berbagai konsetrasi fraksi semi polar ekstrak
metanol kulit batang Kambong terhadap Sel HeLa ......................
34
Tabel 4. Nilai probit dari fraksi semipolar ekstrak
metanol kulit batang Kambong terhadap Sel HeLa ......................
36
Tabel 5. Analisis KLT dibawah sinar UV254 nm dan UV366 nm.............
39
Tabel 6. Hasil analisis KLT untuk uji Flavonoid........................................
41
xi
DAFTAR GAMBAR
Halaman
Gambar 1. Skema Kerja ..............................................................................
28
Gambar 2. Pembagian Fraksi ......................................................................
31
Gambar 3. Grafik Hubungan antara pengaruh konsentrasi
DMSO VS Sel hidup.................................................................
32
Gambar 4. Mekanisme Reduksi Sel HeLa terhadap MTT..........................
33
Gambar 5. Grafik Hubungan Konsentrasi Fraksi semipolar ekstrak
metanol kulit batang Kambong VS % sel hidup Sel HeLa .......
35
Gambar 6. Grafik hubungan Log Konsentrasi dengan Nilai Probit............
36
Gambar 7. Gambar sel setelah Perlakuan ...................................................
37
Gambar 8. Sel tanpa perlakuan ...................................................................
37
Gambar 9. Hasil KLT..................................................................................
39
Gambar 10. Hasil KLT dengan Uap Ammonia ..........................................
40
xii
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
Lampiran 1. Penghitungan hasil rendemen.................................................
46
Lampiran 2. Perhitungan seri konsentrasi di luar sumuran.........................
46
Lampiran 3. Penrhitungan seri konsentrasi di dalam sumuran ...................
47
Lampiran 4. Tabel absorbansi pada uji sitotoksik fraksi semipolar ekstrak
metanol kulit batang Kambong dengan ELISA reader ...........
47
Lampiran 5. Perhitungan kepadatan stock Sel HeLa .................................
48
Lampiran 6.Perhitungan prosen sel hidup akibat pemberian
fraksi semipolar ekstrak metanol kulit batang Kambong........
49
Lampiran 7. Tabel probit.............................................................................
52
Lampiran 8. Tanaman Kambong.................................................................
53
Lampiran 9. Surat Keterangan Determinasi................................................
54
xiii
INTI SARI
Kanker adalah penyakit terbesar pada abad ini. Di dunia penyakit kanker
menempati urutan kedua sebagai penyebab kematian. Banyak penelitian yang
dilakukan untuk mencari dan mengembankan obat kanker terutama dari tanaman.
Salah satunya adalah tanaman yang berasal dari familli Dipterocarpaceae yang
telah terbukti memiliki efek anti kanker. Tujuan penelitian ini adalah untuk
mengetahui efek sitotoksik dan nilai IC50 dari fraksi semipolar ekstrak metanol
kulit batang Kambong ( Dipterocarpus vallidus Blume.) terhadap sel HeLa dan
untuk mengetahui kandungan senyawa kimianya dengan analisis KLT.
Ekstraksi kulit batang Kambong dilakukan dengan cara maserasi,
menggunakan pelarut metanol. Kemudian dari ekstrak yang dihasilkan
difraksinasi dengan pelarut yang bertingkat yaitu n-heksana : etilasetat (8:2),
(3:7), (2:8), (1:9) dan etilasetat 100%. Pelarut ini didapatkan dari hasil KLT yang
dilakukan pada ekstrak metanol dengan fase diam silika GF254. Untuk
menunjukkan banyaknya sel hidup digunakan metode MTT assay dengan seri
konsentrasi 250 Pg/mL, 125 Pg/mL, 62,5 Pg/mL, 31,25 Pg/mL, 15,625 Pg/mL,
sedangkan untuk mengetahui kandungan kimianya digunakan pereaksi semprot
uap ammonia, Lieberman Burchard, Dragendorff, UV254 nm, UV366 nm.
Hasil yang didapatkan yaitu IC50 sebesar 55,28 Pg/mL, sedangkan dari hasil
KLT menunjukkan bahwa fraksi semipolar ekstrak metanol kulit batang Kambong
mempunyai kandungan kimia senyawa flavonoid.
Kata kunci : Dipterocarpus vallidus Blume., sel HeLa, MTT assay, IC50, fraksi
semipolar.
xiv
HALAMAN JUDUL...................................................................................
ii
HALAMAN PENGESAHAN.....................................................................
iii
HALAMAN MOTTO .................................................................................
iv
HALAMAN PERSEMBAHAN .................................................................
v
HALAMAN DEKLARASI.........................................................................
vi
KATA PENGANTAR ................................................................................
vii
DAFTAR ISI...............................................................................................
ix
DAFTAR TABEL.......................................................................................
xi
DAFTAR GAMBAR ..................................................................................
xii
DAFTAR LAMPIRAN............................................................................... xiii
INTISARI.................................................................................................... xiv
BAB I PENDAHULUAN
A. Latar Belakang Masalah............................................................
1
B. Perumusan Masalah ..................................................................
4
C. Tujuan Penelitian ......................................................................
4
D. Tinjauan Pustaka .......................................................................
5
1. Tumbuhan Kambong (Dipterocarpus validus Blume) ........
5
2. Ekstrasi................................................................................
7
3. Kanker .................................................................................
8
4. Sel HeLa..............................................................................
12
5. Sitotoksik ............................................................................
13
6. Kromotogradi LAPIS Tipis.................................................
14
E. Keterangan Empiris...................................................................
17
BAB II METODE PENELITIAN
A. Rancangan Penelitian ................................................................
18
B. Bahan dan Alat..........................................................................
18
1. Bahan Penelitian..................................................................
18
2. Alat Penelitian.....................................................................
19
ix
C. Jalan Penelitian..........................................................................
20
1. Determinasi Tanaman .........................................................
20
2. Pengambilan Bahan.............................................................
20
3. Pembuatan Serbuk...............................................................
20
4. Pembuatan Ekstrak..............................................................
20
5. Pembuatan Fraksi ................................................................
21
6. Uji Sitotoksik ......................................................................
23
a
Sterilisasi Alat ...............................................................
23
b Pembuatan Media Pertumbuhan ...................................
23
c
Propagasi Sel HeLa .......................................................
24
d Pemanenan Sel HeLa ....................................................
24
e
Pembuatan Larutan Uji .................................................
25
f
Uji Sitotoksik dengan metode MTT..............................
25
7. Uji KLT...............................................................................
26
D. Cara Analisis .............................................................................
26
BAB III. HASIL DAN PEMBAHASAN
A. Determinasi Tanaman ...............................................................
30
B. Ekstraksi....................................................................................
30
C. Fraksinasi ..................................................................................
31
D. Uji Sitotoksik ............................................................................
32
E. Kromotografi Lapis Tipis..........................................................
39
BAB IV. KESIMPULAN DAN SARAN
A. Kesimpulan .....................................................................................
43
B. Saran................................................................................................
43
DAFTAR PUSTAKA .................................................................................
44
LAMPIRAN................................................................................................
46
x
DAFTAR TABEL
Halaman
Tabel 1. Sifat – sifat dasar adsorben untuk KLT ........................................
15
Tabel 2. Pengaruh berbagai konsentrasi DMSO terhadap Sel HeLa ..........
32
Tabel 3. Pengaruh berbagai konsetrasi fraksi semi polar ekstrak
metanol kulit batang Kambong terhadap Sel HeLa ......................
34
Tabel 4. Nilai probit dari fraksi semipolar ekstrak
metanol kulit batang Kambong terhadap Sel HeLa ......................
36
Tabel 5. Analisis KLT dibawah sinar UV254 nm dan UV366 nm.............
39
Tabel 6. Hasil analisis KLT untuk uji Flavonoid........................................
41
xi
DAFTAR GAMBAR
Halaman
Gambar 1. Skema Kerja ..............................................................................
28
Gambar 2. Pembagian Fraksi ......................................................................
31
Gambar 3. Grafik Hubungan antara pengaruh konsentrasi
DMSO VS Sel hidup.................................................................
32
Gambar 4. Mekanisme Reduksi Sel HeLa terhadap MTT..........................
33
Gambar 5. Grafik Hubungan Konsentrasi Fraksi semipolar ekstrak
metanol kulit batang Kambong VS % sel hidup Sel HeLa .......
35
Gambar 6. Grafik hubungan Log Konsentrasi dengan Nilai Probit............
36
Gambar 7. Gambar sel setelah Perlakuan ...................................................
37
Gambar 8. Sel tanpa perlakuan ...................................................................
37
Gambar 9. Hasil KLT..................................................................................
39
Gambar 10. Hasil KLT dengan Uap Ammonia ..........................................
40
xii
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
Lampiran 1. Penghitungan hasil rendemen.................................................
46
Lampiran 2. Perhitungan seri konsentrasi di luar sumuran.........................
46
Lampiran 3. Penrhitungan seri konsentrasi di dalam sumuran ...................
47
Lampiran 4. Tabel absorbansi pada uji sitotoksik fraksi semipolar ekstrak
metanol kulit batang Kambong dengan ELISA reader ...........
47
Lampiran 5. Perhitungan kepadatan stock Sel HeLa .................................
48
Lampiran 6.Perhitungan prosen sel hidup akibat pemberian
fraksi semipolar ekstrak metanol kulit batang Kambong........
49
Lampiran 7. Tabel probit.............................................................................
52
Lampiran 8. Tanaman Kambong.................................................................
53
Lampiran 9. Surat Keterangan Determinasi................................................
54
xiii
INTI SARI
Kanker adalah penyakit terbesar pada abad ini. Di dunia penyakit kanker
menempati urutan kedua sebagai penyebab kematian. Banyak penelitian yang
dilakukan untuk mencari dan mengembankan obat kanker terutama dari tanaman.
Salah satunya adalah tanaman yang berasal dari familli Dipterocarpaceae yang
telah terbukti memiliki efek anti kanker. Tujuan penelitian ini adalah untuk
mengetahui efek sitotoksik dan nilai IC50 dari fraksi semipolar ekstrak metanol
kulit batang Kambong ( Dipterocarpus vallidus Blume.) terhadap sel HeLa dan
untuk mengetahui kandungan senyawa kimianya dengan analisis KLT.
Ekstraksi kulit batang Kambong dilakukan dengan cara maserasi,
menggunakan pelarut metanol. Kemudian dari ekstrak yang dihasilkan
difraksinasi dengan pelarut yang bertingkat yaitu n-heksana : etilasetat (8:2),
(3:7), (2:8), (1:9) dan etilasetat 100%. Pelarut ini didapatkan dari hasil KLT yang
dilakukan pada ekstrak metanol dengan fase diam silika GF254. Untuk
menunjukkan banyaknya sel hidup digunakan metode MTT assay dengan seri
konsentrasi 250 Pg/mL, 125 Pg/mL, 62,5 Pg/mL, 31,25 Pg/mL, 15,625 Pg/mL,
sedangkan untuk mengetahui kandungan kimianya digunakan pereaksi semprot
uap ammonia, Lieberman Burchard, Dragendorff, UV254 nm, UV366 nm.
Hasil yang didapatkan yaitu IC50 sebesar 55,28 Pg/mL, sedangkan dari hasil
KLT menunjukkan bahwa fraksi semipolar ekstrak metanol kulit batang Kambong
mempunyai kandungan kimia senyawa flavonoid.
Kata kunci : Dipterocarpus vallidus Blume., sel HeLa, MTT assay, IC50, fraksi
semipolar.
xiv