DAFTAR ISI UJI SITOTOKSIK FRAKSI POLAR EKSTRAK METANOL KULIT BATANG KAMBONG (Dipterocarpus validus Blume) TERHADAP SEL HeLa DAN PROFIL KROMATOGRAFI LAPIS TIPISNYA.
DAFTAR ISI
Halaman
HALAMAN JUDUL ........................................................................................
ii
HALAMAN PENGESAHAN ………………………………………………..
iii
HALAMAN MOTTO ………………………………………………………….
iv
HALAMAN PERSEMBAHAN ……………………………………………...
v
HALAMAN DEKLARASI …………………………………………………..
vi
KATA PENGANTAR …………...…………………………………………...
vii
DAFTAR ISI ….................................................................................................
xi
DAFTAR TABEL …..………………………………………………………...
xiv
DAFTAR GAMBAR …………………………………………………………
xv
DAFTAR LAMPIRAN …..…………………………………………………..
xvi
DAFTAR SINGKATAN …...………………………………………………...
xvii
INTISARI …………...………………………………………………………...
xviii
BAB I. PENDAHULUAN
A. Latar Belakang Masalah ……..…………………………………...
1
B. Perumusan Masalah ……..………………………………………..
3
C. Tujuan Penelitian …………………………………..……………..
4
D. Tinjauan Pustaka ……...………………………………………….
4
1. Kanker ……..…………………………………………………..
4
2. Kanker Leher Rahim ……..……………………………………
10
3. Sel HeLa ……..………………………………………………...
11
4. Ekstraksi ……..………………………………………………...
12
5. Kromatografi Cair Vakum (KCV) …..………………………..
12
6. Kromatografi Lapis Tipis (KLT) ……...……………………..
13
7.Tumbuhan Kambong ………..…………………………………
14
8. Uji Sitotoksik …………………………………………………..
16
E. Keterangan Empiris ……...………………………………............
19
BAB II. METODE PENELITIAN
A. Kategori Penelitian ……..………………………………………...
20
B. Variabel Penelitian ……...………………………………………..
20
C. Bahan dan Alat …………………………………………………...
20
1. Bahan yang digunakan ……...…………………………............
20
2. Alat yang digunakan ……...........................................................
21
D. Jalannya Penelitian ……...………………………………………..
22
1. Determinasi tanaman dan pengumpulan bahan ……..…………
22
2. Pembuatan ekstrak ……...……………………………………...
23
3. Pembuatan Fraksi ……...………………………………………
23
4. Pembuatan media kultur ……..………………………………...
26
5. Preparasi sel ………..…………………………………………..
26
6. Panen sel ……...………………………………………………..
26
7. Pembuatan larutan uji ……...…………………………………..
27
8. Uji sitotoksik dengan metode MTT ………...…………............
28
9. Kromatografi Lapis Tipis (KLT) ……..………………………..
29
10. Skema Kerja Penelitian ………..……………………………...
30
BAB III. HASIL DAN PEMBAHASAN
A. Determinasi tanaman Dipterocarpus validus Blume …………….
31
B. Ekstraksi ………………………………………………………….
31
C. Fraksinasi ………..………………………………………………..
32
D.Uji sitotoksik dengan metode MTT ……...………………………..
34
E. Analisis Kromatografi Lapis Tipis ……………………………….
41
BAB IV. KESIMPULAN DAN SARAN
A. Kesimpulan ……...………………………………………………..
45
B. Saran ……..……………………………………………….............
45
DAFTAR PUSTAKA ………………………………………………………...
46
LAMPIRAN ……...…………………………………………………………...
49
DAFTAR TABEL
Halaman
Tabel 1. Hasil Fraksinasi Ekstrak Metanol Kulit Batang Dipterocarpus validus
Blume …………………………………………………………………
34
Tabel 2. Hasil Uji Pelarut DMSO Terhadap Sel HeLa .......................................
35
Tabel 3. Hasil Uji Sitotoksik Fraksi Polar Ekstrak Metanol Kulit Batang
Dipterocarpus validus Blume Terhadap Sel HeLa Dengan Metode
MTT ………………………….……………………………………….
37
Tabel 4. Persamaan Kurva Probit Persen Sel Hidup vs Berbagai Konsentrasi
Sampel Dengan Metode MTT ………………………………………...
39
Tabel 5. Hasil KLT Fraksi Polar Ekstrak Metanol Kulit Batang Dipterocarpus
validus Blume Dengan Deteksi Sinar UV254 …………………………
43
Tabel 6. Hasil KLT Fraksi Polar Ekstrak Metanol Kulit Batang Dipterocarpus
validus Blume Dengan Deteksi Sinar UV366 …………………………
43
Tabel 7. Hasil KLT Fraksi Polar Ekstrak Metanol Kulit Batang Dipterocarpus
43
validus Blume Dengan Pereaksi Uap Ammonia ……………………...
DAFTAR GAMBAR
Halaman
Gambar 1.
Skema Pembelahan Sel Pada Sel Kanker ………………
7
Gambar 2.
Kerangka Dasar Flavonoid………………………………
15
Gambar 3.
Reaksi Reduksi MTT Menjadi Formazan……………….
18
Gambar 4.
Skema Kerja Penelitian …………………………………
30
Gambar 5.
Profil Kromatografi Lapis Tipis Hasil KCV dengan Fase
33
Gerak Kloroform : Metanol (8,5 : 1,5) ………………….
Gambar 6.
Kristal Formazan ………………………………………..
36
Gambar 7.
Morfologi Sel HeLa …………………………………….
37
Gambar 8.
Profil Efek Sitotoksik Fraksi Polar Ekstrak Metanol
38
Kulit Batang Dipterocarpus validus Blume Terhadap
Sel HeLa ………………………………………………...
Gambar 9.
Grafik Log Konsentrasi vs Nilai Probit ………………...
39
Gambar 10. Kromatogram dari Fraksi Polar Ekstrak Metanol Kulit
42
Batang Dipterocarpus validus Blume …………………..
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
Lampiran 1.
Surat Keterangan Determinasi ……………………………………
50
Lampiran 2.
Surat Keterangan Bebas Laboratorium ………………...................
51
Lampiran 3.
Pembuatan Larutan Stok Dan Perhitungan Konsentrasi .................
52
Lampiran 4.
Perhitungan Stok Sel HeLa .............................................................
53
Lampiran 5.
Data Uji Sitotoksik Fraksi Polar Ekstrak Metanol Kulit Batang 54
Dipterocarpus validus Blume Terhadap Sel HeLa………………..
Lampiran 6.
Perhitungan % Sel Hidup …………………………………...
Lampiran 7.
Data Log Konsentrasi Dengan Nilai Probit Akibat Pemberian 56
Fraksi
Polar
Ekstrak
Metanol
Kulit
Batang
55
Kambong
(Dipterocarpus validus Blume)…………………………………...
Lampiran 8.
Tabel Probit……………………………………………………….. 57
Lampiran 9.
Perhitungan Nilai Probit ………………………………………….. 58
Lampiran 10. Perhitungan IC50 …………………………………………………..
59
Lampiran 11. Tumbuhan Kambong (Dipterocarpus validus Blume)…………....
60
Lampiran 12. Alat Kromatografi Cair Vakum (KCV)…………………………...
61
Lampiran 13. Gambar Fraksi Hasil KCV………………………………………...
62
Lampiran 14. ELISA Reader …………………………………………………..... 63
Lampiran 15. Gambar Plate 96 Sumuran ………………………………………..
64
DAFTAR SINGKATAN
DMSO
: Dimetil Sulfoksid
DNA
: Deoxyribo Nucleic Acid
ELISA
: Enzim Linked Immuno Sorbent Assay
FBS
: Fetal Bovine Serum
G1
: Gap phase-1
G2
: Gap phase-2
HPV
: Human Papilloma Virus
IC
: Inhibitor Concentration
MTT
: 3-(4,5-dimethylthiazol-2yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide)
PBS
: Phospat Buffer Saline
PRB
: Protein Retino Blastoma
Rf
: Retardation factor
RPMI
: Rosewell Park Memorial Institute
SDS
: Sodium Dodecyl Sulphat
VS
: Versus
INTISARI
Kanker leher rahim merupakan jenis kanker yang menduduki urutan pertama
dari seluruh angka kejadian kanker di Indonesia. Banyak penelitian dilakukan untuk
memperoleh senyawa-senyawa baru yang memiliki aktivitas antikanker, terutama
yang berasal dari tumbuhan. Salah satu tumbuhan yang telah diteliti adalah famili
Dipterocarpaceae. Senyawa hasil isolasi dari kulit batang Dipterocarpus hasselti
blume (Dipterocarpaceae) memiliki efek sitotoksik terhadap sel murin leukemia P388. Penelitian ini dilakukan untuk memisahkan fraksi polar dari ekstrak metanol
kulit batang kambong (Dipterocarpus validus Blume), menentukan harga IC50, dan
mengidentifikasi kandungan kimia dalam fraksi polar ekstrak metanol kulit batang
kambong.
Penyarian dilakukan dengan metode maserasi (3 x @ 24 jam) menggunakan
pelarut metanol kemudian dilanjutkan fraksinasi untuk mendapatkan fraksi polar
dengan metode Kromatografi Cair Vakum (KCV) menggunakan pelarut n-heksana :
etilasetat (2:8). Pengaruh pemberian fraksi polar ekstrak metanol kulit batang
kambong terhadap sel HeLa diamati dengan potensi penghambatannya (IC50). IC50
dihitung menggunakan analisis probit. Uji sitotoksik dilakukan dengan metode MTT
dengan lima seri konsentrasi 50; 25; 12,5; 6,25; dan 3,125 µg/ml. Absorbansi dibaca
pada ELISA reader. Hasil absorbansi menggambarkan banyaknya sel hidup. Fraksi
polar ekstrak metanol kulit batang kambong dianalisis kualitatif dengan Kromatografi
Lapis Tipis (KLT), fase diam yang digunakan adalah silika GF254 dan fase gerak
n-heksana : etilasetat (2:8)v/v dengan pereaksi uap ammonia untuk identifikasi
flavonoid dan deteksi pada Sinar UV254 dan Sinar UV366.
Hasil penelitian terhadap sel HeLa didapatkan harga IC50 sebesar 89,36 µg/ml.
Hasil analisis KLT menunjukkan adanya senyawa fenolik golongan flavonoid dalam
fraksi polar ekstrak metanol kulit batang kambong.
Kata kunci: Kulit Batang Kambong (Dipterocarpus validus Blume), Fraksi polar, Sel
HeLa, Sitotoksik.
Halaman
HALAMAN JUDUL ........................................................................................
ii
HALAMAN PENGESAHAN ………………………………………………..
iii
HALAMAN MOTTO ………………………………………………………….
iv
HALAMAN PERSEMBAHAN ……………………………………………...
v
HALAMAN DEKLARASI …………………………………………………..
vi
KATA PENGANTAR …………...…………………………………………...
vii
DAFTAR ISI ….................................................................................................
xi
DAFTAR TABEL …..………………………………………………………...
xiv
DAFTAR GAMBAR …………………………………………………………
xv
DAFTAR LAMPIRAN …..…………………………………………………..
xvi
DAFTAR SINGKATAN …...………………………………………………...
xvii
INTISARI …………...………………………………………………………...
xviii
BAB I. PENDAHULUAN
A. Latar Belakang Masalah ……..…………………………………...
1
B. Perumusan Masalah ……..………………………………………..
3
C. Tujuan Penelitian …………………………………..……………..
4
D. Tinjauan Pustaka ……...………………………………………….
4
1. Kanker ……..…………………………………………………..
4
2. Kanker Leher Rahim ……..……………………………………
10
3. Sel HeLa ……..………………………………………………...
11
4. Ekstraksi ……..………………………………………………...
12
5. Kromatografi Cair Vakum (KCV) …..………………………..
12
6. Kromatografi Lapis Tipis (KLT) ……...……………………..
13
7.Tumbuhan Kambong ………..…………………………………
14
8. Uji Sitotoksik …………………………………………………..
16
E. Keterangan Empiris ……...………………………………............
19
BAB II. METODE PENELITIAN
A. Kategori Penelitian ……..………………………………………...
20
B. Variabel Penelitian ……...………………………………………..
20
C. Bahan dan Alat …………………………………………………...
20
1. Bahan yang digunakan ……...…………………………............
20
2. Alat yang digunakan ……...........................................................
21
D. Jalannya Penelitian ……...………………………………………..
22
1. Determinasi tanaman dan pengumpulan bahan ……..…………
22
2. Pembuatan ekstrak ……...……………………………………...
23
3. Pembuatan Fraksi ……...………………………………………
23
4. Pembuatan media kultur ……..………………………………...
26
5. Preparasi sel ………..…………………………………………..
26
6. Panen sel ……...………………………………………………..
26
7. Pembuatan larutan uji ……...…………………………………..
27
8. Uji sitotoksik dengan metode MTT ………...…………............
28
9. Kromatografi Lapis Tipis (KLT) ……..………………………..
29
10. Skema Kerja Penelitian ………..……………………………...
30
BAB III. HASIL DAN PEMBAHASAN
A. Determinasi tanaman Dipterocarpus validus Blume …………….
31
B. Ekstraksi ………………………………………………………….
31
C. Fraksinasi ………..………………………………………………..
32
D.Uji sitotoksik dengan metode MTT ……...………………………..
34
E. Analisis Kromatografi Lapis Tipis ……………………………….
41
BAB IV. KESIMPULAN DAN SARAN
A. Kesimpulan ……...………………………………………………..
45
B. Saran ……..……………………………………………….............
45
DAFTAR PUSTAKA ………………………………………………………...
46
LAMPIRAN ……...…………………………………………………………...
49
DAFTAR TABEL
Halaman
Tabel 1. Hasil Fraksinasi Ekstrak Metanol Kulit Batang Dipterocarpus validus
Blume …………………………………………………………………
34
Tabel 2. Hasil Uji Pelarut DMSO Terhadap Sel HeLa .......................................
35
Tabel 3. Hasil Uji Sitotoksik Fraksi Polar Ekstrak Metanol Kulit Batang
Dipterocarpus validus Blume Terhadap Sel HeLa Dengan Metode
MTT ………………………….……………………………………….
37
Tabel 4. Persamaan Kurva Probit Persen Sel Hidup vs Berbagai Konsentrasi
Sampel Dengan Metode MTT ………………………………………...
39
Tabel 5. Hasil KLT Fraksi Polar Ekstrak Metanol Kulit Batang Dipterocarpus
validus Blume Dengan Deteksi Sinar UV254 …………………………
43
Tabel 6. Hasil KLT Fraksi Polar Ekstrak Metanol Kulit Batang Dipterocarpus
validus Blume Dengan Deteksi Sinar UV366 …………………………
43
Tabel 7. Hasil KLT Fraksi Polar Ekstrak Metanol Kulit Batang Dipterocarpus
43
validus Blume Dengan Pereaksi Uap Ammonia ……………………...
DAFTAR GAMBAR
Halaman
Gambar 1.
Skema Pembelahan Sel Pada Sel Kanker ………………
7
Gambar 2.
Kerangka Dasar Flavonoid………………………………
15
Gambar 3.
Reaksi Reduksi MTT Menjadi Formazan……………….
18
Gambar 4.
Skema Kerja Penelitian …………………………………
30
Gambar 5.
Profil Kromatografi Lapis Tipis Hasil KCV dengan Fase
33
Gerak Kloroform : Metanol (8,5 : 1,5) ………………….
Gambar 6.
Kristal Formazan ………………………………………..
36
Gambar 7.
Morfologi Sel HeLa …………………………………….
37
Gambar 8.
Profil Efek Sitotoksik Fraksi Polar Ekstrak Metanol
38
Kulit Batang Dipterocarpus validus Blume Terhadap
Sel HeLa ………………………………………………...
Gambar 9.
Grafik Log Konsentrasi vs Nilai Probit ………………...
39
Gambar 10. Kromatogram dari Fraksi Polar Ekstrak Metanol Kulit
42
Batang Dipterocarpus validus Blume …………………..
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
Lampiran 1.
Surat Keterangan Determinasi ……………………………………
50
Lampiran 2.
Surat Keterangan Bebas Laboratorium ………………...................
51
Lampiran 3.
Pembuatan Larutan Stok Dan Perhitungan Konsentrasi .................
52
Lampiran 4.
Perhitungan Stok Sel HeLa .............................................................
53
Lampiran 5.
Data Uji Sitotoksik Fraksi Polar Ekstrak Metanol Kulit Batang 54
Dipterocarpus validus Blume Terhadap Sel HeLa………………..
Lampiran 6.
Perhitungan % Sel Hidup …………………………………...
Lampiran 7.
Data Log Konsentrasi Dengan Nilai Probit Akibat Pemberian 56
Fraksi
Polar
Ekstrak
Metanol
Kulit
Batang
55
Kambong
(Dipterocarpus validus Blume)…………………………………...
Lampiran 8.
Tabel Probit……………………………………………………….. 57
Lampiran 9.
Perhitungan Nilai Probit ………………………………………….. 58
Lampiran 10. Perhitungan IC50 …………………………………………………..
59
Lampiran 11. Tumbuhan Kambong (Dipterocarpus validus Blume)…………....
60
Lampiran 12. Alat Kromatografi Cair Vakum (KCV)…………………………...
61
Lampiran 13. Gambar Fraksi Hasil KCV………………………………………...
62
Lampiran 14. ELISA Reader …………………………………………………..... 63
Lampiran 15. Gambar Plate 96 Sumuran ………………………………………..
64
DAFTAR SINGKATAN
DMSO
: Dimetil Sulfoksid
DNA
: Deoxyribo Nucleic Acid
ELISA
: Enzim Linked Immuno Sorbent Assay
FBS
: Fetal Bovine Serum
G1
: Gap phase-1
G2
: Gap phase-2
HPV
: Human Papilloma Virus
IC
: Inhibitor Concentration
MTT
: 3-(4,5-dimethylthiazol-2yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide)
PBS
: Phospat Buffer Saline
PRB
: Protein Retino Blastoma
Rf
: Retardation factor
RPMI
: Rosewell Park Memorial Institute
SDS
: Sodium Dodecyl Sulphat
VS
: Versus
INTISARI
Kanker leher rahim merupakan jenis kanker yang menduduki urutan pertama
dari seluruh angka kejadian kanker di Indonesia. Banyak penelitian dilakukan untuk
memperoleh senyawa-senyawa baru yang memiliki aktivitas antikanker, terutama
yang berasal dari tumbuhan. Salah satu tumbuhan yang telah diteliti adalah famili
Dipterocarpaceae. Senyawa hasil isolasi dari kulit batang Dipterocarpus hasselti
blume (Dipterocarpaceae) memiliki efek sitotoksik terhadap sel murin leukemia P388. Penelitian ini dilakukan untuk memisahkan fraksi polar dari ekstrak metanol
kulit batang kambong (Dipterocarpus validus Blume), menentukan harga IC50, dan
mengidentifikasi kandungan kimia dalam fraksi polar ekstrak metanol kulit batang
kambong.
Penyarian dilakukan dengan metode maserasi (3 x @ 24 jam) menggunakan
pelarut metanol kemudian dilanjutkan fraksinasi untuk mendapatkan fraksi polar
dengan metode Kromatografi Cair Vakum (KCV) menggunakan pelarut n-heksana :
etilasetat (2:8). Pengaruh pemberian fraksi polar ekstrak metanol kulit batang
kambong terhadap sel HeLa diamati dengan potensi penghambatannya (IC50). IC50
dihitung menggunakan analisis probit. Uji sitotoksik dilakukan dengan metode MTT
dengan lima seri konsentrasi 50; 25; 12,5; 6,25; dan 3,125 µg/ml. Absorbansi dibaca
pada ELISA reader. Hasil absorbansi menggambarkan banyaknya sel hidup. Fraksi
polar ekstrak metanol kulit batang kambong dianalisis kualitatif dengan Kromatografi
Lapis Tipis (KLT), fase diam yang digunakan adalah silika GF254 dan fase gerak
n-heksana : etilasetat (2:8)v/v dengan pereaksi uap ammonia untuk identifikasi
flavonoid dan deteksi pada Sinar UV254 dan Sinar UV366.
Hasil penelitian terhadap sel HeLa didapatkan harga IC50 sebesar 89,36 µg/ml.
Hasil analisis KLT menunjukkan adanya senyawa fenolik golongan flavonoid dalam
fraksi polar ekstrak metanol kulit batang kambong.
Kata kunci: Kulit Batang Kambong (Dipterocarpus validus Blume), Fraksi polar, Sel
HeLa, Sitotoksik.