UJI SITOTOKSIK EKSTRAK ETANOL 70% BUAH MERICA HITAM (Piper nigrum L.) UJI SITOTOKSIK EKSTRAK ETANOL 70% BUAH MERICA HITAM (Piper nigrum L.) TERHADAP SEL MYELOMA.
UJI SITOTOKSIK EKSTRAK ETANOL 70%
BUAH MERICA HITAM (Piper nigrum L.)
TERHADAP SEL MYELOMA
SKRIPSI
Oleh:
Oleh:
DIAN PRARIANTI
K 100030107
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA
SURAKARTA
2007
UJI SITOTOKSIK EKSTRAK ETANOL 70%
BUAH MERICA HITAM (Piper nigrum L.)
TERHADAP SEL MYELOMA
SKRIPSI
Diajukan untuk memenuhi salah satu syarat mencapai Derajat
Sarjana Farmasi (S.Farm) pada Fakultas Farmasi
Universitas Muhammadiyah Surakarta
Di Surakarta
Oleh:
DIAN PRARIANTI
K 100030107
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA
SURAKARTA
2007
ii
PENGESAHAN SKRIPSI
Berjudul :
UJI SITOTOKSIK EKSTRAK ETANOL 70%
BUAH MERICA HITAM (Piper ningrum L.)
TERHADAP SEL MYELOMA
Oleh :
DIAN PRARIANTI
K100030107
Dipertahankan dihadapan Panitia Ujian Skripsi
Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta
Pada Tanggal : 22 Januari 2007
Mengetahui,
Fakultas Farmasi
Universitas Muhammadiyah Surakarta
Dekan,
Dra. Nurul Mutmainah, M.Si., Apt
Pembimbing Utama
Maryati, M.Si., Apt
Penguji :
1. dr. E.M. Sutrisna, M.Kes
_______________
2. Dedi Hanwar, M.Si, Apt
3. Maryati, M.Si, Apt
______________
_______________
iii
MOTTO
Sesungguhnya sesudah kesulitan itu ada kemudahan. Maka apabila kamu
telah selesai (dari suatu urusan), kerjakanlah dengan sungguh-sungguh
(urusan) yang lain, dan hanya kepada Tuhanmulah hendaknya kamu
berharap (Q.S. Alam Nasyrah 6-8)
Allah akan meninggikan orang-orang beriman diantaramu dan orang-orang yang
diberi ilmu pengetahuan beberapa derajat (Q.S. Al Mujaadilah 11)
Dengan tetap mematuhi hal-hal yang tak ditakdirkan untuk untuk kulakukan, aku
kini mengerti bahwa kekuatanku adalah hasil kegagalanku, dan gayaku langsung
berkaitan dengan keterbatasanku (Billi Joel)
PERSEMBAHAN
Karya terindah ini kupersembahkan untuk :
[ Ibu dan Bapak tercinta sebagai ungkapan tulus
kasihku, rasa hormat dan dharma baktiku atas
curahan kasih sayang, cinta, pengorbanan,
kesabaran dan untaian doa yang selalu menyertai
disetiap langkahku.
[ Adik-adikku Dewi dan Priyo atas kebersamaan
kalian selama ini, rajinlah belajar and raihlah
sukses.
[ Sahabat-sahabat sebagai tempat berbagi dalam
suka dan duka serta yang selalu memberi warna
dalam hari-hariku.
[ Almamater UMS.
iv
DEKLARASI
Saya disini menyatakan bahwa penelitian/ karya ilmiah/ skripsi ini adalah
hasil pekerjaan saya sendiri dan sepanjang pengetahuan saya tidak berisi materi
yang dipublikasikan atau ditulis orang atau telah dipergunakan dan diterima
sebagai persyaratan penyelesaian studi pada Universitas yang lain, kecuali pada
bagian-bagian tertentu yang telah dinyatakan dalam teks.
Dan apabila penelitian/ karya ilmiah/ skripsi ini merupakan jiplakan dari
skripsi orang lain, maka saya siap menerima sanksi baik akademis maupun
hukum.
Surakarta,
Januari 2007
Peneliti,
DIAN PRARIANTI
v
KATA PENGANTAR
Assalamu’alaikum Wr. Wb
Alhamdulillah, puji syukur kehadirat Allah SWT atas segala rahmat, taufiq
dan hidayah-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan penelitian dan penulisan
skripsi dengan judul “Uji Sitotoksik Ekstrak Etanol 70 % Buah Merica Hitam
(Piper nigrum L.) Terhadap Sel Myeloma”.
Skripsi ini diajukan sebagai salah satu syarat untuk mencapai gelar Sarjana
Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta. Penulis menyadari bahwa dalam
penyusunan skripsi ini masih jauh dari kesempurnaan yang disebabkan oleh
keterbatasan kemampuan dan pengetahuan yang penulis miliki.
Dalam pelaksanaan penelitian maupun penyusunan skripsi ini penulis
banyak memperoleh bantuan dan dukungan dari berbagai pihak. Oleh karena itu
dalam kesempatan ini, biarkan penulis mengucapkan terima kasih pada orangorang hebat yang membantu penulis mewujudkan suatu impian. Penulis ucapkan
terima kasih kepada :
1. Dra. Nurul Mutmainah, M.Si., Apt., selaku dekan Fakultas Farmasi
Universitas Muhammadiyah Surakarta.
2. Maryati, M.Si., Apt., selaku pembimbing utama yang telah memberikan
pengarahan, bimbingan dan saran hingga terselesainya skripsi ini.
3. dr. E.M. Sutrisna, M.Kes., selaku penguji I dan Dedi Hanwar, M.Si., Apt.,
selaku penguji II yang telah meluangkan waktu, tenaga dan pikiran untuk
menguji skripsi ini.
vi
4. Azis Saifudin, S.F., Apt., selaku pembimbing akademik yang telah memberi
bimbingan dan motivasi selama studi.
5. Bapak dan ibu dosen Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta
yang telah memberikan ilmunya selama penulis menempuh studi dan staf
Laboratorium Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta.
6. Mbak Rumbi selaku teknisi dan staf karyawan Laboratorium Parasitologi
Fakultas Kedokteran Universitas Gadjah Mada yang telah membantu penulis
selama pengujian sitotoksik.
7. Ibu dan bapak tercinta, sembah baktiku dengan doa, cinta dan kasih sayang
yang tulus, dukungan dan semangat yang telah kalian berikan.
8. Adikku Dewi dan Priyo yang selalu memberikan semangat dan dukungan.
9. Teman seperjuangan mbak Reni, Novi, Tini dan Laila atas kerjasamanya saat
penelitian.
10. Desti, Hesti dan Anik terima kasih atas persahabatan yang tulus.
11. Teman-teman di kost warna-warni yang terus ceria and semangat Nie-ya,
Dinar, Antin, mbak Rena, mbak Windi, mbak Ayu, mbak Desi, mbak Doti,
Santi, Suci, Nur, Rini dan Vivin.
12. Teman-teman angkatan 2003 “Thanks for all”.
13. Semua pihsk yang telah membantu terselesainya skripsi ini yang tidak kami
sebutkan satu persatu.
Semoga segala bantuan, bimbingan baik moril maupun spiritual yang telah
diberikan dalam menyelesaikan skripsi ini akan mendapatkan balasan dari Allah
vii
SWT. Selanjutnya penulis mengharapkan saran dan kritik yang bersifat
membangun guna memperbaiki dan menyempurnakan tulisan ini.
Wassalamu’alaikum Wr.Wb
Surakarta, Januari 2007
Penulis
viii
DAFTAR ISI
Halaman
HALAMAN JUDUL...................................................................................
i
HALAMAN PENGESAHAN.....................................................................
ii
HALAMAN MOTTO .................................................................................
iii
HALAMAN PERSEMBAHAN .................................................................
iii
HALAMAN DEKLARASI.........................................................................
v
KATA PENGANTAR ................................................................................
vi
DAFTAR ISI...............................................................................................
ix
DAFTAR TABEL.......................................................................................
xii
DAFTAR GAMBAR ..................................................................................
xiii
DAFTAR LAMPIRAN...............................................................................
xiv
DAFTAR SINGKATAN ............................................................................
xv
INTISARI....................................................................................................
xvi
BAB I.
PENDAHULUAN .......................................................................
1
A. Latar Belakang.......................................................................
1
B. Perumusan Masalah...............................................................
3
C. Tinjauan Pustaka ...................................................................
3
1. Tanaman Merica Hitam...................................................
3
a. Sistematika Tanaman.................................................
3
b. Nama Daerah .............................................................
4
c. Morfologi Tanaman...................................................
4
ix
d. Ekologi Tanaman.......................................................
4
e. Kandungan Kimia Tanaman......................................
5
f. Khasiat Tanaman .......................................................
5
2. Ekstraksi ..........................................................................
5
3. Kanker .............................................................................
6
a. Definisi Kanker .........................................................
6
b. Sifat Kanker...............................................................
7
c. Siklus Kanker ............................................................
9
d. Jenis Kanker ..............................................................
11
e. Gejala Kanker ............................................................
11
f. Pencegahan dan Pengobatan Kanker.........................
12
4. Sel Myeloma....................................................................
13
5. Uji Sitotoksik...................................................................
15
6. Kromatografi Lapis Tipis ................................................
16
a. Fase Diam..................................................................
16
b. Fase Gerak .................................................................
17
c. Parameter ...................................................................
18
D. Hipotesis ................................................................................
18
BAB II. METODE PENELITIAN ............................................................
19
A. Kategori Penelitian ................................................................
19
B. Bahan dan Alat ......................................................................
19
C. Jalannya Penelitian ................................................................
20
x
1. Determinasi Tanaman......................................................
20
2. Pengambilan Bahan .........................................................
20
3. Pembuatan Serbuk ...........................................................
21
4. Pembuatan Ekstrak ..........................................................
21
5. Uji Sitotoksik...................................................................
22
a. Sterilisasi Alat ...........................................................
22
b. Pembuatan Media Kultur...........................................
22
c. Preparasi Sel Myeloma..............................................
22
1) Propagasi Sel .......................................................
22
2) Pemanenan Sel Myeloma ....................................
23
d. Pembuatan Larutan Uji..............................................
23
e. Uji Sitotoksik secara MTT assay ..............................
23
6. Uji Kualitatif Kromatografi Lapis Tipis..........................
25
D. Cara Analisis .........................................................................
26
1. Uji Sitotoksik...................................................................
26
2. Uji Kualitatif Kromatografi Lapis Tipis..........................
26
BAB III. HASIL DAN PEMBAHASAN ...................................................
28
A. Determinasi Tanaman ...........................................................
28
B. Pembuatan Serbuk dan Ekstrak .............................................
28
1. Pembuatan Serbuk ...........................................................
28
2. Pembuatan Ekstrak ..........................................................
29
C. Uji Sitotoksik.........................................................................
30
D. Kromatografi Lapis Tipis ......................................................
36
xi
BAB IV. KESIMPULAN DAN SARAN ...................................................
39
A. Kesimpulan............................................................................
39
B. Saran ......................................................................................
39
DAFTAR PUSTAKA ................................................................................
40
LAMPIRAN................................................................................................
43
xii
DAFTAR TABEL
Halaman
Tabel 1.
Pengaruh Berbagai Konsentrasi DMSO terhadap % Sel
Myeloma Hidup........................................................................
Tabel 2.
Tabel 3.
33
Pengaruh Berbagai Konsentrasi Ekstrak Etanol 70 % Buah
Merica Hitam terhadap % Sel Hidup Sel Myeloma ................
34
Kromatogram Ekstrak Etanol 70 % Buah Merica Hitam.........
37
xiii
DAFTAR GAMBAR
Halaman
Gambar 1.
Siklus Pertumbuhan Biologis Sel..........................................
11
Gambar 2.
Skema Pembuatan Ekstrak Etanol 70% Buah Merica Hitam
21
Gambar 3.
Skema Kerja Uji Sitotoksik
Ekstrak Etanol 70% Buah
Merica Hitam terhadap Sel Myeloma ...................................
Gambar 4.
Skema Kerja Penelitian Uji Sitotoksik Ekstrak Etanol 70%
Buah Merica Hitam terhadap Sel Myeloma ..........................
Gambar 5.
25
27
Mekanisme Reduksi MTT oleh Enzim Sel Hidup Sel
Myeloma................................................................................
32
Gambar 6.
Foto Sel Myeloma .................................................................
32
Gambar 7.
Pengaruh Konsentrasi DMSO terhadap Prosentase Hidup
Sel Myeloma .........................................................................
Gambar 8.
33
Grafik Hubungan Konsentrasi Ekstrak Etanol 70% Buah
Merica Hitam Versus % Sel Hidup Sel Myeloma.................
34
Grafik Hubungan Log Konsentrasi Versus Probit ................
35
Gambar 10. Kromatogram Ekstrak Etanol 70% Buah Merica Hitam.......
37
Gambar 9.
xiv
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
Lampiran 1. Hasil Determinasi Merica Hitam (Piper nigrum L.) .............
44
Lampiran 2. Foto Tanaman Merica Hitam (Piper nigrum L.) ...................
48
Lampiran 3. Foto Buah Merica Hitam (Piper nigrum L.)..........................
49
Lampiran 4. Foto Mikroplate 96 Sumursn untuk Uji Sitotoksik ...............
50
Lampiran 5. Foto ELISA reader................................................................
51
Lampiran 6. Perhitungan Hasil Rendemen ................................................
52
Lampiran 7. Perhitungan Seri Konsentrasi ................................................
52
Lampiran 8. Perhitungan Prosen Sel Hidup...............................................
53
Lampiran 9. Tabel Probit ...........................................................................
58
Lampiran 10. Surat Pemesanan Bahan di BPTO Tawangmangu ...............
59
Lampitan 11. Surat Bebas Laboratorium UGM .........................................
60
xv
DAFTAR SINGKATAN
DMSO
: Dimetil Sulfoksida
DNA
: Deoxyribo Nucleic Acid
ELISA
: Enzim-Linked Immuno- Sorbent Assay
FBS
: Fetal Bovine Serum
IC50
: Inhibitory Concentration 50
KLT
: Kromatografi Lapis Tipis
MTT
: (3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-dipheniltetrazolium bromide)
PBS
: Phosphate-Buffer Saline
Pen-Strep
: Penisilin Streptomisin
Rf
: Retention factor
RNA
: Ribo Nucleic Acid
RPMI
: Roserwell Park Memorial institute
SDS
: Sodium Dodecyl Sulphate
WHO
: World Health Organization
xvi
UJI SITOTOKSIK EKSTRAK ETANOL 70% BUAH MERICA HITAM
(Piper nigrum L.) TERHADAP SEL MYELOMA
INTISARI
Selama ini terapi kanker dengan kemoterapi belum memperoleh hasil yang
memuaskan sehingga perlu dicari alternatif pengobatannya. Salah satu cara adalah
dengan menggunakan obat-obat dari alam. Salah satu tanaman yang diduga
berkhasiat sebagai antikanker adalah merica hitam (Piper nigrum L.) karena
dalam buah merica hitam terdapat kandungan piperin. Hal ini didasarkan pada
penelitian Sunila dan Kutan yang menunjukkan bahwa piperin dalam ekstrak
alkohol Piper longum mempunyai efek toksik terhadap sel DLA (Dalton’s
Lymphoma Ascites) dan sel EAC (Ehrlich Ascites Carcinoma). Tujuan dilakukan
penelitian ini adalah untuk mengetahui potensi sitotoksik ekstrak etanol 70% buah
merica hitam terhadap sel Myeloma.
Ekstrak etanol 70% buah merica hitam diperoleh dengan cara menyari
buah merica hitam dengan pelarut etanol 70% dengan menggunakan metode
maserasi. Untuk mengetahui potensi sitotoksik ekstrak etanol 70% buah merica
hitam terhadap sel Myeloma, dilakukan uji sitotoksik dengan metode MTT
dengan menggunakan 6 seri konsentrasi yaitu 250 Pg/ml, 125 Pg/ml, 62,5 Pg/ml,
31,25 Pg/ml, 15,63 Pg/ml dan 7,81 Pg/ml. Hasil absorbansi menggambarkan
banyaknya sel hidup. Parameter yang digunakan adalah IC50 (Inhibitory
Concentration 50) yang dihitung dengan analisis probit. Untuk analisis golongan
senyawa yang terkandung dalam buah merica hitam dilakukan dengan
kromatografi lapis tipis (KLT) dengan fase diam silika gel GF254 dan fase gerak
heksana-etil asetat 4:6 v/v. Deteksi dilakukan dengan sinar biasa dan UV 366 nm
dengan pereaksi semprot anisaldehid-H2SO4.
Hasil uji sitotoksik menunjukkan bahwa ekstrak etanol 70% buah merica
hitam memiliki efek sitotoksik terhadap sel Myeloma dengan nilai IC50 sebesar
51,20 Pg/ml. Hasil uji KLT menunjukkan bahwa ekstrak etanol 70% buah merica
hitam mengandung senyawa piperin, hal ini dibuktikan dengan adanya bercak
hijau kuning setelah dideteksi dengan anisaldehid-H2SO4.
Kata kunci : Buah merica hitam (Piper nigrum L.), sel Myeloma, sitotoksik
Mengetahui
Dekan,
Dra. Nurul Mutmainah, M.Si., Apt
Pembimbing Utama
Maryati, M.Si., Apt
xvii
BUAH MERICA HITAM (Piper nigrum L.)
TERHADAP SEL MYELOMA
SKRIPSI
Oleh:
Oleh:
DIAN PRARIANTI
K 100030107
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA
SURAKARTA
2007
UJI SITOTOKSIK EKSTRAK ETANOL 70%
BUAH MERICA HITAM (Piper nigrum L.)
TERHADAP SEL MYELOMA
SKRIPSI
Diajukan untuk memenuhi salah satu syarat mencapai Derajat
Sarjana Farmasi (S.Farm) pada Fakultas Farmasi
Universitas Muhammadiyah Surakarta
Di Surakarta
Oleh:
DIAN PRARIANTI
K 100030107
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA
SURAKARTA
2007
ii
PENGESAHAN SKRIPSI
Berjudul :
UJI SITOTOKSIK EKSTRAK ETANOL 70%
BUAH MERICA HITAM (Piper ningrum L.)
TERHADAP SEL MYELOMA
Oleh :
DIAN PRARIANTI
K100030107
Dipertahankan dihadapan Panitia Ujian Skripsi
Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta
Pada Tanggal : 22 Januari 2007
Mengetahui,
Fakultas Farmasi
Universitas Muhammadiyah Surakarta
Dekan,
Dra. Nurul Mutmainah, M.Si., Apt
Pembimbing Utama
Maryati, M.Si., Apt
Penguji :
1. dr. E.M. Sutrisna, M.Kes
_______________
2. Dedi Hanwar, M.Si, Apt
3. Maryati, M.Si, Apt
______________
_______________
iii
MOTTO
Sesungguhnya sesudah kesulitan itu ada kemudahan. Maka apabila kamu
telah selesai (dari suatu urusan), kerjakanlah dengan sungguh-sungguh
(urusan) yang lain, dan hanya kepada Tuhanmulah hendaknya kamu
berharap (Q.S. Alam Nasyrah 6-8)
Allah akan meninggikan orang-orang beriman diantaramu dan orang-orang yang
diberi ilmu pengetahuan beberapa derajat (Q.S. Al Mujaadilah 11)
Dengan tetap mematuhi hal-hal yang tak ditakdirkan untuk untuk kulakukan, aku
kini mengerti bahwa kekuatanku adalah hasil kegagalanku, dan gayaku langsung
berkaitan dengan keterbatasanku (Billi Joel)
PERSEMBAHAN
Karya terindah ini kupersembahkan untuk :
[ Ibu dan Bapak tercinta sebagai ungkapan tulus
kasihku, rasa hormat dan dharma baktiku atas
curahan kasih sayang, cinta, pengorbanan,
kesabaran dan untaian doa yang selalu menyertai
disetiap langkahku.
[ Adik-adikku Dewi dan Priyo atas kebersamaan
kalian selama ini, rajinlah belajar and raihlah
sukses.
[ Sahabat-sahabat sebagai tempat berbagi dalam
suka dan duka serta yang selalu memberi warna
dalam hari-hariku.
[ Almamater UMS.
iv
DEKLARASI
Saya disini menyatakan bahwa penelitian/ karya ilmiah/ skripsi ini adalah
hasil pekerjaan saya sendiri dan sepanjang pengetahuan saya tidak berisi materi
yang dipublikasikan atau ditulis orang atau telah dipergunakan dan diterima
sebagai persyaratan penyelesaian studi pada Universitas yang lain, kecuali pada
bagian-bagian tertentu yang telah dinyatakan dalam teks.
Dan apabila penelitian/ karya ilmiah/ skripsi ini merupakan jiplakan dari
skripsi orang lain, maka saya siap menerima sanksi baik akademis maupun
hukum.
Surakarta,
Januari 2007
Peneliti,
DIAN PRARIANTI
v
KATA PENGANTAR
Assalamu’alaikum Wr. Wb
Alhamdulillah, puji syukur kehadirat Allah SWT atas segala rahmat, taufiq
dan hidayah-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan penelitian dan penulisan
skripsi dengan judul “Uji Sitotoksik Ekstrak Etanol 70 % Buah Merica Hitam
(Piper nigrum L.) Terhadap Sel Myeloma”.
Skripsi ini diajukan sebagai salah satu syarat untuk mencapai gelar Sarjana
Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta. Penulis menyadari bahwa dalam
penyusunan skripsi ini masih jauh dari kesempurnaan yang disebabkan oleh
keterbatasan kemampuan dan pengetahuan yang penulis miliki.
Dalam pelaksanaan penelitian maupun penyusunan skripsi ini penulis
banyak memperoleh bantuan dan dukungan dari berbagai pihak. Oleh karena itu
dalam kesempatan ini, biarkan penulis mengucapkan terima kasih pada orangorang hebat yang membantu penulis mewujudkan suatu impian. Penulis ucapkan
terima kasih kepada :
1. Dra. Nurul Mutmainah, M.Si., Apt., selaku dekan Fakultas Farmasi
Universitas Muhammadiyah Surakarta.
2. Maryati, M.Si., Apt., selaku pembimbing utama yang telah memberikan
pengarahan, bimbingan dan saran hingga terselesainya skripsi ini.
3. dr. E.M. Sutrisna, M.Kes., selaku penguji I dan Dedi Hanwar, M.Si., Apt.,
selaku penguji II yang telah meluangkan waktu, tenaga dan pikiran untuk
menguji skripsi ini.
vi
4. Azis Saifudin, S.F., Apt., selaku pembimbing akademik yang telah memberi
bimbingan dan motivasi selama studi.
5. Bapak dan ibu dosen Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta
yang telah memberikan ilmunya selama penulis menempuh studi dan staf
Laboratorium Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta.
6. Mbak Rumbi selaku teknisi dan staf karyawan Laboratorium Parasitologi
Fakultas Kedokteran Universitas Gadjah Mada yang telah membantu penulis
selama pengujian sitotoksik.
7. Ibu dan bapak tercinta, sembah baktiku dengan doa, cinta dan kasih sayang
yang tulus, dukungan dan semangat yang telah kalian berikan.
8. Adikku Dewi dan Priyo yang selalu memberikan semangat dan dukungan.
9. Teman seperjuangan mbak Reni, Novi, Tini dan Laila atas kerjasamanya saat
penelitian.
10. Desti, Hesti dan Anik terima kasih atas persahabatan yang tulus.
11. Teman-teman di kost warna-warni yang terus ceria and semangat Nie-ya,
Dinar, Antin, mbak Rena, mbak Windi, mbak Ayu, mbak Desi, mbak Doti,
Santi, Suci, Nur, Rini dan Vivin.
12. Teman-teman angkatan 2003 “Thanks for all”.
13. Semua pihsk yang telah membantu terselesainya skripsi ini yang tidak kami
sebutkan satu persatu.
Semoga segala bantuan, bimbingan baik moril maupun spiritual yang telah
diberikan dalam menyelesaikan skripsi ini akan mendapatkan balasan dari Allah
vii
SWT. Selanjutnya penulis mengharapkan saran dan kritik yang bersifat
membangun guna memperbaiki dan menyempurnakan tulisan ini.
Wassalamu’alaikum Wr.Wb
Surakarta, Januari 2007
Penulis
viii
DAFTAR ISI
Halaman
HALAMAN JUDUL...................................................................................
i
HALAMAN PENGESAHAN.....................................................................
ii
HALAMAN MOTTO .................................................................................
iii
HALAMAN PERSEMBAHAN .................................................................
iii
HALAMAN DEKLARASI.........................................................................
v
KATA PENGANTAR ................................................................................
vi
DAFTAR ISI...............................................................................................
ix
DAFTAR TABEL.......................................................................................
xii
DAFTAR GAMBAR ..................................................................................
xiii
DAFTAR LAMPIRAN...............................................................................
xiv
DAFTAR SINGKATAN ............................................................................
xv
INTISARI....................................................................................................
xvi
BAB I.
PENDAHULUAN .......................................................................
1
A. Latar Belakang.......................................................................
1
B. Perumusan Masalah...............................................................
3
C. Tinjauan Pustaka ...................................................................
3
1. Tanaman Merica Hitam...................................................
3
a. Sistematika Tanaman.................................................
3
b. Nama Daerah .............................................................
4
c. Morfologi Tanaman...................................................
4
ix
d. Ekologi Tanaman.......................................................
4
e. Kandungan Kimia Tanaman......................................
5
f. Khasiat Tanaman .......................................................
5
2. Ekstraksi ..........................................................................
5
3. Kanker .............................................................................
6
a. Definisi Kanker .........................................................
6
b. Sifat Kanker...............................................................
7
c. Siklus Kanker ............................................................
9
d. Jenis Kanker ..............................................................
11
e. Gejala Kanker ............................................................
11
f. Pencegahan dan Pengobatan Kanker.........................
12
4. Sel Myeloma....................................................................
13
5. Uji Sitotoksik...................................................................
15
6. Kromatografi Lapis Tipis ................................................
16
a. Fase Diam..................................................................
16
b. Fase Gerak .................................................................
17
c. Parameter ...................................................................
18
D. Hipotesis ................................................................................
18
BAB II. METODE PENELITIAN ............................................................
19
A. Kategori Penelitian ................................................................
19
B. Bahan dan Alat ......................................................................
19
C. Jalannya Penelitian ................................................................
20
x
1. Determinasi Tanaman......................................................
20
2. Pengambilan Bahan .........................................................
20
3. Pembuatan Serbuk ...........................................................
21
4. Pembuatan Ekstrak ..........................................................
21
5. Uji Sitotoksik...................................................................
22
a. Sterilisasi Alat ...........................................................
22
b. Pembuatan Media Kultur...........................................
22
c. Preparasi Sel Myeloma..............................................
22
1) Propagasi Sel .......................................................
22
2) Pemanenan Sel Myeloma ....................................
23
d. Pembuatan Larutan Uji..............................................
23
e. Uji Sitotoksik secara MTT assay ..............................
23
6. Uji Kualitatif Kromatografi Lapis Tipis..........................
25
D. Cara Analisis .........................................................................
26
1. Uji Sitotoksik...................................................................
26
2. Uji Kualitatif Kromatografi Lapis Tipis..........................
26
BAB III. HASIL DAN PEMBAHASAN ...................................................
28
A. Determinasi Tanaman ...........................................................
28
B. Pembuatan Serbuk dan Ekstrak .............................................
28
1. Pembuatan Serbuk ...........................................................
28
2. Pembuatan Ekstrak ..........................................................
29
C. Uji Sitotoksik.........................................................................
30
D. Kromatografi Lapis Tipis ......................................................
36
xi
BAB IV. KESIMPULAN DAN SARAN ...................................................
39
A. Kesimpulan............................................................................
39
B. Saran ......................................................................................
39
DAFTAR PUSTAKA ................................................................................
40
LAMPIRAN................................................................................................
43
xii
DAFTAR TABEL
Halaman
Tabel 1.
Pengaruh Berbagai Konsentrasi DMSO terhadap % Sel
Myeloma Hidup........................................................................
Tabel 2.
Tabel 3.
33
Pengaruh Berbagai Konsentrasi Ekstrak Etanol 70 % Buah
Merica Hitam terhadap % Sel Hidup Sel Myeloma ................
34
Kromatogram Ekstrak Etanol 70 % Buah Merica Hitam.........
37
xiii
DAFTAR GAMBAR
Halaman
Gambar 1.
Siklus Pertumbuhan Biologis Sel..........................................
11
Gambar 2.
Skema Pembuatan Ekstrak Etanol 70% Buah Merica Hitam
21
Gambar 3.
Skema Kerja Uji Sitotoksik
Ekstrak Etanol 70% Buah
Merica Hitam terhadap Sel Myeloma ...................................
Gambar 4.
Skema Kerja Penelitian Uji Sitotoksik Ekstrak Etanol 70%
Buah Merica Hitam terhadap Sel Myeloma ..........................
Gambar 5.
25
27
Mekanisme Reduksi MTT oleh Enzim Sel Hidup Sel
Myeloma................................................................................
32
Gambar 6.
Foto Sel Myeloma .................................................................
32
Gambar 7.
Pengaruh Konsentrasi DMSO terhadap Prosentase Hidup
Sel Myeloma .........................................................................
Gambar 8.
33
Grafik Hubungan Konsentrasi Ekstrak Etanol 70% Buah
Merica Hitam Versus % Sel Hidup Sel Myeloma.................
34
Grafik Hubungan Log Konsentrasi Versus Probit ................
35
Gambar 10. Kromatogram Ekstrak Etanol 70% Buah Merica Hitam.......
37
Gambar 9.
xiv
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
Lampiran 1. Hasil Determinasi Merica Hitam (Piper nigrum L.) .............
44
Lampiran 2. Foto Tanaman Merica Hitam (Piper nigrum L.) ...................
48
Lampiran 3. Foto Buah Merica Hitam (Piper nigrum L.)..........................
49
Lampiran 4. Foto Mikroplate 96 Sumursn untuk Uji Sitotoksik ...............
50
Lampiran 5. Foto ELISA reader................................................................
51
Lampiran 6. Perhitungan Hasil Rendemen ................................................
52
Lampiran 7. Perhitungan Seri Konsentrasi ................................................
52
Lampiran 8. Perhitungan Prosen Sel Hidup...............................................
53
Lampiran 9. Tabel Probit ...........................................................................
58
Lampiran 10. Surat Pemesanan Bahan di BPTO Tawangmangu ...............
59
Lampitan 11. Surat Bebas Laboratorium UGM .........................................
60
xv
DAFTAR SINGKATAN
DMSO
: Dimetil Sulfoksida
DNA
: Deoxyribo Nucleic Acid
ELISA
: Enzim-Linked Immuno- Sorbent Assay
FBS
: Fetal Bovine Serum
IC50
: Inhibitory Concentration 50
KLT
: Kromatografi Lapis Tipis
MTT
: (3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-dipheniltetrazolium bromide)
PBS
: Phosphate-Buffer Saline
Pen-Strep
: Penisilin Streptomisin
Rf
: Retention factor
RNA
: Ribo Nucleic Acid
RPMI
: Roserwell Park Memorial institute
SDS
: Sodium Dodecyl Sulphate
WHO
: World Health Organization
xvi
UJI SITOTOKSIK EKSTRAK ETANOL 70% BUAH MERICA HITAM
(Piper nigrum L.) TERHADAP SEL MYELOMA
INTISARI
Selama ini terapi kanker dengan kemoterapi belum memperoleh hasil yang
memuaskan sehingga perlu dicari alternatif pengobatannya. Salah satu cara adalah
dengan menggunakan obat-obat dari alam. Salah satu tanaman yang diduga
berkhasiat sebagai antikanker adalah merica hitam (Piper nigrum L.) karena
dalam buah merica hitam terdapat kandungan piperin. Hal ini didasarkan pada
penelitian Sunila dan Kutan yang menunjukkan bahwa piperin dalam ekstrak
alkohol Piper longum mempunyai efek toksik terhadap sel DLA (Dalton’s
Lymphoma Ascites) dan sel EAC (Ehrlich Ascites Carcinoma). Tujuan dilakukan
penelitian ini adalah untuk mengetahui potensi sitotoksik ekstrak etanol 70% buah
merica hitam terhadap sel Myeloma.
Ekstrak etanol 70% buah merica hitam diperoleh dengan cara menyari
buah merica hitam dengan pelarut etanol 70% dengan menggunakan metode
maserasi. Untuk mengetahui potensi sitotoksik ekstrak etanol 70% buah merica
hitam terhadap sel Myeloma, dilakukan uji sitotoksik dengan metode MTT
dengan menggunakan 6 seri konsentrasi yaitu 250 Pg/ml, 125 Pg/ml, 62,5 Pg/ml,
31,25 Pg/ml, 15,63 Pg/ml dan 7,81 Pg/ml. Hasil absorbansi menggambarkan
banyaknya sel hidup. Parameter yang digunakan adalah IC50 (Inhibitory
Concentration 50) yang dihitung dengan analisis probit. Untuk analisis golongan
senyawa yang terkandung dalam buah merica hitam dilakukan dengan
kromatografi lapis tipis (KLT) dengan fase diam silika gel GF254 dan fase gerak
heksana-etil asetat 4:6 v/v. Deteksi dilakukan dengan sinar biasa dan UV 366 nm
dengan pereaksi semprot anisaldehid-H2SO4.
Hasil uji sitotoksik menunjukkan bahwa ekstrak etanol 70% buah merica
hitam memiliki efek sitotoksik terhadap sel Myeloma dengan nilai IC50 sebesar
51,20 Pg/ml. Hasil uji KLT menunjukkan bahwa ekstrak etanol 70% buah merica
hitam mengandung senyawa piperin, hal ini dibuktikan dengan adanya bercak
hijau kuning setelah dideteksi dengan anisaldehid-H2SO4.
Kata kunci : Buah merica hitam (Piper nigrum L.), sel Myeloma, sitotoksik
Mengetahui
Dekan,
Dra. Nurul Mutmainah, M.Si., Apt
Pembimbing Utama
Maryati, M.Si., Apt
xvii