3.3.2 Uji Diameter Zona Bening Hasil Hidrolisis Pati
Tiap isolat tunggal diambil dengan ose
dimasukkan dalam larutan fisiologis divortex
disamakan keruhnya dengan larutan Mac Farland 10
8
Hasil pengenceran dipipet 5 mikroliter
dimasukkan dalam media agar + pati 1 diinkubasi selama 48 jam pada suhu 30
o
C Isolat bakteri tumbuh
ditetesi larutan iodin Zona bening
diukur zona bening dengan penggaris
Universitas Sumatera Utara
3.3.3 Pembuatan Larutan Standar Maltosa
Dibuat larutan stok maltosa 1000 ppm sebanyak 100 ml
Diencerkan menjadi berbagai konsentrasidari 0 - 600 ppm
Tiap konsentrasi dibuat dalam tabung reaksi berbeda masing-masing 1 ml
tiap tabung ditambah reagen DNS 2 ml divorteks
didiinkubasi selama 10 menit pada suhu ruang dididihkan selama 5 menit
didinginkan dengan air mengalir selama 15 menit ditambah aquades sebanyak 20 ml
divortex diabsorbansi pada panjang gelombang 540 nm
dengan spektrofotometer Kurva standar maltosa
Universitas Sumatera Utara
3.3.4 Optimasi Produksi Enzim Amilase
Blanko
ditambahkan aquades
dihomogenisasi
diinkubasi suhu ruang selama 10 menit
ditambahkan 1 ml DNS
dipanaskan suhu 100
o
C selama 5 menit
didinginkan dengan air keran selama 20 menit
diukur absorbansi panjang gelombang 550 nm
Sampel
dihomogenisasi
diinkubasi suhu ruang selama 10 menit
ditambahkan 1 ml enzim dipanaskan suhu 100
o
C selama 5 menit
didinginkan dengan air keran selama 20 menit
diukur absorbansi panjang gelombang 550 nm
Kontrol
dihomogenisasi
diinkubasi suhu ruang selama 10 menit
ditambahkan 1 ml DNS
dipanaskan suhu 100
o
C selama 5 menit
didinginkan dengan air keran selama 20 menit
diukur absorbansi panjang gelombang 550 nm
ditambahkan 1 ml pati 1
ditambahkan 1 ml pati 1
ditambahkan 1 ml pati 1
ditambahkan 1 ml DNS ditambahkan 1 ml enzim
Universitas Sumatera Utara
3.3.5 Produksi dan Ekstraksi Enzim Amilase
Isolat bakteri amiolitik diambil satu ose
dilarutkan dalam media cair penghasil amilase steril diinkubasi pada kondisi optimum hasil optimasi pada shakerincubator
dengan kecepatan 150 rpm Kultur bakteri
penghasil enzim amilase disentrifuse selama 10 menit dengan kecepatan 10000 rpm pada suhu 4
Supernatan mengandung ekstrak dari enzim amilase kasar
Diuji aktivitas
Universitas Sumatera Utara
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1 Hasil Penelitian 4.1.1 Isolasi dan Bakteri Terseleksi
Isolasi bakteri dilakukan pada tiga sampel tanah tempat pembuangan akhir sampah Terjun Medan.
Dari hasil isolasi tersebut, diperoleh
sebanyak total 24 isolat bakteri. Dari 24 isolat
bakteri tersebut diperoleh 12 isolat bakteri yang
memiliki zona amilolitik. Aktivitas amilolitik
ditunjukkan dengan terbentuknya zona
bening pada media agar- agar ketika diteteskan
dengan larutan iodin.
Gambar 4.1. Zona bening yang terbentuk disekitar isolat
Tabel 4.1 Indeks Amilolitik Isolat TPA Sampah Terjun, Medan
Kode Isolat
Diameter Koloni cm
Diameter Zona Bening cm
Indeks Amilolitik cm
FM 10 0,40
0,60 0,50
FM 1411 0,40
0,80 1,00
Universitas Sumatera Utara