BAB III METODE PENELITIAN
A. Lokasi dan Waktu Penelitian
Ekstraksi dan uji aktivitas enzim bromelin dilakukan di Laboratorium Instrumentasi Jurusan Kimia sedangkan isolasi DNA dilakukan di laboratorium
Biologi Molekuler Jurusan Biologi FMIPA Universitas Negeri Semarang pada bulan Februari – Juni 2009.
B. Subyek dan Obyek Penelitian
Subyek penelitian adalah kuantitas dan kualitas hasil isolasi DNA daun pisang dan obyek penelitian adalah DNA dari daun pisang.
C. Variabel Penelitian
1. Variabel terikat adalah aktivitas enzim hasil ekstraksi, kuantitas dan kualitas DNA yang dihasilkan.
2. Variabel bebas adalah bagian buah nanas yang digunakan sebagai sumber enzim dan volume ekstrak enzim bromelin dari buah nanas yang ditambahkan
pada isolasi DNA. 3. Variabel kendali adalah jenis nanas, tingkat kematangan buah, NaCl garam
dapur, etanol 96, deterjen dan akuades dingin steril.
D. Rancangan Penelitian
Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan Sumiyati 2009, penambahan 5 ml jus nanas pada isolasi DNA menghasilkan DNA dengan
kualitas dan kuantitas yang paling baik. Pada penelitian ini 12 tabung reaksi digunakan untuk 3 kelompok perlakuan yaitu volume penambahan ekstrak enzim
2,3 ml I; 4,6 ml II dan 6,9 ml III dari bagian daging buah nanas maupun dari batang buah nanas. Masing-masing perlakuan diulang sebanyak dua kali. Luaran
yang diharapkan adalah data konsentrasi dan tingkat kemurnian DNA hasil isolasi. Matriks sampel penelitian dapat dilihat pada Tabel 1.
15
Perlakuan Volume Ekstrak Bromelin ml
2,3 ml I 4,6 ml II
6,9 ml III Daging buah A
AI
1
AII
1
AIII
1
AI
2
AII
2
AIII
2
Batang buah B
BI
1
BII
1
BIII
1
BI
2
BII
2
BIII
2
Volume pemberian ekstrak enzim ini didapat dari hasil rata-rata ekstraksi dari 5 ml cairan dari bagian daging maupun batang buah yaitu sebanyak 4,6 ml.
volume 4,6 ml ini menjadi volume pemberian ekstrak enzim optimum pada isolasi DNA. Kemudian ditentukan volume pemberian ekstrak minimumnya
yaitu 2,3 ml dan volume maksimumnya adalah 6,9 ml. Kontrol yang digunakan dalam penelitian ini adalah data dari teknik isolasi DNA
metode Kitchen preparation
Sumiyati 2009 yang menggunakan 5 ml jus nanas dan larutan detergen attack 25.
E. Alat dan Bahan Penelitian
Kategori