9 promoter Ubiquitin dilaporkan memiliki tingkat ekspresi gen yang tinggi pada tanaman
monokotil Christensen Quail 1996, sehingga diharapkan tanaman anggrek V. tricolor yang sudah disisipi gen PaFT ini nantinya mampu berbunga lebih cepat. Kultivar baru
anggrek V. tricolor Lidl. forma Bali yang dihasilkan melalui penelitian ini dapat dijadikan tanaman induk untuk menghasilkan hibrida-hibrida baru genus Vanda yang berbunga lebih
cepat. Rhodora Thomas 1996 menyatakan bahwa gen asing yang ada pada tanaman transforman yang dihasilkan melalui transformasi dengan Agrobacterium diturunkan pada
progeninya. Mengingat Vanda hibrid memiliki nilai tinggi secara ekonomis, maka hasil penelitian ini akan sangat bermanfaat bagi pengembangan agribisnis anggrek khususnya di
Indonesia.
BAB 2. TINJAUAN PUSTAKA
Transformasi tanaman dengan perantara A. tumefaciens merupakan metode yang paling banyak digunakan untuk induksi gen asing ke dalam sel tanaman untuk selanjutnya
dihasilkan tanaman transgenik Alimohamdi dan Bagherieh-Najjar, 2009. Secara alamiah, A. tumefaciens menginokulasi bagian yang luka dari tanaman dikotil
dan menyebabkan terbentuknya tumor. Strain virulen dari A. tumefaciens memiliki plasmid yang besar 200kb disebut Ti Tumor inducing plasmid yang berperan dalam induksi
tumor. Selama inokulasi, suatu segmen DNA yang bersifat mobile dari Ti plasmid disebut T- DNA ditransfer ke inti sel tanaman dan terintegrasi ke dalam genom tanaman Zupan dan
Zambryski, 1995 dan 95 dari sel-sel tumor tersebut tertransformasi Deeken et al., 2006. Sifat alamiah A. tumefaciens dalam menginduksi tumor pada tanaman seperti tersebut di atas
kemudian dimanfaatkan dalam rekayasa genetika tumbuhan. Tiga hal penting yang mendasari proses transfer T-DNA ke sel tanaman adalah sebagai berikut.
1. Pembentukan tumor, merupakan suatu proses transformasi yang dihasilkan dari transfer dan integrasi T-DNA ke sel tanaman dan ekspresi gen-gen pada T-DNA.
2. Gen-gen pada T-DNA ditranskripsi hanya dalam sel tanaman dan tidak berperan selama proses transfer.
3. Suatu DNA asing yang disisipkan diantara T-DNA border dapat ditransfer ke sel-sel tanaman Opabode 2006.
Pada tanaman anggrek, transformasi genetik dengan perantara A. tumefaciens sudah berhasi dilakukan untuk anggrek Dendrobium nobile Men et al., 2003, Phalaenopsis hibrida
Chai et al., 2002; Mishiba et al., 2005, anggrek Cymbidium Chin et al., 2007,
10 Phalaenopsis amabilis Semiarti et al., 2007, Vanda
hibrida ‟Tokyo Blue‟ Shresta et al., 2007 dan Vanda tricolor Lindl. Dwiyani dkk., 2011. Transformasi genetik tersebut pada
tanaman anggrek dilakukan pada target transformasi berupa protocorm like bodies plb yang berasal dari sel somatik Men et al., 2003; Chin et al., 2007; Shresta et al., 2007 serta
protocorm yang berasal dari biji Mishiba et al., 2005; Semiarti et al., 2007; Dwiyani dkk., 2011.
Penelitian ini menggunakan anggrek Vanda tricolor Lindl. var. suavis forma Bali seperti yang dilakukan oleh Dwiyani dkk. 2012, akan tetapi menggunakan target
transformasi yang lebih bervariasi yakni protocorm dan plb. Sedangkan Dwiyani 2012 hanya menggunakan protocorm sebagai target transformasi. Meskipun relatif lebih sulit untuk
menghasilkan plb dari sel somatik dibandingkan menghasilkan protocorm dari biji, namun diharapkan dengan target berupa plb, terjadinya chimera dapat dihindarkan. Selain itu,
seleksi transforman dalam penelitian ini menggunakan higromisin, sedangkan Dwiyani dkk. 2011 menggunakan kanamisin sebagai agen penyeleksi transforman. Hasil seleksi
menggunakan kanamisin bersifat sangat bias, sehingga banyak ditemukan adanya tanaman non-transforman diantara kandidat transforman yang dihasilkan Dwiyani, 2012, sedangkan
menggunakan antibiotik higromisin hasilnya lebih akurat, karena jaringan tanaman umunnya bersifat sensitif terhadap antibiotik higromisin. Penelitian ini juga menggunakan metode
transformasi in planta yang sangat spesifik untuk tanaman anggrek dan belum pernah dilaporkan sebelumnya.
Pada penelitian ini dilakukan overekspresi gen pembungaan yaitu gen PaFT dengan „strong promoter‟ Ubiquitin. Gen PaFT adalah gen ortholog dari FLOWERING LOCUS T
FT yang diisolasi dari tanaman Platanus acerifolia Pa Zhang et al. 2011. Mercuriani Komunikasi pribadi 2013 sudah berhasil melakukan transformasi gen PaFT melalui
Agrobacterium tumefaciens pada anggrek Phalaenopsis amabilis, namun belum ada yang melaporkan untuk tanaman anggrek genus Vanda yang memiliki masa juvenil sangat panjang,
lebih panjang dari anggrek P. amabilis.
11
BAB 3. TUJUAN DAN MANFAAT PENELITIAN Tujuan Penelitian
