11
BAB 3. TUJUAN DAN MANFAAT PENELITIAN Tujuan Penelitian
Penelitian ini bertujuan untuk menghasilkan kultivar baru anggrek V. tricolor Lindl. var. suavis forma Bali yang memiliki kemampuan mencapai masa berbunga lebih cepat
melalui rekayasa genetika. Tujuan penelitian tahap 3 adalah mendapatkan kandidat transgenik dari transformasi
in planta serta mendeteksi keberadaan gen pembungaan pada genom tanaman melalui analisis PCR dengan primer spesifik untuk gen PaFT. Selanjutnya kandidat transforman yang positif
mengandung gen PaFT disebut transforman.
Manfaat Penelitian
Hasil penelitian ini berguna secara aplikatif karena kultivar baru anggrek yang dihasilkan dapat dikembangkan untuk kepentingan agribisnis florikultura di pulau Bali.
Kultivar baru anggrek V. tricolor Lidl. forma Bali yang dihasilkan melalui penelitian ini dapat dijadikan tanaman induk untuk menghasilkan hibrida-hibrida baru genus Vanda yang
berbunga lebih cepat. Rhodora dan Thomas 1996 menyatakan bahwa gen asing yang ada pada tanaman transgenik yang dihasilkan melalui transformasi dengan Agrobacterium
diturunkan pada progeninya melalui Hukum Mendel. Metode transformasi yang juga dihasilkan dari penelitian ini dapat memperkaya hasil-
hasil penelitian Universitas Udayana di bidang bioteknologi dan biomolekuler, sehingga diharapkan dapat bersaing secara nasional maupun internasional dalam pengembangan
IPTEK. Tanaman transgenik yang dihasilkan pada tahap 3 ini dapat didaftarkan sebagai paten karena sejauh ini penelitian mengenai tanaman transgenik Vanda tricolor Lindl. yang cepat
berbunga belum pernah dilaporkan. Metode transformasi in planta yang dilakukan dalam penelitian ini juga belum pernah dilaporkan sebelumnya, sehingga juga berpotensi paten.
BAB 4. METODE PENELITIAN PENELITIAN TAHAP 3
Pekerjaan yang sudah dan akan dilakukan pada penelitian tahap 3 adalah sebabagi berikut:
Panen Buah kapsul anggrek Hasil Penelitian Transformasi In planta Tahap 2
Transformasi in planta tahap 2 menghasilkan 12 buah anggrek Vanda tricolor merupakan 4 kombinasi perlakuan, 3 ulangan dan 2 buah anggrek tanpa perlakuan. Buah-
12 buah tersebut bijinya layak ditabur pada umur 7 bulan setelah semai yakni tanggal
29042015, dengan demikian panen dilakukan pada tanggal tersebut.
Penanaman Biji Anggrek Hasil Transformasi in planta
Buah anggrek hasil selfing yang berumur 7 bulan dipanen, disterilisasi baru kemudian ditabur pada media MS dengan konsentrasi 50 yang ditambah 100 gram per liter tomat.
Sterilisasi terhadap material tanam dilakukan dengan tahapan sebagai berikut. Pertama buah anggrek yang akan ditabur bijinya dicuci pada kucuran air kran sambil disikat dengan sikat
gigi bersih menggunakan detergen. Selanjutnya buah anggrek yang sudah bersih ini dicelupkan dalam spiritus dan dibakar di atas lampu bunsen. Hal ini dilakukan sebanyak tiga
kali, baru kemudian dimasukkan ke dalam laminar. Di dalam laminar, buah anggrek tersebut dipegang dengan pinset, dibakar sekali lagi baru kemudian dibelah. Selanjutnya biji-biji
anggrek ditanam pada media yang sudah disiapkan.
Uji Higromisin
Uji higromisin terhadap protokorm anggrek V. tricolor dilakukan dengan konsentrasi higromisin 0 ppm kontrol, 5 ppm, 10 ppm, 15 ppm dan 20 ppm. Diamati persentase
protokorm mati setiap minggu.
Seleksi Protokorm
Seleksi awal terhadap keberadaan gen PaFT dilakukan dengan menanam protokorm yang berumur 8 minggu pada media higromisin. Protokorm yang tetap hijau pada media yang
mengandung higromisin disebut sebagai kandidat transforman, mengindikasikan bahwa gen tersebut diduga terinsersi pada genom tanaman.
Konfirmasi transgen dengan PCR
Selanjutnya protokorm hijau tersebut ditumbuhkan hingga menjadi plantlet yang memiliki 2 daun. Plantlet ini kemudian dambil satu daunnya untuk diisolasi DNA genomnya.
Selanjutnya di
PCR dengan
primer dengan
primer Ubiquitin
forward: 5-
TTGTCGATGCTCACCCTG-3 dan TNos reverse: 5-GATCTAGTAACATAGAT
13 GACACCGCG-3. Dengan menggunakan primer ini maka harus dihasilkan 1100bp untuk
konfirmasi bahwa transgen benar-benar terinsersi.
BAB 5. HASIL YANG SUDAH DICAPAI Panen Buah Kapsul Anggrek Hasil Transformasi