Potensi Ekstrak Tempuyung dan Meniran sebagai Antiasam Urat: Aktivitas Inhibisinya terhadap Xantin Oksidase
POTENSI EKSTRAK TEMPUYUNG DAN MENIRAN
SEBAGAI ANTIASAM URAT: AKTIVITAS
INHIBISINYA TERHADAP XANTIN OKSIDASE
CHINTYA GALUH TRI WARDANI
DEPARTEMEN KIMIA
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
BOGOR
2008
ABSTRAK
CHINTYA GALUH TRI WARDANI. Potensi Ekstrak Tempuyung dan Meniran sebagai
Antiasam Urat: Aktivitas Inhibisinya terhadap Xantin Oksidase. Dibimbing oleh DYAH
ISWANTINI PRADONO dan LATIFAH KOSIM DARUSMAN.
Penyakit gout merupakan suatu penyakit akibat terjadinya penimbunan kristal
mononatrium urat di dalam tubuh sehingga menyebabkan nyeri sendi (arthritis gout).
Tempuyung dan meniran merupakan tanaman obat asli Indonesia yang biasa digunakan
untuk menurunkan kadar asam urat dalam tubuh. Berdasarkan kandungannya, kedua
tanaman ini diduga dapat menginhibisi xantin oksidase. Dalam penelitian ini ekstrak
tempuyung dan meniran (etanol, air, dan flavonoid) diuji aktivitas inhibisinya terhadap
xantin oksidase pada kondisi optimum. Aktivitas enzim diukur pada suhu 20 °C, pH 7.5,
0.7 mM xantin sebagai substrat, 0.1 unit/ml enzim xantin oksidase dan diinkubasi selama
45 menit. Dari beberapa ekstrak tempuyung dan meniran, nilai LC50 tertinggi dan
terendah adalah ekstrak flavonoid tempuyung (2281 ppm) dan ekstrak air tempuyung
(1252 ppm). Semua ekstrak dapat menghambat aktivitas xantin oksidase. Persen inhibisi
tertinggi adalah ekstrak etanol meniran (150 ppm) dengan persen inhibisi sebesar 53.71%.
Kandungan ekstrak etanol berdasarkan uji fitokimia adalah flavonoid, triterpenoid, dan
tanin.
ABSTRACT
CHINTYA GALUH TRI WARDANI. Potention of Tempuyung and Meniran Extract as
Anti Uric Acid: Inhibition Activity of Xanthine Oxidase. Under the direction of DYAH
ISWANTINI PRADONO and LATIFAH KOSIM DARUSMAN.
Gout is certain a consequence indicated by accumulation of monosodium urate in
body causing painful joint (gout arthritis). Tempuyung and meniran are original plant of
Indonesian commonly used to reduce uric acid contents in body. Based on their contents,
it may be inhibit xanthine oxidase. In the research, tempuyung and meniran extracts
(ethanol, water, and flavonoid) were assayed for xanthine oxidase inhibition at optimum
condition. The activity enzyme was measured at 20 °C, pH 7.5, 0.7 mM xanthine as
substrate, 0.1 unit/ml xanthine oxidase, and were incubated for 45 min. From several
extracts of tempuyung and meniran, the highest and the lowest of LC50 value were
flavonoid extract of tempuyung (2281 ppm) and water extract of tempuyung (1252 ppm).
All extracts examined could inhibit the activity of xanthine oxidase. The highest
inhibition percent was ethanol extract of meniran (150 ppm) with percent of inhibition of
53.71%. Ethanol extract of meniran contents based on phytochemistry test are flavonoid,
triterpenoid, and tannin.
POTENSI EKSTRAK TEMPUYUNG DAN
MENIRAN SEBAGAI ANTIASAM URAT: AKTIVITAS
INHIBISINYA TERHADAP XANTIN OKSIDASE
CHINTYA GALUH TRI WARDANI
Skripsi
sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar
Sarjana Sains pada
Departemen Kimia
DEPARTEMEN KIMIA
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
BOGOR
2008
Judul Skripsi : Potensi Ekstrak Tempuyung dan Meniran sebagai Antiasam Urat:
Aktivitas Inhibisinya terhadap Xantin Oksidase
Nama
: Chintya Galuh Tri Wardani
NIM
: G44203020
Disetujui:
Pembimbing I
Pembimbing II
Dr. Dyah I Pradono, MAgr
NIP 131 956 706
Prof. Dr. Latifah K Darusman, MS
NIP 13053668
Diketahui:
Dekan Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam
Dr. drh. Hasim, DEA
NIP 131578806
Tanggal lulus:
PRAKATA
Alhamdulillah, puji dan syukur kehadiran Allah SWT atas segala rahmat dan
karunia-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan karya ilmiah ini. Judul yang dipilih
dalam penelitian ini adalah Potensi Ekstrak Tempuyung dan Meniran sebagai Antiasam
Urat: Aktivitas Inhibisinya terhadap Xantin Oksidase.
Terima kasih penulis ucapkan kepada Ibu Dr. Dyah Iswantini Pradono, MAgr dan
Ibu Prof. Dr. Latifah K Darusman, MS selaku pembimbing yang telah memberikan
bimbingan, pengarahan, serta semangat dalam penelitian dan penulisan karya ilmiah ini.
Di samping itu, penulis mengucapkan terima kasih kepada seluruh staf Kimia Analitik
dan seluruh staf Pusat Studi Biofarmaka yang telah membantu selama penelitian.
Ungkapan terima kasih penulis ucapkan pada papa, mama, beserta seluruh keluarga atas
segala doa, kasih sayang, dan dorongan semangat yang telah diberikan. Terima kasih
pada saudara-saudara seperjuangan, Lina, Farah, dan Hesti atas ketulusan hati,
kebersamaan, dukungan, dan bantuannya selama ini, teman-teman kimia 40 khususnya
Nana, Rahma, Ita, dan Sabet atas bantuan serta ide-idenya dalam penyelesaian karya
ilmiah ini, pada Ibu Mala atas bantuannya, dan kepada saudara-saudaraku di MSC atas
doa, semangat dan ukhuwah.
Semoga karya ilmiah ini bermanfaat.
Bogor, Juni 2008
Chintya Galuh Tri Wardani
RIWAYAT HIDUP
Penulis dilahirkan di Surabaya pada tanggal 31 Desember 1984 dari Bapak H.
Suwarto Utomo dan Ibu Hj. Sri Rejeki. Penulis merupakan anak ketiga dari empat
bersaudara.
Tahun 2003 penulis lulus dari SMU Negeri 74 Jakarta dan pada tahun yang sama
lulus seleksi masuk IPB melalui jalur Undangan Seleksi Masuk IPB. Penulis memilih
Departemen Kimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam.
Selama mengikuti perkuliahan, penulis aktif sebagai anggota Imasika periode
2005/2006 dan anggota DKM Al Ghifari sebagai staf Departemen Dompet Umat periode
2004/2005 dan Koordinator akhwat Departemen Sosial periode 2005/2006. Pada tahun
2006 penulis melaksanakan Praktik Kerja Lapangan di Laboratorium Pusat Sarana
Dampak Lingkungan Serpong.
DAFTAR ISI
Halaman
DAFTAR TABEL ..................................................................................................... viii
DAFTAR GAMBAR ................................................................................................ viii
DAFTAR LAMPIRAN ............................................................................................. viii
PENDAHULUAN ....................................................................................................
1
TINJAUAN PUSTAKA
Tempuyung ....................................................................................................
Meniran ..........................................................................................................
Xantin Oksidase .............................................................................................
Gout ...............................................................................................................
Flavonoid .......................................................................................................
1
2
2
3
4
BAHAN DAN METODE
Bahan dan Alat.................................................................................................
Metode Penelitian ............................................................................................
4
4
HASIL DAN PEMBAHASAN
Kadar Air ....................................................................................................... 6
Ekstraksi ......................................................................................................... 6
Uji Fitokimia .................................................................................................. 6
Uji Toksisitas Larva Udang ............................................................................. 7
Uji Inhibisi Ekstrak Kasar terhadap Aktivitas Xantin Oksidase ....................... 7
Uji Statistik .................................................................................................... 10
SIMPULAN DAN SARAN
Simpulan ......................................................................................................... 11
Saran ............................................................................................................... 11
DAFTAR PUSTAKA ................................................................................................ 11
LAMPIRAN ............................................................................................................. 13
DAFTAR TABEL
Halaman
1 Uji Fitokimia ekstrak air tempuyung dan meniran .................................................
7
2 Uji Fitokimia ekstrak etanol tempuyung dan meniran ............................................
7
3 Uji Fitokimia ekstrak flavonoid tempuyung dan meniran .......................................
7
4 Nilai LC50 ekstrak tempuyung dan meniran terhadap A. salina .............................
7
5 Persamaan linear ekstrak tempuyung dan meniran ................................................ 10
6 Nilai IC50 ekstrak tempuyung dan meniran ........................................................... 10
DAFTAR GAMBAR
Halaman
1 Tempuyung (Sonchus arvensis) ............................................................................
1
2 Meniran (Phyllanthus niruri) ................................................................................
2
3 Skema reaksi xantin oksidase yang mengkonversi hipoxantin menjadi xantin dan
asam urat...............................................................................................................
3
4 Skema reaksi xantin oksidase yang dapat dihambat oleh alopurinol dalam
pembentukan asam urat .........................................................................................
4
5 Struktur umum senyawa flavonoid.........................................................................
4
6 Persen inhibisi enzim dari ekstrak air meniran terhadap xantin oksidase dalam
berbagai konsentrasi..............................................................................................
8
7 Persen inhibisi enzim dari ekstrak air tempuyung terhadap xantin oksidase dalam
berbagai konsentrasi..............................................................................................
8
8 Persen inhibisi enzim dari ekstrak etanol meniran terhadap xantin oksidase dalam
berbagai konsentrasi..............................................................................................
9
9 Persen inhibisi enzim dari ekstrak etanol tempuyung terhadap xantin oksidase
dalam berbagai konsentrasi....................................................................................
9
10 Persen inhibisi enzim dari ekstrak flavonoid meniran terhadap xantin oksidase
dalam berbagai konsentrasi....................................................................................
9
11 Persen inhibisi enzim dari ekstrak flavonoid tempuyung terhadap xantin oksidase
dalam berbagai konsentrasi....................................................................................
9
12 Persen inhibisi terbaik dari seluruh ekstrak dan kontrol positif terhadap xantin
oksidase ............................................................................................................... 10
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
1 Bagan alir penelitian ............................................................................................ 14
2 Uji toksisitas dengan larva udang A. salina............................................................ 15
3 Uji Inhibisi aktivitas xantin oksidase ..................................................................... 17
4 Kadar air tempuyung dan meniran ......................................................................... 18
5 Aktivitas ekstrak tempuyung dan meniran terhadap larva A. salina ........................ 19
6 Pembuatan kurva standar ....................................................................................... 20
7 Data hasil uji enzimatis berbagai ekstrak ............................................................... 21
8 Perhitungan statistik ekstrak tempuyung dan meniran ............................................ 25
PENDAHULUAN
Penyakit asam urat, biasa juga dikenal
sebagai gout, merupakan suatu penyakit
akibat terjadinya penimbunan kristal
mononatrium urat di dalam tubuh sehingga
menyebabkan nyeri sendi (artritis gout),
benjolan-benjolan
pada
bagian-bagian
tertentu dari tubuh (tofi), serta gangguan dan
batu pada saluran kemih. Kejadian artritis
gout dalam beberapa dasawarsa terakhir ini
baik di negara-negara maju maupun yang
sedang berkembang semakin meningkat
terutama pada pria usia 40-50 tahun. Di
Amerika, gout menyerang lebih dari 5 juta
penduduk (Yu 2006).
Obat sintetik yang biasa dikonsumsi
untuk mengobati asam urat oleh masyarakat
adalah alopurinol yang menginhibisi
aktivitas xantin oksidase. Xantin oksidase
mengkatalisis oksidasi xantin menjadi asam
urat. Penggunaan alopurinol yang terlalu
sering atau berlebihan dapat menimbulkan
efek samping, yaitu hepatitis, gangguan
pencernaan, timbulnya ruam di kulit,
berkurangnya jumlah sel darah putih, dan
kerusakan hati. Oleh sebab itu, diperlukan
obat yang lebih aman dengan harga
terjangkau.
Penelitian mengenai khasiat tanaman
obat sebagai anti-asam urat melalui
mekanisme inhibisi enzim xantin oksidase
telah banyak dilakukan. Di Cina, Conyza
bonariensis dengan pelarut metanol dapat
menginhibisi xantin oksidase dengan daya
inhibisi yang lebih besar dari 50% (Kong et
al. 2000), tanaman obat asli India, Coccinia
grandis dan Vitex negundo juga dapat
menginhibisi xantin oksidase secara in vitro
dan in vivo (Umamaheswari et al. 2007),
selain itu spesies Lychnopora dari Brazil
juga dapat menginhibisi xantin oksidase
dengan daya inhibisi di atas 60% (Filha et
al. 2006).
Beberapa tanaman obat asli Indonesia
juga terbukti dapat menginhibisi xantin
oksidase, seperti sidaguri yang ekstrak
flavonoidnya dapat menginhibisi sampai
55.29% (Iswantini & Darusman 2003),
seledri (Rhamdani 2004) dan gabungan
ekstrak sidaguri dan seledri diteliti lebih
lanjut
untuk
mengetahui
efek
penghambatannya terhadap xantin oksidase
(Iswantini et al. 2005). Hasil yang didapat,
yaitu gabungan kedua ekstrak dapat
menginhibisi enzim xantin oksidase
melebihi daya inhibisi alopurinol atau
produk komersial lainnya. Gabungan ekstrak
juga menunjukan efek yang signifikan
terhadap penurunan kadar asam urat pada
tikus.
Penelitian
lain
yang
dapat
membuktikan khasiat tanaman obat asli
Indonesia lainnya sebagai anti-asam urat
sangat perlu dilakukan mengingat bahwa
beberapa tanaman obat asli Indonesia
berpotensi untuk mengobati gout.
Tempuyung merupakan salah satu jenis
tanaman obat potensial di Indonesia yang
sering dikonsumsi untuk obat. Tempuyung
mengandung ion-ion mineral dan beberapa
flavonoid yang diduga dapat menghambat
xantin oksidase (Chairul 1999). Meniran
juga merupakan tanaman yang kandungan
utamanya ialah flavonoid dan glikosida
flavonoid. Data ilmiah pendukung yang
mengungkapkan khasiat tempuyung dan
meniran sebagai biomedicine masih sedikit.
Berdasarkan penelusuran, belum ada paten
yang menyebutkan khasiat tempuyung dan
meniran sebagai anti-asam urat.
Kandungan tempuyung dan meniran
telah diteliti sebelumnya (Chairul 1999).
Oleh karena itu, untuk membuktikan
penelitian sebelumnya, pada penelitian ini
dilakukan uji inhibisi ekstrak tempuyung
dan meniran terhadap xantin oksidase secara
in vitro untuk mengetahui potensinya
sebagai anti-asam urat.
TINJAUAN PUSTAKA
Tempuyung (Sonchus arvensis)
Tempuyung (Gambar 1) termasuk
tanaman obat asli Indonesia dari famili
Asteraceae. Tanaman ini merupakan
tumbuhan
herba
menahun,
tegak,
mengandung getah, mempunyai akar
tunggang yang kuat (Rusdeyti 1985),
tumbuh liar di Jawa, yaitu di daerah yang
banyak hujan pada ketinggian 50-1650 m di
atas permukaan laut. Tempuyung tumbuh di
tempat terbuka seperti di pematang, dan di
pinggir saluran air (Heyne 1987).
Gambar 1 Tempuyung (Sonchus arvensis).
POTENSI EKSTRAK TEMPUYUNG DAN MENIRAN
SEBAGAI ANTIASAM URAT: AKTIVITAS
INHIBISINYA TERHADAP XANTIN OKSIDASE
CHINTYA GALUH TRI WARDANI
DEPARTEMEN KIMIA
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
BOGOR
2008
ABSTRAK
CHINTYA GALUH TRI WARDANI. Potensi Ekstrak Tempuyung dan Meniran sebagai
Antiasam Urat: Aktivitas Inhibisinya terhadap Xantin Oksidase. Dibimbing oleh DYAH
ISWANTINI PRADONO dan LATIFAH KOSIM DARUSMAN.
Penyakit gout merupakan suatu penyakit akibat terjadinya penimbunan kristal
mononatrium urat di dalam tubuh sehingga menyebabkan nyeri sendi (arthritis gout).
Tempuyung dan meniran merupakan tanaman obat asli Indonesia yang biasa digunakan
untuk menurunkan kadar asam urat dalam tubuh. Berdasarkan kandungannya, kedua
tanaman ini diduga dapat menginhibisi xantin oksidase. Dalam penelitian ini ekstrak
tempuyung dan meniran (etanol, air, dan flavonoid) diuji aktivitas inhibisinya terhadap
xantin oksidase pada kondisi optimum. Aktivitas enzim diukur pada suhu 20 °C, pH 7.5,
0.7 mM xantin sebagai substrat, 0.1 unit/ml enzim xantin oksidase dan diinkubasi selama
45 menit. Dari beberapa ekstrak tempuyung dan meniran, nilai LC50 tertinggi dan
terendah adalah ekstrak flavonoid tempuyung (2281 ppm) dan ekstrak air tempuyung
(1252 ppm). Semua ekstrak dapat menghambat aktivitas xantin oksidase. Persen inhibisi
tertinggi adalah ekstrak etanol meniran (150 ppm) dengan persen inhibisi sebesar 53.71%.
Kandungan ekstrak etanol berdasarkan uji fitokimia adalah flavonoid, triterpenoid, dan
tanin.
ABSTRACT
CHINTYA GALUH TRI WARDANI. Potention of Tempuyung and Meniran Extract as
Anti Uric Acid: Inhibition Activity of Xanthine Oxidase. Under the direction of DYAH
ISWANTINI PRADONO and LATIFAH KOSIM DARUSMAN.
Gout is certain a consequence indicated by accumulation of monosodium urate in
body causing painful joint (gout arthritis). Tempuyung and meniran are original plant of
Indonesian commonly used to reduce uric acid contents in body. Based on their contents,
it may be inhibit xanthine oxidase. In the research, tempuyung and meniran extracts
(ethanol, water, and flavonoid) were assayed for xanthine oxidase inhibition at optimum
condition. The activity enzyme was measured at 20 °C, pH 7.5, 0.7 mM xanthine as
substrate, 0.1 unit/ml xanthine oxidase, and were incubated for 45 min. From several
extracts of tempuyung and meniran, the highest and the lowest of LC50 value were
flavonoid extract of tempuyung (2281 ppm) and water extract of tempuyung (1252 ppm).
All extracts examined could inhibit the activity of xanthine oxidase. The highest
inhibition percent was ethanol extract of meniran (150 ppm) with percent of inhibition of
53.71%. Ethanol extract of meniran contents based on phytochemistry test are flavonoid,
triterpenoid, and tannin.
POTENSI EKSTRAK TEMPUYUNG DAN
MENIRAN SEBAGAI ANTIASAM URAT: AKTIVITAS
INHIBISINYA TERHADAP XANTIN OKSIDASE
CHINTYA GALUH TRI WARDANI
Skripsi
sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar
Sarjana Sains pada
Departemen Kimia
DEPARTEMEN KIMIA
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
BOGOR
2008
Judul Skripsi : Potensi Ekstrak Tempuyung dan Meniran sebagai Antiasam Urat:
Aktivitas Inhibisinya terhadap Xantin Oksidase
Nama
: Chintya Galuh Tri Wardani
NIM
: G44203020
Disetujui:
Pembimbing I
Pembimbing II
Dr. Dyah I Pradono, MAgr
NIP 131 956 706
Prof. Dr. Latifah K Darusman, MS
NIP 13053668
Diketahui:
Dekan Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam
Dr. drh. Hasim, DEA
NIP 131578806
Tanggal lulus:
PRAKATA
Alhamdulillah, puji dan syukur kehadiran Allah SWT atas segala rahmat dan
karunia-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan karya ilmiah ini. Judul yang dipilih
dalam penelitian ini adalah Potensi Ekstrak Tempuyung dan Meniran sebagai Antiasam
Urat: Aktivitas Inhibisinya terhadap Xantin Oksidase.
Terima kasih penulis ucapkan kepada Ibu Dr. Dyah Iswantini Pradono, MAgr dan
Ibu Prof. Dr. Latifah K Darusman, MS selaku pembimbing yang telah memberikan
bimbingan, pengarahan, serta semangat dalam penelitian dan penulisan karya ilmiah ini.
Di samping itu, penulis mengucapkan terima kasih kepada seluruh staf Kimia Analitik
dan seluruh staf Pusat Studi Biofarmaka yang telah membantu selama penelitian.
Ungkapan terima kasih penulis ucapkan pada papa, mama, beserta seluruh keluarga atas
segala doa, kasih sayang, dan dorongan semangat yang telah diberikan. Terima kasih
pada saudara-saudara seperjuangan, Lina, Farah, dan Hesti atas ketulusan hati,
kebersamaan, dukungan, dan bantuannya selama ini, teman-teman kimia 40 khususnya
Nana, Rahma, Ita, dan Sabet atas bantuan serta ide-idenya dalam penyelesaian karya
ilmiah ini, pada Ibu Mala atas bantuannya, dan kepada saudara-saudaraku di MSC atas
doa, semangat dan ukhuwah.
Semoga karya ilmiah ini bermanfaat.
Bogor, Juni 2008
Chintya Galuh Tri Wardani
RIWAYAT HIDUP
Penulis dilahirkan di Surabaya pada tanggal 31 Desember 1984 dari Bapak H.
Suwarto Utomo dan Ibu Hj. Sri Rejeki. Penulis merupakan anak ketiga dari empat
bersaudara.
Tahun 2003 penulis lulus dari SMU Negeri 74 Jakarta dan pada tahun yang sama
lulus seleksi masuk IPB melalui jalur Undangan Seleksi Masuk IPB. Penulis memilih
Departemen Kimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam.
Selama mengikuti perkuliahan, penulis aktif sebagai anggota Imasika periode
2005/2006 dan anggota DKM Al Ghifari sebagai staf Departemen Dompet Umat periode
2004/2005 dan Koordinator akhwat Departemen Sosial periode 2005/2006. Pada tahun
2006 penulis melaksanakan Praktik Kerja Lapangan di Laboratorium Pusat Sarana
Dampak Lingkungan Serpong.
DAFTAR ISI
Halaman
DAFTAR TABEL ..................................................................................................... viii
DAFTAR GAMBAR ................................................................................................ viii
DAFTAR LAMPIRAN ............................................................................................. viii
PENDAHULUAN ....................................................................................................
1
TINJAUAN PUSTAKA
Tempuyung ....................................................................................................
Meniran ..........................................................................................................
Xantin Oksidase .............................................................................................
Gout ...............................................................................................................
Flavonoid .......................................................................................................
1
2
2
3
4
BAHAN DAN METODE
Bahan dan Alat.................................................................................................
Metode Penelitian ............................................................................................
4
4
HASIL DAN PEMBAHASAN
Kadar Air ....................................................................................................... 6
Ekstraksi ......................................................................................................... 6
Uji Fitokimia .................................................................................................. 6
Uji Toksisitas Larva Udang ............................................................................. 7
Uji Inhibisi Ekstrak Kasar terhadap Aktivitas Xantin Oksidase ....................... 7
Uji Statistik .................................................................................................... 10
SIMPULAN DAN SARAN
Simpulan ......................................................................................................... 11
Saran ............................................................................................................... 11
DAFTAR PUSTAKA ................................................................................................ 11
LAMPIRAN ............................................................................................................. 13
DAFTAR TABEL
Halaman
1 Uji Fitokimia ekstrak air tempuyung dan meniran .................................................
7
2 Uji Fitokimia ekstrak etanol tempuyung dan meniran ............................................
7
3 Uji Fitokimia ekstrak flavonoid tempuyung dan meniran .......................................
7
4 Nilai LC50 ekstrak tempuyung dan meniran terhadap A. salina .............................
7
5 Persamaan linear ekstrak tempuyung dan meniran ................................................ 10
6 Nilai IC50 ekstrak tempuyung dan meniran ........................................................... 10
DAFTAR GAMBAR
Halaman
1 Tempuyung (Sonchus arvensis) ............................................................................
1
2 Meniran (Phyllanthus niruri) ................................................................................
2
3 Skema reaksi xantin oksidase yang mengkonversi hipoxantin menjadi xantin dan
asam urat...............................................................................................................
3
4 Skema reaksi xantin oksidase yang dapat dihambat oleh alopurinol dalam
pembentukan asam urat .........................................................................................
4
5 Struktur umum senyawa flavonoid.........................................................................
4
6 Persen inhibisi enzim dari ekstrak air meniran terhadap xantin oksidase dalam
berbagai konsentrasi..............................................................................................
8
7 Persen inhibisi enzim dari ekstrak air tempuyung terhadap xantin oksidase dalam
berbagai konsentrasi..............................................................................................
8
8 Persen inhibisi enzim dari ekstrak etanol meniran terhadap xantin oksidase dalam
berbagai konsentrasi..............................................................................................
9
9 Persen inhibisi enzim dari ekstrak etanol tempuyung terhadap xantin oksidase
dalam berbagai konsentrasi....................................................................................
9
10 Persen inhibisi enzim dari ekstrak flavonoid meniran terhadap xantin oksidase
dalam berbagai konsentrasi....................................................................................
9
11 Persen inhibisi enzim dari ekstrak flavonoid tempuyung terhadap xantin oksidase
dalam berbagai konsentrasi....................................................................................
9
12 Persen inhibisi terbaik dari seluruh ekstrak dan kontrol positif terhadap xantin
oksidase ............................................................................................................... 10
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
1 Bagan alir penelitian ............................................................................................ 14
2 Uji toksisitas dengan larva udang A. salina............................................................ 15
3 Uji Inhibisi aktivitas xantin oksidase ..................................................................... 17
4 Kadar air tempuyung dan meniran ......................................................................... 18
5 Aktivitas ekstrak tempuyung dan meniran terhadap larva A. salina ........................ 19
6 Pembuatan kurva standar ....................................................................................... 20
7 Data hasil uji enzimatis berbagai ekstrak ............................................................... 21
8 Perhitungan statistik ekstrak tempuyung dan meniran ............................................ 25
PENDAHULUAN
Penyakit asam urat, biasa juga dikenal
sebagai gout, merupakan suatu penyakit
akibat terjadinya penimbunan kristal
mononatrium urat di dalam tubuh sehingga
menyebabkan nyeri sendi (artritis gout),
benjolan-benjolan
pada
bagian-bagian
tertentu dari tubuh (tofi), serta gangguan dan
batu pada saluran kemih. Kejadian artritis
gout dalam beberapa dasawarsa terakhir ini
baik di negara-negara maju maupun yang
sedang berkembang semakin meningkat
terutama pada pria usia 40-50 tahun. Di
Amerika, gout menyerang lebih dari 5 juta
penduduk (Yu 2006).
Obat sintetik yang biasa dikonsumsi
untuk mengobati asam urat oleh masyarakat
adalah alopurinol yang menginhibisi
aktivitas xantin oksidase. Xantin oksidase
mengkatalisis oksidasi xantin menjadi asam
urat. Penggunaan alopurinol yang terlalu
sering atau berlebihan dapat menimbulkan
efek samping, yaitu hepatitis, gangguan
pencernaan, timbulnya ruam di kulit,
berkurangnya jumlah sel darah putih, dan
kerusakan hati. Oleh sebab itu, diperlukan
obat yang lebih aman dengan harga
terjangkau.
Penelitian mengenai khasiat tanaman
obat sebagai anti-asam urat melalui
mekanisme inhibisi enzim xantin oksidase
telah banyak dilakukan. Di Cina, Conyza
bonariensis dengan pelarut metanol dapat
menginhibisi xantin oksidase dengan daya
inhibisi yang lebih besar dari 50% (Kong et
al. 2000), tanaman obat asli India, Coccinia
grandis dan Vitex negundo juga dapat
menginhibisi xantin oksidase secara in vitro
dan in vivo (Umamaheswari et al. 2007),
selain itu spesies Lychnopora dari Brazil
juga dapat menginhibisi xantin oksidase
dengan daya inhibisi di atas 60% (Filha et
al. 2006).
Beberapa tanaman obat asli Indonesia
juga terbukti dapat menginhibisi xantin
oksidase, seperti sidaguri yang ekstrak
flavonoidnya dapat menginhibisi sampai
55.29% (Iswantini & Darusman 2003),
seledri (Rhamdani 2004) dan gabungan
ekstrak sidaguri dan seledri diteliti lebih
lanjut
untuk
mengetahui
efek
penghambatannya terhadap xantin oksidase
(Iswantini et al. 2005). Hasil yang didapat,
yaitu gabungan kedua ekstrak dapat
menginhibisi enzim xantin oksidase
melebihi daya inhibisi alopurinol atau
produk komersial lainnya. Gabungan ekstrak
juga menunjukan efek yang signifikan
terhadap penurunan kadar asam urat pada
tikus.
Penelitian
lain
yang
dapat
membuktikan khasiat tanaman obat asli
Indonesia lainnya sebagai anti-asam urat
sangat perlu dilakukan mengingat bahwa
beberapa tanaman obat asli Indonesia
berpotensi untuk mengobati gout.
Tempuyung merupakan salah satu jenis
tanaman obat potensial di Indonesia yang
sering dikonsumsi untuk obat. Tempuyung
mengandung ion-ion mineral dan beberapa
flavonoid yang diduga dapat menghambat
xantin oksidase (Chairul 1999). Meniran
juga merupakan tanaman yang kandungan
utamanya ialah flavonoid dan glikosida
flavonoid. Data ilmiah pendukung yang
mengungkapkan khasiat tempuyung dan
meniran sebagai biomedicine masih sedikit.
Berdasarkan penelusuran, belum ada paten
yang menyebutkan khasiat tempuyung dan
meniran sebagai anti-asam urat.
Kandungan tempuyung dan meniran
telah diteliti sebelumnya (Chairul 1999).
Oleh karena itu, untuk membuktikan
penelitian sebelumnya, pada penelitian ini
dilakukan uji inhibisi ekstrak tempuyung
dan meniran terhadap xantin oksidase secara
in vitro untuk mengetahui potensinya
sebagai anti-asam urat.
TINJAUAN PUSTAKA
Tempuyung (Sonchus arvensis)
Tempuyung (Gambar 1) termasuk
tanaman obat asli Indonesia dari famili
Asteraceae. Tanaman ini merupakan
tumbuhan
herba
menahun,
tegak,
mengandung getah, mempunyai akar
tunggang yang kuat (Rusdeyti 1985),
tumbuh liar di Jawa, yaitu di daerah yang
banyak hujan pada ketinggian 50-1650 m di
atas permukaan laut. Tempuyung tumbuh di
tempat terbuka seperti di pematang, dan di
pinggir saluran air (Heyne 1987).
Gambar 1 Tempuyung (Sonchus arvensis).
Tempuyung termasuk dalam divisi
Spermatophyta, sub divisi Angiospermae,
kelas Dicotyledonae, bangsa Asterales, suku
Asteraceae, marga Sonchus, dan jenis
arvensis. Daun tempuyung di Indonesia
menurut Sardjito dapat digunakan sebagai
obat untuk "menghancurkan" batu ginjal
(Chairul 1999). Kelarutan batu ginjal oleh
tempuyung diduga melalui efek diuretiknya.
Daun tempuyung mengandung ion-ion
mineral cukup tinggi terutama K+ dan Na+
yang dapat mengatur keseimbangan
elektrolit di dalam tubuh sehingga
mempermudah keluarnya air seni.
Kandungan kimia yang terdapat di dalam
daun tempuyung adalah ion-ion mineral,
antara lain silika, kalium, magnesium,
natrium, dan senyawa organik seperti
flavonoid
(kaempferol,
luteolin-7-Oglukosida, dan apigenin-7-O-glukosida),
kumarin (skepoletin), taraksasterol, inositol,
serta asam fenolat (sinamat, kumarat, dan
vanilat). Kandungan flavonoid total di dalam
daun tempuyung ialah 0.1044% (Chairul
1999). Menurut Cos (1998), flavonoid
apigenin-7-O-glukosida adalah salah satu
golongan flavonoid yang berpotensi cukup
baik untuk menghambat kerja enzim xantin
oksidase dan superoksidase.
Meniran (Phyllanthus niruri)
Meniran (Gambar 2) merupakan salah
satu jenis tumbuhan yang sering digunakan
oleh masyarakat untuk obat. Tumbuhan ini
tumbuh liar di hutan, ladang, semak-semak,
sepanjang jalan, pinggir sungai, pinggir
pantai, tanah berumput, gembur atau
berbatuan pada dataran rendah sampai pada
ketinggian 1000 m di atas permukaan laut.
Secara taksonomi, meniran diklasifikasikan
dalam divisi Spermatophyta, sub divisi
Angiospermae, kelas Dicotyledone, bangsa
Geraniales, suku Euphorbiaceae, marga
Phylianthus dan jenis niruri.
Meniran berkhasiat sebagai antivirus.
Senyawaan yang ditemukan pada meniran
antara lain adalah triterpenoid, flavonoid,
tanin, alkaloid, dan asam fenolat. Secara
empiris, rebusan daun meniran sering
dimanfaatkan secara tradisional untuk
mengobati penyakit hati, diuretik, obat
batuk, antidiare, dan sebagai tonik lambung.
Hasil penelitian menunjukkan bahwa
meniran menghambat DNA polimerase dari
virus hepatitis B (Bermawie 2006).
Penelitian yang dilakukan oleh Nurdiana dan
Kulsum (2001) menunjukkan bahwa
meniran juga dapat menghambat kerusakan
hati dan antioksidan secara in vivo. Selain
itu, menurut Ma'at (2005), ekstrak meniran
dapat meningkatkan sistem imun atau
kekebalan tubuh yang sangat dibutuhkan
untuk penderita penyakit infeksi. Ekstrak ini
telah lulus uji praklinis (uji keamanan) dan
uji klinis (pembuktian khasiatnya). Menurut
Chairul (1999), meniran mengandung
senyawa-senyawa kimia golongan lignan,
antara lain filantin, hipofilantin, niranin,
nirtetralin, dan fitetralin. Beberapa senyawa
lignan baru juga telah diisolasi dari
Phyllanthus
niruri
yaitu,
seco-4hidroksilintetralin,
seco-isoarisiresinol
trimetil
eter,
hidroksinirantin,
dibenzilbutirolakton, nirfilin, dan neolignan
(filnirurin).
Akar dan daun Meniran kaya senyawaan
flavonoid, antara lain, kuersetin, keursetrin,
isokuersetrin, astragalin dan rutin. Di
samping itu, dilaporkan pula beberapa
glikosida flavonoid dan senyawa flavonon
baru.
Dari
minyak
bijinya
telah
diidentifikasi beberapa asam lemak, yaitu
asam ricinoleat, asam linoleat, dan asam
linolenat. Selain itu, meniran juga
mengadung kalium, damar, dan zat samak.
Karena meniran mempunyai kandungan
utama senyawa golongan flavonoid dan
glikosida flavonoid, beberapa senyawa
flavonoid tersebut memberikan efek
menginhibisi terhadap xantin oksidase dan
superoksidase (Chairul 1999).
Xantin Oksidase
Gambar 2 Meniran (Phyllanthus niruri).
Xantin oksidase merupakan enzim yang
tersebar luas dalam beberapa spesies dari
bakteri hingga manusia dan juga terdapat
pada jaringan mamalia. Di dalam tubuh,
xantin oksidase ditemukan di sel hati dan sel
otot. Tetapi keberadaan xantin oksidase
dalam darah mengindikasikan adanya
kerusakan fungsi hati. Xantin oksidase
mengkatalisis oksidase hipoxantin dan
xantin menjadi asam urat yang berperan
penting dalam timbulnya gout. Selama
proses oksidasi, oksigen bertindak sebagai
akseptor elektron menghasilkan radikal
superoksida (O2*-) dan hidrogen peroksida
(Ramdhani 2004).
Gambar 3
Skema reaksi xantin oksidase
yang
mengkonversi
hipoxantin menjadi xantin dan
asam urat.
Xantin oksidase juga dapat mengkatalisis
reduksi nitrat dan nitrit menjadi nitrit oksida
sekaligus membentuk radikal superoksida
yang dapat menyebabkan peradangan.
Meningkatnya aktivitas xantin oksidase
dalam mengkatalisis xantin menjadi asam
urat akan menyebabkan bertambahnya
produksi asam urat dalam darah. Produksi
asam urat berlebih dapat menyebabkan
hiperurisemia, namun asam urat akan
disimpan di dalam persendian sehingga
menyebabkan peradangan dan gout.
Gout
Gout didefinisikan sebagai penyakit atau
sindrom yang disebabkan oleh adanya
pembengkakan atau inflamasi karena
menumpuknya kristal monosodium urat
pada tulang sendi sebagai akibat dari
tingginya kadar asam urat dalam darah
(Johnstone 2005). Gout merupakan penyakit
yang biasa ditemui di seluruh dunia dan
sebagian besar disebabkan oleh deposisi
monosodium kristal urat dalam tulang sendi
dan jaringan otot lainnya.
Kelebihan asam urat atau hiperurisemia
terjadi apabila tingkat asam urat dalam darah
> 7 mg/dl. Hiperurisemia dapat disebabkan
oleh kelebihan produksi asam urat atau yang
lebih jauh lagi biasanya disebabkan oleh
ekskresi yang tidak efisien dari ginjal (Luck
2005). Serangan gout dapat dicegah dengan
gaya hidup yang sehat dari pasien. Jika
pasien kelebihan berat badan maka
dianjurkan
untuk
mengurangi
berat
badannya dengan bertahap sesuai dengan
tingkat kemampuannya. Penurunan berat
badan secara cepat dapat meningkatkan
asam urat yang dapat menyebabkan
serangan gout (Johnstone 2005).
Gout sering dibagi menjadi empat
tingkat
gejala,
yaitu
hiperurisemia
asimptomatik, radang sendi gout akut, gout
interkritikal, dan gout tofi. Hiperirusemia
asimptomatik dicirikan oleh kondisi kadar
asam urat abnormal tinggi tanpa radang
sendi gout. Pada kondisi ini, monosodium
urat cenderung terbentuk dan mengarahkan
pada terjadinya gout. Keadaan ini dianggap
sebagai tahap pertama dari gangguan dan
sering
terjadi
pada
umur
30-an,
pengobatannya hanya dianjurkan untuk
mengubah gaya hidup baik itu pola
konsumsi maupun pola kegiatan. Radang
sendi gout dicirikan oleh serangan sakit
yang
sangat
tiba-tiba,
disertai
pembengkakan dan sukar digerakkannya
sendi yang diserang. Tiga perlakuan yang
dapat diterapkan untuk serangan gout akut,
yaitu pengobatan dengan obat antiinflamasi
nonsteroid dengan kortikosteroid dan
kolkisin. Gout interkritikal menggambarkan
periode antar serangan. Serangan gout
pertama biasanya diikuti oleh hilangnya
seluruh rasa sakit (gejala) tetapi jika
dibiarkan tidak diobati, gout akan datang
lagi pada waktu berikutnya. Gout kronis
(tofi) terjadi jika gout akut terus menerus
tidak diobati, maka gout akut dapat menjadi
gout kronis yang menyebabkan perubahan
bentuk. Kristal asam urat yang terus
menerus terkumpul di bawah kulit sekitar
persendian dan ujung otot menyebabkan
kerusakan dan meningkatnya kekakuan
sendi. Gumpalan keras dari kristal urat (tofi)
terkumpul di bawah kulit telinga atau di
sekitar siku. Bila tidak diobati, tophus pada
tangan dan kaki dapat pecah dan
mengeluarkan suatu kristal yang seperti
kapur. Pencegahan serangan gout berulang
dan tofi diberikan setelah serangan gout akut
berakhir. Obat yang biasa diberikan adalah
obat urikosurik ginjal dan alopurinol
(Iswantini 2003).
Alopurinol dapat menurunkan kadar
asam urat dengan menghambat biosintesis
purin khususnya pada reaksi perubahan
hipoxantin menjadi xantin oleh enzim xantin
oksidase. Struktur molekul obat ini mirip
dengan struktur enzim xantin oksidase
sehingga
dapat
menyainginya
dan
menghambat produksi asam urat.
Gambar 5
flavonoid
Struktur
umum senyawa
BAHAN DAN METODE
Bahan dan Alat
Bahan yang digunakan ialah tempuyung,
meniran, enzim xantin oksidase, xantin,
pereaksi Mayer, Wagner, dan Dragendorf.
Alat yang digunakan ialah spektrofotometer.
Metode Penelitian
Gambar 4
Skema reaksi xantin oksidase
yang dapat dihambat oleh
alopurinol dalam pembentukan
asam urat.
Flavonoid
Flavonoid merupakan golongan senyawa
polifenol yang terdiri atas 15 atom karbon
sebagai kerangka dasarnya. Studi in vitro
menunjukkan bahwa beberapa flavonoid
terutama luteolin dan apigenin dapat juga
bekerja sebagai inhibitor xantin oksidase
dengan daya inhibisi yang hampir sama
dengan Alopurinol (Cos et al. 1998).
Flavonoid kuersetin, kuersitin, mirisitin, dan
miresetinasal tanaman salam juga berkhasiat
dalam menghambat kerja xantin oksidase
(Schemeda et al. 1987). Flavonoid krisin,
baikelin, isorhamnetin, dan ester asam kafeat
juga tergolong efektif (Nakanishi 1990).
Inhibitor lain ialah antosianidin dan
proantisianidin yang daya inhibisinya
rendah.
Adanya ikatan rangkap pada flavonoid
jenis flavonol dan flavone memungkinkan
terjadinya reaksi adisi (oksidasi oleh xantin
oksidase), ikatan rangkap pada atom C2
dengan C3 akan mengakibatkan posisi ring
B co-planar terhadap ring A sehingga lebih
memudahkan dalam berinteraksi dengan
enzim xantin oksidase. Selain itu juga gugus
hidroksil pada flavonoid turut berperan
dalam efek penghambatan (Cos et al. 1998).
Penelitian ini terdiri dari beberapa
tahap seperti penentuan kadar air, ekstraksi,
uji fitokimia, uji toksisitas A. salina, uji
inhibisi terhadap xantin oksidase dan uji
statistik. Diagram alir penelitian disajikan
dalam Lampiran 1.
Penentuan kadar air
Pinggan porselen dikeringkan pada suhu
105 °C selama 30 menit. Pinggan porselen
yang
telah
dikeringkan
kemudian
didinginkan dalam desikator dan ditimbang.
Serbuk tempuyung kering sebanyak 3 gram
dimasukkan ke dalam pinggan porselen,
dikeringkan pada suhu 105 °C selama 3 jam
lalu didinginkan dalam desikator dan
ditimbang. Serbuk tempuyung kering dalam
cawan dikeringkan lagi selama 3 jam pada
suhu 105 °C, serta didinginkan dan
ditimbang kembali. Prosedur dilakukan
secara berulang-ulang hingga diperoleh
bobot yang stabil.
Ekstraksi air
Tempuyung dan meniran kering masingmasing diekstrak secara maserasi dengan air,
disaring, dan filtrat yang dihasilkan
dikeringkan dengan penguap putar hingga
diperoleh residu kering.
Ekstraksi etanol
Tempuyung dan meniran kering masingmasing diekstraksi dengan etanol, disaring
dan dipekatkan dengan penguap putar.
Ekstraksi flavonoid
Serbuk tanaman kering direndam dalam
pelarut metanol-air dengan nisbah 9:1 dan
1:1. Masing-masing ekstrak digabungkan,
disaring, dan filtratnya diuapkan dengan
penguap putar hingga sepertiganya. Filtrat
yang didapat dipartisi dengan menggunakan
heksana
dan
kloroform
untuk
menghilangkan lemak dan senyawa-senyawa
yang memiliki kepolaran rendah dan
diuapkan kembali dengan penguap putar.
Uji fitokimia
Uji alkaloid. Sebanyak 1 g contoh
dilarutkan dalam 10 ml kloroform dan
beberapa tetes NH4OH kemudian disaring
dan filtrat dimasukkan ke dalam tabung
reaksi bertutup. Ekstrak kloroform dalam
tabung reaksi dikocok dengan 10 tetes
H2SO4 2 M dan lapisan asamnya dipisahkan
dalam tabung reaksi yang lain. Lapisan asam
ini diteteskan pada lempeng tetes dan
ditambahkan pereaksi Mayer, Wagner, dan
Dragendorf yang akan menimbulkan
endapan warna berturut-turut putih, coklat,
dan merah jingga.
Uji triterpenoid dan steroid. Sebanyak
1 g contoh dilarutkan dengan 25 ml etanol
panas (50 °C), disaring ke dalam pinggan
porselen, dan diuapkan sampai kering.
Residu ditambahkan eter dan ekstrak eter
dipindahkan ke dalam lempeng tetes serta
ditambahkan 3 tetes anhidrida asam asetat
dan 1 tetes H2SO4 pekat (uji LiebermanBuchard). Warna merah atau ungu
menunjukkan adanya triterpenoid sedangkan
warna hijau atau biru menunjukkan adanya
steroid.
Uji saponin dan flavonoid. Sebanyak 1
g masing-masing contoh yang ingin diuji
dimasukkan dalam gelas piala, ditambahkan
100 ml air panas, dan dididihkan selama 5
menit. Setelah itu, disaring dan filtratnya
digunakan untuk pengujian. Uji saponin
dilakukan dengan pengocokan 10 ml filtrat
dalam tabung reaksi tertutup selama 10 detik
lalu dibiarkan selama 10 menit. Saponin
ditunjukkan dengan terbentuknya buih
stabil. Sebanyak 10 ml filtrat lain
ditambahkan 0.5 gram serbuk magnesium, 2
ml alkohol klorhidrat (campuran HCl 37%
dan etanol 95% dengan perbandingan 1:1),
dan 2 ml amil alkohol kemudian dikocok
dengan kuat. Terbentuknya warna merah,
kuning, atau jingga pada lapisan amil
alkohol menunjukkan adanya flavonoid.
Uji tanin. Sebanyak 1 g contoh
ditambah 100 ml air panas, dididihkan
selama 5 menit, dan disaring. Sebagian
filtrat yang diperoleh ditambah larutan
besi(III) klorida. Terbentuknya warna hitam
kehijauan menunjukkan tanin.
Uji toksisitas ekstrak terhadap A. salina
Kista A. salina ditimbang sebanyak 50
mg, dimasukkan ke dalam wadah yang berisi
air laut yang sudah disaring, dan diaerasi
selama 48 jam di bawah pencahayaan lampu
agar menetas sempurna. Larva yang sudah
menetas diambil untuk digunakan dalam uji
toksisitas terhadap A. salina.
Sebanyak 10 ekor larva A. Salina
dimasukkan ke dalam vial yang berisi air
laut lalu ditambahkan larutan ekstrak (air,
etanol, alkaloid, dan flavonoid) sehingga
konsentrasi akhirnya menjadi 1000, 100, dan
10 ppm. Dilakukan dengan bantuan kaca
pembesar. Pengolahan persen mortalitas
kumulatif digunakan analisis konsentrasi
letal 50% (LC50) dengan selang kepercayaan
95% (Lampiran 2).
Pembuatan kurva standar
Larutan substrat (xantin) dibuat pada
berbagai konsentrasi (0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5,
0.6, 0.7 ppm). Kemudian diukur serapannya
menggunakan spektrofotometer UV pada
panjang gelombang 262 nm. Setelah itu
dibuat kuva hubungan antara konsentrasi
dengan serapan, serta persamaan linearnya.
Persamaan linear ini akan digunakan untuk
menghitung aktivitas enzim xantin oksidase.
Uji inhibisi aktivitas xantin oksidase
Ekstrak tanaman tempuyung dan
meniran masing-masing dimasukkan ke
dalam tabung reaksi dengan beragam
konsentrasi berdasarkan hasil uji BSLT,
ditambah larutan bufer kalium fosfat 50 mM
pH 7.5 sampai volumenya menjadi 1.9 ml.
Campuran kemudian ditambah 1 ml xantin
2.1 mM dan xantin oksidase 0.1 unit/ml
sebanyak 0.1 ml diinkubasi pada suhu 20 °C
selama 45 menit. Setelah diinkubasi,
campuran segera ditambahkan HCl 0.58 M
sebanyak 1 ml untuk menghentikan
reaksinya. Campuran diukur serapannya
menggunakan spektrofotometer UV pada
panjang gelombang 262 nm (Lampiran 3).
HASIL DAN PEMBAHASAN
Kadar Air
Sampel tempuyung dan meniran yang
digunakan pada penelitian ini berbentuk
simplisia yang telah kering. Serbuk
tempuyung dan meniran ditentukan kadar
airnya agar dapat diperkirakan cara
penyimpanan terbaik bagi sampel untuk
menghindari pengaruh aktivitas mikroba
(jamur). Kadar air yang diperoleh dari
serbuk tanaman tempuyung dan meniran
masing-masing adalah 10.71 dan 8.03%
(Lampiran 4). Dari hasil yang didapatkan,
meniran relatif stabil dari serangan mikroba
karena kadar air yang didapat kurang dari
10%,
sedangkan
tempuyung
mudah
terserang mikroba karena kadar airnya lebih
besar dari 10%.
Ekstraksi
Ekstraksi
dilakukan
dengan
menggunakan berbagai macam pelarut, yaitu
air, etanol serta penggunaan metanol dalam
mengekstrak
senyawa
flavonoid.
Penggunaan air dimaksudkan untuk melihat
toksisitas dan aktivitas inhibisi xantin
oksidase karena mengingat biasanya air
selalu digunakan oleh masyarakat sebagai
pelarut dalam menyeduh dan merebus obat.
Rendemen ekstrak air meniran dan
tempuyung masing-masing, yaitu 6.49% dan
7.95%. Selanjutnya, pelarut yang digunakan
adalah etanol dikarenakan etanol merupakan
pelarut yang baik untuk ekstraksi
pendahuluan karena etanol memiliki dua
gugus yang berbeda kepolarannya, yaitu
gugus hidroksil yang bersifat polar dan
gugus alkil yang bersifat nonpolar. Adanya
dua gugus ini diharapkan senyawa dengan
tingkat kepolaran yang berbeda akan
terekstrak ke dalam etanol. Rendemen
ekstrak etanol meniran dan tempuyung
masing-masing, yaitu 14.66 dan 17.15%.
Ekstraksi yang dilakukan berikutnya
adalah flavonoid dengan menggunakan
metanol. Rendemen ekstrak flavonoid
meniran dan tempuyung masing-masing,
yaitu 9 dan 10%. Pada ekstraksi ini
dilakukan
partisi
cair-cair
dengan
menggunakan heksana untuk menghilangkan
lemak dan kloroform untuk menghilangkan
senyawa-senyawa yang memiliki kepolaran
rendah. Proses ekstraksi ini dilakukan untuk
melihat
aktivitas
flavonoid
dalam
menginhibisi xantin oksidase karena
berdasarkan penelitian sebelumnya diketahui
bahwa flavonoid dapat menyembuhkan
penderita gout dengan cara penurunan kadar
asam urat, yaitu dengan menghambat enzim
xantin oksidase (Cos et al. 1998; Hoorn
2002). Beberapa flavonoid terutama luteolin
(Cos et al. 1998) dapat bekerja sebagai
inhibitor xantin oksidase, selain itu
berdasarkan penelitian Lin et al. (2002),
kuersetin, myrisetin genistein, dan isovitexin
dapat menginhibisi
xantin oksidase.
Apigenin juga dapat menginhibisi xantin
oksidase dengan efek inhibisi yang
sebanding dengan alopurinol.
Uji Fitokimia
Senyawa metabolit sekunder dalam
ekstrak tanaman tempuyung dan meniran
dapat diketahui melalui uji fitokimia. Uji
yang dilakukan meliputi uji flavonoid,
alkaloid, tanin, saponin, steroid, dan
triterpenoid. Uji pendahuluan ini dilakukan
untuk mengetahui ada tidaknya flavonoid di
dalam ekstrak dan senyawa-senyawa lain
yang
kemungkinan
berperan
dalam
menginhibisi xantin oksidase.
Hasil uji fitokimia
dari serbuk
tempuyung dan meniran (Tabel 1)
menunjukkan bahwa serbuk kedua tanaman
mengandung tanin dan flavonoid. Akan
tetapi intensitas warna senyawa flavonoid
dalam ekstrak tempuyung
lebih besar
dibandingkan dengan meniran. Hal ini
diduga karena senyawa flavonoid yang
terkandung dalam tempuyung lebih banyak.
Selain itu dapat diduga karena jenis
flavonoid
yang
terkandung
dalam
tempuyung berbeda dengan senyawa
flavonoid yang terkandung dalam meniran.
Berdasarkan penelitian sebelumnya,
meniran mengandung flavonoid jenis
kuersetin,
keursetrin,
isokuersetrin,
astragalin dan rutin, sedangkan tempuyung
mengandung jenis flavonoid kaempferol,
luteolin-7-O-glukosida dan apigenin-7-Oglukosida (Chairul 1999). Tabel 2
menunjukkan bahwa senyawa metabolit
sekunder yang terkandung dalam ekstrak
etanol tempuyung adalah tanin, flavonoid,
steroid, dan triterpenoid. Ekstrak etanol
meniran juga mengandung senyawa
metabolit sekunder yang sama dengan
ekstrak etanol tempuyung, kecuali steroid.
Ekstrak meniran uji steroid menunjukkan
hasil yang negatif terhadap uji steroid.
Tabel 3 menunjukkan golongan senyawa
yang terdapat pada ekstrak flavonoid
tempuyung dan meniran. Dari tabel
diketahui bahwa kedua ekstrak tidak hanya
mengandung
flavonoid
tapi
juga
mengandung tanin. Hal ini diduga karena
tanin termasuk senyawa yang memiliki
kepolaran tinggi seperti flavonoid, Sehingga
tidak hilang pada saat dilakukan partisi
(pemisahan) cair-cair untuk menghilangkan
senyawa-senyawa yang memiliki kepolaran
rendah.
Tabel 1 Uji fitok
SEBAGAI ANTIASAM URAT: AKTIVITAS
INHIBISINYA TERHADAP XANTIN OKSIDASE
CHINTYA GALUH TRI WARDANI
DEPARTEMEN KIMIA
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
BOGOR
2008
ABSTRAK
CHINTYA GALUH TRI WARDANI. Potensi Ekstrak Tempuyung dan Meniran sebagai
Antiasam Urat: Aktivitas Inhibisinya terhadap Xantin Oksidase. Dibimbing oleh DYAH
ISWANTINI PRADONO dan LATIFAH KOSIM DARUSMAN.
Penyakit gout merupakan suatu penyakit akibat terjadinya penimbunan kristal
mononatrium urat di dalam tubuh sehingga menyebabkan nyeri sendi (arthritis gout).
Tempuyung dan meniran merupakan tanaman obat asli Indonesia yang biasa digunakan
untuk menurunkan kadar asam urat dalam tubuh. Berdasarkan kandungannya, kedua
tanaman ini diduga dapat menginhibisi xantin oksidase. Dalam penelitian ini ekstrak
tempuyung dan meniran (etanol, air, dan flavonoid) diuji aktivitas inhibisinya terhadap
xantin oksidase pada kondisi optimum. Aktivitas enzim diukur pada suhu 20 °C, pH 7.5,
0.7 mM xantin sebagai substrat, 0.1 unit/ml enzim xantin oksidase dan diinkubasi selama
45 menit. Dari beberapa ekstrak tempuyung dan meniran, nilai LC50 tertinggi dan
terendah adalah ekstrak flavonoid tempuyung (2281 ppm) dan ekstrak air tempuyung
(1252 ppm). Semua ekstrak dapat menghambat aktivitas xantin oksidase. Persen inhibisi
tertinggi adalah ekstrak etanol meniran (150 ppm) dengan persen inhibisi sebesar 53.71%.
Kandungan ekstrak etanol berdasarkan uji fitokimia adalah flavonoid, triterpenoid, dan
tanin.
ABSTRACT
CHINTYA GALUH TRI WARDANI. Potention of Tempuyung and Meniran Extract as
Anti Uric Acid: Inhibition Activity of Xanthine Oxidase. Under the direction of DYAH
ISWANTINI PRADONO and LATIFAH KOSIM DARUSMAN.
Gout is certain a consequence indicated by accumulation of monosodium urate in
body causing painful joint (gout arthritis). Tempuyung and meniran are original plant of
Indonesian commonly used to reduce uric acid contents in body. Based on their contents,
it may be inhibit xanthine oxidase. In the research, tempuyung and meniran extracts
(ethanol, water, and flavonoid) were assayed for xanthine oxidase inhibition at optimum
condition. The activity enzyme was measured at 20 °C, pH 7.5, 0.7 mM xanthine as
substrate, 0.1 unit/ml xanthine oxidase, and were incubated for 45 min. From several
extracts of tempuyung and meniran, the highest and the lowest of LC50 value were
flavonoid extract of tempuyung (2281 ppm) and water extract of tempuyung (1252 ppm).
All extracts examined could inhibit the activity of xanthine oxidase. The highest
inhibition percent was ethanol extract of meniran (150 ppm) with percent of inhibition of
53.71%. Ethanol extract of meniran contents based on phytochemistry test are flavonoid,
triterpenoid, and tannin.
POTENSI EKSTRAK TEMPUYUNG DAN
MENIRAN SEBAGAI ANTIASAM URAT: AKTIVITAS
INHIBISINYA TERHADAP XANTIN OKSIDASE
CHINTYA GALUH TRI WARDANI
Skripsi
sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar
Sarjana Sains pada
Departemen Kimia
DEPARTEMEN KIMIA
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
BOGOR
2008
Judul Skripsi : Potensi Ekstrak Tempuyung dan Meniran sebagai Antiasam Urat:
Aktivitas Inhibisinya terhadap Xantin Oksidase
Nama
: Chintya Galuh Tri Wardani
NIM
: G44203020
Disetujui:
Pembimbing I
Pembimbing II
Dr. Dyah I Pradono, MAgr
NIP 131 956 706
Prof. Dr. Latifah K Darusman, MS
NIP 13053668
Diketahui:
Dekan Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam
Dr. drh. Hasim, DEA
NIP 131578806
Tanggal lulus:
PRAKATA
Alhamdulillah, puji dan syukur kehadiran Allah SWT atas segala rahmat dan
karunia-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan karya ilmiah ini. Judul yang dipilih
dalam penelitian ini adalah Potensi Ekstrak Tempuyung dan Meniran sebagai Antiasam
Urat: Aktivitas Inhibisinya terhadap Xantin Oksidase.
Terima kasih penulis ucapkan kepada Ibu Dr. Dyah Iswantini Pradono, MAgr dan
Ibu Prof. Dr. Latifah K Darusman, MS selaku pembimbing yang telah memberikan
bimbingan, pengarahan, serta semangat dalam penelitian dan penulisan karya ilmiah ini.
Di samping itu, penulis mengucapkan terima kasih kepada seluruh staf Kimia Analitik
dan seluruh staf Pusat Studi Biofarmaka yang telah membantu selama penelitian.
Ungkapan terima kasih penulis ucapkan pada papa, mama, beserta seluruh keluarga atas
segala doa, kasih sayang, dan dorongan semangat yang telah diberikan. Terima kasih
pada saudara-saudara seperjuangan, Lina, Farah, dan Hesti atas ketulusan hati,
kebersamaan, dukungan, dan bantuannya selama ini, teman-teman kimia 40 khususnya
Nana, Rahma, Ita, dan Sabet atas bantuan serta ide-idenya dalam penyelesaian karya
ilmiah ini, pada Ibu Mala atas bantuannya, dan kepada saudara-saudaraku di MSC atas
doa, semangat dan ukhuwah.
Semoga karya ilmiah ini bermanfaat.
Bogor, Juni 2008
Chintya Galuh Tri Wardani
RIWAYAT HIDUP
Penulis dilahirkan di Surabaya pada tanggal 31 Desember 1984 dari Bapak H.
Suwarto Utomo dan Ibu Hj. Sri Rejeki. Penulis merupakan anak ketiga dari empat
bersaudara.
Tahun 2003 penulis lulus dari SMU Negeri 74 Jakarta dan pada tahun yang sama
lulus seleksi masuk IPB melalui jalur Undangan Seleksi Masuk IPB. Penulis memilih
Departemen Kimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam.
Selama mengikuti perkuliahan, penulis aktif sebagai anggota Imasika periode
2005/2006 dan anggota DKM Al Ghifari sebagai staf Departemen Dompet Umat periode
2004/2005 dan Koordinator akhwat Departemen Sosial periode 2005/2006. Pada tahun
2006 penulis melaksanakan Praktik Kerja Lapangan di Laboratorium Pusat Sarana
Dampak Lingkungan Serpong.
DAFTAR ISI
Halaman
DAFTAR TABEL ..................................................................................................... viii
DAFTAR GAMBAR ................................................................................................ viii
DAFTAR LAMPIRAN ............................................................................................. viii
PENDAHULUAN ....................................................................................................
1
TINJAUAN PUSTAKA
Tempuyung ....................................................................................................
Meniran ..........................................................................................................
Xantin Oksidase .............................................................................................
Gout ...............................................................................................................
Flavonoid .......................................................................................................
1
2
2
3
4
BAHAN DAN METODE
Bahan dan Alat.................................................................................................
Metode Penelitian ............................................................................................
4
4
HASIL DAN PEMBAHASAN
Kadar Air ....................................................................................................... 6
Ekstraksi ......................................................................................................... 6
Uji Fitokimia .................................................................................................. 6
Uji Toksisitas Larva Udang ............................................................................. 7
Uji Inhibisi Ekstrak Kasar terhadap Aktivitas Xantin Oksidase ....................... 7
Uji Statistik .................................................................................................... 10
SIMPULAN DAN SARAN
Simpulan ......................................................................................................... 11
Saran ............................................................................................................... 11
DAFTAR PUSTAKA ................................................................................................ 11
LAMPIRAN ............................................................................................................. 13
DAFTAR TABEL
Halaman
1 Uji Fitokimia ekstrak air tempuyung dan meniran .................................................
7
2 Uji Fitokimia ekstrak etanol tempuyung dan meniran ............................................
7
3 Uji Fitokimia ekstrak flavonoid tempuyung dan meniran .......................................
7
4 Nilai LC50 ekstrak tempuyung dan meniran terhadap A. salina .............................
7
5 Persamaan linear ekstrak tempuyung dan meniran ................................................ 10
6 Nilai IC50 ekstrak tempuyung dan meniran ........................................................... 10
DAFTAR GAMBAR
Halaman
1 Tempuyung (Sonchus arvensis) ............................................................................
1
2 Meniran (Phyllanthus niruri) ................................................................................
2
3 Skema reaksi xantin oksidase yang mengkonversi hipoxantin menjadi xantin dan
asam urat...............................................................................................................
3
4 Skema reaksi xantin oksidase yang dapat dihambat oleh alopurinol dalam
pembentukan asam urat .........................................................................................
4
5 Struktur umum senyawa flavonoid.........................................................................
4
6 Persen inhibisi enzim dari ekstrak air meniran terhadap xantin oksidase dalam
berbagai konsentrasi..............................................................................................
8
7 Persen inhibisi enzim dari ekstrak air tempuyung terhadap xantin oksidase dalam
berbagai konsentrasi..............................................................................................
8
8 Persen inhibisi enzim dari ekstrak etanol meniran terhadap xantin oksidase dalam
berbagai konsentrasi..............................................................................................
9
9 Persen inhibisi enzim dari ekstrak etanol tempuyung terhadap xantin oksidase
dalam berbagai konsentrasi....................................................................................
9
10 Persen inhibisi enzim dari ekstrak flavonoid meniran terhadap xantin oksidase
dalam berbagai konsentrasi....................................................................................
9
11 Persen inhibisi enzim dari ekstrak flavonoid tempuyung terhadap xantin oksidase
dalam berbagai konsentrasi....................................................................................
9
12 Persen inhibisi terbaik dari seluruh ekstrak dan kontrol positif terhadap xantin
oksidase ............................................................................................................... 10
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
1 Bagan alir penelitian ............................................................................................ 14
2 Uji toksisitas dengan larva udang A. salina............................................................ 15
3 Uji Inhibisi aktivitas xantin oksidase ..................................................................... 17
4 Kadar air tempuyung dan meniran ......................................................................... 18
5 Aktivitas ekstrak tempuyung dan meniran terhadap larva A. salina ........................ 19
6 Pembuatan kurva standar ....................................................................................... 20
7 Data hasil uji enzimatis berbagai ekstrak ............................................................... 21
8 Perhitungan statistik ekstrak tempuyung dan meniran ............................................ 25
PENDAHULUAN
Penyakit asam urat, biasa juga dikenal
sebagai gout, merupakan suatu penyakit
akibat terjadinya penimbunan kristal
mononatrium urat di dalam tubuh sehingga
menyebabkan nyeri sendi (artritis gout),
benjolan-benjolan
pada
bagian-bagian
tertentu dari tubuh (tofi), serta gangguan dan
batu pada saluran kemih. Kejadian artritis
gout dalam beberapa dasawarsa terakhir ini
baik di negara-negara maju maupun yang
sedang berkembang semakin meningkat
terutama pada pria usia 40-50 tahun. Di
Amerika, gout menyerang lebih dari 5 juta
penduduk (Yu 2006).
Obat sintetik yang biasa dikonsumsi
untuk mengobati asam urat oleh masyarakat
adalah alopurinol yang menginhibisi
aktivitas xantin oksidase. Xantin oksidase
mengkatalisis oksidasi xantin menjadi asam
urat. Penggunaan alopurinol yang terlalu
sering atau berlebihan dapat menimbulkan
efek samping, yaitu hepatitis, gangguan
pencernaan, timbulnya ruam di kulit,
berkurangnya jumlah sel darah putih, dan
kerusakan hati. Oleh sebab itu, diperlukan
obat yang lebih aman dengan harga
terjangkau.
Penelitian mengenai khasiat tanaman
obat sebagai anti-asam urat melalui
mekanisme inhibisi enzim xantin oksidase
telah banyak dilakukan. Di Cina, Conyza
bonariensis dengan pelarut metanol dapat
menginhibisi xantin oksidase dengan daya
inhibisi yang lebih besar dari 50% (Kong et
al. 2000), tanaman obat asli India, Coccinia
grandis dan Vitex negundo juga dapat
menginhibisi xantin oksidase secara in vitro
dan in vivo (Umamaheswari et al. 2007),
selain itu spesies Lychnopora dari Brazil
juga dapat menginhibisi xantin oksidase
dengan daya inhibisi di atas 60% (Filha et
al. 2006).
Beberapa tanaman obat asli Indonesia
juga terbukti dapat menginhibisi xantin
oksidase, seperti sidaguri yang ekstrak
flavonoidnya dapat menginhibisi sampai
55.29% (Iswantini & Darusman 2003),
seledri (Rhamdani 2004) dan gabungan
ekstrak sidaguri dan seledri diteliti lebih
lanjut
untuk
mengetahui
efek
penghambatannya terhadap xantin oksidase
(Iswantini et al. 2005). Hasil yang didapat,
yaitu gabungan kedua ekstrak dapat
menginhibisi enzim xantin oksidase
melebihi daya inhibisi alopurinol atau
produk komersial lainnya. Gabungan ekstrak
juga menunjukan efek yang signifikan
terhadap penurunan kadar asam urat pada
tikus.
Penelitian
lain
yang
dapat
membuktikan khasiat tanaman obat asli
Indonesia lainnya sebagai anti-asam urat
sangat perlu dilakukan mengingat bahwa
beberapa tanaman obat asli Indonesia
berpotensi untuk mengobati gout.
Tempuyung merupakan salah satu jenis
tanaman obat potensial di Indonesia yang
sering dikonsumsi untuk obat. Tempuyung
mengandung ion-ion mineral dan beberapa
flavonoid yang diduga dapat menghambat
xantin oksidase (Chairul 1999). Meniran
juga merupakan tanaman yang kandungan
utamanya ialah flavonoid dan glikosida
flavonoid. Data ilmiah pendukung yang
mengungkapkan khasiat tempuyung dan
meniran sebagai biomedicine masih sedikit.
Berdasarkan penelusuran, belum ada paten
yang menyebutkan khasiat tempuyung dan
meniran sebagai anti-asam urat.
Kandungan tempuyung dan meniran
telah diteliti sebelumnya (Chairul 1999).
Oleh karena itu, untuk membuktikan
penelitian sebelumnya, pada penelitian ini
dilakukan uji inhibisi ekstrak tempuyung
dan meniran terhadap xantin oksidase secara
in vitro untuk mengetahui potensinya
sebagai anti-asam urat.
TINJAUAN PUSTAKA
Tempuyung (Sonchus arvensis)
Tempuyung (Gambar 1) termasuk
tanaman obat asli Indonesia dari famili
Asteraceae. Tanaman ini merupakan
tumbuhan
herba
menahun,
tegak,
mengandung getah, mempunyai akar
tunggang yang kuat (Rusdeyti 1985),
tumbuh liar di Jawa, yaitu di daerah yang
banyak hujan pada ketinggian 50-1650 m di
atas permukaan laut. Tempuyung tumbuh di
tempat terbuka seperti di pematang, dan di
pinggir saluran air (Heyne 1987).
Gambar 1 Tempuyung (Sonchus arvensis).
POTENSI EKSTRAK TEMPUYUNG DAN MENIRAN
SEBAGAI ANTIASAM URAT: AKTIVITAS
INHIBISINYA TERHADAP XANTIN OKSIDASE
CHINTYA GALUH TRI WARDANI
DEPARTEMEN KIMIA
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
BOGOR
2008
ABSTRAK
CHINTYA GALUH TRI WARDANI. Potensi Ekstrak Tempuyung dan Meniran sebagai
Antiasam Urat: Aktivitas Inhibisinya terhadap Xantin Oksidase. Dibimbing oleh DYAH
ISWANTINI PRADONO dan LATIFAH KOSIM DARUSMAN.
Penyakit gout merupakan suatu penyakit akibat terjadinya penimbunan kristal
mononatrium urat di dalam tubuh sehingga menyebabkan nyeri sendi (arthritis gout).
Tempuyung dan meniran merupakan tanaman obat asli Indonesia yang biasa digunakan
untuk menurunkan kadar asam urat dalam tubuh. Berdasarkan kandungannya, kedua
tanaman ini diduga dapat menginhibisi xantin oksidase. Dalam penelitian ini ekstrak
tempuyung dan meniran (etanol, air, dan flavonoid) diuji aktivitas inhibisinya terhadap
xantin oksidase pada kondisi optimum. Aktivitas enzim diukur pada suhu 20 °C, pH 7.5,
0.7 mM xantin sebagai substrat, 0.1 unit/ml enzim xantin oksidase dan diinkubasi selama
45 menit. Dari beberapa ekstrak tempuyung dan meniran, nilai LC50 tertinggi dan
terendah adalah ekstrak flavonoid tempuyung (2281 ppm) dan ekstrak air tempuyung
(1252 ppm). Semua ekstrak dapat menghambat aktivitas xantin oksidase. Persen inhibisi
tertinggi adalah ekstrak etanol meniran (150 ppm) dengan persen inhibisi sebesar 53.71%.
Kandungan ekstrak etanol berdasarkan uji fitokimia adalah flavonoid, triterpenoid, dan
tanin.
ABSTRACT
CHINTYA GALUH TRI WARDANI. Potention of Tempuyung and Meniran Extract as
Anti Uric Acid: Inhibition Activity of Xanthine Oxidase. Under the direction of DYAH
ISWANTINI PRADONO and LATIFAH KOSIM DARUSMAN.
Gout is certain a consequence indicated by accumulation of monosodium urate in
body causing painful joint (gout arthritis). Tempuyung and meniran are original plant of
Indonesian commonly used to reduce uric acid contents in body. Based on their contents,
it may be inhibit xanthine oxidase. In the research, tempuyung and meniran extracts
(ethanol, water, and flavonoid) were assayed for xanthine oxidase inhibition at optimum
condition. The activity enzyme was measured at 20 °C, pH 7.5, 0.7 mM xanthine as
substrate, 0.1 unit/ml xanthine oxidase, and were incubated for 45 min. From several
extracts of tempuyung and meniran, the highest and the lowest of LC50 value were
flavonoid extract of tempuyung (2281 ppm) and water extract of tempuyung (1252 ppm).
All extracts examined could inhibit the activity of xanthine oxidase. The highest
inhibition percent was ethanol extract of meniran (150 ppm) with percent of inhibition of
53.71%. Ethanol extract of meniran contents based on phytochemistry test are flavonoid,
triterpenoid, and tannin.
POTENSI EKSTRAK TEMPUYUNG DAN
MENIRAN SEBAGAI ANTIASAM URAT: AKTIVITAS
INHIBISINYA TERHADAP XANTIN OKSIDASE
CHINTYA GALUH TRI WARDANI
Skripsi
sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar
Sarjana Sains pada
Departemen Kimia
DEPARTEMEN KIMIA
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
BOGOR
2008
Judul Skripsi : Potensi Ekstrak Tempuyung dan Meniran sebagai Antiasam Urat:
Aktivitas Inhibisinya terhadap Xantin Oksidase
Nama
: Chintya Galuh Tri Wardani
NIM
: G44203020
Disetujui:
Pembimbing I
Pembimbing II
Dr. Dyah I Pradono, MAgr
NIP 131 956 706
Prof. Dr. Latifah K Darusman, MS
NIP 13053668
Diketahui:
Dekan Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam
Dr. drh. Hasim, DEA
NIP 131578806
Tanggal lulus:
PRAKATA
Alhamdulillah, puji dan syukur kehadiran Allah SWT atas segala rahmat dan
karunia-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan karya ilmiah ini. Judul yang dipilih
dalam penelitian ini adalah Potensi Ekstrak Tempuyung dan Meniran sebagai Antiasam
Urat: Aktivitas Inhibisinya terhadap Xantin Oksidase.
Terima kasih penulis ucapkan kepada Ibu Dr. Dyah Iswantini Pradono, MAgr dan
Ibu Prof. Dr. Latifah K Darusman, MS selaku pembimbing yang telah memberikan
bimbingan, pengarahan, serta semangat dalam penelitian dan penulisan karya ilmiah ini.
Di samping itu, penulis mengucapkan terima kasih kepada seluruh staf Kimia Analitik
dan seluruh staf Pusat Studi Biofarmaka yang telah membantu selama penelitian.
Ungkapan terima kasih penulis ucapkan pada papa, mama, beserta seluruh keluarga atas
segala doa, kasih sayang, dan dorongan semangat yang telah diberikan. Terima kasih
pada saudara-saudara seperjuangan, Lina, Farah, dan Hesti atas ketulusan hati,
kebersamaan, dukungan, dan bantuannya selama ini, teman-teman kimia 40 khususnya
Nana, Rahma, Ita, dan Sabet atas bantuan serta ide-idenya dalam penyelesaian karya
ilmiah ini, pada Ibu Mala atas bantuannya, dan kepada saudara-saudaraku di MSC atas
doa, semangat dan ukhuwah.
Semoga karya ilmiah ini bermanfaat.
Bogor, Juni 2008
Chintya Galuh Tri Wardani
RIWAYAT HIDUP
Penulis dilahirkan di Surabaya pada tanggal 31 Desember 1984 dari Bapak H.
Suwarto Utomo dan Ibu Hj. Sri Rejeki. Penulis merupakan anak ketiga dari empat
bersaudara.
Tahun 2003 penulis lulus dari SMU Negeri 74 Jakarta dan pada tahun yang sama
lulus seleksi masuk IPB melalui jalur Undangan Seleksi Masuk IPB. Penulis memilih
Departemen Kimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam.
Selama mengikuti perkuliahan, penulis aktif sebagai anggota Imasika periode
2005/2006 dan anggota DKM Al Ghifari sebagai staf Departemen Dompet Umat periode
2004/2005 dan Koordinator akhwat Departemen Sosial periode 2005/2006. Pada tahun
2006 penulis melaksanakan Praktik Kerja Lapangan di Laboratorium Pusat Sarana
Dampak Lingkungan Serpong.
DAFTAR ISI
Halaman
DAFTAR TABEL ..................................................................................................... viii
DAFTAR GAMBAR ................................................................................................ viii
DAFTAR LAMPIRAN ............................................................................................. viii
PENDAHULUAN ....................................................................................................
1
TINJAUAN PUSTAKA
Tempuyung ....................................................................................................
Meniran ..........................................................................................................
Xantin Oksidase .............................................................................................
Gout ...............................................................................................................
Flavonoid .......................................................................................................
1
2
2
3
4
BAHAN DAN METODE
Bahan dan Alat.................................................................................................
Metode Penelitian ............................................................................................
4
4
HASIL DAN PEMBAHASAN
Kadar Air ....................................................................................................... 6
Ekstraksi ......................................................................................................... 6
Uji Fitokimia .................................................................................................. 6
Uji Toksisitas Larva Udang ............................................................................. 7
Uji Inhibisi Ekstrak Kasar terhadap Aktivitas Xantin Oksidase ....................... 7
Uji Statistik .................................................................................................... 10
SIMPULAN DAN SARAN
Simpulan ......................................................................................................... 11
Saran ............................................................................................................... 11
DAFTAR PUSTAKA ................................................................................................ 11
LAMPIRAN ............................................................................................................. 13
DAFTAR TABEL
Halaman
1 Uji Fitokimia ekstrak air tempuyung dan meniran .................................................
7
2 Uji Fitokimia ekstrak etanol tempuyung dan meniran ............................................
7
3 Uji Fitokimia ekstrak flavonoid tempuyung dan meniran .......................................
7
4 Nilai LC50 ekstrak tempuyung dan meniran terhadap A. salina .............................
7
5 Persamaan linear ekstrak tempuyung dan meniran ................................................ 10
6 Nilai IC50 ekstrak tempuyung dan meniran ........................................................... 10
DAFTAR GAMBAR
Halaman
1 Tempuyung (Sonchus arvensis) ............................................................................
1
2 Meniran (Phyllanthus niruri) ................................................................................
2
3 Skema reaksi xantin oksidase yang mengkonversi hipoxantin menjadi xantin dan
asam urat...............................................................................................................
3
4 Skema reaksi xantin oksidase yang dapat dihambat oleh alopurinol dalam
pembentukan asam urat .........................................................................................
4
5 Struktur umum senyawa flavonoid.........................................................................
4
6 Persen inhibisi enzim dari ekstrak air meniran terhadap xantin oksidase dalam
berbagai konsentrasi..............................................................................................
8
7 Persen inhibisi enzim dari ekstrak air tempuyung terhadap xantin oksidase dalam
berbagai konsentrasi..............................................................................................
8
8 Persen inhibisi enzim dari ekstrak etanol meniran terhadap xantin oksidase dalam
berbagai konsentrasi..............................................................................................
9
9 Persen inhibisi enzim dari ekstrak etanol tempuyung terhadap xantin oksidase
dalam berbagai konsentrasi....................................................................................
9
10 Persen inhibisi enzim dari ekstrak flavonoid meniran terhadap xantin oksidase
dalam berbagai konsentrasi....................................................................................
9
11 Persen inhibisi enzim dari ekstrak flavonoid tempuyung terhadap xantin oksidase
dalam berbagai konsentrasi....................................................................................
9
12 Persen inhibisi terbaik dari seluruh ekstrak dan kontrol positif terhadap xantin
oksidase ............................................................................................................... 10
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
1 Bagan alir penelitian ............................................................................................ 14
2 Uji toksisitas dengan larva udang A. salina............................................................ 15
3 Uji Inhibisi aktivitas xantin oksidase ..................................................................... 17
4 Kadar air tempuyung dan meniran ......................................................................... 18
5 Aktivitas ekstrak tempuyung dan meniran terhadap larva A. salina ........................ 19
6 Pembuatan kurva standar ....................................................................................... 20
7 Data hasil uji enzimatis berbagai ekstrak ............................................................... 21
8 Perhitungan statistik ekstrak tempuyung dan meniran ............................................ 25
PENDAHULUAN
Penyakit asam urat, biasa juga dikenal
sebagai gout, merupakan suatu penyakit
akibat terjadinya penimbunan kristal
mononatrium urat di dalam tubuh sehingga
menyebabkan nyeri sendi (artritis gout),
benjolan-benjolan
pada
bagian-bagian
tertentu dari tubuh (tofi), serta gangguan dan
batu pada saluran kemih. Kejadian artritis
gout dalam beberapa dasawarsa terakhir ini
baik di negara-negara maju maupun yang
sedang berkembang semakin meningkat
terutama pada pria usia 40-50 tahun. Di
Amerika, gout menyerang lebih dari 5 juta
penduduk (Yu 2006).
Obat sintetik yang biasa dikonsumsi
untuk mengobati asam urat oleh masyarakat
adalah alopurinol yang menginhibisi
aktivitas xantin oksidase. Xantin oksidase
mengkatalisis oksidasi xantin menjadi asam
urat. Penggunaan alopurinol yang terlalu
sering atau berlebihan dapat menimbulkan
efek samping, yaitu hepatitis, gangguan
pencernaan, timbulnya ruam di kulit,
berkurangnya jumlah sel darah putih, dan
kerusakan hati. Oleh sebab itu, diperlukan
obat yang lebih aman dengan harga
terjangkau.
Penelitian mengenai khasiat tanaman
obat sebagai anti-asam urat melalui
mekanisme inhibisi enzim xantin oksidase
telah banyak dilakukan. Di Cina, Conyza
bonariensis dengan pelarut metanol dapat
menginhibisi xantin oksidase dengan daya
inhibisi yang lebih besar dari 50% (Kong et
al. 2000), tanaman obat asli India, Coccinia
grandis dan Vitex negundo juga dapat
menginhibisi xantin oksidase secara in vitro
dan in vivo (Umamaheswari et al. 2007),
selain itu spesies Lychnopora dari Brazil
juga dapat menginhibisi xantin oksidase
dengan daya inhibisi di atas 60% (Filha et
al. 2006).
Beberapa tanaman obat asli Indonesia
juga terbukti dapat menginhibisi xantin
oksidase, seperti sidaguri yang ekstrak
flavonoidnya dapat menginhibisi sampai
55.29% (Iswantini & Darusman 2003),
seledri (Rhamdani 2004) dan gabungan
ekstrak sidaguri dan seledri diteliti lebih
lanjut
untuk
mengetahui
efek
penghambatannya terhadap xantin oksidase
(Iswantini et al. 2005). Hasil yang didapat,
yaitu gabungan kedua ekstrak dapat
menginhibisi enzim xantin oksidase
melebihi daya inhibisi alopurinol atau
produk komersial lainnya. Gabungan ekstrak
juga menunjukan efek yang signifikan
terhadap penurunan kadar asam urat pada
tikus.
Penelitian
lain
yang
dapat
membuktikan khasiat tanaman obat asli
Indonesia lainnya sebagai anti-asam urat
sangat perlu dilakukan mengingat bahwa
beberapa tanaman obat asli Indonesia
berpotensi untuk mengobati gout.
Tempuyung merupakan salah satu jenis
tanaman obat potensial di Indonesia yang
sering dikonsumsi untuk obat. Tempuyung
mengandung ion-ion mineral dan beberapa
flavonoid yang diduga dapat menghambat
xantin oksidase (Chairul 1999). Meniran
juga merupakan tanaman yang kandungan
utamanya ialah flavonoid dan glikosida
flavonoid. Data ilmiah pendukung yang
mengungkapkan khasiat tempuyung dan
meniran sebagai biomedicine masih sedikit.
Berdasarkan penelusuran, belum ada paten
yang menyebutkan khasiat tempuyung dan
meniran sebagai anti-asam urat.
Kandungan tempuyung dan meniran
telah diteliti sebelumnya (Chairul 1999).
Oleh karena itu, untuk membuktikan
penelitian sebelumnya, pada penelitian ini
dilakukan uji inhibisi ekstrak tempuyung
dan meniran terhadap xantin oksidase secara
in vitro untuk mengetahui potensinya
sebagai anti-asam urat.
TINJAUAN PUSTAKA
Tempuyung (Sonchus arvensis)
Tempuyung (Gambar 1) termasuk
tanaman obat asli Indonesia dari famili
Asteraceae. Tanaman ini merupakan
tumbuhan
herba
menahun,
tegak,
mengandung getah, mempunyai akar
tunggang yang kuat (Rusdeyti 1985),
tumbuh liar di Jawa, yaitu di daerah yang
banyak hujan pada ketinggian 50-1650 m di
atas permukaan laut. Tempuyung tumbuh di
tempat terbuka seperti di pematang, dan di
pinggir saluran air (Heyne 1987).
Gambar 1 Tempuyung (Sonchus arvensis).
Tempuyung termasuk dalam divisi
Spermatophyta, sub divisi Angiospermae,
kelas Dicotyledonae, bangsa Asterales, suku
Asteraceae, marga Sonchus, dan jenis
arvensis. Daun tempuyung di Indonesia
menurut Sardjito dapat digunakan sebagai
obat untuk "menghancurkan" batu ginjal
(Chairul 1999). Kelarutan batu ginjal oleh
tempuyung diduga melalui efek diuretiknya.
Daun tempuyung mengandung ion-ion
mineral cukup tinggi terutama K+ dan Na+
yang dapat mengatur keseimbangan
elektrolit di dalam tubuh sehingga
mempermudah keluarnya air seni.
Kandungan kimia yang terdapat di dalam
daun tempuyung adalah ion-ion mineral,
antara lain silika, kalium, magnesium,
natrium, dan senyawa organik seperti
flavonoid
(kaempferol,
luteolin-7-Oglukosida, dan apigenin-7-O-glukosida),
kumarin (skepoletin), taraksasterol, inositol,
serta asam fenolat (sinamat, kumarat, dan
vanilat). Kandungan flavonoid total di dalam
daun tempuyung ialah 0.1044% (Chairul
1999). Menurut Cos (1998), flavonoid
apigenin-7-O-glukosida adalah salah satu
golongan flavonoid yang berpotensi cukup
baik untuk menghambat kerja enzim xantin
oksidase dan superoksidase.
Meniran (Phyllanthus niruri)
Meniran (Gambar 2) merupakan salah
satu jenis tumbuhan yang sering digunakan
oleh masyarakat untuk obat. Tumbuhan ini
tumbuh liar di hutan, ladang, semak-semak,
sepanjang jalan, pinggir sungai, pinggir
pantai, tanah berumput, gembur atau
berbatuan pada dataran rendah sampai pada
ketinggian 1000 m di atas permukaan laut.
Secara taksonomi, meniran diklasifikasikan
dalam divisi Spermatophyta, sub divisi
Angiospermae, kelas Dicotyledone, bangsa
Geraniales, suku Euphorbiaceae, marga
Phylianthus dan jenis niruri.
Meniran berkhasiat sebagai antivirus.
Senyawaan yang ditemukan pada meniran
antara lain adalah triterpenoid, flavonoid,
tanin, alkaloid, dan asam fenolat. Secara
empiris, rebusan daun meniran sering
dimanfaatkan secara tradisional untuk
mengobati penyakit hati, diuretik, obat
batuk, antidiare, dan sebagai tonik lambung.
Hasil penelitian menunjukkan bahwa
meniran menghambat DNA polimerase dari
virus hepatitis B (Bermawie 2006).
Penelitian yang dilakukan oleh Nurdiana dan
Kulsum (2001) menunjukkan bahwa
meniran juga dapat menghambat kerusakan
hati dan antioksidan secara in vivo. Selain
itu, menurut Ma'at (2005), ekstrak meniran
dapat meningkatkan sistem imun atau
kekebalan tubuh yang sangat dibutuhkan
untuk penderita penyakit infeksi. Ekstrak ini
telah lulus uji praklinis (uji keamanan) dan
uji klinis (pembuktian khasiatnya). Menurut
Chairul (1999), meniran mengandung
senyawa-senyawa kimia golongan lignan,
antara lain filantin, hipofilantin, niranin,
nirtetralin, dan fitetralin. Beberapa senyawa
lignan baru juga telah diisolasi dari
Phyllanthus
niruri
yaitu,
seco-4hidroksilintetralin,
seco-isoarisiresinol
trimetil
eter,
hidroksinirantin,
dibenzilbutirolakton, nirfilin, dan neolignan
(filnirurin).
Akar dan daun Meniran kaya senyawaan
flavonoid, antara lain, kuersetin, keursetrin,
isokuersetrin, astragalin dan rutin. Di
samping itu, dilaporkan pula beberapa
glikosida flavonoid dan senyawa flavonon
baru.
Dari
minyak
bijinya
telah
diidentifikasi beberapa asam lemak, yaitu
asam ricinoleat, asam linoleat, dan asam
linolenat. Selain itu, meniran juga
mengadung kalium, damar, dan zat samak.
Karena meniran mempunyai kandungan
utama senyawa golongan flavonoid dan
glikosida flavonoid, beberapa senyawa
flavonoid tersebut memberikan efek
menginhibisi terhadap xantin oksidase dan
superoksidase (Chairul 1999).
Xantin Oksidase
Gambar 2 Meniran (Phyllanthus niruri).
Xantin oksidase merupakan enzim yang
tersebar luas dalam beberapa spesies dari
bakteri hingga manusia dan juga terdapat
pada jaringan mamalia. Di dalam tubuh,
xantin oksidase ditemukan di sel hati dan sel
otot. Tetapi keberadaan xantin oksidase
dalam darah mengindikasikan adanya
kerusakan fungsi hati. Xantin oksidase
mengkatalisis oksidase hipoxantin dan
xantin menjadi asam urat yang berperan
penting dalam timbulnya gout. Selama
proses oksidasi, oksigen bertindak sebagai
akseptor elektron menghasilkan radikal
superoksida (O2*-) dan hidrogen peroksida
(Ramdhani 2004).
Gambar 3
Skema reaksi xantin oksidase
yang
mengkonversi
hipoxantin menjadi xantin dan
asam urat.
Xantin oksidase juga dapat mengkatalisis
reduksi nitrat dan nitrit menjadi nitrit oksida
sekaligus membentuk radikal superoksida
yang dapat menyebabkan peradangan.
Meningkatnya aktivitas xantin oksidase
dalam mengkatalisis xantin menjadi asam
urat akan menyebabkan bertambahnya
produksi asam urat dalam darah. Produksi
asam urat berlebih dapat menyebabkan
hiperurisemia, namun asam urat akan
disimpan di dalam persendian sehingga
menyebabkan peradangan dan gout.
Gout
Gout didefinisikan sebagai penyakit atau
sindrom yang disebabkan oleh adanya
pembengkakan atau inflamasi karena
menumpuknya kristal monosodium urat
pada tulang sendi sebagai akibat dari
tingginya kadar asam urat dalam darah
(Johnstone 2005). Gout merupakan penyakit
yang biasa ditemui di seluruh dunia dan
sebagian besar disebabkan oleh deposisi
monosodium kristal urat dalam tulang sendi
dan jaringan otot lainnya.
Kelebihan asam urat atau hiperurisemia
terjadi apabila tingkat asam urat dalam darah
> 7 mg/dl. Hiperurisemia dapat disebabkan
oleh kelebihan produksi asam urat atau yang
lebih jauh lagi biasanya disebabkan oleh
ekskresi yang tidak efisien dari ginjal (Luck
2005). Serangan gout dapat dicegah dengan
gaya hidup yang sehat dari pasien. Jika
pasien kelebihan berat badan maka
dianjurkan
untuk
mengurangi
berat
badannya dengan bertahap sesuai dengan
tingkat kemampuannya. Penurunan berat
badan secara cepat dapat meningkatkan
asam urat yang dapat menyebabkan
serangan gout (Johnstone 2005).
Gout sering dibagi menjadi empat
tingkat
gejala,
yaitu
hiperurisemia
asimptomatik, radang sendi gout akut, gout
interkritikal, dan gout tofi. Hiperirusemia
asimptomatik dicirikan oleh kondisi kadar
asam urat abnormal tinggi tanpa radang
sendi gout. Pada kondisi ini, monosodium
urat cenderung terbentuk dan mengarahkan
pada terjadinya gout. Keadaan ini dianggap
sebagai tahap pertama dari gangguan dan
sering
terjadi
pada
umur
30-an,
pengobatannya hanya dianjurkan untuk
mengubah gaya hidup baik itu pola
konsumsi maupun pola kegiatan. Radang
sendi gout dicirikan oleh serangan sakit
yang
sangat
tiba-tiba,
disertai
pembengkakan dan sukar digerakkannya
sendi yang diserang. Tiga perlakuan yang
dapat diterapkan untuk serangan gout akut,
yaitu pengobatan dengan obat antiinflamasi
nonsteroid dengan kortikosteroid dan
kolkisin. Gout interkritikal menggambarkan
periode antar serangan. Serangan gout
pertama biasanya diikuti oleh hilangnya
seluruh rasa sakit (gejala) tetapi jika
dibiarkan tidak diobati, gout akan datang
lagi pada waktu berikutnya. Gout kronis
(tofi) terjadi jika gout akut terus menerus
tidak diobati, maka gout akut dapat menjadi
gout kronis yang menyebabkan perubahan
bentuk. Kristal asam urat yang terus
menerus terkumpul di bawah kulit sekitar
persendian dan ujung otot menyebabkan
kerusakan dan meningkatnya kekakuan
sendi. Gumpalan keras dari kristal urat (tofi)
terkumpul di bawah kulit telinga atau di
sekitar siku. Bila tidak diobati, tophus pada
tangan dan kaki dapat pecah dan
mengeluarkan suatu kristal yang seperti
kapur. Pencegahan serangan gout berulang
dan tofi diberikan setelah serangan gout akut
berakhir. Obat yang biasa diberikan adalah
obat urikosurik ginjal dan alopurinol
(Iswantini 2003).
Alopurinol dapat menurunkan kadar
asam urat dengan menghambat biosintesis
purin khususnya pada reaksi perubahan
hipoxantin menjadi xantin oleh enzim xantin
oksidase. Struktur molekul obat ini mirip
dengan struktur enzim xantin oksidase
sehingga
dapat
menyainginya
dan
menghambat produksi asam urat.
Gambar 5
flavonoid
Struktur
umum senyawa
BAHAN DAN METODE
Bahan dan Alat
Bahan yang digunakan ialah tempuyung,
meniran, enzim xantin oksidase, xantin,
pereaksi Mayer, Wagner, dan Dragendorf.
Alat yang digunakan ialah spektrofotometer.
Metode Penelitian
Gambar 4
Skema reaksi xantin oksidase
yang dapat dihambat oleh
alopurinol dalam pembentukan
asam urat.
Flavonoid
Flavonoid merupakan golongan senyawa
polifenol yang terdiri atas 15 atom karbon
sebagai kerangka dasarnya. Studi in vitro
menunjukkan bahwa beberapa flavonoid
terutama luteolin dan apigenin dapat juga
bekerja sebagai inhibitor xantin oksidase
dengan daya inhibisi yang hampir sama
dengan Alopurinol (Cos et al. 1998).
Flavonoid kuersetin, kuersitin, mirisitin, dan
miresetinasal tanaman salam juga berkhasiat
dalam menghambat kerja xantin oksidase
(Schemeda et al. 1987). Flavonoid krisin,
baikelin, isorhamnetin, dan ester asam kafeat
juga tergolong efektif (Nakanishi 1990).
Inhibitor lain ialah antosianidin dan
proantisianidin yang daya inhibisinya
rendah.
Adanya ikatan rangkap pada flavonoid
jenis flavonol dan flavone memungkinkan
terjadinya reaksi adisi (oksidasi oleh xantin
oksidase), ikatan rangkap pada atom C2
dengan C3 akan mengakibatkan posisi ring
B co-planar terhadap ring A sehingga lebih
memudahkan dalam berinteraksi dengan
enzim xantin oksidase. Selain itu juga gugus
hidroksil pada flavonoid turut berperan
dalam efek penghambatan (Cos et al. 1998).
Penelitian ini terdiri dari beberapa
tahap seperti penentuan kadar air, ekstraksi,
uji fitokimia, uji toksisitas A. salina, uji
inhibisi terhadap xantin oksidase dan uji
statistik. Diagram alir penelitian disajikan
dalam Lampiran 1.
Penentuan kadar air
Pinggan porselen dikeringkan pada suhu
105 °C selama 30 menit. Pinggan porselen
yang
telah
dikeringkan
kemudian
didinginkan dalam desikator dan ditimbang.
Serbuk tempuyung kering sebanyak 3 gram
dimasukkan ke dalam pinggan porselen,
dikeringkan pada suhu 105 °C selama 3 jam
lalu didinginkan dalam desikator dan
ditimbang. Serbuk tempuyung kering dalam
cawan dikeringkan lagi selama 3 jam pada
suhu 105 °C, serta didinginkan dan
ditimbang kembali. Prosedur dilakukan
secara berulang-ulang hingga diperoleh
bobot yang stabil.
Ekstraksi air
Tempuyung dan meniran kering masingmasing diekstrak secara maserasi dengan air,
disaring, dan filtrat yang dihasilkan
dikeringkan dengan penguap putar hingga
diperoleh residu kering.
Ekstraksi etanol
Tempuyung dan meniran kering masingmasing diekstraksi dengan etanol, disaring
dan dipekatkan dengan penguap putar.
Ekstraksi flavonoid
Serbuk tanaman kering direndam dalam
pelarut metanol-air dengan nisbah 9:1 dan
1:1. Masing-masing ekstrak digabungkan,
disaring, dan filtratnya diuapkan dengan
penguap putar hingga sepertiganya. Filtrat
yang didapat dipartisi dengan menggunakan
heksana
dan
kloroform
untuk
menghilangkan lemak dan senyawa-senyawa
yang memiliki kepolaran rendah dan
diuapkan kembali dengan penguap putar.
Uji fitokimia
Uji alkaloid. Sebanyak 1 g contoh
dilarutkan dalam 10 ml kloroform dan
beberapa tetes NH4OH kemudian disaring
dan filtrat dimasukkan ke dalam tabung
reaksi bertutup. Ekstrak kloroform dalam
tabung reaksi dikocok dengan 10 tetes
H2SO4 2 M dan lapisan asamnya dipisahkan
dalam tabung reaksi yang lain. Lapisan asam
ini diteteskan pada lempeng tetes dan
ditambahkan pereaksi Mayer, Wagner, dan
Dragendorf yang akan menimbulkan
endapan warna berturut-turut putih, coklat,
dan merah jingga.
Uji triterpenoid dan steroid. Sebanyak
1 g contoh dilarutkan dengan 25 ml etanol
panas (50 °C), disaring ke dalam pinggan
porselen, dan diuapkan sampai kering.
Residu ditambahkan eter dan ekstrak eter
dipindahkan ke dalam lempeng tetes serta
ditambahkan 3 tetes anhidrida asam asetat
dan 1 tetes H2SO4 pekat (uji LiebermanBuchard). Warna merah atau ungu
menunjukkan adanya triterpenoid sedangkan
warna hijau atau biru menunjukkan adanya
steroid.
Uji saponin dan flavonoid. Sebanyak 1
g masing-masing contoh yang ingin diuji
dimasukkan dalam gelas piala, ditambahkan
100 ml air panas, dan dididihkan selama 5
menit. Setelah itu, disaring dan filtratnya
digunakan untuk pengujian. Uji saponin
dilakukan dengan pengocokan 10 ml filtrat
dalam tabung reaksi tertutup selama 10 detik
lalu dibiarkan selama 10 menit. Saponin
ditunjukkan dengan terbentuknya buih
stabil. Sebanyak 10 ml filtrat lain
ditambahkan 0.5 gram serbuk magnesium, 2
ml alkohol klorhidrat (campuran HCl 37%
dan etanol 95% dengan perbandingan 1:1),
dan 2 ml amil alkohol kemudian dikocok
dengan kuat. Terbentuknya warna merah,
kuning, atau jingga pada lapisan amil
alkohol menunjukkan adanya flavonoid.
Uji tanin. Sebanyak 1 g contoh
ditambah 100 ml air panas, dididihkan
selama 5 menit, dan disaring. Sebagian
filtrat yang diperoleh ditambah larutan
besi(III) klorida. Terbentuknya warna hitam
kehijauan menunjukkan tanin.
Uji toksisitas ekstrak terhadap A. salina
Kista A. salina ditimbang sebanyak 50
mg, dimasukkan ke dalam wadah yang berisi
air laut yang sudah disaring, dan diaerasi
selama 48 jam di bawah pencahayaan lampu
agar menetas sempurna. Larva yang sudah
menetas diambil untuk digunakan dalam uji
toksisitas terhadap A. salina.
Sebanyak 10 ekor larva A. Salina
dimasukkan ke dalam vial yang berisi air
laut lalu ditambahkan larutan ekstrak (air,
etanol, alkaloid, dan flavonoid) sehingga
konsentrasi akhirnya menjadi 1000, 100, dan
10 ppm. Dilakukan dengan bantuan kaca
pembesar. Pengolahan persen mortalitas
kumulatif digunakan analisis konsentrasi
letal 50% (LC50) dengan selang kepercayaan
95% (Lampiran 2).
Pembuatan kurva standar
Larutan substrat (xantin) dibuat pada
berbagai konsentrasi (0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5,
0.6, 0.7 ppm). Kemudian diukur serapannya
menggunakan spektrofotometer UV pada
panjang gelombang 262 nm. Setelah itu
dibuat kuva hubungan antara konsentrasi
dengan serapan, serta persamaan linearnya.
Persamaan linear ini akan digunakan untuk
menghitung aktivitas enzim xantin oksidase.
Uji inhibisi aktivitas xantin oksidase
Ekstrak tanaman tempuyung dan
meniran masing-masing dimasukkan ke
dalam tabung reaksi dengan beragam
konsentrasi berdasarkan hasil uji BSLT,
ditambah larutan bufer kalium fosfat 50 mM
pH 7.5 sampai volumenya menjadi 1.9 ml.
Campuran kemudian ditambah 1 ml xantin
2.1 mM dan xantin oksidase 0.1 unit/ml
sebanyak 0.1 ml diinkubasi pada suhu 20 °C
selama 45 menit. Setelah diinkubasi,
campuran segera ditambahkan HCl 0.58 M
sebanyak 1 ml untuk menghentikan
reaksinya. Campuran diukur serapannya
menggunakan spektrofotometer UV pada
panjang gelombang 262 nm (Lampiran 3).
HASIL DAN PEMBAHASAN
Kadar Air
Sampel tempuyung dan meniran yang
digunakan pada penelitian ini berbentuk
simplisia yang telah kering. Serbuk
tempuyung dan meniran ditentukan kadar
airnya agar dapat diperkirakan cara
penyimpanan terbaik bagi sampel untuk
menghindari pengaruh aktivitas mikroba
(jamur). Kadar air yang diperoleh dari
serbuk tanaman tempuyung dan meniran
masing-masing adalah 10.71 dan 8.03%
(Lampiran 4). Dari hasil yang didapatkan,
meniran relatif stabil dari serangan mikroba
karena kadar air yang didapat kurang dari
10%,
sedangkan
tempuyung
mudah
terserang mikroba karena kadar airnya lebih
besar dari 10%.
Ekstraksi
Ekstraksi
dilakukan
dengan
menggunakan berbagai macam pelarut, yaitu
air, etanol serta penggunaan metanol dalam
mengekstrak
senyawa
flavonoid.
Penggunaan air dimaksudkan untuk melihat
toksisitas dan aktivitas inhibisi xantin
oksidase karena mengingat biasanya air
selalu digunakan oleh masyarakat sebagai
pelarut dalam menyeduh dan merebus obat.
Rendemen ekstrak air meniran dan
tempuyung masing-masing, yaitu 6.49% dan
7.95%. Selanjutnya, pelarut yang digunakan
adalah etanol dikarenakan etanol merupakan
pelarut yang baik untuk ekstraksi
pendahuluan karena etanol memiliki dua
gugus yang berbeda kepolarannya, yaitu
gugus hidroksil yang bersifat polar dan
gugus alkil yang bersifat nonpolar. Adanya
dua gugus ini diharapkan senyawa dengan
tingkat kepolaran yang berbeda akan
terekstrak ke dalam etanol. Rendemen
ekstrak etanol meniran dan tempuyung
masing-masing, yaitu 14.66 dan 17.15%.
Ekstraksi yang dilakukan berikutnya
adalah flavonoid dengan menggunakan
metanol. Rendemen ekstrak flavonoid
meniran dan tempuyung masing-masing,
yaitu 9 dan 10%. Pada ekstraksi ini
dilakukan
partisi
cair-cair
dengan
menggunakan heksana untuk menghilangkan
lemak dan kloroform untuk menghilangkan
senyawa-senyawa yang memiliki kepolaran
rendah. Proses ekstraksi ini dilakukan untuk
melihat
aktivitas
flavonoid
dalam
menginhibisi xantin oksidase karena
berdasarkan penelitian sebelumnya diketahui
bahwa flavonoid dapat menyembuhkan
penderita gout dengan cara penurunan kadar
asam urat, yaitu dengan menghambat enzim
xantin oksidase (Cos et al. 1998; Hoorn
2002). Beberapa flavonoid terutama luteolin
(Cos et al. 1998) dapat bekerja sebagai
inhibitor xantin oksidase, selain itu
berdasarkan penelitian Lin et al. (2002),
kuersetin, myrisetin genistein, dan isovitexin
dapat menginhibisi
xantin oksidase.
Apigenin juga dapat menginhibisi xantin
oksidase dengan efek inhibisi yang
sebanding dengan alopurinol.
Uji Fitokimia
Senyawa metabolit sekunder dalam
ekstrak tanaman tempuyung dan meniran
dapat diketahui melalui uji fitokimia. Uji
yang dilakukan meliputi uji flavonoid,
alkaloid, tanin, saponin, steroid, dan
triterpenoid. Uji pendahuluan ini dilakukan
untuk mengetahui ada tidaknya flavonoid di
dalam ekstrak dan senyawa-senyawa lain
yang
kemungkinan
berperan
dalam
menginhibisi xantin oksidase.
Hasil uji fitokimia
dari serbuk
tempuyung dan meniran (Tabel 1)
menunjukkan bahwa serbuk kedua tanaman
mengandung tanin dan flavonoid. Akan
tetapi intensitas warna senyawa flavonoid
dalam ekstrak tempuyung
lebih besar
dibandingkan dengan meniran. Hal ini
diduga karena senyawa flavonoid yang
terkandung dalam tempuyung lebih banyak.
Selain itu dapat diduga karena jenis
flavonoid
yang
terkandung
dalam
tempuyung berbeda dengan senyawa
flavonoid yang terkandung dalam meniran.
Berdasarkan penelitian sebelumnya,
meniran mengandung flavonoid jenis
kuersetin,
keursetrin,
isokuersetrin,
astragalin dan rutin, sedangkan tempuyung
mengandung jenis flavonoid kaempferol,
luteolin-7-O-glukosida dan apigenin-7-Oglukosida (Chairul 1999). Tabel 2
menunjukkan bahwa senyawa metabolit
sekunder yang terkandung dalam ekstrak
etanol tempuyung adalah tanin, flavonoid,
steroid, dan triterpenoid. Ekstrak etanol
meniran juga mengandung senyawa
metabolit sekunder yang sama dengan
ekstrak etanol tempuyung, kecuali steroid.
Ekstrak meniran uji steroid menunjukkan
hasil yang negatif terhadap uji steroid.
Tabel 3 menunjukkan golongan senyawa
yang terdapat pada ekstrak flavonoid
tempuyung dan meniran. Dari tabel
diketahui bahwa kedua ekstrak tidak hanya
mengandung
flavonoid
tapi
juga
mengandung tanin. Hal ini diduga karena
tanin termasuk senyawa yang memiliki
kepolaran tinggi seperti flavonoid, Sehingga
tidak hilang pada saat dilakukan partisi
(pemisahan) cair-cair untuk menghilangkan
senyawa-senyawa yang memiliki kepolaran
rendah.
Tabel 1 Uji fitok