ISOLASI DAN IDENTIFIKASI SENYAWA ALKALOID DARI ACTINOMYCETES ANLd-2b-3 LUMPUR HUTAN BAKAU

ISOLATION AND IDENTIFICATION OF ALKALOID COMPOUND FROM ACTINOMYCETES ANLd-2b-3 OF MANGROVE MUD

By

Deliana Hernawati

The isolation and identification of an alkaloid compound of actinomycetes ANLd-2b-3 living in mangrove mud has been carried out. The compound, A8, was purified through several stages using colum chromatography method and yielded about 3,7%. The purity of the compound was identified by High Performance Liquid Chromatography (HPLC) method using Evaporating Light Scattering Detection (ELSD) detector. The chromatogram gave a peak with Retention Time (Rt) 20,6 minute. Characterization using Fourier Transform Infra Red (FTIR) method informed that the A8 was a secondary metabolite compound of alkaloid group. It was shown by the absorption band of C-N of tertiary amine at 1109,95 cm-1 on FTIR spectrum which was also supported by Thin Layer Chromatography (TLC) test using Dragendorff reagent. The A8 compound also contained both hydroxyl group (s) shown by the absorption band at 3402,33 cm-1and carboxyl group at1647,09 cm-1. The result of antibacterial testing with 5000 ppm concentration of A8 showed that the compound had antibacterial activities towardEschericia coliandStaphylococcus aureus.

ISOLASI DAN IDENTIFIKASI SENYAWA ALKALOID DARI ACTINOMYCETESANLd-2b-3 LUMPUR HUTAN BAKAU

Oleh

Deliana Hernawati

Telah dilakukan isolasi dan identifikasi senyawa alkaloid dariactinomycetes ANLd-2b-3 yang hidup di lumpur hutan bakau. Senyawa isolat, A8, dimurnikan dengan metoda kromatografi kolom melalui beberapa tahapan dan diperoleh rendemen sebanyak 3.7 %. Kemurnian isolat diidentifikasi menggunakan metoda Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT) dengan detektorEvaporating Light Scattering Detection(ELSD). Kromatogram KCKT menunjukkan satu puncak dengan nilaiRetention Time(Rt) 20,6 menit. Karakterisasi dengan metoda

spektroskopiFourier Transform Infrared(FTIR) menginformasikan bahwa senyawa A8 merupakan senyawa metabolit sekunder dari golongan alkaloid. Hal ini ditunjukkan oleh adanya pita serapan C-N dari gugus amina tersier pada daerah 1109,95 cm-1spektrum FTIR yang didukung dengan hasil uji

Kromatografi Lapis Tipis (KLT) dengan pereaksi spesifik Dragendorff. Senyawa A8 juga mengandung gugus hidroksil yang ditunjukkan oleh pita serapan O-H yang melebar pada dareah 3402,33 cm-1dan gugus karboksil pada daerah 1647,09 cm-1. Hasil uji antibakteri senyawa A8 dengan konsentrasi 5000 bpj menunjukkan bahwa senyawa A8 memiliki aktivitas antibakteri terhadap bakteri Eschericia colidanStaphylococcus aureus.

A. Latar Belakang

Indonesia merupakan negara yang memiliki komunitas bakau terluas di dunia, dengan luas antara 2,5 hingga 4,5 juta hektar, melebihi Brazil (1,3 juta ha), Nigeria (1,1 juta ha) dan Australia (0,97 ha) (Spaldinget al, 1997). Hutan bakau pada umumnya berada di daerah pasang surut yang jenis tanahnya berlumpur, berlempung dan berpasir (Bengen, 1999). Hutan bakau terdiri atas flora dan fauna yang hidup di daerah pantai. Hutan bakau memiliki

karakteristik yang unik hal ini disebabkan oleh kemampuannya untuk bertahan hidup di dua zona transisi antara daratan dan lautan dengan tingkat abrasi (erosi tanah) yang tinggi karena arus air laut yang berubah-ubah pada saat pasang dan surut, dan mampu hidup pada lingkungan yang rawan pencemaran oleh adanya limbah (Tarumingken, 2001).

Selain ekosistemnya yang unik hutan bakau juga memiliki mikrooorganisme yang berbeda dengan mikroorganisme di lingkungan daratan (terrestrial). Salah satu mikroorganisme yang terdapat di lingkungan hutan bakau ini adalah actinomycetes(Jensenet al., 1991; Daset al., 2006). Menurut Frobisher (1970) morfologiactinomycetesberada di antara morfologi bakteri dan jamur.

Namun disisi lainactinomycetesdapat dikelompokkan ke dalam kelompok tersendiri karena mempunyai ciri khas yang berbeda (Rao, 1994). Dalam sistem klasifikasi,actinomycetesdimasukkan dalam kelompok bakteri, dalam kelasSchizomycetes, tetapi terbatas hanya dalam ordoActinomycetales (Alexander, 1977)

Selama sepuluh tahun terakhir para peneliti telah berhasil menemukan lebih dari 30 senyawa metabolit sekunder yang memiliki aktivitas biologis dari actinomycetes. Aktivitas biologis yang dimiliki antara lain, seperti antibiotik, antivirus, antiradang, antitumor, antikanker, dan antioksidan (Wu and Chen, 1995; Rawat and Av-Gay, 2007). Akan tetapi, saat ini perkembangan

penemuan senyawa metabolit sekunder yang memiliki aktivitas biologis baru dariactinomycetesmenurun, sementara laju re-isolasi senyawa bioaktif yang telah diketahui meningkat. Oleh karena itu perlu dicari sumberactinomycetes baru untuk mendapatkan senyawa metabolit sekunder yang memiliki aktivitas biologis spesifik.

Actinomycetesdapat hidup di daerah pantai, bakau, hingga kedalaman laut tertentu (Jensenet al., 1991; Daset al., 2006). Karena lingkungan yang berbeda, diperkirakan bahwaactinomycetesyang berasal dari lumpur hutan bakau memiliki karakteristik yang berbeda denganactinomycetesyang berasal dari daratan (terrestrial), sehingga senyawa bioaktif yang dihasilkan pun memiliki keunikan tersendiri.

Salah satu golongan senyawa metabolit sekunder yang memiliki aktivitas biologis tersebut adalah alkaloid. Senyawa-senyawa alkaloid yang berasal dari

actinomycetesyang memilki aktivitas biologis antara lain: aburatubolaktam sebagai antiperadangan dan antipenuaan (Kuramotoet al, 2004),

metasikloprodigiosin dan undesilprodigiosin diisolasi dariactinomycetesjenis Saccharopolyspora sp.nov yang mempunyai aktivitas sebagai antikanker (Liu et al, 2005), stourosporin dan rebekkamicin sebagai antitumor (Onaka, 2006) yang telah berhasil diisolasi dariStreptomyces spdan alkaloid pirrolizidina yang memiliki aktivitas antikanker (Mahyudin, 2008).

Upaya penelitian maupun pemanfaatanactinomycetesdari lumpur hutan bakau yang memungkinkan ditemukan beraneka jenis senyawa metabolit sekunder yang digunakan sebagai antibiotik terus dilakukan . Namun, sampai saat ini data yang berhubungan dengan senyawa metabolit sekunder terutama dari actinomyceteslumpur hutan bakau masih terbatas. Oleh karena itu, pada penelitian ini penulis mencoba mengisolasi dan mengidentifikasi senyawa alkaloid dariactinomyceteslumpur hutan yang diharapkan ditemukannya variasi senyawa baru yang memiliki aktivitas biologis yang unik.

B. Tujuan Penelitian

Tujuan dilakukannya penelitian ini adalah untuk mengisolasi dan

mengidentifikasi senyawa alkaloid dariactinomycetesANLd-2b-3 deposit laboratorium Biomass Universitas Lampung yang diperoleh dari pantai Ringgung dan mengetahui aktivitasnya sebagai antibakteri.

C. Manfaat Penelitian

Hasil penelitian ini diharapkan dapat menambah informasi dalam pengembangan lebih lanjut senyawa alkaloid yang dihasilkan oleh

actinomycetesdari lingkungan lumpur hutan bakau yang dapat dimanfaatkan dalam dunia farmasi dan kedokteran.

A. Hutan Bakau

Hutan bakau merupakan hutan yang terdapat diatas rawa-rawa berair payau yang terletak pada garis pantai dan dipengaruhi oleh pasang-surut air laut. Hutan ini umumnya tumbuh di tempat-tempat dimana terjadi pelumpuran dan akumulasi bahan organik, baik di teluk-teluk yang terlindung dari gempuran ombak, maupun disekitar muara sungai dimana air melambat dan

mengendapkan lumpur yang dibawanya dari hulu (Anwar dkk,1984).

Gambar 1. Hutan Bakau yang terdapat di pantai Ringgung Pesawaran

Lumpur merupakan bagian ekosistem di hutan bakau yang mengandung sejumlah bahan organik, dengan sumber karbon yang menghasilkan

bentuk-bentuk yang kompleks (seperti metabolit sekunder, enzim selulase dan kitinase). Bahan organik tersebut digunakan oleh mikroorganisme sebagai sumber karbon dan nitrogen. Salah satu mikroorganisme tersebut adalah actinomycetes(Magarveyet al., 2004; Suryanto dan Yurnaliza, 2005).

B. Actinomycetes

Actinomycetesmerupakan organisme peralihan antara jamur dan bakteri. (Alexander, 1997). Organisme ini memiliki sifat-sifat yang umum dimiliki oleh jamur dan bakteri. Terlihat dari luar seperti jamur karena mempunyai hifa bercabang yang membentuk miselium. Miselium padaactinomycetesdapat berupa miselium udara dan miselium substrat yang mempunyai spora (Atlas, 1995). Actinomycetesmenyerupai bakteri karena termasuk kelompok bakteri gram positif yang memiliki dinding sel yang terdiri dari polimer-polimer gula, asam amino dan asam gula (Alexander, 1997). Walaupun demikian

actinomycetesmempunyai ciri yang khas, yang cukup membatasinya menjadi satu kelompok yang jelas berbeda. Pada lempeng agar,actinomycetesdapat dibedakan dengan mudah dari bakteri, dimana koloni bakteri tumbuh dengan cepat dan berlendir, sedangkanactinomycetesmuncul perlahan dan berbubuk serta melekat erat pada permukaan agar. Koloniactinomycetesbiasanya keras, kasar, dan tumbuh tinggi di atas permukaan medium. Umumnya,

actinomycetestidak toleran terhadap asam dan jumlahnya menurun pada pH 5,0. Rentang pH dan suhu yang cocok untuk pertumbuhanactinomycetesini adalah antara 6,5–8,0 dan 25–300C (Rao, 1994).

Actinomycetesdiketahui sebagai penghasil metabolit sekunder, sehingga telah banyak penelitian dilakukan untuk mengisolasiactinomycetes. Beberapa jenis actinomycetesyang telah berhasil diisolasi dan diketahui aktivitas biologisnya antara lain dapat dilihat pada tabel 1.

Table 1. Senyawa metabolit sekunder yang telah diisolasi dan sifat aktivitas biologinya (Jensenet.al.,2006).

C. Senyawa Metabolit Sekunder

Suatu mikroorganisme dapat menghasilkan produk metabolisme yang disebut metabolit. Senyawa yang dihasilkan selama fase pertumbuhan primer

(tropofase, fase eksponensial atau fase log) disebut metabolit primer contohnya karbohidrat, protein, lemak, asam nukleat, dan enzim. Senyawa yang

diproduksi selama fase stasioner disebut metabolit sekunder, contohnya terpenoid, steroid, alkaloid dan flavonoid. (Bajpaiet al, 1981; Zborowski, 2004). Metabolit sekunder tidak dihasilkan oleh seluruh mikroorganisme, selain itu jenis metabolit sekunder yang terbentuk berbeda antara

mikroorganisme satu dengan yang lain. Pembentukan metabolit sekunder

No Senyawa Nama

actinomycetes

Aktivitas

biologis Molekul target 1. Salinosporamid A S. tropica Antikanker proteasome 2. Rifamisin S. arenicola Antibiotik RNA

polimerase 3. Staurosporin S. arenicola Antikanker Protein kinase 4. Saliniketal S. arenicola Antikanker Ornathine

Decarboxylase 5. Siklomarin A S. arenicola Antiinflamasi

Antiviral

-sangat bergantung pada kondisi pertumbuhan, terutama komposisi medium. Metabolit sekunder hanya diproduksi dalam jumlah sedikit. Fungsi senyawa metabolit sekunder pada organisme diantaranya untuk bertahan terhadap predator, kompetitor dan untuk mendukung proses reproduksi (Faulkner, 2000).

Salah satu golongan senyawa metabolit sekunder yang terdapat pada

actinomycetesyaitu dari golongan alkaloid (Jensenet al., 1991, Gorajanaet al., 2005; Onaka, 2006)

D. Senyawa alkaloid

Alkaloid merupakan golongan senyawa metabolit sekunder terbesar dan diperkirakan ada 5500 alkaloid telah diketahui jenisnya. Tidak ada satu pun definisi yang memuaskan tentang alkaloid, tetapi alkaloid umumnya mencakup senyawa-senyawa bersifat basa yang mengandung satu atau lebih atom

nitrogen, biasanya sebagai bagian dari sistem siklik. Secara kimia, alkaloid adalah golongan yang sangat heterogen berkisar dari senyawa-senyawa yang sederhana seperticoniinesampai ke struktur pentasiklikstrychnine. Sebagai hasil metabolit sekunder, senyawa alkaloid berguna sebagai cadangan bagi biosintesis protein, pelindung, penguat dan pengatur kerja hormon (Harborne, 1984; Bhakuni and Rawat, 2005)

Sifat–sifat alkaloid :

a. Biasanya merupakan kristal tak berwarna, tidak mudah menguap, tidak larut dalam air, larut dalam pelarut organik. Beberapa alkaloid berwujud cair dan larut dalam air. Ada juga alkaloid yang berwarna, misalnya berberin (kuning).

b. Bersifat basa (pahit, racun). c. Mempunyai efek fisiologis

d. Dapat membentuk endapan dengan asam fosfomolibdat, asam pikrat, dan kalium merkuriiodida. (Tobing, 1989)

Hingga kini belum ada penggolongan yang jelas dari alkaloid. Menurut, Matsjeh (2002) alkaloid diklasifikasikan berdasarkan lokasi atom nitrogen di dalam struktur alkaloid.

Berdasarkan lokasi atom nitrogen di dalam struktur alkaloid, alkaloid dapat dibagi atas 5 golongan:

1. Alkaloid heterosiklik

2. Alkaloid dengan nitrogen eksosiklik dan amina alifatik 3. Alkaloid putressina, spermidina, dan spermina

4. Alkaloid peptida 5. Alkaloid

Dari lima golongan di atas, alkaloid heterosiklik adalah yang terbesar. Yang termasuk pada golongan ini adalah:

1. Alkaloid piridin-piperidin

Alkaloid piridin-piperidin mempunyai satu cincin karbon mengandung 1 atom nitrogen.

2. Alkaloid tropan

Alkaloid tropan mengandung satu atom nitrogen dengan gugus metilnya (N-CH3), dengan struktur inti:

3. Alkaloid kuinolin

Alkaloid quinolin mempunyai 2 cincin karbon dengan 1 atom nitrogen. 4. Alkaloid isokuinolin

Alkaloid isoquinolin mempunyai 2 cincin karbon mengandung 1 atom nitrogen.

5. Alkaloid indol

Alkaloid indol mempunyai 2 cincin karbon dengan 1 cincin indol. 6. Alkaloid imidazol

Alkaloid imidazol berupa cincin karbon mengandung 2 atom nitrogen 7. Alkaloid lupinan

Alkaloid lupinan mempunyai 2 cincin karbon dengan 1 atom N, dengan struktur inti:

8. Alkaloid steroid

Alkaloid steroid mengandung 2 cincin karbon dengan 1 atom nitrogen dan 1 rangka steroid yang mengandung 4 cincin karbon.

9. Alkaloid amina

Alkaloid amina golongan ini tidak mengandung N heterosiklik. Banyak yang merupakan tutrunan sederhana dari feniletilamin dan senyawa-senyawa turunan dari asam amino fenilalanin atau tirosin.

10. Alkaloid purin

Alkaloid purin mempunyai 2 cincin karbon dengan 4 atom nitrogen.

Gambar 2. Struktur jenis–jenis alkaloid (1. Pirolidin, 2. Tropen, 3. Kuinolin, 4. Isokuinolin, 5. Indol, 6. Imidazol, 7. Lupinan, 8. Feniletilamina)

Senyawa-senyawa alkaloid yang telah berhasil diisolasi dariactinomycetes menunjukkan aktivitas biologis diantaranya:

1. Senyawa aburatubolaktam memiliki aktivitas sebagai antiperadangan dan antipenuaan (Kuramoto et al, 2004)

1 2 3 4

2. Senyawa anthranilamid yang telah diisolasi dari actinomycetes laut yang memiliki aktivitas konsentrasi inhibitor minimum 20-107 µg/ml melawan mikroalga (Biabani et al., 1997).

3. Senyawa diazepinomicin memiliki aktivitas sebagai antibakteri, antikanker dan antiinflamasi (Lam, 2006)

4. Senyawa stourosporin memiliki aktivitas sebagai obat antitumor (Onaka, 2006).

N N

H N

O

M e H N M e O

H M e

5. Senyawa rebekkamisin sebagai inhibitor protein kinase (Onaka, 2006). N H N N H O O H

O H O M e O H C l

C l O O

E. Isolasi Dan Karakterisasi Senyawa Alkaloid 1. Ekstraksi

Ekstraksi merupakan suatu metode pemisahan berasarkan perbedaan distribusi senyawa sampel dalam dua pelarut yang tidak saling melarut. Salah satu langkah penting yang menentukan keberhasilan ekstraksi adalah pemilihan pelarut (Haslego,2004)

Syarat-syarat untuk pelarut dalam ekstraksi:

• tidak dapat bercampur dengan air

• memiliki kerapatan yang berbeda dengan air • karakteristik kelarutannya

• kestabilan dan volatilitas yang baik sehingga dapat dengan mudah dilepaskan dari senyawa organik dengan cara penguapan

• tidak beracun dan tidak mudah terbakar, tetapi kedua syarat ini sulit untuk dipenuhi.

Ekstraksi digolongkan kedalam dua bagian besar berdasarkan pada bentuk fasa yang diekstraksi yaitu ekstraksi cair-cair dan ekstraksi cair-padat. Untuk ekstraksi cair-cair dapat menggunakan corong pisah, sedangkan untuk ekstraksi cair-padat terdiri dari beberapa cara yaitu maserasi, perkolasi dan, sokletsi (Harborne, 1984).

2. Kromatografi lapis tipis (KLT)

Kromatografi lapis tipis merupakan metoda kromatografi cair yang melibatkan dua fasa yaitu fasa diam dan fasa gerak. Fasa geraknya berupa campuran pelarut pengembang dan fasa diamnya dapat berupa serbuk halus yang berfungsi sebagai permukaan penyerap (kromatografi cair-padat) atau berfungsi sebagai penyangga untuk lapisan zat cair (kromatografi cair-cair). Fasa diam (adsorben) yang sering digunakan adalah serbuk silika gel, alumina dan selulosa yang mempunyai ukuran butir sangat kecil, yaitu 0,063-0,125 mm. Fasa diam yang umum digunakan adalah silika gel yang dapat dipakai untuk memisahkan campuran senyawa lipofil maupun campuran senyawa hidrofil (Hostettman dkk., 1995).

Kromatografi lapis tipis dapat digunakan untuk keperluan yang luas dalam pemisahan-pemisahan. Disamping memberikan hasil pemisahan yang lebih baik, juga membutuhkan waktu yang lebih cepat. Kromatografi lapis tipis hanya membutuhkan cuplikan dalam jumlah sedikit dan noda-noda yang terpisahkan dilokalisir pada plat. Metode lapis tipis mempunyai keuntungan yang utama yaitu membutuhkan waktu yang lebih cepat dan diperoleh pemisahan yang lebih baik. Waktu rata-rata untuk kromatografi lapis tipis

dengan panjang 10 cm pada silika gel adalah sekitar 20-30 menit (tergantung sifat fase gerak) (Sastrohamidjojo, 1991).

Menurut Gritter (1991), penampakan bercak pada KLT dapat diidentifikasi dengan menghitung harga Rf(Retardation Factor)yaitu :

Jarak perjalanan suatu senyawa Rf =

Jarak perjalanan suatu eluen

Harga Rfkomponen murni dapat dibandingkan dengan harga Rfsenyawa

standar, karena pada kondisi tertentu suatu senyawa akan memiliki harga Rf

yang sama. Harga Rfini bergantung pada beberapa parameter yaitu sistem

pelarut, adsorben (ukuran butir, ketebalan), jumlah bahan yang ditotolkan pada plat, dan suhu (Khopkar, 2002).

3. Kromatografi kolom

Kromatografi kolom digunakan untuk mendapatkan hasil zat murni secara preparatif dari campuran beberapa senyawa yang diperoleh dari hasil isolasi. Dalam kromatografi kolom campuran terpisah dalam zona-zona warna yang berbeda dalam tiap pelarut. Untuk kromatografi kolom dari larutan dibutuhkan tabung pemisah tertentu yang diisi dengan bahan sorbsi dan juga pelarut

pengembang yang berbeda. Tabung pemisah yang diisi dengan bahan sorbsi disebut kolom pemisah (Kisman dan Ibrahim, 1998).

Pada dasarnya kromatografi kolom ini meliputi penempatan campuran suatu senyawa diatas kolom yang diisi serbuk penyerap (silika gel), kemudian dielusi beruntun dengan pelarut yang sesuai. Pelarut tersebut akan mengangkut

senyawa-senyawa yang merupakan komponen dari campuran dan kecepatan daya pisah bergantung pada besarnya komponen terhambat dalam kolom (Johnson dan Stevenson, 1991).

4. Kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT)

Kromatografi Cairan Kinerja Tinggi (KCKT) merupakan salah satu teknik kromatografi untuk zat cair yang biasanya disertai dengan tekanan tinggi.

KCKT secara mendasar merupakan perkembangan tingkat tinggi dari

kromatografi kolom. Selain dari pelarut yang menetes melalui kolom dibawah gravitasi, didukung melalui tekanan tinggi sampai dengan 400 atm.

KCKT merupakan suatu kromatografi yang memiliki fungsi sama dengan Kromatografi Lapis Tipis (KLT) dan kromatografi kolom yaitu untuk mengetahui hasil analisis kualitatif, analisis kuantitatif, menentukan jumlah komponen campuran, mengidentifikasi komponen, namun penggunaan KCKT memiliki keuntungan yaitu hasil keluarannya berupa kromatogram.

Berdasarkan polaritas relative fasa gerak dan fasa diamnya, KCKT dibagi menjadi dua, yaitu fasa normal yang umum digunakan untuk identifikasi senyawa nonpolar dan fasa terbalik yang umum digunakan untuk identifikasi senyawa polar. Pada fasa normal, fasa gerak yang digunakan kurang polar dibandingkan fasa diam. Sedangkan pada fase terbalik, fasa gerak lebih polar dibandingkan fasa diam (Gritter dkk, 1991).

Cara kerja KCKT sebagai berikut: dengan bantuan pompa fasa gerak cair dialirkan melalui kolom ke detektor. Sampel dimasukkan ke dalam aliran fasa gerak dengan cara penyuntikan. Di dalam kolom terjadi pemisahan

komponen-komponen campuran. Karena perbedaan kekuatan interaksi antara zat terlarut terhadap fasa diam. Zat terlarut yang kurang kuat interaksinya dengan fasa diam akan keluar dari kolom lebih dulu. Sebaliknya, zat terlarut yang kuat berinteraksi dengan fasa diam akan keluar dari kolom lebih lama. Setiap komponen campuran yang keluar kolom dideteksi oleh detektor yang kemudian direkam dalam bentuk kromatogram (Anwar ,1994).

Gambar 8. Diagram alat Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT) (Anwar ,1994)

Metode yang digunakan untuk mendeteksi substansi yang telah melewati kolom KCKT pada penelitian ini digunakan ELSD (Evaporative Light

Scattering Detection) yaitu, detektor hamburan cahaya menguapkan yang dapat digunakan untuk mendeteksi analit dengan berbagai panjang gelombang. Pada detektor ini sampel yang akan dideteksi harus melalui 3 tahap yaitu:

a. Nebulisasi merupakan langkah pertama untuk mengubah seluruh fasa gerak yang mengalir dari kolom KCKT dengan bantuan gas nitrogen menjadi butiran halus atau disebut dengan aerosol.

b. Evaporasi ( penguapan) merupakan langkah kedua setelah fasa gerak diubah menjadi aerosol yang dibawa oleh aliran gas ke daerah panas yang terletak sebelum ruang deteksi. Pelarut akan diuapkan untuk menghasilkan partikel zat terlarut murni.

c. Deteksi dimana partikel-partikel sampel akan ditembakkan dengan sumber cahaya, jumlah cahaya yang tersebar yang diukur dengan menggunakan

fotomultiplier dan perangkat elektronik.

Gambar 9. Diagram detektor Evaporative Light Scattering Detection(ELSD)

(http://www.sedere.com/writable/versions/sedere/applications/index-upload-ELSD_Biblio_2010.pdf)

F. Bakteri

Bakteri adalah mikroorganisme bersel tunggal tidak terlihat oleh mata, berukuran antara 0,5–10 µm dan lebar 0,5-2,5 µm tergantung pada jenisnya. Terdapat beribu jenis bakteri, tapi hanya beberapa jenis bakteri yang

ditemukan, diantaranya berbentuk coccus, batang, spiral, vibrio (Buckel dkk., 1987).

Bentuk dan ukuran bakteri ada beberapa macam, antara lain : a. Bentuk basil : lebar 0,3 -1µm, panjang 1,5–4 µm

b. Bentukcoccus: ukuran tengahnya rata-rata 1 µm

c. Bentuk spiral : lebar 0,5 -1 µm, panjang 2-5 µm, kadang sampai 10 µm d. Bentukvibrio: lebar 0,5 µm, panjang sampai 3 µm

e. Bentukspirocheta: lebar 0,2 -0,7 µm, panjang 5 -10 µm. (Adam, 1995)

Secara garis besar bakteri dibedakan berdasarkan perbedaan komposisi dinding selnya yaitu: bakteri gram positif dan gram negatif.

1. Staphylococcus aureus

Staphylococcusmerupakan bakteri Gram positif berbentuk bulat biasanya tersusun dalam bentuk menggerombol yang tidak teratur seperti anggur.

Staphylococcusbertambah dengan cepat pada beberapa tipe media dengan aktif melakukan metabolisme, melakukan fermentasi karbohidrat dan menghasilkan bermacam-macam pigmen dari warna putih hingga kuning gelap.

Staphylococcus cepat menjadi resisten terhadap beberapa antimikroba (Jawetz, et al., 2001).

KlasifikasiStaphylococcus aureus: • Kingdom :Protozoa

• Divisio :Schyzomycetes • Class :Schyzomycetes

• Ordo :Eubacterialos • Family :Micrococcaceae • Genus :Staphylococcus

• Species :Staphylococcus aureus (Salle, 1961)

Gambar 10. BakteriStaphylococcus aureus

(http://millicent.blogdetik.com/2010/06/04/keyboard-sumber-bakteri)

Staphylococcustumbuh dengan baik pada berbagai media bakteriologi dibawah suasana aerobik atau mikroaerofilik. Tumbuh dengan cepat pada temperatur 20 -35ºC. Koloni pada media padat berbentuk bulat, lambat dan mengkilat (Jawetz, et al., 2001).

Staphylococcus aureusmempunyai 4 karakteristik khusus, yaitu faktor virulensi yang menyebabkan penyakit berat pada normal hast, faktor

differensiasi yang menyebabkan penyakit yang berbeda pada sisi atau tempat berbeda, faktor persisten bakteri pada lingkungan dan manusia yang membawa gejala karier, dan faktor resistensi terhadap berbagai antibiotik yang

sebelumnya masih efektif (Spicer, 2000). Staphylococcus aureus

menghasilkan katalase yang mengubah hidrogen peroksida menjadi air dan oksigen (Jawetz,et al., 2001).

2. Escherichia coli

Organisme ini tersebar luas di alam biasanya lazim terdapat dalam sel pencernaan manusia dan hewan. Dalam Merchant dan Parker (1961)

disebutkan spesiesE. colitidak dapat mengurangi asam sitrat dan garam asam sitrat sebagai sumber karbon tunggal dan tidak menghasilkan pigmen, tetapi kadang-kadang menghasilkan pigmen berwarna kuning.

KlasifikasiEscherichia coli: • Divisio :Schizomycota • Kelas :Schizomycetec • Ordo :Eubacteriaceae • Genus :Escherichia

Gambar 11. BakteriEscherichia coli

(http://dokterternak.com/2011/05/31/penyakit-colibacillosis-akibat-bakteri-e-coli-pada-ayam/)

E. colitersebar diseluruh dunia dan ditularkan bersama air atau makanan yang terkontaminasi oleh feses. Escherichia coliberbentuk batang, tebal 0,5µm; panjang antara 1,0 -3,0 µm; bervariasi dari bentuk koloid sampai berbentuk seperti filamen yang panjang; tidak berbentuk spora; motil dan filamen perithin beberapa galur tidak memiliki flagella; bersifat Gram negatif (Merchant dan Parker, 1961).

E. colibersifat aerob atau kualitatif anaerob, dapat tumbuh pada media buatan. Beberapa sifat E. coli antara lain pertumbuhan optimum pada suhu 37ºC, dapat tumbuh pada suhu 15ºC -45ºC, tumbuh baik pada pH 7,0 tapi tumbuh juga pada pH yang lebih tinggi (Merchant dan Parker, 1961).

Koloni terlihat basah, mengkilat, tidak bening, bulat dan dengan tepi yang terlihat halus dan rata. Koloni muda terlihat granuler halus dan makin tua menjadi granuler kasar. Escherichia colimenghasilkan asam dan gas dari glukosa, laktosa, fruktosa, maltosa, arabinosa, xylosa, rhamnosa dan manitol; dapat atau tidak memfermentasi sukrosa, rafinosa, salisin, eskulin, dulsitol dan

gliserol; bervariasi dalam memfermentasi sakrosa dan salisin, pektin dan adonitol jarang difermentasikan; dekstrin, pati dan glikogen dan inositol tidak pernah difermentasikan (Merchant dan Parker, 1961).

Escherichia colimenghasilkan katalase, tidak mencairkan gelatin, membentuk indol, mereduksi nitrat, mengoksidasi dan mengasamkan air susu tanpa

peptonisasi, mengoksidasi kentang sehingga berwarna coklat gelap, tidak menghasilkan gas H2S (Merchant dan Parker, 1961).

G. Uji Antibakteri

Antibakteri adalah zat yang menghambat pertumbuhan bakteri dan digunakan secara khusus untuk mengobati infeksi (pelczar dan Chan 1986).

Pengukuran aktivitas antibakteri menurut Jawetz (1986) meliputi 2 cara yaitu:

1. Dilusi

Pada prinsipnya antibiotik diencerkan hingga diperoleh beberapa konsentrasi. Metode yang dipakai ada dua macam, yaitu metode dilusi kaldu disebut juga dengan dilusi cair dan metode dilusi agar atau dilusi padat. Pada dilusi cair, masing-masing konsentrasi obat ditambah suspensi kuman atau bakteri dalam media. Sedangkan dalam dilusi padat, tiap konsentrasi obat dicampur dengan media agar, lalu ditanami bakteri (Brander et al., 1991).

Pertumbuhan bakteri ditandai oleh adanya kekeruhan setelah 16-20 jam diinkubasi. Konsentrasi terendah yang menghambat pertumbuhan bakteri ditunjukkan dengan tidak adanya kekeruhan, dan disebut dengan Konsentrasi

Hambat Minimal (KHM). Masing-masing konsentrasi antibiotik yang menunjukkan hambatan pertumbuhan ditanam pada agar padat media

pertumbuhan bakteri dan diinkubasi. Konsentrasi terendah dari antibiotik yang membunuh 99,9% inokulum bakteri disebut Konsentrasi Bakterisid Minimal (Brander et al., 1991).

2. Difusi

Media difusi menggunakan kertas disk yang berisi antibiotik dan telah

diketahui konsentrasinya. Pada metode difusi, media yang dipakai adalah agar Mueller Hinton. Ada beberapa cara pada metode difusi ini, yaitu :

i. Cara Kirby-Bauer

Cara Kirby-Bauer merupakan suatu metode uji sensitivitas bakteri yang dilakukan dengan membuat suspensi bakteri pada media Brain Heart Infusion (BHI) cair dari koloni pertumbuhan kuman 24 jam, selanjutnya disuspensikan dalam 0,5 ml BHI cair (diinkubasi 4-8 jam pada suhu 37°C) (Jawetz et al., 2001).

Hasil inkubasi bakteri diencerkan sampai sesuai dengan standar konsentrasi kuman 108 CFU/ml (CFU : Coloni Forming Unit). Suspensi bakteri diuji sensitivitas dengan meratakan suspensi bakteri tersebut pada permukaan media agar. Disk antibiotik diletakkan di atas media tersebut dan kemudian diinkubasi pada suhu 37°C selama 19-24 jam kemudian dibaca hasilnya (Jawetz et al., 2001).

ii. Cara sumuran

Suspensi bakteri 108CFU/ml diratakan pada media agar, kemudian agar tersebut dibuat sumuran dengan garis tengah tertentu menurut kebutuhan. Larutan antibiotik yang digunakan diteteskan kedalam sumuran. Diinkubasi pada suhu 37°C selama 18-24 jam. Dibaca hasilnya, seperti pada cara Kirby-Bauer (Jawetz et al., 2001).

iii. CaraPour Plate

Setelah dibuat suspensi kuman dengan larutan BHI sampai konsentrasi standar (108CFU/ml), lalu diambil satu mata ose dan dimasukkan kedalam 4ml agar base 1,5% dengan temperatur 50°C. Suspensi kuman tersebut dibuat homogen dan dituang pada media agar Mueller Hinton. Setelah beku, kemudian

dipasang disk atau ring yang diberi antibiotik (diinkubasi 15-20 jam pada suhu 37°C) dibaca dan disesuaikan dengan standar masing-masing antibiotik

(Jawetz et al., 2001).

H. Spektroskopi Infra Merah (IR)

Spektroskopi infra merah adalah suatu metoda analisis yang didasarkan pada penyerapan sinar infra merah. Fungsi utama dari spektroskopi infra merah adalah untuk mengenal struktur molekul (gugus fungsional). Spektroskopi infra merah adalah grafik dari persentasi transmitansi dengan panjang

gelombang atau penurunan frekuensi. Tiap lekukan yang disebut gelombang atau puncak menunjukkan adsorbsi dari radiasi inframerah oleh cuplikan pada frekuensi tersebut (Fessenden&Fessenden:1981).

Prinsip kerja dari metode ini adalah apabila sinar dilewatkan melalui cuplikan senyawa organik, maka sejumlah frekuensi yang lain akan diteruskan. Karena atom-atom dalam suatu molekul tidak diam melainkan bervibrasi, maka penyerapan frekuensi (energi ini mengakibatkan terjadinya transisi diantara tingkat vibrasi dasar dan tingkat vibrasi tereksitasi. Metode ini juga digunakan dalam mendeteksi gugus fungsional, mengidentifikasi senyawa dan

menganalisis campuran (Day and Underwood, 1989)

Sebagai contoh spektrum serapan IR senyawa alkaloid dariactinomycetes yaitu: senyawaN-Carboxamido-staurosporine memberikan data serapanIR : ν = 2855, 2929, 2359, 2344, 1633, 1458, 1385, 1316, 1282, 1120, 1018 cm-1. (Wuet.al, 2006).

A. Tempat dan Waktu Penelitian

Penelitian ini telah dilakukan dari bulan Februari 2011 sampai bulan

November 2011 di Laboratorium Biomassa Universitas Lampung. Analisis struktur dengan spektrofotometriFourier Transform Infra Reddilakukan di Laboratorium Biomassa Universitas Lampung.

B. Alat dan Bahan 1. Alat-alat

Alat-alat yang digunakan pada penelitian ini adalah: alat-alat gelas, pengguncang orbital (orbital shaker) Wiggen Houser 05-150, jarum ose, pinset, pipet Ependrof, inkubator CO2Memmert-Germany, otoklaf Hitachi CF

16RX II, alatlaminar air flowESCO/AVC4A1, alat sentrifugasi Hitachi/CF-46RX, penguap putar vakum Buchii/R205, lampu UV kohler/SN402006, seperangkat alat kromatografi lapis tipis, seperangkat alat kromatografi kolom, seperangkat alat Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT) Varian 940-LC dengan Detektor ELS Varian 385-LC, spektofotometerfourier transform infrared( FTIR ) Varian/Scimittar 2000.

2. Bahan-bahan

Bahan-bahan yang digunakan adalah: isolat murniactinomycetesAnLd-2b-3 yang terdapat di Laboratorium Biomassa Universitas Lampung, ekstrak ragi, bubuk agar, tepung pati,Tryptic Soy Broth(TSB),nutrient agar(NA), pepton, dektrosa, kloramfenikol, sikloheksamida, asam nalidixat, bismut nitrat, asam tartarat, kalium iodida, pereaksi serium sulfat, natrium hidroksida, asam klorida, berbagai macam pelarut p.a yang berasal dari J.T Beaker antaralain: etanol, n-heksana, diklorometana, metanol, silika gel 60 Merck(0,063-0,200 mm), plat KLT silika gel 60 F254, bakteri gram negatif (Escherichia coli), dan

bakteri gram positif (Staphylococcus aureus).

C. Prosedur Penelitian

1. Pembuatan media perkembangbiakanActinomycetes

i. Pembuatan mediaTryptic Soy Broth(TSB)

Tiga puluh sembilan gram TSB dilarutkan dalam 1 L air laut steril kemudian di sterilkan. Campuran yang dihasilkan disebut media TSB (Magarveyet al., 2004).

ii. Pembuatan media M1

Sepuluh gram pati, 4 gram ekstrak ragi, 2 gram pepton dilarutkan dalam 1 L air laut steril kemudian di sterilkan. Campuran yang dihasilkan disebut media M1 (Magarveyet al., 2004).

2. Produksi senyawa metabolit sekunder (Magarveyet al., 2004)

Isolat murniactinomycetesAnLd-2b-3 telah dibiakkan di dalam tabung gelas yang berisi 175 mL media TSB sambil diguncang dengan pengguncang orbital pada suhu 250C dengan kecepatan 120 rpm selama 14 hari. Hasil inkubasi dipindahkan ke dalam botol yang berisi 5 L media M1 dan diinkubasi kembali selama 21 hari. Biakan yang dihasilkan dipisahkan dengan menggunakan alat sentrifugasi pada suhu 40C, kecepatan 6500 rpm, selama 15 menit hingga diperoleh filtrat dan biomassanya. Masing-masing filtrat dan biomass ini dimaserasi selama 1 hari dengan pelarut DCM:MeOH (1:1). Maserat diekstraksi dengan menggunakan corong pisah. Maserat dari keduanya

masing-masing diuji dengan metode KLT untuk melihat pola kromatogramnya apabila memunjukkan pola yang sama maka kedua maserat digabung dan selanjutnya maserat tersebut kemudian diuapkan dengan menggunakan

penguap putar vakum. Ekstrak pekat ini dianalisis menggunakan metode KLT menggunakan larutan pengembang DCM:MeOH dengan berbagai

perbandingan , hingga diperoleh komposisi eluen terbaik yaitu yang

memberikan pola pemisahan terbaik. Komposisi larutan ini akan digunakan sebagai eluen dalam pemurnian ekstrak dengan metode kromatografi kolom. Kromatogram hasil KLT yang dihasilkan diamati dengan lampu UV dengan panjang gelombang 254 nm dan 366 nm, diidentifikasi menggunakan pereaksi CeSO4 untuk mengetahui senyawa metabolit sekunder yang ada pada ekstrak

pekat tersebut dan pereaksi Dragendroff untuk mengetahui keberadaan senyawa alkaloid.

3. Fraksinasi senyawa metabolit sekunder menggunakan metode kromatografi kolom

Fraksinasi menggunakan metode kromatografi kolom bertujuan untuk mendapatkan senyawa alkaloid murni dari ekstrak hasil maserasi. Ekstrak DCM:MeOH pekat diimpregnasi menggunakan pelarut metanol ke dalam silika impreg dengan perbandingan sampel:silika yaitu 1:2 dan elusi dilakukan secara elusi landaian menggunakan pelarut yang tepat menghasilkan fraksi-fraksi. Fraksi-fraksi hasil pemisahan dianalisis kembali dengan metode KLT menggunakan pereaksi CeSO4dan Dragendoff. Fraksi yang memiliki

kromatogram sama digabung menjadi satu dan selanjutnya direfraksinasi sampai diperoleh komponen yang murni.

4. Analisis dengan kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT) Kromatografi cair kinerja tinggi pada penelitian ini digunakan untuk mengetahui tingkat kemurnian dari fraksi yang mengandung alkaloid hasil pemisahan kolom kromatografi. Sampel sebanyak 5 µL dimasukkan ke dalam botol vial kemudian diletakkan dalam rak yang selanjutnya akan diinjeksi. Fasa diam yang digunakan adalah kolom C18dengan panjang 125 mm yang

berdiameter 4,6 mm dan fasa gerak yang dipakai adalah metanol-air (90:10). Detektor yang digunakan adalahEvaporative Light Scatter Detector(ELSD yang merupakan detektor universal dengan suhu evaporasi 300C, suhu nebulizer 400C, laju alir sebesar 1,0 mL/menit, laju gas nitrogen 1,6 L/menit.

5. Identifikasi senyawa menggunakan spektroskopiFrourier Transform Infra Red(FTIR)

Analisis FTIR bertujuan untuk memperhatikan karakteristik serapan gugus fungsi dari fraksi murni yang mengandung senyawa alkaloid. Caranya, senyawa digerus bersama KBr hingga homogen, kemudian dikempa hingga menjadi pelet KBr. Pelet tersebut diidentifikasi menggunakan

spektrofotometer FTIR

6. Pengujian antibakteri

Uji antibakteri senyawa isolate dilakukan terhadap pertumbuhan bakteri (S. aureusdan E. coli) dengan teknik difusi yaitu dengan meletakkan silinder (cincin) besi tahan karat berukuran diameter 6 mm pada medium NA yang telah di inokulasikan bakteri (S. aureusdanE. coli). Caranya 10 mL media NA dituang ke dalam cawan petri yang sudah disterilkan, lalu dipadatkan sebagai lapisan pertama. Kemudian media NA cair yang telah diinokulasi bakteri uji dituang di atas media NA yang telah padat, lalu diratakan dan dibiarkan memadat, kemudian diletakkan silinder (cincin) besi tahan karat yang telah steril. Ekstrak senyawa alkaloid dengan konsentrasi 5000 bpj, kloramfenikol (kontrol positif) dengan konsentrasi 100 bpj dan metanol (kontrol negatifnya) dimasukkan ke dalam cincin yang berbeda sebanyak 50 µL. Inkubasi dilakukan selama ± 24 jam dan diamati diameter zona hambat yang dihasilkan dari senyawa alkaloid, kloramfenikol dan metanol.

A. Simpulan

Dari hasil penelitian yang telah dilakukan, dapat disimpulkan bahwa :

1. IsolasiactinomycetesANLd-2b-3 menggunakan metoda kromatografi kolom diperoleh senyawa alkaloid dengan rendemen 3,7 %.

2. Analisis FTIR menunjukkan bahwa senyawa alkaloid tersebut mengandung gugus fungsi amina tersier, primer atau sekunder, gugus karboksil, dan gugus hidroksil.

3. Senyawa alkaloid yang diperoleh dari isolatactinomyceteslumpur hutan bakau memiliki aktivitas antibakteri terhadap bakteriEschericia coli, Staphylococcus aureus

B. Saran

Berdasarkan hasil penelitian yang diperoleh pada penelitian ini, untuk penelitian selanjutnya disarankan :

1. Melakukan teknik pemurnian menggunakan metoda lain yang lebih efektif dan cepat pada proses pemurniannya sehingga tidak menghabiskan banyak

waktu dan sampel yang diperoleh dapat lebih murni dengan rendemen yang tinggi.

2. Melakukan analisis struktur senyawa dengan menggunakan metode spektroskopi C RMI dan H RMI untuk mengetahui informasi struktural mengenai atom atom hidrogen dan karbon dalam sebuah molekul senyawa alkaloid, spektroskopiUV untuk mengetahui λ_{maks, spektroskopi massa} untuk mengetahui bobot molekul senyawa alkaloid, sehingga dapat ditentukan struktur dari senyawa alkaloid hasil isolasi, dan dua dimensi.

(Skripsi)

Oleh

Deliana Hernawati

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM UNIVERSITAS LAMPUNG

BANDAR LAMPUNG 2012

Oleh

Deliana Hernawati

Skripsi

Sebagai Salah Satu Syarat untuk Mencapai Gelar SARJANA SAINS

pada Jurusan Kimia

Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM UNIVERSITAS LAMPUNG

BANDAR LAMPUNG 2012

persembahkan skripsi ini

sebagai ungkapan bakti,

hormat kepada:

Bapa dan Mamaku Tercinta

Yang selalu memberikan kasih

sayangnya, tak pernah lelah

bermandi peluh, dan selalu

mendoakanku

Adik-adikku Tersayang

Sebagai Penyala Semangat,

Nama Mahasiswa : Deliana Hernawati Nomor pokok Mahasiswa : 0517011025 Program Studi : Kimia

Fakultas : Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam

MENYETUJUI 1. Komisi Pembimbing

Dra. Nurul Utami, M.Sc. Dian Herasari, M.Si.

NIP. 196204121989032002 NIP. 19710806200032001

2. Ketua Jurusan Kimia

Andi Setiawan, Ph.D. NIP 195809221988111001

1. Tim Penguji

Ketua : Dra.Nurul Utami, M.Sc ...

Sekertaris : Dian Herasari, M.Si. ...

Penguji

Bukan Pembimbing : Andi Setiawan,Ph.D. ...

2. Dekan Fakultas MIPA

Prof. Dr. Sutyarso, M.Biomed. NIP 195704241987031001

Penulis dilahirkan di Bogor pada tanggal 05 April 1986 sebagai anak Pertama dari tiga bersaudara pasangan S. Simamora dan R br. Manalu.

Penulis menyelesaikan pendidikan Taman Kanak-kanak (TK) pada tahun 1992 di TK Mardi-Yuana, tahun 1998 menyelesaikan Sekolah Dasar (SD) di SD Negeri 1

Wibawa Mukti, tahun 2001 menyelesaikan Sekolah Lanjutan Tingkat Pertama (SLTP) di SLTP Swasta Cinta Rakyat 2 Siantar Timur, menyelesaikan Sekolah Menegah Umum (SMU) di SMU Negeri 6 Bekasi, pada tahun 2004 dan pada tahun 2005 penulis diterima sebagai mahasiswa Universitas Lampung (UNILA) melalui jalur Seleksi Penerimaan Mahasiswa Baru (SPMB).

Selama menjadi mahasiswa, penulis pernah menjadi asisten pembimbing Kimia Dasar I Fakultas Matematika Dan Ilmu Pengetahuan Alam (MIPA) tahun 2008-2010 dan Fakultas Pertanian tahun 2010-2011, asisten praktikum Kimia Organik II, Fakultas MIPA tahun 2006-2008 penulis juga pernah aktif di organisasi Persekutuan Doa Oikumene (PDO) Fakultas MIPA UNILA.

Puji syukur penulis ucapkan atas kehadirat Allah Bapa Surgawi yang telah memberikan kasih dan karunia-NYA sehingga skripsi ini dapat diselesaikan

Skripsi dengan judul “Isolasi dan Identifikasi senyawa Alkaloid dari

Actinomycetes ANLd-2b-3 Lumpur Hutan Bakau” adalah salah satu syrat untuk memperoleh gelar sarjana Sains di Universitas lampung

Dalam kesempatan kali ini penulis mengucapkan terimakasih kepada: 1. Bapak Prof. Suharso Ph. D., Selaku Dekan Fakultas Matematika dan lmu

Pengetahuan Alam Universitas Lampung.

2. Bapak Andi Setiawan,Ph.D., selaku Ketua Jurusan Kimia Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas (MIPA) dan Penguji Utama pada ujian skripsi. Terimakasih atas ilmu, saran dan bimbingannya demi keberhasilan penelitian ini

3. Ibu Dra. Nurul Utami, M.Sc selaku dosen Pembimbing Utama dan

Pembimbing Akademik atas kesediannya yang telah memberikan banyak ilmu, saran, bimbingan dalam proses menyelesaikan studi dan penelitian ini.

4. Ibu Dian Herasari, M.Si selaku Pembimbing kedua atas bimbingan dan sarannya dalam proses menyelesaikan penelitian ini.

5. Bapak dan ibu staf dosen, karyawan dan laboran Jurusan Kimia Fakultas MIPA Universitas Lampung.

6. Kedua orang tua saya, adik-adik, kekasih, sahabat, dan rekan-rekan di Jurusan Kimia FMIPA Unila yang selalu memberikan semangat dan dukungan moral selama menyelesaikan studi

Bandar Lampung, 08 Februari 2012 Penulis

Dengan rasa syukur kehadirat

Tuhan Yesus Kristus Penulis

persembahkan skripsi ini

sebagai ungkapan bakti,

hormat kepada:

Bapa dan Mamaku Tercinta

Yang selalu memberikan kasih

sayangnya, tak pernah lelah

bermandi peluh, dan selalu

mendoakanku

Adik-adikku Tersayang

Sebagai Penyala Semangat,

Judul Skripsi :ISOLASI DAN IDENTIFIKASI SENYAWA ALKALOID DARIACTINOMYCETESANLd-2b-3 LUMPUR HUTAN BAKAU

Nama Mahasiswa : Deliana Hernawati Nomor pokok Mahasiswa : 0517011025 Program Studi : Kimia

Fakultas : Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam

MENYETUJUI 1. Komisi Pembimbing

Dra. Nurul Utami, M.Sc. Dian Herasari, M.Si.

NIP. 196204121989032002 NIP. 19710806200032001

2. Ketua Jurusan Kimia

Andi Setiawan, Ph.D. NIP 195809221988111001

MENGESAHKAN

1. Tim Penguji

Ketua : Dra.Nurul Utami, M.Sc ... Sekertaris : Dian Herasari, M.Si. ... Penguji

Bukan Pembimbing : Andi Setiawan,Ph.D. ...

2. Dekan Fakultas MIPA

Prof. Dr. Sutyarso, M.Biomed. NIP 195704241987031001

RIWAYAT HIDUP

Penulis dilahirkan di Bogor pada tanggal 05 April 1986 sebagai anak Pertama dari tiga bersaudara pasangan S. Simamora dan R br. Manalu.

Penulis menyelesaikan pendidikan Taman Kanak-kanak (TK) pada tahun 1992 di TK Mardi-Yuana, tahun 1998 menyelesaikan Sekolah Dasar (SD) di SD Negeri 1

Wibawa Mukti, tahun 2001 menyelesaikan Sekolah Lanjutan Tingkat Pertama (SLTP) di SLTP Swasta Cinta Rakyat 2 Siantar Timur, menyelesaikan Sekolah Menegah Umum (SMU) di SMU Negeri 6 Bekasi, pada tahun 2004 dan pada tahun 2005 penulis diterima sebagai mahasiswa Universitas Lampung (UNILA) melalui jalur Seleksi Penerimaan Mahasiswa Baru (SPMB).

Selama menjadi mahasiswa, penulis pernah menjadi asisten pembimbing Kimia Dasar I Fakultas Matematika Dan Ilmu Pengetahuan Alam (MIPA) tahun 2008-2010 dan Fakultas Pertanian tahun 2010-2011, asisten praktikum Kimia Organik II, Fakultas MIPA tahun 2006-2008 penulis juga pernah aktif di organisasi Persekutuan Doa Oikumene (PDO) Fakultas MIPA UNILA.

SANWACANA

Puji syukur penulis ucapkan atas kehadirat Allah Bapa Surgawi yang telah memberikan kasih dan karunia-NYA sehingga skripsi ini dapat diselesaikan

Skripsi dengan judul “Isolasi dan Identifikasi senyawa Alkaloid dari

Actinomycetes ANLd-2b-3 Lumpur Hutan Bakau” adalah salah satu syrat untuk memperoleh gelar sarjana Sains di Universitas lampung

Dalam kesempatan kali ini penulis mengucapkan terimakasih kepada: 1. Bapak Prof. Suharso Ph. D., Selaku Dekan Fakultas Matematika dan lmu

Pengetahuan Alam Universitas Lampung.

2. Bapak Andi Setiawan,Ph.D., selaku Ketua Jurusan Kimia Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas (MIPA) dan Penguji Utama pada ujian skripsi. Terimakasih atas ilmu, saran dan bimbingannya demi keberhasilan penelitian ini

3. Ibu Dra. Nurul Utami, M.Sc selaku dosen Pembimbing Utama dan

Pembimbing Akademik atas kesediannya yang telah memberikan banyak ilmu, saran, bimbingan dalam proses menyelesaikan studi dan penelitian ini.

4. Ibu Dian Herasari, M.Si selaku Pembimbing kedua atas bimbingan dan sarannya dalam proses menyelesaikan penelitian ini.

5. Bapak dan ibu staf dosen, karyawan dan laboran Jurusan Kimia Fakultas MIPA Universitas Lampung.

6. Kedua orang tua saya, adik-adik, kekasih, sahabat, dan rekan-rekan di Jurusan Kimia FMIPA Unila yang selalu memberikan semangat dan dukungan moral selama menyelesaikan studi

Penulis menyadari masih terdapat kekurangan dalam penulisan karya tulis ini, karena itu kritik dan saran yang bersifat membangun sangat penulis harapkan. Semoga karya tulis ini bermanfaat bagi kita semua.

Bandar Lampung, 08 Februari 2012 Penulis