Ekstraksi dan Pemurnian Protease dari Bacilus pumillus (Y1)
EKSTRAKSI DAN PEMURNIAN
PROTEASE
DARI
Bacillus pumiiius
(Y1)
1 9 9 4
FAKULTAS TEKNOLOGI PERTANIAN
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
B O G O R
Julius.
F
pumillus (Y1).
Ir.
0959.
27.
Ekstraksi dan Pemurnian Protease Dari Bacillus
Ir.
Di bawah bimbingan D r .
Maggy T. Suhartono
dan
Sutrisno Koswara.
RINGKASAN
Bacillus adalah bakteri yang sangat potensial u n t u k dijadi kan
sumber enzim protease.
Bacillus yang digunakan dalam penelitian i n i
adalah j e n i s B. pumillus (Y1) y a n g diisolasi d a r i limbah c a i r t a h u
Sedangkan penelitian ini bertujuan u n t u k mela-
( L i kumahwa, 1993).
kukan ekstraksi
dan
pemurnian
enzim
protease
d a r i B.
purnillus (Y1 ) dengan menggunakan berbagai kolom kromatografi [DEAE
( d i e t i l a m i n o e t i l ) Sephadex A-50 dan Amberlitel u n t u k mendapatkan
enzim protease yang relatif murni.
Dalam penelitian ini dilakukan fermentasi bakteri untuk menghas i l k a n enzim protease dalam limbah cair tahu dengan penambahan 2%
skim,
(w/v),
lalu d i i k u t i ekstraksi enzim dengan garam ammonium sulfat 55%
besi (111) klorida,
aluminium (111) k l o r i d a dan aseton dan
d i l a r u t k a n kembali dalam b u f f e r sodium sitrat,
f o s f a t 0.01 M pH 8.0,
sodium ditionat dan
kemudian d i d i a l i s i s dalam k a n t u n g selofan.
Dialisat lalu di kromatografi dalam resin penukar anion (Amberlite I R A
400 dan DEAE Sephadex A
Fraksi-fraksi
yang
- 50) dan penukar kation (Amberlite DP-1).
diperoleh, dipekatkan
dengan pengeringan beku
dan selanjutnya dielektroforesis dalam gel SDS-poliakrilamid.
Dari hasil
(ammonium sulfat,
ekstraksi dengan berbagai macam garam pengendap
besi (111) klorida,
aluminium (111) klorida),
maka
setelah dilarutkan kembaii hasil l a r u t a n enzim yang mempunyai a k t i f i t a s t i n g g i dihasilkan pada pengendapan oleh besi (111) k l o r i d a yang
kernudian d i l a r u t k a n dalam b u f f e r s i t r a t y a i t u sebesar 1.482 IU/ml,
a k t i f i t a s spesifiknya 67.364 IU/mg
dan konsentrasi proteinnya 0.022
rng/ml dan d i i k u t i dengan ammonium s u l f a t (0.348 IU/ml;
0.742 mg/ml).
0.742 IU/mg;
Sedangkan u n t u k pengendapan dengan peiarut organik
(aseton t e k n i s ) ,
a k t i f i t a s t e r t i n g g i d i d a p a t k a n pada p e r b a n d i n g a n
aseton dengan ekstrak kasar enzim sebesar 1 : 3 yaitu 2.406 IU/ml
dengan konsentrasi protein 2.367 mg/mi.
Namun karena pertimbangan
keamanan pangan oleh logam b e r a t (Fe) yang c u k u p riskan dan dilihat
d a r i segi ekonomis,
maka l a r u t a n enzim yang berasal dari pengenda-
p a n dengan ammonium s u l f a t l a h (0.393 I U / m l ) yang d i p a k a i u n t u k
tahap pemurnian selanjutnya.
Dari hasil penelitian pemurnian protease dari Bacillus pumillus
(Yl),
setelah pernisahan dengan Amberlite I R A 400 d i d a p a t k a n d u a
kelompok gabungan f r a k s i - f r a k s i
t i n g g i y a i t u A ( f r a k s i nomor 2
dengan a k t i f i t a s protease c u k u p
- 5 ) dan B ( f r a k s i nomor
dengan a k t i f i t a s masing-masing 0.186 IU/ml dan 0.159
aktifitas spesifiknya 0.451 IU/mg dan 0.846 IU/mg.
t e i n u n t u k A dan B b e r t u r u t - t u r u t
rng/ml.
- 18)
IU/ml s e r t a
Konsentrasi pro-
adalah 0.412 mg/ml
Pada pemisahan dengan Amberlite DP-1
11
dan 0.188
hanya didapat satu
- 6
kelompok f r a k s i dengan a k t i f i t a s t e r t i n g g i yaitu C (fraksi nomor 2
dengan a k t i f i t a s protease 0.194, a k t i f i t a s spesifik 0.357 IU/mg, konsent r a s i protein 0.442 mg/ml).
Sedangkan untuk DEAE Sephadex A
-
50
didapatkan dua kelompok gabungan f r a k s i - f r a k s i yaitu E (nomor 6 15) dan G (nomor 22
-
24) dengan a k t i f i t a s protease 0.186 IU/ml;
aktifitas spesifik 0.576 IU/mg;
konsentrasi protein 0.323 mg/ml
dan
0.131 IU/ml;
0.985 IU/mg;
0.133 rng/ml.
Untuk kelipatan pemurnian,
niiai terbesar didapat pada pemur-
- 4.3 k a l i )
n i a n dengan r e s i n D E A E Sephadex A - 50 (sebesar 2.5
kernudian Arnberiite penukar anion (IRA 400) (sebesar 2
-
3.6 kali) dan
Arnberlite penukar kation (DP-1) (1.9 kali).
Dari perhitungan hasil elektroforesis,
kan perkiraan
u n t u k f r a k s i A didapat-
berat rnolekul enzim adalah 19550.34 Dalton;
fraksi 6
didapat dua pita dengan perkiraan berat rnolekul enzimnya 25202.17
Dalton dan 19550.34 Dalton.
Untuk fraksi C tidak dapat ditentukan
berat rnolekul aproksimatnya karena p i t a yang dihasilkan dari elektroforesis tidak cukup jelas terlihat.
Sedangkan u n t u k f r a k s i E dan G
didapat dua pita dengan berat moiekul dugaannya 22197.10 Dalton dan
16160.02 Dalton.
I N S T I T U T PERTANIAN BOGOR
FAKULTAS TEKNOLOGI PERTANIAN
EKSTRAKSI DAN PEMURNIAN PROTEASE
DARI Bacillus purnillus (Y1 )
SKRIPSI
sebagai salah s a t u s y a r a t u n t u k mernperoleh g e l a r
SARJANA TEKNOLOGI PERTANIAN
p a d a J u r u s a n T e k n o l o g i Pangan d a n Gizi
Fakultas Teknologi Pertanian
Institut P e r t a n i a n Bogor
Oleh
J U L I U S
F 27. 0959
1994
JURUSAN TEKNOLOGI PANGAN DAN GIZI
FAKULTAS TEKNOLOGI PERTANIAN
I N S T I T U T PERTANIAN BOGOR
I N S T I T U T PERTANIAN BOGOR
FAKULTAS TEKNOLOGI PERTANIAN
EKSTRAKSI DAN PEMURNIAN PROTEASE
DARI Bacillus pumillus (Y1 )
SKRIPSI
sebagai salah satu s y a r a t u n t u k memperoleh gelar
SARJANA TEKNOLOGI PERTANIAN
p a d a J u r u s a n T e k n o l o g i Pangan d a n Gizi
F a k u l t a s Teknologi P e r t a n i a n
Institut P e r t a n i a n Bogor
Oleh
J U L I U S
F 27. 0959
Disetujui,
Bogor,
September 1994
-?/,p-.-r
A./
'.&
Dr. Ir. M&y
i
T. S u h a r t o n o
Dosen Pembirnbing I
Dosen Pembirnbing I1
KATA PENGANTAR
P u j i s y u k u r kepada T u h a n Yang Maha Kasih,
karunia-Nyalah
karena b e r k a t
p e n u l i s d a p a t rnenyelesaikan penulisan s k r i p s i i n i
dengan baik dan tepat pada waktunya.
Dengan tersusunnya laporan ini,
rnaka penulis hendak rnengha-
t u r k a n terirna kasih kepada :
1.
Ibu
Dr.
Ir.
pernbirnbing
dosen
Maggy
dan
I
penyusunan
Ir.
Bapak
pernbirnbing 11,
pengarahan
Thenawijaya
selarna
Suhartono,
Sutrisno
Koswara
yang telah rnernberi kan
berlangsungn ya
skripsi, s e r t a atas
selaku dosen
bantuan
penelitian
kesediaannya
selaku
dan
dan
proses
rnenjadi
dosen
p e n g u j i I dan 11.
2.
Ir.
Bapak
Feri K.
yang
telah
bersedia untuk menjadi dosen
penguji I11 pada u j i a n skripsi.
3.
Yang kukasihi di
dan
Rok kida
Jakarta,
Ibu,
Ayah,
Saudara-saudaraku
yang telah rnernberi kan kasi h sayang,
dorongan,
sernangat dan bantuan baik rnoril dan rnateriil.
4.
Sernua ternan-ternan se-lab dan para laboran
t h e most",
Kang Yaya,
Junaidi,
I b u Eni,
lain-lain) yang telah
Marcella,
I b u Ika,
Mardi,
(Pak
Agus,
Pak Angga,
rnernberi kan banyak
Putu "you're
Lili,
Ricki,
Pak Ujang
dan
bantuan dan suasana
k e r j a yang rnenyenangkan.
5.
Sernua
ma,
ternan-ternanku di Bogor,
Ong Hui Yung,
Elingsari,
Narto Sunarno,
Fiametta,
Evi
Grace, St.
WiratAgung
8
N.,
Suciono,
Durrnan,
I
Herijanto
dan
lain-lain yang
telah
memberi kan a r t i sebuah persahabatan.
6.
Semua
pihak
yang
t u r u t pula rnernbantu penulis daiarn rnenye-
iesai kan penyusunan laporan ini.
Penulis menyadari
bahwa dalam pelaksanaan rnaupun
daiarn
penyusunan s k r i p s i i n i masih jauh dari sernpurna dan tidak lepas dari
kesalahan,
sehingga k r i t i k dan saran u n t u k kesempurnaan iaporan ini
sangat diharapkan.
Akhirnya,
semoga tuiisan ini dapat rnemberi kan
manfaat bagi yang rnembutuhkannya.
Bogor, September 1994
Penulis,
DAFTAR I S 1
KATA PENGANTAR
...............................
i
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . iii
DAFTAR GAMBAR
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .v i
DAFTAR TABEL
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .v i i
DAFTAR LAMPIRAN . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .v i i i
............................... 1
I.
PENDAHULUAN
1
A . LATAR BELAKANG . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
B . TUJUAN . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3
I 1.
T I N J A U A N PUSTAKA
............................. 4
A . PROTEASE MIKROBA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4
B . PROTEASE Baci77us pumi77us
................. 6
C . EKSTRAKSI DAN PEMURNIAN . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 7
D . ELEKTROFORESIS . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 5
I11 . METODA P E N E L I T I A N . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 8
DAFTAR I S 1
.............................
1 . BAHAN . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
2 . ALAT
...................................
8 . METODA P E N E L I T I A N
.........................
.........................
1 . PRODUKSI E N Z I M
a. Produksi Inokulum ....................
b. P r o d u k s i Enzirn . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
2 . PEMURNIAN E N Z I M . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
a. Pengendapan dengan b e r b a g a i p e r e a k s i ..
b. D i a l i s i s .............................
A
.
BAHAN DAN A L A T
18
18
18
19
19
19
19
20
21
22
c.
Kromatografi
..........................
P e r s i a p a n k o l o m DEAE Seahadex A-50
Persiapan
Amberlite
...........
Elektroforesis .......................
P e r s i a p a n Sampel (Hames,
1987)
.....
oenukar
d.
kolom
..
a n i o n dan k a t i o n
Persiapan b u f f e r r e s e r v o i r
........................
(Sigma,1988)
Pembuatan Gel e l e k t r o f o r e s i s SDS ( 1 0 % )
(Hames,
1987)
.......................
Pewarnaan ( S t a i n i n q ) dan p e n g h i l a n g a n
warna ( d e s t a i n i n g l (Sigma,
Mo 7ecu7ar m a r k e r (Sigma,
.....
.......
1988)
1988)
...............................
Pengukuran j u m l a h p r o t e i n . . . . . . . . . . . .
Pengujian a k t i f i t a s protease . . . . . . . . .
3 . ANALISIS
a.
b.
IV.
HASIL DAN PEMBAHASAN
A.
Pemurnian
..........................
Enzim
Protease
A m b e r l i t e Penukar A n i o n
B.
Pemurnian
Pemurnian
...................
Enzim P r o t e a s e Dengan Kolom
A m b e r l i t e Penukar K a t i o n
C.
Dengan Kolom
Enzim
DEAE Sephadex A
- 50
...................
Protease
Dengan
Kolom
.......................
EKSTRAKSI DAN PEMURNIAN
PROTEASE
DARI
Bacillus pumiiius
(Y1)
1 9 9 4
FAKULTAS TEKNOLOGI PERTANIAN
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
B O G O R
Julius.
F
pumillus (Y1).
Ir.
0959.
27.
Ekstraksi dan Pemurnian Protease Dari Bacillus
Ir.
Di bawah bimbingan D r .
Maggy T. Suhartono
dan
Sutrisno Koswara.
RINGKASAN
Bacillus adalah bakteri yang sangat potensial u n t u k dijadi kan
sumber enzim protease.
Bacillus yang digunakan dalam penelitian i n i
adalah j e n i s B. pumillus (Y1) y a n g diisolasi d a r i limbah c a i r t a h u
Sedangkan penelitian ini bertujuan u n t u k mela-
( L i kumahwa, 1993).
kukan ekstraksi
dan
pemurnian
enzim
protease
d a r i B.
purnillus (Y1 ) dengan menggunakan berbagai kolom kromatografi [DEAE
( d i e t i l a m i n o e t i l ) Sephadex A-50 dan Amberlitel u n t u k mendapatkan
enzim protease yang relatif murni.
Dalam penelitian ini dilakukan fermentasi bakteri untuk menghas i l k a n enzim protease dalam limbah cair tahu dengan penambahan 2%
skim,
(w/v),
lalu d i i k u t i ekstraksi enzim dengan garam ammonium sulfat 55%
besi (111) klorida,
aluminium (111) k l o r i d a dan aseton dan
d i l a r u t k a n kembali dalam b u f f e r sodium sitrat,
f o s f a t 0.01 M pH 8.0,
sodium ditionat dan
kemudian d i d i a l i s i s dalam k a n t u n g selofan.
Dialisat lalu di kromatografi dalam resin penukar anion (Amberlite I R A
400 dan DEAE Sephadex A
Fraksi-fraksi
yang
- 50) dan penukar kation (Amberlite DP-1).
diperoleh, dipekatkan
dengan pengeringan beku
dan selanjutnya dielektroforesis dalam gel SDS-poliakrilamid.
Dari hasil
(ammonium sulfat,
ekstraksi dengan berbagai macam garam pengendap
besi (111) klorida,
aluminium (111) klorida),
maka
setelah dilarutkan kembaii hasil l a r u t a n enzim yang mempunyai a k t i f i t a s t i n g g i dihasilkan pada pengendapan oleh besi (111) k l o r i d a yang
kernudian d i l a r u t k a n dalam b u f f e r s i t r a t y a i t u sebesar 1.482 IU/ml,
a k t i f i t a s spesifiknya 67.364 IU/mg
dan konsentrasi proteinnya 0.022
rng/ml dan d i i k u t i dengan ammonium s u l f a t (0.348 IU/ml;
0.742 mg/ml).
0.742 IU/mg;
Sedangkan u n t u k pengendapan dengan peiarut organik
(aseton t e k n i s ) ,
a k t i f i t a s t e r t i n g g i d i d a p a t k a n pada p e r b a n d i n g a n
aseton dengan ekstrak kasar enzim sebesar 1 : 3 yaitu 2.406 IU/ml
dengan konsentrasi protein 2.367 mg/mi.
Namun karena pertimbangan
keamanan pangan oleh logam b e r a t (Fe) yang c u k u p riskan dan dilihat
d a r i segi ekonomis,
maka l a r u t a n enzim yang berasal dari pengenda-
p a n dengan ammonium s u l f a t l a h (0.393 I U / m l ) yang d i p a k a i u n t u k
tahap pemurnian selanjutnya.
Dari hasil penelitian pemurnian protease dari Bacillus pumillus
(Yl),
setelah pernisahan dengan Amberlite I R A 400 d i d a p a t k a n d u a
kelompok gabungan f r a k s i - f r a k s i
t i n g g i y a i t u A ( f r a k s i nomor 2
dengan a k t i f i t a s protease c u k u p
- 5 ) dan B ( f r a k s i nomor
dengan a k t i f i t a s masing-masing 0.186 IU/ml dan 0.159
aktifitas spesifiknya 0.451 IU/mg dan 0.846 IU/mg.
t e i n u n t u k A dan B b e r t u r u t - t u r u t
rng/ml.
- 18)
IU/ml s e r t a
Konsentrasi pro-
adalah 0.412 mg/ml
Pada pemisahan dengan Amberlite DP-1
11
dan 0.188
hanya didapat satu
- 6
kelompok f r a k s i dengan a k t i f i t a s t e r t i n g g i yaitu C (fraksi nomor 2
dengan a k t i f i t a s protease 0.194, a k t i f i t a s spesifik 0.357 IU/mg, konsent r a s i protein 0.442 mg/ml).
Sedangkan untuk DEAE Sephadex A
-
50
didapatkan dua kelompok gabungan f r a k s i - f r a k s i yaitu E (nomor 6 15) dan G (nomor 22
-
24) dengan a k t i f i t a s protease 0.186 IU/ml;
aktifitas spesifik 0.576 IU/mg;
konsentrasi protein 0.323 mg/ml
dan
0.131 IU/ml;
0.985 IU/mg;
0.133 rng/ml.
Untuk kelipatan pemurnian,
niiai terbesar didapat pada pemur-
- 4.3 k a l i )
n i a n dengan r e s i n D E A E Sephadex A - 50 (sebesar 2.5
kernudian Arnberiite penukar anion (IRA 400) (sebesar 2
-
3.6 kali) dan
Arnberlite penukar kation (DP-1) (1.9 kali).
Dari perhitungan hasil elektroforesis,
kan perkiraan
u n t u k f r a k s i A didapat-
berat rnolekul enzim adalah 19550.34 Dalton;
fraksi 6
didapat dua pita dengan perkiraan berat rnolekul enzimnya 25202.17
Dalton dan 19550.34 Dalton.
Untuk fraksi C tidak dapat ditentukan
berat rnolekul aproksimatnya karena p i t a yang dihasilkan dari elektroforesis tidak cukup jelas terlihat.
Sedangkan u n t u k f r a k s i E dan G
didapat dua pita dengan berat moiekul dugaannya 22197.10 Dalton dan
16160.02 Dalton.
I N S T I T U T PERTANIAN BOGOR
FAKULTAS TEKNOLOGI PERTANIAN
EKSTRAKSI DAN PEMURNIAN PROTEASE
DARI Bacillus purnillus (Y1 )
SKRIPSI
sebagai salah s a t u s y a r a t u n t u k mernperoleh g e l a r
SARJANA TEKNOLOGI PERTANIAN
p a d a J u r u s a n T e k n o l o g i Pangan d a n Gizi
Fakultas Teknologi Pertanian
Institut P e r t a n i a n Bogor
Oleh
J U L I U S
F 27. 0959
1994
JURUSAN TEKNOLOGI PANGAN DAN GIZI
FAKULTAS TEKNOLOGI PERTANIAN
I N S T I T U T PERTANIAN BOGOR
I N S T I T U T PERTANIAN BOGOR
FAKULTAS TEKNOLOGI PERTANIAN
EKSTRAKSI DAN PEMURNIAN PROTEASE
DARI Bacillus pumillus (Y1 )
SKRIPSI
sebagai salah satu s y a r a t u n t u k memperoleh gelar
SARJANA TEKNOLOGI PERTANIAN
p a d a J u r u s a n T e k n o l o g i Pangan d a n Gizi
F a k u l t a s Teknologi P e r t a n i a n
Institut P e r t a n i a n Bogor
Oleh
J U L I U S
F 27. 0959
Disetujui,
Bogor,
September 1994
-?/,p-.-r
A./
'.&
Dr. Ir. M&y
i
T. S u h a r t o n o
Dosen Pembirnbing I
Dosen Pembirnbing I1
KATA PENGANTAR
P u j i s y u k u r kepada T u h a n Yang Maha Kasih,
karunia-Nyalah
karena b e r k a t
p e n u l i s d a p a t rnenyelesaikan penulisan s k r i p s i i n i
dengan baik dan tepat pada waktunya.
Dengan tersusunnya laporan ini,
rnaka penulis hendak rnengha-
t u r k a n terirna kasih kepada :
1.
Ibu
Dr.
Ir.
pernbirnbing
dosen
Maggy
dan
I
penyusunan
Ir.
Bapak
pernbirnbing 11,
pengarahan
Thenawijaya
selarna
Suhartono,
Sutrisno
Koswara
yang telah rnernberi kan
berlangsungn ya
skripsi, s e r t a atas
selaku dosen
bantuan
penelitian
kesediaannya
selaku
dan
dan
proses
rnenjadi
dosen
p e n g u j i I dan 11.
2.
Ir.
Bapak
Feri K.
yang
telah
bersedia untuk menjadi dosen
penguji I11 pada u j i a n skripsi.
3.
Yang kukasihi di
dan
Rok kida
Jakarta,
Ibu,
Ayah,
Saudara-saudaraku
yang telah rnernberi kan kasi h sayang,
dorongan,
sernangat dan bantuan baik rnoril dan rnateriil.
4.
Sernua ternan-ternan se-lab dan para laboran
t h e most",
Kang Yaya,
Junaidi,
I b u Eni,
lain-lain) yang telah
Marcella,
I b u Ika,
Mardi,
(Pak
Agus,
Pak Angga,
rnernberi kan banyak
Putu "you're
Lili,
Ricki,
Pak Ujang
dan
bantuan dan suasana
k e r j a yang rnenyenangkan.
5.
Sernua
ma,
ternan-ternanku di Bogor,
Ong Hui Yung,
Elingsari,
Narto Sunarno,
Fiametta,
Evi
Grace, St.
WiratAgung
8
N.,
Suciono,
Durrnan,
I
Herijanto
dan
lain-lain yang
telah
memberi kan a r t i sebuah persahabatan.
6.
Semua
pihak
yang
t u r u t pula rnernbantu penulis daiarn rnenye-
iesai kan penyusunan laporan ini.
Penulis menyadari
bahwa dalam pelaksanaan rnaupun
daiarn
penyusunan s k r i p s i i n i masih jauh dari sernpurna dan tidak lepas dari
kesalahan,
sehingga k r i t i k dan saran u n t u k kesempurnaan iaporan ini
sangat diharapkan.
Akhirnya,
semoga tuiisan ini dapat rnemberi kan
manfaat bagi yang rnembutuhkannya.
Bogor, September 1994
Penulis,
DAFTAR I S 1
KATA PENGANTAR
...............................
i
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . iii
DAFTAR GAMBAR
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .v i
DAFTAR TABEL
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .v i i
DAFTAR LAMPIRAN . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .v i i i
............................... 1
I.
PENDAHULUAN
1
A . LATAR BELAKANG . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
B . TUJUAN . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3
I 1.
T I N J A U A N PUSTAKA
............................. 4
A . PROTEASE MIKROBA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4
B . PROTEASE Baci77us pumi77us
................. 6
C . EKSTRAKSI DAN PEMURNIAN . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 7
D . ELEKTROFORESIS . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 5
I11 . METODA P E N E L I T I A N . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 8
DAFTAR I S 1
.............................
1 . BAHAN . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
2 . ALAT
...................................
8 . METODA P E N E L I T I A N
.........................
.........................
1 . PRODUKSI E N Z I M
a. Produksi Inokulum ....................
b. P r o d u k s i Enzirn . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
2 . PEMURNIAN E N Z I M . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
a. Pengendapan dengan b e r b a g a i p e r e a k s i ..
b. D i a l i s i s .............................
A
.
BAHAN DAN A L A T
18
18
18
19
19
19
19
20
21
22
c.
Kromatografi
..........................
P e r s i a p a n k o l o m DEAE Seahadex A-50
Persiapan
Amberlite
...........
Elektroforesis .......................
P e r s i a p a n Sampel (Hames,
1987)
.....
oenukar
d.
kolom
..
a n i o n dan k a t i o n
Persiapan b u f f e r r e s e r v o i r
........................
(Sigma,1988)
Pembuatan Gel e l e k t r o f o r e s i s SDS ( 1 0 % )
(Hames,
1987)
.......................
Pewarnaan ( S t a i n i n q ) dan p e n g h i l a n g a n
warna ( d e s t a i n i n g l (Sigma,
Mo 7ecu7ar m a r k e r (Sigma,
.....
.......
1988)
1988)
...............................
Pengukuran j u m l a h p r o t e i n . . . . . . . . . . . .
Pengujian a k t i f i t a s protease . . . . . . . . .
3 . ANALISIS
a.
b.
IV.
HASIL DAN PEMBAHASAN
A.
Pemurnian
..........................
Enzim
Protease
A m b e r l i t e Penukar A n i o n
B.
Pemurnian
Pemurnian
...................
Enzim P r o t e a s e Dengan Kolom
A m b e r l i t e Penukar K a t i o n
C.
Dengan Kolom
Enzim
DEAE Sephadex A
- 50
...................
Protease
Dengan
Kolom
.......................
PROTEASE
DARI
Bacillus pumiiius
(Y1)
1 9 9 4
FAKULTAS TEKNOLOGI PERTANIAN
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
B O G O R
Julius.
F
pumillus (Y1).
Ir.
0959.
27.
Ekstraksi dan Pemurnian Protease Dari Bacillus
Ir.
Di bawah bimbingan D r .
Maggy T. Suhartono
dan
Sutrisno Koswara.
RINGKASAN
Bacillus adalah bakteri yang sangat potensial u n t u k dijadi kan
sumber enzim protease.
Bacillus yang digunakan dalam penelitian i n i
adalah j e n i s B. pumillus (Y1) y a n g diisolasi d a r i limbah c a i r t a h u
Sedangkan penelitian ini bertujuan u n t u k mela-
( L i kumahwa, 1993).
kukan ekstraksi
dan
pemurnian
enzim
protease
d a r i B.
purnillus (Y1 ) dengan menggunakan berbagai kolom kromatografi [DEAE
( d i e t i l a m i n o e t i l ) Sephadex A-50 dan Amberlitel u n t u k mendapatkan
enzim protease yang relatif murni.
Dalam penelitian ini dilakukan fermentasi bakteri untuk menghas i l k a n enzim protease dalam limbah cair tahu dengan penambahan 2%
skim,
(w/v),
lalu d i i k u t i ekstraksi enzim dengan garam ammonium sulfat 55%
besi (111) klorida,
aluminium (111) k l o r i d a dan aseton dan
d i l a r u t k a n kembali dalam b u f f e r sodium sitrat,
f o s f a t 0.01 M pH 8.0,
sodium ditionat dan
kemudian d i d i a l i s i s dalam k a n t u n g selofan.
Dialisat lalu di kromatografi dalam resin penukar anion (Amberlite I R A
400 dan DEAE Sephadex A
Fraksi-fraksi
yang
- 50) dan penukar kation (Amberlite DP-1).
diperoleh, dipekatkan
dengan pengeringan beku
dan selanjutnya dielektroforesis dalam gel SDS-poliakrilamid.
Dari hasil
(ammonium sulfat,
ekstraksi dengan berbagai macam garam pengendap
besi (111) klorida,
aluminium (111) klorida),
maka
setelah dilarutkan kembaii hasil l a r u t a n enzim yang mempunyai a k t i f i t a s t i n g g i dihasilkan pada pengendapan oleh besi (111) k l o r i d a yang
kernudian d i l a r u t k a n dalam b u f f e r s i t r a t y a i t u sebesar 1.482 IU/ml,
a k t i f i t a s spesifiknya 67.364 IU/mg
dan konsentrasi proteinnya 0.022
rng/ml dan d i i k u t i dengan ammonium s u l f a t (0.348 IU/ml;
0.742 mg/ml).
0.742 IU/mg;
Sedangkan u n t u k pengendapan dengan peiarut organik
(aseton t e k n i s ) ,
a k t i f i t a s t e r t i n g g i d i d a p a t k a n pada p e r b a n d i n g a n
aseton dengan ekstrak kasar enzim sebesar 1 : 3 yaitu 2.406 IU/ml
dengan konsentrasi protein 2.367 mg/mi.
Namun karena pertimbangan
keamanan pangan oleh logam b e r a t (Fe) yang c u k u p riskan dan dilihat
d a r i segi ekonomis,
maka l a r u t a n enzim yang berasal dari pengenda-
p a n dengan ammonium s u l f a t l a h (0.393 I U / m l ) yang d i p a k a i u n t u k
tahap pemurnian selanjutnya.
Dari hasil penelitian pemurnian protease dari Bacillus pumillus
(Yl),
setelah pernisahan dengan Amberlite I R A 400 d i d a p a t k a n d u a
kelompok gabungan f r a k s i - f r a k s i
t i n g g i y a i t u A ( f r a k s i nomor 2
dengan a k t i f i t a s protease c u k u p
- 5 ) dan B ( f r a k s i nomor
dengan a k t i f i t a s masing-masing 0.186 IU/ml dan 0.159
aktifitas spesifiknya 0.451 IU/mg dan 0.846 IU/mg.
t e i n u n t u k A dan B b e r t u r u t - t u r u t
rng/ml.
- 18)
IU/ml s e r t a
Konsentrasi pro-
adalah 0.412 mg/ml
Pada pemisahan dengan Amberlite DP-1
11
dan 0.188
hanya didapat satu
- 6
kelompok f r a k s i dengan a k t i f i t a s t e r t i n g g i yaitu C (fraksi nomor 2
dengan a k t i f i t a s protease 0.194, a k t i f i t a s spesifik 0.357 IU/mg, konsent r a s i protein 0.442 mg/ml).
Sedangkan untuk DEAE Sephadex A
-
50
didapatkan dua kelompok gabungan f r a k s i - f r a k s i yaitu E (nomor 6 15) dan G (nomor 22
-
24) dengan a k t i f i t a s protease 0.186 IU/ml;
aktifitas spesifik 0.576 IU/mg;
konsentrasi protein 0.323 mg/ml
dan
0.131 IU/ml;
0.985 IU/mg;
0.133 rng/ml.
Untuk kelipatan pemurnian,
niiai terbesar didapat pada pemur-
- 4.3 k a l i )
n i a n dengan r e s i n D E A E Sephadex A - 50 (sebesar 2.5
kernudian Arnberiite penukar anion (IRA 400) (sebesar 2
-
3.6 kali) dan
Arnberlite penukar kation (DP-1) (1.9 kali).
Dari perhitungan hasil elektroforesis,
kan perkiraan
u n t u k f r a k s i A didapat-
berat rnolekul enzim adalah 19550.34 Dalton;
fraksi 6
didapat dua pita dengan perkiraan berat rnolekul enzimnya 25202.17
Dalton dan 19550.34 Dalton.
Untuk fraksi C tidak dapat ditentukan
berat rnolekul aproksimatnya karena p i t a yang dihasilkan dari elektroforesis tidak cukup jelas terlihat.
Sedangkan u n t u k f r a k s i E dan G
didapat dua pita dengan berat moiekul dugaannya 22197.10 Dalton dan
16160.02 Dalton.
I N S T I T U T PERTANIAN BOGOR
FAKULTAS TEKNOLOGI PERTANIAN
EKSTRAKSI DAN PEMURNIAN PROTEASE
DARI Bacillus purnillus (Y1 )
SKRIPSI
sebagai salah s a t u s y a r a t u n t u k mernperoleh g e l a r
SARJANA TEKNOLOGI PERTANIAN
p a d a J u r u s a n T e k n o l o g i Pangan d a n Gizi
Fakultas Teknologi Pertanian
Institut P e r t a n i a n Bogor
Oleh
J U L I U S
F 27. 0959
1994
JURUSAN TEKNOLOGI PANGAN DAN GIZI
FAKULTAS TEKNOLOGI PERTANIAN
I N S T I T U T PERTANIAN BOGOR
I N S T I T U T PERTANIAN BOGOR
FAKULTAS TEKNOLOGI PERTANIAN
EKSTRAKSI DAN PEMURNIAN PROTEASE
DARI Bacillus pumillus (Y1 )
SKRIPSI
sebagai salah satu s y a r a t u n t u k memperoleh gelar
SARJANA TEKNOLOGI PERTANIAN
p a d a J u r u s a n T e k n o l o g i Pangan d a n Gizi
F a k u l t a s Teknologi P e r t a n i a n
Institut P e r t a n i a n Bogor
Oleh
J U L I U S
F 27. 0959
Disetujui,
Bogor,
September 1994
-?/,p-.-r
A./
'.&
Dr. Ir. M&y
i
T. S u h a r t o n o
Dosen Pembirnbing I
Dosen Pembirnbing I1
KATA PENGANTAR
P u j i s y u k u r kepada T u h a n Yang Maha Kasih,
karunia-Nyalah
karena b e r k a t
p e n u l i s d a p a t rnenyelesaikan penulisan s k r i p s i i n i
dengan baik dan tepat pada waktunya.
Dengan tersusunnya laporan ini,
rnaka penulis hendak rnengha-
t u r k a n terirna kasih kepada :
1.
Ibu
Dr.
Ir.
pernbirnbing
dosen
Maggy
dan
I
penyusunan
Ir.
Bapak
pernbirnbing 11,
pengarahan
Thenawijaya
selarna
Suhartono,
Sutrisno
Koswara
yang telah rnernberi kan
berlangsungn ya
skripsi, s e r t a atas
selaku dosen
bantuan
penelitian
kesediaannya
selaku
dan
dan
proses
rnenjadi
dosen
p e n g u j i I dan 11.
2.
Ir.
Bapak
Feri K.
yang
telah
bersedia untuk menjadi dosen
penguji I11 pada u j i a n skripsi.
3.
Yang kukasihi di
dan
Rok kida
Jakarta,
Ibu,
Ayah,
Saudara-saudaraku
yang telah rnernberi kan kasi h sayang,
dorongan,
sernangat dan bantuan baik rnoril dan rnateriil.
4.
Sernua ternan-ternan se-lab dan para laboran
t h e most",
Kang Yaya,
Junaidi,
I b u Eni,
lain-lain) yang telah
Marcella,
I b u Ika,
Mardi,
(Pak
Agus,
Pak Angga,
rnernberi kan banyak
Putu "you're
Lili,
Ricki,
Pak Ujang
dan
bantuan dan suasana
k e r j a yang rnenyenangkan.
5.
Sernua
ma,
ternan-ternanku di Bogor,
Ong Hui Yung,
Elingsari,
Narto Sunarno,
Fiametta,
Evi
Grace, St.
WiratAgung
8
N.,
Suciono,
Durrnan,
I
Herijanto
dan
lain-lain yang
telah
memberi kan a r t i sebuah persahabatan.
6.
Semua
pihak
yang
t u r u t pula rnernbantu penulis daiarn rnenye-
iesai kan penyusunan laporan ini.
Penulis menyadari
bahwa dalam pelaksanaan rnaupun
daiarn
penyusunan s k r i p s i i n i masih jauh dari sernpurna dan tidak lepas dari
kesalahan,
sehingga k r i t i k dan saran u n t u k kesempurnaan iaporan ini
sangat diharapkan.
Akhirnya,
semoga tuiisan ini dapat rnemberi kan
manfaat bagi yang rnembutuhkannya.
Bogor, September 1994
Penulis,
DAFTAR I S 1
KATA PENGANTAR
...............................
i
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . iii
DAFTAR GAMBAR
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .v i
DAFTAR TABEL
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .v i i
DAFTAR LAMPIRAN . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .v i i i
............................... 1
I.
PENDAHULUAN
1
A . LATAR BELAKANG . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
B . TUJUAN . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3
I 1.
T I N J A U A N PUSTAKA
............................. 4
A . PROTEASE MIKROBA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4
B . PROTEASE Baci77us pumi77us
................. 6
C . EKSTRAKSI DAN PEMURNIAN . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 7
D . ELEKTROFORESIS . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 5
I11 . METODA P E N E L I T I A N . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 8
DAFTAR I S 1
.............................
1 . BAHAN . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
2 . ALAT
...................................
8 . METODA P E N E L I T I A N
.........................
.........................
1 . PRODUKSI E N Z I M
a. Produksi Inokulum ....................
b. P r o d u k s i Enzirn . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
2 . PEMURNIAN E N Z I M . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
a. Pengendapan dengan b e r b a g a i p e r e a k s i ..
b. D i a l i s i s .............................
A
.
BAHAN DAN A L A T
18
18
18
19
19
19
19
20
21
22
c.
Kromatografi
..........................
P e r s i a p a n k o l o m DEAE Seahadex A-50
Persiapan
Amberlite
...........
Elektroforesis .......................
P e r s i a p a n Sampel (Hames,
1987)
.....
oenukar
d.
kolom
..
a n i o n dan k a t i o n
Persiapan b u f f e r r e s e r v o i r
........................
(Sigma,1988)
Pembuatan Gel e l e k t r o f o r e s i s SDS ( 1 0 % )
(Hames,
1987)
.......................
Pewarnaan ( S t a i n i n q ) dan p e n g h i l a n g a n
warna ( d e s t a i n i n g l (Sigma,
Mo 7ecu7ar m a r k e r (Sigma,
.....
.......
1988)
1988)
...............................
Pengukuran j u m l a h p r o t e i n . . . . . . . . . . . .
Pengujian a k t i f i t a s protease . . . . . . . . .
3 . ANALISIS
a.
b.
IV.
HASIL DAN PEMBAHASAN
A.
Pemurnian
..........................
Enzim
Protease
A m b e r l i t e Penukar A n i o n
B.
Pemurnian
Pemurnian
...................
Enzim P r o t e a s e Dengan Kolom
A m b e r l i t e Penukar K a t i o n
C.
Dengan Kolom
Enzim
DEAE Sephadex A
- 50
...................
Protease
Dengan
Kolom
.......................
EKSTRAKSI DAN PEMURNIAN
PROTEASE
DARI
Bacillus pumiiius
(Y1)
1 9 9 4
FAKULTAS TEKNOLOGI PERTANIAN
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
B O G O R
Julius.
F
pumillus (Y1).
Ir.
0959.
27.
Ekstraksi dan Pemurnian Protease Dari Bacillus
Ir.
Di bawah bimbingan D r .
Maggy T. Suhartono
dan
Sutrisno Koswara.
RINGKASAN
Bacillus adalah bakteri yang sangat potensial u n t u k dijadi kan
sumber enzim protease.
Bacillus yang digunakan dalam penelitian i n i
adalah j e n i s B. pumillus (Y1) y a n g diisolasi d a r i limbah c a i r t a h u
Sedangkan penelitian ini bertujuan u n t u k mela-
( L i kumahwa, 1993).
kukan ekstraksi
dan
pemurnian
enzim
protease
d a r i B.
purnillus (Y1 ) dengan menggunakan berbagai kolom kromatografi [DEAE
( d i e t i l a m i n o e t i l ) Sephadex A-50 dan Amberlitel u n t u k mendapatkan
enzim protease yang relatif murni.
Dalam penelitian ini dilakukan fermentasi bakteri untuk menghas i l k a n enzim protease dalam limbah cair tahu dengan penambahan 2%
skim,
(w/v),
lalu d i i k u t i ekstraksi enzim dengan garam ammonium sulfat 55%
besi (111) klorida,
aluminium (111) k l o r i d a dan aseton dan
d i l a r u t k a n kembali dalam b u f f e r sodium sitrat,
f o s f a t 0.01 M pH 8.0,
sodium ditionat dan
kemudian d i d i a l i s i s dalam k a n t u n g selofan.
Dialisat lalu di kromatografi dalam resin penukar anion (Amberlite I R A
400 dan DEAE Sephadex A
Fraksi-fraksi
yang
- 50) dan penukar kation (Amberlite DP-1).
diperoleh, dipekatkan
dengan pengeringan beku
dan selanjutnya dielektroforesis dalam gel SDS-poliakrilamid.
Dari hasil
(ammonium sulfat,
ekstraksi dengan berbagai macam garam pengendap
besi (111) klorida,
aluminium (111) klorida),
maka
setelah dilarutkan kembaii hasil l a r u t a n enzim yang mempunyai a k t i f i t a s t i n g g i dihasilkan pada pengendapan oleh besi (111) k l o r i d a yang
kernudian d i l a r u t k a n dalam b u f f e r s i t r a t y a i t u sebesar 1.482 IU/ml,
a k t i f i t a s spesifiknya 67.364 IU/mg
dan konsentrasi proteinnya 0.022
rng/ml dan d i i k u t i dengan ammonium s u l f a t (0.348 IU/ml;
0.742 mg/ml).
0.742 IU/mg;
Sedangkan u n t u k pengendapan dengan peiarut organik
(aseton t e k n i s ) ,
a k t i f i t a s t e r t i n g g i d i d a p a t k a n pada p e r b a n d i n g a n
aseton dengan ekstrak kasar enzim sebesar 1 : 3 yaitu 2.406 IU/ml
dengan konsentrasi protein 2.367 mg/mi.
Namun karena pertimbangan
keamanan pangan oleh logam b e r a t (Fe) yang c u k u p riskan dan dilihat
d a r i segi ekonomis,
maka l a r u t a n enzim yang berasal dari pengenda-
p a n dengan ammonium s u l f a t l a h (0.393 I U / m l ) yang d i p a k a i u n t u k
tahap pemurnian selanjutnya.
Dari hasil penelitian pemurnian protease dari Bacillus pumillus
(Yl),
setelah pernisahan dengan Amberlite I R A 400 d i d a p a t k a n d u a
kelompok gabungan f r a k s i - f r a k s i
t i n g g i y a i t u A ( f r a k s i nomor 2
dengan a k t i f i t a s protease c u k u p
- 5 ) dan B ( f r a k s i nomor
dengan a k t i f i t a s masing-masing 0.186 IU/ml dan 0.159
aktifitas spesifiknya 0.451 IU/mg dan 0.846 IU/mg.
t e i n u n t u k A dan B b e r t u r u t - t u r u t
rng/ml.
- 18)
IU/ml s e r t a
Konsentrasi pro-
adalah 0.412 mg/ml
Pada pemisahan dengan Amberlite DP-1
11
dan 0.188
hanya didapat satu
- 6
kelompok f r a k s i dengan a k t i f i t a s t e r t i n g g i yaitu C (fraksi nomor 2
dengan a k t i f i t a s protease 0.194, a k t i f i t a s spesifik 0.357 IU/mg, konsent r a s i protein 0.442 mg/ml).
Sedangkan untuk DEAE Sephadex A
-
50
didapatkan dua kelompok gabungan f r a k s i - f r a k s i yaitu E (nomor 6 15) dan G (nomor 22
-
24) dengan a k t i f i t a s protease 0.186 IU/ml;
aktifitas spesifik 0.576 IU/mg;
konsentrasi protein 0.323 mg/ml
dan
0.131 IU/ml;
0.985 IU/mg;
0.133 rng/ml.
Untuk kelipatan pemurnian,
niiai terbesar didapat pada pemur-
- 4.3 k a l i )
n i a n dengan r e s i n D E A E Sephadex A - 50 (sebesar 2.5
kernudian Arnberiite penukar anion (IRA 400) (sebesar 2
-
3.6 kali) dan
Arnberlite penukar kation (DP-1) (1.9 kali).
Dari perhitungan hasil elektroforesis,
kan perkiraan
u n t u k f r a k s i A didapat-
berat rnolekul enzim adalah 19550.34 Dalton;
fraksi 6
didapat dua pita dengan perkiraan berat rnolekul enzimnya 25202.17
Dalton dan 19550.34 Dalton.
Untuk fraksi C tidak dapat ditentukan
berat rnolekul aproksimatnya karena p i t a yang dihasilkan dari elektroforesis tidak cukup jelas terlihat.
Sedangkan u n t u k f r a k s i E dan G
didapat dua pita dengan berat moiekul dugaannya 22197.10 Dalton dan
16160.02 Dalton.
I N S T I T U T PERTANIAN BOGOR
FAKULTAS TEKNOLOGI PERTANIAN
EKSTRAKSI DAN PEMURNIAN PROTEASE
DARI Bacillus purnillus (Y1 )
SKRIPSI
sebagai salah s a t u s y a r a t u n t u k mernperoleh g e l a r
SARJANA TEKNOLOGI PERTANIAN
p a d a J u r u s a n T e k n o l o g i Pangan d a n Gizi
Fakultas Teknologi Pertanian
Institut P e r t a n i a n Bogor
Oleh
J U L I U S
F 27. 0959
1994
JURUSAN TEKNOLOGI PANGAN DAN GIZI
FAKULTAS TEKNOLOGI PERTANIAN
I N S T I T U T PERTANIAN BOGOR
I N S T I T U T PERTANIAN BOGOR
FAKULTAS TEKNOLOGI PERTANIAN
EKSTRAKSI DAN PEMURNIAN PROTEASE
DARI Bacillus pumillus (Y1 )
SKRIPSI
sebagai salah satu s y a r a t u n t u k memperoleh gelar
SARJANA TEKNOLOGI PERTANIAN
p a d a J u r u s a n T e k n o l o g i Pangan d a n Gizi
F a k u l t a s Teknologi P e r t a n i a n
Institut P e r t a n i a n Bogor
Oleh
J U L I U S
F 27. 0959
Disetujui,
Bogor,
September 1994
-?/,p-.-r
A./
'.&
Dr. Ir. M&y
i
T. S u h a r t o n o
Dosen Pembirnbing I
Dosen Pembirnbing I1
KATA PENGANTAR
P u j i s y u k u r kepada T u h a n Yang Maha Kasih,
karunia-Nyalah
karena b e r k a t
p e n u l i s d a p a t rnenyelesaikan penulisan s k r i p s i i n i
dengan baik dan tepat pada waktunya.
Dengan tersusunnya laporan ini,
rnaka penulis hendak rnengha-
t u r k a n terirna kasih kepada :
1.
Ibu
Dr.
Ir.
pernbirnbing
dosen
Maggy
dan
I
penyusunan
Ir.
Bapak
pernbirnbing 11,
pengarahan
Thenawijaya
selarna
Suhartono,
Sutrisno
Koswara
yang telah rnernberi kan
berlangsungn ya
skripsi, s e r t a atas
selaku dosen
bantuan
penelitian
kesediaannya
selaku
dan
dan
proses
rnenjadi
dosen
p e n g u j i I dan 11.
2.
Ir.
Bapak
Feri K.
yang
telah
bersedia untuk menjadi dosen
penguji I11 pada u j i a n skripsi.
3.
Yang kukasihi di
dan
Rok kida
Jakarta,
Ibu,
Ayah,
Saudara-saudaraku
yang telah rnernberi kan kasi h sayang,
dorongan,
sernangat dan bantuan baik rnoril dan rnateriil.
4.
Sernua ternan-ternan se-lab dan para laboran
t h e most",
Kang Yaya,
Junaidi,
I b u Eni,
lain-lain) yang telah
Marcella,
I b u Ika,
Mardi,
(Pak
Agus,
Pak Angga,
rnernberi kan banyak
Putu "you're
Lili,
Ricki,
Pak Ujang
dan
bantuan dan suasana
k e r j a yang rnenyenangkan.
5.
Sernua
ma,
ternan-ternanku di Bogor,
Ong Hui Yung,
Elingsari,
Narto Sunarno,
Fiametta,
Evi
Grace, St.
WiratAgung
8
N.,
Suciono,
Durrnan,
I
Herijanto
dan
lain-lain yang
telah
memberi kan a r t i sebuah persahabatan.
6.
Semua
pihak
yang
t u r u t pula rnernbantu penulis daiarn rnenye-
iesai kan penyusunan laporan ini.
Penulis menyadari
bahwa dalam pelaksanaan rnaupun
daiarn
penyusunan s k r i p s i i n i masih jauh dari sernpurna dan tidak lepas dari
kesalahan,
sehingga k r i t i k dan saran u n t u k kesempurnaan iaporan ini
sangat diharapkan.
Akhirnya,
semoga tuiisan ini dapat rnemberi kan
manfaat bagi yang rnembutuhkannya.
Bogor, September 1994
Penulis,
DAFTAR I S 1
KATA PENGANTAR
...............................
i
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . iii
DAFTAR GAMBAR
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .v i
DAFTAR TABEL
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .v i i
DAFTAR LAMPIRAN . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .v i i i
............................... 1
I.
PENDAHULUAN
1
A . LATAR BELAKANG . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
B . TUJUAN . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3
I 1.
T I N J A U A N PUSTAKA
............................. 4
A . PROTEASE MIKROBA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4
B . PROTEASE Baci77us pumi77us
................. 6
C . EKSTRAKSI DAN PEMURNIAN . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 7
D . ELEKTROFORESIS . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 5
I11 . METODA P E N E L I T I A N . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 8
DAFTAR I S 1
.............................
1 . BAHAN . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
2 . ALAT
...................................
8 . METODA P E N E L I T I A N
.........................
.........................
1 . PRODUKSI E N Z I M
a. Produksi Inokulum ....................
b. P r o d u k s i Enzirn . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
2 . PEMURNIAN E N Z I M . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
a. Pengendapan dengan b e r b a g a i p e r e a k s i ..
b. D i a l i s i s .............................
A
.
BAHAN DAN A L A T
18
18
18
19
19
19
19
20
21
22
c.
Kromatografi
..........................
P e r s i a p a n k o l o m DEAE Seahadex A-50
Persiapan
Amberlite
...........
Elektroforesis .......................
P e r s i a p a n Sampel (Hames,
1987)
.....
oenukar
d.
kolom
..
a n i o n dan k a t i o n
Persiapan b u f f e r r e s e r v o i r
........................
(Sigma,1988)
Pembuatan Gel e l e k t r o f o r e s i s SDS ( 1 0 % )
(Hames,
1987)
.......................
Pewarnaan ( S t a i n i n q ) dan p e n g h i l a n g a n
warna ( d e s t a i n i n g l (Sigma,
Mo 7ecu7ar m a r k e r (Sigma,
.....
.......
1988)
1988)
...............................
Pengukuran j u m l a h p r o t e i n . . . . . . . . . . . .
Pengujian a k t i f i t a s protease . . . . . . . . .
3 . ANALISIS
a.
b.
IV.
HASIL DAN PEMBAHASAN
A.
Pemurnian
..........................
Enzim
Protease
A m b e r l i t e Penukar A n i o n
B.
Pemurnian
Pemurnian
...................
Enzim P r o t e a s e Dengan Kolom
A m b e r l i t e Penukar K a t i o n
C.
Dengan Kolom
Enzim
DEAE Sephadex A
- 50
...................
Protease
Dengan
Kolom
.......................