Mempelajari Beberapa Metode Ekstraksi dan Pemurnian Protease Xanthomonas campestris pathovar glycines 1FL
I
i
,
I
SKRIPSI
MEMPELAJARI BEBERAPA METODE EKSTRAKSI
DAN PEMURNIAN PROTEASE
Xanthomonas campestris pathovarglycines 1FL
Oleh
WINA WILYANI
F 30.0081
1998
FAKUkTAS 'fEKNOLOGI PERTANIAN
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
BOGOR
WIN A WILYANI. F 30.1)081. Mempelajari beberapa Metode Ekstraksi dan
Pcmurnian Protease XaiJIhomonas campestris pathovar glycines IFL. Di bawah
bimbingan Maggy T. Suhartono.
RINGKASAN
Xanthomonas campestris pv. glycines IFL merupakan salah satu bakteri
penghasil protease asli Indonesia. Pemurnian protease ini merupakan salah satu eara
untuk dapat melakukan studi-studi lanjutannya seperti mempelajari struktur,
komposisi dan UTlltan asam amino, berat molekul protease tersebut.
Pada penelitian ini, media fermentasi· yang digunakan untuk produksi
protease adalah limbah cair tahu (LeT) yang diambil dari daerah Panaragan, Bogor.
Metode pemumian dan ekstraksi yang dilakukan adalah metode dial isis, filtrasi gel
dan pengendapan dengan beberapa jenis presipitan.· Presipitan yang digunakan
adalah amonium suI fat mumi dan teknis, aseton teknis, PEG (polietilen glikol) dan
potimer PEG-dekstran. Amonium sulfat yang digunakan adalah sebesar 40% (b/v),
aseton sebesar 1:1,1:2, dan 1:3 (aseton:enzim), dan PEG sebesar 20% dan 30% (b/v).
PEG-dekstran dengan konsentrasi dekstran 7.1I% (bib) dan PEG 28.44% (bib)
diglinakan sebanyak 0.5 kali vollime filtrat kasar enzim.
Dialisis dilakukan dengan beberapa variasi kondisi berupa waktu dialisis
dan frekuensi penyegaran bufer. Waktu dialisis yang diteliti adalah 14, 5 dan 3 jam.
Pemumian protease X campestris pv. glycines IFL dengan metode dialisis eenderung
menyebabkan teIjadinya penurunan aktivitas spesifik.
Dalam penelitian ini, pemurnian protease dengan filtrasi gel tidak
menghasilkan resolusi yang baik. Meskipun demikian, dari nilai aktivitas spesifik
fraksi-fraksi tertentu terlihat adanya kenaikan tingkat kemurnian yang cukup besar,
yakni sebesar 21.24 (fraksi ke-l) dan 21.08 (fraksi ke-4), serta 22.48 (fraksi ke-27)
dan 22.96 ( fraksi ke-41).
Ekstraksi dengan menggunakan amonium sulfat mumi dan aseton teknis
(1: I) menghasilkan peningkatan kemumian yang paling tinggi dan hasil ulangannya
relatif konsisten. Penggunaan PEG-dekstran menghasilkan tingkat kemumian yang
tidak berbeda nyata dengan pengendapan menggunakan amonium sui fat dan aseton
(I: 1). Setelah penyimpanan selama I minggu pada mang dingin, hasil pengendapan
cenderung mengalami penurunan aktivitas spesifik. Penurunan ak-tivitas spesifik
pada filtrat yang diendapkan dengan amonium sulfat relatif sedikit dibanding dengan
presipitan lainnya. Hasil analisa pada filtrat yang diendapkan dengan PEG tidak
konsisten.
MEMPELAJARI BEBERAPA METODE EKSTRAKSI DAN PEMURNIAN
PROTEASE Xanthomonas campestris pathovar glycines 1FL
Oleh
WINA WILYANI
F 30.0081
SKRIPSI
Sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar
SARJANA TEKNOLOGI PERTANIAN
pada Jurusan Teknologi Pangan dan Gizi
Fakultas Teknologi Pertanian
Institut Pertanian Bogor
1998
JURUSAN TEKNOLOGI PANGAN DAN GIZI
FAKULTAS TEKNOLOGI PERTANIAN
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
BOGOR
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
FAKULTASTEKNOLOGI PERTANIAN
MEMPELAJARI BEBERAPA METODE EKSTRAKSI DAN PEMURNIAN
PROTEASE Xanthomonas campestris pathovar glycines 1FL
Oleh
W1NA WILYANI
F 30.0081
SKRIPSI
Sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar
SARJANA TEKONOLOGI PERTANIAN
pada Jurusan Teknologi Pangan dan Gizi
Fakultas Teknologi Pertanian
Institut Pertanian Bogor
Dilahirkan pada tanggal10 Juli 1975
diPurwakarta
T anggal lulus : 10 Pebruari 1998
KATA PENGANTAR
Puji syukur kepada Tuhan Yang Maha Esa yang senantiasa melimpahkan
kasih karuniaNya kepada penulis. Dengan kekuatan dan hikrnat yang diberikanNya,
penulis dapat rnenyelesaikan penelitian dan penyusunan skripsi ini.
Skripsi ini merupakan salah satu syarat untuk memperoleh gelar kesatjanaan
strata-l pada jurusan Teknologi Pangan dan Gizi, Fakultas Teknologi Pertanian,
lnstitut Pertanian Bogor, yang disusun berdasarkan penelitian dan studi pustaka.
Selama pelaksanaan penelitian dan penyusunan skripsi ini, penulis mendapatkan
banyak bantuan dari berbagai pihak. Untuk itu penulis mengucapkan terima kasih
kepada:
L Dr. lr. Maggy T. Suhartono selaku dosen pembimbing yang telah memberikan
birnbingan dan perhatian yang sangat berarti selarna penelitian dan penulisan
skripsi inL
2. If. Winiati Puji Rahayu, MS yang telah berkenan untuk menguji dan memberikan
masukan-rnasukan bagi kesernpumaan skripsi ini.
3. If. Alfi selaku dosen penguji yang telah rnernberikan perhatian dan waktu bagi
kesempumaan skripsi inL
4. Papi, Mami, Jejek, Ellen, Dodon dan Willy atas doa dan kasih sayang yang sangat
berarti.
5. Grandpa, grandma, Engku, Ie Dodoh, Ie Honny, Ie Bibing, dan Ie Jenny atas
dukungan dan perhatian yang diberikan.
6. Ternan-ternan tersayang atas persahabatan yang indah : Erwin, Fani, Olin, Agus,
Winny, Engel, Obrin, Dico, Hui, Probo, Eryan, Sahat, Pengurus KPS A' 30 dan
Kharisrna.
7. Rekan-rekan di laboratorium: Oen, Lily, Gun, Benny, Budiman, Firly, Edwin,
Irma, Irawan, Mbak Novi, Mbak Nurul, Mbak Yun, Cie Eli, Bu Yus, Bu Armini,
Bu Ika, Bu Eni, Bu Benika, Kang Yaya, Pak Gi, Pak Sutrisno, Pak Bowo, serta
Pudin dan Ida.
8. Ternan-ternan Radar 43 : Naga, Ollin, Siska, Nancy, Linda, Karmila, Windy, Rita,
serta keluarga Pak Rahmat.
9. Berbagai pihak lain yang tidak dapat disebutkan satu persatu.
Penulis menyadari bahwa masih banyak kekurangan dalam penelitian dan
skripsi ini, maka segala kritik dan saran untuk kesempurnaannya akan diterima
dengan senang hati.
Akhir kala, penulis berharap semoga skripsi ini dapat
bermanfaat bagi semua pihak yang rnembutuhkannya.
Bogor, Pebruari 1998
Penulis
DAFTARISI
Halaman
KATA PENGANTAR ..................................................................... .
DAFTAR lSI... ... ... ... ... ... ... ... ...... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ...... ... ... ... ... ... ...
III
DAFTAR TABEL ............................................................................. v
DAFT AR GAMBAR................................................... ... ... ...... ... ... ...
vi
DAFT AR LAMPIRAN ...................................................................... vii
I.
II.
PENDAHULUAN ................................................................. .
A.
LATAR BELAKANG ......................................................... 1
B.
TUJUAN PENELlTlAN ...................................................... 3
TINJAUAN PUSTAKA ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ...... ... ... ... ... ...
4
A. PROTEASE MIKROBA... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ....
4
B. PROTEASE Xanlhomonas campeslris... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... .... 6
C. EKSTRAKSr DENGAN PENGENDAPAN ................................... 7
D. D1ALlSIS ........................................................................... 9
E. KROMATOGRAFI... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ....
III.
10
BAHAN DAN METODE...... ... ... ... ...... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ....... 13
A. BAHAN DAN ALAT... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ....... ... . ... ... 13
B. METODE PENf.L1TIAN.. ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ...
14
Penyiapan Kultur dan Inokulum ....................................
14
2. Produksi Enzim............................................................
14
I.
iii
3_ DialisiL. ___ "_ ._ ..... __ ... _.. '" _'_ '" __ . '" ... '_' ___ .... " _' __ ..... __ ...... 15
4.
Filtrasi Gel... ..... _. ___ .. ___ .. _.. _'" _____ .... __ . "_ . _____ '" ........ " ___ .
16
5. Perbandingan beberapa Metode Pengendapan . __ ..... __ .. _' __ .. _'_' '" 17
6.
IV_
Pengukuran Aktivitas Protease dan Konsentrasi Protein ____ ..... _ \9
HASIL DAN PEMBAHASAN._. '" _._ '" '_' . __ ... ___ . ____ ... _' __ .... ______ ...... 22
A. PRODUKSI PROTEASE. ____ . " __ ._ .. _... ______ . ___ .. '" ____ '_ ._ .... '" __ ' . __ 22
B. DIALISIS .. __ '_ .,. _.. '" :_. '" "_ ............. _.. _.... : ............ _.... _.. ... ...
25
C_ FILTRASI GEL... __ .. " '" .......... ' ... _._ ." ............ " ._ ......... __ ' ... 29
D. PERBANDINGAN BEBERAPA METODE PENGENDAPAN ..... ' __ . 35
V.
KESIMPULAN DAN SARAN '" ..... ' ....... " .............. ' ... '" ...... "_ ... 39
A. KESIMPULAN ........ ' ....... " . __ ........ ' .. ' .............. ' ....... '_ ... _..... 39
B_ SARAN ... '" ....... '" ., ... _........... ' ....... " '" ._ .. _. '" ., .................. 40
DAFTAR PUSTAKA ... '" ..... _.......... " ........... ' ." ... '" ........ ' _" .. _.. _......... 42
LAMPIRAN ............... '" ............... '" ..... ' .... " ., ....... '" .... " .... " ... ... ....
45
iv
DAFTARTABEL
Halaman
Tabel I. Mikroba penghasil enzim protease ............................................. 5
Tabel 2. Prosedur pengujian aktivitas protease .......................................... 21
Tabel 3. Komposisi komponen limbah cair tahu ...................................... 23
Tabel4. Hasil dialisis selama 14 jam dengan 2 kali penyegaran bufer ...... ....... 26
Tabel 5. Hasil dial isis selama 5 jam dengan I kali penyegaran bufer ................. 27
Tabel 6. Hasil dialisis selama 3 jam tanpa penyegaran bufer (ulangan 1) ............ 28
Tabel7. Hasil dial isis selama 3 jam tanpa penyegaran bufer (u1angan 2) ........... 29
Tabel 8. Pengaruh penambahan beberapa presipitan pada ak'tivitas spesifik
protease x: campeslris pv. glycines IFL ....................................... 36
Tabel9. Pengaruh penyimpanan selama 1 minggu pada ruangdingin (O-4°C)
terhadap tingkat kemurnian protease X campeslris pv. glycines IFL ... 38
v
DAFfAR GAMBAR
Halaman
Gambar l. Prosedur persiapan kantong dialisis ........................................... 16
Gambar 2. Prosedur persiapan kolom filtrasi gel ........................................ 17
Gambar 3. Kurva hasil filtrasi gel percobaan yang pertama ............................ 32
Gambar 4. Kurva hasil filtrasi gel dengan sampel hasilJreeze dry .................... 33
Gambar 5. Kurva hasil filtrasi gel percobaan yang kedua ............................. 34
..
vi
I
i
,
I
SKRIPSI
MEMPELAJARI BEBERAPA METODE EKSTRAKSI
DAN PEMURNIAN PROTEASE
Xanthomonas campestris pathovarglycines 1FL
Oleh
WINA WILYANI
F 30.0081
1998
FAKUkTAS 'fEKNOLOGI PERTANIAN
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
BOGOR
WIN A WILYANI. F 30.1)081. Mempelajari beberapa Metode Ekstraksi dan
Pcmurnian Protease XaiJIhomonas campestris pathovar glycines IFL. Di bawah
bimbingan Maggy T. Suhartono.
RINGKASAN
Xanthomonas campestris pv. glycines IFL merupakan salah satu bakteri
penghasil protease asli Indonesia. Pemurnian protease ini merupakan salah satu eara
untuk dapat melakukan studi-studi lanjutannya seperti mempelajari struktur,
komposisi dan UTlltan asam amino, berat molekul protease tersebut.
Pada penelitian ini, media fermentasi· yang digunakan untuk produksi
protease adalah limbah cair tahu (LeT) yang diambil dari daerah Panaragan, Bogor.
Metode pemumian dan ekstraksi yang dilakukan adalah metode dial isis, filtrasi gel
dan pengendapan dengan beberapa jenis presipitan.· Presipitan yang digunakan
adalah amonium suI fat mumi dan teknis, aseton teknis, PEG (polietilen glikol) dan
potimer PEG-dekstran. Amonium sulfat yang digunakan adalah sebesar 40% (b/v),
aseton sebesar 1:1,1:2, dan 1:3 (aseton:enzim), dan PEG sebesar 20% dan 30% (b/v).
PEG-dekstran dengan konsentrasi dekstran 7.1I% (bib) dan PEG 28.44% (bib)
diglinakan sebanyak 0.5 kali vollime filtrat kasar enzim.
Dialisis dilakukan dengan beberapa variasi kondisi berupa waktu dialisis
dan frekuensi penyegaran bufer. Waktu dialisis yang diteliti adalah 14, 5 dan 3 jam.
Pemumian protease X campestris pv. glycines IFL dengan metode dialisis eenderung
menyebabkan teIjadinya penurunan aktivitas spesifik.
Dalam penelitian ini, pemurnian protease dengan filtrasi gel tidak
menghasilkan resolusi yang baik. Meskipun demikian, dari nilai aktivitas spesifik
fraksi-fraksi tertentu terlihat adanya kenaikan tingkat kemurnian yang cukup besar,
yakni sebesar 21.24 (fraksi ke-l) dan 21.08 (fraksi ke-4), serta 22.48 (fraksi ke-27)
dan 22.96 ( fraksi ke-41).
Ekstraksi dengan menggunakan amonium sulfat mumi dan aseton teknis
(1: I) menghasilkan peningkatan kemumian yang paling tinggi dan hasil ulangannya
relatif konsisten. Penggunaan PEG-dekstran menghasilkan tingkat kemumian yang
tidak berbeda nyata dengan pengendapan menggunakan amonium sui fat dan aseton
(I: 1). Setelah penyimpanan selama I minggu pada mang dingin, hasil pengendapan
cenderung mengalami penurunan aktivitas spesifik. Penurunan ak-tivitas spesifik
pada filtrat yang diendapkan dengan amonium sulfat relatif sedikit dibanding dengan
presipitan lainnya. Hasil analisa pada filtrat yang diendapkan dengan PEG tidak
konsisten.
MEMPELAJARI BEBERAPA METODE EKSTRAKSI DAN PEMURNIAN
PROTEASE Xanthomonas campestris pathovar glycines 1FL
Oleh
WINA WILYANI
F 30.0081
SKRIPSI
Sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar
SARJANA TEKNOLOGI PERTANIAN
pada Jurusan Teknologi Pangan dan Gizi
Fakultas Teknologi Pertanian
Institut Pertanian Bogor
1998
JURUSAN TEKNOLOGI PANGAN DAN GIZI
FAKULTAS TEKNOLOGI PERTANIAN
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
BOGOR
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
FAKULTASTEKNOLOGI PERTANIAN
MEMPELAJARI BEBERAPA METODE EKSTRAKSI DAN PEMURNIAN
PROTEASE Xanthomonas campestris pathovar glycines 1FL
Oleh
W1NA WILYANI
F 30.0081
SKRIPSI
Sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar
SARJANA TEKONOLOGI PERTANIAN
pada Jurusan Teknologi Pangan dan Gizi
Fakultas Teknologi Pertanian
Institut Pertanian Bogor
Dilahirkan pada tanggal10 Juli 1975
diPurwakarta
T anggal lulus : 10 Pebruari 1998
KATA PENGANTAR
Puji syukur kepada Tuhan Yang Maha Esa yang senantiasa melimpahkan
kasih karuniaNya kepada penulis. Dengan kekuatan dan hikrnat yang diberikanNya,
penulis dapat rnenyelesaikan penelitian dan penyusunan skripsi ini.
Skripsi ini merupakan salah satu syarat untuk memperoleh gelar kesatjanaan
strata-l pada jurusan Teknologi Pangan dan Gizi, Fakultas Teknologi Pertanian,
lnstitut Pertanian Bogor, yang disusun berdasarkan penelitian dan studi pustaka.
Selama pelaksanaan penelitian dan penyusunan skripsi ini, penulis mendapatkan
banyak bantuan dari berbagai pihak. Untuk itu penulis mengucapkan terima kasih
kepada:
L Dr. lr. Maggy T. Suhartono selaku dosen pembimbing yang telah memberikan
birnbingan dan perhatian yang sangat berarti selarna penelitian dan penulisan
skripsi inL
2. If. Winiati Puji Rahayu, MS yang telah berkenan untuk menguji dan memberikan
masukan-rnasukan bagi kesernpumaan skripsi ini.
3. If. Alfi selaku dosen penguji yang telah rnernberikan perhatian dan waktu bagi
kesempumaan skripsi inL
4. Papi, Mami, Jejek, Ellen, Dodon dan Willy atas doa dan kasih sayang yang sangat
berarti.
5. Grandpa, grandma, Engku, Ie Dodoh, Ie Honny, Ie Bibing, dan Ie Jenny atas
dukungan dan perhatian yang diberikan.
6. Ternan-ternan tersayang atas persahabatan yang indah : Erwin, Fani, Olin, Agus,
Winny, Engel, Obrin, Dico, Hui, Probo, Eryan, Sahat, Pengurus KPS A' 30 dan
Kharisrna.
7. Rekan-rekan di laboratorium: Oen, Lily, Gun, Benny, Budiman, Firly, Edwin,
Irma, Irawan, Mbak Novi, Mbak Nurul, Mbak Yun, Cie Eli, Bu Yus, Bu Armini,
Bu Ika, Bu Eni, Bu Benika, Kang Yaya, Pak Gi, Pak Sutrisno, Pak Bowo, serta
Pudin dan Ida.
8. Ternan-ternan Radar 43 : Naga, Ollin, Siska, Nancy, Linda, Karmila, Windy, Rita,
serta keluarga Pak Rahmat.
9. Berbagai pihak lain yang tidak dapat disebutkan satu persatu.
Penulis menyadari bahwa masih banyak kekurangan dalam penelitian dan
skripsi ini, maka segala kritik dan saran untuk kesempurnaannya akan diterima
dengan senang hati.
Akhir kala, penulis berharap semoga skripsi ini dapat
bermanfaat bagi semua pihak yang rnembutuhkannya.
Bogor, Pebruari 1998
Penulis
DAFTARISI
Halaman
KATA PENGANTAR ..................................................................... .
DAFTAR lSI... ... ... ... ... ... ... ... ...... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ...... ... ... ... ... ... ...
III
DAFTAR TABEL ............................................................................. v
DAFT AR GAMBAR................................................... ... ... ...... ... ... ...
vi
DAFT AR LAMPIRAN ...................................................................... vii
I.
II.
PENDAHULUAN ................................................................. .
A.
LATAR BELAKANG ......................................................... 1
B.
TUJUAN PENELlTlAN ...................................................... 3
TINJAUAN PUSTAKA ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ...... ... ... ... ... ...
4
A. PROTEASE MIKROBA... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ....
4
B. PROTEASE Xanlhomonas campeslris... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... .... 6
C. EKSTRAKSr DENGAN PENGENDAPAN ................................... 7
D. D1ALlSIS ........................................................................... 9
E. KROMATOGRAFI... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ....
III.
10
BAHAN DAN METODE...... ... ... ... ...... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ....... 13
A. BAHAN DAN ALAT... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ....... ... . ... ... 13
B. METODE PENf.L1TIAN.. ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ...
14
Penyiapan Kultur dan Inokulum ....................................
14
2. Produksi Enzim............................................................
14
I.
iii
3_ DialisiL. ___ "_ ._ ..... __ ... _.. '" _'_ '" __ . '" ... '_' ___ .... " _' __ ..... __ ...... 15
4.
Filtrasi Gel... ..... _. ___ .. ___ .. _.. _'" _____ .... __ . "_ . _____ '" ........ " ___ .
16
5. Perbandingan beberapa Metode Pengendapan . __ ..... __ .. _' __ .. _'_' '" 17
6.
IV_
Pengukuran Aktivitas Protease dan Konsentrasi Protein ____ ..... _ \9
HASIL DAN PEMBAHASAN._. '" _._ '" '_' . __ ... ___ . ____ ... _' __ .... ______ ...... 22
A. PRODUKSI PROTEASE. ____ . " __ ._ .. _... ______ . ___ .. '" ____ '_ ._ .... '" __ ' . __ 22
B. DIALISIS .. __ '_ .,. _.. '" :_. '" "_ ............. _.. _.... : ............ _.... _.. ... ...
25
C_ FILTRASI GEL... __ .. " '" .......... ' ... _._ ." ............ " ._ ......... __ ' ... 29
D. PERBANDINGAN BEBERAPA METODE PENGENDAPAN ..... ' __ . 35
V.
KESIMPULAN DAN SARAN '" ..... ' ....... " .............. ' ... '" ...... "_ ... 39
A. KESIMPULAN ........ ' ....... " . __ ........ ' .. ' .............. ' ....... '_ ... _..... 39
B_ SARAN ... '" ....... '" ., ... _........... ' ....... " '" ._ .. _. '" ., .................. 40
DAFTAR PUSTAKA ... '" ..... _.......... " ........... ' ." ... '" ........ ' _" .. _.. _......... 42
LAMPIRAN ............... '" ............... '" ..... ' .... " ., ....... '" .... " .... " ... ... ....
45
iv
DAFTARTABEL
Halaman
Tabel I. Mikroba penghasil enzim protease ............................................. 5
Tabel 2. Prosedur pengujian aktivitas protease .......................................... 21
Tabel 3. Komposisi komponen limbah cair tahu ...................................... 23
Tabel4. Hasil dialisis selama 14 jam dengan 2 kali penyegaran bufer ...... ....... 26
Tabel 5. Hasil dial isis selama 5 jam dengan I kali penyegaran bufer ................. 27
Tabel 6. Hasil dialisis selama 3 jam tanpa penyegaran bufer (ulangan 1) ............ 28
Tabel7. Hasil dial isis selama 3 jam tanpa penyegaran bufer (u1angan 2) ........... 29
Tabel 8. Pengaruh penambahan beberapa presipitan pada ak'tivitas spesifik
protease x: campeslris pv. glycines IFL ....................................... 36
Tabel9. Pengaruh penyimpanan selama 1 minggu pada ruangdingin (O-4°C)
terhadap tingkat kemurnian protease X campeslris pv. glycines IFL ... 38
v
DAFfAR GAMBAR
Halaman
Gambar l. Prosedur persiapan kantong dialisis ........................................... 16
Gambar 2. Prosedur persiapan kolom filtrasi gel ........................................ 17
Gambar 3. Kurva hasil filtrasi gel percobaan yang pertama ............................ 32
Gambar 4. Kurva hasil filtrasi gel dengan sampel hasilJreeze dry .................... 33
Gambar 5. Kurva hasil filtrasi gel percobaan yang kedua ............................. 34
..
vi
i
,
I
SKRIPSI
MEMPELAJARI BEBERAPA METODE EKSTRAKSI
DAN PEMURNIAN PROTEASE
Xanthomonas campestris pathovarglycines 1FL
Oleh
WINA WILYANI
F 30.0081
1998
FAKUkTAS 'fEKNOLOGI PERTANIAN
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
BOGOR
WIN A WILYANI. F 30.1)081. Mempelajari beberapa Metode Ekstraksi dan
Pcmurnian Protease XaiJIhomonas campestris pathovar glycines IFL. Di bawah
bimbingan Maggy T. Suhartono.
RINGKASAN
Xanthomonas campestris pv. glycines IFL merupakan salah satu bakteri
penghasil protease asli Indonesia. Pemurnian protease ini merupakan salah satu eara
untuk dapat melakukan studi-studi lanjutannya seperti mempelajari struktur,
komposisi dan UTlltan asam amino, berat molekul protease tersebut.
Pada penelitian ini, media fermentasi· yang digunakan untuk produksi
protease adalah limbah cair tahu (LeT) yang diambil dari daerah Panaragan, Bogor.
Metode pemumian dan ekstraksi yang dilakukan adalah metode dial isis, filtrasi gel
dan pengendapan dengan beberapa jenis presipitan.· Presipitan yang digunakan
adalah amonium suI fat mumi dan teknis, aseton teknis, PEG (polietilen glikol) dan
potimer PEG-dekstran. Amonium sulfat yang digunakan adalah sebesar 40% (b/v),
aseton sebesar 1:1,1:2, dan 1:3 (aseton:enzim), dan PEG sebesar 20% dan 30% (b/v).
PEG-dekstran dengan konsentrasi dekstran 7.1I% (bib) dan PEG 28.44% (bib)
diglinakan sebanyak 0.5 kali vollime filtrat kasar enzim.
Dialisis dilakukan dengan beberapa variasi kondisi berupa waktu dialisis
dan frekuensi penyegaran bufer. Waktu dialisis yang diteliti adalah 14, 5 dan 3 jam.
Pemumian protease X campestris pv. glycines IFL dengan metode dialisis eenderung
menyebabkan teIjadinya penurunan aktivitas spesifik.
Dalam penelitian ini, pemurnian protease dengan filtrasi gel tidak
menghasilkan resolusi yang baik. Meskipun demikian, dari nilai aktivitas spesifik
fraksi-fraksi tertentu terlihat adanya kenaikan tingkat kemurnian yang cukup besar,
yakni sebesar 21.24 (fraksi ke-l) dan 21.08 (fraksi ke-4), serta 22.48 (fraksi ke-27)
dan 22.96 ( fraksi ke-41).
Ekstraksi dengan menggunakan amonium sulfat mumi dan aseton teknis
(1: I) menghasilkan peningkatan kemumian yang paling tinggi dan hasil ulangannya
relatif konsisten. Penggunaan PEG-dekstran menghasilkan tingkat kemumian yang
tidak berbeda nyata dengan pengendapan menggunakan amonium sui fat dan aseton
(I: 1). Setelah penyimpanan selama I minggu pada mang dingin, hasil pengendapan
cenderung mengalami penurunan aktivitas spesifik. Penurunan ak-tivitas spesifik
pada filtrat yang diendapkan dengan amonium sulfat relatif sedikit dibanding dengan
presipitan lainnya. Hasil analisa pada filtrat yang diendapkan dengan PEG tidak
konsisten.
MEMPELAJARI BEBERAPA METODE EKSTRAKSI DAN PEMURNIAN
PROTEASE Xanthomonas campestris pathovar glycines 1FL
Oleh
WINA WILYANI
F 30.0081
SKRIPSI
Sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar
SARJANA TEKNOLOGI PERTANIAN
pada Jurusan Teknologi Pangan dan Gizi
Fakultas Teknologi Pertanian
Institut Pertanian Bogor
1998
JURUSAN TEKNOLOGI PANGAN DAN GIZI
FAKULTAS TEKNOLOGI PERTANIAN
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
BOGOR
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
FAKULTASTEKNOLOGI PERTANIAN
MEMPELAJARI BEBERAPA METODE EKSTRAKSI DAN PEMURNIAN
PROTEASE Xanthomonas campestris pathovar glycines 1FL
Oleh
W1NA WILYANI
F 30.0081
SKRIPSI
Sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar
SARJANA TEKONOLOGI PERTANIAN
pada Jurusan Teknologi Pangan dan Gizi
Fakultas Teknologi Pertanian
Institut Pertanian Bogor
Dilahirkan pada tanggal10 Juli 1975
diPurwakarta
T anggal lulus : 10 Pebruari 1998
KATA PENGANTAR
Puji syukur kepada Tuhan Yang Maha Esa yang senantiasa melimpahkan
kasih karuniaNya kepada penulis. Dengan kekuatan dan hikrnat yang diberikanNya,
penulis dapat rnenyelesaikan penelitian dan penyusunan skripsi ini.
Skripsi ini merupakan salah satu syarat untuk memperoleh gelar kesatjanaan
strata-l pada jurusan Teknologi Pangan dan Gizi, Fakultas Teknologi Pertanian,
lnstitut Pertanian Bogor, yang disusun berdasarkan penelitian dan studi pustaka.
Selama pelaksanaan penelitian dan penyusunan skripsi ini, penulis mendapatkan
banyak bantuan dari berbagai pihak. Untuk itu penulis mengucapkan terima kasih
kepada:
L Dr. lr. Maggy T. Suhartono selaku dosen pembimbing yang telah memberikan
birnbingan dan perhatian yang sangat berarti selarna penelitian dan penulisan
skripsi inL
2. If. Winiati Puji Rahayu, MS yang telah berkenan untuk menguji dan memberikan
masukan-rnasukan bagi kesernpumaan skripsi ini.
3. If. Alfi selaku dosen penguji yang telah rnernberikan perhatian dan waktu bagi
kesempumaan skripsi inL
4. Papi, Mami, Jejek, Ellen, Dodon dan Willy atas doa dan kasih sayang yang sangat
berarti.
5. Grandpa, grandma, Engku, Ie Dodoh, Ie Honny, Ie Bibing, dan Ie Jenny atas
dukungan dan perhatian yang diberikan.
6. Ternan-ternan tersayang atas persahabatan yang indah : Erwin, Fani, Olin, Agus,
Winny, Engel, Obrin, Dico, Hui, Probo, Eryan, Sahat, Pengurus KPS A' 30 dan
Kharisrna.
7. Rekan-rekan di laboratorium: Oen, Lily, Gun, Benny, Budiman, Firly, Edwin,
Irma, Irawan, Mbak Novi, Mbak Nurul, Mbak Yun, Cie Eli, Bu Yus, Bu Armini,
Bu Ika, Bu Eni, Bu Benika, Kang Yaya, Pak Gi, Pak Sutrisno, Pak Bowo, serta
Pudin dan Ida.
8. Ternan-ternan Radar 43 : Naga, Ollin, Siska, Nancy, Linda, Karmila, Windy, Rita,
serta keluarga Pak Rahmat.
9. Berbagai pihak lain yang tidak dapat disebutkan satu persatu.
Penulis menyadari bahwa masih banyak kekurangan dalam penelitian dan
skripsi ini, maka segala kritik dan saran untuk kesempurnaannya akan diterima
dengan senang hati.
Akhir kala, penulis berharap semoga skripsi ini dapat
bermanfaat bagi semua pihak yang rnembutuhkannya.
Bogor, Pebruari 1998
Penulis
DAFTARISI
Halaman
KATA PENGANTAR ..................................................................... .
DAFTAR lSI... ... ... ... ... ... ... ... ...... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ...... ... ... ... ... ... ...
III
DAFTAR TABEL ............................................................................. v
DAFT AR GAMBAR................................................... ... ... ...... ... ... ...
vi
DAFT AR LAMPIRAN ...................................................................... vii
I.
II.
PENDAHULUAN ................................................................. .
A.
LATAR BELAKANG ......................................................... 1
B.
TUJUAN PENELlTlAN ...................................................... 3
TINJAUAN PUSTAKA ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ...... ... ... ... ... ...
4
A. PROTEASE MIKROBA... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ....
4
B. PROTEASE Xanlhomonas campeslris... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... .... 6
C. EKSTRAKSr DENGAN PENGENDAPAN ................................... 7
D. D1ALlSIS ........................................................................... 9
E. KROMATOGRAFI... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ....
III.
10
BAHAN DAN METODE...... ... ... ... ...... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ....... 13
A. BAHAN DAN ALAT... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ....... ... . ... ... 13
B. METODE PENf.L1TIAN.. ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ...
14
Penyiapan Kultur dan Inokulum ....................................
14
2. Produksi Enzim............................................................
14
I.
iii
3_ DialisiL. ___ "_ ._ ..... __ ... _.. '" _'_ '" __ . '" ... '_' ___ .... " _' __ ..... __ ...... 15
4.
Filtrasi Gel... ..... _. ___ .. ___ .. _.. _'" _____ .... __ . "_ . _____ '" ........ " ___ .
16
5. Perbandingan beberapa Metode Pengendapan . __ ..... __ .. _' __ .. _'_' '" 17
6.
IV_
Pengukuran Aktivitas Protease dan Konsentrasi Protein ____ ..... _ \9
HASIL DAN PEMBAHASAN._. '" _._ '" '_' . __ ... ___ . ____ ... _' __ .... ______ ...... 22
A. PRODUKSI PROTEASE. ____ . " __ ._ .. _... ______ . ___ .. '" ____ '_ ._ .... '" __ ' . __ 22
B. DIALISIS .. __ '_ .,. _.. '" :_. '" "_ ............. _.. _.... : ............ _.... _.. ... ...
25
C_ FILTRASI GEL... __ .. " '" .......... ' ... _._ ." ............ " ._ ......... __ ' ... 29
D. PERBANDINGAN BEBERAPA METODE PENGENDAPAN ..... ' __ . 35
V.
KESIMPULAN DAN SARAN '" ..... ' ....... " .............. ' ... '" ...... "_ ... 39
A. KESIMPULAN ........ ' ....... " . __ ........ ' .. ' .............. ' ....... '_ ... _..... 39
B_ SARAN ... '" ....... '" ., ... _........... ' ....... " '" ._ .. _. '" ., .................. 40
DAFTAR PUSTAKA ... '" ..... _.......... " ........... ' ." ... '" ........ ' _" .. _.. _......... 42
LAMPIRAN ............... '" ............... '" ..... ' .... " ., ....... '" .... " .... " ... ... ....
45
iv
DAFTARTABEL
Halaman
Tabel I. Mikroba penghasil enzim protease ............................................. 5
Tabel 2. Prosedur pengujian aktivitas protease .......................................... 21
Tabel 3. Komposisi komponen limbah cair tahu ...................................... 23
Tabel4. Hasil dialisis selama 14 jam dengan 2 kali penyegaran bufer ...... ....... 26
Tabel 5. Hasil dial isis selama 5 jam dengan I kali penyegaran bufer ................. 27
Tabel 6. Hasil dialisis selama 3 jam tanpa penyegaran bufer (ulangan 1) ............ 28
Tabel7. Hasil dial isis selama 3 jam tanpa penyegaran bufer (u1angan 2) ........... 29
Tabel 8. Pengaruh penambahan beberapa presipitan pada ak'tivitas spesifik
protease x: campeslris pv. glycines IFL ....................................... 36
Tabel9. Pengaruh penyimpanan selama 1 minggu pada ruangdingin (O-4°C)
terhadap tingkat kemurnian protease X campeslris pv. glycines IFL ... 38
v
DAFfAR GAMBAR
Halaman
Gambar l. Prosedur persiapan kantong dialisis ........................................... 16
Gambar 2. Prosedur persiapan kolom filtrasi gel ........................................ 17
Gambar 3. Kurva hasil filtrasi gel percobaan yang pertama ............................ 32
Gambar 4. Kurva hasil filtrasi gel dengan sampel hasilJreeze dry .................... 33
Gambar 5. Kurva hasil filtrasi gel percobaan yang kedua ............................. 34
..
vi
I
i
,
I
SKRIPSI
MEMPELAJARI BEBERAPA METODE EKSTRAKSI
DAN PEMURNIAN PROTEASE
Xanthomonas campestris pathovarglycines 1FL
Oleh
WINA WILYANI
F 30.0081
1998
FAKUkTAS 'fEKNOLOGI PERTANIAN
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
BOGOR
WIN A WILYANI. F 30.1)081. Mempelajari beberapa Metode Ekstraksi dan
Pcmurnian Protease XaiJIhomonas campestris pathovar glycines IFL. Di bawah
bimbingan Maggy T. Suhartono.
RINGKASAN
Xanthomonas campestris pv. glycines IFL merupakan salah satu bakteri
penghasil protease asli Indonesia. Pemurnian protease ini merupakan salah satu eara
untuk dapat melakukan studi-studi lanjutannya seperti mempelajari struktur,
komposisi dan UTlltan asam amino, berat molekul protease tersebut.
Pada penelitian ini, media fermentasi· yang digunakan untuk produksi
protease adalah limbah cair tahu (LeT) yang diambil dari daerah Panaragan, Bogor.
Metode pemumian dan ekstraksi yang dilakukan adalah metode dial isis, filtrasi gel
dan pengendapan dengan beberapa jenis presipitan.· Presipitan yang digunakan
adalah amonium suI fat mumi dan teknis, aseton teknis, PEG (polietilen glikol) dan
potimer PEG-dekstran. Amonium sulfat yang digunakan adalah sebesar 40% (b/v),
aseton sebesar 1:1,1:2, dan 1:3 (aseton:enzim), dan PEG sebesar 20% dan 30% (b/v).
PEG-dekstran dengan konsentrasi dekstran 7.1I% (bib) dan PEG 28.44% (bib)
diglinakan sebanyak 0.5 kali vollime filtrat kasar enzim.
Dialisis dilakukan dengan beberapa variasi kondisi berupa waktu dialisis
dan frekuensi penyegaran bufer. Waktu dialisis yang diteliti adalah 14, 5 dan 3 jam.
Pemumian protease X campestris pv. glycines IFL dengan metode dialisis eenderung
menyebabkan teIjadinya penurunan aktivitas spesifik.
Dalam penelitian ini, pemurnian protease dengan filtrasi gel tidak
menghasilkan resolusi yang baik. Meskipun demikian, dari nilai aktivitas spesifik
fraksi-fraksi tertentu terlihat adanya kenaikan tingkat kemurnian yang cukup besar,
yakni sebesar 21.24 (fraksi ke-l) dan 21.08 (fraksi ke-4), serta 22.48 (fraksi ke-27)
dan 22.96 ( fraksi ke-41).
Ekstraksi dengan menggunakan amonium sulfat mumi dan aseton teknis
(1: I) menghasilkan peningkatan kemumian yang paling tinggi dan hasil ulangannya
relatif konsisten. Penggunaan PEG-dekstran menghasilkan tingkat kemumian yang
tidak berbeda nyata dengan pengendapan menggunakan amonium sui fat dan aseton
(I: 1). Setelah penyimpanan selama I minggu pada mang dingin, hasil pengendapan
cenderung mengalami penurunan aktivitas spesifik. Penurunan ak-tivitas spesifik
pada filtrat yang diendapkan dengan amonium sulfat relatif sedikit dibanding dengan
presipitan lainnya. Hasil analisa pada filtrat yang diendapkan dengan PEG tidak
konsisten.
MEMPELAJARI BEBERAPA METODE EKSTRAKSI DAN PEMURNIAN
PROTEASE Xanthomonas campestris pathovar glycines 1FL
Oleh
WINA WILYANI
F 30.0081
SKRIPSI
Sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar
SARJANA TEKNOLOGI PERTANIAN
pada Jurusan Teknologi Pangan dan Gizi
Fakultas Teknologi Pertanian
Institut Pertanian Bogor
1998
JURUSAN TEKNOLOGI PANGAN DAN GIZI
FAKULTAS TEKNOLOGI PERTANIAN
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
BOGOR
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
FAKULTASTEKNOLOGI PERTANIAN
MEMPELAJARI BEBERAPA METODE EKSTRAKSI DAN PEMURNIAN
PROTEASE Xanthomonas campestris pathovar glycines 1FL
Oleh
W1NA WILYANI
F 30.0081
SKRIPSI
Sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar
SARJANA TEKONOLOGI PERTANIAN
pada Jurusan Teknologi Pangan dan Gizi
Fakultas Teknologi Pertanian
Institut Pertanian Bogor
Dilahirkan pada tanggal10 Juli 1975
diPurwakarta
T anggal lulus : 10 Pebruari 1998
KATA PENGANTAR
Puji syukur kepada Tuhan Yang Maha Esa yang senantiasa melimpahkan
kasih karuniaNya kepada penulis. Dengan kekuatan dan hikrnat yang diberikanNya,
penulis dapat rnenyelesaikan penelitian dan penyusunan skripsi ini.
Skripsi ini merupakan salah satu syarat untuk memperoleh gelar kesatjanaan
strata-l pada jurusan Teknologi Pangan dan Gizi, Fakultas Teknologi Pertanian,
lnstitut Pertanian Bogor, yang disusun berdasarkan penelitian dan studi pustaka.
Selama pelaksanaan penelitian dan penyusunan skripsi ini, penulis mendapatkan
banyak bantuan dari berbagai pihak. Untuk itu penulis mengucapkan terima kasih
kepada:
L Dr. lr. Maggy T. Suhartono selaku dosen pembimbing yang telah memberikan
birnbingan dan perhatian yang sangat berarti selarna penelitian dan penulisan
skripsi inL
2. If. Winiati Puji Rahayu, MS yang telah berkenan untuk menguji dan memberikan
masukan-rnasukan bagi kesernpumaan skripsi ini.
3. If. Alfi selaku dosen penguji yang telah rnernberikan perhatian dan waktu bagi
kesempumaan skripsi inL
4. Papi, Mami, Jejek, Ellen, Dodon dan Willy atas doa dan kasih sayang yang sangat
berarti.
5. Grandpa, grandma, Engku, Ie Dodoh, Ie Honny, Ie Bibing, dan Ie Jenny atas
dukungan dan perhatian yang diberikan.
6. Ternan-ternan tersayang atas persahabatan yang indah : Erwin, Fani, Olin, Agus,
Winny, Engel, Obrin, Dico, Hui, Probo, Eryan, Sahat, Pengurus KPS A' 30 dan
Kharisrna.
7. Rekan-rekan di laboratorium: Oen, Lily, Gun, Benny, Budiman, Firly, Edwin,
Irma, Irawan, Mbak Novi, Mbak Nurul, Mbak Yun, Cie Eli, Bu Yus, Bu Armini,
Bu Ika, Bu Eni, Bu Benika, Kang Yaya, Pak Gi, Pak Sutrisno, Pak Bowo, serta
Pudin dan Ida.
8. Ternan-ternan Radar 43 : Naga, Ollin, Siska, Nancy, Linda, Karmila, Windy, Rita,
serta keluarga Pak Rahmat.
9. Berbagai pihak lain yang tidak dapat disebutkan satu persatu.
Penulis menyadari bahwa masih banyak kekurangan dalam penelitian dan
skripsi ini, maka segala kritik dan saran untuk kesempurnaannya akan diterima
dengan senang hati.
Akhir kala, penulis berharap semoga skripsi ini dapat
bermanfaat bagi semua pihak yang rnembutuhkannya.
Bogor, Pebruari 1998
Penulis
DAFTARISI
Halaman
KATA PENGANTAR ..................................................................... .
DAFTAR lSI... ... ... ... ... ... ... ... ...... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ...... ... ... ... ... ... ...
III
DAFTAR TABEL ............................................................................. v
DAFT AR GAMBAR................................................... ... ... ...... ... ... ...
vi
DAFT AR LAMPIRAN ...................................................................... vii
I.
II.
PENDAHULUAN ................................................................. .
A.
LATAR BELAKANG ......................................................... 1
B.
TUJUAN PENELlTlAN ...................................................... 3
TINJAUAN PUSTAKA ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ...... ... ... ... ... ...
4
A. PROTEASE MIKROBA... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ....
4
B. PROTEASE Xanlhomonas campeslris... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... .... 6
C. EKSTRAKSr DENGAN PENGENDAPAN ................................... 7
D. D1ALlSIS ........................................................................... 9
E. KROMATOGRAFI... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ....
III.
10
BAHAN DAN METODE...... ... ... ... ...... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ....... 13
A. BAHAN DAN ALAT... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ....... ... . ... ... 13
B. METODE PENf.L1TIAN.. ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ...
14
Penyiapan Kultur dan Inokulum ....................................
14
2. Produksi Enzim............................................................
14
I.
iii
3_ DialisiL. ___ "_ ._ ..... __ ... _.. '" _'_ '" __ . '" ... '_' ___ .... " _' __ ..... __ ...... 15
4.
Filtrasi Gel... ..... _. ___ .. ___ .. _.. _'" _____ .... __ . "_ . _____ '" ........ " ___ .
16
5. Perbandingan beberapa Metode Pengendapan . __ ..... __ .. _' __ .. _'_' '" 17
6.
IV_
Pengukuran Aktivitas Protease dan Konsentrasi Protein ____ ..... _ \9
HASIL DAN PEMBAHASAN._. '" _._ '" '_' . __ ... ___ . ____ ... _' __ .... ______ ...... 22
A. PRODUKSI PROTEASE. ____ . " __ ._ .. _... ______ . ___ .. '" ____ '_ ._ .... '" __ ' . __ 22
B. DIALISIS .. __ '_ .,. _.. '" :_. '" "_ ............. _.. _.... : ............ _.... _.. ... ...
25
C_ FILTRASI GEL... __ .. " '" .......... ' ... _._ ." ............ " ._ ......... __ ' ... 29
D. PERBANDINGAN BEBERAPA METODE PENGENDAPAN ..... ' __ . 35
V.
KESIMPULAN DAN SARAN '" ..... ' ....... " .............. ' ... '" ...... "_ ... 39
A. KESIMPULAN ........ ' ....... " . __ ........ ' .. ' .............. ' ....... '_ ... _..... 39
B_ SARAN ... '" ....... '" ., ... _........... ' ....... " '" ._ .. _. '" ., .................. 40
DAFTAR PUSTAKA ... '" ..... _.......... " ........... ' ." ... '" ........ ' _" .. _.. _......... 42
LAMPIRAN ............... '" ............... '" ..... ' .... " ., ....... '" .... " .... " ... ... ....
45
iv
DAFTARTABEL
Halaman
Tabel I. Mikroba penghasil enzim protease ............................................. 5
Tabel 2. Prosedur pengujian aktivitas protease .......................................... 21
Tabel 3. Komposisi komponen limbah cair tahu ...................................... 23
Tabel4. Hasil dialisis selama 14 jam dengan 2 kali penyegaran bufer ...... ....... 26
Tabel 5. Hasil dial isis selama 5 jam dengan I kali penyegaran bufer ................. 27
Tabel 6. Hasil dialisis selama 3 jam tanpa penyegaran bufer (ulangan 1) ............ 28
Tabel7. Hasil dial isis selama 3 jam tanpa penyegaran bufer (u1angan 2) ........... 29
Tabel 8. Pengaruh penambahan beberapa presipitan pada ak'tivitas spesifik
protease x: campeslris pv. glycines IFL ....................................... 36
Tabel9. Pengaruh penyimpanan selama 1 minggu pada ruangdingin (O-4°C)
terhadap tingkat kemurnian protease X campeslris pv. glycines IFL ... 38
v
DAFfAR GAMBAR
Halaman
Gambar l. Prosedur persiapan kantong dialisis ........................................... 16
Gambar 2. Prosedur persiapan kolom filtrasi gel ........................................ 17
Gambar 3. Kurva hasil filtrasi gel percobaan yang pertama ............................ 32
Gambar 4. Kurva hasil filtrasi gel dengan sampel hasilJreeze dry .................... 33
Gambar 5. Kurva hasil filtrasi gel percobaan yang kedua ............................. 34
..
vi