Potensi rumput mutiara (Hedyotis corymbosa (L) Lam.) sebagai antioksidan alami

POTENSI RUMPUT MUTIARA (Hedyotis corymbosa (L.)
Lam.) SEBAGAI ANTIOKSIDAN ALAMI

GUSMETA AMELIA

PROGRAM STUDI BIOKIMIA
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
BOGOR
2006

POTENSI RUMPUT MUTIARA (Hedyotis corymbosa (L.)
Lam.) SEBAGAI ANTIOKSIDAN ALAMI

GUSMETA AMELIA

Skripsi
sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar
Sarjana Sains
Pada Program Studi Biokimia

PROGRAM STUDI BIOKIMIA
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
BOGOR
2006

Judul
Nama
NIM

: Potensi Rumput Mutiara (Hedyotis corymbosa (L.) Lam.) Sebagai
Antioksidan Alami
: Gusmeta Amelia
: G44102001

Disetujui
Komisi Pembimbing

Dr. Anna P. Roswiem M.S
Ketua

Drs. Edy Djauhari PK, M.Si
Anggota

Diketahui
Dekan Fakultas Matematika Dan Ilmu Pengetahuan Alam

Dr. Ir. Yonny Koesmaryono, M.S
NIP. 131473999

Tanggal Lulus :

ABSTRAK
GUSMETA AMELIA. Potensi Rumput Mutiara (Hedyotis corymbosa (L.) Lam.)
Sebagai Antioksidan Alami. Dibimbing oleh ANNA P. ROSWIEM dan EDY
DJAUHARI PURWAKUSUMAH.
Rumput mutiara adalah tumbuhan peneduh. Tumbuhan ini diduga
berpotensi sebagai antioks idan alami. Penelitian ini dilakukan untuk
membandingkan aktivitas antioksidasi antara tajuk dan akar rumput mutiara yang
dianalisis secara in vitro dan aktivitasnya dibandingkan dengan senyawa atokoferol (V itamin E). Tajuk dan akar rumput mutiara diekstraksi dengan

menggunakan etanol 70% secara refluks. Aktivitas antioksidasinya ditentukan
dengan metode asam tiobarbiturat (TBA). Metode ini didasarkan pada reaksi
spesifik antara TBA dan malondialdehid (MDA) (hasil oksidasi asam linoleat).
Daya hambat dari ekstrak tajuk 500 ppm dan 200 ppm, eks trak akar 500
ppm serta a -tokoferol 200 ppm secara berturut-turut adalah sebesar 71,74%;
61,78%; 63,81% dan 77,61%. Dari hasil uji Duncan (a= 0.05) diperoleh bahwa
ekstrak tajuk (500 dan 200 ppm) serta ekstrak akar (500 ppm) memiliki daya
hambat pembentukan MDA yang tidak berbeda nyata dengan a-tokoferol. Hasil
penelitian ini menunjukkan bahwa penambahan ekstrak tajuk dan akar rumput
mutiara dapat menghambat laju pembentukan MDA. Semakin tinggi konsentrasi
ekstrak maka semakin besar pula aktivitas antioksidasinya. Dari penelitian ini
disimpulkan bahwa ekstrak tajuk rumput mutiara memiliki aktivitas antioksidan
yang lebih tinggi dibandingkan ekstrak akar rumput mutiara.

ABSTRACT
GUSMETA AMELIA. Potency of Pearl Grass (Hedyotis corymbosa (L.) Lam. )
as Natural Antioxidant. Under the direction of ANNA P. ROSWIEM and EDY
DJAUHARI PURWAKUSUMAH.
Pearl grass (Hedyotis corymbosa (L.) Lam.) is a shading tree. The plant is
suspected as a natural antioxidant. The aim of this research is to compare in vitro

antioxidant activities of coronet and root of pearl grass and then to compare them
with a -tocopherol activity. Samples were prepared by solvent extraction with 70%
ethanol. Antioxidant activity was determined by thiobarbituric acid (TBA)
method. This method is based on the specific reaction between TBA and
malondialdehyde (MDA) (the result of linoleic acid oxidation).
Inhibition capacity of coronet extract at 500 ppm and 200 ppm, of root
extract at 500 ppm, and of a-tocopherol at 200 ppm were 71.74%, 61.78%,
63.81%, and 77.61% respectively. Duncan test (a= 0.05) revealed that coronet
extract (at 500 ppm and 200 ppm) and root extract (at 500 ppm) showed similar
inhibitory effect to a-tocopherol on MDA formation. The result of this research
revealed that the addition of coronet and root extract of pearl grass can inhibit the
rate of MDA formation. Increase in extract concentration improved the
antioxidant activity. This research concluded that coronet extract of pearl grass
has higher antioxidant activity than the root extract.

DAFTAR ISI
Halaman
DAFTAR TABEL ..........................................................................................

ii

DAFTAR GAMBAR .....................................................................................

ii

DAFTAR LAMPIRAN ..................................................................................

iii

PENDAHULUAN ..........................................................................................

1

TINJAUAN PUSTAKA
Radikal Bebas .......................................................................................
Definisi Antioksidan ............................................................................
Fungsi Antioksidan ..............................................................................
Sumber A ntioksidan .............................................................................
Rumput Mutiara ...................................................................................
Flavonoid .............................................................................................

Vitamin E .............................................................................................
Metode P engukuran Antioksidan .........................................................

1
2
2
3
3
4
4
5

BAHAN DAN METODE
Bahan dan Alat .....................................................................................
Metode Penelitian .................................................................................

6
6

HASIL DAN PEMBAHASAN

Kadar Air ..............................................................................................
Rendemen Ekstrak Rumput Mutiara ....................................................
Analisis Hidroperoksida Asam Linoleat ..............................................
Analisis MDA dan Potensi Antioksidan Rumput Mutiara ...................

7
8
8
9

SIMPULAN DAN SARAN ...........................................................................

11

DAFTAR PUSTAKA ....................................................................................

11

LAMPIRAN ...................................................................................................

14

DAFTAR TABEL
Halaman
1 Enam perlakuan pada uji potensi antioksidan rumput mutiara ..................

7

2 Kadar air rata-rata rumput mutiara .............................................................

8

3 Hasil analisis kadar MDA dengan uji Duncan ...........................................

11

DAFTAR GAMBAR
Halaman
1 Rumput mutiara ..........................................................................................

3

2 Rumus struktur flavonoid ...........................................................................

4

3 Struktur vitamin E ......................................................................................

5

4 Reaksi antara MDA dan TBA ....................................................................

5

5 Reaksi lipid peroksidasi dari MDA ............................................................

6

6 Reaksi pembentukan hidroperoksida dari asam lemak tidak jenuh ...........

9

7 Nilai absorbansi hidroperoksida dari asam linoleat ...................................

9

8 Kadar MDA (µM) dari ekstrak tajuk dan akar pada beberapa
tingkatan konsentrasi (ppm) .......................................................................

10

9 Persentase ekstrak tajuk dan akar rumput mutiara dalam menahan
laju oksidasi ................................................................................................

10

DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
1 Tahapan umum penelitian .........................................................................

15

2 Penentuan kadar air tajuk dan akar rumput mutiara .................................

16

3 Analisis kadar air tajuk dan akar rumput mutiara .....................................

16

4 Prosedur ekstraksi tajuk dan akar rumput mutiara ....................................

17

5 Rendeman hasil ekstraksi rumput mutiara dengan etanol 70% .................

17

6 Analisis hidroperoksida asam linoleat dengan metode tiosianat ...............

17

7 Nilai absorbansi hidroperoksida asam linoleat pada ? 492 nm .................

18

8 Analisis potensi antioksidan dengan metode TBA ...................................

18

9 Hasil analisis aktivitas antioksidan metode TBA ......................................

19

10 Hasil uji Duncan untuk rerata konsentrasi MDA tiap perlakuan dengan
selang kepercayaan 95% ..........................................................................

20

RIWAYAT HIDUP
Penulis dilahirkan di Jambi pada tanggal 27 Agustus 1984 dari ayah
Nilwandi BE. dan ibu Ermawati. Penulis merupakan anak pertama dari tiga
bersaudara.
Tahun 2002 penulis lulus dari SMU Negeri 2 Sungai Penuh (Kerinci) dan
pada tahun yang sama lulus seleksi masuk IPB melalui jalur Undangan Seleksi
Masuk IPB (USMI) pada program studi Biokimia, Fakultas Matematika dan Ilmu
Pengetahuan Alam.
Selama mengikuti perkuliahan, penulis pernah menjadi asisten mata kuliah
Biologi Dasar pada tahun ajaran 2005/2006 dan mata kuliah Biokimia Fisik S1
Biokimia pada tahun ajaran 2005/2006. Penulis melakukan praktik kerja lapang di
Laboratorium Biokimia Mikroba, Bidang Mikrobiologi, Puslit Biologi-LIPI,
Bogor dari bulan Juli sampai Agustus 2005 dengan judul Isolasi dan Pengujian
Aktivitas Enzim Amilase dan Protease dari Mikroba Terasi Asal Kalimantan
Timur. Penulis juga aktif di Ikatan Mahasiswa Kimia (IMASIKA) pada tahun
2004/2005.

PRAKATA
Puji dan syukur penulis panjatkan kepada Allh SWT atas segala karunia Nya sehingga karya ilmiah ini berhasil diselesaikan dengan baik. Tema yang
dipilih dalam penelitian ini adalah khasiat dari tanaman rumput mutiara sebagai
antioksidan, dengan judul Potensi Rumput Mutiara (Hedyotis corymbosa (L.)
Lam.) Sebagai Antioksidan Alami. Penelitian ini dilaksanakan mulai bulan Mei
sampai Agustus 2006 di Laboratorium Biokimia, Departemen Biokimia, Fakultas
Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam , Institut Pertanian Bogor.
Penulis berterima kasih kepada berbagai pihak yang telah membantu
menyelesaikan karya ilmiah ini terutama kepada Ibu Dr. Anna P. Roswiem M.S
dan Bapak Drs. Edy Djauhari PK. M.Si selaku dosen pembimbing. Terima kasih
juga penulis ucapkan kepada seluruh staf laboratorium Biokimia antara lain, Ibu
Iis, Ibu Mary, Pak Arya dan Mbak Itin atas semua bantuan dan fasilitas yang
diberikan. Terima kasih juga kepada Mbak Wida, Indri, Rita, Andri, Cicing, dan
Peni atas kebersamaan, kerjasama dan dukungannya. Ucapan terima kasih yang
sedalam-dalamnya penulis ucapkan untuk Papa, Mama, adik-adikku serta
keluarga besar atas segala doa, semangat dan kasih sayangnya.
Semoga karya ilmiah ini dapat bermanfaat.

Bogor, Oktober 2006

Gusmeta Amelia

1

PENDAHULUAN
Makanan, lingkungan, serta pola hidup
suatu masyarakat sangatlah mempengaruhi
kesehatan di samping faktor endogen yang ada
di dalam tubuh masing-masing individu.
Faktor endogen masih bisa dikendalikan,
tetapi untuk faktor lingkungan tidaklah
mudah. Bahaya lingkungan yang tidak sehat
diantaranya adalah radikal bebas, yaitu suatu
molekul, atom, atau grup beberapa atom yang
memiliki elektron yang tidak berpasangan
sehingga menjadi radikal bebas reaktif.
Radikal bebas reaktif ini sangat berbahaya
sekali karena akan mencuri elektron dari
senyawa lain seperti protein, lipid, karbohidrat
dan juga DNA di dalam tubuh. DNA adalah
senyawa yang ada di dalam inti sel sehingga
jika
mengalami
kerusakan
dapat
mengakibatkan berbagai macam penyakit
seperti katarak, kanker dan berbagai penyakit
degeneratif lainnya yang banyak menyerang
para manula.
Secara alami tubuh memiliki pelindung
yang dapat mencegah serangan berbagai
macam penyakit yang disebut antioksidan.
Kegunaan utama dari antioksidan adalah
untuk menghentikan atau memutuskan reaksi
berantai dari radikal bebas yang terdapat
secara alami di dalam tubuh. Dengan kata
lain, antioksidan dapat menyelamatkan tubuh
dari kerusakan akibat adanya radikal bebas.
Pada umur 40 tahun, produksi antioksidan
dalam tubuh hanya 50% dan pada umur 60-70
tahun akan turun menjadi 5-10%. Untuk itu
asupan antioksidan dari luar sangatlah
diperlukan oleh tubuh. Disamping itu,
antioksidan
sintesis
seperti
BHA
(butylatedhydroxyanysole)
dan
BHT
(butylatedhydroxytoluene) bila digunakan
dalam jangka waktu panjang dan digunakan
dalam jumlah yang berlebihan dapat
memberikan efek samping yang cukup
berbahaya bagi kesehatan, antara lain adalah
dapat menyebabkan kerusakan hati. Oleh
sebab itu sekarang banyak peneliti yang
berusaha menemukan dan mengembangkan
antioksidan dari produk alami seperti dari
buah, sayur, rempah dan tanaman obat.
Senyawa kimia yang tergolong dalam
kelompok antioksidan dan dapat ditemui pada
tanaman antara lain berasal dari golongan
polifenol, bioflavonoid, vitamin C, vitamin E,
betakaroten, katekin, dan lain sebagainya.
Salah satu tumbuhan yang diduga
memiliki potensi sebagai antioksidan adalah
Rumput Mutiara (Hedyotis corymbosa (L.)
Lam .). Tumbuhan ini belum terlalu dikenal

oleh masyarakat luas dan belum ada penelitian
secara
ilmiah yang dilakukan untuk
mengetahui potensi antioksidan dari t umbuhan
ini. Namun, dalam bidang farmakologi Cina,
tumbuhan ini telah lama digunakan untuk
menyembuhkan berbagai penyakit. Secara
tradisional, ada beberapa sumber yang
mengatakan bahwa rumput mutiara dapat
digunakan untuk melawan kanker, yaitu
dengan cara meminum air rebusan seluruh
bagian tumbuhan ini. Dalam penggunaannya,
biasanya masyarakat menggunakan rebusan
dari keseluruhan bagian dari tumbuhan ini.
Namun,
dalam
penelitian
ini
akan
dibandingkan antara tajuk dan akarnya untuk
melihat bagian manakah yang lebih berpotensi
sebagai antioksidan.
Penelitian ini bertujuan untuk menguji
potensi aktivitas antioksidan ekstrak tajuk dan
akar rumput mutiara dengan menggunakan
metoda TBA (thiobarbituric acid) serta
membandingkan
aktivitasnya
dengan
antioksidan alami yaitu a-tokoferol (Vitamin
E).
Hipotesis penelitian ini adalah tumbuhan
Rumput mutiara (Hedyotis corymbosa (L.)
Lam.) mengandung senyawa bioaktif yang
dapat berpotensi sebagai antioksidan. Serta
terdapat potensi antioksidan yang berbeda
antara bagian tajuk dan akar rumput mutiara.
Hasil penelitian ini diharapkan dapat
memberikan
informasi
ilmiah
kepada
masyarakat luas mengenai khasiat rumput
mutiara sebagai obat alternatif terutama
sebagai antioksidan alami.

TINJAUAN PUSTAKA
Radikal B ebas
Kehidupan
aerobik
yang
mampu
menggunakan oksigen untuk mendapatkan
energi ternyata juga memberikan dampak
yang merugikan. Adanya O 2 dalam jumlah
berlebih dapat memicu timbulnya reaksi
oksidasi yang dapat menghasilkan senyawa
radikal bebas dan dapat menyebabkan
kerusakan sel (Supari 1995 dan Langseth
2000). Radikal bebas adalah sebuah molekul
yang memiliki satu atau lebih elektron yang
tidak berpasangan pada orbital kulit terluarnya
dan terbentuk melalui dua cara yaitu secara
endogen dan eksogen. Secara endogen adalah
sebagai respon normal dari peristiwa biokimia
dalam tubuh. Dan secara eksogen adalah
radikal bebas yang di dapat dari polusi yang
berasal dari luar tubuh dan bereaksi dalam

2

tubuh melalu i pernafasan, pencernaan,
injeksi dan penyerapan kulit (Supari 1995).
Menurut Halliwel dan Gutteridge (1989)
radikal bebas adalah molekul atau senyawa
yang mempunyai satu atau lebih elektron yang
tidak berpasangan dan dapat menimbulkan
kerusakan pada biomolekul. Produksi radikal
bebas yang menyebabkan kerusakan pada
materi biologis terjadi selama metabolisme
aerob normal. Radikal bebas dapat diproduksi
di dalam sel oleh mitokondria, membran
plasma, lisosom, peroksisom, retikulum
endoplasma, dan inti sel (Langseth 1995).
Bentuk nyata dari radikal bebas yang dapat
dilihat di alam bebas adalah pembakaran yang
tidak sempurna misalnya asap rokok yang
tidak menghasilkan CO 2 tapi CO, demikian
juga dengan asap dari kendaraan bermotor
merupakan radikal bebas yang berbahaya
sekali bagi paru-paru. Disamping itu asupan
makanan yang mengandung logam-logam
berat memungkinkan terbentuknya radikal
bebas akibat oksidasi dari luar. Beberapa
macam radikal bebas antara lain superoksida
(O2-), hidrogen peroksida (H2O2), radikal
hidroksil (OH), radikal hipoklorit (OCl), dan
ozon (O3) (Kumalaningsih 2006).
Menurut Halliwell dan Gutteridge (1989)
radikal bebas di dalam tubuh dapat terjadi
melalui
beberapa
mekanisme
yaitu
autooksidasi, aktifitas oksidasi, dan sistem
transport elektron. Sedangkan menurut
Fardiaz (1996), reaksi autooksidasi di dalam
tubuh terjadi antara lipid dan oksigen. Reaksi
ini berlangsung melalui tiga tahap, yaitu:
Inisiasi, yaitu reaksi dimana radikal bebas
terbentuk. Hidroperoksida (ROOH) dapat
terbentuk melalui berbagai proses termasuk
reaksi antara singlet oksigen dengan lipid
tidak jenuh atau oksidasi asam lemak tidak
jenuh yang dikatalisis dengan enzim
lipoksigenase. Propagasi, merupakan reaksi
dimana radikal-radikal bebas diubah menjadi
radikal-radikal yang lain. Radikal lipid yang
terbentuk
pada
reaksi
inisiasi
dapat
mengalami reaksi propagasi melalui abstraksi
satu atom hidrogen atau melalui reaksi
oksigenasi
dengan
molekul
oksigen.
Terminasi,
reaksi
dimana
terjadi
penggabungan dua radikal dan membentuk
produk-produk yang stabil.
Mekanisme reaksinya dapat dijelaskan
sebagai berikut:
Inisiasi :
RH + OH•
R• + H 2O
propagasi :
R• + O2
ROO•

ROO• + RH
Terminasi :
ROO•+ROO•
ROO• + R•
R• + R•

ROOH + R•
ROOR + O2
ROOR
RR

Definisi Antioksidan
Antioksidan merupakan senyawa penting
yang berfungsi menangkap radikal bebas
dalam tubuh. Secara umum, antioksidan
didef inisikan sebagai senyawa yang dapat
menunda, memperlambat atau mencegah
proses oksidasi lipid (Schuler 1990). Dalam
arti khusus, antioksidan adalah zat yang dapat
menunda atau mencegah terjadinya reaksi
autooksidasi radikal bebas dalam oksidasi
lipid
(Kochhar
dan
Rossell
1990).
Antioksidan juga merupakan senyaw a yang
mempunyai struktur molekul yang dapat
memberikan elektronnya dengan cuma-cuma
kepada molekul radikal bebas tanpa terganggu
sama sekali dan dapat memutuskan reaksi
berantai dari radikal bebas (Kumalaningsih
2006). Selain dikonsumsi dalam bentuk
makanan antioksidan juga dimanfaatkan untuk
penggunaan di bagian luar tubuh, yaitu
sebagai
kosmetik
dalam
perawatan
kecantikan. Antioksidan telah banyak dikenal,
diproduksi, dan digunakan dalam berbagai
industri dan kesehatan (Hernani dan Rahardjo
2005).
Sebenarnya, antioksidan juga saling
berkompetisi dengan sesamanya sehingga
membutuhkan komposisi campuran yang
cukup tepat. Antioksidan seperti vitamin C, E
dan karotenoid (beta karoten, likopen, dan
lutein) memiliki peranan yang cukup penting
dalam membantu pencegahan kerusakan selsel akibat adanya radikal bebas tersebut
(Hernani dan Rahardjo 2005).
Fungsi Antioksidan
Fungsi utama antioksidan digunakan
sebagai upaya untuk memperkecil terjadinya
proses oksidasi dari lemak dan minyak,
memperkecil
proses
kerusakan
dalam
makanan, memperpanjang masa pemakaian
dalam industri makanan, dan meningkatkan
stabilitas lemak, serta mencegah hilangnya
kualitas sensori dan nutrisi. Dalam hal ini
lipid peroksidase sangatlah berperan penting
(Hernani dan Rahardjo 2005). Berdasarkan
fungsinya,
antioksidan
dikelompokkan
menjadi antioksidan primer ,antioksidan
sekunder,
antioksidan
tersier,
oxygen

3

scavanger, dan chelators (Kumalaningsih
2006 dan Gordon 1990).
Antioksidan primer (antioksidan pemecah
rantai), yaitu antioksidan yang dapat bereaksi
dengan radikal lipid lalu mengubahnya ke
bentuk yang lebih stabil. Antioksidan dapat
dikatakan sebagai antioksidan primer (AH)
jika dapat mendonorkan atom hidrogennya
secara cepat ke radikal lipida (RO*) dan
turunan antioksidan disebut (A*) lebih stabil
dibanding
antioksidan
lipid,
atau
mengubahnya ke bentuk yang lebih stabil.
Antioksidan primer yang sangat terkenal
adalah enzim superoksida dismutase (SOD)
dan glutation peroksidase (GPx). Enzim ini
dapat melindungi hancurnya sel-sel dalam
tubuh akibat serangat radikal bebas.
Antioksidan
sekunder
(antioksidan
pencegah),
didefinisikan sebagai suatu
senyawa yang dapat memperlambat laju reaksi
autooksidasi lipid. Antioksidan ini bekerja
dengan berbagai mekanisme , seperti
mengikat ion metal, menangkap oksigen,
memecah hidroperoksida ke bentuk-bentuk
non radikal menyerap radiasi UV atau
mendeaktifkan singlet oksigen. Contoh yang
populer dari antioksidan sekunder ini adalah
vitamin E, vitamin C, dan betakaroten.
Antioksidan tersier, merupakan s enyawa
yang memperbaiki sel-sel dan jaringan yang
rusak karena serangan radikal bebas. Biasanya
yang termasuk golongan ini adalah enzim
metionin sulfoksidan reduktase yang dapat
memperbaiki DNA dalam inti sel. Enzim
tersebut bermanfaat untuk perbaikan DNA
pada penderita kanker.
Oxygen scavanger , merupakan antioksidan
yang mengikat oksigen sehingga tidak
mendukung terjadinya reaksi oksidasi,
misalnya vitamin C.
Chelators, berfungsi mengikat logam yang
mampu
mengkatalisis
reaksi
oksidasi
misalnya asam sitrat dan asam amino.
Sumber Antioksidan
Antioksidan Sintetik.
Ada beberapa antioksidan sintetis yang
umum digunakan di seluruh dunia, yaitu
butylatedhydroxytoluene
(BHT),
butylatedhydroxyanysole (BHA), propilgalat,
tert-butyl
hydroxy
quinon
(TBHQ),
propylgallate (PG), nordihidroquairetic acid
(NDGA) dan a-tokoferol. BHT dan BHA
adalah yang paling banyak digunakan (Buck
1991). Namun, antioksidan tersebut bersifat
karsinogen terhadap sistem reproduksi, dapat
menyebabkan pembengkakan organ hati,

mempengaruhi aktivitas enzim dalam hati dan
metabolisme, bahkan dalam jangka waktu
lama
tidak
terjamin
keamanannya.
Berdasarkan uji toksisitas akut dan kronik
pada hewan percobaan, pemakaian zat
antioksidan maksimal yang diperbolehkan
dalam campuran makanan adalah 200 ppm
( Hernani dan Rahardjo 2005).
Antioksidan Alami.
Antioksidan alami dalam makanan dapat
berasal dari senyawa antioksidan yang sudah
ada dari satu atau dua komponen makanan,
senyawa antioksidan yang terbentuk dari
reaksi-reaksi selama proses pengolahan dan
senyawa antioksidan yang diisolasi dari
sumber alami dan ditambahkan ke dalam
makanan sebagai tambahan pangan (Pratt
1992). Menurut Pratt dan Hudson (1990),
kebanyakan senyawa antioksidan yang
diisolasi dari sumber alami berasal dari
tumbuhan dan dapat tersebar di berbagai
bagian tanaman seperti pada kayu, kulit kayu,
akar, daun, buah, bunga, biji, rimpang, dan
serbuk sari.
Rumput Mutiara
(Hedyotis corymbosa (L.) Lam.)
Sinonim dari Rumput M utiara (Hedyotis
corymbosa (L.) Lam. ) adalah Oldenlandia
corymbosa, Linn. Rumput mutiara juga
memiliki beberapa nama daerah, diantaranya
adalah rumput siku-siku, lidah ular, bunga
telor belungkas (Indonesia), daun mutiara,
rumput mutiara (Jakarta), katepan, urek -urek
polo (Jawa), Pengka (Makasar), pucuk pulung
(Kalimantan Barat), Shui xian cao (China)
(Sudewo 2004 dan IPTEKnet 2005).
Klasifikasi tumbuhan rumput mutiara adalah
sebagai berikut (DepKes BPPK 1999):
kingdom
Plantae,
subkingdom
Tracheobiont a , superdivisi Spermatophyta,
divisi Magnoliophyta, kelas Magnoliopsida,
subkelas Asteridae, ordo Rubiales, famili
Rubiaceae, genus Oldenlandia L, spesies
Oldenlandia corymbosa L. atau Hedyotis
corymbosa L.

Gambar

1

Tanaman Rumput Mutiara
(Hedyotis corymbosa (L.) Lam .).

4

Rumput mutiara merupakan rumput yang
tumbuh rindang berserak, berupa semak,
batang
tegak,
berbulu,
warna
hijau
kemerahan, agak lemah, tinggi 15 - 50 cm,
tumbuh subur pada tanah lembab di pinggir
jalan, pinggir selokan, batang bersegi dan
mempunyai banyak percabangan (Gambar 1).
Daun tunggal berhadapan bersilang, tangkai
daun pendek/hampir duduk, berbentuk lanset,
daun berwarna hijau, panjang daun 2 - 5 cm,
ujung runcing, tulang daun satu di tengah dan
ujung daun mempunyai rambut yang pendek.
Bunga tunggal ke luar dari ketiak daun,
bentuknya seperti payung berwarna putih
(corong), berupa bunga majemuk 2-5, terdapat
di ketiak daun, kelopak hijau kemerahan,
tangkai bunga (induk) keras seperti kawat,
panjangnya 5-10 mm. Buahnya kotak dan
warna cokelat sedangkan bijinya bulat dan
berwarna cokelat (IPTEKnet 2005).
Bagian yang digunakan sebagai obat
adalah seluruh bagian tumbuhan, baik dalam
keadaan segar maupun yang dikeringkan
(Kusuma FR, Zaky BM 2005). Sifat kimiawi
dan efek farmakologis dari rumput mutiara
adalah memiliki rasa manis, tawar, sedikit
pahit, lembut, netral, agak dingin atau sejuk
(Dalimartha 2005 dan Kusuma, Zaky 2005).
Menurut Wijaya
(2004) dan Soenanto ,
Kuncoro
(2005), kandungan kimia yang
terkandung dalam rumput mutiara adalah
hentriakontan, stigmasterol, asam ursolat,
asam oleanolat, Beta-sitosterol, sitosterol-D glukosida, p-asam
kumarat,
flavonoid
glikosida, baihuasheshecaosu (kemungkinan
analog kumarin), iridoid glikosida, alizarin,
krorogenin, dan ikatan antragalol.
Khasiat yang dimilikinya adalah sebagai
antiradang
(anti-inflamasi),
diuretik,
menyembuhkan bisul (anti karbunkular),
menghilangkan panas (demam), antitoksin,
mengaktifkan
sirkulasi
darah
dan
memperlancar sumbatan sperma (trubus 2005,
Kusuma, Zaky 2005), serta meningkatkan
daya fagositosis sel darah putih dan imunitas
hormonal (Dalimartha
2005) Dapat
mengobati berbagai penyakit seperti radang
kandung empedu, hepatitis, kanker (payudara,
limpa, usus besar, serviks, rektum, lambung,
nasofaring dan fibrosarkoma), tekanan darah
tinggi, tonsilis, bronchitis, gondongan,
pneumonia, radang usus buntu, radang
panggul, infeksi saluran kemih, bisul, dan
borok (IPTEKnet 2005, Permadi 2006), untuk
batu ginjal, radang ginjal dan infeksi ginjal
(Soenanto , Kuncoro 2005). Daunnya yang
segar juga dapat dimanfaatkan untuk
mengobati luka luar seperti memar, pyodermi,

gigitan ular, tersiram air panas, tulang patah,
terkilir, yaitu dengan cara melumatkan herba
segar lalu dibubuhkan pada tempat yang sakit
(IPTEKnet 2005).
Flavonoid
Senyawa antioksidan alami yang terdapat
pada tumbuhan umumnya adalah senyawa
fenolik atau polifenolik yang dapat berupa
golongan flavonoid, turunan asam sinamat,
kumarin, tokoferol dan asam-asam organik
polifungsional. Golongan flavonoid yang
memiliki aktivitas antioksidan meliputi
flavon, flavanon, flavonol, isoflavon, katekin,
dan kalkon. Sement ara turunan asam sinamat
meliputi asam kafeat, asam ferulat, asam
klorogenat dan lain-lain. Senyawa antioksidan
alami polifenolik ini adalah multifungsional
dan dapat bereaksi sebagai pereduksi,
penangkap radikal bebas, pengkelat logam,
dan peredam terbent uknya singlet oksigen
(Kumalaningsih 2006).
Flavonoid merupakan golongan fenolat
yang memiliki struktur dasar C6 -C3-C 6 dan
umumnya mengandung inti ?-benzopiron
(Gambar 2). Beberapa flavonoid dilaporkan
memiliki aktivitas biologis yang berbedabeda. Aktivitas biologis tersebut ada yang
berguna
sebagai
antiviral,
antifungal,
antiinflamatory, dan aktivitas yang bersifat
antitoksik (Santos et al 1985). Flavonoid di
alam terdapat dalam dua bentuk, yaitu
flavonoid aglikon (flavonoid tanpa gula
terikat) dan flavonoid glikosida (dengan gula
terikat). Flavonoid glikosida umumnya lebih
larut dalam air, sebaliknya flavonoid aglikon
lebih mudah larut dalam pelarut seperti eter
dan kloroform. Seperti senyawa fenolik
lainnya, flavonoid tidak stabil terhadap
pengaruh cahaya, oksidasi, dan perubahan
kimia,
sehingga
apabila
teroksidasi
strukturnya akan berubah dan keaktifannya
menurun bahkan hilang (Hernani, Rahardjo
2005).

Gambar 2 Rumus struktur flavonoid.
Vitamin E
Vitamin
E
(tokoferol)
merupakan
antioksidan utama yang tidak larut dalam air

5

tetapi larut dalam lemak atau minyak.
Terdapat delapan bentuk vitain E yaitu empat
tokoferol alfa, beta, gamma dan delta serta
empat tokotrienol. Dari delapan bentuk
tersebut, yang bermanfaat bagi aktivitas
biologis dalam tubuh adalah alfa yang
ditemukan dalam darah dan jaringan yang
berfungsi sebagai mengakhiri rentetan reaksi
radikal bebas (Gambar 3). Vitamin E banyak
sekali ditemukan dalam minyak tumbuhan
seperti minyak bunga matahari, minyak
zaitun, kacang-kacangan, biji gandum, dan
sayuran berwarna hijau. Pada hewan seperti
daging sapi, unggas dan ikan. Vitamin E dapat
menstimulasi sistem imun sehingga tubuh
dapat menghancurkan sel prekanker sebelum
berkembang menjadi ganas. Dapat juga
menghambat perkembangan kanker di mulut,
kulit, payudara, dan usus (Kumalaningsih
2006). Vitamin E ini digunakan sebagai
antioksidan pembanding untuk ekstrak tajuk
dan akar rumput mutiara.

Gambar 3 Struktur vitamin E.
Metode Pengukuran Antioksidan
Metode pengukuran antioksidan dapat
dilakukan
dengan
beberapa
metode,
diantaranya adalah metode bilangan peroksida
(metode FTC), metode asam tiobarbiturat
(TBA), metode tiosianat, metode Kreis,
metode bilangan anisidin dan metode oksigen
aktif (Nawar 1996).
Metode bilangan peroksida, peroksida
yang merupakan produk reaksi oksidasi
diukur
berdasarkan
kemampuannya
menghasilkan iodin dari kalium iodida. Nilai
peroksida dinyatakan dalam miliekivalen
oksigen per kilogram sampel. Metode asam
tiobarbiturat mengukur produk oksidasi asam
linoleat (malondialdehida) yang bereaksi
dengan asam tiobarbiturat yang menghasilkan
produk berwarna merah yang diukur pada ?
532 nm. Metode Kreis mengukur hasil
oksidasi lemak yang bereaksi dengan
floroglusinol. Metode tiosianat mengukur
peroksida
melalui
kompleks
warna
Fe[Fe(SCN)6 ]. Metode bilangan anisidin
mengukur senyawa aldehida hasil oksidasi
yang bereaksi dengan p–anisidin.Metode
oksigen aktif mengukur nilai peroksida yang

dihasilkan dari oksidasi asam lemak tak jenuh
dalam kondisi jenuh udara pada suhu 98oC.
Potensi antioksidan yang digunakan dalam
penelitian ini adalah metode TBA. Alasannya
adalah metode TBA merupakan cara yang
paling lama dan paling sering digunakan
untuk mengukur peroksidasi asam lemak pada
membran sel dan makanan, reaksi TBA
diketahui bersifat sensitif terhadap peroksida
lipid dan reaksi antara malodialdehid dengan
asam tiobarbiturat akan menghasilkan produk
yang sama dengan reaksi yang terjadi antara
lipid peroksida dengan asam tiobarbiturat.
Kekurangan metode ini adalah berbagai
senyawa seperti karbohidrat, protein, dan
aldehida dapat bereaksi dengan TBA.
Senyawa-senyawa yang bereaksi ini disebut
dengan istilah TBARS (Thiobarbituric Acid
Reactive Subtances) (Yagi 1994).
Sebelum dilakukan uji potensi antioksidan,
dilakukan dulu pengukuran hidroperoksida
yang merupakan produk primer dari oksidasi
asam linoleat dengan metode tiosianat.
Pengukuran hidrop eroksida dilakukan untuk
menentukan waktu inkubasi asam linoleat.
Menurut Kikuzaki dan Nakatani (1993)
pengukuran potensi antioksidan dengan
metode TBA sebaiknya dilakukan setelah
beberapa hari terjadinya puncak absorbansi
asam linoleat karena hidroperoksida akan
mengalami
dekomposisi
membentuk
malondialdehida.
Malondialdehida (MDA) adalah produk
akhir dari peroksidasi lipid, yaitu senyawa
aldehida berkarbon tiga yang reaktif (Gambar
4). MDA inilah yang nantinya diukur dengan
metode TBA, karena MDA dapat bereaksi
dengan TBA membentuk produk yang
berfluororesesnsi yang memiliki panjang
gelombang maksimum pada 532 nm (Gambar
5). Pengukuran MDA telah digunakan sebagai
indikator kerusakan oksidatif asam lemak
tidak jenuh pada sel hidup yang menyebabkan
perubahan struktural dan fungsi (Septiana
2000).

Gambar 4 Reaksi antara MDA dan TBA.

6

jam pada suhu 70-80 oC (Satria 2005).
Selanjutnya
ekstrak
dis aring
dengan
menggunakan kertas saring dan kain kassa.
Ekstrak yang diperoleh diuapkan dengan
menggunakan rotavapor pada suhu 50 oC
(sampai kental) kurang lebih selama 8 jam dan
dioven pada suhu 40oC sehingga diperoleh
ekstrak kasar (kering). Sebelum ekstrak kasar
digunakan untuk uji potensi antioksidan,
ekstrak tersebut disimpan dalam freezer
(Harbone 1987).

Gambar 5 Reaksi lipid peroksidasi dari MDA.

BAHAN DAN METODE
Bahan dan Alat
Bahan-bahan yang akan digunakan ialah tajuk
dan akar rumput mutiara, etanol 99.8%, etanol
70%, FeCl2 0.02 M dalam HCl 3.5%, stok
1,1,3,3 tetrametoksipropana (TMP) 6 M, TBA
1% (Thiobarbituric Acid) (b/v) dalam asam
asetat 50%, TCA (Trichloro Acetate) 20%,
asam linoleat 50 mM dalam etanol 99.8%, air
bebas ion, buffer fosfat 0.1 M pH 7, a tokoferol, asam asetat 50% NaOH 1N, asam
fosfat 10% dan ammonium tiosianat 30%.
Alat-alat yang digunakan adalah alatalat gelas, kertas saring, kain kassa, botol
gelap berulir, bulp, sudip, gegep, mikropipet,
vorteks, termometer, neraca, refluks, rotary
evaporator, oven, pHmeter, penangas air,
eksikator, spektrofotometer UVvis, freezer
dan sentrifus (r = 0.9cm ; RCF= 9.072 x g).
Metode Penelitian
Pengeringan S ampel
Sebanyak 1 Kg tajuk dan akar rumput mutiara
segar dibersihkan, lalu dikeringkan di bawah
sinar matahari langsung sebelum pukul
sepuluh kurang lebih selama 3 hari. Di atas
pukul sepuluh, tajuk dan akar dikering
anginkan (tidak langsung di bawah sinar
matahari, karena dapat merusak senyawa yang
terdapat dalam ut mbuhan) sampai diperoleh
bobot akhir 100 gram atau sepersepuluhnya
Ekstraksi
Mutiara

Tajuk

dan

Akar

Rumput

Sebanyak 20 gram simplisia tajuk dan akar
rumput mutiara masing-masing direfluks
dengan 200 ml pelarut etanol 70% selama 2-3

Analisis Kadar Air Tajuk dan Akar
Rumput M utiara (Harjadi 1990)
Penentuan kadar air dilakukan dengan cara
mengeringkan cawan porselin di dalam oven
yang bersuhu 105oC selama 30 menit. Lalu
didinginkan dalam eksikator dan ditimbang
sampai diperoleh bobot cawan yang konstan.
Lalu sebanyak 2 g sampel dimasukkan dalam
cawan, dikeringkan dalam oven 105oC selama
3 jam sampai diperoleh bobot yang konstan.
Kemudian didinginkan lagi dalam eksikator
dan ditimbang. Penentuan kadar air ini
dilakukan pada tumbuhan segar dan
simplisianya.
Kadar air = A-B x 100%
A
Keterangan:
A = bobot sampel
B = bobot bahan setelah dikeringkan
Analisis Hidroperoksida Asam Linoleat
Dengan Metode Tiosianat (Chen et al 1996)
Sebelum dilakukannya pengukuran potensi
antioksidan dari ekstrak tajuk dan akar rumput
mutiara,
dilakukan
pengukuran
hidroperoksida sebagai produk primer asam
linoleat yang teroksidasi dengan metode
tiosianat. Sebanyak 2 ml buffer fosfat 0.1 M
pH 7, 2 ml asam linoleat 50 mM dalam etanol
99.8%, dan 1 ml air bebas ion diletakkan
dalam botol gelap berulir, kemudian
campuran diinkubasi pada suhu 40oC. Lama
inkubasi yaitu sampai tercapai absorbansi
maksimum.
Selanjutnya
analisis
hidroperoksida dilakukan sebagai berikut. Ke
dalam 50 µL campuran yang telah diinkubasi
ditambahkan 6 ml etanol 75%, 50 µL
ammonium tiosianat 30% dan 50 µL FeCl2
0.02 m dalam HCl 3.5%. Setelah didiamkan
selama 3 menit, absorbansi diukur pada
panjang gelombang 492 nm. Analisis
hidroperoksida diukur setiap hari sampai
tercapai absorbansi maksimum.

7

Analisis Potensi Antioksidan Tajuk dan
Akar Rumput Mutiara Dengan Metode
TBA (Kikuzaki 1993)
Analisis potensi antioksidan dari ekstrak tajuk
dan akar rumput mutiara dilakukan dengan
berbagai seri konsentrasi larutan uji yaitu 50,
100, 200 dan 500 ppm. Uji potensi
antioksidan dilakukan dengan metode TBA.
Nilai
aktivitas
antioksidan
ditentukan
berdasarkan kemampuan ekstrak menahan
laju pembentukan MDA. Oleh karena itu
aktivitasnya dihitung sebagai % inhibisi
dengan rumus:
%inhibisi = {(A -B)/A} x 100%
A adalah MDA kontrol negatif, B adalah
MDA tiap perlakuan.
Sampel terdiri atas 2 ml buffer fosfat 0.1 M
pH 7, 2 ml asam linoleat 50 mM dalam etanol
99.8% dan 1 ml larutan uji. Sebagai kontrol
negatif dibuat campuran yang sama tetapi 1
ml larutan uji diganti dengan 1 ml air bebas
ion. Sedangkan sebagai pembanding (kontrol
positif) dibuat campuran yang terdiri atas 2 m l
buffer fosfat 0.1 M pH 7, 2 ml asam linoleat
50 mM dalam etanol 99.8% dan 1 ml a tokoferol. Tajuk dan akar diberi perlakuan
yang sama.Masing-masing perlakuan di atas
dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1 Enam perlakuan pada uji potensi
antioksidan rumput mutiara
Komposisi
Buffer
fosfat 1.0
M pH 7
Asam
linoleat 50
mM dalam
etanol
99.8%
Larutan uji
50 ppm
Larutan uji
100 ppm
Larutan uji
200 ppm
Larutan uji
500 ppm
Air bebas
ion
a-tokoferol
200 ppm
Keterangan:
Perlakuan I
Perlakuan II
Perlakuan III
Perlakuan IV
Perlakuan V
Perlakuan VI

I

II

2

2

Perlakuan (mL)
III IV V
2

2

VI

2

Semua
campuran
reaksi
tersebut
diinkubasi dalam penangas air yang bersuhu
40 oC dengan lamanya waktu inkubasi
disesuaikan
dengan
hasil
pengukuran
hidroperoksida dari asam linoleat pada metode
tiosianat. Campuran reaksi itu diuji potensi
antioksidannya setelah 1 atau beberapa hari
dari puncak absorbansi asam linoleat dengan
menggunakan metode TBA. Masing-masing
campuran reaksi diambil 1 ml, kemudian
ditambahkan 2 ml TCA 20%, dan 2 ml larutan
TBA 1% (b/v) dalam pelarut asam asetat 50%.
Lalu campuran reaksi tersebut ditempatkan
pada penangas air bersuhu 100 oC selama 10
menit. Setelah dingin disentrifugasi pada 3000
rpm selama 15 menit, selanjutnya diukur
absorbansinya dengan spektrofotometer pada
panjang gelombang 532 nm.
Penentuan kurva standar dibuat dari
larutan pereaksi 1,1,3,3 tetra metoksi propana
(TMP). Larutan stok pereaksi TMP 6 M
diencerkan menjadi 0.15, 0.3, 0.6, 0.75, 1.5,
dan 3.0 µM. Masing-masing konsentrasi
dipipet
sebanyak
1
ml,
selanjutnya
ditambahkan 2 ml TCA 20% dan 2 ml TBA
1% dalam pelarut asetat 50%, selanjutnya
semua tabung diinkubasi pada suhu 100 oC
selama 10 menit dan didinginkan dalam suhu
kamar. Setelah dingin dilakukan sentrifugasi
pada kecepatan 3000 rpm selama 15 menit,
kemudian absorbansinya diukur menggunakan
spektrofotometer pada panjang gelombang
532 nm.

2

Analisis Data
2

2

2

2

2

2

1
1
1
1
1

Konsentrasi
MDA
sebagai
respon
langsung tiap perlakuan diuji dengan analisis
varian (ANOVA) untuk melihat adanya
perbedaan respon perlakuan terhadap respon
tanpa perlakuan (kontrol negatif). Rerata
konsentrasi MDA yang berbeda nyata
terhadap kontrol negatif menunjukkan adanya
potensi sebagai antioksidan. ANOVA
dilanjutkan dengan uji Duncan (a = 0.05)
untuk melihat perbedaan respon tiap
perlakuan. Analisis data dilakukan dengan
progam SPSS for Windows (Mattjik 2002).

1
:
:
:
:
:
:

sampel 50 ppm
sampel 100 ppm
sampel 200 ppm
sampel 500 ppm
kontrol negatif
kontrol positif (vit.E 200
ppm)

HASIL DAN PEMBAHASAN
Kadar Air
Tajuk dan akar rumput mutiara dihitung
dulu kadar airnya sebelum digunakan untuk
percobaan. Penentuan kadar air ini bertujuan

8

untuk mengetahui kandungan zat dalam
tumbuhan sebagai persentase bahan kering.
Selain itu penentuan kadar air juga bertujuan
untuk mengetahui ketahanan suatu bahan
dalam penyimpanannya (Harjadi 1993). Kadar
air yang bagus suatu bahan adalah kurang dari
10%. Pada kadar ini suatu bahan dapat
disimpan dalam jangka waktu yang sangat
lama karena kemungkinan bahan itu rusak
oleh jamur pada saat penyimpanan akan kecil.
Umumnya, penentuan kadar air di lakukan
dengan mengeringkan bahan pada suhu 105110oC selama 3 jam sampai diperoleh berat
yang konstan (Winarno 1992). Selisih berat
bahan sebelum dan sesudah pengeringan
adalah banyaknya air yang telah diuapkan
atau dihilangkan. Pada penelitian ini diperoleh
kadar air untuk tajuk dan akar segar berturut turut sebesar 86.23% dan 86.62% (Tabel 2).
Jadi, jumlah air yang telah diuapkan dari tajuk
dan akar segar berturut -turut sebesar 17.77%
dan 13.38%. Kemudian, dari simplisia tajuk
dan akar diperoleh kadar air akhir berturut turut sebesar 18.55% dan 12.25% atau jumlah
air yang telah berhasil diuapkan dari simplisia
tajuk dan akar sebesar 81.45% dan 87.75% .
Dari percobaan ternyata jumlah air dari
simplisia lebih banyak yang teruapkan
dibandingkan jumlah air pada tajuk dan akar
segarnya. Hasil ini menunjukkan bahwa
simplisia tajuk dan akar dapat disimpan dalam
jangka waktu yang lebih lama dibandingkan
akar dan tajuk segarnya.
Tabel 2 Kadar air rata-rata rumput mutiara
Kadar air
perlakuan Bagian tanaman
(%)
tajuk
86.23
segar
akar
86.62
tajuk
18.55
simp lisia
akar
12.25
Rendemen Ekstrak Rumput Mutiara
Senyawa bioaktif yang diperkirakan
berperan sebagai antioksidan dari rumput
mutiara adalah flavonoid. Flavonoid adalah
senyawa yang polar, maka umumnya
flavonoid larut dalam pelarut polar sep erti
etanol,
metanol,
butanol,
aseton,
dimetilsulfoksida, dan lain-lain. Dalam
percobaan simplisia tajuk dan akar rumput
mutiara diekstraksi dengan menggunakan
pelarut etanol 70%.
Pemilihan etanol 70% sebagai pelarut
karena etanol 70% sering digunakan untuk
ekstraksi dan menghasilkan senyawa bahan
aktif yang optimal dan kemungkinan jumlah

pengotor
yang
ikut
dalam
larutan
pengekstraksi sangat kecil. Ekstraksi simplisia
tajuk dan akar dilakukan dengan metode
refluks. Sampel dan larutannya (etanol 70%)
dipanaskan pada suhu 70 -80oC selama 2
sampai 3 jam. Uap yang dihasilkan akan
melewati pipa kondensor yang panjang dan
akan jatuh kembali ke dalam larutan sehingga
jumlah uap yang keluar dapat diminimumkan.
Metode ini dipilih karena pada umumnya
masyarakat secara tradisional mengolah
rumput mutiara ini dengan cara merebusnya
terlebih dahulu (Kusuma, Zaky 2005). Hasil
ekstraksi
menunjukkan
bahwa
tajuk
menghasilkan rendemen yang lebih besar
dibandingkan akar, yaitu sebesar 19.51%
sedangkan rendemen akar sebesar 16.06%.
Sehingga dapat dikatakan bahwa tajuk lebih
banyak mengandung senyawa bioaktif
dibanding akar. Ekstrak yang dihasilkan
berwarna hitam dengan aroma yang khas.
Analisis Hidroperoksida Asam Linoleat
Hidroperoksida adalah salah satu produk
primer hasil oksidasi asam linoleat. Pada
percobaan, campuran asam linoleat, buffer
fosfat dan air bebas ion dalam botol gelap
berulir ditempatkan dalam penangas air 40 oC
selama 8 hari. Asam linoleat akan dioksidasi
oleh oksigen sehingga Fe2+ akan teroksidasi
menjadi Fe3+. Reaksi antara Fe3+ hasil oksidasi
FeCl2+ oleh hidroperoksida dengan SCN- akan
menghasilkan
kompleks
Fe[Fe(SCN)6
berwarna merah. Absorbansi dari kompleks
yang berwarna merah diukur dengan
menggunakan spektrofotometer UVvis tiap 24
jam pada panjang gelombang 492 nm (hasil
pencarian panjang gelombang maksimum)
untuk melihat waktu saat hidroperoksida
maksimum yang dihasilkan. Pada tahap awal
(inisiasi) oksidasi asam linoleat akan
membentuk hidroperoksida (Gambar 6),
selanjutnya terjadi tahap propagasi, yaitu
kadar hidroperoksida akan terus meningkat
sampai terbentuk suatu keadaan maksimum,
kemudian
pada
tahap
terminasi
hidroperoksida
didekomposisi
menjadi
senyawa molekuler yang lebih kecil seperti
malondialdehida.
Beberapa faktor yang mempengaruhi
autooksidasi asam linoleat adalah panas,
cahaya, pH, oksigen, ion logam dan radikal
lipid itu sendiri. Pada percobaan, inkubasi
sampel
dikondisikan
sedemikian
rupa
sehingga hanya faktor panas, oksigen, pH dan
radikal lipid saja yang mempengaruhi oksidasi
asam linoleat.

9

Analisis MDA dan Potensi Antioksidan
Rumput Mutiara

Gambar

6
Reaksi
Pembentukan
hidroperoksida dari asam lemak
tidak jenuh.

Hasil percobaan menunjukkan bahwa
hidroperoksida dari hasil oksidasi asam
linoleat terbentuk maksimum pada hari ke-5,
yaitu pada tahap propagasi (Gambar 7). Maka
setelah hari kelima ini (pada tahap terminasi)
malondialdehida baru terbentuk bersamaan
dengan senyawa-senyawa dengan rantai C
lebih pendek lainnya seperti asam-asam
lemak, aldehid dan keton yang dapat
menimbulkan bau tengik (Winarno 1992).
Berdasarkan hasil ini, maka analisis potensi
antioksidan dengan metode TBA dilakukan
pada hari ke-7, yaitu dua hari setelah
hidroperoksida terbentuk maksimum. Hal ini
diasumsikan bahwa setelah dua hari, semua
hidroperoksida telah terdekompisisi menjadi
malondialdehida
(jumlah
MDA
yang
terbentuk jauh lebih banyak dibanding jumlah
pembentukan hidroperoksida pada saat yang
bersamaan).

serapan 492 nm

1.5
1.0
0.5
0.0
0

1

2

3

4

5

6

7

8

lama inkubasi (hari)

Gambar

7 Nilai absorbansi hidroperoksida
dari asam linoleat.

9

Penambahan ekstrak tajuk dan akar
rumput mutiara pada campuran yang berisis
asam linoleat dan buffer fosfat dilakukan
seawal mungkin (dilakukan pada hari ke-0)
untuk menghasilkan efek antioksidasi yang
optimum. Antioksidan akan benar -banar
bekerja efektif jika ditambahkan seawal
mungkin selama periode induksinya, yaitu
pada suasana periode awal oksidasi asam
linoleat terjadi, dalam hal ini oksidasi masih
berjalan secara lambat dengan kecepatan yang
seragam.
Malondialdehida yang terbentuk pada
tahap terminasi setelah diinkubasi selama 7
hari diukur sebagai TBARS (Thiobarbituric
Acid Reactive Subtances ). MDA akan
bereaksi dengan TBA membentuk kompleks
MDA-TBA (gambar 5) dan menghasilkan
warna yang merah muda dengan serapan
maksimum pada panjang gelombang 532 nm.
Pada pengukuran ini pengaruh senyawasenyawa lain selain MDA dapat diabaikan
karena TBA hanya bereaksi spesifik dengan
MDA. Sebagai kurva standar, digunakan
larutan 1.1.3.3-Tetra metoksi propana (TMP)
pada berbagai kisaran konsentrasi.
Vitamin E (alfa tokoferol) digunakan
sebagai pembanding pada percobaan ini,
karena vitamin E banyak digunakan sebagai
antioksidan alami pada makanan. Mengingat
batas
maksimum
antioksidan
yang
diperbolehkan dalam makanan adalah 200
ppm, maka konsentrasi vitamin E yang
digunakan dalam percobaan ini juga sebesar
200 ppm. Sedangkan kontrol negatif pada
perlakuan ini adalah air bebas ion.
Selama waktu inkubasi, reaksi oksidasi
asam linoleat oleh oksigen dapat dihambat
dengan adanya ekstrak tajuk dan akar rumput
mutiara di dalam campuran yang berisi asam
linoleat . Ada empat konsentrasi ekstrak yang
digunakan yaitu 50, 100, 200, dan 500 ppm.
Pemilihan
keempat
konsentrasi
ini
berdasarkan
pada
batas
maksimum
antioksidan dalam makanan yaitu 200 ppm.
Jadi ada konsentrasi di bawah 200 ppm dan
ada juga konsentrasi di atas 200 ppm.
Semakin tinggi konsentrasi ekstrak maka laju
pembentukan MDA dapat semakin terhambat.
Pada tahap inkubasi ini jumlah hidroperoksida
yang terbentuk sebanding dengan jumlah
MDA yang dihasilkan. Nilai pengukuran
absorbansi pada panjang gelombang 532 nm
berbanding lurus dengan jumlah MDA yang
terbentuk dan berbanding terbalik dengan

10

potensi antioksidan yang dihasilkan dari
masing-masing ekstrak.
Dari hasil percobaan diperoleh bahwa
semakin tinggi konsentrasi ekstrak, maka
kadar MDAnya semakin menurun. Hal ini
ditandai dengan semakin pudarnya warna
merah yang terbentuk dari masing-masing
ekstrak. Pada Gambar 8 dapat dilihat bahwa
secara umum dari penelitian ini ternyata
ekstrak tajuk memiliki daya hambat yang
lebih besar dalam menahan laju pembentukan
MDA dari asam linoleat dibandingkan dengan
ekstrak akar rumput mutiara.. Ekstrak tajuk
500 ppm memiliki kadar MDA sebesar 8.632
µM sedangkan akar pada konsentrasi 500 ppm
sebesar 11.046 µM. Begitu juga pada 3
konsentrasi lainnya, ekstrak tajuk lebih
mampu menahan laju pembentukan MDA
dibandingkan ekstrak akar.
Konsent rasi MDA dari tiap -tiap perlakuan
dapat dilihat pada Gambar 8. Kontrol negatif
ternyata menghasilkan konsentrasi MDA yang
sangat tinggi sekali (30.517µM), ini terjadi
karena pada kontrol negatif tidak ada senyawa
yang
berperan
untuk
menahan
laju
pembentukan MDA. Sedangkan kontrol
positif (vitamin E) memiliki kadar MDA
terendah dibandingkan perlakuan lainnya
(6.834µM). Dari gambar tersebut dapat
dikatakan bahwa kontrol positif memang
berperan lebih baik dalam menahan
terbentuknya MDA dibandingkan ekstrak
tajuk dan akar rumput mutiara yang
digunakan. Hal ini menunjukkan bahwa
adanya perlakuan dapat menghambat proses
oksidasi sehingga mengurangi konsentrasi
MDA yang terbentuk.
kadar MDA
(µM) 35

Aktivitas suatu bahan sebagai antioksidan
sangat dipengaruhi oleh konsentrasi dan
ketahanannya terhadap berbagai faktor fisik
dan kimia. Antioksidan yang ideal memiliki
aktivitas yang baik pada konsentrasi yang
rendah dan memiliki daya tahan yang baik
pula terhadap perubahan kondisi seperti suhu,
pH, cahaya dan oksigen (Coppen 1983).
Menurut Gordon 1990, ekstrak suatu bahan
yang berperan sebagai antioksidan dapat
berubah sifatnya menjadi prooksidan jika
berada dalam konsent rasi yang terlalu besar.
Aktivitas penghambatan (% inhibisi) terhadap
pembentukan MDA dari tiap perlakuan juga
dapat dihitung dari
kadar MDA yang
diperoleh (Gambar 9). Persentase inhibisi ini
menggambarkan seberapa besarkah potensi
dari masing-masing ekstrak dengan berbagai
tingkatan konsentrasi dalam berperan sebagai
antioksidan.
Persentase inhibisi (penghambatan) dari
gambar dapat dilihat bahwa semakin besar
konsentrasi ekstrak maka semakin besar pula
aktivitas penghambatannya terhadap proses
oksidasi asam linoleat. Dari gambar juga
dapat dilihat bahwa kontrol negatif sama
sekali tidak memiliki aktivitas penghambatan
(0%), sedangkan kontrol positif dapat
menghambat terjadinya proses ok sidasi yang
lebih baik dari ekstrak tajuk dan akar rumput
mutiara. Kontrol positif memiliki aktivitas
penghambatan sebesar 77.61% Persentase
inhibisi meningkat secara kontinu seiring
dengan peningkatan konsentrasi ekstrak.
Aktivitas inhibisi (penghambatan) ekstrak
tajuk pada konsentrasi 50, 100, 200 dan 500
ppm masing-masing adalah 45.21%, 54.96%,
61.78%, dan 71.74%. Selanjutnya untuk

% inhibisi
80

30

70

25

60

20

50

15

40

10

30

5

20
10

0
50

100

200

500

k-

k+

perlakuan (ppm)
Kontrol negatif
Kontrol positif

Akar
Tajuk

Gambar 8 Kadar MDA (µM) dari ekstrak
tajuk dan akar
pada beberapa
tingkatan konsentrasi (ppm).

0
50

100

200

500

k-

k+

perlakuan (ppm)
Kontrol negatif
Kontrol positif

Akar
Tajuk

Gambar 9 Persentase ekstrak tajuk dan akar
rumput mutiara dalam menahan
laju oksidasi.

11

ekstrak akar berturut-turut dari konsentrasi
yang rendah adalah 39.56%, 52.88%, 58.48%,
dan 63.81%. Dari hasil yang diperoleh
tersebut secara umum ekstrak tajuk memiliki
kemampuan menghambat pembentukan MDA
yang lebih baik dibandingkan dengan ekstrak
akar. Pada gambar dan hasil yang diperoleh
terlihat bahwa ekstrak tajuk 500 ppm
memiliki % inhibisi yang mendekati %
inhibisi dari kontrol positif.
Hasil analisis statistik dengan uji Duncan
(a=0.05) pada Tabel 3 diperoleh bahwa
potensi antioksidasi dari ekstrak tajuk 500
ppm, tajuk 200 ppm dan akar 500 ppm tidak
berbeda nyata dengan kontrol positif (lihat
variabel a pada tabel). Berdasarkan hasil
tersebut berarti ekstrak tajuk 500 ppm, 200
ppm, dan akar 500 ppm memiliki aktivitas
antioksidasi yang sama besar dengan vitamin
E. Dan memiliki kemampuan
sebagai
ant ioksidasi yang lebih baik dibanding ekstrak
tajuk dan akar pada konsentrasi yang lebih
rendah lagi.
Ekstrak tajuk 500 dan 200 ppm juga tidak
berbeda nyata dengan ekstrak akar 500 dan
200 ppm (variabel b) . Ekstrak tajuk 500 ppm
memiliki nilai yang berbeda nyata dengan
ekstrak tajuk dan akar 100 dan 50 ppm.
Sedangkan ekstrak akar 500 ppm berbeda
nyata dengan