Tabung volumetric 10 mL Pyrex 4.
Pengukuran kadar nitric oxide Microplate Reader
Labtech Well plate Merkc
Incubator Memmert
5. Pengukuran aktivitas glutation
peroksidase Spektofotometer Zenix
Kuvet UniversalLAB
b. Bahan
Tabel 3. Bahan penelitian No
Tahapan Kegiatan Bahan
1. Pengambilan sampel darah
Kapas alkohol steril Oneswabs Plaster Plesterin
2. Pengukuran kadar Pb
Triton X-100 TX Merkc Ammonium Pyrrolidine Dithiocarbamate Merkc
Methyl Isobutyl Ketone MIBK Merkc Air deionisasi Teknis
Standard Conditions Merkc
3. Pengukuran kadar nitric oxide Kit Qayee-Bio
4. Pengukuran aktivitas
glutation peroksidase Kit Randox
F. Prosedur Penelitian
1. Pengambilan Sampel Darah
Pengambilan sampel darah Operator SPBU dilakukan di SPBU Kota Semarang yang berlokasi di Jl. Woltermonginsidi Bangetayu, Jl. Kaligawe
Sidomuncul, COCO Jl. Brigjen Sudiarto Penggaron, Jl. Brigjen Sudiarto Pedurungan dan Jl. Brigjen Sudiarto Sendangguwo. Sampel darah diambil
sebanyak 5 ml dari vena median cubital dengan menggunakan spuit 5 cc dan
dipindah ke dalam 4 tube, 3 tube sebagai whole blood untuk pengukuran kadar Pb dan 1 tube digunakan untuk pengukuran kadar nitric oxide dan glutation
peroksidase .
2. Pengukuran Pb
Metode yang digunakan dalam pengukuran timbal adalah metode Perkin Elmer 1982. Sampel darah whole blood sebanyak 3 mL dimasukkan ke dalam
10 mL labu volumetrik, kemudian ditambah 0,5 mL Titron X-100 TX 10 dan 0,5 mL Ammonium Pyrrolidine Dithiocarbamate APDC 2. Mengaduk larutan
yang telah dicampur. Menambah 0,75 mL MIBK water saturated, kocok selama 5 menit dan kemudian ditambah 0,5 mL air dionisasi. Sampel darah di
sentrifus dengan kecepatan 700 g selama 10 menit. Larutan standar yang digunakan disebut “Standard Conditions” untuk timbal, sedangkan blanko yang
digunakan yaitu air deionisasi. Preparasi yang digunakan untuk membuat larutan standar dan larutan blanko sama dengan preparasi yang digunakan untuk sampel
darah, kecuali untuk larutan standar dilakukan sentrifus selama 20 menit. Kandungan timbal dalam darah dibaca menggunakan Atomic Absorbtion
Spectrophotometry AAS dengan panjang gelombang 283,3 nm.
3. Pemisahan Serum Darah
Pembuatan serum dilakukan di Laboratorium Biologi Molekular Jurusan Biologi Universitas Negeri Semarang. Sampel darah disentrifuge dengan
kecepatan 8000 rpm selama 10 menit, supernatan diambil dan dipindah dalam tube yang baru kemudian disimpan dalam frezzer -4 °C.
4. Pengukuran Kadar Nitric Oxide
Pengukuran kadar nitric oxide dilaksanakan di Laboratotium PAU Pangan dan Gizi Universitas Gadjah Mada. Alat yang digunakan microplate reader.
Sampel, standar, dan HRP-Conjugate reagent ditambahkan dalam well plate, kemudian diinkubasi pada suhu 37
selama 60 menit. Well plate dicuci sebanyak lima kali menggunakan wash solution. Chromogen solution A dan
chromogen solution B ditambahkan dalam well plate, kemudian diinkubasi
selama 10 menit pada suhu 37 . Stop solution ditambahkan dan diukur
menggunakan microplate reader dengan panjang gelombang 450 nm.
5. Pengukuran Aktivitas Glutation Peroksidase
