acid from Giberella fujikuroi}, alkohol 70 , akuades, Benzine Amino Purine BAP, Indole-3-Acetic Acid IAA, sukrosa, Plant Preservative
Mixture PPM, Kalium Hidroksida KOH, Asam Chlorida HCl, Formalin Aseto Alkohol FAA, dan bahan kimia medium VW Vacin
Went padat yang komposisinya disajikan dalam Lampiran 1.
C. Rancangan Percobaan
Rancangan Penelitian ini disusun dengan pola dasar Rancangan Acak Lengkap RAL dengan satu faktor yaitu konsentrasi asam fusarat yang terdiri atas 5
taraf yaitu: 0 ppm, 10 ppm, 20 ppm, 30 ppm, dan 40 ppm. Masing-masing konsentrasi dilakukan 5 kali ulangan dan setiap ulangan terdiri dari 3 eksplan
S. plicata dalam setiap botol kultur. Tabel 1. Tata letak satuan percobaan
K
5
U
1
K
4
U
5
K
3
U
4
K
1
U
2
K
2
U
4
K
4
U
1
K
5
U
2
K
2
U
3
K
1
U
3
K
1
U
4
K
3
U
1
K
4
U
2
K
5
U
3
K
3
U
5
K
2
U
5
K
2
U
1
K
3
U
2
K
4
U
3
K
5
U
4
K
1
U
5
K
1
U
1
K
2
U
2
K
3
U
3
K
4
U
4
K
5
U
5
Keterangan : K
1
: Konsentrasi 0 ppm kontrol K
2
: Konsentrasi 10 ppm K
3
: Konsentrasi 20 ppm K
4
: Konsentrasi 30 ppm K
5
: Konsentrasi 40ppm U
1
-U
5
: Ulangan 1 – ulangan 5
D.
Bagan Alir Penelitian
Penelitian terdiri atas beberapa tahap, yaitu: 1 Penanaman planlet S. plicata
umur 2 bulan ke dalam medium VW yang sudah ditambahkan AF sesuai konsentrasi; 2 Penentuan kisaran konsentrasi asam fusarat toleran untuk
seleksi planlet S. plicata secara in vitro; 3 analisis karakter ekspresi yang spesifik pada planlet S. plicata meliputi persentase jumlah planlet yang hidup,
visualisasi planlet, analisis kandungan klorofil a, klorofil b, dan klorofil total, serta analisis indeks stomata. Tahap penelitian ini disajikan dalam bentuk
bagan alir seperti tercantum pada Gambar 3.
Gambar 5. Bagan alir penelitian Karakterisasi planlet:
analisis kandungan klorofil a, b, dan total, indeks
stomata, dan enzim peroksidase
Munculnya karakter spesifik planlet
S. plicata: kandungan klorofil a,
b, dan total, indeks stomata, dan enzim
peroksidase Terdapat sifat
spesifik pada planlet S. plicata:
peningkatan kandungan klorofil a,
b, total, indeks stomata, dan enzim
peroksidase
Terbentuknya ketahanan pada planlet
S. plicata
hasil pengimbasan AF
Seleksi planlet S. plicata dengan AF pada berbagai
konsentrasi Planlet S. plicata yang
tahan tidak menunjukkan layu dan
tetap tumbuh Penanaman planlet S.
plicata dalam medium VW yang sudah diberi AF
Terjadinya pertumbuhan tunas,
daun dan akar
Luaran
Planlet S. plicata berjumlah banyak
untuk stok pengujian selanjutnya
Indikator Perlakuan
E. Pelaksanaan Penelitian
Pelaksanaan penelitian meliputi beberapa tahap sebagai berikut. 1.
Persiapan medium tanam
Medium yang digunakan dalam penelitian ini adalah Vacint Went VW padat. Pembuatan medium tanam VW sebanyak 1 liter adalah dengan cara
memipet sejumlah larutan stok Lampiran 1, kemudian dimasukkan ke dalam labu takar 1 liter. Akuades ditambahkan sampai tanda 1 liter dan
pH diatur sampai 5,5. Untuk mendapatkan pH 5,5 dilakukan penambahan KOH 1 N atau HCl 1 N. Larutan tersebut kemudian dipindahkan ke dalam
wadah yang lebih besar kemudian ditambahkan agar-agar sebanyak 7 gl, sukrosa 30 gl, dan PPM 0,5 mll. Larutan medium dipanaskan untuk
melarutkan agar-agar sambil diaduk sampai mendidih. Penambahan ZPT dilakukan setelah larutan medium diangkat, kemudian dituangkan ke dalam
botol kultur sebanyak 20 mlbotol. Sterilisasi medium dengan menggunakan autoklaf dengan tekanan 17,5 psi, 121
C selama 15 menit.
2. Persiapan medium seleksi
Medium Vacint Went VW ditambah asam fusarat AF dengan konsentrasi 0 ppm kontrol, 10 ppm, 20 ppm, 30 ppm, dan 40 ppm. Asam
fusarat sebelum digunakan, dilarutkan dengan akuades pada konsentrasi tertentu, kemudian disaring menggunakan syringe filter yang mempunyai
diameter 0,45 µm sebanyak 2 kali, dilanjutkan filter berdiameter 0,22 µm satu kali. Penyaringan dilakukan dalam ruang steril didalam LAF Cabinet.
Selanjutnya AF ditambahkan ke dalam medium VW. Sebelum digunakan,
