Viabilitas Embrio Mencit (Mus musculus albinus) setelah Kriopreservasi dengan Vitrifikasi Ganda pada Tahap Perkembangan Zigot dan Dilanjutkan pada Tahap Blastosis.
VIABILITAS EMBRIO MENCIT (Mus musculus albinus)
SETELAH KRIOPRESERVASI DENGAN VITRIFIKASI
GANDA PADA TAHAP PERKEMBANGAN ZIGOT DAN
DILANJUTKAN PADA TAHAP BLASTOSIS
CANDRANI KHOIRINAYA
FAKULTAS KEDOKTERAN HEWAN
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
BOGOR
2011
PERNYATAAN MENGENAI SKRIPSI DAN SUMBER
INFORMASI
Dengan ini saya menyatakan bahwa skripsi saya yang berjudul “Viabilitas
Embrio Mencit (Mus musculus albinus) setelah Kriopreservasi dengan Vitrifikasi
Ganda pada Tahap Perkembangan Zigot dan Dilanjutkan pada Tahap Blastosis”
adalah karya saya dengan arahan pembimbing dan belum diajukan dalam
bentuk apapun kepada perguruan tinggi manapun. Sumber informasi yang
berasal atau dikutip dari karya yang diterbitkan maupun tidak diterbitkan dari
penulis lain telah disebutkan dalam teks dan dicantumkan dalam Daftar Pustaka
di bagian akhir skripsi ini.
Bogor, Mei 2011
Candrani Khoirinaya
NIM B04063491
ABSTRAK
CANDRANI KHOIRINAYA. Viabilitas Embrio Mencit (Mus musculus albinus)
setelah Kriopreservasi dengan Vitrifikasi Ganda pada Tahap Perkembangan
Zigot dan Dilanjutkan pada Tahap Blastosis. Dibimbing oleh ARIEF BOEDIONO
dan WAHONO ESTHI PRASETYANINGTYAS.
Perkembangan teknologi pembekuan embrio dengan metode vitrifikasi
memungkinkan penyimpanan sel sebagai bank genetik atau sel yang dapat
dimanfaatkan di masa mendatang. Penelitian ini bertujuan mengetahui viabilitas
embrio mencit setelah vitrifikasi ganda tahap zigot dan dilanjutkan pada tahap
blastosis. Embrio mencit galur DDY tahap zigot diperoleh melalui superovulasi
dengan menyuntikkan hormon pregnant mare serum gonadotrophin (PMSG)
yang diikuti dengan hormon human chorionic gonadotrophin (hCG) 48
setelahnya. Sebelum zigot disimpan dalam nitrogen cair, zigot divitrifikasi dengan
memapar dalam medium vitrifikasi yang terdiri atas etilen glikol 15% +
dimetilsulfoksida 15% + sukrosa 0.5M di dalam larutan dulbecco’s phosphate
buffered saline (DPBS) yang disuplementasi fetal bovine serum (FBS) 20% dan
diteteskan pada ujung straw 0.25 ml yang telah disayat (wadah hemi-straw).
Proses penghangatan dilakukan pada medium rehidrasi yang terdiri atas larutan
sukrosa bertingkat yaitu 0.5M, 0.25M, 0.1M di dalam larutan DPBS yang
disuplementasi FBS 20%. Hasil penelitian menunjukkan bahwa kelangsungan
hidup setelah vitrifikasi ganda pada tahap zigot dan dilanjutkan pada tahap
blastosis berturut-turut mencapai 96.81% dan 92.50%, setelah 2 jam kultur in
vitro hasil ini tidak berbeda (P>0.05) dibandingkan kelompok kontrol.
Perkembangan embrio tahap blastosis hatched setelah vitrifikasi tunggal pada
tahap blastosis mencapai 80%, sedangkan setelah vitrifikasi ganda mencapai
66.22%, tidak berbeda (P>0.05) dibandingkan kelompok kontrol (79.62%). Hasil
penelitian ini menunjukkan bahwa embrio mencit dapat dibekukan dengan
vitrifikasi ganda pada tahap zigot dan dilanjutkan pada tahap blastosis.
Kata Kunci: blastosis, hemi-straw, mencit, vitrifikasi ganda, zigot.
ABSTRACT
CANDRANI KHOIRINAYA. Viability of Mouse (Mus musculus albinus) Embryo
after Cryopreservation by Double Vitrification of Zygote Followed by Blastocyst
Stage. Under direction of ARIEF BOEDIONO and WAHONO ESTHI
PRASETYANINGTYAS.
Development of cryopreservation technology by vitrification method allowed cell
storage as a genetic or cell banking that can be utilized in the future. The aim of
this research was to find out the viability of mouse embryo after double
vitrification at zygote and followed by blastocyst stage. Zygote were obtained
from DDY mouse through superovulation by injecting the pregnant mare serum
gonadotrophin (PMSG) hormone, followed by human chorionic gonadotrophin
(hCG) hormone with interval 48 hours. Before the zygote was being plunged into
liquid nitrogen, they were exposed to vitrification medium consist of 15% ethylene
glycol + 15% dimethylsulfoxide + 0.5M sucrose in dulbecco’s phosphate buffered
saline (DPBS) which supplemented with 20% fetal bovine serum (FBS) and then
dropped onto the open inner face of the 0.25 ml straw (hemi-straw carrier).
Warming process was done in rehydration medium (sucrose solution leveled by
0.5M, 0.25M, 0.1M in DPBS solution which supplemented with 20% FBS. The
result showed that survival rate after double vitrification at zygote and followed by
blastocyst stage were 96.81% and 92.50%, respectively, two hours after in vitro
culture was similar (P>0.05) compared to control group. The development of
hatched blastocyst embryos after single vitrification at blastocyst stage reached
80%, meanwhile after double vitrification reached 66.22%, they were not different
(P
SETELAH KRIOPRESERVASI DENGAN VITRIFIKASI
GANDA PADA TAHAP PERKEMBANGAN ZIGOT DAN
DILANJUTKAN PADA TAHAP BLASTOSIS
CANDRANI KHOIRINAYA
FAKULTAS KEDOKTERAN HEWAN
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
BOGOR
2011
PERNYATAAN MENGENAI SKRIPSI DAN SUMBER
INFORMASI
Dengan ini saya menyatakan bahwa skripsi saya yang berjudul “Viabilitas
Embrio Mencit (Mus musculus albinus) setelah Kriopreservasi dengan Vitrifikasi
Ganda pada Tahap Perkembangan Zigot dan Dilanjutkan pada Tahap Blastosis”
adalah karya saya dengan arahan pembimbing dan belum diajukan dalam
bentuk apapun kepada perguruan tinggi manapun. Sumber informasi yang
berasal atau dikutip dari karya yang diterbitkan maupun tidak diterbitkan dari
penulis lain telah disebutkan dalam teks dan dicantumkan dalam Daftar Pustaka
di bagian akhir skripsi ini.
Bogor, Mei 2011
Candrani Khoirinaya
NIM B04063491
ABSTRAK
CANDRANI KHOIRINAYA. Viabilitas Embrio Mencit (Mus musculus albinus)
setelah Kriopreservasi dengan Vitrifikasi Ganda pada Tahap Perkembangan
Zigot dan Dilanjutkan pada Tahap Blastosis. Dibimbing oleh ARIEF BOEDIONO
dan WAHONO ESTHI PRASETYANINGTYAS.
Perkembangan teknologi pembekuan embrio dengan metode vitrifikasi
memungkinkan penyimpanan sel sebagai bank genetik atau sel yang dapat
dimanfaatkan di masa mendatang. Penelitian ini bertujuan mengetahui viabilitas
embrio mencit setelah vitrifikasi ganda tahap zigot dan dilanjutkan pada tahap
blastosis. Embrio mencit galur DDY tahap zigot diperoleh melalui superovulasi
dengan menyuntikkan hormon pregnant mare serum gonadotrophin (PMSG)
yang diikuti dengan hormon human chorionic gonadotrophin (hCG) 48
setelahnya. Sebelum zigot disimpan dalam nitrogen cair, zigot divitrifikasi dengan
memapar dalam medium vitrifikasi yang terdiri atas etilen glikol 15% +
dimetilsulfoksida 15% + sukrosa 0.5M di dalam larutan dulbecco’s phosphate
buffered saline (DPBS) yang disuplementasi fetal bovine serum (FBS) 20% dan
diteteskan pada ujung straw 0.25 ml yang telah disayat (wadah hemi-straw).
Proses penghangatan dilakukan pada medium rehidrasi yang terdiri atas larutan
sukrosa bertingkat yaitu 0.5M, 0.25M, 0.1M di dalam larutan DPBS yang
disuplementasi FBS 20%. Hasil penelitian menunjukkan bahwa kelangsungan
hidup setelah vitrifikasi ganda pada tahap zigot dan dilanjutkan pada tahap
blastosis berturut-turut mencapai 96.81% dan 92.50%, setelah 2 jam kultur in
vitro hasil ini tidak berbeda (P>0.05) dibandingkan kelompok kontrol.
Perkembangan embrio tahap blastosis hatched setelah vitrifikasi tunggal pada
tahap blastosis mencapai 80%, sedangkan setelah vitrifikasi ganda mencapai
66.22%, tidak berbeda (P>0.05) dibandingkan kelompok kontrol (79.62%). Hasil
penelitian ini menunjukkan bahwa embrio mencit dapat dibekukan dengan
vitrifikasi ganda pada tahap zigot dan dilanjutkan pada tahap blastosis.
Kata Kunci: blastosis, hemi-straw, mencit, vitrifikasi ganda, zigot.
ABSTRACT
CANDRANI KHOIRINAYA. Viability of Mouse (Mus musculus albinus) Embryo
after Cryopreservation by Double Vitrification of Zygote Followed by Blastocyst
Stage. Under direction of ARIEF BOEDIONO and WAHONO ESTHI
PRASETYANINGTYAS.
Development of cryopreservation technology by vitrification method allowed cell
storage as a genetic or cell banking that can be utilized in the future. The aim of
this research was to find out the viability of mouse embryo after double
vitrification at zygote and followed by blastocyst stage. Zygote were obtained
from DDY mouse through superovulation by injecting the pregnant mare serum
gonadotrophin (PMSG) hormone, followed by human chorionic gonadotrophin
(hCG) hormone with interval 48 hours. Before the zygote was being plunged into
liquid nitrogen, they were exposed to vitrification medium consist of 15% ethylene
glycol + 15% dimethylsulfoxide + 0.5M sucrose in dulbecco’s phosphate buffered
saline (DPBS) which supplemented with 20% fetal bovine serum (FBS) and then
dropped onto the open inner face of the 0.25 ml straw (hemi-straw carrier).
Warming process was done in rehydration medium (sucrose solution leveled by
0.5M, 0.25M, 0.1M in DPBS solution which supplemented with 20% FBS. The
result showed that survival rate after double vitrification at zygote and followed by
blastocyst stage were 96.81% and 92.50%, respectively, two hours after in vitro
culture was similar (P>0.05) compared to control group. The development of
hatched blastocyst embryos after single vitrification at blastocyst stage reached
80%, meanwhile after double vitrification reached 66.22%, they were not different
(P