DETEKSI DAN SPESIASI PARASIT MALARIA SAMPEL MONITORING PENGOBATAN DIHYDROARTEMISININ- PIPERAQUINE DI KALIMANTAN DAN SULAWESI: MIKROSKOPIS VS POLYMERASE CHAIN REACTION

  

A R T I K E L

D E T E K S I D A N S P E S I A S I P A R A S I T M A L A R I A S A M P E L

D I H Y D R O A R T E M I S I N I N -

M O N I T O R I N G P E N G O B A T A N

  

P I P E R A Q U I N E D I K A L I M A N T A N D A N S U L A W E S I :

M I K R O S K O P I S

  V S P O L Y M E R A S E C H A I N R E A C T I O N R e n i H e r m a n ,* E n d a h A r iy a n ti,* E r v i S a lw a ti,* D e lim a ,* E m ilia n a T jitr a *

  D E T E C T I O N A N D S P E C I A T I O N O F M A L A R I A S A M P L E S

  I N M O N I T O R I N G P A R A S I T E S D I H Y D R O A R T E M I S I N I N - P I P E R A Q U I N E T R E A T M E N T

  I N K A L I M A N T A N A N D S U L A W E S I : M I C R O S C O P I C

  V S P O L Y M E R A S E C H A I N R E A C T I O N

A b s t r a c t

I n m o n i t o r i n g t h e t r e a t m e n t o f m a l a r i a w i t h D i h y d r o a r t e m i s i n i n - p i p e r a q u i n e ( D H P ) , m i c r o s c o p i c c r o s s

c h e c k a n d P o l y m e r a s e C h a i n R e a c t i o n ( P C R ) p e r f o r m e d t o v a l i d a t e t h e r e s u l t s o f l a b o r a t o r y

e x a m i n a t i o n s i n t h e f i e l d . T h i s s t u d y u s e d f i n g e r p r i c k s a m p l e s f r o m s u b j e c t s w i t h a d i a g n o s i s o f m a l a r i a

i n m o n i t o r i n g t h e t r e a t m e n t o f m a l a r i a w i t h D H P i n K a l i m a n t a n a n d S u l a w e s i . S a m p l e s t a k e n a t d a y 0 ,

b l o o d s m e a r s m a d e o n s l i d e s f o r m i c r o s c o p i c a n d b l o o d s p o t o n f i l t e r p a p e r f o r P C R e x a m i n a t i o n . T h e

P C R m e t h o d u s e d i s a s i n g l e - r o u n d m u l t i p l e x p o l y m e r a s e c h a i n r e a c t i o n t h a t h a s b e e n m o d i f i e d , t h e

e x a m i n a t i o n o f e a c h s p e c i e s c a r r i e d o u t i n d i f f e r e n t t u b e s t o d i s t i n g u i s h t h e s p e c i e s P . f a l c i p a r u m o r P .

  

V i v a x . T a r g e t o f D N A a m p l i f i c a t i o n i s a s p e c i e s - s p e c i f i c g e n e s e q u e n c e s i n t h e s m a l l - s u b u n i t r i b o s o m a l

R N A ( S S U r R N A ) , 3 0 0 b p f o r P .f a l c i p a r u m a n d b p f o r P .v i v a x . P .f a l c i p a r u m a n d P .v i v a x i d e n t i f i e d

276

i n s a m p l e s o f b l o o d s m e a r s a n d b l o o d s p o t s . M i c r o s c o p i c a n d P C R g a v e t h e s a m e r e s u l t s , p o s i t i v e

  229

9 3 .4 % a n d n e g a t i v e 6.6% w i t h a s e n s i t i v i t y o f 99% a n d s p e c i f i c i t y 93.3%. P f a l c i p a r u m s e n s i t i v i t y a n d

s p e c i f i c i t y o f a n d P .v i v a x a n d P C R a s a g o l d s t a n d a r d . T h e r e a r e d i f J e r e n c e s i n

  92% 99%, 97% 94%, t h e r e s u l t s o f e x a m i n a t i o n o f

  5 s a m p l e s , i e w i t h m i c r o s c o p i c e x a m i n a t i o n i d e n t i f i e d a s P . v i v a x w h i l e t h e

  

P C R a s P . f a l c i p a r u m . I n t h i s s t u d y , i d e n t i f i c a t i o n o f t h e m i c r o s c o p i c p a r a s i t e s i m i l a r t o t h e r e s u l t s o f

i d e n t i f i c a t i o n b y P C R , b u t d i f J e r i n d e t e r m i n i n g t h e t y p e s o f p a r a s i t e s . I n g e n e r a l , t h e a b i l i t y t o

m i c r o s c o p i c d i a g n o s i s o f m a l a r i a i s v e r y g o o d , b u t c o n f i r m a t i o n b y P C R i s s t i ! ! n e e d e d .

  K e y w o r d s : M a l a r i a , m i c r o s c o p i c , P C R , P l a s m o d i u m f a l c i f a r u m , P l a s m o d i u m v i v a x

A b s t r a k

  

P a d a m o n i t o r i n g p e n g o b a t a n m a l a r i a d e n g a n D i h y d r o a r t e m i s i n i n - p i p e r a q u i n e ( D H P ) ,c e k s i l a n g

m i k r o s k o p i s d a n P o l y m e r a s e C h a i n R e a c t i o n ( P C R ) d i l a k u k a n u n t u k m e m v a l i d a s i h a s i l p e m e r i k s a a n d i

l a b o r a t o r i u m l a p a n g a n . P e n e l i t i a n i n i m e n g g u n a k a n s e d i a a n d a r a h j a r i d a r i s u b y e k d e n g a n d i a g n o s i s

m a l a r i a p a d a m o n i t o r i n g p e n g o b a t a n m a l a r i a d e n g a n D H P d i K a l i m a n t a n d a n S u l a w e s i . S a m p e l

d i a m b i l p a d a h a r i 0 , d i b u a t s e d i a a n a p u s d a r a h p a d a k a c a b e n d a d a n s e d i a a n t e t e s d a r a h ( B l o o d s p o t )

p a d a k e r t a s s a r i n g . T e r h a d a p s e d i a a n a p u s d a r a h d i l a k u k a n p e m e r i k s a a n m i k r o s k o p i s , d a n t e r h a d a p

s e d i a a n t e t e s d a r a h d i l a k u k a n p e m e r i k s a a n P C R . M e t o d e P C R y a n g d i g u n a k a n a d a l a h m u l t i p l e x s i n g l e

r o u n d P o l y m e r a s e C h a i n R e a c t i o n y a n g t e l a h d i m o d i f i k a s i , p e m e r i k s a a n m a s i n g - m a s i n g s p e s i e s

d i l a k u k a n p a d a t a b u n g y a n g b e r b e d a u n t u k m e m b e d a k a n s p e s i e s P f a l c i p a r u m a t a u P . V i v a x . T a r g e t

a m p l i f i k a s i D N A a d a l a h g e n s p e c i e s - s p e c i f i c s e q u e n c e s p a d a s m a l l - s u b u n i t r i b o s o m a l R N A ( S S U r R N A ) ,

A

  A nalisis PC R dapat m endeteksi parasit pada jum lah yang sangat sedikit.' W alapun begitu, beberapa studi juga m elaporkan bahw a sensitifitas PC R tergantung dari kepadatan parasit.

  Sebanyak 229 sam pel yang terkum pul pada penelitian ini berasal dari penderita tersangka m alaria yang diam bil pada hari 0, sebelum pem berian terapi. Sam pel berupa sediaan apus darah jari pada kaca benda dan sedian tetes darah pada kertas saring W h a t m a n ( B l o o d s p o t ) . Terhadap sediaan apus darah dilakukan pem eriksaan m ikroskopis oleh petugas di Puskesm as kem udian dilakukan pengecekan kem bali di Laboratorium Parasitologi B adan Litbangkes. Sem entara terhadap sediaan tetes darah pada kertas saring dilakukan pem eriksaan PC R .

  M e to d e S a m p e l

  U ntuk m enentukan kualitas hasil pem eriksaan m ikroskopis dan PC R pada penelitian ini, m aka hasil identifikasi parasit dengan pem eriksaan m ikroskopis oleh tim pusat dibandingkan dengan hasil pem eriksaan PC R .

  spesim en darah dari penderita diidentifikasi parasitnya dengan m enggunakan pem eriksaan m ikroskopis yang dilakukan oleh petugas di Puskesm as. Spesim en darah juga diperiksa ulang oleh petugas di B adan Litbangkes untuk cek silang. Selanjutnya pem eriksaan PC R dilakukan untuk konfirm asi hasil pem eriksaan m ikroskopis.

  v i v o dan farm akovigilans. Pada studi im ,

  m olekuler digunakan untuk m elengkapi data i n -

  P . v i v a x di K alim antan dan Sulaw esi, pendekatan

  D alam rangka studi m onitoring resistensi obat pada subyek dengan P f a l c i p a r u m dan

  H asil pem eriksaan PC R juga dipengaruhi oleh cara pengum pulan dan penyim panan sam pel, ekstraksi

  4 ,5

  R e a c t i o n (PC R ) dapat m enjadi pelengkap untuk m engkonfirm asi hasil pem eriksaan m ikroskopis.

  

3 0 0 b p u n t u k P f a l c i p a r u m d a n P . v i v a x . P f a l c i p a r u m d a n P . v i v a x d i i d e n t i f i k a s i p a d a 229 s a m p e l

b e r u p a s e d i a a n a p u s d a r a h p a d a k a c a b e n d a d a n b l o o d s p o t . H a s i l i d e n t i f i k a s i d e n g a n m i k r o s k o p i s d a n

P C R , s a m p e l p o s i t i f

  Pem eriksaan m ikroskopis sangat m em erlukan keteram pilan petugas, karena akurasi dari hasil pem eriksaan m ikroskopis dapat m enurun 64 % sam pai dengan 95% bila jum lah parasit dalam darah m enurun atau pada kasus infeksi cam puran dim ana hanya satu parasit yang terdeteksi.' Pem eriksaan P o l y m e r a s e C h a i n

  (R D T) dan pem eriksaan m ikroskopis. Pilihan untuk m enggunakan pem eriksaan m ikroskopis atau R D T tergantung dari keadaan daerah, jum lah kasus, epidem iologi m alaria dan kem ungkinan untuk m enggunakan pem eriksaan m ikroskopis pada penyakit lain. Pem eriksaan m ikroskopis m em iliki keuntungan lain karena selain dapat m endeteksi spesies parasit juga dapat ditentukan jum lah parasit sehingga dapat diketahui kem ajuan pengobatannya.'

  da dua m etode pem eriksaan yang rutin dilakukan untuk m endeteksi parasit m alaria, yaitu R a p i d d i a g n o s t i c T e s t

  P e n d a h u lu a n

  K a t a k u n c i : M a l a r i a , m i k r o s k o p i s , P C R , P l a s m o d i u m f a l c i f a r u m , P l a s m o d i u m v i v a x Subm it: 5 Juli 2011, R eview 1: 6 Juli 2011, R eview 2: 6 Juli 2011, Eligible article: 9 Septem ber 2011

  

p e m e r i k s a a n m i k r o s k o p i s d i i d e n t i f i k a s i s e b a g a i P . v i v a x s e m e n t a r a p a d a p e m e r i k s a a n P C R s e b a g a i

P f a l c i p a r u m . P a d a p e n e l i t i a n i n i , h a s i l i d e n t i f i k a s i p a r a s i t d e n g a n m i k r o s k o p i s s a m a d e n g a n h a s i l

i d e n t i f i k a s i d e n g a n P C R , n a m u n b e r b e d a p a d a p e n e n t u a n j e n i s p a r a s i t . S e c a r a u m u m k e m a m p u a n

t e n a g a m i k r o s k o p i s p u s a t u n t u k m e n e g a k k a n d i a g n o s i s m a l a r i a s u d a h s a n g a t b a i k , n a m u n u n t u k

p e n e n t u a n j e n i s P l a s m o d i u m m a s i h m e m e r l u k a n k o n f i r m a s i P C R .

  5 s a m p e l , y a i t u d e n g a n

  

S e n s i t i f i t a s d a n s p e s i f i s i t a s P f a l c i p a r u m a d a l a h 92% d a n 99%, P . v i v a x 97% d a n 94%, d i h i t u n g d e n g a n

P C R s e b a g a i b a k u s t a n d a r . T e r d a p a t p e r b e d a a n h a s i l p e m e r i k s a a n t e r h a d a p

  99% d a n s p e s i f i s i t a s 93,3%.

  6,6% d e n g a n s e n s i t i f i t a s

  93,4% d a n n e g a t i f

• Pusat B iom edis dan Teknologi D asar K esehatan

  P e m e r i k s a a n m i k r o s k o p i s

  arah prim er

  P l a s m o d i u m adalah 99% . Pada penentuan P f a l c i p a r u m , nilai sensitifitas dan spesifisitas ::::

  1 sam pel ditem ukan 1 parasit dalam bentuk seksual. Penem uan P l a s m o d i u m dari pem eriksaan m ikro- skopis terhadap PC R m em iliki sensitifitas dan spesifisitas diatas 93% , dem ikian juga dengan nilai duga positif dan negatif. R asio kem ungkinan positif lebih dari 10 sem entara ratio kem ungkinan negatif kurang dari 0,1. A kurasi pada penentuan

  Pada penelitian nu m asing-m asing terkum pul 229 sediaan darah jari dan b l o o d s p o t dari penderita m alaria yang diam bil pada hari O . Proporsi P l a s m o d i u m yang positif pada pem eriksaan m ikroskopis baik bentuk seksual m aupun aseksual sam a dengan pem eriksaan PC R , yaitu 214 (93,4% ). D ari jum lah yang positif,

  a C H a s il

  A nalisis data m enggunakan program SPSS 15.0 dan program e x c e l . H asil pem eriksaan PC R digunakan sebagai baku standar untuk m enentukan nilai sensitifitas dan spesifisitas, V ariabel yang diukur adalah nilai T r u e p o s i t i v e (TP), T r u e n e g a t i v e (TN ) , F a l s e p o s i t i v e (FP) dan F a l s e n e g a t i v e (FN ). N ilai sensitifitas diukur dengan m enghitung TP/ (TP +FN ), dan spesifisitas TN /(TN +FP). N ilai duga positif dihitung berdasarkan TP/(TP+FP) dan nilai duga negatif TN /(FN +TN ). N ilai rasio kem ungkinan positif diukur dengan m enghitung nilai sensitifitas/t l-spesifisitas), N ilai rasio kem ungkin- an negatif dihitung berdasarkan (l-sensitifitasj/ spesifisitas, A dapun akurasi dihitung berdasarkan (TP+ TN )/jum lah sam pel. Perhitungan nilai pem eriksaan seperti yang dilakukan oleh Tjitra e t

  f a l c i p a r u m dan 27 6 bp untuk P . v i v a x A n a l i s i s d a t a

  95 C -- 10 m enit jum lah siklus 1, dan tahap 2 : suhu 95 C - 45 detik, 62 C - 90 detik dan 72 C - 5 m enit dengan jum lah siklus 43. Selanjutnya produk PC R dielektroforesis pada gel agarose 2% . H asil elektroforesis produk D N A sam pel akan m enunjukkan panjang pita 300 bp untuk P.

  PC R yang digunakan; tahap I suhu

  5 U //--ll 0,25 ul, V olum e cam puran reagen sam pai 45 ul, lalu ditam bahkan sam pel D N A 5 ul. Prosedur

  (10 m M ) 1 ul, M gC b (25m M ) 5 ul, R ev M al prim er (10 /--lMeach) 0,6 ul, Prim er PF/PV (10 /--lM each) 0,6 ul, Tag D N A polym erase

  R eagen PC R yang digunakan adalah produksi A p p l i e d B i o s y s t e m , yang kom posisinya 10 x PC R b u f J e r ( w i t h o u t M gC b) 5 ul, dN TP m ix

  dengan urutan basa C G G C TT G G A A G T C C T TG T (jum lah basa 18).

  f o w a r d

  P . v i v a x :

  Pem eriksaan m ikroskopis dilakukan untuk identifikasi parasit yang m eliputi jenis/spesies, stadium dan kepadatan parasit. Sediaan apus darah tebal pada kaca benda diw arnai dengan m ikroskop perbesaran 1000x. K epadatan parasit dihitung berdasarkan jum lah parasit per 200 leukosit, dengan asum si jum lah leukosit 5000/m l. H asil pem eriksaan dinyatakan negatif apabila tidak ditem ukan parasit dalam 100 lapang pandang. Sem ua hasil final pem eriksaan m ikroskopis selanjutnya dikonfirm asi spesiesnya dengan pem eriksaan PC R .

  Prim er yang digunakan untuk pem eriksaan PC R adalah; U niversal (R evM al) arah r e v e r s e dengan urutan basa G T A TC T G A T C G T C TT C A C TC C C (jum lah basa 22), P . f a l c i p a r u m : arah prim er f o r w a r d dengan urutan basa A A C A G A C G G G TA G TC A TG A TT G A G (jum lah basa 24) dan

  P f a l c i p a r u m atau P . v i v a x dengan panjang pita yang ham pir sam a.

  spesies dilakukan pada tabung yang berbeda karena sulit untuk m em bedakan s p e s i e s

  m u l t i p l e x , nam un reaksi untuk m asing-m asing

  (SSU rR N A ). M eskipun dilakukan dengan m etode

  s e q u e n c e s pada s m a l l - s u b u n i t r i b o s o m a l R N A

  reagen dan suhu pada prosedur PC R . Target am plifikasi D N A adalah gen s p e c i e s - s p e c i j i c

  R e s e a r c h (M SH R ), ada m odifikasi pada volum e

  telah digunakan oleh M e n z i e s S e h l o o l o f H e a l t h

  s i n g l e r o u n d P o l y m e r a s e C h a i n R e a c t i o n yang

  M etode yang digunakan adalah m u l t i p l e x

  Pem eriksaan PC R m eliputi 3 tahap yaitu ekstraksi D N A , am plifikasi D N A dan elektro- foresis D N A pada gel agarose. Ekstraksi D N A dari kertas filter W h a t m a n m enggunakan m etode filtrasi kolom (kit Q iagen) dengan m etode kerja sesuai dengan instruksi dari produsen.

  P e m e r i k s a a n peR

  92 % , dengan nilai duga positif dan negatif'> 91 % . R asio kem ungkinan positif adalah 94,8 dan ratio kem ungkinan negatif 0,08. A kurasi pada penentuan P f a l c i p a r u m 95% . Pada P .v i v a x , nilai

  119 (55.6% ) 88 (41.1 % ) 7 (3.2% ) 214

  98

  91

  94.8

  0.08

  95 (86-95.6) (94.79.8) (94.6-99.9) (83.8-95.4) (13.4-667.2) (0.04-0.145) P .v i v a x

  97

  94

  93

  18

  99

  0.02

  96 (92.6-99.4) (89.6-97.4) (85.6-96.8) (92.9-99.7) (C I 9.1- 38.5) (0.006-0.088)

  T abel 2. D istribusi Frekuensi P l a s m o d i u m S p B erdasarkan H asil Pem eriksaan M ikroskopis dan PC R Pada M onitoring Pengobatan M alaria dengan D H P di K alim antan dan Sulaw esi

  Pifalciparum P i v i v a x

  Pifalciparum &

  Jum lah

  P i v i v a x M ikroskopik 114 (53.3% ) 97 (45.3% )

  3 (1.4% ) 214 peR

  99

  92

  sensitifitas dan spesifisitas ::::94% , nilai duga positif dan negatif :::: 93. R asio kem ungkinan positif 18 dan nilai duga negatif 0,02. N Ilai akurasi pada penentuan P . v i v a x adalah 96% .(Tabel 1). parasit yang positif berdasarkan pem eriksaan m ikroskopis sedikit berbeda dengan hasil pem eriksaan PC R . P l a s m o d i u m f a l c i p a r u m ditem ukan 114 dengan pem eriksaan m ikroskopis sem entara dengan pem eriksaan PC R 119.

  Pada penelitian ini, proporsi P f a l c i p a r u m tam pak lebih tinggi pada jum lah parasit ::::5000 (G am bar 1), sem entara proporsi P . v i v a x lebih tinggi pada jum lah parasit 500-4999/ul (G am bar 2). Jum lah parasit :::;50 dan :::: 5000 dengan pem eriksaan m ikroskopis dan PC R m em berikan hasil yang sam a. Sem entara pada jum lah parasit 51-4999 tam pak ada perbedaan (G am bar 1 dan gam bar 2)

  P l a s m o d i u m v i v a x ditem ukan

  97 dengan pem eriksaan m ikroskopis sem entara dengan PC R

  88. Infeksi cam puran lebih banyak ditem ukan pada pem eriksaan PC R .

  Jum lah parasit pada penelitian ini berada pada kisaran 0 sam pai 122.413 parasit/ul, dengan

  m e a n 10224 parasit/ul. Jum lah parasit terbanyak

  adalah pada kisaran > 5000/ul, dan sem akin rendah jum lah parasit, sem akin kecil proposi jum lah sam pel. H asil tem uan ini sam a dengan pem eriksaan m ikroskopis m aupun pada pem eriksaan PC R . (G am bar 1

  & gam bar 2).

  T abel 1. K ualitas H asil Pem eriksaan M ikroskopis* T erhadap PC R Pada M onitoring Pengobatan M alaria D engan D H P di K alim antan dan Sulaw esi

  P f a l c i p a r u m

  Sensitifitas Spesifisitas N ilai duga N ilai duga R asio kem ungkinan A kurasi (% ) C I 95% (% ) C I95% Positif (% ) negatif(% )

  Positif N egatif (% ) (C I 95% ) (C I 95% )

  P l a s m o d i u m s p

  99

  93.3

  99

  93.3 14.14 0.005

  99 (97.4-99.9) (70-98.8) (97-99.9) (70-98.8) (2.24-99.1) (0.001-0.036)

• Parasit seksual dan aseksual

  60

  50

  40

  30

  20

  10 o

  G am bar

  1. D istribusi Frekw ensi H asil Identifikasi P . F a l c i p a r u m B erdasarkan Jum lah Parasit dengan Pem eriksaan M ikroskopis dan PC R Pada M onitoring Pengobatan M alaria dengan D H P di K alim antan dan Sulaw esi

  60

  50

  40

  30

• Mikrosk • peR PV

  20

  10 o

  G am bar

  2. D istribusi Frekuensi H asil Identifikasi P . V i v a x B erdasarkan Jum lah Parasit D engan Pem eriksaan M ikroskopis dan PC R Pada M onitoring Pengobatan M alaria dengan D H P di K alim antan dan Sulaw esi

  T abel 3. K om posisi Parasit pada Jum lah 51-4999/ul M ikro

  peR

  Jum lah (parasit/ul) skopis

  PF PV PF PV 51-499

  10

  6

  12

  4 500-4999

  34

  54

  37

  51 Terdapat 5 sam pel yang ditem ukan P . v i v a x dengan pem eriksaan m ikroskopis, nam un dengan pem eriksaan PC R diidentifikasi sebagai P.

  f a l c i p a r u m . Satu sam pel yang teridentifikasi

  Secara um um pem eriksaan PC R lebih sensitif dan spesifik dibandingkan pem eriksaan m ikroskopis.

  U c a p a n T e r im a k a s ih

  hasil identifikasi parasit dengan pem eriksaan m ikroskopis sam a dengan hasil identifikasi dengan PC R , nam un berbeda pada penentuan jenis parasit. Secara um um kem am puan tenaga m ikroskopis pusat sudah sangat baik untuk m enegakkan diagnosis m alaria, nam un untuk penentuan jenis P l a s m o d i u m m asih m em erlukan konfirm asi dengan pem eriksaan PC R .

  P l a s m o d i u m v i v a x di K alim antan dan Sulaw esi,

  Pada penelitian m onitoring resistensi obat pada subyek dengan P f a l c i p a r u m dan

  K e s im p u la n

  H asil ini m em erlukan pem eriksaan lebih lanjut, m engingat jum lah parasit pada kelim a sam pel tersebut tidak sedikit sehingga kecil kem ungkinan kesalahan deteksi oleh tenaga m ikroskopis.

  f a l c i p a r u m dengan pem eriksaan PC R (Tabel 3).

  5 sam pel ditem ukan P . v i v a x dengan pem eriksaan m ikroskopis nam un diidentifikasi sebagai P.

  Pada penelitian ini terdapat

  8,9

  1 & 2). Parasitem ia pada P . f a l c i p a r u m lebih tinggi dibandingkan dengan P . v i v a x , terlihat pada frekuensi P . f a l c i p a r u m paling banyak pada jum lah parasit :::: 5000/ul, P . v i v a x frekuensi terbanyak pada jum lah parasit 500-4999/ul. K enyataan ini dapat dijelaskan dengan m elihat jenis sel darah m erah yang diinfeksi oleh kedua parasit, P l a s m o d i u m f a l c i p a r u m m enyerang sel darah m erah dew asa, sem entara P . v i v a x m enyerang sel darah m erah m uda yang jum lahnya lebih sedikit dibandingkan dengan sel darah m erah dew asa.

  sebagai

  Secara um um ham pir sam a jum lah parasit yang ditem ukan antara pada pem eriksaan m ikroskopis dan PC R berdasarkan jenis parasit. N am un ada sedikit perbedaan frekw ensi jenis parasit pada kedua jenis pem eriksaan dengan jum lah parasit antara 51-499/ul dan 500-4999/ul.(G am bar

  dem ikian juga dengan pem eriksaan PC R ,6 m aka dilakukan pem isahan jum lah parasit untuk m elihat sebaran jum lah parasit terbanyak.

  2

  O leh karena jum lah parasit dapat m em - pengaruhi hasil identifikasi pada pem eriksaan m ikroskopis

  H asil identifikasi spesies parasit sedikit berbeda antara pem eriksaan m ikroskopis dan PC R (Tabel 2). B eberapa hal yang dapat m enjadi penyebabnya adalah; berbedanya sediaan darah yang diperiksa. Pada pem eriksaan m ikroskopis sam pel yang diperiksa adalah sediaan apus darah pada k a c a b e n d a , sem entara pada pem eriksaan PC R m enggunakan sediaan tetes darah pada kertas saring. Perbedaan juga dapat disebabkan oleh jum lah darah pada kedua sediaan berbeda, kesalahan di lapangan seperti tertukam ya sam pel antara satu subyek penelitian dengan yang lain, atau kesalahan pada saat penom oran sediaan darah. Perbedaan ini dapat ditelusuri penyebabnya bila dilakukan pem eriksaan PC R dari kerokan darah pada k a c a b e n d a setelah pem eriksaan m ikroskopis. Penyebab lain adalah jum lah parasit yang rendah, sehingga parasit yang ditem ukan berbeda pada pem eriksaan dengan kedua m etode.'

  dan sangat bervariasinya keteram pilan dan pengalam an petugas di lapangan untuk pem eriksaan m ikroskopis, m aka dapat terjaw ab pertanyaan m engapa m asih ada hasil pem eriksaan yang negatif. N am un begitu secara um um keteram pilan petugas pusat dalam m eng- identifikasi parasit m alaria sudah baik, dengan nilai sensitifitas dan spesifisitas cukup tinggi (92% -99% ). D em ikian juga dengan nilai duga positif dan negatif yang cukup tinggi. N ilai diagnosis pada penelitian ini juga baik karena rasio kem ungkinan positif di atas 10 dan rasio kem ungkinan negatif di baw ah 0,1 serta akurasi :::: 95 % .(Tabel 1).

  2

  Sam pel dari penelitian ini diperoleh dari penderita m alaria yang direkrut untuk studi m onitor resistensi obat pada penderita dengan infeksi P f a l c i p a r u m dan P . v i v a x . O leh karena itu, hasil pem eriksaan pada penelitian ini yang m estinya positif untuk parasit tersebut, dalam kenyataanya m asih ditem ukan hasil yang negatif. K arena keteram pilan petugas sangat m em - pengaruhi hasil pem eriksaan m ikroskopis,

  P e m b a h a s a n

  dengan pem eriksaan infeksi cam puran (Tabel 3).

  P . v i v a x

  Terim a kasih diucapkan kepada berbagai pihak yang telah m em bantu terlaksananya penelitian ,G lobal Fund (yang telah m em bantu pendanaan sehingga penelitian nu dapat terlaksana), D irjen

  pp & PL (selaku Sub

  E: Poor accuracy of rapid diagnostic tests and m is diagnosis of im ported m alaria: are PC R -based reference laboratories the answ er? J C lin M icrobiol 2002,40:736-737.

  8. M akler M T, Palm er C J, A ger A L: A review of practical techniques for the diagnosis of m alaria. A nn Trop M ed Parasitol 1998,92:419-433.

  presum ptive clinical diagnosis of m alaria in eastem lndonesia. J C l i n M i c r o b i o l 1 9 9 9 , 37:2412-2417.

  P l a s m o d i u m v i v a x in patients w ith a

  IC T m alaria P.F/P.v im m unochrom atographic test for detection of P l a s m o d i u m f a l c i p a r u m and

  E, Suprianto S, D yer M , C urrie B J, A nstey N M : Field evaluation of the

  7. Tjitra

  G eographic differences in the sensitivity of a polym erase chain reaction for the detection of Plasm odium falciparum infection. A m J Trop M ed H yg 1996, 55:647-65l.

  6. Jelinek T, Proll S, H ess F, K abagam be G , von Sonnenburg F, Loscher T, K ilian A H :

  5. H anscheid T, V aladas

  R esipient), K epala B adan Litbang K esehatan dan K epala Puslitbang B iom edis dan Farm asi (selaku Pelindung dan K oordiantor yang telah m em bantu m em fasilitasi kegiatan penelitian),K epala D inas K esehatan Propinsi K alim antan B arat, K alim antan Tengah, Sulaw esi U tara dan Sulaw esi Tengah dan Staf serta K epala D inas K esehatan K abupaten Pontianak, K atingan, M inahasa Tenggara dan Sigi beserta staf (yang banyak m em bantu perijinan dan pelaksanaan penelitian di lapangan),K epala Puskesm as Toho, A njungan, K asongan Tum bang Sam ba, Touluaan, Tam belang, B aluase dan B anpres beserta staf (yang banyak m em bantu pengum pulan sam pel dan spesim en m alaria di lapangan)

  48.

  4. H um ar A , O hrt C , H arrington M A , Pillai D , K ain K C : Parasight F test com pared w ith the polym erase chain reaction and m icroscopy for the diagnosis of P.falciparum m alaria in travelers. A m J Trop M ed H yg 1997, 56:44-

  876-83.

  3. M urray C K , B ell D , G asser R A , W ongsrichanalai C . R apid diagnostic testing for m alaria. Trop M ed Int H ealth 2003; 8 :

  P a t h o I 1 9 9 4 ,4 7 : 7 4 0 - 7 4 2 .

  2. M ilne LM , K yi M S, C hiodini PL, W arhurst D C : A ccuracy ofroutine laboratory diagnosis of m alaria in the U nited K ingdom . J C l i n

  1. W orld H ealth O rganization. D iagnosis of m alaria. G uidelines for the treatm ent of m alaria. Second edition. W orld H ealth O rganization 2010.

  D a fta r P u s ta k a

  9. B arker R H Jr, B anchongaksom T, C ourval JM , Suw onkerd W , R im w ungtragoon K , W irth D F: Plasm odium falciparum and P.vivax: factors affecting sensitivity and specificity of PC R based diagnosis of m alaria. Exp Parasitol1994, 79:41-49.