Deteksi FcyRIIa Pada Stem Cell Yang Diisolasi Dari Lipoaspirate.

iv ABSTRAK

DETEKSI FcγRIIa PADA STEM CELL YANG DIISOLASI DARI LIPOASPIRATE

Devina Marchita I.S., 2009. Pembimbing I : Caroline Tan Sardjono, dr.PhD Pembimbing II : Laella K. Liana,dr.M.Kes.Sp.P.A.

Beberapa tahun terakhir, terapi kesehatan mulai berkembang ke arah cell-based therapy. Cell-cell-based therapy merupakan terapi dengan menggunakan human stem cell yang memiliki potensi untuk memperbaharui sel dan jaringan. Akan tetapi, pengetahuan mengenai imunogenisitas stem cell masih sangatlah minim. Ini menjadi hal yang menarik bagi peneliti untuk meneliti lebih lanjut mengenai imunogenisitas stem cell khususnya stem cell yang diisolasi dari lipoaspirate.

Penelitian ini bertujuan untuk mendeteksi ekspresi FcγRIIa pada stem cell yang diisolasi dari lipoaspirate. FcγRIIa merupakan molekul yang bertanggung jawab dalam proses clearance kompleks imun, sehingga deteksi mengenai keberadan molekul ini akan memberikan wawasan baru mengenai profil imunogenisitas stem cell.

Objek penelitian ini adalah stem cell yang diisolasi dari lipoaspirate. Pertama-tama dilakukan isolasi mononuclear cell dari hasil lipoaspirate (dengan enzim collagenase) dan kemudian dikultur. Sebagai konfirmasi didapatkannya populasi sel MSC yang homogen, dilakukan analisa ekspresi CD45 dengan menggun akan flow cytometry. Setelah itu, dilakukan isolasi mRNA yang kemudian ditranskripsi balik dan diamplifikasi dengan primer forward dan reverse spesifik FcγRIIa, β-actin, CD45 melalui proses reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR). Amplicon RT-PCR tersebut dievaluasi melalui elektroforesis dan kemudian dianalisa.

Hasil kultur menunjukkan karakteristik MSC yaitu melekat di dasar plate kultur dan memiliki bentuk spindle menyerupai fibroblast. Analisa dengan flow cytometry menunjukkan bahwa MSC tidak mengekspresikan CD45. Hasil visualisasi RT-PCR dengan primer FcγRIIa didapatkan band dengan ukuran 300 bp dan 400 bp. Hasil visualisasi RT-PCR dengan primer β-actin didapatkan band dengan ukuran antara 200 bp dan 250 bp. Sedangkan hasil visualisasi RT-PCR dengan primer CD45 tidak didapatkan band.

Kesimpulan penelitian ini adalah stem cell yang diisolasi dari lipoaspirate mengekspresikan FcγRIIa yang merupakan reseptor IgG dalam bentuk kompleks imun.

ABSTRACT

DETECTION OF FcγRIIa IN STEM CELL ISOLATED FROM LIPOASPIRATE

Devina Marchita I.S., 2009. Supervisor I : Caroline Tan Sardjono, dr.PhD Co-Supervisor : Laella K. Liana,dr.M.Kes.Sp.P.A.

Within the last few years, cell-based therapy has been rapidly developed as a potential medical treatment. Cell-based therapy offers the possibility of renewable cells and tissues using human stem cell. However, little has been known about the immunogenicity profiles of stem cell. Based on this condition, it becomes an interest for many researchers to investigate stem cell immunogenicity profiles especially those isolated from lipoaspirates.

The objective of this study is to detect the expression of FcγRIIa on stem cells isolated from lipoaspirate. FcγRIIa is a molecule responsible for immune complex clearance. Thus the detection of this receptor will give an insight into immunogenicity profile of stem cells.

Experimental object in this study was stem cell isolated from lipoaspirate. First of all, mononuclear cell was isolated from lipoaspirate (by collagenase digest). Then, the cells were cultured to isolate mesenchymal stem cell (MSC) from other mononuclear cells. Furthermore, a flow cytometry assay was done to confirm the homogenous MSC population by using CD45 as a marker for mature leukocyte. From the cultured cells mRNA was isolated and subjected to reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR). The amplification was done using FcγRIIa, β-actin, and CD45 primers. Finally, amplicons of RT-PCR were analyzed following the electrophoresis process.

The cells cultured showed MSC characteristics including adherence to plastic discs and the fibroblast-like appearance. Analysis by flow cytometry confirmed the cells isolated were MSC as they lacked of CD45 expression. Visualisation of RT-PCR amplicon using FcγRIIa primer showed a band with the expected size laid between the 300 bp to 400 bp. Visualisation of RT-PCR amplicon using β-actin primer showed a band with the expected size laid between the 200 bp to 250 bp. Visualisation of RT-PCR amplicon using CD45 primer showed no band.

This study concludes that stem cell isolated from lipoaspirate expressed FcγRIIa based on the RNA detection assay using RT-PCR.

viii DAFTAR ISI

JUDUL ...i

LEMBAR PERSETUJUAN... ii

SURAT PERNYATAAN... iii

ABSTRAK. ...iv

ABSTRACT ...v

KATA PENGANTAR ... vi

DAFTAR ISI ... viii

DAFTAR TABEL ...x

DAFTAR GAMBAR ...xi

DAFTAR GRAFIK...xii

DAFTAR LAMPIRAN... xiii

BAB I PENDAHULUAN 1.1 Latar Belakang Masalah ...1

1.2 Identifikasi Masalah ...2

1.3 Maksud dan Tujuan ...2

1.4 Manfaat Penelitian...2

1.5 Kerangka Pemikiran ...2

1.6 Metode Penelitian ...3

1.7 Lokasi dan Waktu Penelitian ...3

BAB II TINJAUAN PUSTAKA 2.1 Stem cell ...4

2.1.1 Definisi stem cell...4

2.1.2 Karakteristik stem cell ...4

2.1.2 Pembagian stem cell ...6

2.2 Mesenchymal stem cell ...9

2.2.1 Definisi mesenchymal stem cell ...9

2.2.2 Sumber mesenchymal stem cell ...9

2.2.3 Karakteristik mesenchymal stem cell ...10

2.2.4 Immunomodulasi mesenchymal stem cell ...12

2.2.5 Aplikasi klinis mesenchymal stem cell...14

2.3 Fragment crystallizable receptor (Fc receptor / FcR)...15

2.3.1 Definisi Fc receptor ...15

2.3.2 Fc gamma receptor ...17

2.4 Flow cytometry ...20

2.5 Polymerase chain reaction...25

BAB III METODE PENELITIAN

3.1 Objek Penelitian ...31

3.2 Metode Penelitian ...31

3.3 Alat dan Bahan ...31

3.3.1 Bahan-bahan yang digunakan... 31

3.3.2 Alat-alat yang digunakan...37

3.4 Diagram Kerja ...38

3.5 Cara Kerja ...39

3.5.1 Thawing cell...39

3.5.1.1 Thawing mesenchymal stem cell ... 39

3.5.1.2 Thawing peripheral blood mononuclear cell ... 40

3.5.2 Analisis flow cytometry dengan menggunakan alat fluoresences activated cells sorting ... 40

3.5.3 Isolasi messenger RNA (mRNA)...41

3.5.4 Reverse transcription polymerase chain reaction ...42

3.5.5 Polymerase chain reaction (PCR) untuk memeriksa kontaminasi DNA...44

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN 4.1 Hasil kultur mesenchymal stem cell (MSC) selama 14 hari...46

4.2 Deteksi ekspresi CD45 pada MSC dibandingkan dengan PBMC...47

4.3 Deteksi ekspresi FcγRIIa pada MSC ...50

BAB V KESIMPULAN 5.1 Kesimpulan...55

5.2 Saran ...55

DAFTAR PUSTAKA ...56

LAMPIRAN ...60

x

DAFTAR TABEL

Tabel 3.1 Primer yang digunakan ...32

Tabel 3.2 Master mix one step PCR yang digunakan dalam reaksi RT-PCR dengan primer β-actin, FcγRIIa dan CD45...42

Tabel 3.3 Program one step RT-PCR dengan primer spesifik β-actin dan FcγRIIa. ...43

Tabel 3.4 Program one step RT-PCR dengan primer spesifik CD45...43

Tabel 3.5 Master mix PCR dengan primer spesifik FcγRIIa ...44

DAFTAR GAMBAR

Gambar 2.1 Pembelahan dan differensiasi stem cell ...5

Gambar 2.2 Isolasi dan kultur human ESC dari blastocysts ...8

Gambar 2.3 Differensiasi MSC ...11

Gambar 2.4 Morfologi MSC dalam kultur...11

Gambar 2.5 Siklus pembelahan sel...14

Gambar 2.6 Fc region...16

Gambar 2.7 Fc receptor. ... 16

Gambar 2.8 Human Fc gamma receptors ... 18

Gambar 2.9 Mekanisme antigen-antibodi melalui Fc receptor yang menyebabkan terjadinya inflamasi ...19

Gambar 2.10 Pengikatan antibodi yang telah terkonjugasi zat fluorescent pada antigen permukaan suatu sel...22

Gambar 2.11 Flow cytometry secara skematik...22

Gambar 2.12 Forward scatter and side scatter...23

Gambar 2.13 Hasil analisa dengan flow cytometry ditampilkan dalam bentuk histogram...23

Gambar 2.14 Hasil analisa FSC/SSC darah lengkap dengan flow cytometry ditampilkan dalam bentuk dot plot ...24

Gambar 2.15 Hasil analisa ekspresi CD45 darah lengkap yang dikonjugasi dengan phycoerythrin (PE) dengan flow cytometry ditampilkan dalam bentuk dot plot...24

Gambar 2.16 Amplikasi pada PCR yang terjadi secara eksponensial ...28

Gambar 2.17 Siklus PCR ...28

Gambar 2.18 Transkripsi dan translasi ...29

Gambar 4.1 Hasil kultur mesenchymal stem cell selama 14 hari dengan perbesaran 400X ...47

Gambar 4.2 Molekul FITC ...48

Gambar 4.3 Visualisasi hasil one step RT-PCR pada gel agarosa 2.5%...50

Gambar 4.4 Struktur β-actin... 51

xii DAFTAR GRAFIK

Grafik 4.1 Hasil analisis dengan menggunakan flowcytometry menggambarkan populasi sel MSC hasil kultur (CD45-). Sel mononuklear yang berasal dari darah perifer/ PBMC (CD45+) digunakan sebagai kontrol positif. Isotype control digunakan

DAFTAR LAMPIRAN

60

LAMPIRAN Foto Alat

Timbangan mikro (Precisa) Petri dish NunclonSurface (NUNC)

Biological Safety Cabinet (NUAIRE) Mesin elektroforesis (BioRad)

Incubator CO2 Excella ECO 170 Mesin Polymerase Chain Reaction (New Brunswick Scientific) (PCR) (Eppendorf)

61

Inkubator (Memmert) Gel documentation tools G-Box (Syngene)

Vortexer (BioRad) Pipet mikro (BioRad)

Sentrifuge (Eppendorf) Inverted microscope (Zeiss Axiovert 40 CFL)

62

63

RIWAYAT HIDUP

Nama : Devina Marchita I.S

NRP : 0510005

Tempat/Tanggal Lahir : Jember/ 29 Maret 1987

Alamat : Jl. Kedung Bunder 22 Ambulu-Jember

Riwayat Pendidikan :

SDK Yos Sudarso, Ambulu (1993-1999) SLTPK Maria Fatima, Jember (1999-2002) SMUK St. Paulus, Jember (2002-2005)

Fakultas Kedokteran Universitas Kristen Maranatha, Bandung (2005-sekarang)

1 BAB I PENDAHULUAN

1.1Latar Belakang

Beberapa tahun terakhir, terapi kesehatan mulai berkembang ke arah cell-based therapy. Cell-cell-based therapy merupakan terapi dengan menggunakan human stem cell yang memiliki potensi untuk memperbaharui sel dan jaringan. Cell based therapy ini diharapkan dapat mengobati berbagai penyakit yang belum dapat disembuhkan sekarang seperti penyakit Parkinson, penyakit Alzheimer, stroke, luka bakar, penyakit jantung, diabetes, osteoarthritis, dan rheumatoid arthritis (National Institute of Health, 2008).

Pada saat ini mesenchymal stem cell (MSC) menjadi kandidat dalam cell-based therapy. MSC dapat diperoleh dari beberapa sumber antara lain tali pusat, liver fetus, darah, sumsum tulang, dan paru-paru. Selain itu, jaringan lemak juga dapat menjadi sumber alternatif MSC dimana MSC merupakan populasi stem cell terbanyak dalam jaringan lemak. Lebih lanjut, MSC dapat diisolasi dari lipoaspirate sisa liposuction. MSC ini dikenal juga dengan sebutan processed lipoaspirate cell / PLA cell ( Kern et al., 2006).

Berdasarkan penelitian sebelumnya, MSC dikembangkan sebagai therapy-resistent severe acute graft-versus host disease, terapi untuk perbaikan jaringan, terapi untuk rejeksi pada organ allograft serta untuk penyakit autoimun (Le Blanc and Ringden, 2007). Selain itu, MSC juga dikembangkan sebagai terapi Diabetes Mellitus tipe I karena kemampuannya dalam berdifferensiasi menjadi sel β pankreas (Liu and Zhong, 2007). Akan tetapi, pengetahuan mengenai imunogenisitas stem cell khususnya yang diisolasi dari lipoaspirate masih sangatlah minim. Menjadi hal yang menarik bagi peneliti untuk meneliti lebih lanjut mengenai imunogenisitas stem cell yang diisolasi dari lipoaspirate khususnya apakah mengekspresikan FcγRIIa yang memegang peranan penting dalam mekanisme terjadinya penyakit autoimun.

2

1.2Identifikasi Masalah

Apakah stem cell yang diisolasi dari lipoaspirate mengekspresikan FcγRIIa? 1.3Maksud dan Tujuan

Maksud dari penelitian ini adalah untuk mempelajari imunogenisitas stem cell yang diisolasi dari lipoaspirate.

Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mendeteksi ekspresi FcγRIIa pada stem cell yang diisolasi dari lipoaspirate.

1.4Manfaat Penelitian

Karya tulis ini diharapkan dapat dijadikan penelitian pendahuluan bagi para peneliti selanjutnya dalam melakukan penelitian lebih lanjut mengenai imunogenisitas stem cell yang diperoleh dari lipoaspirate dan diharapkan juga dapat membantu dalam penyusunan strategi cell-based therapy.

1.5Kerangka Penelitian

Saat ini MSC menjadi kandidat dalam cell-based therapy (Sundin et al., 2007). Secara in vitro, dikatakan MSC dapat menghambat proliferasi sel limfosit T, limfosit B, sel dendritik, dan Natural Killer cells (Tyndall et al., 2007). Oleh karena sifat imunosupresi yang dimiliki oleh MSC tersebut, MSC dikembangkan sebagai terapi pencegahan terhadap graft versus host reaction setelah transplantasi haematopoeitic stem cell secara allogenic (Le Blanc and Ringden, 2007). Lebih lanjut, MSC dikembangkan sebagai terapi regeneratif, terapi untuk penyakit autoimun, dan berbagai penyakit metabolik seperti penyakit Hurler dan lain-lain (Sundin et al., 2007).

3

FcγRIIa merupakan Fcγ reseptor yang diekspresikan hampir di setiap sel imun dalam tubuh manusia. Molekul ini memegang peran penting dalam terjadinya aktivasi sel imun yang juga merupakan aktivator inflamasi yang poten. FcγRIIa memiliki sifat low affinity terhadap monomer Imunoglobulin G tetapi high avidity terhadap kompleks imun. FcγRIIa banyak terdapat pada sel-sel inflamasi seperti neutrofil, eosinofil, limfosit B, platelet, sel mast, sel Langerhans, dan sel dendritik. Lebih lanjut, FcγRIIa memegang peran penting dalam mekanisme terjadinya penyakit autoimun, dimana inflamasi yang diinduksi oleh antibodi merupakan komponen penting dalam penyakit autoimun (Caroline Tan Sardjono et al., 2003).

Menjadi hal yang menarik bagi peneliti untuk meneliti lebih lanjut tentang apakah MSC mengekspresikan FcγRIIa yang merupakan reseptor IgG dalam bentuk kompleks imun karena hal ini penting dalam penyusunan strategi terapi.

1.6Metode penelitian

Penelitian laboratory experimental ini merupakan suatu cara untuk mendeteksi apakah stem cell yang diisolasi dari lipoaspirate mengekspresikan FcγRIIa.

1.7Lokasi dan Waktu Penelitian

Lokasi Penelitian : Stem Cell and Cancer Institute Jakarta Waktu Penelitian : Januari 2008 – Desember 2008

BAB V

KESIMPULAN DAN SARAN

5.1Kesimpulan

Berdasarkan hasil penelitian dapat disimpulkan bahwa stem cell yang diisolasi dari lipoaspirate mengekspresikan FcγRIIa yang merupakan reseptor IgG dalam bentuk kompleks imun.

5.2Saran

Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut mengenai immunogenicity stem cell khususnya yang diisolasi dari lipoaspirate.

Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut mengenai ikatan MSC dengan kompleks imun melalui FcγRIIa dan bagaimana proses downstream signal yang terjadi setelah pengikatan kompleks imun.

56

DAFTAR PUSTAKA

Abdi R., Fiorina P., Adra C.N, AtkinsonM., SayeghM.H. 2008. Immunomodulation by mesenchymal stem cells. A potential therapeutic strategy for type 1 diabetes. Diabetes, 57:1759-1767.

Brown T.A. 1995. Gene cloning, an introduction 3rd ed. Chapman and Hall. p228-38. BD Biosciences. 2000. Introduction to flow cytometry : a learning guide. info.med.yale.edu/immuno/cytometry/docs/pdf/introduction.pdf. August 02nd, 2008.

Caroline Tan Sardjono. Role of FcγRIIa in inflammation and its use as a target for anti-inflammatory therapies.Victoria: University of Melbourne, 2003. Dissertation.

Caroline Tan Sardjono, Mottram P.L., Hogarth P.M. 2003. The role of FcγRIIa as an inflammatory mediator in rheumathoid arthritis and systemic lupus erythematosus. Immunology and Cell Biology, 81: 374-81.

Caroline Tan Sardjono, Mottram P.L., Van de Velde N.C., Powell M.S., Power D., Slocombe R.F. et al. 2005. Development of spontaneous multisystem autoimmune disease and hypersensitivity to antibody-induced inflammation in Fcγ Receptor IIa-transgenic mice. Arthritis & Rheumatology, 52: 3320-9. Chamberlain G., Fox J., Ashton B., Middleton J. 2007. Mesenchymal stem cells: their

phenotype, differentiation capacity, immunological features and potensial homing. Stem Cells, 25: 2739 -2749.

Clarke E. 2004. Culture of human and mouse mesenchymal cells. In: Helgasson C.D., Miller C.L. eds: Basic cell culture protocols, 3rd ed. Totowa: Humana Press. p.173-186.

Committee on the Biological and Biomedical Applications of Stem Cells Research, Life Sciences National Research Council, Neurosciences and Behavioral Health Institute of Medicine. 2002. Stem cells and the future of regenerative medicine. Washington DC: National Academy Press.

Dennis J.E., Caplan A. I. 2004. Bone marrow mesenchymal stem cells. In: Sell S. ed: Stem cells handbook. Totowa: Humana Press. p.107-18.

57

Dominici M., Le Blanc K., Mueller I., Slaper-Cortenbach I., Marini F.C., Krause D.S. et al. 2006. Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stromal cells. The International Society for Cellular Therapy position statement. Cytotherapy, 8: 315-317.

Doyonnas R., Blau H.M. 2004. What is the future for stem cells research? In: Sell S. ed: Stem cells handbook. Totowa: Humana Press. p.491-500.

Gajkowska A., Oldak T., Jastrzewska M., Machaj E.K., Walewski K., Kreszewska E. 2006. Flow cytometric enumeration of CD34+ haematopoeitic stem and progenitor cells in leukapheresis product and bone marrow for clinical transplantation: a comparison method. Folia Histochemica et Cytobiologica, 44: 53-60.

Goebel S.U., Iwamoto M., Raffeld M., Gibril F., Hou W., Serrano J. et al. 2002. HER-2/ neu expression and gene amplification in gastrinoma: correlation with tumor biology, growth, aggressiveness. Cancer Research, 62: 3702-10.

Kern S., Eichler H., Stoeve J., Kluter H., Bieback K. 2006. Comparative analysis of mesenchymal stem cells from bone marrow, umbilical cord blood, or adipose tissue. Stem Cells, 24: 1294-301.

Le Blanc K., Rasmusson I., Sundberg B., Gotherstrom C., Hassan M., Uzunel M. et al. 2004. Treatment of severe acute graft-versus host disease with third party haploidentical mesenchymal stem cells. The Lancet, 363: 1439-40.

Le Blanc K., Ringden O. 2007. Immunomodulation by mesenchymal stem cells and clinical experience. J of Internal Medicine, 262: 509-25.

Liu M., Zhong C.H. 2007. Mesenchymal stem cells: biology and clinical potential in type 1 diabetes therapy. Journal of Cellular and Molecular, 12: 1155-68. Lodish, Berk, Matsudaira, Kaiser, Krieger, Scott et al., 2003. Molecular cell biology.

5th ed. New York: W H Freeman & Co. p 1-29.

National Institute of Health. 2008. Stem cells basics. Stem cells information. http://stemcells.nih.gov/info/basics/. January 31th, 2008.

Peanut. 2004. Housekeeping gene. http://everything2.com/index.pl?node_id=1513 423. September 29th, 2008

58

Pietersz G.A., Mottram P.L., van de Velde N., Caroline Tan Sardjono, Esparon S., Ramsland P. et al. 2006. Immune complex induced arthritis is inhibited by small chemical entities that are designed to interact with FcγRIIa receptors in transgenic mice. FcR Drugs paper.

Rasmusson I., Le Blanc K., Sundberg B., Ringden O. 2007. Mesenchymal stem cell stimulate antibody secretion in human B cells. Scandinavian Journal of Immunology, 65: 336-343.

Rahman M. 2006. Introduction to flow cytometry. www.ab-direct.com/uploads/Flow-Cytometry.pdf. September 19th, 2008.

Sell S. 2004. Stem cells. In: Sell S. ed: Stem cells handbook. Totowa: Humana Press. p.1-18.

Sundin M., Ringden O., Sundberg B., Nava S., Gotherstorm C., Le Blanc K. 2007. No alloantibodies against mesenchymal stromal cells but presence of anti-fetal calf serum antibodies, after transplantation in allogeneic hematopoietic stem cell recipients.Haematologica, 92: 1208-1215.

Tyndall A., Walker U.A., Cope A., Dazzi F., De Bari C., Fibbe W. et al., 2007. Immunomodulatory properties of mesenchymal stem cells: a review based on interdisciplinary meeting held at the Kennedy Institute of Rheumatology Division, London, UK, 31 October 2005. Arthritis Research & Therapy, 9: 301.

Yoder M.C., Mead L.E., Prater D., Krier T.R., Mroueh K.N., Li F. et al. 2007. Redefining endothelial progenitor cells via clonal analysis haematopoeitic stem/progenitor cell principals. Blood, 109: 1801-9.

Zuk P.A., Zhu M., Mizuno H., Huang J., Futrell J.W., Katz A.J. et al. 2001. Multilineage cells from human adipose tissue: implications for cell-based therapies. Tissue Engineering, 7: 221-8.

http://www.abcam.com/index.html?pageconfig=resource&rid=10419. November

03rd, 2008.

http://www.copewithcytokines.de/cope.cgi?key=RT-PCR%20quantitation%20of %20cytokines. December 24th, 2008.

59

http://en.wikipedia.org/wiki/PCR. February 03rd, 2008.

http://en.wikipedia.org/wiki/Fluorescent-activated_cell_sorting#Fluorescence-activated_cell_sorting. August 25th, 2008.

http://en.wikipedia.org/wiki/CD45. September 29th, 2008. http://en.wikipedia.org/wiki/FITC. July 23rd, 2008. http://en.wikipedia.org/wiki/ACTB. July 23rd, 2008.

http://en.wikipedia.org/wiki/Fc_receptor. October 9th, 2008. http://en.wikipedia.org/wiki/RT-PCR. October 20th, 2008.

http://en.wikipedia.org/wiki/Regulatory_T_cell. November 19th, 2008.

www.homepage.montana.edu/~shalonen /Lecture%207%202008.pdf. November 25th,

2008.

http://images2.clinicaltools.com/images/gene/proteinsyn.jpg. December 17th, 2008. http://www.promega.com/paguide/chap1.htm. November 07th , 2008.

http://www.usbweb.com/category.asp?special=&cat=145&id=78350.October 22nd, 2008.

http://www.usbweb.com/category.asp?special=&cat=145&id=78355. October 22nd, 2008.

FcγRIIa merupakan Fcγ reseptor yang diekspresikan hampir di setiap sel imun dalam tubuh manusia. Molekul ini memegang peran penting dalam terjadinya aktivasi sel imun yang juga merupakan aktivator inflamasi yang poten. FcγRIIa memiliki sifat low affinity terhadap monomer Imunoglobulin G tetapi high avidity terhadap kompleks imun. FcγRIIa banyak terdapat pada sel-sel inflamasi seperti neutrofil, eosinofil, limfosit B, platelet, sel mast, sel Langerhans, dan sel dendritik. Lebih lanjut, FcγRIIa memegang peran penting dalam mekanisme terjadinya penyakit autoimun, dimana inflamasi yang diinduksi oleh antibodi merupakan komponen penting dalam penyakit autoimun (Caroline Tan Sardjono et al., 2003).

Menjadi hal yang menarik bagi peneliti untuk meneliti lebih lanjut tentang apakah MSC mengekspresikan FcγRIIa yang merupakan reseptor IgG dalam bentuk kompleks imun karena hal ini penting dalam penyusunan strategi terapi.

1.6Metode penelitian

Penelitian laboratory experimental ini merupakan suatu cara untuk mendeteksi apakah stem cell yang diisolasi dari lipoaspirate mengekspresikan FcγRIIa.

1.7Lokasi dan Waktu Penelitian

Lokasi Penelitian : Stem Cell and Cancer Institute Jakarta Waktu Penelitian : Januari 2008 – Desember 2008

55

BAB V

KESIMPULAN DAN SARAN

5.1Kesimpulan

Berdasarkan hasil penelitian dapat disimpulkan bahwa stem cell yang diisolasi dari lipoaspirate mengekspresikan FcγRIIa yang merupakan reseptor IgG dalam bentuk kompleks imun.

5.2Saran

Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut mengenai immunogenicity stem cell khususnya yang diisolasi dari lipoaspirate.

Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut mengenai ikatan MSC dengan kompleks imun melalui FcγRIIa dan bagaimana proses downstream signal yang terjadi setelah pengikatan kompleks imun.

56

Abdi R., Fiorina P., Adra C.N, AtkinsonM., SayeghM.H. 2008. Immunomodulation by mesenchymal stem cells. A potential therapeutic strategy for type 1 diabetes. Diabetes, 57:1759-1767.

Brown T.A. 1995. Gene cloning, an introduction 3rd ed. Chapman and Hall. p228-38. BD Biosciences. 2000. Introduction to flow cytometry : a learning guide.

info.med.yale.edu/immuno/cytometry/docs/pdf/introduction.pdf. August 02nd, 2008.

Caroline Tan Sardjono. Role of FcγRIIa in inflammation and its use as a target for anti-inflammatory therapies.Victoria: University of Melbourne, 2003. Dissertation.

Caroline Tan Sardjono, Mottram P.L., Hogarth P.M. 2003. The role of FcγRIIa as an inflammatory mediator in rheumathoid arthritis and systemic lupus erythematosus. Immunology and Cell Biology, 81: 374-81.

Caroline Tan Sardjono, Mottram P.L., Van de Velde N.C., Powell M.S., Power D., Slocombe R.F. et al. 2005. Development of spontaneous multisystem autoimmune disease and hypersensitivity to antibody-induced inflammation in Fcγ Receptor IIa-transgenic mice. Arthritis & Rheumatology, 52: 3320-9. Chamberlain G., Fox J., Ashton B., Middleton J. 2007. Mesenchymal stem cells: their

phenotype, differentiation capacity, immunological features and potensial homing. Stem Cells, 25: 2739 -2749.

Clarke E. 2004. Culture of human and mouse mesenchymal cells. In: Helgasson C.D., Miller C.L. eds: Basic cell culture protocols, 3rd ed. Totowa: Humana Press. p.173-186.

Committee on the Biological and Biomedical Applications of Stem Cells Research, Life Sciences National Research Council, Neurosciences and Behavioral Health Institute of Medicine. 2002. Stem cells and the future of regenerative

medicine. Washington DC: National Academy Press.

Dennis J.E., Caplan A. I. 2004. Bone marrow mesenchymal stem cells. In: Sell S. ed:

57

Dominici M., Le Blanc K., Mueller I., Slaper-Cortenbach I., Marini F.C., Krause D.S.

et al. 2006. Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stromal

cells. The International Society for Cellular Therapy position statement.

Cytotherapy, 8: 315-317.

Doyonnas R., Blau H.M. 2004. What is the future for stem cells research? In: Sell S. ed: Stem cells handbook. Totowa: Humana Press. p.491-500.

Gajkowska A., Oldak T., Jastrzewska M., Machaj E.K., Walewski K., Kreszewska E. 2006. Flow cytometric enumeration of CD34+ haematopoeitic stem and progenitor cells in leukapheresis product and bone marrow for clinical transplantation: a comparison method. Folia Histochemica et Cytobiologica, 44: 53-60.

Goebel S.U., Iwamoto M., Raffeld M., Gibril F., Hou W., Serrano J. et al. 2002. HER-2/ neu expression and gene amplification in gastrinoma: correlation with tumor biology, growth, aggressiveness. Cancer Research, 62: 3702-10.

Kern S., Eichler H., Stoeve J., Kluter H., Bieback K. 2006. Comparative analysis of mesenchymal stem cells from bone marrow, umbilical cord blood, or adipose tissue. Stem Cells, 24: 1294-301.

Le Blanc K., Rasmusson I., Sundberg B., Gotherstrom C., Hassan M., Uzunel M. et

al. 2004. Treatment of severe acute graft-versus host disease with third party

haploidentical mesenchymal stem cells. The Lancet, 363: 1439-40.

Le Blanc K., Ringden O. 2007. Immunomodulation by mesenchymal stem cells and clinical experience. J of Internal Medicine, 262: 509-25.

Liu M., Zhong C.H. 2007. Mesenchymal stem cells: biology and clinical potential in type 1 diabetes therapy. Journal of Cellular and Molecular, 12: 1155-68. Lodish, Berk, Matsudaira, Kaiser, Krieger, Scott et al., 2003. Molecular cell biology.

5th ed. New York: W H Freeman & Co. p 1-29.

National Institute of Health. 2008. Stem cells basics. Stem cells information.

http://stemcells.nih.gov/info/basics/. January 31th, 2008.

Peanut. 2004. Housekeeping gene. http://everything2.com/index.pl?node_id=1513

Pietersz G.A., Mottram P.L., van de Velde N., Caroline Tan Sardjono, Esparon S., Ramsland P. et al. 2006. Immune complex induced arthritis is inhibited by small chemical entities that are designed to interact with FcγRIIa receptors in transgenic mice. FcR Drugs paper.

Rasmusson I., Le Blanc K., Sundberg B., Ringden O. 2007. Mesenchymal stem cell stimulate antibody secretion in human B cells. Scandinavian Journal of

Immunology, 65: 336-343.

Rahman M. 2006. Introduction to flow cytometry.

www.ab-direct.com/uploads/Flow-Cytometry.pdf. September 19th, 2008.

Sell S. 2004. Stem cells. In: Sell S. ed: Stem cells handbook. Totowa: Humana Press. p.1-18.

Sundin M., Ringden O., Sundberg B., Nava S., Gotherstorm C., Le Blanc K. 2007. No alloantibodies against mesenchymal stromal cells but presence of anti-fetal calf serum antibodies, after transplantation in allogeneic hematopoietic stem cell recipients.Haematologica, 92: 1208-1215.

Tyndall A., Walker U.A., Cope A., Dazzi F., De Bari C., Fibbe W. et al., 2007. Immunomodulatory properties of mesenchymal stem cells: a review based on interdisciplinary meeting held at the Kennedy Institute of Rheumatology Division, London, UK, 31 October 2005. Arthritis Research & Therapy, 9: 301.

Yoder M.C., Mead L.E., Prater D., Krier T.R., Mroueh K.N., Li F. et al. 2007. Redefining endothelial progenitor cells via clonal analysis haematopoeitic stem/progenitor cell principals. Blood, 109: 1801-9.

Zuk P.A., Zhu M., Mizuno H., Huang J., Futrell J.W., Katz A.J. et al. 2001. Multilineage cells from human adipose tissue: implications for cell-based therapies. Tissue Engineering, 7: 221-8.

http://www.abcam.com/index.html?pageconfig=resource&rid=10419. November 03rd, 2008.

http://www.copewithcytokines.de/cope.cgi?key=RT-PCR%20quantitation%20of %20cytokines. December 24th, 2008.

59

http://en.wikipedia.org/wiki/PCR. February 03rd, 2008.

http://en.wikipedia.org/wiki/Fluorescent-activated_cell_sorting#Fluorescence-activated_cell_sorting. August 25th, 2008.

http://en.wikipedia.org/wiki/CD45. September 29th, 2008. http://en.wikipedia.org/wiki/FITC. July 23rd, 2008. http://en.wikipedia.org/wiki/ACTB. July 23rd, 2008.

http://en.wikipedia.org/wiki/Fc_receptor. October 9th, 2008. http://en.wikipedia.org/wiki/RT-PCR. October 20th, 2008.

http://en.wikipedia.org/wiki/Regulatory_T_cell. November 19th, 2008.

www.homepage.montana.edu/~shalonen /Lecture%207%202008.pdf. November 25th, 2008.

http://images2.clinicaltools.com/images/gene/proteinsyn.jpg. December 17th, 2008. http://www.promega.com/paguide/chap1.htm. November 07th , 2008.

http://www.usbweb.com/category.asp?special=&cat=145&id=78350.October 22nd, 2008.

http://www.usbweb.com/category.asp?special=&cat=145&id=78355. October 22nd, 2008.