ISOLASI DAN ELUSIDASI STRUKTUR SENYAWA PENANDA DARI EKSTRAK MENIRAN (Phyllanthus niruri L.) Isolasi Dan Elusidasi Struktur Senyawa Penanda Dari Ekstrak Meniran (Phyllanthus Niruri L.).
ISOLASI DAN ELUSIDASI STRUKTUR SENYAWA PENANDA
DARI EKSTRAK MENIRAN (Phyllanthus niruri L.)
SKRIPSI
Oleh:
NORMAIDAH
K 100110129
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA
SURAKARTA
2015
i
ISOLASI DAN ELUSIDASI STRUKTUR SENYAWA PENANDA
DARI EKSTRAK MENIRAN (Phyllanthus niruri L.)
SKRIPSI
Diajukan untuk memenuhi salah satu syarat mencapai
derajat Sarjana Farmasi (S.Farm) pada Fakultas Farmasi
Universitas Muhammadiyah Surakarta
di Surakarta
Oleh:
NORMAIDAH
K 100110129
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA
SURAKARTA
2015
ii
iii
iv
KATA PENGANTAR
Assalamu’alaikum warahmatullahi wabarakatuh.
Alhamdulillah, puji syukur hanya untuk Allah SWT yang selalu memberikan
petunjuk dan kekuatan sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi dengan judul
‘‘Isolasi dan Elusidasi Struktur Senyawa Penanda dari Ekstrak Meniran (Phyllanthus
niruri L.)”. Skripsi ini disusun untuk memenuhi salah satu syarat mencapai gelar
Sarjana Farmasi pada Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta.
Dengan segala kerendahan hati, penulis mengucapkan terima kasih kepada:
1.
Bapak Azis Saifudin, Ph.D., Apt., selaku Dekan Fakultas Farmasi Universitas
Muhammadiyah Surakarta.
2.
Bapak Suprapto, M. Sc., Apt., selaku dosen pembimbing akademik.
3.
Bapak Dr. Muhammad Da’i, M.Si., Apt. selaku dosen pembimbing utama dan
Ibu Erindyah Retno Wikantyasning, Ph.D., Apt., selaku dosen pembimbing
pendamping.
4.
Bapak Broto Santoso, M.Sc., Apt., selaku dosen penguji I serta Bapak Dedi
Hanwar, M.Si., Apt., selaku reviewer dan penguji II.
5.
Bapak Andi Suhendi, M.Sc., Apt., selaku dosen yang membimbing penulis, serta
Bapak Alwathoni dan Bapak Rahmat, selaku laboran yang selalu menemani dan
membantu penulis dalam menyelesaikan penelitian di Lab. Kimia Farmasi UMS.
6.
Bapak dan Ibu dosen Fakultas Farmasi UMS yang telah membagi ilmu dan
pengalaman.
7.
Kedua orang tua tercinta, Ibu Hamidah dan Bapak Imansyah, S.E., yang selalu
memberi semangat dan doa serta Kakek Ilmi dan Nenek Salbiah.
8.
Teman satu perjuangan (Indah, Gilang, Yaya, Raudah, Hadi, Fadly, Rifqi,
Choirul, Gita, dan Rosma)
9.
Teman-teman serta pihak lain yang tidak dapat penulis sebutkan satu per satu.
Wassalamu'alaikum warahmatullahi wabarakatuh.
Surakarta, 30 Desember 2014
Normaidah
v
DAFTAR ISI
Halaman
HALAMAN SAMPUL DEPAN .................................................................................. ii
HALAMAN SAMPUL DALAM ................................................................................ ii
PENGESAHAN SKRIPSI .......................................................................................... iii
DEKLARASI .............................................................................................................. iv
KATA PENGANTAR ................................................................................................. v
DAFTAR ISI ............................................................................................................... vi
DAFTAR GAMBAR ................................................................................................. vii
DAFTAR TABEL ....................................................................................................... ix
DAFTAR LAMPIRAN ................................................................................................ x
DAFTAR SINGKATAN ............................................................................................ xi
INTISARI .............................................................................................................. xii
BAB I.
PENDAHULUAN ..................................................................................... 1
A. Latar Belakang Masalah......................................................................................... 1
B. Perumusan Masalah ............................................................................................... 2
C. Tujuan Penelitian ................................................................................................... 2
D. Tinjauan Pustaka .................................................................................................... 3
1. Meniran (Phillanthus niruri L.)..................................................... 3
2. Kromatotron .................................................................................. 4
3. LC-MS (Liquid Chromatoghraphy Mass Spectrum)..................... 4
4. NMR .............................................................................................. 5
E. KETERANGAN EMPIRIS.................................................................................... 5
BAB II. METODE PENELITIAN ........................................................................... 6
A. Kategori Penelitian ................................................................................................. 6
B. Bahan dan Alat yang Digunakan ........................................................................... 6
C. Tempat Penelitian .................................................................................................. 6
D. Rencana Penelitian ................................................................................................. 7
1. Persiapan simplisia P. niruri ......................................................... 7
2. Persiapan ekstrak P.niruri ............................................................. 7
3. Fraksinasi pertama menggunakan enap tuang ............................... 7
4. Optimasi Fase Gerak ..................................................................... 7
5. Kromatografi preparatif ................................................................. 7
6. Isolasi Menggunakan Kromatografi Sistem Radial (Kromatotron)8
7. Analisis Isolat Menggunakan Kromatografi Lapis Tipis (KLT) ... 8
8. Analisis Isolat Menggunakan Liquid Chromatoghraphy-Mass
Spectrum (LC-MS) ........................................................................ 9
9. Analisis Isolat Menggunakan Spektroskopi NMR......................... 9
E. Teknik Analisis ...................................................................................................... 9
BAB III. HASIL DAN PEMBAHASAN ............................................................... 10
BAB IV. KESIMPULAN DAN SARAN ............................................................... 25
DAFTAR PUSTAKA ................................................................................................ 26
LAMPIRAN .............................................................................................................. 29
vi
DAFTAR GAMBAR
Halaman
Gambar 1. Tanaman Meniran (Phyllanthus niruri L.) .................................................. 3
Gambar 2. Hasil optimasi fase gerak kloroform : metanol (8 : 2 v/v) dan fase diam
silika gel 60 F254 yang diamati menggunakan UV 366 nm, 254 nm, dan
sinar tampak menghasilkan rf 0,625 dan 0,325 pada fraksi polar ......... 11
Gambar 3. Hasil optimasi fase gerak kloroform : metanol (7 : 3 v/v) dan fase diam
silika gel 60 F254 yang diamati menggunakan UV 366 nm, 254 nm, dan
sinar tampak menghasilkan rf 0,925 dan 0,725 pada fraksi polar ......... 11
Gambar 4. Hasil orientasi KLT preparatif fraksi etil asetat menggunakan fase diam
silika gel 60 F254 dengan panjang elusi 8 cm dan fase gerak kloroform :
metanol (9 : 1 v/v) yang dilihat dengan sinar UV 366 nm (A) dan 254
nm (B) .................................................................................................... 12
Gambar 5. Hasil analisis isolat senyawa berfluoresensi kuning stabilo dengan HPLC
menggunakan fase gerak asetonitril : asam fosforat 0,1% v/v dalam
akuabidestilata (40 : 60 v/v)................................................................... 12
Gambar 6. Hasil analisis dari isolasi pertama fraksi polar menggunakan kromatotron
dengan fase diam silika gel 60 F254 dengan panjang elusi 4 cm ddan fase
gerk kloroform : metanol (7 : 3 v/v) yang dilihat dengan sinar UV 366
nm .......................................................................................................... 13
Gambar 7. Hasil analisis dari isolasi kedua fraksi polar menggunakan kromatotron
dengan fase diam silika gel 60 F254 dengan panjang elusi 4 cm ddan fase
gerk kloroform : metanol (7 : 3 v/v) yang dilihat dengan sinar UV 366
nm .......................................................................................................... 14
Gambar 8. Hasil analisis fraksi 1.8 menggunakan KLT dengan fase gerak (A)
kloroform : metanol (9 : 1 v/v), (B) kloroform : metanol (8 : 2 v/v), dan
(C) metanol : aseton (2 : 8 v/v) panjang elusi 4 cm pada sinar UV 366
nm .......................................................................................................... 14
Gambar 9. Hasil analisis fraksi 2.10-2.17 menggunakan KLT dengan fase gerak (A)
kloroform : metanol (8 : 2 v/v), (B) etil asetat : aseton (8 : 2 v/v), (C) etil
asetat : aseton (6 : 4 v/v), dan (D) etil asetat : aseton (4 : 6 v/v) panjang
elusi 4 cm pada sinar UV 366 nm .......................................................... 15
Gambar 10. Hasil analisis LC menunjukkan peak terbesar memiliki waktu retensi
0,860 menit dengan metode dari Institute of Tropical Disease-UNAIR
Surabaya................................................................................................. 15
vii
Gambar 11. Hasil ESI-LC-MS fraksi 1.8 dengan waktu retensi 0,860 menit memiliki
base peak 222,1127 m/z menggunakan ion positif ESI-MFE-MS pada
LC-MS dengan metode dari Institute of Tropical Disease-UNAIR
Surabaya, (A) hasil semua spektra (B) analisis menggunakan database,
dan (C) hasil spektra ESI-LC-MS isobubbialin dengan ion positif (Zhou
et al., 2012) ............................................................................................ 16
Gambar 12. Struktur epibubbialin (A), isobubbialin (B), dan niruroidina (C) ........... 17
Gambar 13. Hasil analisis 13C-NMR fraksi 1.8 dengan CD3OD menggunakan
instrumen berfrekuensi 400 MHz .......................................................... 19
Gambar 14. Hasil HPLC fraksi 2.10-2.17 pada LC-MS menunjukkan peak yang lebar
dengan waktu retensi 2,600067 menit dengan metode dari LIPI-Serpong
............................................................................................................... 20
Gambar 15. Hasil ESI-LC-MS fraksi 2.10-2.17 dengan waktu retensi 2,600067 menit
memiliki base peak 219,1430 m/z menggunakan ion positif ESI-MFEMS pada LC-MS dengan metode dari LIPI-Serpong ............................ 20
Gambar 16. Hasil analisis fraksi 2.10-2.17 dengan 1H-NMR dengan CD3OD
menggunakan instrumen berfrekuensi 500 MHz ................................... 21
Gambar 17. Hasil analisis pertama fraksi 2.10-2.17 dengan 13C-NMR dengan CD3OD
menggunakan instrumen berfrekuensi 500 MHz ................................... 22
Gambar 18. Hasil analisis kedua fraksi 2.10-2.17 dengan 13C-NMR dengan CD3OD
menggunakan instrumen berfrekuensi 500 MHz ................................... 22
Gambar 19. Hasil 1H-NMR 400 MHz fraksi 1.8 (2-1) ............................................... 31
Gambar 20. Hasil 1H-NMR 400 MHz fraksi 1.8 (2-2) ............................................... 31
Gambar 21. Hasil 1H-NMR 400 MHz fraksi 1.8 (2-3) ............................................... 32
viii
DAFTAR TABEL
Halaman
Tabel 1. Analisis 1H-NMR Epibubbialin (A) dan Isobubbialin (B1) pada 1H-NMR
400 MHz dalam CDCl3 (Houghton et al., 1996), Isobubbialin pada 1H-NMR
500 MHz dalam CD3OD (Zhu et al., 2011) (B2) (Zhou et al., 2012) (B3),
niruroidina pada 1H-NMR 500 MHz dalam CDCl3 (Babady-Bila et al.,
1996), dan fraksi 1.8 pada 1H-NMR 400 MHz dalam CD3OD
(dalam
ppm) ............................................................................................................. 17
Tabel 2. Nilai kekuatan elusi pada optimasi fase gerak .............................................. 29
Tabel 3. Hasil rendemen maserasi dan fraksinasi ....................................................... 30
ix
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
Lampiran 1. Nilai kekuatan elusi pada optimasi fase gerak....................................... 29
Lampiran 2. Hasil rendemen maserasi dan fraksinasi ................................................ 30
Lampiran 3. Hasil 1H-NMR isolat 1.8 pada frekuensi 400 MHz yang dibaca
menggunakan software MestReNova 10.0.0-14381 ............................. 31
x
DAFTAR SINGKATAN
br ddd
brs
d
dd
ddd
dt
ECC
broad doublet of doublet of doublets
broad singlet
doublet
doublet of doublet
doublet of doublet of doublets
doublet of triplet
enhanced charge capacity
g
GF
KLT
mg
gram
Gypsum Fluorosensi
Kromatografi Lapis Tipis
miligram
m
MFE
multiplet
molecular feature extraction
Mg
mL
nm
ppm
Rf
Rt
UV
PDA
miligram
mililiter
nanometer
part per million
retardation factor
retension time
Ultraviolet
photodiode array
prt
s
t
TIC
poorly resolved triplet
singlet
triplet
total ion current
xi
INTISARI
Dalam upaya pengembangan jamu menjadi obat herbal terstandar, senyawa
penanda sangat dibutuhkan dalam standardisasi. Ekstrak P. niruri memiliki berbagai
senyawa penanda seperti fillantin, hipofillantin, dan korilagin. Isolasi senyawa dari
fraksi polar P. niruri menggunakan kromatotron belum pernah dikembangkan. Pada
percobaan ini dilakukan isolasi dan elusidasi struktur untuk mendapatkan senyawa
penanda dari herba P. niruri L..
Herba P. niruri L. diekstraksi dengan metode maserasi dalam metanol.
Ekstrak difraksinasi menggunakan n-heksan, etil aetat, dan metanol : air (2 : 5 v/v).
Isolasi senyawa fraksi polar metanol : air dari ekstrak P. niruri L. dilakukan
menggunakan kromatotron dengan fase diam silika gel 60 GF254 dengan ketebalan 1
mm, jari-jari 7 cm, dan fase gerak kloroform : metanol sistem gradien. Fraksi yang
didapat selanjutnya dielusidasi struktur menggunakan ESI-LC-MS, 1H-NMR, dan
13
C-NMR.
Maserasi sebanyak 3 kali penyarian menghasilkan ekstrak dengan rendemen
18,65% b/b. Isolasi pertama menghasilkan 8 fraksi dan isolasi kedua menghasilkan 17
fraksi. Fraksi 1.8 (18 mg) diprediksi mengandung alkaloid dengan BM 221,104989
g/mol dan belum murni. Fraksi 2.10-2.17 (96,3 mg) memiliki base peak 219,1430
m/z dan masih berupa senyawa campuran dengan polaritas yang serupa. Dari
penelitian ini belum didapatkan senyawa penanda.
Kata kunci: Phyllanthus niruri L.; senyawa penanda; kromatotron; ESI-LC-MS;
NMR.
xii
DARI EKSTRAK MENIRAN (Phyllanthus niruri L.)
SKRIPSI
Oleh:
NORMAIDAH
K 100110129
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA
SURAKARTA
2015
i
ISOLASI DAN ELUSIDASI STRUKTUR SENYAWA PENANDA
DARI EKSTRAK MENIRAN (Phyllanthus niruri L.)
SKRIPSI
Diajukan untuk memenuhi salah satu syarat mencapai
derajat Sarjana Farmasi (S.Farm) pada Fakultas Farmasi
Universitas Muhammadiyah Surakarta
di Surakarta
Oleh:
NORMAIDAH
K 100110129
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA
SURAKARTA
2015
ii
iii
iv
KATA PENGANTAR
Assalamu’alaikum warahmatullahi wabarakatuh.
Alhamdulillah, puji syukur hanya untuk Allah SWT yang selalu memberikan
petunjuk dan kekuatan sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi dengan judul
‘‘Isolasi dan Elusidasi Struktur Senyawa Penanda dari Ekstrak Meniran (Phyllanthus
niruri L.)”. Skripsi ini disusun untuk memenuhi salah satu syarat mencapai gelar
Sarjana Farmasi pada Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta.
Dengan segala kerendahan hati, penulis mengucapkan terima kasih kepada:
1.
Bapak Azis Saifudin, Ph.D., Apt., selaku Dekan Fakultas Farmasi Universitas
Muhammadiyah Surakarta.
2.
Bapak Suprapto, M. Sc., Apt., selaku dosen pembimbing akademik.
3.
Bapak Dr. Muhammad Da’i, M.Si., Apt. selaku dosen pembimbing utama dan
Ibu Erindyah Retno Wikantyasning, Ph.D., Apt., selaku dosen pembimbing
pendamping.
4.
Bapak Broto Santoso, M.Sc., Apt., selaku dosen penguji I serta Bapak Dedi
Hanwar, M.Si., Apt., selaku reviewer dan penguji II.
5.
Bapak Andi Suhendi, M.Sc., Apt., selaku dosen yang membimbing penulis, serta
Bapak Alwathoni dan Bapak Rahmat, selaku laboran yang selalu menemani dan
membantu penulis dalam menyelesaikan penelitian di Lab. Kimia Farmasi UMS.
6.
Bapak dan Ibu dosen Fakultas Farmasi UMS yang telah membagi ilmu dan
pengalaman.
7.
Kedua orang tua tercinta, Ibu Hamidah dan Bapak Imansyah, S.E., yang selalu
memberi semangat dan doa serta Kakek Ilmi dan Nenek Salbiah.
8.
Teman satu perjuangan (Indah, Gilang, Yaya, Raudah, Hadi, Fadly, Rifqi,
Choirul, Gita, dan Rosma)
9.
Teman-teman serta pihak lain yang tidak dapat penulis sebutkan satu per satu.
Wassalamu'alaikum warahmatullahi wabarakatuh.
Surakarta, 30 Desember 2014
Normaidah
v
DAFTAR ISI
Halaman
HALAMAN SAMPUL DEPAN .................................................................................. ii
HALAMAN SAMPUL DALAM ................................................................................ ii
PENGESAHAN SKRIPSI .......................................................................................... iii
DEKLARASI .............................................................................................................. iv
KATA PENGANTAR ................................................................................................. v
DAFTAR ISI ............................................................................................................... vi
DAFTAR GAMBAR ................................................................................................. vii
DAFTAR TABEL ....................................................................................................... ix
DAFTAR LAMPIRAN ................................................................................................ x
DAFTAR SINGKATAN ............................................................................................ xi
INTISARI .............................................................................................................. xii
BAB I.
PENDAHULUAN ..................................................................................... 1
A. Latar Belakang Masalah......................................................................................... 1
B. Perumusan Masalah ............................................................................................... 2
C. Tujuan Penelitian ................................................................................................... 2
D. Tinjauan Pustaka .................................................................................................... 3
1. Meniran (Phillanthus niruri L.)..................................................... 3
2. Kromatotron .................................................................................. 4
3. LC-MS (Liquid Chromatoghraphy Mass Spectrum)..................... 4
4. NMR .............................................................................................. 5
E. KETERANGAN EMPIRIS.................................................................................... 5
BAB II. METODE PENELITIAN ........................................................................... 6
A. Kategori Penelitian ................................................................................................. 6
B. Bahan dan Alat yang Digunakan ........................................................................... 6
C. Tempat Penelitian .................................................................................................. 6
D. Rencana Penelitian ................................................................................................. 7
1. Persiapan simplisia P. niruri ......................................................... 7
2. Persiapan ekstrak P.niruri ............................................................. 7
3. Fraksinasi pertama menggunakan enap tuang ............................... 7
4. Optimasi Fase Gerak ..................................................................... 7
5. Kromatografi preparatif ................................................................. 7
6. Isolasi Menggunakan Kromatografi Sistem Radial (Kromatotron)8
7. Analisis Isolat Menggunakan Kromatografi Lapis Tipis (KLT) ... 8
8. Analisis Isolat Menggunakan Liquid Chromatoghraphy-Mass
Spectrum (LC-MS) ........................................................................ 9
9. Analisis Isolat Menggunakan Spektroskopi NMR......................... 9
E. Teknik Analisis ...................................................................................................... 9
BAB III. HASIL DAN PEMBAHASAN ............................................................... 10
BAB IV. KESIMPULAN DAN SARAN ............................................................... 25
DAFTAR PUSTAKA ................................................................................................ 26
LAMPIRAN .............................................................................................................. 29
vi
DAFTAR GAMBAR
Halaman
Gambar 1. Tanaman Meniran (Phyllanthus niruri L.) .................................................. 3
Gambar 2. Hasil optimasi fase gerak kloroform : metanol (8 : 2 v/v) dan fase diam
silika gel 60 F254 yang diamati menggunakan UV 366 nm, 254 nm, dan
sinar tampak menghasilkan rf 0,625 dan 0,325 pada fraksi polar ......... 11
Gambar 3. Hasil optimasi fase gerak kloroform : metanol (7 : 3 v/v) dan fase diam
silika gel 60 F254 yang diamati menggunakan UV 366 nm, 254 nm, dan
sinar tampak menghasilkan rf 0,925 dan 0,725 pada fraksi polar ......... 11
Gambar 4. Hasil orientasi KLT preparatif fraksi etil asetat menggunakan fase diam
silika gel 60 F254 dengan panjang elusi 8 cm dan fase gerak kloroform :
metanol (9 : 1 v/v) yang dilihat dengan sinar UV 366 nm (A) dan 254
nm (B) .................................................................................................... 12
Gambar 5. Hasil analisis isolat senyawa berfluoresensi kuning stabilo dengan HPLC
menggunakan fase gerak asetonitril : asam fosforat 0,1% v/v dalam
akuabidestilata (40 : 60 v/v)................................................................... 12
Gambar 6. Hasil analisis dari isolasi pertama fraksi polar menggunakan kromatotron
dengan fase diam silika gel 60 F254 dengan panjang elusi 4 cm ddan fase
gerk kloroform : metanol (7 : 3 v/v) yang dilihat dengan sinar UV 366
nm .......................................................................................................... 13
Gambar 7. Hasil analisis dari isolasi kedua fraksi polar menggunakan kromatotron
dengan fase diam silika gel 60 F254 dengan panjang elusi 4 cm ddan fase
gerk kloroform : metanol (7 : 3 v/v) yang dilihat dengan sinar UV 366
nm .......................................................................................................... 14
Gambar 8. Hasil analisis fraksi 1.8 menggunakan KLT dengan fase gerak (A)
kloroform : metanol (9 : 1 v/v), (B) kloroform : metanol (8 : 2 v/v), dan
(C) metanol : aseton (2 : 8 v/v) panjang elusi 4 cm pada sinar UV 366
nm .......................................................................................................... 14
Gambar 9. Hasil analisis fraksi 2.10-2.17 menggunakan KLT dengan fase gerak (A)
kloroform : metanol (8 : 2 v/v), (B) etil asetat : aseton (8 : 2 v/v), (C) etil
asetat : aseton (6 : 4 v/v), dan (D) etil asetat : aseton (4 : 6 v/v) panjang
elusi 4 cm pada sinar UV 366 nm .......................................................... 15
Gambar 10. Hasil analisis LC menunjukkan peak terbesar memiliki waktu retensi
0,860 menit dengan metode dari Institute of Tropical Disease-UNAIR
Surabaya................................................................................................. 15
vii
Gambar 11. Hasil ESI-LC-MS fraksi 1.8 dengan waktu retensi 0,860 menit memiliki
base peak 222,1127 m/z menggunakan ion positif ESI-MFE-MS pada
LC-MS dengan metode dari Institute of Tropical Disease-UNAIR
Surabaya, (A) hasil semua spektra (B) analisis menggunakan database,
dan (C) hasil spektra ESI-LC-MS isobubbialin dengan ion positif (Zhou
et al., 2012) ............................................................................................ 16
Gambar 12. Struktur epibubbialin (A), isobubbialin (B), dan niruroidina (C) ........... 17
Gambar 13. Hasil analisis 13C-NMR fraksi 1.8 dengan CD3OD menggunakan
instrumen berfrekuensi 400 MHz .......................................................... 19
Gambar 14. Hasil HPLC fraksi 2.10-2.17 pada LC-MS menunjukkan peak yang lebar
dengan waktu retensi 2,600067 menit dengan metode dari LIPI-Serpong
............................................................................................................... 20
Gambar 15. Hasil ESI-LC-MS fraksi 2.10-2.17 dengan waktu retensi 2,600067 menit
memiliki base peak 219,1430 m/z menggunakan ion positif ESI-MFEMS pada LC-MS dengan metode dari LIPI-Serpong ............................ 20
Gambar 16. Hasil analisis fraksi 2.10-2.17 dengan 1H-NMR dengan CD3OD
menggunakan instrumen berfrekuensi 500 MHz ................................... 21
Gambar 17. Hasil analisis pertama fraksi 2.10-2.17 dengan 13C-NMR dengan CD3OD
menggunakan instrumen berfrekuensi 500 MHz ................................... 22
Gambar 18. Hasil analisis kedua fraksi 2.10-2.17 dengan 13C-NMR dengan CD3OD
menggunakan instrumen berfrekuensi 500 MHz ................................... 22
Gambar 19. Hasil 1H-NMR 400 MHz fraksi 1.8 (2-1) ............................................... 31
Gambar 20. Hasil 1H-NMR 400 MHz fraksi 1.8 (2-2) ............................................... 31
Gambar 21. Hasil 1H-NMR 400 MHz fraksi 1.8 (2-3) ............................................... 32
viii
DAFTAR TABEL
Halaman
Tabel 1. Analisis 1H-NMR Epibubbialin (A) dan Isobubbialin (B1) pada 1H-NMR
400 MHz dalam CDCl3 (Houghton et al., 1996), Isobubbialin pada 1H-NMR
500 MHz dalam CD3OD (Zhu et al., 2011) (B2) (Zhou et al., 2012) (B3),
niruroidina pada 1H-NMR 500 MHz dalam CDCl3 (Babady-Bila et al.,
1996), dan fraksi 1.8 pada 1H-NMR 400 MHz dalam CD3OD
(dalam
ppm) ............................................................................................................. 17
Tabel 2. Nilai kekuatan elusi pada optimasi fase gerak .............................................. 29
Tabel 3. Hasil rendemen maserasi dan fraksinasi ....................................................... 30
ix
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
Lampiran 1. Nilai kekuatan elusi pada optimasi fase gerak....................................... 29
Lampiran 2. Hasil rendemen maserasi dan fraksinasi ................................................ 30
Lampiran 3. Hasil 1H-NMR isolat 1.8 pada frekuensi 400 MHz yang dibaca
menggunakan software MestReNova 10.0.0-14381 ............................. 31
x
DAFTAR SINGKATAN
br ddd
brs
d
dd
ddd
dt
ECC
broad doublet of doublet of doublets
broad singlet
doublet
doublet of doublet
doublet of doublet of doublets
doublet of triplet
enhanced charge capacity
g
GF
KLT
mg
gram
Gypsum Fluorosensi
Kromatografi Lapis Tipis
miligram
m
MFE
multiplet
molecular feature extraction
Mg
mL
nm
ppm
Rf
Rt
UV
PDA
miligram
mililiter
nanometer
part per million
retardation factor
retension time
Ultraviolet
photodiode array
prt
s
t
TIC
poorly resolved triplet
singlet
triplet
total ion current
xi
INTISARI
Dalam upaya pengembangan jamu menjadi obat herbal terstandar, senyawa
penanda sangat dibutuhkan dalam standardisasi. Ekstrak P. niruri memiliki berbagai
senyawa penanda seperti fillantin, hipofillantin, dan korilagin. Isolasi senyawa dari
fraksi polar P. niruri menggunakan kromatotron belum pernah dikembangkan. Pada
percobaan ini dilakukan isolasi dan elusidasi struktur untuk mendapatkan senyawa
penanda dari herba P. niruri L..
Herba P. niruri L. diekstraksi dengan metode maserasi dalam metanol.
Ekstrak difraksinasi menggunakan n-heksan, etil aetat, dan metanol : air (2 : 5 v/v).
Isolasi senyawa fraksi polar metanol : air dari ekstrak P. niruri L. dilakukan
menggunakan kromatotron dengan fase diam silika gel 60 GF254 dengan ketebalan 1
mm, jari-jari 7 cm, dan fase gerak kloroform : metanol sistem gradien. Fraksi yang
didapat selanjutnya dielusidasi struktur menggunakan ESI-LC-MS, 1H-NMR, dan
13
C-NMR.
Maserasi sebanyak 3 kali penyarian menghasilkan ekstrak dengan rendemen
18,65% b/b. Isolasi pertama menghasilkan 8 fraksi dan isolasi kedua menghasilkan 17
fraksi. Fraksi 1.8 (18 mg) diprediksi mengandung alkaloid dengan BM 221,104989
g/mol dan belum murni. Fraksi 2.10-2.17 (96,3 mg) memiliki base peak 219,1430
m/z dan masih berupa senyawa campuran dengan polaritas yang serupa. Dari
penelitian ini belum didapatkan senyawa penanda.
Kata kunci: Phyllanthus niruri L.; senyawa penanda; kromatotron; ESI-LC-MS;
NMR.
xii