Skrining Fitokimia dan Karakterisasi Simplisia serta Uji Efek Antidiare Ekstrak Etanol Majakani Terhadap Tikus
Lampiran 1. Hasil identifikasi tumbuhan
Lampiran 2. Gambar pohon majakani (Quercus infectoria G. Olivier)
Lampiran 3. Gambar simplisia dan serbuk simplisia majakani 1cm
Simplisia majakani Serbuk simplisia majakani
Lampiran 4. Gambar mikroskopik serbuk simplisia majakani dalam akuades
1
2 Keterangan: (perbesaran 10 x 40)
1. Butir pati
2. Hilus
Lampiran 5. Gambar mikroskopik serbuk simplisia majakani dalam kloralhidrat
Keterangan: (perbesaran 10 x 25)
1. Sel batu
2. Kristal kalsium oksalat
3. Serat
1
2
3
Lampiran 6. Bagan kerja penelitian
Dibersihkan dari kotoran menggunakan kain basah Dikeringkan di dalam lemari pengering Ditimbang Diserbukkan/ dihaluskan Ditimbang
Gall Majakani kering Karakterisasi Simplisia :
a. Pemeriksaan makroskopik
b. Pemeriksaan mikroskopik
c. Penetapan kadar air
d. Penetapan kadar sari larut dalam etanol e. Penetapan kadar sari larut dalam air f. Penetapan kadar abu total
g. Penetapan kadar abu tidak larut asam Skrining fitokimia untuk pemeriksaan :
a. Alkaloida
b. Flavanoida
c. Glikosida
d. Antrakinon glikosida
e. Saponin
f. Tanin
g. Steroida / triterpenoida Majakani Majakani 2,1 kg Serbuk simplisia 1,9 kg
Lampiran 6. (Lanjutan) Serbuk simplisia
Dimaserasi dengan etanol 80% sampai terendam sempurna Dibiarkan selama 5 hari terlindung dari cahaya sambil sesekali diaduk Diserkai dan diperas
Maserat Ampas
Dicuci dengan etanol 80% Disaring
Maserat
Didiamkan selama 2 hari Dienap tuang
Dipekatkan dengan rotary evaporator (±40
C)
Ekstrak etanol kental
Dikeringkan dengan freeze dryer
Ekstrak Kering
Dilakukan uji Dilakukan skrining antidiare fitokimia
Hasil Hasil
Lampiran 7. Perhitungan penetapan kadar air serbuk simplisia majakani
100 7 % 008 , 5 6 ,
7
95 , 7 % 99 ,
3 %
98 ,
7 %7
% 97 ,
% Kadar air rata-rata =
3
2 ,
3. % Kadar air III = % 98 ,
% Kadar air = % 100
2
5 2 , 2 6 ,
% 95 , 100 7 % 030 ,
2. % Kadar air II =
2
5 8 , 1 2 ,
1. % Kadar air I = % 99 , 100 7 % 004 ,
Berat sampel
Volume airNo Berat sampel (g) Volume awal (ml) Volume akhir (ml) 1 5,004 1,8 2,2 2 5,030 2,2 2,6 3 5,008 2,6 3,0
Lampiran 8. Perhitungan penetapan kadar sari larut air serbuk simplisia majakani
63
57
04 ,
55 %
42 ,3 % 94 , 56 %
56
% 46 ,
% Kadar sari larut air rata-rata =
65
5 5023 , , 64 0720
20 100 002 ,
56
3. % Kadar sari III = % 94 ,
5 0433 , , 63 5943
% Kadar sari larut air =
20 100 005 ,
55
% 04 ,
2. % Kadar sari II =
60
5 7933 , , 59 3687
20 100 010 ,
57
1. % Kadar sari I = % 42 ,
Berat sampel Berat kosong cawan berat sari cawan
20 100
% 100
No Berat sampel (g) Berat cawan kosong (g) Berat cawan sari (g) 1 5,010 59,7933 60,3687 2 5,005 63,0433 63,5943 3 5,002 64,5023 65,0720
Lampiran 9. Perhitungan penetapan kadar sari larut etanol serbuk simplisia
3. % Kadar sari III =
60
41 , 60 % 28 ,
3 % 08 , 61 %
60
% 59 ,
% Kadar sari larut etanol rata-rata =
42
5 5336 , , 41 1460
20 100 013 ,
61
% 08 ,
48
majakani % Kadar sari larut etanol =
5 1110 , , 48 7146
20 100 020 ,
60
2. % Kadar sari II = % 41 ,
51
5 8113 , , 50 4146
20 100 004 ,
60
1. % Kadar sari I = % 28 ,
Berat sampel Berat kosong cawan berat sari cawan
20 100
% 100
No Berat sampel (g) Berat cawan kosong (g) Berat cawan sari (g) 1 5,004 50,8113 51,4146 2 5,020 48,1110 48,7146 3 5,013 41,5336 42,1460
Lampiran 10. Perhitungan penetapan kadar abu total serbuk simplisia majakani
No Berat sampel (g) Berat abu (g) 1 2,0005 0,0318 2 2,0004 0,0319 3 2,0005 0,0320
Berat abu
% Kadar abu total =
100 % Berat sampel
, 0318 1. % Kadar abu total I = 100 % 1 , 59 % 2 , 0005
, 0319 100 % 1 , 60 %
2. % Kadar abu total II = 2 , 0004 , 0320
3. % Kadar abu total III = 100 % 1 , 60 % 2 , 0005
1 , 59 % 1 , 60 % 1 , 60 %
% Kadar sari larut etanol rata-rata =
1 , 60 %
3
Lampiran 11. Perhitungan penetapan kadar abu tidak larut asam serbuk simplisia
majakani % Kadar abu tidak larut asam = % 100
Berat sampel Berat abu
1. % Kadar abu total I = % % 100 0005 ,
2
2. % Kadar abu total II = % % 100 0004 ,
2
3. % Kadar abu total III = % % 100 0005 ,
2
% Kadar sari larut etanol rata-rata = 0% No Berat sampel (g) Berat abu (g) 1 2,0005
2 2,0004 3 2,0005
Lampiran 12. Gambar neraca hewan, spuit dan oral sonde
Neraca hewan Spuit dan oral sonde
Lampiran 13. Gambar tikus
Traslokasi tulang leher Tikus dalam keadaan normal
Tikus dalam keadaan diare
Lampiran 14. Gambar feses tikus
1
2
3
4 Feses tikus Keterangan : 1 = Feses normal 2 = Feses lembek 3 = Feses berair/ berlendir membentuk massa feses 4 = Feses berair/ berlendir tidak membentuk massa feses
Lampiran 15. Volume maksimum larutan sediaan uji yang dapat diberikan pada
hewan uji (Mulyono, 1984) Volume maksimum (ml) sesuai jalur pemberian
Jenis hewan uji i.v. i.m. i.p. s.c. p.o. Mencit (20-30 g) 0,5 0,05 1,0 0,5-1,0 1,0
Tikus (200 g) 1,0 0,1 2-5 2-5 5,0 0,1 1-2 2,5 2,5 - Hamster (50 g)
Marmot (300 g) 0,25 - 2-5 5,0 10,0 Kelinci (2,5 kg) 5-10 0,5 10-20 5-10 20,0
Kucing (3 kg) 5-10 1,0 10-20 5-10 50,0 Anjing (5 kg) 10-20 5,0 20-50 10,0 100,0
Lampiran 16. Konversi dosis antara jenis hewan dengan manusia (Laurance dan
bacharach, 1964) Mencit Tikus Marmot Kelinci Kera Anjing Manusia 20 g 200 g 400 g 1,5 kg 4 kg 12 kg 70 kg
Mencit 1,0 7,0 12,25 27,8 64,1 124,3 387,9 20 g
Tikus 0,14 1,0 1,74 3,0 9,2 17,8 56,0 200 g
Marmot 0,008 0,57 1,0 2,25 5,2 10,2 31,5 400 g
Kelinci 0,04 0,25 0,44 1,0 2,4 4,5 14,2
1,5 kg Kera
0,016 0,11 0,19 0,42 1,0 1,9 6,1 4 kg Anjing
0,008 0,06 0,10 0,22 0,52 1,0 3,1 12 kg Manusia
0,0026 0,018 0,031 0,07 0,16 0,32 1,0 70 kg
Lampiran 17. Perhitungan konversi dosis ®
1. Perhitungan konversi dosis suspensi Loperamid HCl (tablet Imodium ) dari manusia ke tikus : Dosis manusia (berat 70 kg) = 2 mg
- – 8 mg dan tidak melebihi 16 mg/hari Dosis tikus (berat 200 g) = 0,018 x (2 mg
- – 8 mg) = 0,03
- – 0,144 mg dan tidak melebihi 0,288 mg/hari
2. Perhitungan konversi dosis EEM dari tikus ke manusia : Dosis yang digunakan dalam penelitian adalah :
- 75 mg/kg BB atau sama dengan 15 mg/200 g BB
- 100 mg/kg BB atau sama dengan 20 mg/200 g BB
- 125 mg/kg BB atau sama dengan 25 mg/200 g BB
- 150 mg/kg BB atau sama dengan 30 mg/200 g BB Dosis optimal EEM pada tikus adalah 30 mg/200 g BB. Faktor konversi dosis tikus = 56,0 Dosis manusia = dosis pada tikus x faktor konversi
= 30 mg x 56,0 = 1,68 g/70 kg BB manusia = 24 mg/kg BB manusia
Lampiran 17. (Lanjutan) berat ekstrak
Rendemen = 100 %
berat simplisia 1081 g
= 100 %
60 , 05 % 1800 g
Maka pemakaian ekstrak etanol majakani (EEM) 150 mg/kg BB pada tikus setara dengan 249,8 mg simplisia majakani.
Lampiran 18. Perhitungan dosis pemberian ekstrak etanol majakani (EEM) dan
10 500
5 ,
mg mg
Dosis pemberian = ml ml
125 ,
g , 25 025 200 1000
= mg g g
c. EEM yang diberikan untuk dosis 125mg/kg BB Dosis = 125 mg/kg BB = 0,125 g/kg BB
20
10 500
4 ,
ml ml
mg mgDosis pemberian =
20 200 02 , 1000 1 ,
Loperamid HCl (tablet Imodium
g
= mg g g
b. EEM yang diberikan untuk dosis 100mg/kg BB Dosis = 100 mg/kg BB = 0,1 g/kg BB
15
10 500
3 ,
mg mg
Dosis pemberian = ml ml
075 ,
mg g g g , 15 015 200 1000
=
a. EEM yang diberikan untuk dosis 75mg/kg BB Dosis = 75 mg/kg BB = 0,075 g/kg BB
) Konsentrasi EEM = 5% = 5 g/ 100 ml = 500 mg/ 10 ml Berat badan tikus = 200 g
®
25
Lampiran 18. (Lanjutan)
d. EEM yang diberikan untuk dosis 150 mg/kg BB Dosis = 150 mg/kg BB = 0,15 g/kg BB
g ,
15 g g mg
= 200 ,
03
30 1000
30 mg Dosis pemberian = 10 ml , 6 ml 500 mg
®
e. Dosis Loperamid HCl (tablet Imodium ) 0,9 mg/kg BB Dosis = 0,9 mg/kg BB = 0,0009 g/kg BB
mg ,
9
= g mg
200 ,
18 1000
Konsentrasi Loperamid = 2 mg/10ml , 18 mg
Dosis pemberian = 10 ml , 9 ml 2 mg
Lampiran 19. Hasil pengujian efek antidiare Frekuensi defekasi tikus
6
60
30
VI
IV V
III
I II
Tikus
Waktu (menit ke)
5 Kelompok III EEM 75 mg/kg BB
5
4
7
8
1 Total
3
2
2
2 360
2
1
1
1
1 300
2
2 240
1 210
2
3 180
1
3
3
2
2 300
16
11
3
5
9
1 Total
3
2
1
2
1 360
1
2
2
3
2
1
1 240
2
3 210
1
3 180
3
1 150
1
4 120
2
1
90
2 150
2
Kelompok I kontrol negatif Waktu
2
1
2 210
1
1
2
2 180
2
1
3
3 150
4
2 120
2
90
3
4
3
3
3
3
3
60
3
30
VI
IV V
III
I II
(menit ke) Tikus
2
3
1
11
2
2 120
90
60
30
VI
IV V
III
I II
Tikus
Waktu (menit ke)
23 Kelompok II Loperamid HCl
18
15
4
8
16
4 Total
2
1
2
3
3 360
3
3 300
1
3
2
2 240
10
Frekuensi defekasi tikus. (Lanjutan)
Kelompok IV Waktu Tikus
EEM 100 mg/kg (menit ke)
I II
III
IV V
VI BB
30
60
2
3
90
4
1
1
2
3 120
3
2
2
2 150
1 180
2 210 240
2
2
3
2
3 300
2
2
2 360
1
1
1 Total
8
8
5
10
7
11 Kelompok V Waktu Tikus
EEM 125 mg/kg (menit ke)
I II
III
IV V
VI BB
30
60
2
90
1
2
3
1 120
2
2
1 150
1
1
3 180
2
1
1
1 210
1
2 240
2
2
2 300
2
1
1
1
2 360
1
1
1 Total
8
8
8
5
5
9 Kelompok VI Tikus
Waktu EEM 150 mg/kg
(menit ke)
I II
III
IV V
VI BB
30
60
90
3 120
2
3 150
2
1
2
1 180
2
1 210
1 240
3
1 300
2
2
1
1
2 360
2
1
3 Total
9
6
5
5
6
4
Konsistensi feses tikus
Kelompok I Waktu Tikus kontrol negatif
(menit ke)
I II
III
IV V
VI
30
4
60
4
4
4
4
4
4
90
4
4
2 120
4
3 150
4
3
2
3 180
4
2
2
3 210
4
4
4
4
4
3 240
4
2
3
4 300
3
2 360
4
1
1
3
3 Kelompok II Waktu Tikus
Loperamid HCl (menit ke)
I II
III
IV V
VI
30
60
90
4 120
4
3
4
4
4 150
3 180
2
2 210
3 240
1
2 300
1
2
1
1
1 360
1
1
1 Kelompok III Waktu Tikus
EEM 75 mg/kg (menit ke)
I II
III
IV V
VI BB
30
60
4
2
2
2
90
4
4
4 120
2
4 150
2
3 180
2
2 210
3
1 240
2
2
2
1 300
2
1
2 360
1
2
1
1
2
Konsistensi feses tikus. (Lanjutan)
Kelompok IV Waktu Tikus
EEM 100 mg/kg (menit ke)
I II
III
IV V
VI BB
30
60
3
2
90
4
4
4
4
3 120
4
2
4
2 150
1 180
3 210 240
3
3
4
1
2 300
1
1
1 360
1
1
1 Kelompok V Waktu Tikus
EEM 125 mg/kg (menit ke)
I II
III
IV V
VI BB
30
60
4
90
4
4
4
3 120
3
4
4 150
3
4
2 180
2
4
4
4 210
2
2 240
1
2
1 300
1
1
1
1
2 360
1
1
1 Kelompok VI Tikus
Waktu EEM 150 mg/kg
(menit ke)
I II
III
IV V
VI BB
30
60
90
4 120
4
4 150
2
3
4
3 180
2
4 210
2 240
3
1 300
1
1
1
1
1 360
1
1
1
Bobot feses tikus (gram)
IV V
150 2,85 1,85 180 1,58 2,41 210 2,11 1,65 240 0,7 1,37 1,71 1,18 300 0,23 0,21 0,43 360 0,85 0,61 0,31 0,44 1,32
30 60 0,71 2,96 1,63 1,72 90 0,25 2,35 3,71 120 1,03 3,13
VI
IV V
III
I II
Tikus
Waktu (menit ke)
Total 2,91 2,22 4,42 0,69 3,21 2,13 Kelompok III EEM 75 mg/kg BB
60 90 0,43 120 2,25 0,22 0,44 1,41 0,73 150 0,18 2,08 180 0,73 0,23 210 0,16 240 0,15 1,01 300 0,33 0,38 0,9 1,57 0,64 360 0,73 0,25 0,76
30
VI
III
Kelompok I Kontrol negatif
I II
Tikus
Waktu (menit ke)
Kelompok II Loperamid HCl
Total 6,77 4,16 9,6 10,43 14,81 17,66
90 0,49 4,7 1,87 120 0,47 2,78 150 0,48 0,12 1,68 2,11 180 1,2 0,81 0,97 2,21 210 0,31 0,36 0,8 0,93 3,37 1,16 240 2,14 1,1 3,98 3,12 300 2,77 1,07 360 1,53 0,6 0,82 1,08 1,27
30 3,37 60 1,84 3,19 1,2 2,02 1,82 3,69
VI
IV V
III
I II
Tikus
Waktu (menit ke)
Total 2,74 4,75 2,96 6,88 12,77 9,2
Bobot feses tikus (Lanjutan)
Kelompok IV Waktu Tikus
EEM 100 mg/kg (menit ke)
I II
III
IV V
VI BB
30 60 2,88 90 1,95 0,67 0,39 0,13 1,74 120 1,14 0,58 1,82 1,48
150 0,97 180 0,26 210 240 0,35 1,03 0,77 0,64 1,51 300 0,9 0,61 0,94 360 0,35 0,27 0,63
Total 3,2 2,78 4,16 2,01 3,56 6,3 Kelompok V
Waktu Tikus EEM 125 mg/kg
(menit ke)
I II
III
IV V
VI BB
30 60 0,7 90 1,32 0,37 0,57 1,2 120 0,74 0,49 1,32
150 0,71 0,54 1,79 180 0,96 0,33 0,66 0,82 210 0,65 0,74 240 0,41 0,59 1,14 300 0,22 0,44 0,42 0,48 0,43 360 0,37 0,32 0,44
Total 3,28 2,7 3,1 3,04 1,95 5,1
Kelompok VI Tikus
Waktu EEM 150 mg/kg
(menit ke)
I II
III
IV V
VI BB
30
60 90 1,12 120 1,22 1,09 150 0,78 0,57 0,56 0,63 180 0,83 1,06 210 0,28 240 0,83 0,44 300 1,13 1,57 0,16 0,53 0,68 360 0,37 0,34 0,43
Total 3,83 2,21 3,26 2,05 1,52 1,75
Lampiran 20. Hasil analisis statistik anava Saat mulai terjadinya diare ANOVA Sum of Squares Df Mean Square F Sig.
Between Groups 43920.667 5 8784.133 21.701 .000 Within Groups 12143.333 30 404.778 Total 56064.000
35 Frekuensi defekasi ANOVA Sum of Squares Df Mean Square F Sig.
Between Groups 364.806 5 72.961 7.103 .000 Within Groups 308.167 30 10.272 Total 672.972
35 Konsistensi feses ANOVA Sum of Squares df Mean Square F Sig.
Between Groups 6.000 5 1.200 2.769 .036 Within Groups 13.000 30 .433 Total 19.000
35 Bobot total feses ANOVA Sum of Squares Df Mean Square F Sig.
Between Groups 303.980 5 60.796 7.946 .000 Within Groups 229.526 30 7.651 Total 533.507
35
Lampiran 21. Hasil statistik analisis duncan Saat mulai terjadinya diare Subset for alpha = 0.05 a Perlakuan N
1
2
3
4
5 Duncan Kontrol negatif
6
37.50 EEM 75 mg/kgBB
6
78.83 EEM 100 mg/kgBB
6
96.67
96.67 EEM 125 mg/kgBB 6 107.17 107.17 Loperamid HCl 6 127.33 127.33 EEM 150 mg/kgBB
6 146.50 Sig. 1.000 .135 .373 .093 .109
Means for groups in homogeneous subsets are displayed.
a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 6.000.
Frekuensi defekasi Subset for alpha = 0.05 a Perlakuan N
1
2 Duncan Loperamid HCl
6
5.83 EEM 150 mg/kgBB
6
5.83 EEM 125 mg/kgBB
6
7.17 EEM 100 mg/kgBB
6
8.17 EEM 75 mg/kgBB
6
9.00 Kontrol negatif
6
15.17 Sig. .136 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed.
a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 6.000.
Konsistensi feses Perlakuan N Subset for alpha = 0.05
6
3 Duncan a EEM 150 mg/kg BB 6 2.4367 Loperamid HCl 6 2.5967 EEM 125 mg/kg BB 6 3.1950 3.1950 EEM 100 mg/kg BB 6 3.6683 3.6683 EEM 75 mg/kg BB 6 6.5500 Kontrol negatif 6 10.5717 Sig. .489 .055 1.000
2
1
Bobot total feses Perlakuan N Subset for alpha = 0.05
1.50 Sig. .090 .250 Means for groups in homogeneous subsets are displayed.
6
1.50 EEM 150 mg/kgBB
1.33 EEM 125 mg/kgBB
1
6
1.33 EEM 100 mg/kgBB
6
1.00 Loperamid HCl
1.00
6
2 Duncan a Kontrol negatif 6 .33 EEM 75 mg/kgBB
Means for groups in homogeneous subsets are displayed.