AKTIVITAS SITOTOKSIK FRAKSI POLAR EKSTRAK ETANOL KULIT BATANG SIRSAK (Annona muricata Linn.) TERHADAP Aktivitas Sitotoksik Fraksi Polar Ekstrak Etanol Kulit Batang Sirsak (Annona Muricata Linn.) Terhadap Sel T47d Serta Profil Kromatografi Lapis Tipis.
AKTIVITAS SITOTOKSIK FRAKSI POLAR EKSTRAK ETANOL
KULIT BATANG SIRSAK (Annona muricata Linn.) TERHADAP
SEL T47D SERTA PROFIL KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS
SKRIPSI
Oleh:
MEICELLA AZNI
K 100 080 047
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA
SURAKARTA
2012
i
AKTIVITAS SITOTOKSIK FRAKSI POLAR EKSTRAK ETANOL
KULIT BATANG SIRSAK (Annona muricata Linn.) TERHADAP
SEL T47D SERTA PROFIL KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS
SKRIPSI
Diajukan untuk memenuhi salah satu syarat mencapai
Derajat Sarjana Farmasi (S.Farm) pada Fakultas Farmasi
Universitas Muhammadiyah Surakarta
di Surakarta
Oleh:
MEICELLA AZNI
K 100 080 047
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA
SURAKARTA
2012
i
ii
DEKLARASI
Dengan ini saya menyatakan bahwa dalam skripsi ini tidak terdapat karya
yang pernah diajukan untuk memperoleh gelar kesarjanaan di suatu Perguruan
Tinggi, dan sepanjang pengetahuan saya juga tidak terdapat karya atau pendapat
yang pernah ditulis atau diterbitkan oleh orang lain, kecuali yang secara tertulis
diacu dalam naskah ini dan disebutkan dalam daftar pustaka.
Surakarta, 25 Mei 2012
Peneliti
MEICELLA AZNI
iii
KATA PENGANTAR
Assalamu’alaikum wr wb.
Alhamdulillah, penulis panjatkan puji syukur kehadirat Allah SWT atas
segala rahmat, taufiq, dan hidayahNya sehingga penulis dapat menyelesaikan
penelitian dan penulisan skripsi dengan judul “Aktivitas Sitotoksik Fraksi Polar
Ekstrak Etanol Kulit Batang Sirsak (Annona muricata L.) terhadap Sel T47D
Serta Profil Kromatografi Lapis Tipis”.
Skripsi ini diajukan sebagai salah satu syarat untuk mencapai gelar sarjana
Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta, semoga segala yang tersaji dalam
skripsi ini dapat memberikan manfaat dan pengetahuan bagi pembaca dan untuk
perkembangan ilmu pengetahuan.
Penulis ucapkan terima kasih kepada semua pihak yang telah membantu
jalannya penelitian, baik langsung maupun tidak langsung, antara lain:
1. Dr. Muhammad Da’i, M.Si, Apt., selaku Dekan Fakultas Farmasi Universitas
Muhammadiyah Surakarta dan penguji.
2. Rosita Melannisa, M.Si., Apt selaku penguji.
3. Dr. Haryoto, M.Sc, selaku pembimbing utama dan Peni Indrayudha,
M.Biotech., Apt., selaku pembimbing pendamping.
4. Prof. Dr. Supargiono, DTM&H., SU., PhD., SpPark dan Rumbiwati, ST,
selaku pembimbing di laboratorium Parasitologi Fakultas Kedokteran
Universitas Gadjah Mada.
5. Azis Saifudin, SF, Apt dan Arifah Sri Wahyuni, S.Si., M.Sc., Apt selaku
pembimbing akademik.
6. Keluargaku, khususnya Mama yang selalu mendukungku, dan juga almarhum
adikku tercinta Ferdian Azni, kamulah inspirasi terbesarku.
7. Teman seperjuanganku Firstca, Aulia, dan Lutfiani.
Semoga Allah SWT membalas kebaikan dan kemurahan hati mereka,
penulis mengharapkan saran dan kritik yang bersifat membangun dan
menyempurnakan tulisan ini.
Wassalamu’alaikum wr wb.
Surakarta,
Mei 2012
Penulis
iv
DAFTAR ISI
Halaman
HALAMAN JUDUL..........................................................................................
i
HALAMAN PENGESAHAN............................................................................
ii
HALAMAN DEKLARASI................................................................................
iii
KATA PENGANTAR .......................................................................................
iv
DAFTAR ISI............ ..........................................................................................
v
DAFTAR GAMBAR ......................................................................................... vii
DAFTAR TABEL.... .......................................................................................... viii
DAFTAR LAMPIRAN ......................................................................................
ix
DAFTAR SINGKATAN ...................................................................................
x
INTISARI...........................................................................................................
xi
BAB I. PENDAHULUAN
A. Latar Belakang Masalah ..................................................................
1
B. Perumusan Masalah.................................................................... ...
2
C. Tujuan Penelitian ............................................................................
2
D. Tinjauan Pustaka .............................................................................
3
1.
Tanaman Sirsak (Annona muricata Linn.) ..............................
3
a.
Sistematika Tanaman ........................................................
3
b.
Nama Daerah.....................................................................
3
c.
Morfologi ..........................................................................
3
d.
Kandungan Kimia .............................................................
4
e.
Manfaat Tanaman .............................................................
5
Kanker ......................................................................................
5
a.
Sifat Sel Kanker ................................................................
5
b.
Siklus Sel...........................................................................
6
c.
Kanker Payudara ...............................................................
7
d.
Sel T47D ...........................................................................
8
Uji Sitotoksik ...........................................................................
8
E. Landasan Teori ................................................................................
8
F. Hipotesis ..........................................................................................
9
2.
3.
v
BAB II. METODE PENELITIAN
A. Kategori Penelitian ..........................................................................
10
B. Bahan dan Alat ................................................................................
10
1.
Bahan-bahan.............................................................................
10
2.
Alat ...........................................................................................
10
C. Tempat Penelitian............................................................................
11
D. Jalannya Penelitian ..........................................................................
11
1.
Determinasi Tanaman ..............................................................
11
2.
Pengumpulan Bahan ................................................................
11
3.
Ekstraksi dan Fraksinasi...........................................................
12
4.
Sterilisasi Alat ..........................................................................
12
5.
Preparasi Sel T47D ..................................................................
13
a.
Pembuatan Media Kultur Sel ............................................
13
b.
Preparasi Sel ......................................................................
13
c.
Panen Sel ...........................................................................
13
d.
Pembuatan Larutan Uji .....................................................
14
e.
Uji Sitotoksik Menggunakan Metode MTT ......................
14
Uji Kandungan Senyawa Dengan KLT....................................
14
E. Analisis Data ...................................................................................
15
6.
BAB III. HASIL DAN PEMBAHASAN
A. Ekstraksi dan Fraksinasi ..................................................................
17
B. Aktivitas Sitotoksik .........................................................................
19
C. Uji Kandungan Senyawa .................................................................
21
BAB IV. KESIMPULAN DAN SARAN
A. Kesimpulan .....................................................................................
24
B. Saran
...........................................................................................
24
DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................
25
LAMPIRAN .......................................................................................................
28
vi
DAFTAR GAMBAR
Halaman
Gambar 1. Skema Jalannya Penelitian .............................................................
16
Gambar 2. Profil kromatografi hasil 2x fraksinasi ekstrak etanol kulit batang
sirsak dengan metode KCV menggunakan fase diam Silika GF254
dan fase gerak etil asetat : n-heksana 2:8........................................
18
Gambar 3. Pengaruh fraksi polar ekstrak etanol kulit batang sirsak terhadap
morfologi sel T47D dan pembentukan kristal formazan................. 19
Gambar 4. Grafik hubungan antara konsentrasi vs persentase sel hidup.......... 20
Gambar 5. Profil Kromatografi Lapis Tipis fraksi polar ekstrak etanol kulit
batang sirsak dengan fase diam Silika GF254 dan fase gerak
etil asetat : n-heksana 2:8. Hasil identifikasi golongan senyawa
menunjukkan fraksi polar ekstrak etanol kulit batang sirsak
mengandung polifenol, alkaloid, saponin, dan flavonoid............... 22
vii
DAFTAR TABEL
Halaman
Tabel 1. Kandungan Gizi Daun Sirsak dalam 100 gram....................................
4
Tabel 2. Penggunaan Eluen pada KCV..............................................................
12
Tabel 3. Pengelompokan Fraksi KCV 1 dan KCV 2.......................................... 18
Tabel 4. Identifikasi Golongan Senyawa Fraksi Polar Ekstrak Etanolik
Kulit Batang Sirsak dengan Beberapa Pereaksi Semprot ....................
viii
22
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
Lampiran 1. Surat keterangan determinasi........................................................ 29
Lampiran 2. Gambar pohon dan kulit batang sirsak ......................................... 31
Lampiran 3. Perhitungan larutan sampel dan perhitungan sel ......................... 32
Lampiran 4. Pembuatan larutan MTT .............................................................. 34
Lampiran 5. Perhitungan Persentase Sel Hidup Sel T47D .............................. 35
Lampiran 6.Data hasil uji sitotoksik fraksi polar ekstrak etanolik kulit
batang sirsak terhadap sel T47D .................................................. 40
ix
DAFTAR SINGKATAN
DMSO
= Dimetil Sulfoksida
ELISA
= Enzyme Linked Immuno Sorbant Assay
FBS
= Fetal Bovine Serum
IC50
= Inhibitory Concentration 50%
KLT
= Kromatografi Lapis Tipis
KCV
= Kromatografi Cair Vakum
LAF
= Laminar Air Flow
MTT
= 3-(4,5-Dimetilltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolium bromide
p.a
= Pro analisis
PBS
= Phosphate Buffered Saline
Penstrep
= Penicillin Streptomycin
Rf
= Retardation Factor
UV
= Ultraviolet
RPMI
= Roswell Park Memorial Institute
WHO
= World Health Organization
SDS
= Sodium Dodecyl Sulfate
GF254
= Gel Fluoresense at UV-254
x
INTISARI
Tanaman sirsak (Annona muricata L.) merupakan salah satu tanaman yang
berkhasiat sebagai antikanker. Penelitian sebelumnya menunjukkan bahwa ekstrak
heksana dari kulit batang sirsak (Annona muricata L.) mempunyai efek sitotoksik
terhadap sel CEM-SS dengan nilai IC50 sebesar 0,8 µg/mL dan ekstrak etil asetat
mempunyai efek sitotoksik terhadap sel HL dengan nilai IC50 0,5 µg/mL. Tujuan
penelitian ini adalah untuk mengetahui efek sitotoksik terhadap sel T47D serta
mengetahui kandungan senyawa kimia yang terdapat pada fraksi polar ekstrak
etanol kulit batang sirsak dengan analisis KLT.
Ekstraksi kulit batang sirsak dilakukan dengan maserasi menggunakan
pelarut etanol 96%. Ekstrak kental yang didapat difraksinasi menggunakan KCV
dengan pelarut bertingkat yaitu etil asetat : n-heksana (1:9), (2:8), (3:7), (4:6), dan
etanol 96%. Metode yang digunakan dalam penelitan ini adalah metode MTT
assay dengan seri konsentrasi yang digunakan 500, 250, 125, 62,5, 31,25, 15,625,
dan 7,8125 µg/mL, sedangkan untuk identifikasi golongan senyawa kimia
menggunakan metode KLT dengan beberapa pereaksi semprot, fase diam Silika
GF254 dan fase gerak etil asetat : n-heksana 2:8.
Hasil identifikasi golongan senyawa kimia menggunakan beberapa
pereaksi semprot menunjukkan bahwa fraksi polar ekstrak etanol kulit batang
sirsak (Annona muricata L.) mengandung golongan senyawa polifenol, alkaloid,
saponin, dan flavonoid, tetapi tidak berefek sitotoksik terhadap sel kanker
payudara T47D.
Kata kunci: Annona muricata L., fraksi polar, T47D, sitotoksik, kromatografi
lapis tipis
xi
KULIT BATANG SIRSAK (Annona muricata Linn.) TERHADAP
SEL T47D SERTA PROFIL KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS
SKRIPSI
Oleh:
MEICELLA AZNI
K 100 080 047
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA
SURAKARTA
2012
i
AKTIVITAS SITOTOKSIK FRAKSI POLAR EKSTRAK ETANOL
KULIT BATANG SIRSAK (Annona muricata Linn.) TERHADAP
SEL T47D SERTA PROFIL KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS
SKRIPSI
Diajukan untuk memenuhi salah satu syarat mencapai
Derajat Sarjana Farmasi (S.Farm) pada Fakultas Farmasi
Universitas Muhammadiyah Surakarta
di Surakarta
Oleh:
MEICELLA AZNI
K 100 080 047
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA
SURAKARTA
2012
i
ii
DEKLARASI
Dengan ini saya menyatakan bahwa dalam skripsi ini tidak terdapat karya
yang pernah diajukan untuk memperoleh gelar kesarjanaan di suatu Perguruan
Tinggi, dan sepanjang pengetahuan saya juga tidak terdapat karya atau pendapat
yang pernah ditulis atau diterbitkan oleh orang lain, kecuali yang secara tertulis
diacu dalam naskah ini dan disebutkan dalam daftar pustaka.
Surakarta, 25 Mei 2012
Peneliti
MEICELLA AZNI
iii
KATA PENGANTAR
Assalamu’alaikum wr wb.
Alhamdulillah, penulis panjatkan puji syukur kehadirat Allah SWT atas
segala rahmat, taufiq, dan hidayahNya sehingga penulis dapat menyelesaikan
penelitian dan penulisan skripsi dengan judul “Aktivitas Sitotoksik Fraksi Polar
Ekstrak Etanol Kulit Batang Sirsak (Annona muricata L.) terhadap Sel T47D
Serta Profil Kromatografi Lapis Tipis”.
Skripsi ini diajukan sebagai salah satu syarat untuk mencapai gelar sarjana
Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta, semoga segala yang tersaji dalam
skripsi ini dapat memberikan manfaat dan pengetahuan bagi pembaca dan untuk
perkembangan ilmu pengetahuan.
Penulis ucapkan terima kasih kepada semua pihak yang telah membantu
jalannya penelitian, baik langsung maupun tidak langsung, antara lain:
1. Dr. Muhammad Da’i, M.Si, Apt., selaku Dekan Fakultas Farmasi Universitas
Muhammadiyah Surakarta dan penguji.
2. Rosita Melannisa, M.Si., Apt selaku penguji.
3. Dr. Haryoto, M.Sc, selaku pembimbing utama dan Peni Indrayudha,
M.Biotech., Apt., selaku pembimbing pendamping.
4. Prof. Dr. Supargiono, DTM&H., SU., PhD., SpPark dan Rumbiwati, ST,
selaku pembimbing di laboratorium Parasitologi Fakultas Kedokteran
Universitas Gadjah Mada.
5. Azis Saifudin, SF, Apt dan Arifah Sri Wahyuni, S.Si., M.Sc., Apt selaku
pembimbing akademik.
6. Keluargaku, khususnya Mama yang selalu mendukungku, dan juga almarhum
adikku tercinta Ferdian Azni, kamulah inspirasi terbesarku.
7. Teman seperjuanganku Firstca, Aulia, dan Lutfiani.
Semoga Allah SWT membalas kebaikan dan kemurahan hati mereka,
penulis mengharapkan saran dan kritik yang bersifat membangun dan
menyempurnakan tulisan ini.
Wassalamu’alaikum wr wb.
Surakarta,
Mei 2012
Penulis
iv
DAFTAR ISI
Halaman
HALAMAN JUDUL..........................................................................................
i
HALAMAN PENGESAHAN............................................................................
ii
HALAMAN DEKLARASI................................................................................
iii
KATA PENGANTAR .......................................................................................
iv
DAFTAR ISI............ ..........................................................................................
v
DAFTAR GAMBAR ......................................................................................... vii
DAFTAR TABEL.... .......................................................................................... viii
DAFTAR LAMPIRAN ......................................................................................
ix
DAFTAR SINGKATAN ...................................................................................
x
INTISARI...........................................................................................................
xi
BAB I. PENDAHULUAN
A. Latar Belakang Masalah ..................................................................
1
B. Perumusan Masalah.................................................................... ...
2
C. Tujuan Penelitian ............................................................................
2
D. Tinjauan Pustaka .............................................................................
3
1.
Tanaman Sirsak (Annona muricata Linn.) ..............................
3
a.
Sistematika Tanaman ........................................................
3
b.
Nama Daerah.....................................................................
3
c.
Morfologi ..........................................................................
3
d.
Kandungan Kimia .............................................................
4
e.
Manfaat Tanaman .............................................................
5
Kanker ......................................................................................
5
a.
Sifat Sel Kanker ................................................................
5
b.
Siklus Sel...........................................................................
6
c.
Kanker Payudara ...............................................................
7
d.
Sel T47D ...........................................................................
8
Uji Sitotoksik ...........................................................................
8
E. Landasan Teori ................................................................................
8
F. Hipotesis ..........................................................................................
9
2.
3.
v
BAB II. METODE PENELITIAN
A. Kategori Penelitian ..........................................................................
10
B. Bahan dan Alat ................................................................................
10
1.
Bahan-bahan.............................................................................
10
2.
Alat ...........................................................................................
10
C. Tempat Penelitian............................................................................
11
D. Jalannya Penelitian ..........................................................................
11
1.
Determinasi Tanaman ..............................................................
11
2.
Pengumpulan Bahan ................................................................
11
3.
Ekstraksi dan Fraksinasi...........................................................
12
4.
Sterilisasi Alat ..........................................................................
12
5.
Preparasi Sel T47D ..................................................................
13
a.
Pembuatan Media Kultur Sel ............................................
13
b.
Preparasi Sel ......................................................................
13
c.
Panen Sel ...........................................................................
13
d.
Pembuatan Larutan Uji .....................................................
14
e.
Uji Sitotoksik Menggunakan Metode MTT ......................
14
Uji Kandungan Senyawa Dengan KLT....................................
14
E. Analisis Data ...................................................................................
15
6.
BAB III. HASIL DAN PEMBAHASAN
A. Ekstraksi dan Fraksinasi ..................................................................
17
B. Aktivitas Sitotoksik .........................................................................
19
C. Uji Kandungan Senyawa .................................................................
21
BAB IV. KESIMPULAN DAN SARAN
A. Kesimpulan .....................................................................................
24
B. Saran
...........................................................................................
24
DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................
25
LAMPIRAN .......................................................................................................
28
vi
DAFTAR GAMBAR
Halaman
Gambar 1. Skema Jalannya Penelitian .............................................................
16
Gambar 2. Profil kromatografi hasil 2x fraksinasi ekstrak etanol kulit batang
sirsak dengan metode KCV menggunakan fase diam Silika GF254
dan fase gerak etil asetat : n-heksana 2:8........................................
18
Gambar 3. Pengaruh fraksi polar ekstrak etanol kulit batang sirsak terhadap
morfologi sel T47D dan pembentukan kristal formazan................. 19
Gambar 4. Grafik hubungan antara konsentrasi vs persentase sel hidup.......... 20
Gambar 5. Profil Kromatografi Lapis Tipis fraksi polar ekstrak etanol kulit
batang sirsak dengan fase diam Silika GF254 dan fase gerak
etil asetat : n-heksana 2:8. Hasil identifikasi golongan senyawa
menunjukkan fraksi polar ekstrak etanol kulit batang sirsak
mengandung polifenol, alkaloid, saponin, dan flavonoid............... 22
vii
DAFTAR TABEL
Halaman
Tabel 1. Kandungan Gizi Daun Sirsak dalam 100 gram....................................
4
Tabel 2. Penggunaan Eluen pada KCV..............................................................
12
Tabel 3. Pengelompokan Fraksi KCV 1 dan KCV 2.......................................... 18
Tabel 4. Identifikasi Golongan Senyawa Fraksi Polar Ekstrak Etanolik
Kulit Batang Sirsak dengan Beberapa Pereaksi Semprot ....................
viii
22
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
Lampiran 1. Surat keterangan determinasi........................................................ 29
Lampiran 2. Gambar pohon dan kulit batang sirsak ......................................... 31
Lampiran 3. Perhitungan larutan sampel dan perhitungan sel ......................... 32
Lampiran 4. Pembuatan larutan MTT .............................................................. 34
Lampiran 5. Perhitungan Persentase Sel Hidup Sel T47D .............................. 35
Lampiran 6.Data hasil uji sitotoksik fraksi polar ekstrak etanolik kulit
batang sirsak terhadap sel T47D .................................................. 40
ix
DAFTAR SINGKATAN
DMSO
= Dimetil Sulfoksida
ELISA
= Enzyme Linked Immuno Sorbant Assay
FBS
= Fetal Bovine Serum
IC50
= Inhibitory Concentration 50%
KLT
= Kromatografi Lapis Tipis
KCV
= Kromatografi Cair Vakum
LAF
= Laminar Air Flow
MTT
= 3-(4,5-Dimetilltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolium bromide
p.a
= Pro analisis
PBS
= Phosphate Buffered Saline
Penstrep
= Penicillin Streptomycin
Rf
= Retardation Factor
UV
= Ultraviolet
RPMI
= Roswell Park Memorial Institute
WHO
= World Health Organization
SDS
= Sodium Dodecyl Sulfate
GF254
= Gel Fluoresense at UV-254
x
INTISARI
Tanaman sirsak (Annona muricata L.) merupakan salah satu tanaman yang
berkhasiat sebagai antikanker. Penelitian sebelumnya menunjukkan bahwa ekstrak
heksana dari kulit batang sirsak (Annona muricata L.) mempunyai efek sitotoksik
terhadap sel CEM-SS dengan nilai IC50 sebesar 0,8 µg/mL dan ekstrak etil asetat
mempunyai efek sitotoksik terhadap sel HL dengan nilai IC50 0,5 µg/mL. Tujuan
penelitian ini adalah untuk mengetahui efek sitotoksik terhadap sel T47D serta
mengetahui kandungan senyawa kimia yang terdapat pada fraksi polar ekstrak
etanol kulit batang sirsak dengan analisis KLT.
Ekstraksi kulit batang sirsak dilakukan dengan maserasi menggunakan
pelarut etanol 96%. Ekstrak kental yang didapat difraksinasi menggunakan KCV
dengan pelarut bertingkat yaitu etil asetat : n-heksana (1:9), (2:8), (3:7), (4:6), dan
etanol 96%. Metode yang digunakan dalam penelitan ini adalah metode MTT
assay dengan seri konsentrasi yang digunakan 500, 250, 125, 62,5, 31,25, 15,625,
dan 7,8125 µg/mL, sedangkan untuk identifikasi golongan senyawa kimia
menggunakan metode KLT dengan beberapa pereaksi semprot, fase diam Silika
GF254 dan fase gerak etil asetat : n-heksana 2:8.
Hasil identifikasi golongan senyawa kimia menggunakan beberapa
pereaksi semprot menunjukkan bahwa fraksi polar ekstrak etanol kulit batang
sirsak (Annona muricata L.) mengandung golongan senyawa polifenol, alkaloid,
saponin, dan flavonoid, tetapi tidak berefek sitotoksik terhadap sel kanker
payudara T47D.
Kata kunci: Annona muricata L., fraksi polar, T47D, sitotoksik, kromatografi
lapis tipis
xi