AKTIVITAS SITOTOKSIK FRAKSI POLAR EKSTRAK ETANOL KULIT BATANG SRIKAYA (Annona squamosa L.) Aktivitas Sitotoksik Fraksi Polar Ekstrak Etanol Kulit Batang Srikaya (Annona Squamosa L.) Terhadap Sel T47D.
AKTIVITAS SITOTOKSIK FRAKSI POLAR EKSTRAK
ETANOL KULIT BATANG SRIKAYA (Annona squamosa L.)
TERHADAP SEL T47D
SKRIPSI
Oleh:
CHADIROTUL UMMA
K 100 080 151
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA
SURAKARTA
2012
i
AKTIVITAS SITOTOKSIK FRAKSI POLAR EKSTRAK
ETANOL KULIT BATANG SRIKAYA (Annona squamosa L.)
TERHADAP SEL T47D
SKRIPSI
Diajukan untuk memenuhi salah satu syarat mencapai
Derajat Sarjana Farmasi (S.Farm) pada Fakultas Farmasi
Universitas Muhammadiyah Surakarta
di Surakarta
Oleh:
CHADIROTUL UMMA
K 100 080 151
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA
SURAKARTA
2012
ii
ii
PENGESAHAN SKRIPSI
Berjudul:
AKTIVITAS SITOTOKSIK FRAKSI POLAR EKSTRAK
ETANOL KULIT BATANG SRIKAYA (Annona squamosa L.)
TERHADAP SEL T47D
Oleh:
CHADIROTUL UMMA
K 100 080 151
Dipertahankan di Hadapan Panitia Penguji Skripsi
Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta
Pada tanggal:
Mengetahui,
Fakultas Farmasi
Universitas Muhammadiyah Surakarta
Dekan,
Dr. Muhammad Da’i, M.Si., Apt.
Pembimbing Utama
Pembimbing Pendamping
Dr. Haryoto, M.Sc
Peni Indrayudha, M.Biotech, Apt.
Penguji :
1.
Dr. Muhammad Da’i, M.Si., Apt.
2.
Rosita Melannisa, M.Si., Apt.
3.
Dr. Haryoto, M.Sc
4.
Peni Indrayudha, M.Biotech., Apt.
iii
iii
DEKLARASI
Dengan ini saya menyatakan bahwa dalam skripsi ini tidak terdapat karya
yang pernah diajukan untuk memperoleh gelar kesarjanaan di suatu Perguruan
Tinggi, dan sepanjang pengetahuan saya juga tidak terdapat karya atau pendapat
yang pernah ditulis atau diterbitkan oleh orang lain, kecuali yang secara tertulis
diacu dalam naskah ini dan disebutkan dalam daftar pustaka.
Surakarta, 8 Maret 2012
Peneliti
(Chadirotul Umma)
iv
KATA PENGANTAR
Assalamualaikum wr. wb.
Alhamdulillah, puji syukur kehadirat Allah SWT atas segala rahmat dan
kasih sayang-Nya sehingga penulis diberi kemampuan dan kesempatan untuk
menyusun dan menyelesaikan skripsi yang berjudul “Aktivitas Sitotoksik Fraksi
Polar Ekstrak Etanol Kulit Batang Srikaya (Annona squamosa L.) terhadap
Sel T47D”. Skripsi ini diajukan untuk memenuhi salah satu syarat mencapai
derajat Sarjana Farmasi (S. Farm) pada Fakultas Farmasi Universitas
Muhammadyah Surakarta.
Dalam pelaksanaan penelitian sampai penyelesaian skripsi ini, tidak lepas
dari bantuan dan dukungan berbagai pihak. Oleh karena itu, penulis ingin
menyampaikan ucapan terimakasih kepada:
1.
Dr. Muhammad Da’i, M.Si., Apt., selaku Dekan Fakultas Farmasi Universitas
Muhammadyah Surakarta dan sekaligus penguji skripsi.
2.
Ratna Yuliani, S.Si, M.Biotech., St., selaku pembimbing akademik
3.
Dr. Haryoto, M.Sc., selaku pembimbing utama.
4.
Peni Indrayudha, M.Biotech, Apt., selaku pembimbing pendamping.
5.
Rosita Melannisa, M.Si, Apt., selaku penguji skripsi.
6.
Bapak Aris Budiono dan Ibu Siti Qoriah.
7.
Cita, Hefi, dan Woro, selaku tim peneliti.
8.
Semua pihak yang telah membantu selama penelitian dan penyusunan skripsi
ini.
Semoga segala kebaikan yang diberikan menjadi sebuah amalan tersendiri
dan semoga kerjasama yang pernah terjalin dapat terus berjalan dengan baik.
Penulis menyadari bahwa penulisan skripsi ini masih banyak kekurangan karena
keterbatasan kemampuan, pengetahuan, dan pengalaman. Oleh karena itu, saran
dan kritik yang membangun akan senantiasa diterima untuk menjadikan skripsi ini
lebih baik. Penulis berharap agar hasil penelitian ini dapat bermanfaat dan
memberikan sumbangan bagi perkembangan ilmu pengetahuan.
v
Wassalamualaikum wr. wb.
Surakarta, 8 Maret 2012
Penulis
vi
DAFTAR ISI
Halaman
HALAMAN JUDUL............................................................................................. ii
HALAMAN PENGESAHAN ............................................................................... iii
HALAMAN DEKLARASI................................................................................... iv
KATA PENGANTAR .......................................................................................... v
DAFTAR ISI ......................................................................................................... vii
DAFTAR GAMBAR ............................................................................................ ix
DAFTAR TABEL ................................................................................................. x
DAFTAR LAMPIRAN ......................................................................................... xi
DAFTAR SINGKATAN ...................................................................................... xii
INTISARI............................................................................................................ xiii
BAB I. PENDAHULUAN
A. Latar Belakang...................................................................................... 1
B. Perumusan Masalah .............................................................................. 2
C. Tujuan Penelitian .................................................................................. 2
D. Tinjauan Pustaka .................................................................................. 3
1. Tumbuhan Srikaya (Annona squamosa L.) ..................................... 3
2. Kanker .............................................................................................. 5
3. Sel T47D .......................................................................................... 7
4. Uji Sitotoksik dengan Metode MTT assay ...................................... 7
E. Landasan Teori ..................................................................................... 8
F. Hipotesis ............................................................................................... 9
BAB II. METODE PENELITIAN
A. Kategori penelitian .............................................................................. 10
B. Alat dan bahan ...................................................................................... 10
1. Alat yang digunakan ........................................................................ 10
2. Bahan yang digunakan ..................................................................... 11
vii
C. Jalannya Penelitian .............................................................................. 11
1. Determinasi tanaman ....................................................................... 11
2. Penyiapan Bahan.............................................................................. 11
3. Ekstraksi........................................................................................... 12
4. Fraksinasi ......................................................................................... 12
5. Uji Kandungan Senyawa dengan KLT ............................................ 13
6. Uji Aktivitas Antikanker .................................................................. 13
D. Cara Analisis ........................................................................................ 15
1. Uji sitotoksik .................................................................................... 15
2. Analisis Kromatografi Lapis Tipis .................................................. 15
BAB III. HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN
A. Determinasi Tanaman ........................................................................... 16
B. Ekstraksi ............................................................................................... 16
C. Fraksinasi .............................................................................................. 17
D. Uji Sitotoksik Fraksi Polar Ekstrak Etanol Kulit Batang Srikaya
(Annona squamosa L.) terhadap sel T47D ........................................... 18
E. Analisis Kualitatif Kandungan Kimia .................................................. 21
BAB IV. KESIMPULAN DAN SARAN
A. Kesimpulan ............................................................................................... 25
B. Saran .......................................................................................................... 25
DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................... 26
LAMPIRAN .......................................................................................................... 30
viii
DAFTAR GAMBAR
Halaman
Gambar 1. Strukutur umum senyawa asetogenin .................................................. 5
Gambar 2. Reaksi reduksi MTT menjadi formazan oleh enzim reduktase ........... 8
Gambar 3. Profil KLT hasil fraksinasi .................................................................. 17
Gambar 4. Profil KLT hasil gabungan fraksi ........................................................ 18
Gambar 5. Morfologi sel T47D ............................................................................. 19
Gambar 6. Grafik hubungan antara log konsentrasi versus pesen sel hidup ......... 20
Gambar 7. Hasil KLT fraksi polar ekstrak etanol kulit batang srikaya ................ 21
ix
DAFTAR TABEL
Halaman
Tabel 1. Persentase sel hidup dari sel T47D akibat perlakuan fraksi polar ekstrak
etanol kulit batang srikaya (Annona squamosa L.) .......................................... 20
Tabel 2. Identifikasi golongan senyawa fraksi polar ekstrak etanol kulit batang
srikaya dengan beberapa pereaksi semprot ...................................................... 21
x
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
Lampiran 1. Surat keterangan determinasi................................................................... 30
Lampiran 2. Foto tanaman srikaya (Annona squamosa L.) ......................................... 32
Lampiran 3. Foto Alat Fraksinasi................................................................................. 33
Lampiran 4. Perhitungan seri konsentrasi fraksi polar ekstrak etanol kulit batang
srikaya ..................................................................................................... 34
Lampiran 5. Perhitungan kepadatan stok sel T47D ..................................................... 35
Lampiran 6. Data uji sitotoksik dengan metode MTT ................................................. 36
Lampiran 7. Perhitungan persentase sel hidup akibat perlakuan fraksi polar
ekstrak etanol kulit batang srikaya (Annona squamosa L.) .................... 37
Lampiran 8. Perhitungan harga IC50 ............................................................................ 39
xi
DAFTAR SINGKATAN
DMSO
Dimetil sulfoksida
ELISA
Enzyme Linked Immuno Sorbant Assay
FBS
Fetal Bovine Serum
IC50
Inhibitory Concentration 50%
KLT
Kromatografi Lapis Tipis
LAF
Laminar Air Flow
RPMI
Rosewell Park Memorial Institute
MTT
3-(4,5-Dimetilltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolium bromide
PBS
Phosphate Buffered Saline
Penstrep
Penicillin Streptomycin
Rf
Retardation factor
UV
Ultraviolet
SDS
Sodium Dodecyl Sulphate
xii
INTISARI
Senyawa kimia dalam tanaman tertentu terbukti berpotensi sebagai agen
sitotoksik. Beberapa penelitian sebelumnya menunjukkan bahwa senyawa dalam
biji dan daun srikaya mempunyai aktivitas sebagai antikanker. Penelitian ini
bertujuan untuk mengetahui aktivitas sitotoksik dari kulit batang srikaya yang
diharapkan memiliki potensi sebagai antikanker dan mengetahui golongan
senyawa yang terkandung.
Kulit batang srikaya dimaserasi menggunakan pelarut etanol 96%,
kemudian difraksinasi dengan kromatografi cair vakum menggunakan pelarut nheksan:etil asetat yang ditingkatkan kepolarannya. Fraksi polar diuji aktivitas
sitotoksiknya terhadap sel T47D dengan seri konsentrasi 150; 100; 50; 25;
10µg/mL. Identifikasi golongan senyawa kimia menggunakan metode
kromatografi lapis tipis dengan menggunakan beberapa pereaksi semprot yaitu
FeCl3, sitroborat, dan Dragendorff.
Hasil uji sitotoksik menunjukkan bahwa fraksi polar ekstrak etanol kulit
batang srikaya mempunyai efek penghambatan sel kanker payudara dengan nilai
IC50 sebesar 43,524µg/mL serta mengandung golongan senyawa alkaloid dan
flavonoid.
Kata Kunci: Annona squamosa L, Fraksi Polar, Sitotoksik, KLT, T47D
xiii
ETANOL KULIT BATANG SRIKAYA (Annona squamosa L.)
TERHADAP SEL T47D
SKRIPSI
Oleh:
CHADIROTUL UMMA
K 100 080 151
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA
SURAKARTA
2012
i
AKTIVITAS SITOTOKSIK FRAKSI POLAR EKSTRAK
ETANOL KULIT BATANG SRIKAYA (Annona squamosa L.)
TERHADAP SEL T47D
SKRIPSI
Diajukan untuk memenuhi salah satu syarat mencapai
Derajat Sarjana Farmasi (S.Farm) pada Fakultas Farmasi
Universitas Muhammadiyah Surakarta
di Surakarta
Oleh:
CHADIROTUL UMMA
K 100 080 151
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA
SURAKARTA
2012
ii
ii
PENGESAHAN SKRIPSI
Berjudul:
AKTIVITAS SITOTOKSIK FRAKSI POLAR EKSTRAK
ETANOL KULIT BATANG SRIKAYA (Annona squamosa L.)
TERHADAP SEL T47D
Oleh:
CHADIROTUL UMMA
K 100 080 151
Dipertahankan di Hadapan Panitia Penguji Skripsi
Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta
Pada tanggal:
Mengetahui,
Fakultas Farmasi
Universitas Muhammadiyah Surakarta
Dekan,
Dr. Muhammad Da’i, M.Si., Apt.
Pembimbing Utama
Pembimbing Pendamping
Dr. Haryoto, M.Sc
Peni Indrayudha, M.Biotech, Apt.
Penguji :
1.
Dr. Muhammad Da’i, M.Si., Apt.
2.
Rosita Melannisa, M.Si., Apt.
3.
Dr. Haryoto, M.Sc
4.
Peni Indrayudha, M.Biotech., Apt.
iii
iii
DEKLARASI
Dengan ini saya menyatakan bahwa dalam skripsi ini tidak terdapat karya
yang pernah diajukan untuk memperoleh gelar kesarjanaan di suatu Perguruan
Tinggi, dan sepanjang pengetahuan saya juga tidak terdapat karya atau pendapat
yang pernah ditulis atau diterbitkan oleh orang lain, kecuali yang secara tertulis
diacu dalam naskah ini dan disebutkan dalam daftar pustaka.
Surakarta, 8 Maret 2012
Peneliti
(Chadirotul Umma)
iv
KATA PENGANTAR
Assalamualaikum wr. wb.
Alhamdulillah, puji syukur kehadirat Allah SWT atas segala rahmat dan
kasih sayang-Nya sehingga penulis diberi kemampuan dan kesempatan untuk
menyusun dan menyelesaikan skripsi yang berjudul “Aktivitas Sitotoksik Fraksi
Polar Ekstrak Etanol Kulit Batang Srikaya (Annona squamosa L.) terhadap
Sel T47D”. Skripsi ini diajukan untuk memenuhi salah satu syarat mencapai
derajat Sarjana Farmasi (S. Farm) pada Fakultas Farmasi Universitas
Muhammadyah Surakarta.
Dalam pelaksanaan penelitian sampai penyelesaian skripsi ini, tidak lepas
dari bantuan dan dukungan berbagai pihak. Oleh karena itu, penulis ingin
menyampaikan ucapan terimakasih kepada:
1.
Dr. Muhammad Da’i, M.Si., Apt., selaku Dekan Fakultas Farmasi Universitas
Muhammadyah Surakarta dan sekaligus penguji skripsi.
2.
Ratna Yuliani, S.Si, M.Biotech., St., selaku pembimbing akademik
3.
Dr. Haryoto, M.Sc., selaku pembimbing utama.
4.
Peni Indrayudha, M.Biotech, Apt., selaku pembimbing pendamping.
5.
Rosita Melannisa, M.Si, Apt., selaku penguji skripsi.
6.
Bapak Aris Budiono dan Ibu Siti Qoriah.
7.
Cita, Hefi, dan Woro, selaku tim peneliti.
8.
Semua pihak yang telah membantu selama penelitian dan penyusunan skripsi
ini.
Semoga segala kebaikan yang diberikan menjadi sebuah amalan tersendiri
dan semoga kerjasama yang pernah terjalin dapat terus berjalan dengan baik.
Penulis menyadari bahwa penulisan skripsi ini masih banyak kekurangan karena
keterbatasan kemampuan, pengetahuan, dan pengalaman. Oleh karena itu, saran
dan kritik yang membangun akan senantiasa diterima untuk menjadikan skripsi ini
lebih baik. Penulis berharap agar hasil penelitian ini dapat bermanfaat dan
memberikan sumbangan bagi perkembangan ilmu pengetahuan.
v
Wassalamualaikum wr. wb.
Surakarta, 8 Maret 2012
Penulis
vi
DAFTAR ISI
Halaman
HALAMAN JUDUL............................................................................................. ii
HALAMAN PENGESAHAN ............................................................................... iii
HALAMAN DEKLARASI................................................................................... iv
KATA PENGANTAR .......................................................................................... v
DAFTAR ISI ......................................................................................................... vii
DAFTAR GAMBAR ............................................................................................ ix
DAFTAR TABEL ................................................................................................. x
DAFTAR LAMPIRAN ......................................................................................... xi
DAFTAR SINGKATAN ...................................................................................... xii
INTISARI............................................................................................................ xiii
BAB I. PENDAHULUAN
A. Latar Belakang...................................................................................... 1
B. Perumusan Masalah .............................................................................. 2
C. Tujuan Penelitian .................................................................................. 2
D. Tinjauan Pustaka .................................................................................. 3
1. Tumbuhan Srikaya (Annona squamosa L.) ..................................... 3
2. Kanker .............................................................................................. 5
3. Sel T47D .......................................................................................... 7
4. Uji Sitotoksik dengan Metode MTT assay ...................................... 7
E. Landasan Teori ..................................................................................... 8
F. Hipotesis ............................................................................................... 9
BAB II. METODE PENELITIAN
A. Kategori penelitian .............................................................................. 10
B. Alat dan bahan ...................................................................................... 10
1. Alat yang digunakan ........................................................................ 10
2. Bahan yang digunakan ..................................................................... 11
vii
C. Jalannya Penelitian .............................................................................. 11
1. Determinasi tanaman ....................................................................... 11
2. Penyiapan Bahan.............................................................................. 11
3. Ekstraksi........................................................................................... 12
4. Fraksinasi ......................................................................................... 12
5. Uji Kandungan Senyawa dengan KLT ............................................ 13
6. Uji Aktivitas Antikanker .................................................................. 13
D. Cara Analisis ........................................................................................ 15
1. Uji sitotoksik .................................................................................... 15
2. Analisis Kromatografi Lapis Tipis .................................................. 15
BAB III. HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN
A. Determinasi Tanaman ........................................................................... 16
B. Ekstraksi ............................................................................................... 16
C. Fraksinasi .............................................................................................. 17
D. Uji Sitotoksik Fraksi Polar Ekstrak Etanol Kulit Batang Srikaya
(Annona squamosa L.) terhadap sel T47D ........................................... 18
E. Analisis Kualitatif Kandungan Kimia .................................................. 21
BAB IV. KESIMPULAN DAN SARAN
A. Kesimpulan ............................................................................................... 25
B. Saran .......................................................................................................... 25
DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................... 26
LAMPIRAN .......................................................................................................... 30
viii
DAFTAR GAMBAR
Halaman
Gambar 1. Strukutur umum senyawa asetogenin .................................................. 5
Gambar 2. Reaksi reduksi MTT menjadi formazan oleh enzim reduktase ........... 8
Gambar 3. Profil KLT hasil fraksinasi .................................................................. 17
Gambar 4. Profil KLT hasil gabungan fraksi ........................................................ 18
Gambar 5. Morfologi sel T47D ............................................................................. 19
Gambar 6. Grafik hubungan antara log konsentrasi versus pesen sel hidup ......... 20
Gambar 7. Hasil KLT fraksi polar ekstrak etanol kulit batang srikaya ................ 21
ix
DAFTAR TABEL
Halaman
Tabel 1. Persentase sel hidup dari sel T47D akibat perlakuan fraksi polar ekstrak
etanol kulit batang srikaya (Annona squamosa L.) .......................................... 20
Tabel 2. Identifikasi golongan senyawa fraksi polar ekstrak etanol kulit batang
srikaya dengan beberapa pereaksi semprot ...................................................... 21
x
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
Lampiran 1. Surat keterangan determinasi................................................................... 30
Lampiran 2. Foto tanaman srikaya (Annona squamosa L.) ......................................... 32
Lampiran 3. Foto Alat Fraksinasi................................................................................. 33
Lampiran 4. Perhitungan seri konsentrasi fraksi polar ekstrak etanol kulit batang
srikaya ..................................................................................................... 34
Lampiran 5. Perhitungan kepadatan stok sel T47D ..................................................... 35
Lampiran 6. Data uji sitotoksik dengan metode MTT ................................................. 36
Lampiran 7. Perhitungan persentase sel hidup akibat perlakuan fraksi polar
ekstrak etanol kulit batang srikaya (Annona squamosa L.) .................... 37
Lampiran 8. Perhitungan harga IC50 ............................................................................ 39
xi
DAFTAR SINGKATAN
DMSO
Dimetil sulfoksida
ELISA
Enzyme Linked Immuno Sorbant Assay
FBS
Fetal Bovine Serum
IC50
Inhibitory Concentration 50%
KLT
Kromatografi Lapis Tipis
LAF
Laminar Air Flow
RPMI
Rosewell Park Memorial Institute
MTT
3-(4,5-Dimetilltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolium bromide
PBS
Phosphate Buffered Saline
Penstrep
Penicillin Streptomycin
Rf
Retardation factor
UV
Ultraviolet
SDS
Sodium Dodecyl Sulphate
xii
INTISARI
Senyawa kimia dalam tanaman tertentu terbukti berpotensi sebagai agen
sitotoksik. Beberapa penelitian sebelumnya menunjukkan bahwa senyawa dalam
biji dan daun srikaya mempunyai aktivitas sebagai antikanker. Penelitian ini
bertujuan untuk mengetahui aktivitas sitotoksik dari kulit batang srikaya yang
diharapkan memiliki potensi sebagai antikanker dan mengetahui golongan
senyawa yang terkandung.
Kulit batang srikaya dimaserasi menggunakan pelarut etanol 96%,
kemudian difraksinasi dengan kromatografi cair vakum menggunakan pelarut nheksan:etil asetat yang ditingkatkan kepolarannya. Fraksi polar diuji aktivitas
sitotoksiknya terhadap sel T47D dengan seri konsentrasi 150; 100; 50; 25;
10µg/mL. Identifikasi golongan senyawa kimia menggunakan metode
kromatografi lapis tipis dengan menggunakan beberapa pereaksi semprot yaitu
FeCl3, sitroborat, dan Dragendorff.
Hasil uji sitotoksik menunjukkan bahwa fraksi polar ekstrak etanol kulit
batang srikaya mempunyai efek penghambatan sel kanker payudara dengan nilai
IC50 sebesar 43,524µg/mL serta mengandung golongan senyawa alkaloid dan
flavonoid.
Kata Kunci: Annona squamosa L, Fraksi Polar, Sitotoksik, KLT, T47D
xiii