Uji Validasi Dan Estimasi Kandungan Natriumbenzoat Dan Vitamin B6 Pada Minuman Berenergi Secara Spektrofotometri Derivatif
Lampiran 1. Perhitungan Pembuatan Pelarut HCl 0,1 N
HCl pekat
=
37% ~ 12 N
V1 x N1
=
V2 x N2
V 1 x 12 N
=
1000 mL x 0,1 N
V1
=
1000 mL x 0,1 N
12 N
=
8,3 ml
=
8,5 ml
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 2. Bagan Alir Prosedur Penelitian
Natrium benzoat BPFI
ditimbang secara seksama 59 mg
dimasukkan ke dalam labu tentukur
25 mL
dilarutkan dan dicukupkan dengan
HCL 0,1N
LIB I Natrium benzoat 500 μg/ml
diambil 10 mL
dimasukkan ke dalam labu tentukur
25 mL
dilarutkan dan dicukupkan dengan
HCL 0,1N
LIB II Natrium benzoat 50 μg/ml
diambil 1,5
mL
diambil 2,5
mL
diambil 2 mL
Standar 1
Standar 2
Standar 3
3 μg/mL
4 μg/mL
5 μg/mL
diukur serapan
maksimum
pada λ 200400nm
diambil 3,5
mL
diambil 3 mL
Standar 4
Standar 5
6 μg/mL
7 μg/mL
Standar 3
5 μg/mL
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 2. (Lanjutan)
Vitamin B6 BPFI
ditimbang seksama 50 mg
dimasukkan ke dalam labu tentukur
25 mL
dilarutkan dan dicukupkan dengan
HCL 0,1N
LIB I Vitamin B6 500 μg/ml
Diambil 10 mL
dimasukkan ke dalam labu tentukur
25 mL
dilarutkan dan dicukupkan dengan
HCL 0,1N
LIB II Vitamin B6 50 μg/ml
diambil 4,75
mL
diambil 3,75
mL
diambil 3 mL
Standar 1
Standar 2
Standar 4
6 μg/mL
7,5 μg/mL
10,5 μg/mL
diambil 5,25
mL
diukur serapan
maksimum
pada λ 200400nm
diambil 6 mL
Standar 3
Standar 5
9,5 μg/mL
12 μg/mL
Standar
10,5 μg/mL
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 2. (Lanjutan)
Larutan Standar Natrium Benzoat
3 μg/mL, 4μg/mL, 5μg/mL, 6μg/mL dan 7 μg/mL
diukur serapan pada λ 200-400 nm
ditransformasikan ke serapan
derivat pertama
ditransformasikan ke serapan
derivat kedua
ditentukan zero crossing
ditentukan panjang gelombang
analisis
λ 245,4 nm
dibuat kurva kalibrasi
Persamaan Regresi
Larutan Standar Vitamin B6
6 μg/mL, 7,5μg/mL, 9,5μg/mL, 10,5μg/mL dan 12 μg/mL
diukur serapan pada λ 200-400 nm
ditransformasikan ke serapan
derivat pertama
ditransformasikan ke serapan
derivat kedua
ditentukan zero crossing
ditentukan panjang gelombang
analisis
λ 307,4 nm
dibuat kurva kalibrasi
Persamaan Regresi
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 2. (Lanjutan)
Sampel
diambil 20 mL
dimasukkan ke dalam beaker
dipanaskan
disaring
didinginkan pada suhu kamar
diambil 1 mL
dimasukkan ke dalam labu tentukur
25 mL
dilarutkan dan dicukupkan dengan
HCL 0,1N
diukur pada λ 245,4 nm dan 307,4
nm
Nilai Absorbansi
dihitung
Kadar
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 3. Kurva Serapan Natrium Benzoat pada Berbagai Konsentrasi
0 ,3 0 0 0
Abs.
0 ,2 0 0 0
0 ,1 0 0 0
0 ,0 0 0 0
-0 ,0 3 7 1
2 0 0 ,0 0
2 5 0 ,0 0
3 0 0 ,0 0
nm .
3 5 0 ,0 0
40
Kurva serapan natrium benzoat 3 μg/mL
Kurva serapan natrium benzoat 4 μg/mL
Kurva serapan natrium benzoat 5 μg/mL
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 3. (Lanjutan)
0,6000
Abs.
0,4000
0,2000
0,0000
-0,0666
200,00
250,00
300,00
nm .
350,00
400
Kurva serapan natrium benzoat 6 μg/mL
Kurva serapan natrium benzoat 7 μg/mL
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 4. Kurva Serapan Vitamin B6 pada Berbagai Konsentrasi
Abs.
0 ,4 0 0 0
0 ,2 0 0 0
0 ,0 0 0 0
-0 ,1 7 7 3
2 0 0 ,0 0
2 5 0 ,0 0
3 0 0 ,0 0
nm .
3 5 0 ,0 0
40
Kurva Serapan Vitamin B6 6 μg/mL
Kurva Serapan Vitamin B6 7,5 μg/mL
Kurva Serapan Vitamin B6 9,5 μg/mL
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 4. (Lanjutan)
Abs.
0,5000
0,0000
-0,1996
200,00
250,00
300,00
nm .
350,00
400
Kurva Serapan Vitamin B6 10,5 μg/mL
Kurva Serapan Vitamin B6 12 μg/mL
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 5. Kurva Serapan Derivat Pertama Natrium Benzoat pada Berbagai
Konsentrasi
Abs.
0 ,0 0 0 0
-0 ,0 2 0 0
-0 ,0 4 0 0
-0 ,0 5 6 8
2 0 0 ,0 0
2 5 0 ,0 0
3 0 0 ,0 0
nm .
3 5 0 ,0 0
40
Kurva serapan derivat pertama natrium benzoat 3 μg/mL
Kurva serapan derivat pertama natrium benzoat 4 μg/mL
Kurva serapan derivat pertamanatrium benzoat 5 μg/mL
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 5. (Lanjutan)
Abs.
0 ,0 0 0 0
-0 ,0 5 0 0
-0 ,1 0 0 0
-0 ,1 0 4 3
2 0 0 ,0 0
2 5 0 ,0 0
3 0 0 ,0 0
nm .
3 5 0 ,0 0
400
Kurva serapan derivat pertama natrium benzoat 6 μg/mL
Kurva serapan derivat pertamanatrium benzoat 7 μg/mL
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 6. Kurva Serapan Derivat Pertama Vitamin B6 pada Berbagai
Konsentrasi
Abs.
0 ,0 0 0 0
-0 ,0 2 0 0
-0 ,0 4 0 0
-0 ,0 4 3 0
2 0 0 ,0 0
2 5 0 ,0 0
3 0 0 ,0 0
nm .
3 5 0 ,0 0
400
Kurva Serapan Derivat Pertama Vitamin B6 6 μg/mL
Kurva Serapan Derivat Pertama Vitamin B6 7,5 μg/mL
Kurva Serapan Derivat Pertama Vitamin B6 9,5 μg/mL
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 6. (Lanjutan)
Abs.
0,0000
-0,0500
-0,0756
200,00
250,00
300,00
nm .
350,00
40
Kurva Serapan Derivat Pertama Vitamin B6 10,5 μg/mL
Kurva Serapan Derivat Pertama Vitamin B6 12 μg/mL
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 7. Kurva Serapan Derivatif Kedua Natrium Benzoat pada Berbagai
Konsentrasi
0 ,0 1 0 0
Abs.
0 ,0 0 5 0
0 ,0 0 0 0
-0 ,0 0 3 7
2 0 0 ,0 0
2 5 0 ,0 0
3 0 0 ,0 0
nm .
3 5 0 ,0 0
40
Kurva Serapan Derivat Kedua Natrium Benzoat 3 μg/mL
Kurva Serapan Derivat Kedua Natrium Benzoat 4 μg/mL
Kurva Serapan Derivat Kedua Natrium Benzoat 5 μg/mL
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 7. (Lanjutan)
0,0200
Abs.
0,0100
0,0000
-0,0073
200,00
250,00
300,00
nm .
350,00
40
Kurva Serapan Derivat Kedua Natrium Benzoat 6 μg/mL
Kurva Serapan Derivat Kedua Natrium Benzoat 7 μg/mL
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 8. Kurva Serapan Derivat Kedua Vitamin B6 pada Berbagai
Konsentrasi
0 ,0 0 5 0
Abs.
0 ,0 0 0 0
-0 ,0 0 5 0
-0 ,0 0 8 5
2 0 0 ,0 0
2 5 0 ,0 0
3 0 0 ,0 0
nm .
3 5 0 ,0 0
40
Kurva Serapan Derivat Kedua Vitamin B6 6 μg/mL
Kurva Serapan Derivat Kedua Vitamin B6 7,5 μg/mL
Kurva Serapan Derivat Kedua Vitamin B6 9,5 μg/mL
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 8. (Lanjutan)
Abs.
0,0000
-0,0100
-0,0207
200,00
250,00
300,00
nm .
350,00
40
Kurva Serapan Derivat Kedua Vitamin B6 10,5 μg/mL
Kurva Serapan Derivat Kedua Vitamin B6 6 μg/mL
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 9. Perhitungan Persamaan Garis Regresi Natrium Benzoat
Konsentrasi (μg/mL)
(X)
0,0000
3,0000
4,0000
5,0000
6,0000
7,0000
No.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
No.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
Absorbansi
(Y)
0,0000
0,0019
0,0025
0,0032
0,0037
0,0043
X
Y
X2`
Y2
XY
0,0000
3,0000
4,0000
5,0000
6,0000
7,0000
ΣX = 25
0,0000
0,0019
0,0025
0,0032
0,0037
0,0043
ΣY = 0,0156
0,0000
9,0000
16,0000
25,0000
36,0000
49,0000
0,0000
3,61.10-6
6,25.10-6
1,024.10-5
1,369.10-5
1,849.10-5
ΣY2 =
5,228.10-5
0,0000
0,0057
0,0010
0,0160
0,0222
0,0301
ΣXY =
0,0840
�
X = 4,1667
�=
�
Y = 2,6.10-3
ΣX2 = 135
�(∑ ��) − (∑ �)(∑ �)
6 (0,840) − (25)(0,0156)
=
�(∑ �2 ) − (∑ �)2
6 (135) − (252 )
−4
= 6,16216 . 10
�� = ��� + �
� = �� − ��� = (2,6. 10−3 ) − (6,16216. 10−4 )(4,1667) = 2,6899. 10−5
Maka persamaan garis regresinya adalah � = (6,16216� + 0,26899) × 10−4
Perhitungan Koefisien Korelasi :
�=
�(∑ ��) − (∑ �)(∑ �)
���(∑ �2 ) − (∑ �)2 ���(∑ � 2 ) − (∑ �)2 �
Universitas Sumatera Utara
�=
6 (0,0840) − (25)(0,0156)
�[6 (135) − 252 ][6 (5,228. 10−5 ) − (0,0156)2 ]
= 0,9995
Maka, koefisien korelasi dari data kalibrasi serapan derivat kedua natrium benzoat
pada panjang gelombang 245,4 nm adalah 0,9995.
Lampiran 10. Perhitungan Persamaan Garis Regresi Vitamin B6
Konsentrasi (μg/mL)
(X)
0,0000
6,0000
7,5000
9,5000
10,5000
12,0000
No.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
No.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
X
0,0000
6,0000
7,5000
9,5000
10,5000
12,0000
ΣX = 45,5
� = 7,5833
X
�=
Y
0,0000
0,0017
0,0023
0,0029
0,0032
0,0037
ΣY = 0,0138
� = 0,0023
Y
Absorbansi
(Y)
0,0000
0,0017
0,0023
0,0029
0,0032
0,0037
X2`
0,0000
36,0000
56,2500
90,2500
110,2500
144,0000
ΣX2 =
436,75
Y2
0,0000
2,89.10-6
5,29.10-6
8,41.10-6
1,024.10-5
1,636910-5
ΣY2 =
4,052.10-5
XY
0,0000
0,0102
0,01725
0,0275
0,0336
0,0444
ΣXY =
0,1330
�(∑ ��) − (∑ �)(∑ �)
6 (0,1330) − (45,5)(0,0138)
=
6 (436,75) − (45,52 )
�(∑ � 2 ) − (∑ �)2
= 3,09132 . 10−4
�� = ��� + �
� = �� − ��� = (0,0023) − (3,09132. 10−4 )(7,5883) = − 4,425. 10−5
Maka persamaan garis regresinya adalah � = (3,09132� − 0,4425) × 10−4
Perhitungan Koefisien Korelasi :
Universitas Sumatera Utara
�=
�=
�(∑ ��) − (∑ �)(∑ �)
���(∑ �2 ) − (∑ �)2 ���(∑ � 2 ) − (∑ �)2 �
6 (0,1330) − (45,5)(0,0138)
�[6 (436,75) − (45,5)2 ][6 (4,052. 10−5 ) − (0,0138)2 ]
= 0,9991
Maka, koefisien korelasi dari data kalibrasi serapan derivat kedua vitamin B6
pada panjang gelombang 307,4 nm adalah 0,9991.
Lampiran 11. Perhitungan Batas Deteksi (LOD) dan Batas Kuantitasi (LOQ)
Natrium Benzoat
Persamaan garis regresinya adalah Y = (6,16216X + 0,266899) . 10-4
No.
1
2
3
4
5
6
X
0,0000
3,0000
4,0000
5,0000
6,0000
7,0000
Yi (10 -3)
0,02669
1,87534
2,49155
3,10777
3,72399
4,34020
Y
0,0000
0,0019
0,0025
0,0032
0,0037
0,0043
Y-Yi (10-5)
-2,6690
2,4662
0,8446
9,2230
-2,3986
-4,0202
Σ (Y-Yi)2
(Y-Yi)2 (10-9)
0,7123
0,6082
0,0713
8,5064
0,5753
1,6162
12,0898
2
2
−9
∑(�−��)
(12,0898.10 )
�� = � �−2 = �
= 6,0449 .10-9
6−2
��� =
3 × ��
�����
��� =
10 × ��
�����
=
3 ×6,0449.10−9
6,16216.10−4
= 2,94 .10-5 μg/mL
−9
-5
= 10 ×6,0449.10
−4 = 9,81 .10 μg/mL
6,16216.10
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 12. Perhitungan Batas Deteksi (LOD) dan Batas Kuantitasi (LOQ)
Vitamin B6
Persamaan garis regresinya adalah Y = (3,09132X – 0,4425) . 10-4
No.
1
2
3
4
5
6
X
0,0000
6,0000
7,5000
9,5000
10,5000
12,0000
∑(�−��)
�� = � �−2
��� =
3 × ��
�����
��� =
10 × ��
�����
Yi (10 -3)
-0,0443
1,8105
2,2742
2,2892
3,2016
3,6653
Y
0,0000
0,0017
0,0023
0,0029
0,0032
0,0037
(Y-Yi)2 (10-9)
1,9581
12,2195
0,6636
0,0562
0,0027
1,2017
16,1018
2
−9
(16,1018.10 )
=�
= 8,0509.10-9
2
=
Y-Yi (10 -5)
4,4250
-11,0542
2,5760
0,7496
-0,1636
3,4666
Σ(Y-Yi)2
6−2
3 ×8,0509.10−9
3,0913.10−4
=
= 7,8131.10-5 μg/mL
10 ×8,0509.10−9
3,0913.10−4
= 2,6043.10-4 μg/mL
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 13. Kurva Serapan Derivat Kedua Penetapan Kadar Sampel
Sampel 1 Minuman Berenergi Merek K
Universitas Sumatera Utara
Sampel 2 Minuman Berenergi Merek K
Lampiran 13. (Lanjutan)
Sampel 3 Minuman Berenergi Merek K
Universitas Sumatera Utara
Sampel 4 Minuman Berenergi Merek K
Lampiran13. (Lanjutan)
Sampel 5 Minuman Berenergi Merek K
Universitas Sumatera Utara
Sampel 6 Minuman Berenergi Merek K
Lampiran13(Lanjutan)
Sampel 1 Minuman Berenergi Merek M
Universitas Sumatera Utara
Sampel 2 Minuman Berenergi Merek M
Lampiran13(Lanjutan)
Sampel 3 Minuman Berenergi Merek M
Universitas Sumatera Utara
Sampel 4 Minuman Berenergi Merek M
Lampiran13(Lanjutan)
Sampel 5 Minuman Berenergi Merek M
Universitas Sumatera Utara
Sampel 6 Minuman Berenergi Merek M
Lampiran 14. Hasil Analisis Kadar Natrium Benzoat dan Vitamin B6 dalam
Sampel
1. Sampel Merek K
No.
Vol.
(mL)
A 245,4
A 307,4
1
2
3
4
5
6
1
1
1
1
1
1
0,0113
0,0109
0,0109
0,0112
0,0109
0,0109
0,0007
0,0008
0,0007
0,0007
0,0007
0,0007
�
Konsentrasi
Natrium
Benzoat
(μg/mL)
Kadar
Natrium
Benzoat
(mg/kg)
Konsentrasi
Vitamin B6
(μg/mL)
541,8439
522,6182
522,6182
537,0375
522,6182
522,6182
528,2257
513,8192
495,5878
495,5878
509,2614
495,5878
495,5878
500,9053
60,1588
68,2419
60,1588
60,1588
60,1588
60,1588
61,5060
Jumlah
Vitamin
B6
(mg /
sajian)
9,0238
10,2363
9,0238
9,0238
9,0238
9,0238
9,2260
2. Sampel Merek M
Universitas Sumatera Utara
No.
Vol.
(mL)
A 245,4
A 307,4
1
2
3
4
5
6
1
1
1
1
1
1
0,0117
0,0117
0,0118
0,0118
0,0118
0,0119
0,0014
0,0014
0,0014
0,0011
0,0012
0,0015
�
Konsentrasi
Natrium
Benzoat
(μg/mL)
Kadar
Natrium
Benzoat
(mg/kg)
Konsentrasi
Vitamin B6
(μg/mL)
561,0696
561,0696
565,8761
565,8761
565,8761
570,6825
565,0750
533,2191
533,2191
537,7869
537,7869
537,7869
542,3548
537,0256
116,7406
116,7406
116,7406
92,4913
100,5744
124,8237
111,3519
Jumlah
Vitamin
B6
(mg /
sajian)
17,5111
17,5111
17,5111
13,8737
15,0861
18,7236
16,7028
Lampiran 15. ContohPerhitungan Kadar Natrium Benzoat dan Vitamin B6 dalam
Sampel
I.
Merek K
Absorbansi (Y) :
Natrium Benzoat
Vitamin B6
= 0,0113
= 0,0007
Persamaan regresi pada panjang gelombang analisis maksimum untuk natrium
benzoat pada 245,4 nm : Y = (6,16216X + 0,266899) . 10-4
Persamaan regresi pada panjang gelombang analisis maksimum untuk vitamin B6
pada 307,4 nm : Y = (3,09132X – 0,42526) . 10-4
Sehingga untuk mendapatkan kadar (X) sampel digunakan subtitusi (Y) terhadap
persamaan regresi pada masing-masing panjang gelombang.
1. Natrium Benzoat
Konsentrasi Natrium Benzoat : 0,0113 = (6,16216� + 0,266899). 10−4
(asam benzoat) � =
0,0113
� –0,266899
10−4
�
6,16216
= 18,2944 μg/mL
Universitas Sumatera Utara
Kadar Asam Benzoat :
C
V
Fp
W
Maka,
����
�
: kosentrasi larutan sampel (μg/mL)
: volume larutan pengenceran (mL)
: faktor pengenceran
: volume sampel (mL)
18,2944 �� /�� × 25 �� × 1
= 457,3603 μg/mL
1 ��
Kadar yang dihitung merupakan kadar dari asam benzoat. Untuk menghitung
kadar natrium benzoat maka digunakan rumus :
= ����� ���� ������� ×
= 457,3603 ×
144 ,1
122 ,1
�� ������� �������
�� ���� �������
× ������ ����� ����
× 100,40% = 541,8439 μg/mL
Lampiran 15(Lanjutan)
100 mL sampel merek K setara dengan 105,4542 g. Maka kadar natrium benzoat
dalam sampel :
= 541,8439 μg/mL
= 54184,39 μg/100 mL
= 54184,39 μg/105,4542 g
= 513,8192 μg/g
= 513,8192 mg/kg
2. Vitamin B6
Konsentrasi Vitamin B6
Kadar Vitamin B6
:
: 0,0007 = (3,09132� − 0,442526). 10−4
�=
0,0007
+0,442526
10 −4
3,09132
= 2,4075 μg/mL
����
�
Universitas Sumatera Utara
C
V
Fp
W
Maka,
: kosentrasi larutan sampel (μg/mL)
: volume larutan pengenceran (mL)
: faktor pengenceran
: volume sampel (mL)
2,4075 �� /�� × 25 �� × 1
= 60,1875 μg/mL
1 ��
Kadar vitamin B6 dalam sampel:
= ����� ������� �6 × ������ ����� ����
= 60,1875 × 99,95% = 60,1588 μg/mL
Jumlah vitamin B6 per sajian sampel :
= ����� ������� �6 × ������ ����� ������
= 60,1588 μg/mL × 150 �� = 9,0238 mg/sajian
Lampiran 15(Lanjutan)
II. Merek M
Panjang gelombang analisis (Y) :
Natrium Benzoat
Vitamin B6
= 0,0117
= 0,0014
Persamaan regresi pada panjang gelombang analisis maksimum untuk natrium
benzoat pada 245,4 nm : Y = (6,16216X + 0,266899) . 10-4
Persamaan regresi pada panjang gelombang analisis maksimum untuk vitamin B6
pada 307,4 nm : Y = (3,09132X – 0,42526) . 10-4
Sehingga untuk mendapatkan kadar (X) sampel digunakan subtitusi (Y) terhadap
persamaan regresi pada masing-masing panjang gelombang.
1. Natrium Benzoat
Konsentrasi Natrium Benzoat : 0,0117 = (6,16216� + 0,266899). 10−4
(asam benzoat) � =
0,0117
� –0,266899
10−4
�
6,16216
= 18,9435 μg/mL
Universitas Sumatera Utara
Kadar Asam Benzoat :
C
V
Fp
W
Maka,
����
�
: kosentrasi larutan sampel (μg/mL)
: volume larutan pengenceran (mL)
: faktor pengenceran
: volume sampel (mL)
18,9435 �� /�� × 25 �� × 1
= 473,5884 μg/mL
1 ��
Kadar yang dihitung merupakan kadar dari asam benzoat. Untuk menghitung
kadar natrium benzoat maka digunakan rumus :
= ����� ���� ������� ×
= 473,5884 ×
144 ,1
122 ,1
�� ������� �������
�� ���� �������
× ������ ����� ����
× 100,40% =561,0696 μg/mL
Lampiran 15(Lanjutan)
100 mL sampel merek M setara dengan 105,2231g. Maka kadar natrium benzoat
dalam sampel :
= 561,0696 μg/mL
= 56106,96 μg/100 mL
= 56106,96 μg/105,4542 g
= 533,2191 μg/g
= 533,2191 mg/kg
2. Vitamin B6
Konsentrasi Vitamin B6
Kadar Vitamin B6
:
: 0,0014 = (3,09132� − 0,442526). 10−4
�=
0,0014
+0,442526
10 −4
3,09132
=4,6720 μg/mL
����
�
Universitas Sumatera Utara
: kosentrasi larutan sampel (μg/mL)
: volume larutan pengenceran (mL)
: faktor pengenceran
: volume sampel (mL)
C
V
Fp
W
Maka,
4,6720 �� /�� × 25 �� × 1
= 116,8 μg/mL
1 ��
Kadar vitamin B6 dalam sampel:
= ����� ������� �6 × ������ ����� ����
= 116,8 × 99,95% =116,7406 μg/mL
Jumlah vitamin B6 per sajian sampel :
= ����� ������� �6 × ������ ����� ������
= 116,7406 μg/mL × 150 �� = 17,5111 mg/sajian
Lampiran 16. Perhitungan Statistik Kadar Natrium Benzoat dalam Sampel
1. Sampel Merek K
No.
1
2
3
4
5
6
X
Kadar (μg/mL)
541,8439
522,6182
522,6182
537,0375
522,6182
522,6182
ΣX =3169,2257
�= 528,2257
(� − �)
13,6182
-5,6075
-5,6075
8,8118
-5,6075
-5,6075
2
185,4560
31,4441
31,4441
77,6477
31,4441
31,4441
2
Σ(� − �) = 388,8800
2
SD
(� − �)
∑��−��
388,8800
=�
=�
= 8,8191
�−1
6−1
Pada interval kepercayaan 99% dengan nilai α = 0,01, dk = 5,
maka t (α/2,dk) = 4,0321
Universitas Sumatera Utara
Data diterima jika t hitung < t tabel
t hitung 1
t hitung 2
t hitung 3
t hitung 4
t hitung 5
t hitung 6
=�
�−�
�
�� ⁄√�
=�
=�
�−�
�
�� ⁄√�
=�
=�
=�
=�
=�
�−�
�
�� ⁄√�
�−�
�
�� ⁄√�
�−�
�
�� ⁄√�
�−�
�
�� ⁄√�
13,6182
�= 3,7824
8,81907 ⁄√6
=�
−5,6075
�= 1,5575
8,8191 ⁄√6
=�
8,8118
�= 2,4475
8,8191 ⁄√6
=�
=�
−5,6075
�= 1,5575
8,8191 ⁄√6
−5,6075
�= 1,5575
8,8191 ⁄√6
−5,6075
�= 1,5575
8,8191 ⁄√6
Dari hasil perhitungan tersebut diperoleh bahwa semua t hitung < t tabel, maka
semua data tersebut diterima.
Lampiran 16(Lanjutan)
Kadar natrium benzoat pada sampel merek K :
μ = � ± (t α/2, dk) x SD / √n)
= 528,2257 ± (4,0321 x 8,8191 / √6)
= (528,2257 ± 14,5182) μg/mL
= (52822,57 ± 1451,82)μg/100 mL
= (52822,57 ± 1451,82)μg/105,4542 g
= (500,9053 ± 13,7673)μg/g
= (500,9053 ± 13,7673)mg/kg
2. Sampel Merek M
No.
X
Kadar (μg/mL)
(� − �)
(� − �)
2
Universitas Sumatera Utara
1
2
3
4
5
6
SD
561,0696
561,0696
565,8761
565,8761
565,8761
570,6825
ΣX =3390,45
�= 565,075
=�
∑��−��
�−1
2
=�
-4,0054
-4,0054
0,8011
0,8011
0,8011
5,6075
16,0429
16,0429
0,6417
0,6417
0,6417
31,6417
2
Σ(� − �) = 65,4550
65,4550
6−1
= 3,6181
Pada interval kepercayaan 99% dengan nilai α = 0,01, dk = 5,
maka t (α/2,dk) = 4,0321
Data diterima jika t hitung < t tabel.
t hitung 1
=�
�−�
�
�� ⁄√�
=�
−4,0054
�= 2,7116
3,6181 ⁄√6
Lampiran 16(Lanjutan)
t hitung 2
t hitung 3
t hitung 4
t hitung 5
t hitung 6
=�
�−�
�
�� ⁄√�
=�
−4,0054
�= 2,7116
3,6181 ⁄√6
=�
�−�
�
�� ⁄√�
=�
0,8011
�= 0,5423
3,6181 ⁄√6
=�
=�
=�
�−�
�
�� ⁄√�
�−�
�
�� ⁄√�
�−�
�
�� ⁄√�
=�
=�
=�
0,8011
�= 0,5423
3,6181 ⁄√6
0,8011
�= 0,5423
3,6181 ⁄√6
5,6075
�= 3,7963
3,6181 ⁄√6
Dari hasil perhitungan tersebut siperoleh bahwa semua t hitung < t tabel, maka
semua data tersebut diterima.
Universitas Sumatera Utara
Kadar natrium benzoat pada sampel merek M :
μ = � ± (t α/2, dk) x SD / √n)
= 565,075 ± (4,0321 x 3,6181 / √6)
= (565,075 ± 5,9557) μg/mL
= (56507,5 ± 595,57) μg/100 mL
= (56507,5 ± 595,57) μg/105,2231 g
= (537,0256 ± 5,6981) μg/g
= (537,0256 ± 5,6981) mg/kg
Lampiran 17. Perhitungan Statistik Kadar Vitamin B6 dalam Sampel
1. Sampel Merek K
No.
1
2
3
4
5
6
X
Kadar (μg/mL)
60,1588
68,2419
60,1588
60,1588
60,1588
60,1588
ΣX = 369,5060
�= 61,5060
(� − �)
-1,3472
6,7359
-1,3472
-1,3472
-1,3472
-1,3472
2
1,8149
45,3727
1,8149
1,8149
1,8149
1,8149
2
Σ(� − �) = 54,4473
2
SD
(� − �)
∑��−��
54,4473
=�
=�
= 3,2999
�−1
6−1
Pada interval kepercayaan 99% dengan nilai α = 0,01, dk = 5,
Universitas Sumatera Utara
maka t (α/2,dk) = 4,0321
Data diterima jika t hitung < t tabel,
t hitung 1
t hitung 2
t hitung 3
t hitung 4
t hitung 5
t hitung 6
=�
�−�
�
�� ⁄√�
=�
�� ⁄√�
=�
=�
=�
=�
�−�
�
�� ⁄√�
�−�
�−�
�� ⁄√�
=�
=�
�=�
�=�
�−�
�
�� ⁄√�
�−�
�
�� ⁄√�
=�
=�
−1,3472
�= 1
3,2999⁄√6
8,3.10 −3
�= 4
3,2999⁄√6
6,7359
3,2999⁄√6
−1,3472
3,2999⁄√6
�= 1
�= 1
−1,3472
�= 1
3,2999⁄√6
−1,3472
�= 1
3,2999⁄√6
Dari hasil perhitungan tersebut diperoleh bahwa semua t hitung < t tabel, maka
semua data tersebut diterima.
Lampiran 17(Lanjutan)
Kadar vitamin B6 pada sampel merek K :
μ = � ± (t α/2, dk) x SD / √n)
= 61,5060 ± (4,0321 x 3,2999 / √6)
= (61,5060 ± 13,2758) μg/mL
Jumlah per sajian vitamin B6 pada sampel merek K :
μ = (61,5060 ± 13,2758) μg/mL X 150 mL
= (9,2559 ± 1,9914) mg
2. Sampel Merek M
Universitas Sumatera Utara
No.
1
2
3
4
5
6
X
Kadar (μg/mL)
116,7406
116,7406
116,7406
92,4913
100,5744
124,8237
ΣX = 668,1113
�= 111,3519
(� − �)
5,3387
5,3387
5,3387
-18,8606
-10,7775
13,4719
2
29,0386
29,0386
29,0386
355,7224
116,1543
181,4910
2
Σ(� − �) = 740,4834
2
SD
(� − �)
∑��−��
740,4834
=�
=�
= 12,1695
�−1
6−1
Pada interval kepercayaan 99% dengan nilai α = 0,01, dk = 5,
maka t (α/2,dk) = 4,0321
Data diterima jika t hitung < t tabel.
t hitung 1
=�
�−�
�
�� ⁄√�
=�
6,7.10 −5
�=1,0846
0,00015 ⁄√6
Lampiran 17(Lanjutan)
t hitung 2
t hitung 3
t hitung 4
t hitung 5
t hitung 6
=�
�−�
�
�� ⁄√�
=�
6,7.10 −5 .
�= 1,0846
0,00015 ⁄√6
=�
�−�
�
�� ⁄√�
=�
−0,00023
�= 3,7963
0,00015 ⁄√6
=�
0,00017
�= 2,7116
0,00015 ⁄√6
=�
=�
=�
�−�
�
�� ⁄√�
�−�
�
�� ⁄√�
�−�
�
�� ⁄√�
=�
=�
6,7.10 −5
�= 1,0846
0,00015 ⁄√6
−0,00013
�= 2,1693
0,00015 ⁄√6
Dari hasil perhitungan tersebut diperoleh bahwa semua t hitung < t tabel, maka
semua data tersebut diterima.
Universitas Sumatera Utara
Kadar vitamin B6 pada sampel merek M
μ = � ± (t α/2, dk) x SD / √n)
= 111,3519 ± (4,0321 x 0,00015 / √6)
= (111,3519 ± 0,0006) μg/mL
Jumlah per sajian vitamin B6 pada sampel merek M
μ =(111,3519 ± 0,0006) μg/mL X 150 mL
= (16,7028) mg
Lampiran 18. Kurva Serapan Uji Perolehan Kembali
Kurva serapan perolehan kembali – 1
Universitas Sumatera Utara
Kurva serapan perolehan kembali - 2
Lampiran 18(Lanjutan)
Kurva serapan perolehan kembali – 3
Universitas Sumatera Utara
Kurva serapan perolehan kembali – 4
Lampiran 18(Lanjutan)
Universitas Sumatera Utara
Kurva serapan perolehan kembali – 5
Kurva serapan perolehan kembali – 6
Lampiran 19. Hasil Uji Perolehan Kembali Natrium Benzoat dan Vitamin B6
Universitas Sumatera Utara
1. Hasil Uji Perolehan Kembali Natrium Benzoat
No.
1
2
3
4
5
6
Vol.
Sampel
1 mL
1 mL
1 mL
1 mL
1 mL
1 mL
Absorbansi
Kons.
(λ 245,4 nm)
(μg/mL)
0,0144
23,3251
0,0143
23,1628
0,0141
22,8382
0,0140
22,6760
0,0141
22,8383
0,0142
23,0005
Rata-rata
Kadar
(μg/mL)
690,8433
686,0369
676,4240
671,6176
676,4240
681,2304
Persen Perolehan
Kembali (%)
100,61
96,77
89,08
85,23
89,08
92,92
92,28
Kadar
(μg/mL)
367,3172
383,4835
334,9848
391,5666
351,1510
351,1510
Persen Perolehan
Kembali (%)
102,39
108,85
89,45
112,08
95,92
95,92
100,77
2. Hasil Uji Perolehan Kembali Vitamin B6
No.
1
2
3
4
5
6
Vol.
Sampel
1 mL
1 mL
1 mL
1 mL
1 mL
1 mL
Absorbansi
Kons.
(λ 307,4 nm)
(μg/mL)
0,0045
14,7000
0,0047
15,3470
0,0041
13,4061
0,0048
15,6705
0,0043
14,0531
0,0043
14,0531
Rata-rata
Lampiran 20. Contoh Perhitungan Uji Perolehan Kembali
Universitas Sumatera Utara
I.
Perhitungan uji perolehan kembali natrium benzoat
Absorbansi (Y) :
λ 245,4 nm
λ 307,4 nm
= 0,0144
= 0,0045
Persamaan regresi pada spektrum derivat kedua :
Natrium Benzoat
Vitamin B6
: Y = (6,16216X + 0,266899) . 10-4
: Y = (3,09132X – 0,42526) . 10-4
Konsentrasi natrium benzoat :
Y
= (6,16216X + 0,266899) . 10-4
0,0144 = (6,16216X + 0,266899) . 10-4
X
0,0144
− 0,266899 = 6,16216�
10−4
= 23,3251 μg/mL(asam benzoat)
Konsentrasi awal setelah ditambahan larutan baku = 23,3251 μg/mL
Kadar =
=
����������� (�� /�� )
����� ������ (�� )
23,3251 �� /��
1 ��
× ����� (�� ) × ������ �����������
× 25 �� × 1 = 583,1275 μg/mL (asam benzoat)
Kadar natrium benzoat (C F ) :
�� ������� �������
= ����� ���� ������� × �� ���� ������� × ������ ����� ����
= 583,1275 ��/�� ×
144 ,1
122 ,1
× 100,40% = 690,8433 μg/mL
Kadar analit dalam sampel setelah ditambahkan larutan baku :
(C F ) = 690,8433 μg/mL
Kadar rata-rata analit dalam sampel sebelum ditambah larutan baku :
(C A) = 565,075 μg/mL
Lampiran 20(Lanjutan)
Universitas Sumatera Utara
Kadar larutan standar yang ditambahkan (C* A) :
C* A
=
����������� (�� /�� )
=
200 μg/mL
����� ������ (�� )
1 ��
× ������ (�� ) × ������ ����������
× 0,625 �� × 1= 125 μg/mL
Maka % perolehan kembali natrium benzoat =
=
�� −��
�∗�
× 100%
690,8433 �� /�� − 565 ,075 �� /��
125 �� /��
× 100%
= 100,61%
II. Perhitungan uji perolehan kembali vitamin B6
Absorbansi (Y) :
245,4 nm
307,4 nm
= 0,0144
= 0,0045
Persamaan regresi pada spektrum derivat kedua :
: Y = (6,16216X – 0,266899) . 10-4
: Y = (3,09132X – 0,42526) . 10-4
Natrium Benzoat
Vitamin B6
Konsentrasi vitamin B6 :
Y
= (3,09132X – 0,42526) . 10-4
0,0045 = (3,09132X – 0,42526) . 10-4
X
0,0045
− 0,42526 = 3,09132�
10−4
= 14,7 μg/mL
Konsentrasi awal setelah ditambahan larutan baku = 14,7 μg/mL
Kadar =
=
����������� (�� /�� )
����� ������ (�� )
14,7 �� /��
1 ��
× ����� (�� ) × ������ �����������
× 25 �� × 1 = 367,5 μg/mL
Kadar vitamin B6 (C F ) :
= ����� ������� �6 × ������ ����� ����
= 583,1275 ��/�� × 99,95% = 367,3172 μg/mL
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 20(Lanjutan)
Kadar analit dalam sampel setelah ditambahkan larutan baku :
(C F ) = 367,3172 μg/mL
Kadar rata-rata analit dalam sampel sebelum ditambah larutan baku :
(C A) = 111,3519 μg/mL
Kadar larutan standar yang ditambahkan (C* A) :
C* A
=
����������� (�� /�� )
=
200 μg/mL
����� ������ (�� )
1 ��
× ������ (�� ) × ������ ����������
× 1,25 �� × 1= 250 μg/mL
Maka % perolehan kembali natrium benzoat =
=
�� −��
�∗�
× 100%
367 ,3172 �� /�� − 111 ,3519 �� /��
250�� /��
× 100%
= 102,39%
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 21. Perhitungan Simpangan Baku Relatif (RSD) Natrium Benzoat
dalam Sampel
No.
1
2
3
4
5
6
Persen Perolehan Kembali
(Xi)
100,61%
96,71%
89,08%
85,23%
89,08%
92,92%
(�� − �)
8,3383
4,4383
-3,1917
-7,0417
-3,1917
0,6483
SD = �
RSD =
∑(��−�)2
�−1
��
�
= �
159,6055
× 100% =
6−1
5,6499
92,28
2
69,5278
19,6988
10,1867
49,5851
10,1867
0,4203
2
Σ Xi = 553,63%
� Xi = 92,28%
(�� − �)
Σ(�� − �) = 159,6055 μg/mL
= 5,6499 μg/mL
× 100% = 6,1231%
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 22. Perhitungan Simpangan Baku Relatif (RSD) Vitamin B6 dalam
Sampel
No.
1
2
3
4
5
6
Persen Perolehan Kembali
(Xi)
102,39%
108,85%
89,45%
112,08%
95,92%
92,92%
Σ Xi = 604,61%
�Xi = 100,77%
SD = �
RSD =
∑(��−�)2
�−1
��
�
= �
371 ,0143
× 100% =
6−1
8,6141
100 ,77
(�� − �)
1,6217
8,0817
-11,3183
11,3117
-4,8483
-4,8483
= 8,6141 μg/mL
(�� − �)
2
2,6298
65,3133
128,1047
127,9538
23,5063
23,5063
2
Σ(�� − �) = 371,0143 μg/mL
× 100% = 8,5484%
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 23. Komposisi Sampel Minuman Berenergi
Merek K
Merek M
(Kemasan botol, volume 150 mL)
(Kemasan botol, volume 150 mL)
Taurin 1000 mg
Taurin 800 mg
Kafein 50 mg
Kafein 50 mg
Inositol 50 mg
Inositol 50 mg
Vitamin B3 20 mg
Vitamin B3 20 mg
Vitamin B6 5 mg
Vitamin B6 5 mg
Provitamin B5 5 mg
Vitamin B5 5 mg
Vitamin B12 5 mcg
Gula 25 g
Gula 25 g
Natrium Benzoat
Ponceau 4R Cl 16255
Pewarna Tartrazin CI 19140
Tartrazine Cl 19140
Asam Sitrat
Trisodium Sitrat
Natrium Benzoat
Perasa BPOM RI SL 03160091
Panjang Gelombang Maksimum Bahan-bahan dalam Sampel :
Bahan
Taurin
Kafein
Inositol
Niasinamid
Vitamin B6
Vitamin B12
Sukrosa
Natrium Benzoat
Tartrazin
Asam Sitrat
Ponceau
Vitamin B5
Panjang Gelombang
Maksimum (nm)
570
273
261
261
290
361
190
230
425
520
506
200
Rujukan
Draganov, dkk., 2014
Moffat, dkk., 2005
Moffat, dkk., 2005
Moffat, dkk., 2005
Moffat, dkk., 2005
Moffat, dkk., 2005
Sumantri, dkk., 2013
Moffat, dkk., 2005
Huda, N., 2001
Napitupulu, P.M., 2011
Kartadarma, dkk., 2007
Engel, R., 2009
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 24. Gambar Sampel Minuman Berenergi
1. Merek K
2. Merek M
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 25. Gambar Alat Spektrofotometer Sinar Tampak
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 26.
Sertifikat Bahan Baku Natrium Benzoat
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 27. Sertifikat Bahan Baku Vitamin B6
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 28. Daftar Nilai Distribusi t
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 29. Persyaratan Minuman Berenergi Menurut SNI 01-6684-2002
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 30. Batas Penggunaan Natrium Benzoat Menurut SNI 01-0222-1995
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 31. Batas Penggunaan VitaminB6 Menurut BPOM No.
HK.00.05.23.3644
Universitas Sumatera Utara
HCl pekat
=
37% ~ 12 N
V1 x N1
=
V2 x N2
V 1 x 12 N
=
1000 mL x 0,1 N
V1
=
1000 mL x 0,1 N
12 N
=
8,3 ml
=
8,5 ml
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 2. Bagan Alir Prosedur Penelitian
Natrium benzoat BPFI
ditimbang secara seksama 59 mg
dimasukkan ke dalam labu tentukur
25 mL
dilarutkan dan dicukupkan dengan
HCL 0,1N
LIB I Natrium benzoat 500 μg/ml
diambil 10 mL
dimasukkan ke dalam labu tentukur
25 mL
dilarutkan dan dicukupkan dengan
HCL 0,1N
LIB II Natrium benzoat 50 μg/ml
diambil 1,5
mL
diambil 2,5
mL
diambil 2 mL
Standar 1
Standar 2
Standar 3
3 μg/mL
4 μg/mL
5 μg/mL
diukur serapan
maksimum
pada λ 200400nm
diambil 3,5
mL
diambil 3 mL
Standar 4
Standar 5
6 μg/mL
7 μg/mL
Standar 3
5 μg/mL
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 2. (Lanjutan)
Vitamin B6 BPFI
ditimbang seksama 50 mg
dimasukkan ke dalam labu tentukur
25 mL
dilarutkan dan dicukupkan dengan
HCL 0,1N
LIB I Vitamin B6 500 μg/ml
Diambil 10 mL
dimasukkan ke dalam labu tentukur
25 mL
dilarutkan dan dicukupkan dengan
HCL 0,1N
LIB II Vitamin B6 50 μg/ml
diambil 4,75
mL
diambil 3,75
mL
diambil 3 mL
Standar 1
Standar 2
Standar 4
6 μg/mL
7,5 μg/mL
10,5 μg/mL
diambil 5,25
mL
diukur serapan
maksimum
pada λ 200400nm
diambil 6 mL
Standar 3
Standar 5
9,5 μg/mL
12 μg/mL
Standar
10,5 μg/mL
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 2. (Lanjutan)
Larutan Standar Natrium Benzoat
3 μg/mL, 4μg/mL, 5μg/mL, 6μg/mL dan 7 μg/mL
diukur serapan pada λ 200-400 nm
ditransformasikan ke serapan
derivat pertama
ditransformasikan ke serapan
derivat kedua
ditentukan zero crossing
ditentukan panjang gelombang
analisis
λ 245,4 nm
dibuat kurva kalibrasi
Persamaan Regresi
Larutan Standar Vitamin B6
6 μg/mL, 7,5μg/mL, 9,5μg/mL, 10,5μg/mL dan 12 μg/mL
diukur serapan pada λ 200-400 nm
ditransformasikan ke serapan
derivat pertama
ditransformasikan ke serapan
derivat kedua
ditentukan zero crossing
ditentukan panjang gelombang
analisis
λ 307,4 nm
dibuat kurva kalibrasi
Persamaan Regresi
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 2. (Lanjutan)
Sampel
diambil 20 mL
dimasukkan ke dalam beaker
dipanaskan
disaring
didinginkan pada suhu kamar
diambil 1 mL
dimasukkan ke dalam labu tentukur
25 mL
dilarutkan dan dicukupkan dengan
HCL 0,1N
diukur pada λ 245,4 nm dan 307,4
nm
Nilai Absorbansi
dihitung
Kadar
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 3. Kurva Serapan Natrium Benzoat pada Berbagai Konsentrasi
0 ,3 0 0 0
Abs.
0 ,2 0 0 0
0 ,1 0 0 0
0 ,0 0 0 0
-0 ,0 3 7 1
2 0 0 ,0 0
2 5 0 ,0 0
3 0 0 ,0 0
nm .
3 5 0 ,0 0
40
Kurva serapan natrium benzoat 3 μg/mL
Kurva serapan natrium benzoat 4 μg/mL
Kurva serapan natrium benzoat 5 μg/mL
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 3. (Lanjutan)
0,6000
Abs.
0,4000
0,2000
0,0000
-0,0666
200,00
250,00
300,00
nm .
350,00
400
Kurva serapan natrium benzoat 6 μg/mL
Kurva serapan natrium benzoat 7 μg/mL
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 4. Kurva Serapan Vitamin B6 pada Berbagai Konsentrasi
Abs.
0 ,4 0 0 0
0 ,2 0 0 0
0 ,0 0 0 0
-0 ,1 7 7 3
2 0 0 ,0 0
2 5 0 ,0 0
3 0 0 ,0 0
nm .
3 5 0 ,0 0
40
Kurva Serapan Vitamin B6 6 μg/mL
Kurva Serapan Vitamin B6 7,5 μg/mL
Kurva Serapan Vitamin B6 9,5 μg/mL
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 4. (Lanjutan)
Abs.
0,5000
0,0000
-0,1996
200,00
250,00
300,00
nm .
350,00
400
Kurva Serapan Vitamin B6 10,5 μg/mL
Kurva Serapan Vitamin B6 12 μg/mL
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 5. Kurva Serapan Derivat Pertama Natrium Benzoat pada Berbagai
Konsentrasi
Abs.
0 ,0 0 0 0
-0 ,0 2 0 0
-0 ,0 4 0 0
-0 ,0 5 6 8
2 0 0 ,0 0
2 5 0 ,0 0
3 0 0 ,0 0
nm .
3 5 0 ,0 0
40
Kurva serapan derivat pertama natrium benzoat 3 μg/mL
Kurva serapan derivat pertama natrium benzoat 4 μg/mL
Kurva serapan derivat pertamanatrium benzoat 5 μg/mL
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 5. (Lanjutan)
Abs.
0 ,0 0 0 0
-0 ,0 5 0 0
-0 ,1 0 0 0
-0 ,1 0 4 3
2 0 0 ,0 0
2 5 0 ,0 0
3 0 0 ,0 0
nm .
3 5 0 ,0 0
400
Kurva serapan derivat pertama natrium benzoat 6 μg/mL
Kurva serapan derivat pertamanatrium benzoat 7 μg/mL
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 6. Kurva Serapan Derivat Pertama Vitamin B6 pada Berbagai
Konsentrasi
Abs.
0 ,0 0 0 0
-0 ,0 2 0 0
-0 ,0 4 0 0
-0 ,0 4 3 0
2 0 0 ,0 0
2 5 0 ,0 0
3 0 0 ,0 0
nm .
3 5 0 ,0 0
400
Kurva Serapan Derivat Pertama Vitamin B6 6 μg/mL
Kurva Serapan Derivat Pertama Vitamin B6 7,5 μg/mL
Kurva Serapan Derivat Pertama Vitamin B6 9,5 μg/mL
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 6. (Lanjutan)
Abs.
0,0000
-0,0500
-0,0756
200,00
250,00
300,00
nm .
350,00
40
Kurva Serapan Derivat Pertama Vitamin B6 10,5 μg/mL
Kurva Serapan Derivat Pertama Vitamin B6 12 μg/mL
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 7. Kurva Serapan Derivatif Kedua Natrium Benzoat pada Berbagai
Konsentrasi
0 ,0 1 0 0
Abs.
0 ,0 0 5 0
0 ,0 0 0 0
-0 ,0 0 3 7
2 0 0 ,0 0
2 5 0 ,0 0
3 0 0 ,0 0
nm .
3 5 0 ,0 0
40
Kurva Serapan Derivat Kedua Natrium Benzoat 3 μg/mL
Kurva Serapan Derivat Kedua Natrium Benzoat 4 μg/mL
Kurva Serapan Derivat Kedua Natrium Benzoat 5 μg/mL
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 7. (Lanjutan)
0,0200
Abs.
0,0100
0,0000
-0,0073
200,00
250,00
300,00
nm .
350,00
40
Kurva Serapan Derivat Kedua Natrium Benzoat 6 μg/mL
Kurva Serapan Derivat Kedua Natrium Benzoat 7 μg/mL
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 8. Kurva Serapan Derivat Kedua Vitamin B6 pada Berbagai
Konsentrasi
0 ,0 0 5 0
Abs.
0 ,0 0 0 0
-0 ,0 0 5 0
-0 ,0 0 8 5
2 0 0 ,0 0
2 5 0 ,0 0
3 0 0 ,0 0
nm .
3 5 0 ,0 0
40
Kurva Serapan Derivat Kedua Vitamin B6 6 μg/mL
Kurva Serapan Derivat Kedua Vitamin B6 7,5 μg/mL
Kurva Serapan Derivat Kedua Vitamin B6 9,5 μg/mL
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 8. (Lanjutan)
Abs.
0,0000
-0,0100
-0,0207
200,00
250,00
300,00
nm .
350,00
40
Kurva Serapan Derivat Kedua Vitamin B6 10,5 μg/mL
Kurva Serapan Derivat Kedua Vitamin B6 6 μg/mL
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 9. Perhitungan Persamaan Garis Regresi Natrium Benzoat
Konsentrasi (μg/mL)
(X)
0,0000
3,0000
4,0000
5,0000
6,0000
7,0000
No.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
No.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
Absorbansi
(Y)
0,0000
0,0019
0,0025
0,0032
0,0037
0,0043
X
Y
X2`
Y2
XY
0,0000
3,0000
4,0000
5,0000
6,0000
7,0000
ΣX = 25
0,0000
0,0019
0,0025
0,0032
0,0037
0,0043
ΣY = 0,0156
0,0000
9,0000
16,0000
25,0000
36,0000
49,0000
0,0000
3,61.10-6
6,25.10-6
1,024.10-5
1,369.10-5
1,849.10-5
ΣY2 =
5,228.10-5
0,0000
0,0057
0,0010
0,0160
0,0222
0,0301
ΣXY =
0,0840
�
X = 4,1667
�=
�
Y = 2,6.10-3
ΣX2 = 135
�(∑ ��) − (∑ �)(∑ �)
6 (0,840) − (25)(0,0156)
=
�(∑ �2 ) − (∑ �)2
6 (135) − (252 )
−4
= 6,16216 . 10
�� = ��� + �
� = �� − ��� = (2,6. 10−3 ) − (6,16216. 10−4 )(4,1667) = 2,6899. 10−5
Maka persamaan garis regresinya adalah � = (6,16216� + 0,26899) × 10−4
Perhitungan Koefisien Korelasi :
�=
�(∑ ��) − (∑ �)(∑ �)
���(∑ �2 ) − (∑ �)2 ���(∑ � 2 ) − (∑ �)2 �
Universitas Sumatera Utara
�=
6 (0,0840) − (25)(0,0156)
�[6 (135) − 252 ][6 (5,228. 10−5 ) − (0,0156)2 ]
= 0,9995
Maka, koefisien korelasi dari data kalibrasi serapan derivat kedua natrium benzoat
pada panjang gelombang 245,4 nm adalah 0,9995.
Lampiran 10. Perhitungan Persamaan Garis Regresi Vitamin B6
Konsentrasi (μg/mL)
(X)
0,0000
6,0000
7,5000
9,5000
10,5000
12,0000
No.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
No.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
X
0,0000
6,0000
7,5000
9,5000
10,5000
12,0000
ΣX = 45,5
� = 7,5833
X
�=
Y
0,0000
0,0017
0,0023
0,0029
0,0032
0,0037
ΣY = 0,0138
� = 0,0023
Y
Absorbansi
(Y)
0,0000
0,0017
0,0023
0,0029
0,0032
0,0037
X2`
0,0000
36,0000
56,2500
90,2500
110,2500
144,0000
ΣX2 =
436,75
Y2
0,0000
2,89.10-6
5,29.10-6
8,41.10-6
1,024.10-5
1,636910-5
ΣY2 =
4,052.10-5
XY
0,0000
0,0102
0,01725
0,0275
0,0336
0,0444
ΣXY =
0,1330
�(∑ ��) − (∑ �)(∑ �)
6 (0,1330) − (45,5)(0,0138)
=
6 (436,75) − (45,52 )
�(∑ � 2 ) − (∑ �)2
= 3,09132 . 10−4
�� = ��� + �
� = �� − ��� = (0,0023) − (3,09132. 10−4 )(7,5883) = − 4,425. 10−5
Maka persamaan garis regresinya adalah � = (3,09132� − 0,4425) × 10−4
Perhitungan Koefisien Korelasi :
Universitas Sumatera Utara
�=
�=
�(∑ ��) − (∑ �)(∑ �)
���(∑ �2 ) − (∑ �)2 ���(∑ � 2 ) − (∑ �)2 �
6 (0,1330) − (45,5)(0,0138)
�[6 (436,75) − (45,5)2 ][6 (4,052. 10−5 ) − (0,0138)2 ]
= 0,9991
Maka, koefisien korelasi dari data kalibrasi serapan derivat kedua vitamin B6
pada panjang gelombang 307,4 nm adalah 0,9991.
Lampiran 11. Perhitungan Batas Deteksi (LOD) dan Batas Kuantitasi (LOQ)
Natrium Benzoat
Persamaan garis regresinya adalah Y = (6,16216X + 0,266899) . 10-4
No.
1
2
3
4
5
6
X
0,0000
3,0000
4,0000
5,0000
6,0000
7,0000
Yi (10 -3)
0,02669
1,87534
2,49155
3,10777
3,72399
4,34020
Y
0,0000
0,0019
0,0025
0,0032
0,0037
0,0043
Y-Yi (10-5)
-2,6690
2,4662
0,8446
9,2230
-2,3986
-4,0202
Σ (Y-Yi)2
(Y-Yi)2 (10-9)
0,7123
0,6082
0,0713
8,5064
0,5753
1,6162
12,0898
2
2
−9
∑(�−��)
(12,0898.10 )
�� = � �−2 = �
= 6,0449 .10-9
6−2
��� =
3 × ��
�����
��� =
10 × ��
�����
=
3 ×6,0449.10−9
6,16216.10−4
= 2,94 .10-5 μg/mL
−9
-5
= 10 ×6,0449.10
−4 = 9,81 .10 μg/mL
6,16216.10
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 12. Perhitungan Batas Deteksi (LOD) dan Batas Kuantitasi (LOQ)
Vitamin B6
Persamaan garis regresinya adalah Y = (3,09132X – 0,4425) . 10-4
No.
1
2
3
4
5
6
X
0,0000
6,0000
7,5000
9,5000
10,5000
12,0000
∑(�−��)
�� = � �−2
��� =
3 × ��
�����
��� =
10 × ��
�����
Yi (10 -3)
-0,0443
1,8105
2,2742
2,2892
3,2016
3,6653
Y
0,0000
0,0017
0,0023
0,0029
0,0032
0,0037
(Y-Yi)2 (10-9)
1,9581
12,2195
0,6636
0,0562
0,0027
1,2017
16,1018
2
−9
(16,1018.10 )
=�
= 8,0509.10-9
2
=
Y-Yi (10 -5)
4,4250
-11,0542
2,5760
0,7496
-0,1636
3,4666
Σ(Y-Yi)2
6−2
3 ×8,0509.10−9
3,0913.10−4
=
= 7,8131.10-5 μg/mL
10 ×8,0509.10−9
3,0913.10−4
= 2,6043.10-4 μg/mL
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 13. Kurva Serapan Derivat Kedua Penetapan Kadar Sampel
Sampel 1 Minuman Berenergi Merek K
Universitas Sumatera Utara
Sampel 2 Minuman Berenergi Merek K
Lampiran 13. (Lanjutan)
Sampel 3 Minuman Berenergi Merek K
Universitas Sumatera Utara
Sampel 4 Minuman Berenergi Merek K
Lampiran13. (Lanjutan)
Sampel 5 Minuman Berenergi Merek K
Universitas Sumatera Utara
Sampel 6 Minuman Berenergi Merek K
Lampiran13(Lanjutan)
Sampel 1 Minuman Berenergi Merek M
Universitas Sumatera Utara
Sampel 2 Minuman Berenergi Merek M
Lampiran13(Lanjutan)
Sampel 3 Minuman Berenergi Merek M
Universitas Sumatera Utara
Sampel 4 Minuman Berenergi Merek M
Lampiran13(Lanjutan)
Sampel 5 Minuman Berenergi Merek M
Universitas Sumatera Utara
Sampel 6 Minuman Berenergi Merek M
Lampiran 14. Hasil Analisis Kadar Natrium Benzoat dan Vitamin B6 dalam
Sampel
1. Sampel Merek K
No.
Vol.
(mL)
A 245,4
A 307,4
1
2
3
4
5
6
1
1
1
1
1
1
0,0113
0,0109
0,0109
0,0112
0,0109
0,0109
0,0007
0,0008
0,0007
0,0007
0,0007
0,0007
�
Konsentrasi
Natrium
Benzoat
(μg/mL)
Kadar
Natrium
Benzoat
(mg/kg)
Konsentrasi
Vitamin B6
(μg/mL)
541,8439
522,6182
522,6182
537,0375
522,6182
522,6182
528,2257
513,8192
495,5878
495,5878
509,2614
495,5878
495,5878
500,9053
60,1588
68,2419
60,1588
60,1588
60,1588
60,1588
61,5060
Jumlah
Vitamin
B6
(mg /
sajian)
9,0238
10,2363
9,0238
9,0238
9,0238
9,0238
9,2260
2. Sampel Merek M
Universitas Sumatera Utara
No.
Vol.
(mL)
A 245,4
A 307,4
1
2
3
4
5
6
1
1
1
1
1
1
0,0117
0,0117
0,0118
0,0118
0,0118
0,0119
0,0014
0,0014
0,0014
0,0011
0,0012
0,0015
�
Konsentrasi
Natrium
Benzoat
(μg/mL)
Kadar
Natrium
Benzoat
(mg/kg)
Konsentrasi
Vitamin B6
(μg/mL)
561,0696
561,0696
565,8761
565,8761
565,8761
570,6825
565,0750
533,2191
533,2191
537,7869
537,7869
537,7869
542,3548
537,0256
116,7406
116,7406
116,7406
92,4913
100,5744
124,8237
111,3519
Jumlah
Vitamin
B6
(mg /
sajian)
17,5111
17,5111
17,5111
13,8737
15,0861
18,7236
16,7028
Lampiran 15. ContohPerhitungan Kadar Natrium Benzoat dan Vitamin B6 dalam
Sampel
I.
Merek K
Absorbansi (Y) :
Natrium Benzoat
Vitamin B6
= 0,0113
= 0,0007
Persamaan regresi pada panjang gelombang analisis maksimum untuk natrium
benzoat pada 245,4 nm : Y = (6,16216X + 0,266899) . 10-4
Persamaan regresi pada panjang gelombang analisis maksimum untuk vitamin B6
pada 307,4 nm : Y = (3,09132X – 0,42526) . 10-4
Sehingga untuk mendapatkan kadar (X) sampel digunakan subtitusi (Y) terhadap
persamaan regresi pada masing-masing panjang gelombang.
1. Natrium Benzoat
Konsentrasi Natrium Benzoat : 0,0113 = (6,16216� + 0,266899). 10−4
(asam benzoat) � =
0,0113
� –0,266899
10−4
�
6,16216
= 18,2944 μg/mL
Universitas Sumatera Utara
Kadar Asam Benzoat :
C
V
Fp
W
Maka,
����
�
: kosentrasi larutan sampel (μg/mL)
: volume larutan pengenceran (mL)
: faktor pengenceran
: volume sampel (mL)
18,2944 �� /�� × 25 �� × 1
= 457,3603 μg/mL
1 ��
Kadar yang dihitung merupakan kadar dari asam benzoat. Untuk menghitung
kadar natrium benzoat maka digunakan rumus :
= ����� ���� ������� ×
= 457,3603 ×
144 ,1
122 ,1
�� ������� �������
�� ���� �������
× ������ ����� ����
× 100,40% = 541,8439 μg/mL
Lampiran 15(Lanjutan)
100 mL sampel merek K setara dengan 105,4542 g. Maka kadar natrium benzoat
dalam sampel :
= 541,8439 μg/mL
= 54184,39 μg/100 mL
= 54184,39 μg/105,4542 g
= 513,8192 μg/g
= 513,8192 mg/kg
2. Vitamin B6
Konsentrasi Vitamin B6
Kadar Vitamin B6
:
: 0,0007 = (3,09132� − 0,442526). 10−4
�=
0,0007
+0,442526
10 −4
3,09132
= 2,4075 μg/mL
����
�
Universitas Sumatera Utara
C
V
Fp
W
Maka,
: kosentrasi larutan sampel (μg/mL)
: volume larutan pengenceran (mL)
: faktor pengenceran
: volume sampel (mL)
2,4075 �� /�� × 25 �� × 1
= 60,1875 μg/mL
1 ��
Kadar vitamin B6 dalam sampel:
= ����� ������� �6 × ������ ����� ����
= 60,1875 × 99,95% = 60,1588 μg/mL
Jumlah vitamin B6 per sajian sampel :
= ����� ������� �6 × ������ ����� ������
= 60,1588 μg/mL × 150 �� = 9,0238 mg/sajian
Lampiran 15(Lanjutan)
II. Merek M
Panjang gelombang analisis (Y) :
Natrium Benzoat
Vitamin B6
= 0,0117
= 0,0014
Persamaan regresi pada panjang gelombang analisis maksimum untuk natrium
benzoat pada 245,4 nm : Y = (6,16216X + 0,266899) . 10-4
Persamaan regresi pada panjang gelombang analisis maksimum untuk vitamin B6
pada 307,4 nm : Y = (3,09132X – 0,42526) . 10-4
Sehingga untuk mendapatkan kadar (X) sampel digunakan subtitusi (Y) terhadap
persamaan regresi pada masing-masing panjang gelombang.
1. Natrium Benzoat
Konsentrasi Natrium Benzoat : 0,0117 = (6,16216� + 0,266899). 10−4
(asam benzoat) � =
0,0117
� –0,266899
10−4
�
6,16216
= 18,9435 μg/mL
Universitas Sumatera Utara
Kadar Asam Benzoat :
C
V
Fp
W
Maka,
����
�
: kosentrasi larutan sampel (μg/mL)
: volume larutan pengenceran (mL)
: faktor pengenceran
: volume sampel (mL)
18,9435 �� /�� × 25 �� × 1
= 473,5884 μg/mL
1 ��
Kadar yang dihitung merupakan kadar dari asam benzoat. Untuk menghitung
kadar natrium benzoat maka digunakan rumus :
= ����� ���� ������� ×
= 473,5884 ×
144 ,1
122 ,1
�� ������� �������
�� ���� �������
× ������ ����� ����
× 100,40% =561,0696 μg/mL
Lampiran 15(Lanjutan)
100 mL sampel merek M setara dengan 105,2231g. Maka kadar natrium benzoat
dalam sampel :
= 561,0696 μg/mL
= 56106,96 μg/100 mL
= 56106,96 μg/105,4542 g
= 533,2191 μg/g
= 533,2191 mg/kg
2. Vitamin B6
Konsentrasi Vitamin B6
Kadar Vitamin B6
:
: 0,0014 = (3,09132� − 0,442526). 10−4
�=
0,0014
+0,442526
10 −4
3,09132
=4,6720 μg/mL
����
�
Universitas Sumatera Utara
: kosentrasi larutan sampel (μg/mL)
: volume larutan pengenceran (mL)
: faktor pengenceran
: volume sampel (mL)
C
V
Fp
W
Maka,
4,6720 �� /�� × 25 �� × 1
= 116,8 μg/mL
1 ��
Kadar vitamin B6 dalam sampel:
= ����� ������� �6 × ������ ����� ����
= 116,8 × 99,95% =116,7406 μg/mL
Jumlah vitamin B6 per sajian sampel :
= ����� ������� �6 × ������ ����� ������
= 116,7406 μg/mL × 150 �� = 17,5111 mg/sajian
Lampiran 16. Perhitungan Statistik Kadar Natrium Benzoat dalam Sampel
1. Sampel Merek K
No.
1
2
3
4
5
6
X
Kadar (μg/mL)
541,8439
522,6182
522,6182
537,0375
522,6182
522,6182
ΣX =3169,2257
�= 528,2257
(� − �)
13,6182
-5,6075
-5,6075
8,8118
-5,6075
-5,6075
2
185,4560
31,4441
31,4441
77,6477
31,4441
31,4441
2
Σ(� − �) = 388,8800
2
SD
(� − �)
∑��−��
388,8800
=�
=�
= 8,8191
�−1
6−1
Pada interval kepercayaan 99% dengan nilai α = 0,01, dk = 5,
maka t (α/2,dk) = 4,0321
Universitas Sumatera Utara
Data diterima jika t hitung < t tabel
t hitung 1
t hitung 2
t hitung 3
t hitung 4
t hitung 5
t hitung 6
=�
�−�
�
�� ⁄√�
=�
=�
�−�
�
�� ⁄√�
=�
=�
=�
=�
=�
�−�
�
�� ⁄√�
�−�
�
�� ⁄√�
�−�
�
�� ⁄√�
�−�
�
�� ⁄√�
13,6182
�= 3,7824
8,81907 ⁄√6
=�
−5,6075
�= 1,5575
8,8191 ⁄√6
=�
8,8118
�= 2,4475
8,8191 ⁄√6
=�
=�
−5,6075
�= 1,5575
8,8191 ⁄√6
−5,6075
�= 1,5575
8,8191 ⁄√6
−5,6075
�= 1,5575
8,8191 ⁄√6
Dari hasil perhitungan tersebut diperoleh bahwa semua t hitung < t tabel, maka
semua data tersebut diterima.
Lampiran 16(Lanjutan)
Kadar natrium benzoat pada sampel merek K :
μ = � ± (t α/2, dk) x SD / √n)
= 528,2257 ± (4,0321 x 8,8191 / √6)
= (528,2257 ± 14,5182) μg/mL
= (52822,57 ± 1451,82)μg/100 mL
= (52822,57 ± 1451,82)μg/105,4542 g
= (500,9053 ± 13,7673)μg/g
= (500,9053 ± 13,7673)mg/kg
2. Sampel Merek M
No.
X
Kadar (μg/mL)
(� − �)
(� − �)
2
Universitas Sumatera Utara
1
2
3
4
5
6
SD
561,0696
561,0696
565,8761
565,8761
565,8761
570,6825
ΣX =3390,45
�= 565,075
=�
∑��−��
�−1
2
=�
-4,0054
-4,0054
0,8011
0,8011
0,8011
5,6075
16,0429
16,0429
0,6417
0,6417
0,6417
31,6417
2
Σ(� − �) = 65,4550
65,4550
6−1
= 3,6181
Pada interval kepercayaan 99% dengan nilai α = 0,01, dk = 5,
maka t (α/2,dk) = 4,0321
Data diterima jika t hitung < t tabel.
t hitung 1
=�
�−�
�
�� ⁄√�
=�
−4,0054
�= 2,7116
3,6181 ⁄√6
Lampiran 16(Lanjutan)
t hitung 2
t hitung 3
t hitung 4
t hitung 5
t hitung 6
=�
�−�
�
�� ⁄√�
=�
−4,0054
�= 2,7116
3,6181 ⁄√6
=�
�−�
�
�� ⁄√�
=�
0,8011
�= 0,5423
3,6181 ⁄√6
=�
=�
=�
�−�
�
�� ⁄√�
�−�
�
�� ⁄√�
�−�
�
�� ⁄√�
=�
=�
=�
0,8011
�= 0,5423
3,6181 ⁄√6
0,8011
�= 0,5423
3,6181 ⁄√6
5,6075
�= 3,7963
3,6181 ⁄√6
Dari hasil perhitungan tersebut siperoleh bahwa semua t hitung < t tabel, maka
semua data tersebut diterima.
Universitas Sumatera Utara
Kadar natrium benzoat pada sampel merek M :
μ = � ± (t α/2, dk) x SD / √n)
= 565,075 ± (4,0321 x 3,6181 / √6)
= (565,075 ± 5,9557) μg/mL
= (56507,5 ± 595,57) μg/100 mL
= (56507,5 ± 595,57) μg/105,2231 g
= (537,0256 ± 5,6981) μg/g
= (537,0256 ± 5,6981) mg/kg
Lampiran 17. Perhitungan Statistik Kadar Vitamin B6 dalam Sampel
1. Sampel Merek K
No.
1
2
3
4
5
6
X
Kadar (μg/mL)
60,1588
68,2419
60,1588
60,1588
60,1588
60,1588
ΣX = 369,5060
�= 61,5060
(� − �)
-1,3472
6,7359
-1,3472
-1,3472
-1,3472
-1,3472
2
1,8149
45,3727
1,8149
1,8149
1,8149
1,8149
2
Σ(� − �) = 54,4473
2
SD
(� − �)
∑��−��
54,4473
=�
=�
= 3,2999
�−1
6−1
Pada interval kepercayaan 99% dengan nilai α = 0,01, dk = 5,
Universitas Sumatera Utara
maka t (α/2,dk) = 4,0321
Data diterima jika t hitung < t tabel,
t hitung 1
t hitung 2
t hitung 3
t hitung 4
t hitung 5
t hitung 6
=�
�−�
�
�� ⁄√�
=�
�� ⁄√�
=�
=�
=�
=�
�−�
�
�� ⁄√�
�−�
�−�
�� ⁄√�
=�
=�
�=�
�=�
�−�
�
�� ⁄√�
�−�
�
�� ⁄√�
=�
=�
−1,3472
�= 1
3,2999⁄√6
8,3.10 −3
�= 4
3,2999⁄√6
6,7359
3,2999⁄√6
−1,3472
3,2999⁄√6
�= 1
�= 1
−1,3472
�= 1
3,2999⁄√6
−1,3472
�= 1
3,2999⁄√6
Dari hasil perhitungan tersebut diperoleh bahwa semua t hitung < t tabel, maka
semua data tersebut diterima.
Lampiran 17(Lanjutan)
Kadar vitamin B6 pada sampel merek K :
μ = � ± (t α/2, dk) x SD / √n)
= 61,5060 ± (4,0321 x 3,2999 / √6)
= (61,5060 ± 13,2758) μg/mL
Jumlah per sajian vitamin B6 pada sampel merek K :
μ = (61,5060 ± 13,2758) μg/mL X 150 mL
= (9,2559 ± 1,9914) mg
2. Sampel Merek M
Universitas Sumatera Utara
No.
1
2
3
4
5
6
X
Kadar (μg/mL)
116,7406
116,7406
116,7406
92,4913
100,5744
124,8237
ΣX = 668,1113
�= 111,3519
(� − �)
5,3387
5,3387
5,3387
-18,8606
-10,7775
13,4719
2
29,0386
29,0386
29,0386
355,7224
116,1543
181,4910
2
Σ(� − �) = 740,4834
2
SD
(� − �)
∑��−��
740,4834
=�
=�
= 12,1695
�−1
6−1
Pada interval kepercayaan 99% dengan nilai α = 0,01, dk = 5,
maka t (α/2,dk) = 4,0321
Data diterima jika t hitung < t tabel.
t hitung 1
=�
�−�
�
�� ⁄√�
=�
6,7.10 −5
�=1,0846
0,00015 ⁄√6
Lampiran 17(Lanjutan)
t hitung 2
t hitung 3
t hitung 4
t hitung 5
t hitung 6
=�
�−�
�
�� ⁄√�
=�
6,7.10 −5 .
�= 1,0846
0,00015 ⁄√6
=�
�−�
�
�� ⁄√�
=�
−0,00023
�= 3,7963
0,00015 ⁄√6
=�
0,00017
�= 2,7116
0,00015 ⁄√6
=�
=�
=�
�−�
�
�� ⁄√�
�−�
�
�� ⁄√�
�−�
�
�� ⁄√�
=�
=�
6,7.10 −5
�= 1,0846
0,00015 ⁄√6
−0,00013
�= 2,1693
0,00015 ⁄√6
Dari hasil perhitungan tersebut diperoleh bahwa semua t hitung < t tabel, maka
semua data tersebut diterima.
Universitas Sumatera Utara
Kadar vitamin B6 pada sampel merek M
μ = � ± (t α/2, dk) x SD / √n)
= 111,3519 ± (4,0321 x 0,00015 / √6)
= (111,3519 ± 0,0006) μg/mL
Jumlah per sajian vitamin B6 pada sampel merek M
μ =(111,3519 ± 0,0006) μg/mL X 150 mL
= (16,7028) mg
Lampiran 18. Kurva Serapan Uji Perolehan Kembali
Kurva serapan perolehan kembali – 1
Universitas Sumatera Utara
Kurva serapan perolehan kembali - 2
Lampiran 18(Lanjutan)
Kurva serapan perolehan kembali – 3
Universitas Sumatera Utara
Kurva serapan perolehan kembali – 4
Lampiran 18(Lanjutan)
Universitas Sumatera Utara
Kurva serapan perolehan kembali – 5
Kurva serapan perolehan kembali – 6
Lampiran 19. Hasil Uji Perolehan Kembali Natrium Benzoat dan Vitamin B6
Universitas Sumatera Utara
1. Hasil Uji Perolehan Kembali Natrium Benzoat
No.
1
2
3
4
5
6
Vol.
Sampel
1 mL
1 mL
1 mL
1 mL
1 mL
1 mL
Absorbansi
Kons.
(λ 245,4 nm)
(μg/mL)
0,0144
23,3251
0,0143
23,1628
0,0141
22,8382
0,0140
22,6760
0,0141
22,8383
0,0142
23,0005
Rata-rata
Kadar
(μg/mL)
690,8433
686,0369
676,4240
671,6176
676,4240
681,2304
Persen Perolehan
Kembali (%)
100,61
96,77
89,08
85,23
89,08
92,92
92,28
Kadar
(μg/mL)
367,3172
383,4835
334,9848
391,5666
351,1510
351,1510
Persen Perolehan
Kembali (%)
102,39
108,85
89,45
112,08
95,92
95,92
100,77
2. Hasil Uji Perolehan Kembali Vitamin B6
No.
1
2
3
4
5
6
Vol.
Sampel
1 mL
1 mL
1 mL
1 mL
1 mL
1 mL
Absorbansi
Kons.
(λ 307,4 nm)
(μg/mL)
0,0045
14,7000
0,0047
15,3470
0,0041
13,4061
0,0048
15,6705
0,0043
14,0531
0,0043
14,0531
Rata-rata
Lampiran 20. Contoh Perhitungan Uji Perolehan Kembali
Universitas Sumatera Utara
I.
Perhitungan uji perolehan kembali natrium benzoat
Absorbansi (Y) :
λ 245,4 nm
λ 307,4 nm
= 0,0144
= 0,0045
Persamaan regresi pada spektrum derivat kedua :
Natrium Benzoat
Vitamin B6
: Y = (6,16216X + 0,266899) . 10-4
: Y = (3,09132X – 0,42526) . 10-4
Konsentrasi natrium benzoat :
Y
= (6,16216X + 0,266899) . 10-4
0,0144 = (6,16216X + 0,266899) . 10-4
X
0,0144
− 0,266899 = 6,16216�
10−4
= 23,3251 μg/mL(asam benzoat)
Konsentrasi awal setelah ditambahan larutan baku = 23,3251 μg/mL
Kadar =
=
����������� (�� /�� )
����� ������ (�� )
23,3251 �� /��
1 ��
× ����� (�� ) × ������ �����������
× 25 �� × 1 = 583,1275 μg/mL (asam benzoat)
Kadar natrium benzoat (C F ) :
�� ������� �������
= ����� ���� ������� × �� ���� ������� × ������ ����� ����
= 583,1275 ��/�� ×
144 ,1
122 ,1
× 100,40% = 690,8433 μg/mL
Kadar analit dalam sampel setelah ditambahkan larutan baku :
(C F ) = 690,8433 μg/mL
Kadar rata-rata analit dalam sampel sebelum ditambah larutan baku :
(C A) = 565,075 μg/mL
Lampiran 20(Lanjutan)
Universitas Sumatera Utara
Kadar larutan standar yang ditambahkan (C* A) :
C* A
=
����������� (�� /�� )
=
200 μg/mL
����� ������ (�� )
1 ��
× ������ (�� ) × ������ ����������
× 0,625 �� × 1= 125 μg/mL
Maka % perolehan kembali natrium benzoat =
=
�� −��
�∗�
× 100%
690,8433 �� /�� − 565 ,075 �� /��
125 �� /��
× 100%
= 100,61%
II. Perhitungan uji perolehan kembali vitamin B6
Absorbansi (Y) :
245,4 nm
307,4 nm
= 0,0144
= 0,0045
Persamaan regresi pada spektrum derivat kedua :
: Y = (6,16216X – 0,266899) . 10-4
: Y = (3,09132X – 0,42526) . 10-4
Natrium Benzoat
Vitamin B6
Konsentrasi vitamin B6 :
Y
= (3,09132X – 0,42526) . 10-4
0,0045 = (3,09132X – 0,42526) . 10-4
X
0,0045
− 0,42526 = 3,09132�
10−4
= 14,7 μg/mL
Konsentrasi awal setelah ditambahan larutan baku = 14,7 μg/mL
Kadar =
=
����������� (�� /�� )
����� ������ (�� )
14,7 �� /��
1 ��
× ����� (�� ) × ������ �����������
× 25 �� × 1 = 367,5 μg/mL
Kadar vitamin B6 (C F ) :
= ����� ������� �6 × ������ ����� ����
= 583,1275 ��/�� × 99,95% = 367,3172 μg/mL
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 20(Lanjutan)
Kadar analit dalam sampel setelah ditambahkan larutan baku :
(C F ) = 367,3172 μg/mL
Kadar rata-rata analit dalam sampel sebelum ditambah larutan baku :
(C A) = 111,3519 μg/mL
Kadar larutan standar yang ditambahkan (C* A) :
C* A
=
����������� (�� /�� )
=
200 μg/mL
����� ������ (�� )
1 ��
× ������ (�� ) × ������ ����������
× 1,25 �� × 1= 250 μg/mL
Maka % perolehan kembali natrium benzoat =
=
�� −��
�∗�
× 100%
367 ,3172 �� /�� − 111 ,3519 �� /��
250�� /��
× 100%
= 102,39%
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 21. Perhitungan Simpangan Baku Relatif (RSD) Natrium Benzoat
dalam Sampel
No.
1
2
3
4
5
6
Persen Perolehan Kembali
(Xi)
100,61%
96,71%
89,08%
85,23%
89,08%
92,92%
(�� − �)
8,3383
4,4383
-3,1917
-7,0417
-3,1917
0,6483
SD = �
RSD =
∑(��−�)2
�−1
��
�
= �
159,6055
× 100% =
6−1
5,6499
92,28
2
69,5278
19,6988
10,1867
49,5851
10,1867
0,4203
2
Σ Xi = 553,63%
� Xi = 92,28%
(�� − �)
Σ(�� − �) = 159,6055 μg/mL
= 5,6499 μg/mL
× 100% = 6,1231%
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 22. Perhitungan Simpangan Baku Relatif (RSD) Vitamin B6 dalam
Sampel
No.
1
2
3
4
5
6
Persen Perolehan Kembali
(Xi)
102,39%
108,85%
89,45%
112,08%
95,92%
92,92%
Σ Xi = 604,61%
�Xi = 100,77%
SD = �
RSD =
∑(��−�)2
�−1
��
�
= �
371 ,0143
× 100% =
6−1
8,6141
100 ,77
(�� − �)
1,6217
8,0817
-11,3183
11,3117
-4,8483
-4,8483
= 8,6141 μg/mL
(�� − �)
2
2,6298
65,3133
128,1047
127,9538
23,5063
23,5063
2
Σ(�� − �) = 371,0143 μg/mL
× 100% = 8,5484%
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 23. Komposisi Sampel Minuman Berenergi
Merek K
Merek M
(Kemasan botol, volume 150 mL)
(Kemasan botol, volume 150 mL)
Taurin 1000 mg
Taurin 800 mg
Kafein 50 mg
Kafein 50 mg
Inositol 50 mg
Inositol 50 mg
Vitamin B3 20 mg
Vitamin B3 20 mg
Vitamin B6 5 mg
Vitamin B6 5 mg
Provitamin B5 5 mg
Vitamin B5 5 mg
Vitamin B12 5 mcg
Gula 25 g
Gula 25 g
Natrium Benzoat
Ponceau 4R Cl 16255
Pewarna Tartrazin CI 19140
Tartrazine Cl 19140
Asam Sitrat
Trisodium Sitrat
Natrium Benzoat
Perasa BPOM RI SL 03160091
Panjang Gelombang Maksimum Bahan-bahan dalam Sampel :
Bahan
Taurin
Kafein
Inositol
Niasinamid
Vitamin B6
Vitamin B12
Sukrosa
Natrium Benzoat
Tartrazin
Asam Sitrat
Ponceau
Vitamin B5
Panjang Gelombang
Maksimum (nm)
570
273
261
261
290
361
190
230
425
520
506
200
Rujukan
Draganov, dkk., 2014
Moffat, dkk., 2005
Moffat, dkk., 2005
Moffat, dkk., 2005
Moffat, dkk., 2005
Moffat, dkk., 2005
Sumantri, dkk., 2013
Moffat, dkk., 2005
Huda, N., 2001
Napitupulu, P.M., 2011
Kartadarma, dkk., 2007
Engel, R., 2009
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 24. Gambar Sampel Minuman Berenergi
1. Merek K
2. Merek M
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 25. Gambar Alat Spektrofotometer Sinar Tampak
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 26.
Sertifikat Bahan Baku Natrium Benzoat
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 27. Sertifikat Bahan Baku Vitamin B6
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 28. Daftar Nilai Distribusi t
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 29. Persyaratan Minuman Berenergi Menurut SNI 01-6684-2002
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 30. Batas Penggunaan Natrium Benzoat Menurut SNI 01-0222-1995
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 31. Batas Penggunaan VitaminB6 Menurut BPOM No.
HK.00.05.23.3644
Universitas Sumatera Utara