Efek Ekstrak Etanol Biji Petai (Parkia speciosa Hassk.) Sebagai Antimutagenik Pada Mencit Jantan (Mus musculus) Yang Diinduksi Dengan Siklofosfamid
Lampiran 1.Hasil Identifikasi Tumbuhan
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 2. Surat Etikal Klirens
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 3. Gambar Tumbuhan Petai
a. Pohon Petai
b. Biji Petai
Universitas Sumatera Utara
c. Penampang Melintang satu papan petai
d. Irisan Biji Petai
Universitas Sumatera Utara
e. Simplisia Biji Petai
f. Serbuk Simplisia Biji petai
Universitas Sumatera Utara
g. Ekstrak simplisia biji petai
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 4. Hasil Pemeriksaan Mikroskopik Serbuk Simplisia Biji Petai
Perbesaran 10x
1
2
3
4
Keterangan:
1. Parenkim
2. Amylum (Butir Pati)
3. Fragmen Perisperm
4. Berkas Pembuluh (Xylem)
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 5. Perhitungan Hasil Pemeriksaan Karakterisasi Simplisia Biji Petai
1.
Perhitungan Penetapan Kadar Air
% Kadar air =
volume air (ml)
x 100%
berat sampel (g)
a. Berat sampel = 5,010 g
Volume air
= 0,3 ml
% Kadar air
=
0,3 ml
x 100% = 5,98%
5,010 g
b. Berat sampel = 5,013 g
Volume air
= 0,275 ml
% Kadar air
=
0,275 ml
x 100% = 5,48%
5,013 g
c. Berat sampel = 5,020 g
Volume air
% Kadar air
= 0,235 ml
=
0,235 ml
x 100% = 4,68%
5,020 g
% Kadar air rata-rata =
5,98% + 5,48% + 4,68%
= 5,38%
3
2. Perhitungan Penetapan Kadar Sari Larut dalam Air
% Kadar sari larut dalam air =
Berat sari (g)
100
100%
x
Berat simplisia (g) 20
a. Berat sampel = 5,0550 g
Berat sari
= 0,1900 g
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 5. (Lanjutan)
% Kadar sari larut dalam air =
0,19 g 100
x 100% = 18,79%
x
5,055 g 20
b. Berat sampel = 5,0600 g
Berat sari
= 0,2100 g
% Kadar sari larut dalam air =
0,21 g 100
x 100% = 20,75%
x
5,060 g 20
c. Berat sampel = 5,0460 g
Berat sari
= 0,2520 g
% Kadar sari larut dalam air =
0,2520 g 100
x 100% = 24,9%
x
5,0460 g 20
% Kadar sari larut dalam air rata-rata =
18,97% + 20,75% + 24,90%
3
= 21,48%
3. Perhitungan Penetapan Kadar Sari Larut dalam Etanol
% Kadar sari larut dalam etanol =
100
Berat sari (g)
x 100%
x
Berat simplisia (g) 20
a. Berat sampel = 5,015 g
Berat sari
= 0,088 g
% Kadar sari larut dalam etanol =
0,088 g 100
x 100% = 8,77%
x
5,015 g 20
b. Berat sampel = 5,011 g
Berat sari
= 0,095 g
Lampiran 5. (Lanjutan)
Universitas Sumatera Utara
% Kadar sari larut dalam etanol =
0,095 100
x 100% = 9,47%
x
5,011 g 20
c. Berat sampel = 5,009 g
Berat sari
= 0,128 g
% Kadar sari larut dalam etanol =
0,128 g 100
x 100% = 12,77%
x
5,009 g 20
% Kadar sari larut dalam etanol rata-rata =
8,77% + 9,47 % + 12,77%
3
= 10,33%
4. Perhitungan Penetapan Kadar Abu Total
% Kadar abu total =
Berat abu (g)
x 100%
Berat simplisia (g)
a. Berat sampel = 2,0018 g
Berat abu
= 0,018 g
% Kadar abu total =
0,018 g
x 100% = 0,89%
2,0018 g
b. Berat sampel = 2,0015 g
Berat abu
= 0,019 g
% Kadar abu total =
c.
0,019 g
x 100% = 0,94%
2,0015 g
Berat sampel = 2,0016 g
Berat abu
= 0,020 g
Lampiran 5. (Lanjutan)
Universitas Sumatera Utara
% Kadar abu total =
0,1876 g
x 100% = 0,99%
2,0187 g
% Kadar abu total rata-rata =
0,89% + 0,94% + 0,99%
= 0,94%
3
5. Perhitungan Penetapan Kadar Abu Tidak Larut Asam
% Kadar abu tidak larut dalam asam =
Berat abu (g)
x 100%
Berat simplisia (g)
a. Berat sampel = 2,0015 g
Berat abu
= 0,013 g
% Kadar abu tidak larut dalam asam =
0,013 g
x 100%
2,0015 g
= 0,64%
b. Berat sampel = 2,0018 g
Berat abu
= 0,016 g
% Kadar abu tidak larut dalam asam =
0,016 g
x 100%
2,0018 g
= 0,79%
c. Berat sampel = 2,0016 g
Berat abu
= 0,016 g
% Kadar abu tidak larut dalam asam =
0,016 g
x 100%
2,0016 g
= 0,79%
Lampiran 5. (Lanjutan)
% Kadar abu yang tidak larut dalam asam rata-rata
Universitas Sumatera Utara
=
0,64% + 0,79% + 0,79%
3
= 0,74 %
Lampiran 6. Perhitungan Hasil Pemeriksaan Karakterisasi Ekstrak Etanol Biji
Petai
1. Perhitungan Penetapan Kadar Air
Universitas Sumatera Utara
% Kadar air =
volume air (ml)
x 100%
berat ekstrak (g)
a. Berat sampel
= 5,015 g
Volume air
= 0,25 ml
% Kadar air
=
0,25 ml
x 100% = 4,98%
5,015 g
b. Berat sampel
= 5,018 g
Volume air
= 0,28 ml
% Kadar air
=
0,28 ml
x 100% = 4,78%
5,018 g
c. Berat sampel
= 5,013 g
Volume air
= 0,24 ml
% Kadar air
=
0,24 ml
x 100% = 4,58%
5,013 g
% Kadar air rata-rata =
4,98% + 4,78% + 4,58%
= 4,98%
3
2. Perhitungan Penetapan Kadar Sari Larut dalam Air
% Kadar sari larut dalam air =
a. Berat sampel
Berat sari
100
Berat sari (g)
100%
x
Berat ekstrak (g) 20
= 5,0240 g
= 0,2570 g
Lampiran 6. (Lanjutan)
% Kadar sari larut dalam air =
0,2570 g 100
x
x 100% = 25,60%
5,0240g 20
Universitas Sumatera Utara
b. Berat sampel
Berat sari
= 5,0239 g
= 0,2572 g
% Kadar sari larut dalam air =
c. Berat sampel
Berat sari
0,2572 g 100
x
x 100% = 25,60%
5,0239 g 20
= 5,0242 g
= 0,2577 g
% Kadar sari larut dalam air =
0,2577 g 100
x
x 100% = 25,63%
5,0242 g 20
% Kadar sari larut dalam air rata-rata =
25,60% + 25,60% + 25,63%
3
= 25,61%
3. Perhitungan Penetapan Kadar Sari Larut dalam Etanol
% Kadar sari larut dalam etanol =
a. Berat sampel
Berat sari
= 5,0012 g
= 0,3418 g
% Kadar sari larut dalam etanol =
b. Berat sampel
Berat sari
0,3418 g 100
x 100% = 34,24%
x
5,0012 g 20
= 5,0020 g
= 0,3414 g
% Kadar sari larut dalam etanol =
c. Berat sampel
100
Berat sari (g)
x 100%
x
Berat ekstrak (g) 20
0,3414 100
x 100% = 34,23%
x
5,0020 g 20
= 5,0018 g
Lampiran 6. (Lanjutan)
Berat sari
= 0,3420 g
% Kadar sari larut dalam etanol =
0,3420 g 100
x 100% = 34,25%
x
5,0018g 20
Universitas Sumatera Utara
% Kadar sari larut dalam etanol rata-rata =
34,24% + 34,23 % + 34,25%
3
= 34,25%
4. Perhitungan Penetapan Kadar Abu Total
% Kadar abu total =
a. Berat sampel
Berat abu
Berat abu (g)
x 100%
Berat ekstrak (g)
= 2,0022 g
= 0,017 g
% Kadar abu total =
0,017 g
x 100% = 0,85%
2,0022 g
b. Berat sampel = 2,0023 g
Berat abu
= 0,016 g
% Kadar abu total =
0,016 g
x 100% = 0,80%
2,0023 g
c. Berat sampel = 2,0026 g
Berat abu
= 0,019 g
% Kadar abu total =
0,019 g
x 100% = 0,95%
2,0026 g
% Kadar abu total rata-rata =
0,85% + 0,80% + 0,95%
= 0,87%
3
Lampiran 6. (Lanjutan)
5. Perhitungan Penetapan Kadar Abu Tidak Larut Asam
Universitas Sumatera Utara
% Kadar abu tidak larut dalam asam =
a. Berat sampel
Berat abu
Berat abu (g)
x 100%
Berat ekstrak (g)
= 2,0022 g
= 0,012 g
% Kadar abu tidak larut dalam asam =
0,012 g
x 100%
2,0022 g
= 0,60%
b. Berat sampel
Berat abu
= 2,0023 g
= 0,013 g
% Kadar abu tidak larut dalam asam =
0,013 g
x 100%
2,0023 g
= 0,64%
c. Berat sampel
Berat abu
= 2,0026 g
= 0,012 g
% Kadar abu tidak larut dalam asam =
0,012 g
x 100%
2,0026 g
= 0,60%
% Kadar abu yang tidak larut dalam asam rata-rata
=
0,60% + 0,64% + 0,60%
3
= 0,62 %
Lampiran 7. Bagan Alur Penelitian
Biji Petai
Universitas Sumatera Utara
Dipisahkan dari kulit luarnya
Dibersihkan dari pengotor
Dicuci sampai bersih, ditiriskan dan
ditimbang
Berat basah 3,8 kg
Dikeringkan pada lemari pengering
Berat kering 954,9 g
Dihaluskan
Ditimbang
946,08 g serbuk simplisia
Karakterisasi simplisia
a. Pemeriksaan makroskopik
b. Pemeriksaan mikroskopik
c. Penetapan kadar air
d. Penetapan kadar sari larut dalam air
e. Penetapan kadar sari larut dalam etanol
f. Penetapan kadar abu total
g. Penetapan kadar abu tidak larut asam
Skrining fitokimia:
a. Pemeriksaan alkaloida
b. Pemeriksaan flavonoida
c. Pemeriksaan tanin
d. Pemeriksaan saponin
e. Pemeriksaan
steroida/triterpenoida
f. Pemeriksaan glikosida
Lampiran 7. (Lanjutan)
796,08 g Serbuk simplisia biji petai
Universitas Sumatera Utara
Dimaserasi menggunakan etanol
96% yang telah didestilasi
Ampas
Maserat
Diuapkan menggunakan rotavapor
Dikentalkan dengan menggunakan waterbath
Ekstrak kental 123,1 g
Diuji aktivitas antimutagenik
Hasil +
Dilakukan skrining fitokimia
Hasil
(alkaloid, flavonoid, saponin,
steroid/triterpenoid,
glikosida)
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 8. Alat-alat
a. Velocity 18R refrigerated centrifuge
b. Oral sonde dan spuit 1 ml
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 8. (Lanjutan)
b. Pinset dan gunting bedah
c. Mikroskop
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 9. Hewan percobaan
a. Mencit Jantan Putih
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 10. Contoh Perhitungan Dosis
Contoh perhitungan dosis suspensi ekstrak etanol biji petai yang diberikan
secara oral pada mencit
- Dosis suspensi ekstrak etanol biji petai yang dibuat adalah 200 mg/kg bb, 400
mg/kg bb dan 800 mg/kg bb
a. Cara pembuatan suspensi ekstrak etanol biji petai :
Timbang 200 mg, 400 mg dan 800 mg ekstrak etanol biji petai (EEBP), masingmasing dilarutkan dalam suspensi CMC
b. Berapa volume suspensi ekstrak etanol biji petai yang akan diberikan secara
oral pada mencit ? Larutan induk baku (LIB) EEBP 5 g/100 ml = 50 mg/ml dan
misal BB Mencit = 28 g
Jumlah EEBP dosis 200 mg/kg bb
= 28 g x 200 mg = 5,6 mg/mencit
1000g
LIB EEBP yang dipipet 1 ml ad 5 ml = 50 mg/5 ml = 10 mg/ml
Volume larutan yang diberi
= 5,6 mg x 1 ml = 0,56 ml
10 mg
Jumlah EEBP dosis 400 mg/kg bb
= 28 g x 400 mg = 11,2 mg/mencit
1000g
LIB EEBP yang dipipet 2 ml ad 5 ml = 100 mg/5 ml = 20 mg/ml
Volume larutan yang diberi
= 11,2 mg x 1 ml = 0,56 ml
20 mg
Jumlah EEBP dosis 800 mg/kg bb
= 28 g x 800 mg = 22,4 mg
1000 g
LIB EEBP yang dipipet 4 ml ad 5 ml = 200 mg/5 ml = 40 mgl/ml
Volume larutan yang diberi
= 22,4 mg x 1 ml = 0,56 ml
40 mg
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 10. (Lanjutan)
1. Volume maksimal larutan sediaan uji yang diberikan pada berbagai hewan
Jenis
Volume maksimal (ml) sesuai jalur pemberian
hewan uji
i.v.
i.m.
i.p.
s.c.
Mencit
(20-30 g)
Tikus
(100 g)
Hamster
(50 g)
Marmot
(250 g)
Merpati
(300 g)
Kelinci
(2,5 kg)
Kucing
(3 kg)
Anjing
(5 kg)
p.o.
0,5
0,005
1,0
0,5-1,0
1,0
1,0
0,1
2,5
2,5
5,0
-
0,1
1-2
2,5
2,5
-
0,25
2-5
5,0
10,0
2,0
0,5
2,0
2,0
10,0
5-10
0,5
10-20
5-10
20,0
5-10
1,0
10-20
5-10
50,0
10-20
5,0
20-50
10,0
100,0
(Suhardjono, 1995)
2. Perbandingan luas permukaan tubuh hewan percobaan untuk konversi dosis
Mencit
20 g
Tikus
200 g
Marmot
400 g
Kelinci
1,5 kg
Kucing
2 kg
Kera
4 kg
Anjing
12 kg
Manusia
70 kg
Mencit
20 g
Tikus
200 g
Marmot
400 g
Kelinci
1,5 kg
Kucing
2 kg
Kera
4 kg
Anjing
12 kg
Manusia
70 kg
1,0
7,01
12,29
27,8
29,7
64,1
124,2
387,9
0,14
1,0
1,74
3,3
4,2
9,2
17,8
56,0
0,08
0,57
1,0
2,25
2,4
5,2
10,2
31,5
0,04
0,25
0,44
1,0
1,06
2,4
4,5
14,2
0,03
0,23
0,42
0,92
1,0
2,2
4,1
13,0
0,016
0,11
0,19
0,42
0,45
1,0
1,9
6,1
0,008
0,06
0,10
0,022
0,24
0,52
1,0
3,1
0,0026
0,018
0,031
0,07
0,013
0,16
0,32
1,0
(Suhardjono, 1995)
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 10. Contoh Perhitungan Dosis Penginduksi (Siklofosfamid)
Dosis 50 mg/kg BB = 3500 mg/70 kg BB
= 3500 mg x 0,0026
= 9,1 mg/20 g (mencit)
= 9,1 mg/20 g x 28 g
= 12,74 mg/mencit
Konsentrasi Siklofosfamid 2 % = 20 mg/ml
Volume (ml) = 12,74 mg/20 mg/ml x 1 ml
= 0,64 ml
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 11. Hasil Perhitungan Statistik Menggunakan SPSS 16
a. Uji Deskriptif
Descriptives
Jumlahmikronukleus
95% Confidence
Interval for Mean
Std.
N
Kontrol
normal
Kontrol
positif
EEBP 200
mg/kg bb
EEBP 400
mg/kg bb
EEBP 800
mg/kg bb
Total
Mean
Deviation
Std. Error
Lower
Upper
Bound
Bound
Minimum Maximum
5
32.800
2.3875
1.0677
29.836
35.764
30.0
36.0
5
154.000
3.0822
1.3784
150.173
157.827
150.0
158.0
5
96.800
1.3038
.5831
95.181
98.419
95.0
98.0
5
68.000
5.0498
2.2583
61.730
74.270
61.0
74.0
5
37.800
4.4385
1.9849
32.289
43.311
32.0
43.0
25
77.880
45.5021
9.1004
59.098
96.662
30.0
158.0
b. Uji ANOVA Satu Arah (One Way ANOVA)
ANOVA
Jumlahmikronukleus
Sum of Squares
Between Groups
Within Groups
Total
df
Mean Square
49442.240
4
12360.560
248.400
20
12.420
49690.640
24
F
995.214
Sig.
.000
Universitas Sumatera Utara
c. Uji Post Hoc Tukey
Multiple Comparisons
Jumlahmikronukleus
Tukey HSD
95% Confidence
Interval
(I)
perlaku
an
Mean Difference
(J) perlakuan
Sig.
Lower Bound
Bound
2.2289
.000
EEBP 200 mg/kg BB
-64.0000*
2.2289
.000
-70.670
-57.330
EEBP 400 mg/kg BB
-35.2000*
2.2289
.000
-41.870
-28.530
EEBP 800 mg/kg BB
-5.0000
2.2289
.205
-11.670
1.670
121.2000*
2.2289
.000
114.530
127.870
EEBP 200 mg/kg BB
57.2000*
2.2289
.000
50.530
63.870
EEBP 400 mg/kg BB
86.0000*
2.2289
.000
79.330
92.670
EEBP 800 mg/kg BB
116.2000*
2.2289
.000
109.530
122.870
Kontrol Kontrol Normal
Positif
Std. Error
-121.2000*
Kontrol Kontrol Positif
Normal
(I-J)
Upper
-127.870 -114.530
EEBP
Kontrol Normal
64.0000*
2.2289
.000
57.330
70.670
200
Kontrol Positif
-57.2000*
2.2289
.000
-63.870
-50.530
EEBP 400 mg/kg BB
28.8000*
2.2289
.000
22.130
35.470
EEBP 800 mg/kg BB
59.0000*
2.2289
.000
52.330
65.670
EEBP
Kontrol Normal
35.2000*
2.2289
.000
28.530
41.870
400
Kontrol Positif
-86.0000
*
2.2289
.000
-92.670
-79.330
EEBP 200 mg/kg BB
-28.8000
*
2.2289
.000
-35.470
-22.130
EEBP 800 mg/kg BB
30.2000*
2.2289
.000
23.530
36.870
5.0000
2.2289
.205
-1.670
11.670
-116.2000
*
2.2289
.000
EEBP 200 mg/kg BB
-59.0000*
2.2289
.000
-65.670
-52.330
EEBP 400 mg/kg BB
-30.2000
*
2.2289
.000
-36.870
-23.530
mg/kg
BB
mg/kg
BB
EEBP
Kontrol Normal
800
Kontrol Positif
mg/kg
BB
-122.870 -109.530
*. The mean difference is significant at the 0.05
level.
Universitas Sumatera Utara
d. Uji Homogeneous
Jumlahmikronukleus
Tukey HSD
Subset for alpha = 0.05
Perlakuan
N
1
2
Kontrol Normal
5
32.800
EEBP 800 mg/kg BB
5
37.800
EEBP 400 mg/kg BB
5
EEBP 200 mg/kg BB
5
Kontrol Positif
5
Sig.
3
4
68.000
96.800
154.000
.205
1.000
1.000
1.000
Means for groups in homogeneous subsets are displayed.
Universitas Sumatera Utara
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 2. Surat Etikal Klirens
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 3. Gambar Tumbuhan Petai
a. Pohon Petai
b. Biji Petai
Universitas Sumatera Utara
c. Penampang Melintang satu papan petai
d. Irisan Biji Petai
Universitas Sumatera Utara
e. Simplisia Biji Petai
f. Serbuk Simplisia Biji petai
Universitas Sumatera Utara
g. Ekstrak simplisia biji petai
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 4. Hasil Pemeriksaan Mikroskopik Serbuk Simplisia Biji Petai
Perbesaran 10x
1
2
3
4
Keterangan:
1. Parenkim
2. Amylum (Butir Pati)
3. Fragmen Perisperm
4. Berkas Pembuluh (Xylem)
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 5. Perhitungan Hasil Pemeriksaan Karakterisasi Simplisia Biji Petai
1.
Perhitungan Penetapan Kadar Air
% Kadar air =
volume air (ml)
x 100%
berat sampel (g)
a. Berat sampel = 5,010 g
Volume air
= 0,3 ml
% Kadar air
=
0,3 ml
x 100% = 5,98%
5,010 g
b. Berat sampel = 5,013 g
Volume air
= 0,275 ml
% Kadar air
=
0,275 ml
x 100% = 5,48%
5,013 g
c. Berat sampel = 5,020 g
Volume air
% Kadar air
= 0,235 ml
=
0,235 ml
x 100% = 4,68%
5,020 g
% Kadar air rata-rata =
5,98% + 5,48% + 4,68%
= 5,38%
3
2. Perhitungan Penetapan Kadar Sari Larut dalam Air
% Kadar sari larut dalam air =
Berat sari (g)
100
100%
x
Berat simplisia (g) 20
a. Berat sampel = 5,0550 g
Berat sari
= 0,1900 g
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 5. (Lanjutan)
% Kadar sari larut dalam air =
0,19 g 100
x 100% = 18,79%
x
5,055 g 20
b. Berat sampel = 5,0600 g
Berat sari
= 0,2100 g
% Kadar sari larut dalam air =
0,21 g 100
x 100% = 20,75%
x
5,060 g 20
c. Berat sampel = 5,0460 g
Berat sari
= 0,2520 g
% Kadar sari larut dalam air =
0,2520 g 100
x 100% = 24,9%
x
5,0460 g 20
% Kadar sari larut dalam air rata-rata =
18,97% + 20,75% + 24,90%
3
= 21,48%
3. Perhitungan Penetapan Kadar Sari Larut dalam Etanol
% Kadar sari larut dalam etanol =
100
Berat sari (g)
x 100%
x
Berat simplisia (g) 20
a. Berat sampel = 5,015 g
Berat sari
= 0,088 g
% Kadar sari larut dalam etanol =
0,088 g 100
x 100% = 8,77%
x
5,015 g 20
b. Berat sampel = 5,011 g
Berat sari
= 0,095 g
Lampiran 5. (Lanjutan)
Universitas Sumatera Utara
% Kadar sari larut dalam etanol =
0,095 100
x 100% = 9,47%
x
5,011 g 20
c. Berat sampel = 5,009 g
Berat sari
= 0,128 g
% Kadar sari larut dalam etanol =
0,128 g 100
x 100% = 12,77%
x
5,009 g 20
% Kadar sari larut dalam etanol rata-rata =
8,77% + 9,47 % + 12,77%
3
= 10,33%
4. Perhitungan Penetapan Kadar Abu Total
% Kadar abu total =
Berat abu (g)
x 100%
Berat simplisia (g)
a. Berat sampel = 2,0018 g
Berat abu
= 0,018 g
% Kadar abu total =
0,018 g
x 100% = 0,89%
2,0018 g
b. Berat sampel = 2,0015 g
Berat abu
= 0,019 g
% Kadar abu total =
c.
0,019 g
x 100% = 0,94%
2,0015 g
Berat sampel = 2,0016 g
Berat abu
= 0,020 g
Lampiran 5. (Lanjutan)
Universitas Sumatera Utara
% Kadar abu total =
0,1876 g
x 100% = 0,99%
2,0187 g
% Kadar abu total rata-rata =
0,89% + 0,94% + 0,99%
= 0,94%
3
5. Perhitungan Penetapan Kadar Abu Tidak Larut Asam
% Kadar abu tidak larut dalam asam =
Berat abu (g)
x 100%
Berat simplisia (g)
a. Berat sampel = 2,0015 g
Berat abu
= 0,013 g
% Kadar abu tidak larut dalam asam =
0,013 g
x 100%
2,0015 g
= 0,64%
b. Berat sampel = 2,0018 g
Berat abu
= 0,016 g
% Kadar abu tidak larut dalam asam =
0,016 g
x 100%
2,0018 g
= 0,79%
c. Berat sampel = 2,0016 g
Berat abu
= 0,016 g
% Kadar abu tidak larut dalam asam =
0,016 g
x 100%
2,0016 g
= 0,79%
Lampiran 5. (Lanjutan)
% Kadar abu yang tidak larut dalam asam rata-rata
Universitas Sumatera Utara
=
0,64% + 0,79% + 0,79%
3
= 0,74 %
Lampiran 6. Perhitungan Hasil Pemeriksaan Karakterisasi Ekstrak Etanol Biji
Petai
1. Perhitungan Penetapan Kadar Air
Universitas Sumatera Utara
% Kadar air =
volume air (ml)
x 100%
berat ekstrak (g)
a. Berat sampel
= 5,015 g
Volume air
= 0,25 ml
% Kadar air
=
0,25 ml
x 100% = 4,98%
5,015 g
b. Berat sampel
= 5,018 g
Volume air
= 0,28 ml
% Kadar air
=
0,28 ml
x 100% = 4,78%
5,018 g
c. Berat sampel
= 5,013 g
Volume air
= 0,24 ml
% Kadar air
=
0,24 ml
x 100% = 4,58%
5,013 g
% Kadar air rata-rata =
4,98% + 4,78% + 4,58%
= 4,98%
3
2. Perhitungan Penetapan Kadar Sari Larut dalam Air
% Kadar sari larut dalam air =
a. Berat sampel
Berat sari
100
Berat sari (g)
100%
x
Berat ekstrak (g) 20
= 5,0240 g
= 0,2570 g
Lampiran 6. (Lanjutan)
% Kadar sari larut dalam air =
0,2570 g 100
x
x 100% = 25,60%
5,0240g 20
Universitas Sumatera Utara
b. Berat sampel
Berat sari
= 5,0239 g
= 0,2572 g
% Kadar sari larut dalam air =
c. Berat sampel
Berat sari
0,2572 g 100
x
x 100% = 25,60%
5,0239 g 20
= 5,0242 g
= 0,2577 g
% Kadar sari larut dalam air =
0,2577 g 100
x
x 100% = 25,63%
5,0242 g 20
% Kadar sari larut dalam air rata-rata =
25,60% + 25,60% + 25,63%
3
= 25,61%
3. Perhitungan Penetapan Kadar Sari Larut dalam Etanol
% Kadar sari larut dalam etanol =
a. Berat sampel
Berat sari
= 5,0012 g
= 0,3418 g
% Kadar sari larut dalam etanol =
b. Berat sampel
Berat sari
0,3418 g 100
x 100% = 34,24%
x
5,0012 g 20
= 5,0020 g
= 0,3414 g
% Kadar sari larut dalam etanol =
c. Berat sampel
100
Berat sari (g)
x 100%
x
Berat ekstrak (g) 20
0,3414 100
x 100% = 34,23%
x
5,0020 g 20
= 5,0018 g
Lampiran 6. (Lanjutan)
Berat sari
= 0,3420 g
% Kadar sari larut dalam etanol =
0,3420 g 100
x 100% = 34,25%
x
5,0018g 20
Universitas Sumatera Utara
% Kadar sari larut dalam etanol rata-rata =
34,24% + 34,23 % + 34,25%
3
= 34,25%
4. Perhitungan Penetapan Kadar Abu Total
% Kadar abu total =
a. Berat sampel
Berat abu
Berat abu (g)
x 100%
Berat ekstrak (g)
= 2,0022 g
= 0,017 g
% Kadar abu total =
0,017 g
x 100% = 0,85%
2,0022 g
b. Berat sampel = 2,0023 g
Berat abu
= 0,016 g
% Kadar abu total =
0,016 g
x 100% = 0,80%
2,0023 g
c. Berat sampel = 2,0026 g
Berat abu
= 0,019 g
% Kadar abu total =
0,019 g
x 100% = 0,95%
2,0026 g
% Kadar abu total rata-rata =
0,85% + 0,80% + 0,95%
= 0,87%
3
Lampiran 6. (Lanjutan)
5. Perhitungan Penetapan Kadar Abu Tidak Larut Asam
Universitas Sumatera Utara
% Kadar abu tidak larut dalam asam =
a. Berat sampel
Berat abu
Berat abu (g)
x 100%
Berat ekstrak (g)
= 2,0022 g
= 0,012 g
% Kadar abu tidak larut dalam asam =
0,012 g
x 100%
2,0022 g
= 0,60%
b. Berat sampel
Berat abu
= 2,0023 g
= 0,013 g
% Kadar abu tidak larut dalam asam =
0,013 g
x 100%
2,0023 g
= 0,64%
c. Berat sampel
Berat abu
= 2,0026 g
= 0,012 g
% Kadar abu tidak larut dalam asam =
0,012 g
x 100%
2,0026 g
= 0,60%
% Kadar abu yang tidak larut dalam asam rata-rata
=
0,60% + 0,64% + 0,60%
3
= 0,62 %
Lampiran 7. Bagan Alur Penelitian
Biji Petai
Universitas Sumatera Utara
Dipisahkan dari kulit luarnya
Dibersihkan dari pengotor
Dicuci sampai bersih, ditiriskan dan
ditimbang
Berat basah 3,8 kg
Dikeringkan pada lemari pengering
Berat kering 954,9 g
Dihaluskan
Ditimbang
946,08 g serbuk simplisia
Karakterisasi simplisia
a. Pemeriksaan makroskopik
b. Pemeriksaan mikroskopik
c. Penetapan kadar air
d. Penetapan kadar sari larut dalam air
e. Penetapan kadar sari larut dalam etanol
f. Penetapan kadar abu total
g. Penetapan kadar abu tidak larut asam
Skrining fitokimia:
a. Pemeriksaan alkaloida
b. Pemeriksaan flavonoida
c. Pemeriksaan tanin
d. Pemeriksaan saponin
e. Pemeriksaan
steroida/triterpenoida
f. Pemeriksaan glikosida
Lampiran 7. (Lanjutan)
796,08 g Serbuk simplisia biji petai
Universitas Sumatera Utara
Dimaserasi menggunakan etanol
96% yang telah didestilasi
Ampas
Maserat
Diuapkan menggunakan rotavapor
Dikentalkan dengan menggunakan waterbath
Ekstrak kental 123,1 g
Diuji aktivitas antimutagenik
Hasil +
Dilakukan skrining fitokimia
Hasil
(alkaloid, flavonoid, saponin,
steroid/triterpenoid,
glikosida)
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 8. Alat-alat
a. Velocity 18R refrigerated centrifuge
b. Oral sonde dan spuit 1 ml
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 8. (Lanjutan)
b. Pinset dan gunting bedah
c. Mikroskop
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 9. Hewan percobaan
a. Mencit Jantan Putih
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 10. Contoh Perhitungan Dosis
Contoh perhitungan dosis suspensi ekstrak etanol biji petai yang diberikan
secara oral pada mencit
- Dosis suspensi ekstrak etanol biji petai yang dibuat adalah 200 mg/kg bb, 400
mg/kg bb dan 800 mg/kg bb
a. Cara pembuatan suspensi ekstrak etanol biji petai :
Timbang 200 mg, 400 mg dan 800 mg ekstrak etanol biji petai (EEBP), masingmasing dilarutkan dalam suspensi CMC
b. Berapa volume suspensi ekstrak etanol biji petai yang akan diberikan secara
oral pada mencit ? Larutan induk baku (LIB) EEBP 5 g/100 ml = 50 mg/ml dan
misal BB Mencit = 28 g
Jumlah EEBP dosis 200 mg/kg bb
= 28 g x 200 mg = 5,6 mg/mencit
1000g
LIB EEBP yang dipipet 1 ml ad 5 ml = 50 mg/5 ml = 10 mg/ml
Volume larutan yang diberi
= 5,6 mg x 1 ml = 0,56 ml
10 mg
Jumlah EEBP dosis 400 mg/kg bb
= 28 g x 400 mg = 11,2 mg/mencit
1000g
LIB EEBP yang dipipet 2 ml ad 5 ml = 100 mg/5 ml = 20 mg/ml
Volume larutan yang diberi
= 11,2 mg x 1 ml = 0,56 ml
20 mg
Jumlah EEBP dosis 800 mg/kg bb
= 28 g x 800 mg = 22,4 mg
1000 g
LIB EEBP yang dipipet 4 ml ad 5 ml = 200 mg/5 ml = 40 mgl/ml
Volume larutan yang diberi
= 22,4 mg x 1 ml = 0,56 ml
40 mg
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 10. (Lanjutan)
1. Volume maksimal larutan sediaan uji yang diberikan pada berbagai hewan
Jenis
Volume maksimal (ml) sesuai jalur pemberian
hewan uji
i.v.
i.m.
i.p.
s.c.
Mencit
(20-30 g)
Tikus
(100 g)
Hamster
(50 g)
Marmot
(250 g)
Merpati
(300 g)
Kelinci
(2,5 kg)
Kucing
(3 kg)
Anjing
(5 kg)
p.o.
0,5
0,005
1,0
0,5-1,0
1,0
1,0
0,1
2,5
2,5
5,0
-
0,1
1-2
2,5
2,5
-
0,25
2-5
5,0
10,0
2,0
0,5
2,0
2,0
10,0
5-10
0,5
10-20
5-10
20,0
5-10
1,0
10-20
5-10
50,0
10-20
5,0
20-50
10,0
100,0
(Suhardjono, 1995)
2. Perbandingan luas permukaan tubuh hewan percobaan untuk konversi dosis
Mencit
20 g
Tikus
200 g
Marmot
400 g
Kelinci
1,5 kg
Kucing
2 kg
Kera
4 kg
Anjing
12 kg
Manusia
70 kg
Mencit
20 g
Tikus
200 g
Marmot
400 g
Kelinci
1,5 kg
Kucing
2 kg
Kera
4 kg
Anjing
12 kg
Manusia
70 kg
1,0
7,01
12,29
27,8
29,7
64,1
124,2
387,9
0,14
1,0
1,74
3,3
4,2
9,2
17,8
56,0
0,08
0,57
1,0
2,25
2,4
5,2
10,2
31,5
0,04
0,25
0,44
1,0
1,06
2,4
4,5
14,2
0,03
0,23
0,42
0,92
1,0
2,2
4,1
13,0
0,016
0,11
0,19
0,42
0,45
1,0
1,9
6,1
0,008
0,06
0,10
0,022
0,24
0,52
1,0
3,1
0,0026
0,018
0,031
0,07
0,013
0,16
0,32
1,0
(Suhardjono, 1995)
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 10. Contoh Perhitungan Dosis Penginduksi (Siklofosfamid)
Dosis 50 mg/kg BB = 3500 mg/70 kg BB
= 3500 mg x 0,0026
= 9,1 mg/20 g (mencit)
= 9,1 mg/20 g x 28 g
= 12,74 mg/mencit
Konsentrasi Siklofosfamid 2 % = 20 mg/ml
Volume (ml) = 12,74 mg/20 mg/ml x 1 ml
= 0,64 ml
Universitas Sumatera Utara
Lampiran 11. Hasil Perhitungan Statistik Menggunakan SPSS 16
a. Uji Deskriptif
Descriptives
Jumlahmikronukleus
95% Confidence
Interval for Mean
Std.
N
Kontrol
normal
Kontrol
positif
EEBP 200
mg/kg bb
EEBP 400
mg/kg bb
EEBP 800
mg/kg bb
Total
Mean
Deviation
Std. Error
Lower
Upper
Bound
Bound
Minimum Maximum
5
32.800
2.3875
1.0677
29.836
35.764
30.0
36.0
5
154.000
3.0822
1.3784
150.173
157.827
150.0
158.0
5
96.800
1.3038
.5831
95.181
98.419
95.0
98.0
5
68.000
5.0498
2.2583
61.730
74.270
61.0
74.0
5
37.800
4.4385
1.9849
32.289
43.311
32.0
43.0
25
77.880
45.5021
9.1004
59.098
96.662
30.0
158.0
b. Uji ANOVA Satu Arah (One Way ANOVA)
ANOVA
Jumlahmikronukleus
Sum of Squares
Between Groups
Within Groups
Total
df
Mean Square
49442.240
4
12360.560
248.400
20
12.420
49690.640
24
F
995.214
Sig.
.000
Universitas Sumatera Utara
c. Uji Post Hoc Tukey
Multiple Comparisons
Jumlahmikronukleus
Tukey HSD
95% Confidence
Interval
(I)
perlaku
an
Mean Difference
(J) perlakuan
Sig.
Lower Bound
Bound
2.2289
.000
EEBP 200 mg/kg BB
-64.0000*
2.2289
.000
-70.670
-57.330
EEBP 400 mg/kg BB
-35.2000*
2.2289
.000
-41.870
-28.530
EEBP 800 mg/kg BB
-5.0000
2.2289
.205
-11.670
1.670
121.2000*
2.2289
.000
114.530
127.870
EEBP 200 mg/kg BB
57.2000*
2.2289
.000
50.530
63.870
EEBP 400 mg/kg BB
86.0000*
2.2289
.000
79.330
92.670
EEBP 800 mg/kg BB
116.2000*
2.2289
.000
109.530
122.870
Kontrol Kontrol Normal
Positif
Std. Error
-121.2000*
Kontrol Kontrol Positif
Normal
(I-J)
Upper
-127.870 -114.530
EEBP
Kontrol Normal
64.0000*
2.2289
.000
57.330
70.670
200
Kontrol Positif
-57.2000*
2.2289
.000
-63.870
-50.530
EEBP 400 mg/kg BB
28.8000*
2.2289
.000
22.130
35.470
EEBP 800 mg/kg BB
59.0000*
2.2289
.000
52.330
65.670
EEBP
Kontrol Normal
35.2000*
2.2289
.000
28.530
41.870
400
Kontrol Positif
-86.0000
*
2.2289
.000
-92.670
-79.330
EEBP 200 mg/kg BB
-28.8000
*
2.2289
.000
-35.470
-22.130
EEBP 800 mg/kg BB
30.2000*
2.2289
.000
23.530
36.870
5.0000
2.2289
.205
-1.670
11.670
-116.2000
*
2.2289
.000
EEBP 200 mg/kg BB
-59.0000*
2.2289
.000
-65.670
-52.330
EEBP 400 mg/kg BB
-30.2000
*
2.2289
.000
-36.870
-23.530
mg/kg
BB
mg/kg
BB
EEBP
Kontrol Normal
800
Kontrol Positif
mg/kg
BB
-122.870 -109.530
*. The mean difference is significant at the 0.05
level.
Universitas Sumatera Utara
d. Uji Homogeneous
Jumlahmikronukleus
Tukey HSD
Subset for alpha = 0.05
Perlakuan
N
1
2
Kontrol Normal
5
32.800
EEBP 800 mg/kg BB
5
37.800
EEBP 400 mg/kg BB
5
EEBP 200 mg/kg BB
5
Kontrol Positif
5
Sig.
3
4
68.000
96.800
154.000
.205
1.000
1.000
1.000
Means for groups in homogeneous subsets are displayed.
Universitas Sumatera Utara